A periodontite é uma doença de natureza multifatorial e infecciosa, que resulta na inflamação e perda dos tecidos de suporte dos dentes. Essa inflamação é causada por bactérias associadas ao biofilme, causando a perda progressiva de inserção. Os bisfosfonatos são fármacos com capacidade de inibir a reabsorção óssea, atuando nas células clásticas. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos do alendronato, um bisfosfonato nitrogenado com grande potência antireabsortiva, na evolução da doença periodontal induzida em ratos, bem como a possível presença de necrose óssea no processo alveolar. Foram utilizados 48 ratos Wistar albinos, do sexo masculino, com 3 meses de vida e peso médio de 250g. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Alendronato (ALN) e Controle (CON). A periodontite foi induzida com a inserção de um fio de seda 4.0 no sulco gengival do segundo molar superior. Os ratos do grupo ALN, receberam doses diárias de 2,5 mg/kg durante 7 dias antes e 7, 14, 21 e 30 dias após a indução da doença; o grupo CON recebeu solução salina estéril. Nos tempos citados as maxilas foram fixadas, descalcificadas e incluídas em parafina ou resina Spurr. Os cortes foram corados com HE, para análise morfológica, e histomorfométrica. Alguns cortes foram submetidos à imuno-histoquímica para detecção de RANKL e OPG. Foi utilizado o método TRAP, marcador de osteoclastos e microscopia eletrônica de transmissão para análise ultraestrutural. O ALN inibiu a reabsorção da crista alveolar de todos os grupos tratados. As células clásticas apresentaram-se em estado latente. No grupo controle a crista alveolar foi reabsorvida e o TRAP revelou clastos ativos, achados confirmados pela microscopia eletrônica de transmissão. A expressão de RANKL, molécula ativadora da célula clástica, não foi inibida pela droga. A expressão de OPG foi aumentada nos animais tratados. Os animais do grupo tratado durante 21 e 30 dias, apresentaram sinais de osteonecrose na crista alveolar, como lacunas de osteócitos vazias e regiões exposta de osso. Os resultados demonstraram que o uso de alendronato durante a doença periodontal inibe a reabsorção óssea e que durante tempos prolongados pode gerar osteonecrose na região da crista óssea. / Periodontitis is an infectious disease of multifactor nature that results in the inflammation of the tissues supporting the teeth. This inflammation is caused by accumulation of biofilm and causes progressive insertion and bone loss. The bisphosphonates are drugs with the capability to inhibit the activity of clastic cells. The aim of this study was to investigate the effects of alendronate, a nitrogenated bisphosphonate with high antiresorptive power on experimental periodontal disease, and to analyze the possible presence of osteonecrosis in the rat alveolar process. Forty-eight male Wistar rats, three months old, with 250g weight were used. The animals were randomly divided into two groups: Alendronate (ALN) and Control (CON). The periodontitis was induced with a 4.0 silk wire inserted into the gingival sulcus around the right upper second molar. The ALN rats, received daily doses of 2.5 mg/kg alendronate (ALN) for 7 days before the induction of periodontitis; the treatment continued for additional 7, 14, 21 or 30 days. The CON rats, received sterile saline solution. In the time points cited, the maxillae were fixed, decalcified and embedded in Spurr resin or paraffin. The specimens were morphologically analyzed in HE stained sections, after which histomorphometry was carried out. Some stained sections were used for immunolabeling for RANKL and OPG. The osteoclasts were marker by tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry. The ultrathin sections were examined in a transmission electron microscope. ALN reduced the activity of osteoclasts and significantly decreased the resorption of the alveolar crest. In the control group the alveolar crest appeared resorbed, while TRAP showed active osteoclasts, findings confirmed by transmission electron microscopy. The expression of RANKL, an osteoclast-activating molecule, was not inhibited by the drug. The expression of OPG was increased in the treated animals. The animals of the group treated for 21 and 30 days showed signs of osteonecrosis of the alveolar crest, as empty osteocyte lacunae in the exposed bone regions. The results showed that the use of ALN for periodontal disease inhibited bone resorption; when it was administered for prolonged periods it can cause osteonecrosis in the bone crest area.

