Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-18Bitstream added on 2014-08-13T18:00:19Z : No. of bitstreams: 1 000762623.pdf: 1479611 bytes, checksum: e7192eed89859646dfca424b4de666fe (MD5) / Os ecossistemas aquáticos são os ambientes mais comprometidos pela poluição derivada de emissões de substâncias tóxicas presentes em efluentes industriais e domésticos e em resíduos agrícolas. Essa contaminação pode atingir tanto a água quanto os sedimentos dos ambientes aquáticos e induzir diversos efeitos adversos aos organismos vivos expostos. A bacia do rio Corumbataí, localizada no interior do estado de São Paulo (Brasil), apresenta grande importância econômica e ambiental para estado. As águas deste rio sofrem diversos impactos ambientais caracterizados pelo descarte de efluentes urbanos e industriais das cidades localizadas próximas à sua margem, bem como da ação de atividades agrícolas, principalmente da cultura de cana-de-açúcar. Sendo assim, este rio recebe uma quantidade considerável de substâncias potencialmente tóxicas, que vêm comprometendo a qualidade de suas águas e de seus sedimentos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de amostras de águas e de sedimentos do rio Corumbataí – SP, em pontos situados entre as cidades de Rio Claro e Piracicaba. Foram realizadas duas coletas, uma na estação chuvosa e quente e outra na estação seca e fria, em quatro pontos distintos do rio: P1) à montante da cidade de Rio Claro; P2) à jusante da cidade de Rio Claro; P3) à jusante de Santa Gertrudes e da confluência do rio Corumbataí com o Ribeirão Claro; P4) à montante da cidade de Piracicaba. As avaliações foram realizadas por meio de bioensaios desenvolvidos com os organismos testes Allium cepa e com cultura de hepatócitos de truta arco-íris da linhagem RTL-W1. Para os bioensaios realizados com A. cepa, foram realizados testes de índice mitótico (IM), de aberrações cromossômicas (AC) e de indução de micronúcleos (MN), em células meristemáticas e testes de indução de MN em células F1. Para os bioensaios realizados com cultura de... / Aquatic ecosystems are the most affected by pollution from toxic waste emissions of industrial, domestic and agricultural effluents. This contamination may occur in both water and sediments of aquatic environments and induce many adverse effects to the living organisms. The Corumbataí river basin, located within the state of São Paulo (Brazil), has great economic and environmental importance to the state. The waters of this river suffer from various environmental impacts characterized by the disposal of municipal and industrial effluents from cities located close to its border. Thus, this river receives a considerable amount of potentially toxic substances. Due to its importance for public water supply in the region this study aimed to evaluated the cytotoxic, genotoxic and mutagenic effects of water and sediments samples from this water resource, by means of bioassays. For this study, two sampling campaigns were performed, one in the warm and rainy season and the other in the cold and dry season. Samples were collected in Corumbataí River, in four different sites: P1) upstream the municipality of Rio Claro, P2) downstream the municipality of Rio Claro; P3) downstream the confluence of Corumbataí River and Ribeirão Claro; P4) upstream the municipality of Piracicaba. The evaluations were performed through bioassay with the Allium cepa test organisms and culture of hepatocytes from rainbow trout RTL - W1. According to obtained results in this work, it was possible to observed that water and sediments Corumbataí have genotoxic and mutagenic characteristics. The most significant results were recorded for the points P2 and P3, located near the cities of Rio Claro and Santa Gertrudes. Our results also indicated that samples collected at P3 were more affected, probably due to influence of discharges of industrial and domestic effluents from the city of St. Gertrudes , which is considered the largest ceramic hub of America

