Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Coorientador: Ricardo Tadeu de faria / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: Jackson Antônio Marcondes de Souza / Banca: Virgínia Silva Carvalho / Banca: Wagner Aparecido Vendrame / Resumo: A criopreservação como forma de conservação em longo prazo de recursos genéticos e a poliploidização de orquídeas são importantes estratégias para o melhoramento genético destas plantas. Os objetivos gerais deste trabalho foram criopreservar e poliploidizar explantes de orquídeas com avaliação da estabilidade genética. Métodos criopreservantes baseados na vitrificação foram desenvolvidos para explantes de Dendrobium Swartz. híbrido ‗Dong Yai' e Oncidium flexuosum Sims. Sementes maduras de Dendrobium Swartz. híbrido foram criopreservadas em diferentes tempos de exposição à solução vitrificante de plantas 2 (PVS2) entre 0-6h a 0 °C e mergulhado em nitrogênio líquido durante 30 min. Após este período, as sementes foram recuperadas e colocadas para germinar em meio nutritivo MS com metade da concentração de sais (½ MS), incubadas em condições in vitro e avaliadas por meio da contagem de protocormos brotados após 30 dias. Os períodos de exposição à PVS2 entre 1-3h foram mais eficientes para a germinação do híbrido avaliado. Os protocormos desenvolveram plantas completas que foram aclimatizadas com sucesso em casa de vegetação. A análise de citometria de fluxo de plantas controles (não criopreservadas) e daquelas originadas de sementes vitrificadas não apresentou alteração no conteúdo de DNA total. Sementes maduras e protocormos brotados após 30 dias foram investigados para a vitrificação e vitrificação em gotículas, respectivamente, com a utilização dos aditivos floroglucinol e Supercool X1000. Sementes vitrificadas durante 1h com adição de 1% de floroglucinol resultou em 79% de germinação. Para protocormos, o pré-tratamento com sacarose 0,3M durante 24h seguido da exposição a solução PVS2 contendo 1% de floroglucinol por 15 min retornou 14% de sobrevivência após 75 dias de cultivo em condições in vitro. As plantas produzidas ... / Abstract: Cryopreservation as a long-term conservation form of genetic resources and polyploidization of orchids are important strategies for genetic breeding. The aims of this work were to make cryopreservation and polyploidization of orchid explants, with genetic stability evaluation. Vitrification-based methods were developed for Dendrobium Swartz. hybrid ‗Dong Yai' and Oncidium flexuosum Sims explants. Mature seeds of Dendrobium Swartz. hybrid were cryopreserved in different time exposures to plant vitrification solution 2 (PVS2) for 0-6h at 0 °C and plungged into liquid nitrogen for 30 min. Later, seeds were recovered and germinated in halfstrength MS medium (½ MS), incubated in vitro and, after 30 days, germinated protocorms were evaluated. PVS2 time exposures between 1-3h were more efficient for the hybrid germination. Protocorms developed whole seedlings that were successfully acclimatized in greenhouse. Flow-cytometry analysis of seedlings from control (not cryopreserved) and those originated from vitrified seeds did not present any DNA total content difference. Mature seeds and 30-day-old protocormos were investigated for vitrification and droplet-vitrification, respectively, with cryoprotection additives phloroglucinol and Supercool X1000. Seeds vitified for 1h with 1% phloroglucinol resulted 79% germination. Protocorms pretreated with sucrose 0.3M for 24h and exposed to PVS2 with 1% phloroglucinol for 15 min returned 14% survival at 75 days after cultivation in vitro. Seedlings originated presented normal growth. For cryopreservation of Oncidium flexuosum Sims., mature seeds vitrified for 2h with PVS2 and 1% phloroglucinol presented germination extended in 68%. After 6 months in culture, there were no differences on seedlings growth in vitro and ex vitro for phenotypical characteristics. Comparative analysis of seedlings from control and cryopreserved using flow-cytometry indicated ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-15Bitstream added on 2014-06-13T21:01:39Z : No. of bitstreams: 1 moraes_cp_dr_rcla.pdf: 1437388 bytes, checksum: e066c411adea82f23bca10e7e585f5c6 (MD5) / As Orchidaceae, facilmente