O reparo ósseo de alvéolos após exodontia dos molares superiores em um modelo animal em ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus) de osteonecrose dos maxilares associada ao uso de bisfosfonatos foi avaliado através de analise microscópica e molecular. Foram utilizados 48 ratos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar) machos, com 12 semanas de vida e peso aproximado de 300 gramas, que foram dividos em 4 grupos. Cada grupo era composto por 12 animais, sendo 2 grupos experimentais AZ e AZ-Cirúrgico (AZ-C), que foram submetidos a administração de ácido zoledrônico, 0,6 mg/kg a cada 28 dias com um total de 5 doses e 2 grupos controles CO e CO-Cirúrgico (CO-C) com administração de cloreto de sódio 0,9% no mesmo volume e frequencia do ácido zoledrônico. Todas as soluções foram administradas por via intraperitoneal. O grupo AZ-C e o grupo CO-C foram submetidos a exodontia do primeiro, segundo e terceiro molares superiores 45 dias após a primeira aplicação das soluções. Todos os animais foram eutanasiados após 150 dias do início do experimento (105 dias após as exodontias). As maxilas dos animais foram avaliadas macroscopicamente para presença de lesões espontâneas e com uma sonda clinica número 5 as regiões das exodontias dos molares foram avaliadas para presença ou ausência de solução continua do epitélio. Após feita a avaliação macroscópica as regiões das exodontias dos molares superior esquerdo e do lado contralateral de cada animal foram submetidas a análises qualitativa e quantitativa para presença de sequestros ósseos, restos radiculares, área de osteonecrose, área de espaço trabecular, área de reação periosteal, através de estudos por microscopia óptica pela coloração Hematoxilina e Eosina. Análise quantitativa da expressão do RNAm de proteínas envolvidas no processo de reparo ósseo RANK, RANKL, OPG e VEGF, pelo método de reação em cadeia da polimerase em tempo real (RealTimePCR) também foi realizada. A avaliação macroscópica mostrou que 91,66% dos animais do grupo AZ-C e 41,66% do grupo CO-C apresentaram solução de continuidade do epitélio, sendo estatisticamente significante maior no grupo em terapia com ácido zoledrônico pelo este exato de Fischer (p<0,05). Todos animais do grupo AZ-C e nenhum do grupo CO-C apresentaram sequestros ósseos e todos os animais apresentaram presença de restos radiculares na análise microscópica. A área de osteonecrose foi maior nos animais do grupo AZ-C do que no grupo CO-C (p<0,005), não havendo diferença estatística entre as áreas de espaço trabecular, reação periosteal e osso total. Na análise molecular de RANK, RANKL, OPG e VEGF não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos CO, AZ, COC e AZ-C, mesmo quando comparadas áreas de exodontia com áreas com dentes. Estes resultados levam a conclusão que o modelo animal utilizado no presente estudo é um modelo seguro, que o ácido zoledrônico interferiu no reparo ósseo dos alvéolos, causando um atraso na remodelação óssea da região e uma maior incidência de osteonecrose e sequestros ósseos. O ácido zoledrônico não afetou a expressão de RANK, RANKL, OPG e VEGF 105 dias após as exodontias. / The alveolar bone repair following extraction of maxillary molars in an animal model of bisphosphonate related osteonecrosis of the jaws in Wistar rats (Rattus norvegicus, Albinus) was assessed through microscopic and molecular analysis. A total of 48 rats (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar rats) with 12 weeks old and weighing approximately 300 grams were used, they were divided into 4 groups. Each group consisted of 12 animals, with 2 experimental groups AZ and AZ-Cirúrgico (AZ-C), who underwent the administration of zoledronic acid, 0.6 mg / kg every 28 days with a total of 5 doses. And 2 control groups CO and CO-Cirúrgico (CO-C) with administration of sodium chloride at 0.9% in the same volume and frequency of zoledronic acid. All solutions were administered intraperitoneally. The group AZ-C and CO-C underwent to extraction of the first, second and third molars 45 days after the first application of the solutions. All animals were sacrificed after 150 days from the beginning of the experiment (105 days after extractions). The maxilla of the animals were assessed macroscopically for the presence of spontaneous lesions, and with a clinical probe number five the regions of the molar extractions were evaluated for the presence or absence of loss of continuity of the oral epithelium. After macroscopic evaluation, the upper left molar and contralateral side of the extraction regions of each animal were submitted to qualitative and quantitative analyzes for the presence of bone sequestrum, root fragments, osteonecrosis area, trabecular space area, area of periosteal reaction, through optical microscopic studies by hematoxylin and eosin staining. And quantitative analysis of mRNA expression of proteins involved in bone repair (RANK, RANKL, OPG and VEGF), by the method of RealTimePCR were carried out. Macroscopic evaluation showed that 91.66% of the AZ -C group and 41.66% of the CO-C group presented a loss of continuity of the epithelium, which was statistically significant higher in the zoledronic acid group according to the Fisher test (p<0.05). All animals in group AZ-C and none in CO-C group showed bone sequestrum and all animals in both groups had root fragments in microscopic analysis. The area of osteonecrosis was higher in the animals of AZ-C group than in CO-C (p<0.005), with no statistical difference between the areas of trabecular space, periosteal reaction and total bone. In the molecular analysis of RANK, RANKL, OPG e VEGF there was no statistically significant difference between the CO, AZ, CO-C e AZ-C groups, even when extraction regions were compared to non extractions areas. These results lead to the conclusion that the animal model described used in this study is a reliable model and zoledronic acid interferes with alveolar bone repair causing a delay in bone emodeling and a higher incidence of osteonecrosis and bone sequestrum. Zoledronic acid did not affect the expression of RANK, RANKL, OPG and VEGF 105 days after dental extractions.

