Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 411926.pdf: 537628 bytes, checksum: ad84cc7d4a6b34220ad5f86256433b5f (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / As caderinas desempenham um papel-chave na manuten??o das ades?es c?lula-c?lula e altera??es em sua express?o tem implica??es significativas na homeostasia tecidual, estando envolvidas na progress?o do c?ncer. O RC-3095 e um antagonista sint?tico do receptor do pept?deo liberador de gastrina capaz de restringir o crescimento de tumores pela a??o inibit?ria sobre prolifera??o, aumento da motilidade e morfog?nese de c?lulas tumorais, representando uma nova e promissora estrat?gia farmacol?gica no tratamento anti-tumoral. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito do tratamento com RC-3095 durante a progress?o tumoral da linhagem de adenocarcinoma colorretal HT-29 sobre a express?o de caderinas dos tipos E e N. Nossos resultados corroboram achados pr?vios que demonstraram o efeito negativo do RC-3095 sobre a viabilidade celular, refor?ando seu potencial no tratamento do c?ncer colorretal. O tratamento com RC-3095, contudo, n?o alterou o perfil de express?o de caderinas durante o per?odo de 48h estudado. Neste per?odo n?o foi detectada express?o de caderina do tipo N, enquanto a express?o de caderina E diminui progressivamente independente do tratamento com RC-3095, sugerindo que a adesividade celular n?o e alvo do antagonista do receptor do pept?deo liberador de gastrina nas condi??es estudadas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-28T11:40:36Z No. of bitstreams: 1 469525 - Texto Completo.pdf: 2925199 bytes, checksum: d0ce1f2f0c3cdc1d309d3f09e9a7d239 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-28T11:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 469525 - Texto Completo.pdf: 2925199 bytes, checksum: d0ce1f2f0c3cdc1d309d3f09e9a7d239 (MD5) Previous issue date: 2015-03-02 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction: Preeclampsia is a disease characterized as high maternal and fetal morbidity and mortality, diagnosed only after 20th gestational week, its etiology is not completely understood and healing is placental removal. It has been looking for biomarkers that allow early diagnosis for a better outcome of the disease. The 90 kDa isoform of Angiotensin Converting Enzyme (ACE), proposed as a new biomarker for hypertension, has not been studied in the preeclampsia syndrome so far. Objective: To evaluate the gene and protein expression, as well as enzymatic activity of ACE in pregnancy induced hypertension. Material and methods: It were included 69 normotensive and preeclampsia syndrome pregnant women at S?o Lucas Hospital/PUCRS, Porto Alegre/ RS- Brazil. Blood sample was collected to perform ACE genetic polymorphism, and three urine samples (during pregnancy, after delivery and at least 3 months after delivery) were taken to perform ACE protein polymorphism and enzymatic activity. This study was conducted through a partnership between Nephrology Service from PUCRS and Kidneys and Hormones from UNIFESP Laboratories research. Results: Scientific paper was published in Medical Hypotheses journal, entitled ?Angiotensin Converting Enzyme 90 kDa isoform: Biomarker for diagnosis of preeclampsia?? that described the hypotheses of this research. Comparing the participants clinical data among the groups (Normal pregnant, pure preeclampsia, superimposed preeclampsia), statistical significancy was observed between obstetric gestational age, blood pressure, newborn weight (p< 0.001) and placental weight (p= 0.030). Hypertension familial history compared with ACE genotypes (p= 0.017) suggests allele I involvement. Enzymatic activity ZPhe and Hhl ratio was different during the gestational period (p< 0.025), and also in relation to the ACE genotypes (p< 0.001). ZPhe and HhL isolated enzymatic activity also, in relation to the ACE genotypes, was not statistically different (p = 0.83 e p = 0.16, respectively). The protein polymorphism was not performed due to some technique problems, but this activity will be finished as soon as possible. Conclusion: It seems that allele I is associated with the hypertension familial history, and the genotypes that have this allele (ID, II) are predominantly present in pregnant women with preeclampsia. Enzymatic activity of Zphe/Hhl shows different behavior during the gestational period, and it also change according to genotypes classification. The data suggest that the mechanism involved in essential hypertension can be different from those involved in transient and spontaneous hypertension triggered pregnancy induced hypertension. / Introdu??o: Pr?