reconhecíveis pelo aspecto modificado de suas flores, compreendem mais de 20.000 espécies cosmopolitas distribuídas em cinco sub-famílias. A subtribo Zygopetalinae é um grupo tipicamente neotropical incluído na subfamília Epidendroideae e compreende cerca de 30 gêneros e 418 espécies de hábito vegetativo variado. Visando complementar as informações sobre a estrutura dos órgãos vegetativos dos representantes dessa subtribo, estudou-se a anatomia das raízes, caules e folhas de alguns táxons brasileiros, muitos deles de posição taxonômica incerta e pouco conhecidos, sob o ponto de vista anatômico. Comparando os resultados obtidos com os descritos para outros representantes da mesma subtribo, observou-se uma uniformidade anatômica entre os órgãos das espécies brasileiras e das anteriormente estudadas, corroborando a inclusão de Zygopetalinae na tribo monofilética Cymbidieae. Observou-se, também, uma uniformidade nas características anatômicas, dentro dos gêneros, indicando que muitos aspectos podem ser úteis na análise sistemática da subtribo / The Orchidaceae, easily recognized by the modified aspect of their flowers, comprises more than 20,000 cosmopolitan species distributed in five subfamilies. The Zygopetalinae subtribe is a typically neotropical group included in the Epidendroideae subfamily and comprises around 30 genera and 418 species of varied vegetative habit. Aiming to complement the information about the structure of the vegetative organs of the representatives of this subtribe, the anatomy of roots, stems and leaves of some Brazilian taxa, may of them of uncertain and little known taxonomic position under the anatomical point of view, were studied. Comparing the results obtained with the ones described for the other representatives of the same subtribe, an anatomical uniformity among the organs of the Brazilian species and the ones previously studied was observed corroborating the inclusion of Zygopetalinae in the Cymbidieae monofiletic tribe. It was also observed an uniformity in the anatomical characteristics, within the genera, indicating that many aspects can be useful in the systematic analysis of the subtribe

Orientador: Kathia Fernandes Lopes Pivetta / Coorientador: Ricardo Tadeu de Faria / Coorientador: Wagner Aparecido Vendrame / Banca: Renata Gimenes / Banca: Marcos Vieira Ferraz / Banca: Paulo Hercilio Viegas Rodrigues / Banca: Claudia Fabrino Machado Mattiuz / Resumo: As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que, possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O aprimoramento dos métodos de conservação de recursos genéticos por meio de criopreservação de sementes em desenvolvimento é uma importante estratégia para a conservação de germoplasma e programas de melhoramento genético de plantas desta família. Este trabalho teve como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes das orquídeas Amblostoma amblostomoides e Cattleya percivaliana, bem como, diferentes protocolos para a criopreservação de sementes da orquídea Ionopsis utricularioides. Nos experimentos sobre desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes, para cada espécie, o delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Inicialmente foram seis tratamentos (T1 - meio MS (Murashige e Skoog) + sala de crescimento - Controle; T2 - MCA (meio de cultura alternativo) + sala de crescimento; T3 - MCA + tela preta com 70% de sombreamento; T4 - MCA + tela azul com 50% de sombreamento; T5 - MCA + tela preta com 50% de sombreamento e T6 - MCA + tela vermelha com 50% de sombreamento) e quatro repetições com 10 plântulas por parcela avaliando-se porcentagem de sobrevivência; para avaliação dos dados biométricos, em razão do alto índice de mortalidade, foram avaliados quatro tratamentos para A. amblostomoides e três tratamentos para C. percivaliana, com 12 repetições para ambas as espécies, sendo uma plântula... / Abstract: Orchids are well appreciated by ornamental, ecological and economic potential. The improvement of genetic resources conservation methods through seeds and protocorms cryopreservation is an important strategy for the conservation of germplasm and plant breeding programs of this family. The domain of techniques for domestication and mass propagation of species is very important