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-17Bitstream added on 2014-06-13T19:28:37Z : No. of bitstreams: 1 pedro_j_me_rcla.pdf: 1811815 bytes, checksum: a40e56f40ac516c9c22abb3f5a86c289 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os agrotóxicos constituem uma importante estratégia da agricultura, para a obtenção de uma produtividade economicamente viável, pois são substâncias utilizadas no combate de organismos indesejáveis. Os inseticidas são agentes que têm ação de combater insetos, tanto na fase adulta como larval. O fipronil é um composto do grupo fenil-pirazol, toxicologicamente classificado como altamente tóxico, amplamente utilizado em campos agrícolas do estado de São Paulo, bem como nas residências, para combater insetos pragas. A ação deste inseticida se dá pela sua ligação ao canal de cloro, promovendo o bloqueio da ativação da condução dos estímulos nervosos, pelo ácido gama-aminobutírico (GABA), uma substância que controla o fluxo de íons cloro, através da membrana da célula nervosa. Em pequenas concentrações, apresenta uma eficiente ação nos organismos alvos. Esta característica também pode causar problemas ao meio ambiente, muitas vezes, longe até dos lugares onde foi aplicado. O fipronil, em temperaturas moderadas, é estável no ambiente por cerca de um ano. Estudos mostram que esse inseticida pode ser degradado em diversos metabólitos, que são ainda mais tóxicos que ele. Quanto a sua persistência no ambiente, o fipronil apresenta variações decorrentes da sua formulação, mas os seus metabólicos podem ser mais persistentes que o próprio inseticida. Resíduos de fipronil podem ser bioacumulado no tecido adiposo, indicando uma potencialidade de transferência via cadeia trófica. No presente trabalho, foram avaliadas as potencilidades tóxicas, citotóxicas, genotóxicas e mutagênicas do inseticida fipronil, por meio de bioensaios com Allium cepa, cujas sementes foram expostas à germinação em fipronil. / The pesticides are an important strategy for agriculture, to obtain productivity economically viable, because they are substances used to eliminate pest organisms. Insecticides are agents which have action to combat insects, in both the adult and larval stage. The fipronil is a group composed of phenyl-pyrazole, toxicologically classified as highly toxic, and it is widely used in agricultural fields in Sao Paulo State, as well as in homes, to combat insect pests. This insecticide acts through its connection to the channel chlorine, promoting blockade in the activation of the conduct of nervous stimuli, the gamma-aminobutyric acid (GABA), a substance that controls the flow of chloride ions through the cell membrane of nerve. In small concentrations, presents an efficient action in the organism targets. This feature can also cause problems to the environment, often far to the places where it is applied. In moderate temperatures, the fipronil is stable in the environment for about a year. Studies show that this insecticide can be degraded in various metabolites, which are even more toxic than the fipronil. Relative to its persistence in the environment, the fipronil presents variations resulting from its formula, but their metabolites may be more persistent than the insecticide. Residues of fipronil can be bioacumulated in adipose tissue, indicating a potential of transference by the food chain. In the present research, it had been evaluated the toxic, cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials of the fipronil insecticide through bioassays with Allium cepa, whose seeds were exposed to germination in this insecticide. The results indicate that the insecticide presented no toxic and cytotoxic effects for the A. cepa species, when we compared the data resulting from the tests performed with the insecticide and with the negative control.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-05Bitstream added on 2014-06-13T20:10:13Z : No. of bitstreams: 1 bianchi_j_me_rcla.pdf: 700606 bytes, checksum: e0d730f76b54734539c18e1d9a52fbe4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os agrotóxicos, substâncias químicas muito utilizadas para combater pragas na agricultura e nas residências, além de contribuírem para o aumento da produtividade e, conseqüentemente, o crescimento economia, também são responsáveis pela contaminação ambiental, quando utilizados indiscriminadamente, e por muitos casos de intoxicações e doenças genéticas nos seres humanos. Dependendo de sua composição química, degradabilidade e persistência no ambiente, os agrotóxicos podem comprometer a cadeia alimentar e afetar o ecossistema como um todo. Dentre os agrotóxicos bastante utilizados em todo o mundo, está o organofosforado malation. Pelo seu amplo uso, torna-se preocupante os possíveis danos que este inseticida possa promover no meio ambiente e nos organismos a ele expostos, pois alguns trabalhos já mostram esta sua ação detrimental. Desta forma, este trabalho investigou o potencial de indução de danos no DNA, para diferentes concentrações de malation, por meio das técnicas de aberrações cromossômicas e teste do micronúcleo em A. cepa e micronúcleo e ensaio do cometa em células HTC (hepatoma tissue culture). Nos testes com células meristemáticas e F1 de A. cepa, expostas por 24 e 48 horas ao malation, foram verificadas freqüências