-ecl?mpsia ? uma doen?a de alta morbimortalidade materna e fetal, diagnosticada somente ap?s a 20? semana gestacional, de etiologia n?o totalmente esclarecida e a cura consiste na retirada da placenta. Segue-se na busca de biomarcadores que possibilitem um diagn?stico precoce para um melhor desfecho da doen?a. A isoforma 90 kDa da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), proposta como novo marcador de hipertens?o, ainda n?o foi estudada na s?ndrome de pr?-ecl?mpsia. Objetivos: Avaliar a express?o gen?tica, proteica e enzim?tica da ECA na Doen?a Hipertensiva Gestacional. Materiais e m?todos: Foram inclu?das 69 gestantes normotensas e com S?ndrome de Pr?-ecl?mpsia (Pr?-ecl?mpsia Pura ou Sobreposta) no Hospital S?o Lucas da PUCRS, Porto Alegre/ RS- Brasil. Foram coletadas uma amostra de sangue para realizar o polimorfismo gen?tico da ECA e 3 amostras de urina (durante a gesta??o, ap?s o parto e pelo 3 meses ap?s o parto) para realizar a an?lise do polimorfismo proteico e a atividade enzim?tica da ECA. Este estudo teve parceria entre os laborat?rios de pesquisa de Nefrologia da PUCRS e Rins e Horm?nios da UNIFESP. Resultados: Foi publicado um artigo cient?fico na revista Medical Hypotheses, intitulado em Angiotensin Converting Enzyme 90 kDa isoform: Biomarker for diagnosis of preeclampsia?, descrevendo a hip?tese desta pesquisa. Comparando os dados cl?nicos das participantes entre os grupos analisados (Gestante normal, Pr?- ecl?mpsia Pura e Pr?- eclampsia Sobreposta), houve signific?ncia estat?stica entre idade gestacional obst?trica, n?veis press?ricos, peso do rec?m-nascido (p<0,001) e peso da placenta (p= 0,030). A hist?ria familiar de hipertens?o comparada com os gen?tipos da ECA (p= 0,017) sugere envolvimento do alelo I. A raz?o da atividade enzim?tica de Zphe e Hhl foi diferente durante o per?odo gestacional (p<0,025) e tamb?m em rela??o aos gen?tipos da ECA (p<0,001). Enquanto que a atividade enzim?tica isolada de Zphe e Hhl em rela??o aos gen?tipos da ECA n?o foi significativa (p = 0,83 e p = 0,16, respectivamente). A an?lise do polimorfismo proteico n?o foi realizada devido a problemas na execu??o da t?cnica, mas essa atividade ser? conclu?da assim que poss?vel. Conclus?o: O alelo I parece estar associado com a hist?ria familiar de hipertens?o e os gen?tipos que possuem esse alelo (ID, II) est?o predominantemente mais presentes nas gestantes que apresentam pr?-ecl?mpsia. A atividade enzim?tica de ZPhe/Hhl apresenta comportamento diferente durante o per?odo gestacional e tamb?m se altera conforme a classifica??o genot?pica da gestante. Os dados sugerem que os mecanismos envolvidos na hipertens?o essencial possam ser diferentes dos envolvidos na hipertens?o transit?ria e espont?nea desencadeada nas Doen?as Hipertensivas Gestacionais.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-08-27T11:15:23Z No. of bitstreams: 1 474252 - Texto Completo.pdf: 3311481 bytes, checksum: b67f5f48a8325dd3ae5469933fff90ba (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-27T11:15:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 474252 - Texto Completo.pdf: 3311481 bytes, checksum: b67f5f48a8325dd3ae5469933fff90ba (MD5) Previous issue date: 2015-03-02 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Peptide YY (PYY) belongs to the neuropeptide Y (NPY) family, which also includes the neuropeptide Y (NPY) and pancreatic polipeptide (PP). These substances are biologically active, constituted of 36 aminoacids, and act via G protein coupled receptors. There are four functional subtypes of NPY family receptors in humans, namely Y1, Y2, Y4, and Y5. PYY is secreted by the intestinal L cells, being present in the blood stream in two active