because, enables decreasing predation and reduce the cost of production of plants. The in vitro culture is a technique that allows the production of a large numbers of plants; however, there are many losses during the acclimatization period (ex vitro). This work aimed to evaluate different protocols for cryopreservation of Ionopsis utricularioides seeds, as well as the in vitro development of seedlings in alternative culture media and different environments of the orchids, Amblostoma amblostomoides and Cattleya percivaliana. In experiments on cryopreservation of seeds for each species, the experimental design was completely randomized with eight treatments and four replications each. The treatments were: T1) seeds without cryopreservation (control 1); T2) seeds cryopreserved without cryoprotectants (Control 2); T3) glycerol + PVS2; T4) glycerol + PVS2 + phloroglucinol; T5) sucrose + PVS2; T6) sucrose + PVS2 + phloroglucinol; T7) glycerol + sucrose + PVS2; and T8) + sucrose + glycerol + PVS2 + phloroglucinol and 10 repetitions. The variables analyzed were germination percentage, number of seedlings and protocorms and development of the seedlings formed. In the experiments on in vitro development of seedlings in an alternative culture media and in different environments, the experimental design was completely randomized for each species. There were six treatments [T1: MS medium (Murashige e Skoog) - under laboratory conditions; T2: ACM (Alternative Culture Medium) - under laboratory conditions; T3: MCA - black net with 50% shading; T4: MCA - black net with ... / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2017 / Made available in DSpace on 2017-09-19T04:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347951.pdf: 5621990 bytes, checksum: 71af476d9d71bb8e628733d5f2b603cc (MD5) Previous issue date: 2017 / Os remanescentes de floresta de Mata Atlântica, localizados na região Sul do Brasil, são habitados por povos indígenas, como os Mbyá-Guarani, que extraem recursos vegetais para a sua sobrevivência. O objetivo do presente trabalho foi estudar a relação dos Mbyá-Guarani com as espécies de Orchidaceae presentes na Mata Atlântica e a importância desta família botânica para seu modo de vida, assim como descrever anatomicamente as espécies de maior importância para os Mbyá-Guarani, a fim de destacar as características adaptativas ao modo de vida epifítico, a fim de auxiliar em trabalhos futuros de manejo destas espécies, tanto para os Gurani como para auxiliar na conservação das espécies. Foram realizadas três entrevistas semi-estruturadas e duas turnês guiadas com 10 entrevistados. Os indivíduos das espécies citadas como as mais importantes para os Mbyá-Guarani foram coletados para identificação, num total de 26 espécies coletadas, distribuídas em 22 gêneros, entre estas, 14 espécies pertencentes a 10 gêneros, foram utilizadas para o estudo morfoanatômico. O critério utilizado na seleção foi considerar as espécies/gêneros mais comercializados pelos Guarani. Todas as espécies coletadas são de hábito epífito. As espécies pertencem a duas tribos da família Orchidaceae: Epidendreae e Cymbidieae, e seu manejo e cultivo seguem uma lógica, a fim de assegurar a conservação das espécies na mata. A partir das entrevistas foi observado que a comercialização de espécies de Orchidaceae não são a principal fonte de renda das famílias, mas esta prática está associada a outra atividade como, por exemplo, a comercialização de artesanato. Além disso, a pesar de ser uma atividade mais recente, ela se baseia na cultura Guarani. O estudo anatômico forneceu informações importantes sobre a estrutura interna das folhas e raízes das espécies de Orchidaceae analisadas, ressaltando principalmente as estruturas adaptativas ao hábito epifítico como presença de parênquima aquífero, fibras extraxilemáticas no mesofilo, velame, tilossomos, idioblastos traqueoidais. Tais informações são relevantes para futuros trabalho de manejo das espécies tanto no ambiente quanto em viveiros. As informações foram repassadas para a Terra Indígena através de um curso de manejo, para auxiliar no manejo e conservação das espécies em viveiros. / Abstract: The remnants of Atlantic Forest, located in southern Brazil, are inhabited by indigenous people such