significativamente elevadas de AC e MN. Após 24 horas de exposição, não houve aumento na quantidade de AC, mas sim de MN. A análise das células F1 de A. cepa, juntamente com o teste de AC, forneceu dados importantes sobre a fixação dos danos genéticos induzidos pelo malation. Nenhum resultado relevante de citotoxicidade foi verificado em A. cepa. Após passarem pelo teste de recuperação, somente as células expostas às menores concentrações testadas apresentaram diminuição nos índices de AC e MN. / Pesticides, chemicals widely used to combat pest in agriculture and in homes, besides contribute to the increase productivity and the economy, are also responsible for environmental pollution and for many intoxications cases and genetic diseases in human beings. Depending on their chemical composition, degradability and degree of persistence in the environment, the pesticides can endanger the food chain and affect the entire ecosystem. Among the pesticides most used in the world is the organophosphate malathion. Due to its widespread use it has been worrying the possible damages that can promote this insecticide in the environment and in organisms exposed to it. This study investigated the induction potential of DNA damage with several malathion concentrations using chromosomic aberration (CA) techniques, micronucleus test (MN) in A. cepa and micronucleus and comet assay in hepatoma tissue culture (HTC). In A. cepa tests, meristematic and F1 cells exposed for 24 and 48 hours to malathion showed significative frequencies of CA and MN. After 24 hours of exposure, there was no increase in the CA amounts, but was observed an increase to frequency of MN. The F1 cells analysis, together with the CA tests, provided important data on the genetic damages fixation induced by malathion. No relevant results of citotoxicity were verified in A. cepa. After the recovery test, the cells exposed to the smaller tested concentrations of malathion showed reduction of AC and MN indices. In the HTC cells test, was verified by the comet assay, genotoxic effects for all the tested concentrations, after exposure for 24 hours to the insecticide, but by the micronucleus tests, no significative results were found. These data suggest that the DNA lesions were repaired and not elapsed in mutation. With the concomitant realization of different tests, the clastogenic action of malathion could be verified.

Orientador: Maria Aparecida Marin Morales / Banca: Diogo Cavalcanti Cabral de Mello / Banca: Vera Maria Ferrão Vargas / Banca: Grasiela Dias de C. S. Aguiar / Banca: Maria Tercilia V. de A. Oliveira / Resumo: O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar no mundo. Dentre os Estados brasileiros, São Paulo representa 60% de todo o açúcar produzido e 70% das exportações. Pela alta produção de cana-de-açúcar no Estado de São Paulo e o consequente consumo elevado de agrotóxicos, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos de baixas concentrações de dois agrotóxicos utilizados nesta cultura, o herbicida sulfentrazona e o inseticida imidaclopride, tanto em testes individuais quanto associados entre si. As avaliações foram feitas pelos testes de aberrações cromossômicas (AC) e de micronúcleos (MN) em Allium cepa; teste do MN e ensaio do cometa em células HepG2; e teste de Ames com Salmonella typhimurium. Para melhor avaliar o modo de ação dos agrotóxicos, a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) com sonda pan-centromérica foi associada ao teste do MN realizado com células HepG2. Os testes com A. cepa indicaram genotoxicidade para todas as concentrações de imidaclopride, após um período de recuperação de 48 horas. A maior indução de pontes e aderências cromossômicas sugeriu uma ação clastogênica para o inseticida. Esta hipótese foi confirmada nos testes com HepG2, pela técnica de FISH, uma vez que a maioria dos MN (76,6%) não apresentou sinal fluorescente, indicando presença de fragmentos cromossômicos. Para o herbicida sulfentrazona, foram observadas AC para todas as concentrações, considerando os diferentes tempos de tratamento. A indução de MN foi observada para a menor concentração, para todos os tempos de tratamento, sugerindo que os danos induzidos por essa concentração persistem ao longo do ciclo celular. A maior concentração testada do herbicida causou uma diminuição no índice mitótico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brazil is the largest producer of sugarcane in the world. Among the Brazilian states, São Paulo represents 60% of all sugar produced and 70% of exports. Due to the high production of sugarcane in São Paulo state and the great pesticide consumption, this work investigated the