Tesis Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Periodontologia / En el presente estudio de cohorte concurrente se reclutaron 11 pacientes fumadores y 12 pacientes no fumadores con periodontitis. Se registró el nivel de inserción clínica (NIC), profundidad al sondaje (PS), sangramiento al sondaje (SS), placa bacteriana (PB) en todos los pacientes. Los pacientes fueron tratados mediante terapia periodontal no quirúrgica en una sola sesión y se tomarán muestras de fluído crevicular gingival (FCG) a los tiempos 0, 7, 14, 30 y 90 días post tratamiento con el fin de evaluar los niveles de TNF-a durante las diferentes etapas de la reparación periodontal. Los niveles de TNF-a fueron evaluados mediante un ensayo de ELISA en las muestras eluidas desde el FCG. En los pacientes no fumadores se observó una reducción significativa en la PS de 0,96 mm mientras que este valor fue de 0,56 mm en los fumadores con una diferencia entre los grupos de 0,4 mm. En los pacientes no fumadores la ganancia de NIC fue de 0,25 mm mientras que en los fumadores fue de 0,17 mm, con una diferencia entre los grupos de 0,08 mm. La reducción de sitios con PB en los pacientes no fumadores fue de 52,8%, mientras que en los pacientes fumadores fue de 26,3%, con una diferencia entre los grupos de 26,5%. La reducción del sangrado al sondaje en pacientes no fumadores fue de 31,9% mientras que en fumadores fue de 15,1%, con una diferencia entre los grupos de 16,8%. Las mediciones iniciales de TNF-a en el FGC mostraron un valor promedio de 364,83 pg/mL en no fumadores y 1370,33 pg/mL en fumadores. Se observó una reducción significativa en el promedio de esa concentración a lo largo del estudio siendo estas concentraciones similares para ambos grupos. Los resultados del presente estudio permiten concluir que el peor control de placa bacteriana y la exposición al humo de tabaco podrían explicar la menor capacidad de cicatrización periodontal en pacientes fumadores.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:52:21Z : No. of bitstreams: 1 silva_rsf_me_arafo.pdf: 1174318 bytes, checksum: f42c1309d76c33e103772ad2f159706b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do emprego do curativo de demora à base de hidróxido de cálcio na reparação apical e periapical após tratamento endodôntico de dentes de cães sem vitalidade pulpar, com ou sem lesão periapical visível radiograficamente. Os canais radiculares de 80 raízes de pré-molares superiores e inferiores foram submetidos ao método de indução experimental de lesões periapicais ou mantidos expostos ao meio bucal por 30 dias para contaminação. Realizado o preparo biomecânico, os canais radiculares foram obturados em única sessão ou receberam curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio por 15 dias, quando foram obturados com cimento AH Plus. Após o período de 180 dias os animais foram mortos e as peças submetidas ao processamento histológico e coradas pelo HE e Tricrômico de Mallory para avaliação da influência da presença da lesão periapical radiográfica e do emprego do curativo de demora na reparação apical e periapical. Os resultados obtidos demonstraram que o curativo de demora à base de hidróxido de cálcio foi de fundamental importância para a reparação dos tecidos apicais e periapicais, com diferença significante com relação aos grupos obturados em sessão única (p<0,05). / The aim of this study was to evaluate the apical and periapical repair after endodontic treatment of teeth with pulp necrosis, with or without radiographic chronic periapical lesion in mongrel dogs. Eighty root canals of premolars teeth were used. Half of them was submitted to the experimentally induced chronic lesions method and the others was opened to the oral environment for 30 days for contamination. After biomechanical preparation, the root canals were filled in a single visit or they received a root canal dressing with calcium hydroxide for 15 days before root canal filling with AH Plus sealer. The animals were killed, after 180 days, by anesthetic overdose, and the histological sections were stained with H/E and Mallory Trichromic for microscopic evaluation of the influence of radiographic periapical lesion and the use of root canal dressing in the apical and periapical repair. The obtained results showed that the intracanal dressing based on calcium hydroxide was essential to the repair of the apical and perapical tissues, with significant difference to the groups filled in a single visit (p<0,5).