Atualmente é crescente o número de pacientes utilizando drogas que visam a alteração da remodelação óssea. Doenças como osteoporose e tumores ósseos têm possibilidade de tratamento com a utilização dos antirreabsortivos. Entretanto tais medicamentos apresentam, entre outros, um efeito colateral muito nocivo: a osteonecrose dos maxilares (ONM), que consiste em uma lesão rara, mas grave, da mandíbula ou maxila caracterizada por necrose óssea exposta. O denosumab é uma droga antirreabsortiva que possui um mecanismo de ação diferente do encontrado nos bisfosfonatos (BFs), medicação amplamente usada e anterior ao denosumab, entretanto já mostra efeitos colaterais similares aos BFs em relação à ONM e para ambos os medicamentos a fisiopatogenia da doença ainda não está esclarecida pela literatura Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações do denosumab sobre a viabilidade, proliferação e migração de fibroblastos em cultura. Foram utilizados fibroblastos de mucosa bucal humana linhagem FMM1. Após serem submetidos aos testes de citotoxicidade com concentrações do denosumab variando de 10- 3?g a 10 - 7?g os fibroblastos não apresentaram quaisquer alterações quanto aos quesitos avaliados. Foi possível concluir que o denosumab não é citotóxico para fibroblastos em cultura. ecrose dos maxilares Fibroblastos / The number of patients using drugs that target the manipulation of bone remodeling is currently increasing. Bone volume diseases such as osteoporosis and tumors have the possibility of treatment with the use of antiresorptive medications. However, these drugs, among others, may present a very harmful side effect: osteonecrosis of the jaw (ONJ), which consists of a rare but severe injury characterized by exposed bone necrosis. The denosumab is an antiresorptive drug that presents a different mechanism of action found in bisphosphonates (BPs) and shows similar side effects to BPs regarding ONJ. BPs are a class of medication widely used and prior to denosumab. In both drugs the pathophysiology of the disease it is still not clear. This study aimed to evaluate the effect of denosumab in different concentrations on the viability, proliferation and migration of fibroblasts in culture. Were used human oral mucosa fibroblasts FMM1. After being subjected to denosumab concentrations ranging from 10-3?g to 10-7?g fibroblasts did not show any changes to the variables evaluated. It was possible to concluded that denosumab is not cytotoxic to fibroblasts in culture.

Orientador: Edilson Ervolino / Resumo: Bisfosfonatos (BPs) são fármacos amplamente empregados no tratamento de condições que desencadeiam osteólise, atuando via inibição do processo de reabsorção óssea. Os BPs de maior potência, como o zoledronato, são utilizados para o controle da progressão de metástase óssea em neoplasias malignas osteotrópicas ou para o tratamento da osteoporose severa. Todavia, um dos seus efeitos adversos é a ocorrência da osteonecrose dos maxilares associada à terapia medicamentosa (ONM-M). Dentre os principais fatores de risco locais para a ONM-M destacam-se as intervenções odontológicas invasivas, como as cirurgias para instalação de implantes dentários osseointegráveis. Apesar do aumento no número de relatos clínicos de ONM-M após a instalação de implantes dentários em pacientes tratados com BPs, poucos são os estudos que visam compreender quais as alterações que desencadeiam esta condição. Diante disso, o objetivo deste estudo foi analisar o processo de reparo peri-implantar na tíbia de ratas tratadas com dose oncológica ou dose osteoporótica de zoledronato e avaliar a existência de correlação entre tal processo e a ocorrência de lesões osteonecróticas. Quarenta ratas (6 meses) foram distribuídas em dois experimentos: Experimento I: receberam injeções intraperitoneais (IP) de 0,45ml de solução de cloreto de sódio (NaCl) 0,9% (grupo VEI-ONC, n=10) ou desta mesma solução acrescida de 100µg/Kg de zoledronato (grupo ZOL-ONC, n=10), a cada 4 dias, durante 8 semanas; Experimento II: receberam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bisphosphonates (BPs) are drugs widely used for the treatment of conditions that cause osteolysis, by inhibition of the bone resorption process. High potency BPs, such as zoledronate, are used to control the progression of bone metastasis in osteotropic malignant neoplasms or for the treatment of severe osteoporosis. However, one of its adverse effects is the occurrence of medication-related osteonecrosis of the jaws (MRONJ). Among the main local risk factors for MRONJ are invasive dental procedures, such as surgeries for installation