cytotoxic, genotoxic and mutagenic effects of low concentrations of two pesticides utilized in sugarcane culture: the herbicide sulfentrazone and the insecticide imidacloprid, both individually and combined. The evaluations were made by chromosome aberrations (CA) and micronucleus (MN) tests in Allium cepa, MN and comet assay in HepG2 cells and Ames test with Salmonella typhimurium. Associated to the MN test in HepG2 cells, the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique with pan-centromeric probe was applied in order to better evaluate the mode of action of the agrochemicals. The tests with A. cepa indicated genotoxicity for all concentrations of imidacloprid, after a recovery period of 48 hours. The higher induction of bridges and chromosome stickiness suggests a clastogenic action for the insecticide. This hypothesis was confirmed in the tests with HepG2, by FISH, since most of the MN (76.6%) did not present fluorescent signal, indicating presence of chromosomal fragments. For the herbicide sulfentrazone, CA were observed in all concentrations, in the different treatment times. The induction of MN was observed for the lowest concentration for all the treatment times, suggesting that the damages induced by this concentration persist throughout the cell cycles. The highest concentration tested of the herbicide caused a decrease in the mitotic index of the cells after 72 hours recovery period. This effect may be associated with the high amount of induced chromosome stickiness. The mixture of pesticides induced cytotoxicity, genotoxicity... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Matheus Mantuanelli Roberto / Banca: Bruna de Campos Ventura Camargo / Banca: Edson Luis Maistro / Banca: Larissa Fonseca Andrade Vieira / Resumo: A decomposição dos corpos é considerada uma fonte de poluição, devido à produção de um líquido orgânico denominado de necrochorume, que, além de comprometer o meio ambiente, pode causar sérios problemas à saúde humana. Na composição desse líquido, encontra-se a amina biogênica cadaverina (C5H14N2), uma substância altamente tóxica, produzida durante a putrefação de tecidos orgânicos de corpos em decomposição. Considerando que os cemitérios são locais de disposição de cadáveres e que a decomposição dos corpos gera substâncias tóxicas, como a cadaverina, torna-se muito importante a avaliação dos comprometimentos ambientais que possam ser desencadeados por este contaminante. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos citotóxicos, genotóxicos, mutagênicos e oxidativos de diferentes concentrações da diamina cadaverina, por meio de ensaios ecotoxicológicos realizados com sistemas-teste in vitro e in vivo. Foram utilizados três sistemas-teste distintos: Allium cepa, células de anfíbio (Speedy) e células de hepatoma humano (HepG2) mantidas em cultura e ratos Wistar. Em A. cepa, foram aplicados os testes de aberrações cromossômicas (AC) e de micronúcleos (MN) em células meristemáticas, os quais são indicativos de efeitos genotóxico e mutagênico, respectivamente. Foram testadas as concentrações 61,5, 184,5, 307,5, 430,5 e 553,5 mg/L. A elevada frequência de aderências cromossômicas e células binucleadas inferem uma ação aneugênica para a cadaverina. Além diss... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The decomposition of bodies is considered a pollution resource due to the production of an organic liquid denominated as necrochorume that, besides compromising the environment, it can cause serious problems to human health. In the composition of this liquid, the amine cadaverine can be found (C5H14N2), a highly toxic substance, produced during putrefaction of organic tissues of the bodies in decomposition. Whereas the cemeteries are disposal locals for dead bodies and that the decomposition of the bodies generates toxic substances, like cadaverine, the evaluation of the compromising of the environment, which can be unleashed by this contaminant, becomes very important. Therefore, the present study aimed to evaluate the cytotoxic, genotoxic, mutagenic and oxidative effects of different concentrations of the diamine cadaverine, by ecotoxicological assays performed with the test systems in vitro and in vivo. Three different test organisms were used: Allium cepa, HepG2 and Speedy cells maintained in culture and Wistar rats. With the A. cepa organism, tests for chromosomal aberrations and micronucleus in meristematic cells were applied, which are indicatives of genotoxic and mutagenic effects respectively. The concentrations of 61,5, 184,5 e 307,5, 430,5 e 553,5 mg/L were tested. The elevated frequency of chromosomal adherence and binucleated cells