forms capable of crossing the blood brain barrier, PYY (1-36) and its cleavage product, PYY (3-36). PYY is a selective agonist for the Y2 receptor (Y2R) and has been identified as a modulator of appetite, promoting satiety sensation in mammals. Y2R are abundant in the brain hippocampus, where these receptors inhibit excitatory synaptic transmission and glutamatergic release when activated by potassium in hippocampal slices. Besides, knockout mice for Y2R present deficits in spatial and non-spatial memory tasks, showing a role of Y2R in learning and memory. The aim of this Master?s dissertation was searching for a better understanding of the interaction of PYY (3-36) and its Y2 receptor in CNS cells. For this purpose the activity of this peptide was investigated on Ca2+ influx in hippocampal cell cultures of Wistar neonate rats. We evaluated the influence of the presence of Ca2+ in the extracellular fluid, as well as the involvement of plasma membrane voltage-dependent Ca2+ and Na+ channels, and the influence of intracellular mechanisms related to the endoplasmic reticulum (ER), such as the SERCA pump, the inositol triphosphate (IP3) receptors and the ryanodine receptors (RyRs) in the responses induced by PYY (3-36) on the modulation of the [Ca2+]i, by using blockers specific for these channels. It was observed that the increase of the cytosolic [Ca2+] evoked by PYY (3-36) in hippocampal cells is independent of Ca2+ from the extracellular environment. Using a voltage-dependent Na+ channels blocker it was possible demonstrate that PYY (3-36) action is independent on Na+, suggesting that its activity on hippocampal cells does not induce or does not depend on cellular depolarization. In the experiments using RyRs or SERCA pump blockers it was observed an elevation of Ca2+ influx, that probably occurred due to the activation of SOCC, but with the concomitant presence of the a voltage-dependent Na+ channels blocker, this effect was abolished, suggesting a probable inhibition of SOCC channels in these conditions. In the experiments in the presence of an IP3Rs inhibitor, there was a decrease in cytosolic [Ca2+] evoked by PYY (3-36). The results from our experiments indicate that the action of PYY (3-36) on Ca2+ mobilization is mediated by intracellular receptors of the ER, suggesting that the observed elevation of [Ca2+]i is modulated especially by the activation of the intracellular Ca2+ signalling cascade through IP3 receptors. / O pept?deo YY (PYY) pertence ? fam?lia do neuropept?dio Y que ? composta tamb?m pelo neuropept?dio Y (NPY) e pelo polipept?dio pancre?tico (PP). S?o pept?deos biologicamente ativos, compostos por 36 amino?cidos e atuam via receptores acoplados a prote?na G. Existem quatro subtipos de receptores para a fam?lia do NPY que s?o funcionais em humanos, denominados como: Y1, Y2, Y4 e Y5. O PYY ? secretado no intestino pelas c?lulas L e circula no organismo em duas formas ativas que atravessam a barreira hematoencef?lica, que s?o o PYY (1-36) e sua forma clivada PYY (3-36). O PYY (3-36) ? um agonista seletivo do receptor Y2 e tem sido evidenciado por seu papel como um modulador do apetite, promovendo a sensa??o de saciedade em mam?feros. O hipocampo ? uma regi?o rica em receptores Y2 e j? se demonstrou que a ativa??o destes receptores no hipocampo pode inibir a transmiss?o sin?ptica excitat?ria e a libera??o de glutamato estimulada por pot?ssio em fatias hipocampais. Em camundongos knockout para o receptor Y2 observou-se d?ficits na mem?ria espacial e na mem?ria n?o espacial nestes animais evidenciando tamb?m seu envolvimento na regula??o da fun??o cognitiva associada com o aprendizado e mem?ria. O desenvolvimento desta disserta??o teve por objetivo buscar uma melhor compreens?o da intera??o do PYY (3-36) e seu receptor Y2 em c?lulas do sistema nervoso central. Para isso investigou-se a atividade deste pept?deo no influxo de c?lcio (Ca2+) em c?lulas cultivadas do hipocampo de ratos Wistar neonatos. Avaliou-se a influ?ncia do Ca2+ presente no meio extracelular, bem como o envolvimento dos canais de Ca2+ e Na+ voltagem dependentes presentes na membrana plasm?tica, e a influ?ncia de mecanismos intracelulares