of osseointegratable dental implants. Despite the increased number of clinical reports of MRONJ after installation of dental implants in patients treated with BPs, there are few studies that aim to understand the changes triggering this condition. So, the objective of this study was to analyze the peri-implant repair process in the tibia of rats treated with oncologic dose or osteoporotic dose of zoledronate and to evaluate the existence of correlation between this process and the occurrence of osteonecrotic lesions. Forty female rats (6 months old) were distributed in two experiments: Experiment I: rats received intraperitoneal (IP) injections of 0.45ml of 0.9% sodium chloride (NaCl) solution (group VEI-ONC, n=10) or this same solution added by 100µg/Kg of zoledronate (group ZOL-ONC, n=10), every 4 days for 8 weeks; Experiment II: rats received IP injections of 0.45ml of 0.9% NaCl solution (group VEI-OST, n=10) or this same solution added by 10... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Edilson Ervolino / Coorientadora: Letícia Helena Theodoro / Banca: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Maria Bernadete Sasso Stuani / Resumo: Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a progressão da periodontite experimental (PE) em ratas diabéticas submetidas à terapia com dose oncológica de zoledronato. Materiais e métodos: 120 animais (12 meses de idade) foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais: VEI-NG (n=30); VEI-DM (n=30), ZOL-NG (n=30) e ZOL-DM (n=30). Durante 7 semanas, a cada 3 dias, administrou-se pela via intraperitoneal 0,45ml de solução de NaCl 0,9% (VEI-NG e VEI-DM) ou 0,45ml desta solução acrescida de 100 µg/Kg de zoledronato (ZOL-NG e ZOL-DM). No 14º dia todos os animais foram submetidos: 1) indução da PE; 2) indução da diabetes com dose única de 0,3 ml de solução de estreptozotocina (60 mg/kg) diluída em solução de tampão citrato de sódio 0,1M, pH 4,0 (VEI-DM e ZOL-DM) ou apenas o veículo de tampão citrato (VEI-NG e ZOL-NG). As eutanásias foram realizadas aos 14, 21 e 35 dias após indução da PE. Foi realizada análise microtomográfica das hemimandibulas direitas e histopatológica e imunohistoquiímica (TNF-α e IL-1β) das hemimandibulas esquerdas. Os resultados foram analisados em microscopia óptica e submetidos à estatística com nível de significância de 5%. Resultados: A análise micro-CT mostrou uma menor perda óssea alveolar (POA), maior volume ósseo na furca (VOF) e maior espessura do trabeculado ósseo em ZOL-NG e ZOL-DM. ZOL-NG e ZOL-DM apresentaram maior porcentagem de tecido ósseo na furca (PTO) e a porcentagem de tecido ósseo não vital na furca (PON) foi maior... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study is to evaluate the progression of experimental periodontitis (PE) in diabetic female rats under therapy of oncological dosage of zoledronic acid. 120 female rats (12 months of age) were randomly assigned to four experimental groups: VEI-NG (n = 30); VEI-DM (n = 30), ZOL-NG (n = 30) and ZOL-DM (n = 30). For 7 weeks, every 3 days, 0.45 ml of 0.9% NaCl solution (VEI-NG and VEI-DM) or 0.45 ml of this solution plus 100 μg / kg zoledronate (ZOL) were administered intraperitoneally -NG and ZOL-DM). On the 14th day post-start of the experiment all animals were submitted to: 1) a ligature installation around the lower bilaterally first molar, which remained in position throughout the experimental period; 2) a caudal vein injection of 0.3 ml of streptozotocin solution (60mg/kg) diluted in 0.1 M sodium citrate buffer solution pH 4.0 (VEI-DM and ZOL-DM) or only the vehicle of sodium citrate buffer 0.1M, pH 4.0 (VEI-NG and ZOL-NG). As euthanasia were performed at 14, 21 and 35 days after the induction of PE by transcardiac perfusion with histological fixative. A microtomographic analysis of the right and posterior hemi-mandibles of the histological processing of the left hemi-jaw was performed. Patients with histories were submitted to hematoxylin-eosin staining or immunohistochemical reaction for: tumor necrosis factor alpha TNF-α and interleukin IL-1β. The results were analyzed by optical microscopy and submitted to statistical analysis with a significance l... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by JOÃO MARTINS DE MELLO NETO (joao_martins_182@hotmail.com) on 2018-05-05T04:28:36Z No. of bitstreams: 1 VERSÃO FINAL PARA A BIBLIOTECA JMMN.pdf: 3038526 bytes, checksum: 3833aa4fda2a808223e4a27b9eaba2b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-05-07T12:39:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 melloneto_jm_me_araca_int.pdf: 3038526 bytes, checksum: 3833aa4fda2a808223e4a27b9eaba2b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-07T12:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 melloneto_jm_me_araca_int.pdf: 3038526 bytes, checksum: 3833aa4fda2a808223e4a27b9eaba2b1 (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a progressão da periodontite experimental (PE) em ratas diabéticas submetidas à terapia com dose oncológica de zoledronato. Materiais e métodos: 120 animais (12 meses de idade) foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais: VEI-NG (n=30); VEI-DM (n=30), ZOL-NG (n=30) e ZOL-DM (n=30). Durante 7 semanas, a cada 3 dias, administrou-se pela via intraperitoneal 0,45ml de solução de NaCl 0,9% (VEI-NG e VEI-DM) ou 0,45ml desta solução acrescida de 100 µg/Kg de zoledronato (ZOL-NG e ZOL-DM). No 14º dia todos os animais foram submetidos: 1) indução da PE; 2) indução da diabetes com dose única de 0,3 ml de solução de estreptozotocina (60 mg/kg) diluída em solução de tampão citrato de sódio 0,1M, pH 4,0 (VEI-DM e ZOL-DM) ou apenas o veículo de tampão citrato (VEI-NG e ZOL-NG). As eutanásias foram realizadas aos 14, 21 e 35 dias após indução da PE. Foi realizada análise microtomográfica das hemimandibulas direitas e histopatológica e imunohistoquiímica (TNF-α e IL-1β) das hemimandibulas esquerdas. Os resultados foram analisados em microscopia óptica e submetidos à estatística com nível de significância de 5%. Resultados: A análise micro-CT mostrou uma menor perda óssea alveolar (POA), maior volume ósseo na furca (VOF) e maior espessura do trabeculado ósseo em ZOL-NG e ZOL-DM. ZOL-NG e ZOL-DM apresentaram maior porcentagem de tecido ósseo na furca (PTO) e a porcentagem de tecido ósseo não vital na furca (PON) foi maior em ZOL-DM. A resposta inflamatória periodontal foi maior em ZOL-NG e ainda maior em ZOL-DM, com inflamação mais intensa e nível das principais citocinas com atividade pró-inflamatória (TNFα e IL-1β) maior em ZOL e ainda maior em ZOL-DM. Conclusão: O diabetes mellitus promove exacerbação da resposta inflamatória periodontal ao longo do tratamento com dose oncológica de zoledronato, o que o coloca, juntamente com a doença periodontal, como um importante fator de risco para a osteonecrose dos maxilares. / The aim of the present study is to evaluate the progression of experimental periodontitis (PE) in diabetic female rats under therapy of oncological dosage of zoledronic acid. 120 female rats (12 months of age) were randomly assigned to four experimental groups: VEI-NG (n = 30); VEI-DM (n = 30), ZOL-NG (n = 30) and ZOL-DM (n = 30). For 7 weeks, every 3 days, 0.45 ml of 0.9% NaCl solution (VEI-NG and VEI-DM) or 0.45 ml of this solution plus 100 μg / kg zoledronate (ZOL) were administered intraperitoneally -NG and ZOL-DM). On the 14th day post-start of the experiment all animals were submitted to: 1) a ligature installation around the lower bilaterally first molar, which remained in position throughout the experimental period; 2) a caudal vein injection of 0.3 ml of streptozotocin solution (60mg/kg) diluted in 0.1 M sodium citrate buffer solution pH 4.0 (VEI-DM and ZOL-DM) or only the vehicle of sodium citrate buffer 0.1M, pH 4.0 (VEI-NG and ZOL-NG). As euthanasia were performed at 14, 21 and 35 days after the induction of PE by transcardiac perfusion with histological fixative. A microtomographic analysis of the right and posterior hemi-mandibles of the histological processing of the left hemi-jaw was performed. Patients with histories were submitted to hematoxylin-eosin staining or immunohistochemical reaction for: tumor necrosis factor alpha TNF-α and interleukin IL-1β. The results were analyzed by optical microscopy and submitted to statistical analysis with a significance level of 5%. The micro-CT analysis showed lower alveolar bone loss (POA), greater bone volume in the furcation (VOF) and greater thickness of bone trabecule in ZOL-NG and ZOL-DM compared to the VEI-NG and VEI-DM groups. ZOL-NG and ZOL-DM presented a higher percentage of bone tissue in the furcation (PTO) and a percentage of non-vital bone tissue in the furcation (PON) was higher in ZOL-NG and much higher in ZOL-DM. The periodontal inflammatory response was higher in ZOL-NG and even higher in ZOL-DM, with more intense inflammation and major cytokines with the higher pro-inflammatory activity (TNFα and IL-1β) in ZOL and even higher in ZOL-DM. Diabetes mellitus promotes exacerbation of the periodontal inflammatory response during treatment with the oncologic dose of zoledronate, which causes, along with periodontal disease, an important risk factor for osteonecrosis of the jaw.