as the Mbyá-Guarani, who extract plant resources for survival. The objective of this research was to study the relationship between the Mbyá-Guarani and the Orchidaceae species present in the Atlantic Forest and the importance of this botanical family for their livelihood. We also aimed to anatomically describe the important species of Orchidaceae for the Mbyá-Guarani, in order to highlight the adaptive characteristics to the epiphytic way of life, to assist in future initiatives of species management, both for the Gurani and helping in the conservation of species. Three semi-structured interviews and two guided tours were conducted with 10 interviewees. The individuals of eachspecies cited as most important for the Mbyá-Guarani were collected for identification, in a total of 26 species collected, distributed in 22 genera. Fourteen species belonging to 10 genera were used for the morpho-anatomical study. The criterion used in the selection was to consider thespecies / genera more commercialized by Guarani. All species collected have epiphytic habit. The species belong to two tribes of the family Orchidaceae: Epidendreae and Cymbidieae; their management and cultivation follow a logic to ensure a conservation of the species in the forest. From the interviews we observed that the commercialization of Orchidaceae species is not a main source of income for the families, and this practice is associated with another activity, such as, for example, the commercialization of handicrafts. In addition, despite being a more recent activity, it is based on the Guarani culture. The anatomical study provided important information about the internal structure of the leaves and roots of the Orchidaceae species analyzed, emphasizing mainly the adaptive structures for the epiphytic habit such as hypodermis, non-mesophilic extraxilem fibers, canopy, tilosomes and tracheoid idioblasts. Such information is relevant for future management of the species both in the environment and in nurseries. The informations were transferred to the indigenous land through a management course, in order to assist non-management and conservation of species in nurseries.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:53Z : No. of bitstreams: 1 000859876_20160630.pdf: 471050 bytes, checksum: b283e5cdd6fee1565d98e89bf93e40b0 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-01T13:02:23Z: 000859876_20160630.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:03:18Z : No. of bitstreams: 1 000859876.pdf: 729708 bytes, checksum: 0c3f9644fb91e37bed700362170aae04 (MD5) / As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que, possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O aprimoramento dos métodos de conservação de recursos genéticos por meio de criopreservação de sementes em desenvolvimento é uma importante estratégia para a conservação de germoplasma e programas de melhoramento genético de plantas desta família. Este trabalho teve como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes das orquídeas Amblostoma amblostomoides e Cattleya percivaliana, bem como, diferentes protocolos para a criopreservação de sementes da orquídea Ionopsis utricularioides. Nos experimentos sobre desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes, para cada espécie, o delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Inicialmente foram seis tratamentos (T1 - meio MS (Murashige e Skoog) + sala de crescimento - Controle; T2 - MCA (meio de cultura alternativo) + sala de crescimento; T3 - MCA + tela preta com 70% de sombreamento; T4 - MCA + tela azul com 50% de sombreamento; T5 - MCA + tela preta com 50% de sombreamento e T6 - MCA + tela vermelha com 50% de sombreamento) e quatro repetições com 10 plântulas por parcela avaliando-se porcentagem de sobrevivência; para avaliação dos dados biométricos, em razão do alto índice de mortalidade, foram avaliados quatro tratamentos para A. amblostomoides e três tratamentos para C. percivaliana, com 12 repetições para ambas as espécies, sendo uma plântula... / Orchids are well appreciated by ornamental, ecological and economic potential. The improvement of genetic resources conservation methods through seeds and protocorms cryopreservation is an important strategy for the conservation of