presentes no ret?culo endoplasm?tico (RE), como a bomba do ret?culo sarco/endoplasm?tico Ca2+- ATPase (SERCA), os receptores de inositol trifofato (IP3Rs) e os receptores de rianodina (RyRs) nas respostas induzidas pelo PYY (3-36) sobre a modula??o da concentra??o de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i), atrav?s da utiliza??o de bloqueadores espec?ficos para estes canais. Foi observado que o aumento da concentra??o de Ca2+ ([Ca2+]) citos?lico evocado pelo PYY (3-36) em c?lulas do hipocampo ? independente do Ca2+ do meio extracelular. E atrav?s da utiliza??o de bloqueadores dos canais de Na+ voltagem dependentes conseguiu-se demonstrar que a a??o do PYY (3-36) ? independente do influxo de Na+, sugerindo que a sua atividade sobre as c?lulas hipocampais n?o induz ou independe da despolariza??o celular. Nos experimentos utilizando bloqueadores dos RyRs ou da bomba SERCA observou-se uma eleva??o do influxo de Ca2+, o que provavelmente ocorreu devido a ativa??o dos canais de c?lcio operados por estoque (SOCC, do ingl?s store-operated calcium channels), por?m na presen?a concomitante de bloqueadores de canais de Na+ voltagem dependentes, este efeito foi bloqueado, sugerindo uma prov?vel inibi??o dos canais SOCC nessas condi??es. Finalmente, na presen?a de inibidores dos IP3Rs, ocorreu uma diminui??o da [Ca2+] citos?lico evocada pelo PYY (3-36) nas c?lulas. Os resultados evidenciam que a a??o do PYY (3-36) sobre a mobiliza??o do Ca2+ ? atrav?s de receptores intracelulares do RE, sugerindo que a eleva??o da [Ca2+]i observada, ? modulada principalmente pela ativa??o da cascata de sinaliza??o do Ca2+ intracelular pelos receptores de IP3.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T11:52:23Z No. of bitstreams: 1 AllanPiresdaSilvaDissertacao2017.pdf: 4098983 bytes, checksum: 94ec346f3edc58586d44cec31a8597f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T11:52:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AllanPiresdaSilvaDissertacao2017.pdf: 4098983 bytes, checksum: 94ec346f3edc58586d44cec31a8597f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T11:52:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AllanPiresdaSilvaDissertacao2017.pdf: 4098983 bytes, checksum: 94ec346f3edc58586d44cec31a8597f4 (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / Currently, various bacteria can be harmful to human health. Moreover, with continued use of antibiotics and development of resistance by these microorganisms, many infections became worrying, with no effective treatments available generating the need for development of other fighting molecules. In this context, the antimicrobial peptides (AMPs) have been proposed as an alternative in the control of infections caused by resistant microorganisms. Despite the variation in sequence levels, AMPs may present high structural conservation in specific families, especially peptides stabilized by disulfide bonds. Canonically, the identification of PAMs is by exploitation of bioactive natural extracts and subsequent analysis and purification thereof. In the post genomics era, in turn, identifying PAMs could be made from databases using molecular modeling of peptides in direct search. In this work were selected AMPs without structure in PDB, from antimicrobial peptide database (APD) (http://aps.unmc.edu/AP/main.php). The sequences were pre-filtered, being selected two AMPs (myticin B and MiAMP-2b) of classes described with modifications in disulfide bonds pattern arrangement. Additionally, the original bank was submitted to STPs identification. PredSTP was used as an additional evaluation. After prefiltering phases, a new potential STP (CRS4C-2b) with a new hypothetical structural topology was modelled by QUARK and simulated at 300 ns molecular dynamics, maintaining the initial structure. The methodology was then applied to identify PAMs in the Zantedeschia aethiopica transcriptome where two new potential PAMs were found that were predicted to be active by CAMP. Thus, the two methodologies developed here can be successfully applied in the identification of new PAMs and in the analysis of the structural diversity of antimicrobial families. / Atualmente, v??rias