Introdução: A classificação da gravidade da queimadura é determinada a partir da relação entre a superfície corporal queimada (SCQ) e a profundidade da lesão. Os fatores que influenciam a evolução da necrose na zona de estase que circunda a zona de necrose (coagulação) podem estar relacionados com a perfusão, inflamação e estresse oxidativo. No presente estudo avaliamos o efeito da glutamina, pois tem sido demonstrado ter papel importante na prevenção de lesão por isquemia e reperfusão, da inflamação e do estresse oxidativo. Objetivo: avaliar o efeito da glutamina na forma de aminoácido livre e dipeptídeo na evolução da necrose nos interespaços (zona de estase) da queimadura. Materiais e Métodos: Foram utilizados 30 ratos machos da linhagem Wistar. Em todos os animais foi feito a lesão por queimadura de terceiro grau com um pente de metal contendo quatro dentes e três interespaços pré aquecido em água à 98ºC. O Grupo 1- Controle (n=10) recebeu 7,4ml/kg de peso, de solução fisiológica a 0,9%, o Grupo 2- Dipeptídeo, recebeu 7,4 ml do dipeptídeo L-alanil-L-glutamina (1g/kg de L-glutamina e 0,6g/kg de L-Alanina) e o Grupo 3- AA-livre recebeu 1g/kg de L-glutamina e 0,6g/kg de L-alanina na forma de aminoácido livre, por gavagem, por 7 dias após a lesão por queimadura. As análises avaliadas foram por meio de fotografia (no momento 48 horas e 7 dias) e histopatologia (no 7º dia após a lesão), para avaliar a extensão da necrose, alterações isquêmicas nos interespaços (zona de estase), além da alteração da Glutationa. Resultado: Na avaliação fotográfica, houve redução significante da necrose especificamente no Grupo 3- AA-livre entre o momento 48 horas e sete dias (P=0,04). Na avaliação por histologia, globalmente houve redução da inflamação nos Grupos 2- Dipeptídeo e 3- AA-livre quando comparados com o Grupo 1- Controle (p< 0,01). Ainda nos grupos tratados houve tendência a redução de necrose na derme dos interespaços ( Grupo 1- Controle =0,95; Grupo 2- Dipeptídeo =0,73 e Grupo 3- AA-livre =0,8), mas essas diferenças não foram significantes. Os grupos tratados também apresentaram aumento do número de fibroblastos quando comparados ao Grupo 1- Controle (p<0,05). Na dosagem de Glutationa foi encontrado maior quantidade no Grupo 2- Dipeptídeo (p<0,05) quando comparado com o Grupo 1- Controle. Conclusão: A redução das lesões histológicas, redução da inflamação, manutenção de maior extensão dos interespaços, a maior quantidade de fibroblastos e o aumento da glutationa, com a administração de glutamina, observados no presente estudo, podem ter beneficiado a manutenção ou redução da evolução da necrose de queimadura em ratos.a inflamação, acelerou a cicatrização e regrediu a evolução da necrose das zonas de estase das queimaduras em ratos. / Introduction: The classification of burn severity is based on the relationship between the burned body surface (SCQ) and the depth of the lesion. Factors influencing the progression of necrosis in the stasis zone surrounding the area of necrosis (coagulation) may be related to perfusion, inflammation and oxidative stress. In the present study, we evaluated the effect of glutamine, as it has been shown to play an important role in the prevention of ischemia and reperfusion injury, inflammation and oxidative stress. Objective: to evaluate the effect of glutamine as a free amino acid and dipeptide on the progression of necrosis in the interspace (stasis zone) of the burn. Materials and Methods: Thirty male Wistar rats were used. In all animals a third degree burn injury was done with a metal comb containing four teeth and three interspaces preheated in water at 98ºC. Group 1- Control (n = 10) received 7,4 ml of 0.9% saline solution, Group 2- Dipeptide received 7.4 ml of dipeptide solution L-alanyl-L-glutamine (1g/k Lglutamine and 0.6g/k L-Alanine) and Group 3- Free AA received 1g/k L-glutamine and 0,6g/kg L-alanine as free amino acid, by gavage, for 7 days after burn injury. The analyzes evaluated were by means of photograph (in the time 48 hours and 7 days) and histopathology (on the 7th day after the injury), to evaluate the extent of necrosis, ischemic changes in the interspaces (stasis zone), besides the alteration of Glutathione . Results: In the photographic evaluation, there was a significant reduction of necrosis specifically in the 3-AA-free group between 48 hours and 7 days (P = 0.04). Histologically, there was a reduction in inflammation in Groups 2- Dipeptide and 3-AA-free when compared to Group 1-Control (p <0.01). Even in the treated groups there was a tendency to reduce necrosis in the interspaces dermis (Group 1-Control = 0.95, Group 2-Dipeptide = 0.73 and Group 3- AA-free = 0.8), but these differences were not significant. The treated groups also showed an increase in the number of fibroblasts when compared to Group 1- Control (p <0.05). In the dosage of Glutathione, a greater amount was found in Group 2 - Dipeptide (p <0.05) when compared to Group 1 - Control. Conclusion: The reduction of histological lesions, reduction of inflammation, maintenance of greater extension of the interspaces, the greater amount of fibroblasts and the increase of glutathione, with the administration of glutamine observed in the present study, may have benefited the maintenance or reduction of the evolution of necrosis of burn in rats.