germplasm and plant breeding programs of this family. The domain of techniques for domestication and mass propagation of species is very important because, enables decreasing predation and reduce the cost of production of plants. The in vitro culture is a technique that allows the production of a large numbers of plants; however, there are many losses during the acclimatization period (ex vitro). This work aimed to evaluate different protocols for cryopreservation of Ionopsis utricularioides seeds, as well as the in vitro development of seedlings in alternative culture media and different environments of the orchids, Amblostoma amblostomoides and Cattleya percivaliana. In experiments on cryopreservation of seeds for each species, the experimental design was completely randomized with eight treatments and four replications each. The treatments were: T1) seeds without cryopreservation (control 1); T2) seeds cryopreserved without cryoprotectants (Control 2); T3) glycerol + PVS2; T4) glycerol + PVS2 + phloroglucinol; T5) sucrose + PVS2; T6) sucrose + PVS2 + phloroglucinol; T7) glycerol + sucrose + PVS2; and T8) + sucrose + glycerol + PVS2 + phloroglucinol and 10 repetitions. The variables analyzed were germination percentage, number of seedlings and protocorms and development of the seedlings formed. In the experiments on in vitro development of seedlings in an alternative culture media and in different environments, the experimental design was completely randomized for each species. There were six treatments [T1: MS medium (Murashige e Skoog) - under laboratory conditions; T2: ACM (Alternative Culture Medium) - under laboratory conditions; T3: MCA - black net with 50% shading; T4: MCA - black net with ...

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5434.pdf: 780828 bytes, checksum: 48a9fc16b08390721a72c2c717a9c379 (MD5) Previous issue date: 2013-08-22 / Orchidaceae is one of the largest and diverse families of angiosperms, that is in almost every type of habitat, except tundras and deserts. They are considered of great ornamental importance, the genus Phalaenopsis has received a great prominence having increaed and its production enlarged in the Gross and inner market This way, the Brazilian floriculture market has a great demand in seedling production, requiring more studies and researches involving biotechnologycal techniques from the development of vases and containers on a prepared substrate, propagation techniques and acclimatization. And with in vitro culture, it is possible that the desirable plant coul be multiplied through several sucbultures, which enables an earlier and new cultivation available more quickly for commercial use. The luminosity is another factor that is gaining prominence in the productivity of orchids, the fact that the quality of light affects directly the growth and development of plants grown in vitro and/or ex vitro. The present work had as objective to anlyze the growth of in vitro and acclimatization in the two cultivations (cv. 6323 and cv. 6546) of orchid Phalaenopsis amabilis Blume, under different lighting spectra. Inicially it occurred the sowing the seedling in the cultivation enviroment MS that were enveloped with different cellophanes: yellow, blue, Green, red, and white. After 60 cultivation days it was performed an statistical evaluation on the seedling. Afterward, they were put in collective vases to the phase of acclimatization, and those ones stand for more three months. Through analyze the biometric data it can be observed that the growing in vitro and ex vitro of Phalaenopsis amabilis was influenced by many different spectra lights, considering that the various results of this influence from the genotype. It can be observed that the blue spectrum performed a great performance on cv. 6323 and on the Green spectrum cv. 6546. / Orchidaceae é uma das maiores e diversificadas famílias de angiospermas, que ocupam quase todo tipo de habitat, exceto tundras e regiões desérticas. São consideradas de grande importância ornamental, principalmente as do gênero Phalaenopsis que tem recebido grande destaque, e sua produção aumentada no mercado interno e externo. Dessa forma, o mercado florícola brasileiro teve uma grande demanda na produção de mudas, exigindo mais estudos