bact??rias podem ser prejudiciais ?? sa??de humana. Al??m disso, com o uso cont??nuo de antibi??ticos, e desenvolvimento de resist??ncia por parte desses microrganismos, muitas infec????es se tornaram preocupantes, sem tratamentos eficazes dispon??veis gerando a necessidade de desenvolvimento de outras mol??culas de combate. Nesse ??mbito, os pept??deos antimicrobianos (PAMs) t??m sido propostos como uma alternativa no controle de infec????es causadas por microrganismos resistentes. Apesar da variabilidade nas sequ??ncias, os PAMs podem apresentar grande conserva????o estrutural em fam??lias espec??ficas, principalmente em pept??deos estabilizados por pontes dissulfeto. De forma can??nica, a identifica????o de PAMs se d?? pela explora????o de extratos naturais bioativos e posterior an??lise e purifica????o dos mesmos. Na era p??s-gen??mica, por sua vez, a identifica????o de PAMs pode ser feita a partir de bancos de dados utilizando modelagem molecular na busca direta de pept??deos. Nesse trabalho foram selecionados PAMs sem estrutura no PDB, a partir do banco de dados de pept??deos antimicrobianos (APD) (http://aps.unmc.edu/AP/main.php). Desta forma, as sequ??ncias foram pr??-filtradas, sendo selecionados dois PAMs (miticina B e MiAMP-2b) de classes descritas com varia????o na disposi????o ou padr??o de pontes dissulfeto. Al??m disso, o banco original foi submetido ?? identifica????o de STPs. Para tal, o servidor PredSTP foi utilizado como avalia????o adicional. Ao final das etapas de pr??-filtragem, um novo potencial STP (CRS4C-2b) com uma nova topologia estrutural foi modelado pelo QUARK e simulado em din??mica molecular, mantendo a estrutura inicial. A metodologia foi ent??o aplicada para identifica????o de PAMs no transcriptoma de Zantedeschia aethiopica onde foram encontrados dois novos potenciais PAMs que foram preditos como ativos pelo CAMP. Dessa forma, as duas metodologias desenvolvidas aqui podem ser aplicadas com sucesso na identifica????o de novos PAMs e na an??lise de diversidade estrutural de fam??lias antimicrobianas.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-11-08T13:12:56Z No. of bitstreams: 1 AmandaCarolineMarquesSa??deTese2016.pdf: 1482640 bytes, checksum: 98c7088a3903d189fcf2c6a44b4fcdc7 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-11-09T11:04:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AmandaCarolineMarquesSa??deTese2016.pdf: 1482640 bytes, checksum: 98c7088a3903d189fcf2c6a44b4fcdc7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T11:04:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AmandaCarolineMarquesSa??deTese2016.pdf: 1482640 bytes, checksum: 98c7088a3903d189fcf2c6a44b4fcdc7 (MD5) Previous issue date: 2016-11-01 / Bacteria are becoming resistant to a growing number of conventional antibiotics at a worrisome rate. Therefore, there is an increasing demand for new antimicrobial therapeutics. Antimicrobial peptides (AMPs) are one of promising alternatives for conventional antibiotics and are thought to be less likely to induce resistance. AMPs have been coupled to molecular scaffolds for biomedical applications such as hydrogels for wound dressings and covering implants. Here AMPs were chemically conjugated to the CR4 hydrophilic polymers. The CPF_C1 is a short peptide isolated from Xenopus clivii, the original sequence was modified one called LCPF_C1, aiming to create some distance between the first glycine and the azide added on the N terminus (on the coupled sequence). The conjugation between the AMP and the CR4 polymer used a click chemistry reaction with two steps, dependent of a hetero crosslinker (DBCO???PEG4???NHS Ester). Dynamic light scattering (DLS) and fluorimeter assays were used to evaluate the efficiency of coupling. MALDI-ToF analysis showed 3 molecules of LCPF_C1 peptide for each CR4 polymer. Moreover, microrheology showed changes on hybrids increasing the viscosity. Finally, the compounds were evaluate against four different bacteria: Staphylococcus aureus, Klebsiela pneumoneae carbapenemases (Kpc), Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. It was possible to observe MIC???s against P. aeruginosa of 11 mM by using the