A utilização de implantes cirúrgicos para artroplastia de quadril com prótese de recapeamento da cabeça femoral como substituto ósseo é um procedimento que tem sido realizado em 35% dos casos de Osteoartrose nos EUA. Entretanto, o atrito da broca e o aumento da temperatura durante a usinagem da cabeça femoral são responsáveis pelo possível aquecimento do tecido ósseo, podendo provocar a necrose óssea térmica. Neste sentido, o desenvolvimento de novos ferramentais e metodologias para minimizar os danos térmicos do atrito torna-se importante. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo verificar se há a ocorrência de necrose óssea em um procedimento de furação óssea utilizando o dispositivo EQUITRON; Mod.ES 2200, desenvolvido no LTC-EESC-USP. Para tal, utilizamos 4 amostras de costela bovina removidas após a morte do animal, que foram furadas com broca de aço inoxidável (HSS-SKF), de 8 milímetros, sem irrigação externa. As amostras foram furadas com rotações de 100, 1000, 1200 e 2500 RPM, aferidas por tacômetro foto/contato digital da marca MINIPA, MDT-2238, e com avanço controlado de 80 mm/min (dispositivo da marca-EQUITRON; MOD.ES 2200; RPM 2800; Potência 0,30; Torque 1,6 Nm). Foram mensuradas as temperaturas iniciais da broca e da amostra e a final da amostra com termômetro digital, marca-MEDISANA®. Após a furação foram confeccionadas lâminas histológicas (HE) do tecido ósseo, preparadas de acordo com a metodologia apropriada, para posterior qualificação e quantificação da ocorrência de necrose óssea térmica através de imagens captadas por microscopia óptica (Olympus BX 41TF - Made Japan) utilizando-se o programa Motic Images Plus 2.0 para a captura das imagens. Os valores de temperaturas aferidos na amostra após a furação apresentaram relação positiva com a RPM utilizada, isto é, quanto maior a rotação, maior foi a temperatura observada. Apenas a amostra furada a 2500 RPM ultrapassou a temperatura de referencia para a gênese da osteonecrose térmica, que é de 47ºC. As análises histológicas apresentaram uma baixa predominância de células picnóticas e lacunas, sugerindo menor dano tecidual. Os resultados obtidos no presente estudo sugerem que o dispositivo (furadeira) desenvolvido no LTC-EESC-USP para a realização das furações nas amostras ósseas em testes de bancada foi eficiente em minimizar a ocorrência de necrose óssea térmica, até mesmo em condições de temperatura acima do limite fisiológico aceitável. / The utilization of surgical implants for hip arthroplasty with a resurfacing prosthesis of the femoral head as a bone substitute have been conducted in 35% of osteoarthrosis cases in the USA. However, the friction of the drill and the increase in the temperature during the machining of the femoral head can possibly heat the bony tissue and provoke a thermal bone necrosis. The development of new tools and methodologies for minimizing the thermal damage of the friction has become fundamental. The present study analyzes the occurrence of bone necrosis in a procedure of bone drilling that uses an EQUITRON device, Mod. ES 2200, developed at the LTC-EESC-USP. Four samples of bovine ribs removed after the death of the animal were used for the tests. They were drilled by an 8mm stainless-steel drill (HSS-SKF) with no external irrigation, at 100, 1000, 1200 and 2500 RPM calibrated by a MINIPA, MDT-2238 digital photo/contact tachometer and whose 80mm/min. advance (EQUITORN device; MOD.ES 2200; RPM 2800; 0.30 Potency and 1,6Nm torque) was controlled. The initial temperatures of the drill and the sample and the final temperature of the sample were measured by a MEDISANA digital thermometer. After drilling, histological blades (HE) were produced from the bony tissue and prepared according to the adequate methodology for further qualification and quantification of the occurrence of thermal bone necrosis through images captured by optical microscopy (Olympus BX 41TF - made in Japan) and Motic Images Plus 2.0 program. The values of the temperatures measured in the sample after drilling showed a positive relation with the RPM utilized, i.e., the faster the rotation, the higher the temperature. Only the sample drilled at 2500RPM exceeded the reference temperature (47ºC) for the genesis of the thermal osteonecrosis. The histological analyses revealed a low predominance of picnotic cells and gaps, which suggest minor tissue damage. The results show the device (drilling machine) developed at the LTC-EESC-USP for the drilling in the bone samples in workbench tests is efficient to minimize the occurrence of thermal bone necrosis, even at temperatures above the physiological acceptable limit.