e pesquisas biotecnológicas que envolvessem técnicas desde o desenvolvimento de vasos e recipientes, a substratos, formas de propagação e aclimatação. Nesse ínterim, com a cultura in vitro, é possível obter a partir de uma planta de interesses desejáveis, a multiplicação desta em vários subcultivos, que possibilita que uma nova cultivar esteja disponível mais rapidamente para uso comercial. A luminosidade é outro fator que vem ganhando destaque na produtividade de orquídeas frente à sua influência direta no crescimento e desenvolvimento de plantas cultivadas in vitro e/ou ex vitro. O presente trabalho teve como objetivo analisar o crescimento in vitro e a aclimatação de dois cultivares (cv. 6323 e cv. 6546) da orquídea Phalaenopsis amabilis, sob diferentes espectros luminosos. Inicialmente, ocorreu a semeadura da plântula em meio de cultura MS que foram envelopados com diferentes cores de celofane: amarelo, azul, verde, vermelho e o controle. Passados 60 dias de cultivo, foi feita a avaliação estatística das plântulas. Posteriormente, foram envasadas em vasos coletivos para a fase de aclimatação, as quais permaneceram por mais três meses. A partir dos dados biométricos analisados pode-se observar que o crescimento in vitro e ex vitro de Phalaenopsis amabilis foi influenciado pelos diferentes espectros luminosos, sendo os variados resultados desta influência decorrentes do genótipo. Pode se observar que o espectro azul exerceu maior influência sobre o cv. 6323 e o espectro verde sobre o cv. 65496.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:04Z : No. of bitstreams: 1 000869037.pdf: 4086201 bytes, checksum: 3e7f718f4023bf98b9884fa1fe3bbc4b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Orientador: Maria das Graças Sajo / Coorientador: Fábio de Barros / Banca: Ludmila Mickellumas Pansarin / Banca: Claudio Nicoletti de Fraga / Banca: Poliana Ramos Cardoso / Banca: Silvia Rodrigues Machado / Resumo: / Abstract: / Doutor

Orientador : Eliana Regina Forni-Martins / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T21:09:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_JuliaYamagishi_D.pdf: 4268702 bytes, checksum: 5ceb4f75d53e52eb1a73e6e26179508e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Dentro da família Orchidaceae, composta por cerca de 25.000 espécies, o gênero Hoffmannseggella (antiga seção Parviflorae do gênero Laelia Lindl.) é composto por espécies rupícolas, endêmicas da Cadeia do Espinhaço/MG. Estudos sugerem uma evolução rápida para o gênero, com a transição do hábito epifítico para o rupícola, mudança de polinizadores e eventos de hibridização e poliploidia como os principais mecanismos evolutivos envolvidos na origem das espécies de Hoffmannseggella. Estudos cromossômicos prévios haviam sugerido o número básico de x=20 para o gênero, com alta incidência de poliplóides. No presente trabalho, foram obtidas contagens cromossômicas para dez espécies: H. angereri n=20/2n=40, H. bradei n=20-21/2n=40, H. briegeri 2n=80, H. caulescens 2n=80, H. cinnabarina 2n=40, H. crispata n=20, H. fournieri n=20/2n=40, H. liliputana 2n=40/60, H. rupestris n=40/2n=80 e 2n=40 e H. viridiflora 2n=44. Foi observada aneussomatia em células de meristema radicular em H. briegeri (2n=80) e H. rupestris (2n=80), ocorrência de citótipos em H. rupestris (2n=40/80) e anormalidades meióticas em várias espécies, com presença de monovalentes, disjunção adiantada de bivalentes e possíveis tetravalentes nas espécies poliplóides. Por ocorrerem em sincronopatria, apresentarem alta similaridade morfológica e pelas características cromossômicas, é provável que H. viridiflora tenha se originado por aneuploidia a partir de H. bradei. Através dos procedimentos de bandamentos C, CMA/DA/DAPI e DAPI/AMD, foi possível observar grandes diferenças entre os cariótipos das espécies H. angereri, H. bradei, H. briegeri, H. caulescens, H. fournieri, H. liliputana e H. rupestris. Em geral, as espécies apresentaram grande número de bandas C (predominantemente centroméricas e subteloméricas), poucas bandas CMA/DA+ (subteloméricas), e grande variação no número de bandas DAPI/AMD+ (predominantemente teloméricas). Apenas H. bradei apresentou somente duas bandas heterocromáticas, uma CMA/DA+ DA/DAPI- e uma DAPI/AMD+ e H. briegeri