peptide (LCPF_C1) and 55 mM for the original sequence. When the hibrids were compared to the free polymer was not found MIC values against K. pneumoneae (CR-Kp). On the other hand, the hibrids showed three times less activity than the free polymer against P. aeruginosa. No MIC values were found aganst S. aureus. Finally, against E. coli was observed a MIC value of 1000 mM for the free CR4 and 250 mM for the hibrids. On this way, the present work showed the possibility to functionalize biopolymers by using bioactive molecules coupled to biopolimers, changing the physical-chemical characteristics and increasing they applicability against bacterial infections. / Uma taxa alarmante de bact??rias tem se tornado resistente a um grande n??mero de antimicrobianos convencionais. Desta forma, a demanda por novas terapias antimicrobianas tem aumentado proporcionalmente. Assim, o uso de pept??deos antimicrobianos (PAMs) consistem em uma promissora alternativa para antibacterianos convencionais, particularmente podendo ser acoplado a estruturas moleculares para aplica????es biom??dicas, como hidrog??is para curativos e cobertura de implantes. No presente trabalho, PAMs foram quimicamente conjugados ao pol??mero hidrof??lico inspirado nas prote??nas naturais col??geno e seda CR4. O pept??deo CPF_C1 consiste em um pept??deo contendo 17 res??duos de amino??cidos isolado de Xenopus clivii, com atividade comparada ?? bact??rias Gram-negativas e -positivas. Para este estudo, a sequ??ncia original do CPF-C1 foi modificada e intitulada LCPF_C1, objetivando aumentar a dist??ncia entre a primeira glicina e a azida adicionada na por????o N-terminal. A conjuga????o entre o PAM e o pol??mero CR4 foi realizada por meio de click chemistry reaction em dois passos, dependentes do hetero crosslinker (DBCO???PEG4???NHS Ester). Ensaios de espalhamento de luz din??mico (DLS) e fluorimetria foram utilizados para avaliar a efici??ncia de acoplamento e demonstraram a presen??a do pept??deo acoplado ao pol??mero. An??lises de MALDI-ToF demonstraram 3 mol??culas do pept??deo LCPF-C1 para cada mol??cula do pol??mero CR4. Al??m disso, dados de microrreologia demonstraram mudan??as nos h??bridos como aumento de viscosidade. Finalmente, os compostos foram avaliados contra quatro bact??rias diferentes: Staphylococcus aureus, K. pneumoneae carbapenemase (Kpc), Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Foi poss??vel observar para P. aeruginosa MICs de 11 mM utilizando o pept??deo (LCPF_C1) e 55 mM para a sequ??ncia original. Quando comparados aos h??bridos em rela????o a atividade do pol??mero livre n??o foi encontrado valor de MIC contra K. pneumoneae (CR-Kp). Por outro lado, os h??bridos demonstraram um MIC cerca de tr??s vezes menor que o pol??mero livre contra P. aeruginosa. Nenhum valor de MIC foi encontrado contra S. aureus. Finalmente, contra E. coli observou-se MIC de 1000 mM para o pol??mero CR4 e 250 mM para os h??bridos. Desta forma o presente trabalho demonstrou a possibilidade de funcionalizar biopol??meros por meio do acoplamento de mol??culas bioativas, alterando suas caracter??sticas f??sico-qu??micas e aumentando sua aplicabilidade contra infec????es bacterianas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425871.pdf: 1344859 bytes, checksum: dba6de98d2d3eb3cdbd945dc1cdefaf6 (MD5) Previous issue date: 2010-08-10 / Objetivos: Verificar se a Endotelina-1 (ET-1) salivar pode representar um biomarcador eficiente para avalia??o de risco e progn?stico do carcinoma espinocelular bucal. Metodologia: Neste estudo, foi realizada coleta de saliva de 20 pacientes saud?veis, 15 pacientes portadores de leucoplasia oral (diagn?stico histopatol?gico de hiperceratose a displasia severa), 14 pacientes que j? tiveram carcinoma espinocelular bucal (CEB) e estavam em um per?odo p?s-tratamento e livres de doen?a por, no m?nimo cinco anos e, 20 pacientes portadores de CEB. A ET-1 foi quantificada na saliva atrav?s do m?todo ELISA. Resultados: N?o houve diferen?a estatisticamente significativa na express?o de ET-1 entre os grupos estudados, mesmo quando pacientes com idade superior a 65 anos ou hipertensos foram exclu?dos da an?lise. Da mesma forma, quando a amostra foi separada por sexo, tamb?m n?o houve diferen?a significativa. Conclus?es: A ET-1 salivar n?o se mostrou um biomarcador eficiente do carcinoma espinocelular bucal.