SILVA, P. G. B. Expressão de marcadores inflamatórios na osteonecrose dos maxilares induzida por bisfosfonatos e efeito do tratamento crônico com ácido zoledrônico nos tecidos gengival e ósseodentário de ratos. 2016. 118 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T15:18:34Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_pgbsilva.pdf: 8439068 bytes, checksum: eec500000ee5d63a08793ff09fbff38f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T15:18:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_pgbsilva.pdf: 8439068 bytes, checksum: eec500000ee5d63a08793ff09fbff38f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T15:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_pgbsilva.pdf: 8439068 bytes, checksum: eec500000ee5d63a08793ff09fbff38f (MD5) Previous issue date: 2016-11-22 / The Zoledronic Acid (ZA) is a bisphosphonate (BF) that can lead to immune-inflammatory dysregulation leading to Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaws (BRONJ). The objective of this study was to determine the cellular profile and the immune expression of inflammatory markers in mandibular bone of a BRONJ experimental model and in gingival and tooth of rats chronically treated with ZA. Materials and Methods: Male Wistar rats (180-220 g) were chronically infused (four times) venously with sterile saline or 0.04, 0.20 or 1.00 mg/kg of ZA and the left hemimandible was subjected to first molar exodontia (day 49). After 70 days we performed the euthanasia and the hemimandibles (right and left) were histologically and immunohistochemically analyzed (CD68, Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-α), Interleukin(IL)-1β, inducible Nitric Oxide Synthases (iNOS), Nuclear Factor kappa B (NF-kB) and IL-18(bidding protein) bp). In bone subjected to exodontia (left hemimandible) we counted the viable and empty osteocyte lacunae, the viable and apoptotic osteoclasts, the polymorphonuclear neutrophils cells (PMN), mast cells and positive cytoplasmic cells for cited markers. Dental pulp and periodontium of first right molar (contralateral hemimandible) was histologically analyzed by presence of inflammatory cells, dilated/ectasic blood vessels (pulp only) and immunohistochemically by scores. We repeated the protocol (saline versus 0.20 mg/kg ZA) to dosage of TNF-α, IL-1β, myeloperoxidase (MPO), Malondialdehyde (MDA) e Glutathione (GSH) of gingiva of animals. Results: the BRONJ was observed in 0.20 mg/kg and 1.00 mg/kg ZA-treated animals that showed increase in percentage of empty osteocyte lacunae (p<0.001) and percentage of apoptotic osteoclast (p<0.001), total osteoclasts number (p=0.003), PMN (p=0.009), cytoplasmic positive cells for CD68 (p<0.001), TNF-α (p=0.001), IL-1β (p=0.001), iNOS (p<0.001) e NF-kB (p=0.006), and nuclear positivity for NF-kB (p=0.011). The immune expression of IL-18bp decreased dose dependently (p=0.005). In dental pulp there was augment in number of mononuclear CD68+ cells (p=0.026) and immunostaining for TNF-α (p=0.020), IL-1β (p=0.027), iNOS (p=0.001) in odontoblasts and IL-1β (p=0.027) in non odontoblasts dental pulp cells. In periodontium ZA treated animals showed an increase in number of animals showing inflammatory cells (p=0.001) and cytoplasmic immunostaining for TNF-α (p=0.003), IL-1β (p=0.004), iNOS (p=0.008) and NF-kB (p=0.025). MPO (p<0.001), TNF-α (p=0.002), IL-1β (p<0.001) and GSH (p=0.005) levels were significantly raised in 0.20 mg/kg ZA treated gingiva animals. Conclusion: There is overexpression of inflammatory markers in exodontia area with establishing of BRONJ. The chronic infusion of ZA raised the expression of inflammatory markers and cells in gingiva, periodontium and pulp tissue of rats. / O Ácido Zoledrônico (AZ) é um bisfosfonato (BF) capaz de causar desregulação imune-inflamatória estando associado à Osteonecrose dos Maxilares induzida por Bisfosfonatos (OMB). O objetivo deste estudo foi determinar o perfil celular e a imunoexpressão de marcadores inflamatórios do osso mandibular em modelo murino de OMB e nos tecidos gengival e osseodentário de ratos tratados cronicamente com AZ. Materiais e Métodos: Ratos Wistar machos (180-220g) foram submetidos a quatro infusões venosas de solução salina estéril ou AZ nas doses de 0,04, 0,20 ou 1,00 mg/kg, sendo o lado esquerdo submetido a exodontia do primeiro molar inferior (dia 49). Após 70 dias, realizou-se eutanásia e as mandíbulas dos animais foram hemisseccionadas (lados esquerdo e direito) e submetidas a análise histológica e técnica de imuno-histoquímica pelo método da estreptavidina-biotina-peroxidase