apresentou polimorfismo para bandas CMA/DA/DAPI. Com relação aos sítios 45S de DNAr, os resultados foram uniformes, sendo que as espécies diplóides, com 2n=40, apresentaram dois sítios, enquanto as espécies poliplóides, com 2n=80, apresentaram 4 sítios / Abstract: Inside Orchidaceae, composed of almost 25,000 species, Hoffmannseggella H.G.Jones (previous genus Laelia Lindl., section Parviflorae) is characterized by rupiculous species, endemic to the Espinhaço Range/ MG. Previous studies suggested an explosive evolution of the genus, with transition from epiphytic to rupiculous habitat, changes on pollinator specificity and events of hibridization and polyploidy as the main evolutionary mechanisms that originated Hoffmannseggella species. Chromosome data from literature suggested the base number of x=20 for the genus, with high incidence of polyploids. The present work presents chromosome counts for ten species: H. Angereri n=20/2n=40, H. bradei n=20-21/2n=40, H. briegeri 2n=80, H. caulescens 2n=80, H. cinnabarina 2n=40, H. crispata n=20, H. fournieri n=20/2n=40, H. liliputana 2n=40/60, H. rupestris n=40/2n=80 and 2n=40 and H. viridiflora 2n=44. We observed aneussomaty on root meristematic cells of H. briegeri (2n=80) and H. rupestris (2n=80), two distinct cytotypes of H. rupestris (2n=40 and 2n=80) and meiotic abnormalities in several species, like monovalents, early disjunction of bivalents and putative tetravalents on polyploid species. Because they are found sinchronopatric, with high morphological and chromosomal similarity, we suggest that H. viridiflora (2n=44) is an aneuploid derived from H. bradei (2n=40). With C, CMA/DA/DAPI and DAPI/AMD banding techniques, we observed great differences among H. angereri, H. bradei, H. briegeri, H. caulescens, H. fournieri, H. liliputana e H. rupestris. With exception of H. bradei, that presented only two heterochromatic, one CMA/DA+ DA/DAPI- and one DAPI/AMD+ bands, all species presented a high number of C-bands (mainly centromeric and subtelomeric), few CMA/DA+ bands (subtelomeric), and great numeric differences of DAPI/AMD+ bands (mainly telomeric). We also observed, in H. briegeri, a polymorphism of CMA/DA/DAPI bands. The hybridization sites of 45S rDNA were uniform among species, with diploid species (2n=40) presenting two hybridization signals and polyploid species (2n=80) presenting four signals / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:01:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340551.pdf: 2534346 bytes, checksum: bee632d7e3b4d8a516ae521bdc5d0c02 (MD5) Previous issue date: 2016 / As orquídeas compreendem espécies frequentes do bioma Mata Atlântica, as quais têm sofrido ameaça continua devido à destruição e fragmentação dos seus habitats naturais. Devido às características ornamentais e paisagísticas, elas têm sido extraídas desordenadamente de seus habitats e comercializadas em todo o país. Técnicas de cultura de tecidos abrangem ferramentas que podem ser aplicadas à propagação massal e a conservação de orquídeas em extinção. Durante o estabelecimento in vitro, um padrão de resposta morfogênico definido como estruturas semelhantes à protocormos (ESPs) tem sido proposto para várias espécies de orquídeas como a espécie em estudo. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o padrão de desenvolvimento de ESPs em Cattleya tigrina, visando o avanço no conhecimento desta rota da morfogênese e dos fatores que modulam, bem como, suas aplicações para a conservação e propagação de germoplasma. Explantes foliares, obtidos de plantas jovens, micropropagadas in vitro foram inoculados em meio de cultura MS/2 suplementado com 9µM de TDZ, para a indução e desenvolvimento das ESPs. As culturas foram coletadas aos zero, dois, sete, 14, 30, 60 e 100 dias de cultivo para posteriores análises. Realizou-se análises proteômicas mediante a combinação de géis bidimensionais e espectrometria de massas. Adicionalmente, foram realizadas avaliações do padrão de carboidratos solúveis totais e amido, qualificação dos açúcares e quantificação do hormônio AIA (ácido indol-3-acético) durante a indução e desenvolvimento das ESPs. Através dos resultados foi possível verificar uma reprogramação gênica durante a indução e desenvolvimento dessas estruturas, acompanhada