infer an aneugenic action to the cadaverine. Besides, there was no statistically significant difference in the Mitotic Index (MI) values and to the Mutagenicity Index (MutI). Regarding the resazurin assay, performed with cell culture, by using human hepatoma cells (HepG2) and amphibian cells (Speedy), it was possible to observe that the cadaverine was cytotoxic for both cell lines, though, the Speedy cells were more sensible than the HepG2 cells. The comet assay performed with... (Complete abstract electronic acess below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Maria Luiza Silveira Mello / Banca: Cláudia Bueno dos Reis Martinez / Banca: Maria Angélica Maciel Martinho Ferreira / Banca: Edson Luis Maístro / Resumo: Os azocorantes são substâncias químicas extremamente utilizadas em indústrias têxteis que podem induzir mudanças no material genético de organismos expostos, mesmo que essas alterações no DNA não se expressem de imediato. Foram avaliadas as citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de diferentes concentrações (1, 10, 100 e 1000 mg/L - na ausência dos microorganismos - e 50 e 200 mg/L - na presença dos microorganismos) do azocorante Black Dye Commercial Product (BDCP), antes e após tratamentos de biodegradação por diversos microrganismos (1. "Pool" de bactérias heterotróficas provenientes de uma estação de tratamento biológico de efluentes, 2. Levedura Candida viswanathii, e 3. Fungo Basidiomiceto Phanerochaete chrysosporium), por meio de diferentes técnicas citogenéticas (coloração convencional, bandamento C, bandamento RON, bandamento por fluorocromos base-específicos CMA/DAPI e hibridação in situ fluorescente - FISH) aplicadas sobre o organismo teste Allium cepa. Pela técnica citogenética de coloração convencional, foi possível verificar que o corante, com e sem ação microbiana, induziu apoptose, necrose, células micronucleadas, aberrações cromossômicas e alterações nucleares. As aberrações cromossômicas e alterações nucleares foram visualizadas em todos os estágios do ciclo celular: na intérfase foram observados brotos nucleares e células poliplóides; na prófase, perdas de material genético; na metáfase, aderências cromossômicas, perdas cromossômicas, C-metáfases e poliploidias; na anáfase e telófase, multipolaridades, pontes e perdas cromossômicas. Os brotos nucleares apareceram com maior freqüência nas células submetidas aos testes do azocorante tratado com microorganismos, sendo que esse tipo de alteração deve estar associado à presença dos metabólitos do corante. As freqüências de micronúcleos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Azo dyes are chemical substances extremely used by textile industries that may induce changes in the genetic material of exposed organisms, even if these changes in the DNA do not express themselves immediately. Cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity evaluations of the different azo dye (BDCP) concentrations were performed (1, 10, 100 e 1000 mg/L - without microorganisms - and 50 and 200 mg/L - with microorganisms), before and after biodegradation tests, using different microorganisms (1. Heterotrofic bacteria "pool" proceeding from an effluent biological treatment station, 2. Candida viswanathii - Yeast, and 3. Phanerochaete chrysosporium - Basidiomicet Fungi), by means the different cytogenetical assays (conventional staining, C-banding, RON-banding, CMA/DAPI banding and fluorescent in situ fluorescent hybridization), using Allium cepa as test organism. By the conventional staining cytogenetic assay, it was possible to verify that the azo dye induced apoptosis, necrosis, micronuclei, chromosome aberrations and nuclear alterations. The chromosome aberrations and nuclear alterations were visualized in all phases of the cell cycle: in the interphase were observed nuclear buds and polyploidizated cells; in the prophase were observed genetic material losses; in the metaphase were observed chromosome adherences, chromosome losses, C-metaphases and polyploid cells; and in the anaphase and telophase were observed multipolar cells, chromosome bridges and chromosome losses. The frequencies of nuclear buds were the higher when the cells had been submitted to the azodye treated with microorganisms, suggesting that this kind of alteration must be associated to the presence of the azodye metabolites. The micronuclei and chromosome breaks frequencies... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Estudos ambientais têm demonstrado que substâncias geradas por processos antropogênicos podem causar efeitos prejudiciais interferindo no equilíbrio natural do ecossistema. Manguezais exercem funções essenciais nos ciclos biológicos e constituem Área de Proteção Permanente no Brasil. Infelizmente, eles estão sendo degradados acima do seu limite de suporte, levando a uma redução das áreas remanescentes no mundo. Este trabalho apresenta os resultados de mutagenicidade e genotoxicidade observados em quatro amostragens (PI, V, O e PII) entre 2009 e 2010, relacionados com metais e hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA) em sedimento de mangue para a caracterização dos valores de referência. Os testes de genotoxicidade foram feitos a partir de hemócitos do caranguejo Goniopsis cruentata, coletados em um ecossistema potencialmente não poluído do Brasil, localizado no sul do Rio de Janeiro (Parati/RJ), chamado de "Saco do Mamanguá". Coleta, armazenamento e manipulação dos sedimentos e material biológico de cinco pontos de amostragem (M1- M5) foram processados de acordo com normas norte-americanas reconhecidas. A identificação das substâncias químicas foi realizada com extratos de sedimentos e utilizada no bioensaio Salmonella/microssoma (Kado). A avaliação de potenciais danos genotóxicos estabelecidos foi realizada através do Teste de Micronúcleo, que apresentou valores significativos na amostra V. Resultados negativos foram observados para as cepas de Salmonella typhimurium TA97, TA98, TA100 e TA102, tanto na ausência quanto na presença de fração de metabolização exógena de mamíferos (S9 mix 4%) em todas as análises. A quantificação por cromatografia gasosa com detecção por espectrometria de massas dos 16 HPA prioritários em termos de conservação ambiental apresentou valores baixos nas duas primeiras amostragens (PI e V) e nulos nas coletas seguintes (O e PII), nos mesmos pontos. De acordo com os valores utilizados nos Estados Unidos e Canadá como referência, os detectados por nós não são considerados como toxicantes ambientais positivos, com exceção do Benzo(a)pireno, que em M1V apresentou valores um pouco acima do limite a partir do qual já podem ser observados pequenos efeitos na biota. A análise dos metais (Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb e Zn) por Espectrometria de Absorção Atômica inicialmente realizada com a água intersticial foi melhor interpretada a partir da matriz sedimento. Este estudo contribuirá com a implementação de indicadores para valores de referência em mangue. / Environmental studies have shown that substances generated by anthropogenic processes can cause adverse effects by interfering with the ecosystem natural balance. Mangroves perform essential functions in biological cycles and are Permanent Protection Area in Brazil. Unfortunately, they are being degraded above its support limit, leading to a reduction of the remaining areas in the world. This paper presents the results of mutagenicity and genotoxicity observed in four samples (PI, V, O, and PII) between years 2009 and 2010 linked to metals and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in mangrove sediment in order to characterize reference values. The genotoxicity tests were made from the hemocytes Goniopsis cruentata collected in a potential unpolluted ecosystem of Brazil, located in the southern Rio de Janeiro (Parati/RJ), called "Saco do Mamanguá. Collection, storage, manipulation of sediment and biological material from five sampling sites (M1-M5) were processed according to U.S. standards recognized. The identification of the chemicals was performed with extracts of sediments and bioassay used in the Salmonella / microsome (Kado). The assessment of potential genotoxic damage were done down through the Micronucleus Test, and showed significant values in the sample V. Negative results were observed for the Salmonella typhimurium strains TA97, TA98, TA100 and TA102, both in the absence or presence of exogenous fraction of mammalian metabolism (S9 mix 4%) for all analysis. Quantification by Gas chromatography-mass spectrometry of the 16 priority PAHs in terms of environmental conservation, presented low values in the first two samples (V and PI) and null value in the following collections (and the IIP), in the same points. According to United States and Canada references, we detected chemicals not regarded as a positive environmental toxicants, with the exception of benzo(a)pyrene, which showed values in M1V just above the threshold at which already small effects can be observed in the biota. The analysis of metals (Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb and Zn) by Atomic Absorption Spectrometry initially performed with the pore water was best interpreted from the sediment matrix. This study will contribute to the implementation of indicators to benchmarks in the swamp.

Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é o agente etiológico da colibacilose, doença que acomete galinhas, patos, perus e outras aves, principalmente entre a 2ª e a 12ª semana de vida. Existem diversos estudos sobre genes associados à virulência de APEC, mas eles ainda não são capazes de explicar todos os fenótipos de APEC. Portanto, outros genes associados à virulência – ainda não descritos – devem estar presentes em APEC. Para descobrir novos genes associados à virulência em APEC, uma cepa invasiva foi usada para a construção de uma biblioteca de 1.800 mutantes, através da técnica de mutagênese marcada com assinatura, que insere transposons aleatoriamente no genoma da bactéria. Os mutantes foram selecionados em um ensaio de invasão in vitro a fibroblastos aviários da linhagem CEC-32. A sequência dos transposons inseridos nos mutantes permite a identificação daqueles mutantes que não foram capazes de invadir os fibroblastos. Até agora, 11 de 20 pools de 90 mutantes cada foram analisados, e 48 mutantes parecem ter perdido a capacidade invasiva, ou seja, tiveram sua virulência atenuada. Os demais pools já foram selecionados e terão seu DNA analisado. Todos mutantes que possivelmente perderam sua capacidade invasiva serão testados novamente para confirmar seu fenótipo de virulência atenuada. Depois, a região contendo a sequência do transposon será sequenciada para que se descubra qual gene foi interrompido e é essencial para a virulência in vitro de APEC. Essa biblioteca de mutantes também pode ser testada em modelos de seleção in vivo, de modo que é possível identificar, através da análise dos mutantes ausentes na seleção, genes de virulência essenciais para APEC em diferentes condições. / Avian pathogenic E. coli (APEC) is the causative agent of colibacillosis, a disease that affects poultry and other birds, mainly between two and twelve weeks of age. There are many studies about virulence-associated genes in APEC, but they do not fully explain all the APEC phenotypes. Therefore, other virulence-associated genes – not yet described – must be present in APEC strains. In order to find out new virulence genes, we made 1,800 random-transposons mutants of an APEC invasive strain using the signature-tagged mutagenesis method. The mutants were selected using an in vitro invasion assay to fibroblast cells. The sequence of the inserted transposons allows us to identify mutants that have lost the capacity of invade the cells. Until now, we tested eleven out of twenty pools of ninety mutants each, and forty-eight mutants appeared to have lost the invasive capacity. The other nine pools will be analyzed, and all the possible non-invasive mutants will be tested again to confirm the phenotype. Then, they will have the transposon-inserted region sequenced in order to find out which gene has been disrupted and is essential to APEC in vitro invasiveness. The attenuated mutants can also be selected in vivo, so we would identify essential virulence genes to APEC under different conditions.

Escherichia coli patogênicas extraintestinais (ExPEC) causam colibacilose aviária, infecções do trato urinário e meningite neonatal em humanos. A cepa ExPEC MT78 é virulenta in vitro e in vivo, e possui a habilidade de invadir células eucarióticas. Para melhor entender o fenótipo invasivo dessa cepa, foi criada uma biblioteca de mutantes aleatórios pela técnica de mutagênese marcada com assinatura, e os mutantes foram selecionados negativamente em ensaio de invasão a fibroblastos aviários. Mutantes atenuados apresentaram mutação em genes do operon da fímbria do tipo 1 e nos genes de metabolismo de açúcares treA e bglB. Foram feitos mutantes específicos para o gene que codifica a enzima trealase periplasmática (TreA) e para o operon de metabolismo de β-glicosídeos (bgl). O mutante MT78ΔtreA apresentou, frente à cepa selvagem, diminuição na capacidade de adesão e invasão a fibroblastos aviários, na expressão da fímbria do tipo 1 e na capacidade de colonizar a bexiga de camundongos em modelo de infecção urinária. O mutante MT78Δbgl também apresentou, frente à cepa