para CD68, Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α), Interleucina(IL)-1β, Óxido nítrico sintase induzida (iNOS), Fator Nuclear kappa B (NF-kB) e IL-18 bp (bindding protein). No tecido ósseo do lado submetido à exodontia (lado esquerdo), contaram-se as lacunas de osteócitos (vazias e preenchidas), osteoclastos (normais e apoptóticos), polimorfonucleares neutrófilos (PMN), mastócitos e células com marcação positiva para os marcadores supracitados. A polpa dentária e o periodonto do primeiro molar inferior direito (lado contralateral) foram analisados por microscopia de luz convencional quanto à presença de animais exibindo vasos dilatados/ectásicos (somente polpa dentária) e células inflamatórias. O estudo imuno-histoquímico foi realizado por meio da mesma técnica através de escores. O experimento foi repetido (infusão de salina versus AZ 0,20 mg/kg) para dosagem de TNF-α, IL-1β, mieloperoxidase (MPO), malanoaldeído (MDA) e glutationa (GSH) das gengivas excisadas cirurgicamente no dia da eutanásia dos animais. Resultados: a OMB foi observada nos animais tratados com 0,20 e 1,00 mg/kg de AZ com aumento do percentual de lacunas de osteócitos vazias (p<0.001) e osteoclastos apoptóticos (p<0.001), número total de osteoclastos (p=0.003), PMN (p=0.009) e células com positividade citoplasmática para CD68 (p<0.001), TNF-α (p=0.001), IL-1β (p=0.001), iNOS (p<0.001) e NF-kB (p=0.006), e positividade nuclear NF-kB (p=0.011). A imunoexpressão de IL-18bp foi reduzida de forma dose-dependente (p=0.005). Na polpa dentária, houve incremento do número de mononucleares CD68+ (p=0.026) e imunoexpressão de TNF-α (p=0.020), IL-1β (p=0.027), iNOS (p=0.001) em odontoblastos e IL-1β (p=0.027) em células não odontoblastos. No periodonto, observaram-se, nos grupos tratados com AZ, um aumento do número de células inflamatórias (p=0.001) e imunoexpressão citoplasmática para TNF-α (p=0.003), IL-1β (p=0.004), iNOS (p=0.008) e NF-kB (p=0.025). Os níveis de MPO (p<0.001), TNF-α (p=0.002), IL-1β (p<0.001) e GSH (p=0.005) estavam significantemente aumentados na gengiva dos animais tratados com 0,20 mg/kg de AZ. Conclusão: Conclui-se que há superexpressão de marcadores inflamatórios no sítio de exodontia não cicatrizado e com instalação da OMB. A infusão crônica de AZ mostrou-se capaz de aumentar a expressão de citocinas inflamatórias e do infiltrado inflamatório nos tecidos gengival e osseodentário de ratos.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-02-20T17:43:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Eliane Silva de Souza.pdf: 3403691 bytes, checksum: 169b21c74786ac20d23af57041221988 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T17:43:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Eliane Silva de Souza.pdf: 3403691 bytes, checksum: 169b21c74786ac20d23af57041221988 (MD5) / CNPq;FAPESB / As Células Progenitoras Endoteliais (CPEs) são células liberadas na circulação potencialmente envolvidas na neovascularização de tecidos isquêmicos. A anemia falciforme é caracterizada pela oclusão microvascular, vasculopatia e inflamação crônica. Neste estudo avaliamos o número e as propriedades funcionais das CPEs de sangue periférico (n=28) e medula óssea (n=10) de pacientes falciformes. Voluntários, clinicamente estáveis com anemia falciforme e oito controles saudáveis foram recrutados como aprovado pelo comitê de ética. CPEs foram quantificadas por citometria de fluxo, isoladas e cultivas em condições angiogênicas. Ensaio in vitro e de imunofluorescência foram realizados para avaliar a sua capacidade angiogência e migratória e perfil molecular. As análises de citometria mostraram uma alta freqüência de células CD34+/KDR+/CD45-/low e CD34+/KDR+/CD133+ na medula óssea de pacientes falciformes. As análise de citocinas revelaram níveis elevados e TGFβ e VEGF na maioria dos pacientes falciformes, enquanto os níveis de TNF e SDF-1α não apresentaram diferenças consideráveis. As CPEs de MO mostraram capacidade proliferativa e alta aderência em gel de colágeno, expressaram marcadores de células estromais e subendoteliais e os marcadores de células endoteliais, confirmados pela análise de RT-PCR. As CPEs de MO apresentaram capacidade migratória frente aos estímulos angiogênicos. O Aumento da freqüência na circulação de progenitores hematopoiéticos e endoteliais parece estar relacionado com estresse hematopoiético encontrado nos pacientes falciformes. A caracterização molecular das CPEs da medula óssea reveleram uma possível origem de um progenitor em fase de transição mesenquimal/endotelial, sendo uma importante ferramenta para a medicina regenerativa vascular para pacientes falciformes.