de alterações anatômicas, bioquímicas e metabólicas. Na indução das ESPs foi possível verificar um número significativo de proteínas expressas ao zero dia de cultivo, quando comparado aos demais tempos de cultivo. Proteínas relacionadas ao metabolismo energético e carboidratos; defesa e resposta ao estresse e síntese de proteínas apresentaram significativas alterações na sua expressão durante a indução das ESPs. Durante o desenvolvimento das ESPs alterações na expressão de proteínas associadas aos processos metabólicos; metabolismo energético e carboidratos; ciclo celular e metabolismo secundário e fitohormônios, contribuíram no elevado potencial regenerativo dessas estruturas. Aos 100 dias de cultivo houve maior expressão de proteínas em relação aos demais tempos, o que pode estar relacionado com a ativação do metabolismo em relação ao desenvolvimento das ESPs. Em relação as avalições bioquímicas, foi possível observar que a indução e o desenvolvimento das ESPs foram claramente acompanhados por um aumento nos teores de AIA e diminuição nos teores de açúcares, sendo que este sinal parece ter sido importante para que as células se diferenciassem e adquirissem a necessária competência. Os resultados aqui obtidos ampliam a base científica para aprofundar a compreensão dos fatores que modulam o processo de indução e desenvolvimento das ESPs em C. tigrina.<br> / Abstract : Orchids are species of the Atlantic Forest biome, which are under continuing threat due to the destruction and fragmentation of their natural habitats. Because of its ornamental features, they have been inordinately taken from their habitats and marketed throughout the country. Tissue culture techniques include tools that can be applied to mass propagation and conservation of endangered orchids. During establishment of in vitro cultures of this species, a pattern of morphogenic response defined as protocorm-like bodies (PLBs) have been proposed for various orchid species as the species under study. In this context, the aim of this study was to evaluate the PLBs development pattern in C. tigrina for the advancement in knowledge of this morphogenetic route (pathways) and the factors that modulate, and their applications in the conservation and propagation of germplasm. Leaf explants obtained from young plants, in vitro micropropagated were inoculated into culture medium MS/2 supplemented with 9µM TDZ for the induction and development of PLBs. The cultures were collected after zero, two, seven, 14, 30, 60 and 100 days of cultivation, for further analysis. Proteomic analysis were performed by combining two-dimensional gels and mass spectrometry. Additionally, we performed standard evaluations of total soluble carbohydrates and starch, sugars qualification and quantification of the IAA (Indole-3-acetic acid) hormone during induction and development of PLBs .Through the results it was possible to check a reprogramming of gene during induction and development of these structures, accompanied by anatomical, biochemical and metabolic changes.The induction of PLBs observed a significant number of proteins expressed to zero days of culture, when compared to other cultivation times. Proteins related to energy and carbohydrate metabolism; defense and response to stress and in protein synthesis showed significant changes in expression during induction of PLBs. During the development of PLBs changes in expression of proteins associated with metabolic processes; energy and carbohydrate metabolism; cell cycle and secondary metabolism and phytohormones, contributed to the high regenerative potential of these structures. After 100 days of cultivation there was greater expression of proteins compared to the other times, which may be related to metabolic activation in relation to the development of PLBs. Regarding the biochemical evaluations, it was observed that the induction and development of PLBs was clearly accompanied by an increase in IAA level and a decrease in sugar content, and this signal appears to be important for cells to differentiate and acquire the necessary competence. The results obtained broaden the scientific basis for a deeper understanding of the factors that modulate the process of induction and development of PLBs in C. tigrina.