Orientadores: Silvana Pereira Barros, Sergio Roberto Peres Line / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:46:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vasconcelos_DanielFernandoPereira_M.pdf: 718453 bytes, checksum: 33e7ea7787a27dcce6c7a1cac2b7b5ed (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A doença periodontal (DP) é causada por interações entre fatores do hospedeiro, microrganismos específicos patogênicos e o sistema imunológico. TNF-b é um imunoregulador multifuncional que está relacionado com a patogênese de diversas desordens imunológicas, incluindo a DP. Nosso estudo analisou a associação entre DP e polimorfismo no gene TNF-b (+252 A/G). O DNA foi extraído de células da mucosa oral de 126 indivíduos brancos: 44 indivíduos controle e 82 indivíduos com DP. O polimorfismo foi analisado pela técnica de PCR, seguida pela RFLP. Os dados foram estatisticamente analisados pelo teste Exato Fisher (p<0,05) e Odds Ratio (OR). A freqüência do polimorfismo mostrou diferença estatisticamente significativa entre os grupos controle e com DP, revelando que indivíduos portadores do alelo G apresentavam 2,6 vezes mais chances de desenvolver a DP do que indivíduos saudáveis (G vs. A, p=0.0019, OR= 2.67, 95% CI 1.45 - 4.78), em relação aos genótipos a presença de pelo menos um alelo G predispõe 3,1 vezes à DP (G/G+ G/A vs. A/A, p=0,0059, OR= 3.1, 95% CI 1.45 - 6.65). Conclui-se que o TNF-b está envolvido na patogênese da periodontite crônica e pode ser utilizado como um marcador de risco para a DP na população estudada / Abstract: Background: Periodontitis is an inflammatory disease that leads to irreversible attachment loss, bone destruction and eventually bone loss, such cascade that culminates in tissue destruction initiates with pathogenic micro-organisms and depends on host response to disease expression. Tumor necrosis factor (TNF) a potent multifunctional immune modulator has been implicated in the pathogenesis of periodontal disease. Objective: In this study we investigated the hypothesis of association between chronic periodontitis (CP) and polymorphisms of the TNF-ß gene. Materials and Methods: One hundred twenty six individuals were evaluated by measuring clinical attachment loss and divided in 44 health individuals (control group-CG) and 82 subjects with CP. DNA samples were obtained from the individual's epithelial cells through scraping of the buccal mucosa. Polymorphism in the TNF-ß gene was analyzed by PCR, followed by NcoI restriction endonuclease digestion (RFLP). Results: The TNF-ß (+252A/G) polymorphism showed association with chronic periodontitis. Significant differences were found for the TNF-ß allele or carriage rate frequencies; odds ratio (OR)=2.67. Conclusions: These findings suggest that genotype composed of TNF- ß gene polymorphism may influence the susceptibility to chronic periodontitis / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Memoria para optar al título de Bioquímico / Durante la inflamación de las mucosas, las células epiteliales y los macrófagos expresan el receptor de tipo Toll 4 (TLR4) y secretan citoquinas, las que potencian el cuadro. Sin embargo, hasta ahora existe escasa información acerca de la regulación de la expresión de TLR4 por la combinación de moléculas pro-inflamatorias y antiinflamatorias. Utilizando la línea celular de epitelio pulmonar, las células A549, se evaluó la expresión del TLR4 a nivel de transcrito, proteína y actividad transcripcional de mutantes con deleciones en la región promotora del receptor, posterior