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-25T12:18:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Marcella Miranda Sales.pdf: 5077309 bytes, checksum: a1310c8c52436e007c5891d63d4b7e5d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-25T12:18:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Marcella Miranda Sales.pdf: 5077309 bytes, checksum: a1310c8c52436e007c5891d63d4b7e5d (MD5) / CAPES;FAPESB / A osteonecrose da cabeça femoral é uma complicação óssea comum em pacientes falciformes sendo decorrente dos eventos vaso-oclusivos frequentes nesta doença. O reparo anormal na região acometida pela necrose pode ser atribuído à neovascularização limitada e possíveis alterações no número e funcionalidade das células-tronco mesenquimais e ósseas neste ambiente isquêmico. Com este trabalho se avaliou a freqüência e funcionalidade das células-tronco mesenquimais (CTMs) isoladas da fração de células mononucleares da medula óssea (CMMO) dos pacientes com doença falciforme (HbSS e HbSC). Esta população compõe a fração de células mononucleares que são injetadas de forma autóloga na cabeça do fêmur para tratamento da osteonecrose nesses indivíduos. O potencial clonogênico foi analisado por ensaio de Unidades Formadoras de Colônias-Fibroblastóides (CFU-F) na fração de células mononucleares. As CTMs isoladas e expandidas em cultivo foram caracterizadas por citometria de fluxo com os principais marcadores: CD105, CD90, CD146 e CD29. O potencial de diferenciação, a taxa de proliferação, a migração celular em câmara de Boyden, a detecção de citocinas no sobrenadante celular através do ELISA e a análise da expressão gênica , através da técnica de PCR quantitativo em tempo real, foram verificados sob condições normais e após o pré-condicionamento em hipóxia temporária por 48 horas. Os resultados demonstraram que a frequência das CFU-F na fração de células mononucleares dos pacientes portadores de anemia falciforme (n=12) está elevada na medula óssea quando comparadas à dos pacientes com osteonecrose do grupo controle (n=8) (p= 0,0409). As CTMs do grupo falciforme expandidas em cultura se apresentaram morfologicamente e imunofenotipicamente semelhantes àquelas do grupo controle. As CTMs dos pacientes falciformes se mostraram multipotentes, viáveis e proliferativas quando cultivadas em condições normais, perdendo a capacidade de diferenciação óssea após o efeito da hipóxia. Os mesmos resultados foram notados na análise da expressão gênica para marcadores ósseos de fase inicial (RUNX2, ALPL e COLLAGEN I). Concluímos que as CTMs presentes na fração de CMMO são viáveis, proliferativas e tem potencial de diferenciação multipotente em condições de normóxia, o que fundamenta o emprego da terapia celular no tratamento da osteonecrose no doente falciforme.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2015-04-15T04:01:01Z No. of bitstreams: 1 JANDRICE CARRASCO DE ANDRADE.pdf: 918910 bytes, checksum: 95056da51d91bae3c0135582b190ad2f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T04:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JANDRICE CARRASCO DE ANDRADE.pdf: 918910 bytes, checksum: 95056da51d91bae3c0135582b190ad2f (MD5) Previous issue date: 2014-09-26 / Osteonecrose da Cabeça Femoral (ONCF) é uma das complicações da anemia falciforme, a doença hematológica hereditária mais prevalente no Brasil. O presente estudo teve como objetivo verificar a prevalência de ONCF em pacientes portadores de anemia falciforme com disfunção do quadril na faixa etária infanto-juvenil e identificar os fatores de risco associados à ONCF nestes indivíduos. Foi realizado estudo de corte transversal descritivo e analítico; para coleta dos dados utilizamos a entrevista, avaliação clínica e radiográfica realizadas em um serviço de referência ortopédica em Salvador. Foram avaliados 43 pacientes identificados como portadores de disfunção de Quadril. Destes, 10 não compareceram; dos 33 participantes, treze indivíduos compuseram o “grupo com ONCF” e 20 o “grupo comparação”. Diante da análise quantitativa, foi evidenciada uma prevalência de 39,4% de ONCF. A osteonecrose, nestes casos, esteve associada ao maior tempo de diagnóstico da doença (97 meses), trauma prévio do quadril em 92% dos casos, escore médio de Chanrley de 15 pontos. Houve também associação entre ONCF e menor taxa de hemoglobina fetal (7,2 versus 11,8), dando suporte à hipótese de que a hemoglobina fetal pode funcionar como fator de proteção contra a necrose avascular.