selvagem, diminuição na capacidade de adesão e invasão a fibroblastos aviários e na capacidade de colonizar a bexiga de camundongos em modelo de infecção urinária, mas não mostrou alteração na expressão da fímbria do tipo 1, medida por aglutinação de leveduras. Os resultados deste trabalho mostraram que a trealase periplasmática afeta a expressão da fímbria do tipo 1 e a virulência in vivo da cepa ExPEC MT78, enquanto o operon do metabolismo de β-glicosídeos afeta a virulência in vivo da cepa ExPEC MT78 por um mecanismo ainda não-elucidado. / Extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) cause colibacillosis in birds, urinary tract infections and neonatal meningitis in humans. The ExPEC strain MT78 is virulent in vitro and in vivo, and is able to invade eukaryotic cells. In order to better understand the invasive phenotype of this strain, a library of random mutants was made using the signature-tagged mutagenesis approach. The mutants were negatively selected in invasion assays of avian fibroblasts. Attenuated mutants presented mutation in the type 1 fimbria operon and in the genes of sugar metabolism treA and bglB. Specific mutants were created for the periplasmic trehalase (TreA) gene and for the β-glycosides metabolism operon (bgl). The MT78ΔtreA mutant displayed, in comparison with the wild type strain, a reduction on the capacity of adhesion and invasion to avian fibroblastos, on type 1 fimbriae expression and on the capacity to colonize the bladder in a murine model of urinary tract infection. The MT78Δbgl mutant, compared to the wild type strain, also displayed a reduction on the capacity of adhesion and invasion to avian fibroblastos and on the capacity to colonize the bladder in a murine model of urinary tract infection, but did not show any difference on type 1 fimbriae expression as detected by yeast agglutination. Taken together, our results show that the periplasmic trehalase affects type 1 expression and in vivo virulence of the ExPEC strain MT78, and the operon for β-glycosides metabolism affects in vivo virulence by an as yet unidentified mechanism.

Kardiovaskuläre Ereignisse bilden die Haupttodesursache in den westlichen Ländern. Mit der Einführung von Clopidogrel, welches am ADP-Rezeptor P2Y12 wirkt, konnte die Mortalität und Morbidität von kardiovaskulären Ereignissen signifikant gesenkt werden. Der P2Y12 gehört als G-Protein-gekoppelter Rezeptor (GPCR) zur größten Gruppe membranständiger Rezeptoren, welche durch ihr ubiquitäres Vorkommen einen idealen Angriffspunkt in der Pharmakotherapie bilden. Zur intelligenten und gezielten Entwicklung von neuen Arzneimitteln bedarf es umfassender Kenntnisse der Struktur- und Wirkungsbeziehung von GPCR. Um den Modellrezeptor P2Y12 strukturell und funktionell zu charakterisieren, wurde eine sättigende Mutagenese in einem funktionell essentiellen Bereich des Rezeptors (Transmembranhelices 6 und 7 sowie 3. extrazellulärer Loop) durchgeführt. Hiermit sollten die Auswirkungen von Punktmutationen auf die Funktionsweise des Rezeptors untersucht werden. Hierfür wurden sättigende Mutantenbibliotheken für 66 Positionen erstellt, wobei jede Aminosäure (AS) durch jede nicht natürlicherweise im humanen P2Y12 vorkommende AS ersetzt wurde (1254 Mutanten). Diese wurden funktionell im Expressionssystem der Hefe Saccharomyces cerevisiae mit steigenden Agonistenkonzentrationen charakterisiert und anhand ihrer Funktionalität klassifiziert. Dabei wiesen 90,8 ± 1,9 % der Rezeptormutanten keine Wildtypeigenschaften auf. Die Auswertung von 77 Wirbeltierorthologen zeigte ebenso eine hohe Konservierung von 90,7 ± 1,5 % pro Position. Im direkten positionalen Vergleich zwischen evolutionären und in vitro Daten konnte eine Übereinstimmung der in vitro und in vivo Daten von 90,2 % gefunden werden. Die funktionellen Daten wurden in eine Online-Mutantendatenbank eingearbeitet und wurden in einem 3D-Rezeptor-Homologiemodell visualisiert. Damit ist der Beweis geführt worden, dass es mit guter Vorhersagewahrscheinlichkeit möglich ist, von evolutionären Daten Rückschlüsse auf die Relevanz von Mutationen zu ziehen.