a la exposición al factor de necrosis tumoral á (TNFα) en presencia o ausencia del glucocorticoide sintético Dexametasona (Dex), mediante PCR en tiempo real, inmunoblot o citometría de flujo, y ensayos del gen reportero luciferasa, respectivamente. El aumento de la expresión de TLR4 inducido por TNFα, tanto a nivel del mRNA como de la proteína, es revertido por la adición de Dex. La regulación de la actividad transcripcional del promotor de TLR4 por estas moléculas fue similar a la observada a nivel de proteína, y el efecto inhibitorio de Dex estaría comandado por al menos un elemento de respuesta del receptor de glucocorticoides, GR (GRE). En conjunto, estos resultados demuestran un efecto antagónico de Dexametasona sobre la expresión de TLR4 inducida por TNFα, aparentemente por un mecanismo que involucra al menos la regulación de GR a nivel del promotor de TLR4. Se evidenció claramente en estas células los fuertes efectos antagónicos que ejercen sobre la expresión de TLR4, moléculas pro-inflamatorias como es TNFα y antiinflamatorias como los glucocorticoides

Tesis para optar al grado académico de Doctora en Bioquímica / Antecedentes y objetivo: La aterosclerosis se caracteriza por una desdiferenciación las células de músculo liso vascular (VSMC) a un fenotipo migratorio, proliferativo, con baja expresión de proteínas de contracción y una elevada síntesis de matriz extracelular. Esta enfermedad cardiovascular tiene un componente inflamatorio crónico con presencia del factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) en el tejido aterosclerótico. Además, se ha observado que las VSMC de placas de ateroma tienen inducida la autofagia, un mecanismo asociado con la degradación de proteínas y organelos intracelulares. El objetivo de este estudio fue evaluar si el TNF-α induce desdiferenciación en las VSMCs, transformándolas a un fenotipo proinflamatorio con mayor capacidad de migración y proliferación, y si este cambio de fenotipo es mediado por autofagia. Metodología: El modelo de estudio es la línea celular de VSMCs de aorta de rata A7r5. El estímulo de TNF-α fue de 100 ng/mL. La autofagia se determinó midiendo los niveles proteicos de LC3-II, p62 y formación de vacuolas autofágicas marcándolas con LC3-GFP. La participación de la autofagia se evaluó inhibiéndola farmacológicamente con cloroquina, y genéticamente con siRNA de Beclin1. La desdiferenciación celular se evaluó midiendo la expresión y organización de las proteínas de contracción α-SMA y SM22, los niveles de las proteínas de matriz extracelular colágeno tipo I y osteopontina, proliferación celular por incorporación de [3H]-timidina y ensayo de MTT, y migración por ensayo de herida y de transwell usando una cámara Boyden. Los parámetros inflamatorios se evaluaron mediante la medición de las proteínas IL-1β, IL-6 e IL-10 por ELISA. Resultados: El TNF-α indujo autofagia reflejado por un aumento de LC3-II (1,91±0,21 veces vs control, p<0,01) y una disminución de p62 (0,77±0,05 veces vs control, p<0,001). Esta autofagia fue dependiente de IKK ya que el aumento de LC3-II inducida por TNF-α se inhibió con BAY-117082. Además, TNF-α indujo migración celular (1,45±0,09 veces vs control, p<0,01), proliferación (2,33±0,24 veces vs control, p<0,05), secreción de IL-6 (258±53 veces vs control, p<0,01), aumento de las proteínas de matriz extracelular colágeno tipo I (3,09±0,85 veces vs control, p<0,01) y osteopontina (2,32±0,46 veces vs control, p<0,01) y disminución de las proteínas contráctiles α-SMA (0,74±0,12 veces vs control, p<0,05) y SM22 (0,54±0,01 veces vs control, p<0,05). Además, el factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB), un inductor clásico de desdiferenciación de VSMC, al igual que el TNF-α, también indujo un aumento de la secreción de IL-6 en las VSMC. Cuando se inhibió la autofagia farmacológica o genéticamente, estos cambios fenotípicos inducidos por TNF-α no ocurrieron. Conclusión: En este trabajo se demostró que el TNF-α induce desdiferenciación celular, proliferación y migración en VSMCs de forma dependiente de autofagia. Además, el TNF-α también aumentó la secreción de IL-6, efecto que fue también dependiente de autofagia. Debido a que el fenotipo proinflamatorio también se indujo con PDGF-BB, sugerimos que el fenotipo proinflamatorio podría ser una característica común de las VSMC desdiferenciadas. Palabras claves: VSMC, TNF-α, autofagia, desdiferenciación, migración, proliferación y citoquinas / Background and aim: Atherosclerosis is characterized by vascular smooth muscle cells (VSMC) dedifferentiation to a proliferative and migratory phenotype with low contractile protein expression and high extracellular matrix synthesis. This cardiovascular disease has a chronic inflammatory component with the presence of tumor necrosis factor-α (TNF-α) in the atherosclerotic tissue. Furthermore, it has been observed that VSMC of atheromatous plaques have increased autophagy, a mechanism associated with protein and intracellular organelles degradation. The aim of this study was to evaluate if TNF-α induces VSMC dedifferentiation, triggering a proinflammatory phenotype with higher migration and proliferation capacity, and if this phenotype switching is mediated by autophagy. Methodology: Studies were performed in a rat aortic VSMC cell line A7r5. Cells were stimulated with TNF-α 100 ng/mL. Autophagy was determined by measuring LC3-II and p62 protein levels and autophagic vesicles formation using LC3-GFP. Autophagy was pharmacologically inhibited with chloroquine, and genetically with a siRNA Beclin1. Cell dedifferentiation was evaluated by measuring the expression and organization of contractile proteins α-SMA and SM22, extracellular matrix protein osteopontin and type I collagen levels. Cell proliferation was measured by [3H]-thymidine and MTT assay, and migration was evaluated by wound assay and transwell using a Boyden chamber. Inflammatory parameters were measured by the expression of IL-1β, IL16 and IL-10 proteins by ELISA. Results: TNF-α induced autophagy as determined by LC3-II level increase (1.91±0.21 fold vs control, p<0.01) and p62 level decrease (0.77±0.05 fold vs control, p<0.001). This autophagy was dependent on IKK because TNF-α-dependent LC3-II increase was inhibited by BAY-117082. In addition, TNF-α induced migration (1.45±0.09 fold vs control, p<0.01), proliferation (2.33±0.24 fold vs control, p<0.05), IL-6 secretion (258±53 fold vs control, p<0.01), extracellular matrix proteins collagen type I (3.09±0.85 fold vs control, p<0.01) and osteopontin (2.32±0.46 fold vs control, p<0.05), and decreased contractile proteins α -SMA (0.74±0.12 fold vs control, p<0.05) and SM22 (0.54±0.01 fold vs control, p<0.05). In addition, platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB), a classic VSMC dedifferentiation inducer, as well as TNF-α, also induced an increase in IL-6 secretion in those cells. When autophagy was pharmacologically or genetically inhibited, these TNF-α-induced phenotypic changes did not occur. Conclusion: In this study it was shown that TNF-α induces cell dedifferentiation, proliferation and migration in VSMCs in an autophagy dependent manner. In addition, TNF-α also increases IL-6 secretion, this effect is also dependent of autophagy. Because the proinflammatory phenotype is also induced with PDGF-BB, we suggest that the proinflammatory phenotype could be a common feature of dedifferentiated VSMCs / Mecesup; Fondecyt; Fondap; Proyecto Anillo de Investigación de Ciencia y Tecnología

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN) es una enfermedad viral altamente contagiosa que afecta a los salmónidos, causando grandes mortalidades en individuos jóvenes. Se ha observado que la resistencia a esta enfermedad tiene un fuerte componente genético, identificado por un loci de rasgos cuantitativos (QTL) dentro del grupo de ligamiento 21. El objetivo de este trabajo consiste en identificar huellas de selección asociadas con la resistencia a IPN en poblaciones chilenas de salmón del Atlántico. Para esto se genotiparon cuatro poblaciones, calculando el desequilibrio de ligamiento (LD) dentro del grupo de ligamiento 21, buscando si existían diferencias para la región asociada al QTL. Los resultados mostraron que existen diferencias significativas en esta región en una de las poblaciones. De este modo se podría concluir que ésta población se vio sometida a un proceso selectivo de el o los genes presentes en la región responsable de la resistencia a IPN, modificando la estructura genética de la zona, presentando una huella de selección. Estos resultados muestran que ha existido un proceso selectivo para éste rasgo, que puede ser identificable a nivel del genoma. Sin embargo, es necesario tomar en cuenta la influencia de un proceso de admixtura, por lo que los resultados deben tomarse con precaución

Mutagenesis screening in mice is an effective means of identifying essential genes in cardiovascular development. The l11Jus8 (L8) mutant mouse line was originally isolated from a region-specific N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) chemical mutagenesis screen and exhibited an autosomal recessive mid-gestational embryonic lethal phenotype characterised by haemorrhage in the thoracic cavity, blood pooling in the heart, right ventricular dysmorphology and yolk sac vascular degeneration. Prior work mapped the L8 mutation to a ~2.77Mb region on mouse chromosome 11. The aim of this study was to further characterise the L8 mutant phenotype and identify the L8 causative mutation. Phenotypic characterisation conducted here confirmed mid-gestational lethality, haemorrhage and yolk sac vascular degeneration in L8 mutants. Histological analysis of L8 mutants demonstrated presence of fragmented cell nuclei and loss of myocardial integrity in embryonic atrial myocardium. Areas of fragmented cell nuclei did not exhibit positive staining for apoptosis. Furthermore, L8 mutants did not appear to experience typical cardiac defects in aspects including myocardial or smooth muscle differentiation, cell proliferation, ECM production, myocardial hypoplasia/hyperplasia, basement membrane components or observable aberrations in cardiac conduction. L8 mutants exhibited atypical cardiac defects including sudden cessation of heartbeat with morphological indicators of necrosis such as swelling of mitochondria and release of microparticles both from atrial myocardial cells. The L8 mutant appears to represent a novel combination of cardiac defects or novel defects with secondary cardiac phenotypes. Sequencing of the coding exons and splice junctions of 22 candidate genes within the ~2.77Mb L8 locus did not identify the causative mutation. The L8 locus was therefore further refined to a ~1.16Mb region including 20 genes. Sanger sequencing of 10 of these genes plus targeted sequence capture and SOLiD sequencing of the region did not identify a potential L8 mutation. Given the refinement of the candidate locus and advances in sequencing technology and analysis, further sequencing will likely identify the L8 mutation and confirm the cause of the embryonic lethal phenotype.

Philosophiae Doctor - PhD / The blood-brain barrier (BBB) is a critical interface between the blood circulation and brain tissue which performs critical selection of circulating molecules that gain access to the brain tissue. Its unique ability to adjust to changes in the constituents of the blood circulation confer in the BBB a dynamic nature enabling changes in its properties to suit the homeostatic needs of the brain. Dysfunction of the BBB has been established to be pivotal to the initiation and/or maintenance of an array of neurological disorders, most of which involve the production of excess reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress in their pathophysiology. Thus, clinical trials of exogenous antioxidant agents have been proposed and initiated, with most results being inconclusive. Extensive studies of the impact, capacity and plasticity of endogenous antioxidants in the cells that constitute the blood-brain barrier, especially the brain endothelial cells, therefore, became necessary for the rational choice, timing, and the mode of application of antioxidants in the management of oxidative stress-mediated neurological diseases.