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342391.pdf: 682435 bytes, checksum: e11b3d0255ba891f1cb0dd72307b5e5d (MD5) Previous issue date: 2005-12-16 / INTRODU??O: O diagn?stico precoce da artrite reumat?ide (AR) ? fundamental para a decis?o terap?utica e para o progn?stico. O fator reumat?ide (FR) ? o teste cl?ssico na triagem para AR, enquanto o teste para anticorpo antipept?deo citrulinado c?clico (anti-CCP) ? potencialmente mais espec?fico. OBJETIVO: Avaliar a probabilidade de AR em uma popula??o brasileira n?oselecionada a partir da testagem do fator reumat?ide (FR) e do anti-CCP. MATERIAL E M?TODOS: Foram selecionados 1025 soros consecutivos para quais foi solicitado FR no laborat?rio central de refer?ncia para atendimentos prim?rio, secund?rio e terci?rio, independente do motivo ou da origem da solicita??o, no per?odo de 6 meses. Foram realizados os testes do FR IgM por nefelometria (Dade Behring, Marburg, Alemanha) e do anti-CCP IgG de segunda gera??o por ELISA (Inova Diagnostics Inc., San Diego, EUA) com pontos de corte de 15 UI/mL e 20 U/mL, respectivamente. Foram exclu?dos 62 soros de pacientes com menos de 18 anos de idade e 23 soros solicitados 2 vezes. O diagn?stico de AR foi definido de acordo com os crit?rios de classifica??o do ACR. Na an?lise estat?stica foram calculadas as medidas de desempenho dos testes, curva ROC, teste de McNemar para compara??es emparelhadas e regress?o log?stica. O n?vel de signific?ncia adotado foi de alfa = 0,05%. RESULTADOS: Dos 940 soros restantes, 172 pacientes foram exclu?dos por falta de defini??o diagn?stica. O presente estudo compreendeu um total de 768 pacientes, que foram classificados em AR (132) e sem AR (636). Os ?ltimos inclu?ram: outras doen?as difusas do tecido conjuntivo (102), espondiloartropatias soronegativas (38), reumatismo de partes moles e osteoartrite (264), doen?as auto-imunes n?o-reumatol?gicas (42), neoplasias (30) e outras doen?as n?oclassificadas (160). N?o houve diferen?as estat?sticas significativas entre os grupos com e sem AR em rela??o ao sexo e ? origem ambulatorial ou hospitalar. Os n?veis de anticorpos anti-CCP foram significativamente mais elevados no grupo com AR (P<0,001), independente dos ajustes para sexo, idade, tempo de dura??o dos sintomas e FR. Os n?veis de FR foram tamb?m significantemente mais elevados na AR (P<0,001), mas ap?s aplica??o do modelo de regress?o log?stica estas diferen?as n?o se consumaram (P=0,15). A probabilidade pr?-teste de AR no grupo de 768 pacientes foi de 17%. A ?rea sob a curva ROC para anti- CCP foi de 0,83 (IC95%= 0,78-0,88) e para FR foi de 0,79 (IC95%=0,74-0,84). As sensibilidades e especificidades para anti-CCP e FR foram de 62 e 64% (0,83), e de 97 e 90% (P<0,001), respectivamente. O valor preditivo positivo (VPP) para anti-CCP foi de 79% e para FR de 56% (P<0,001), e o valor preditivo negativo foi de 92% em ambos os testes. A raz?o de verossimilhan?a (RV) foi de 17,9 para anti-CCP e de 6,2 para FR (P<0,005). Quarenta pacientes com AR tinham menos de 2 anos de doen?a e apresentaram diferen?as estatisticamente significativas quanto ?s especificidades (P=0,001), VPPs (P=0,018) e RVs (P<0,001) para anti- CCP. Foram calculados RVs para diferentes pontos de corte de ambos os testes, e encontrados RVs significativas acima de 50 U para anti-CCP e 200 U para FR. Quando os testes foram combinados com pontos de corte sugeridos comercialmente, apenas a associa??o de ambos os testes positivos gerou RV acima de 10 (43,4) e uma probabilidade p?s-teste de 90%. CONCLUS?ES: O teste do anti-CCP teve um desempenho melhor em rela??o ao FR em uma popula??o brasileira com baixa probabilidade pr?-teste, sendo mais espec?fico que FR para AR, incluindo doen?a inicial. N?veis s?ricos acima de 50 U/mL para anti-CCP e acima de 200 UI/mL para FR aumentaram a probabilidade de AR. Considerando os pontos de corte comerciais, a combina??o de ambos os testes positivos gerou maior probabilidade de doen?a em uma popula??o com baixa suspei??o de AR.

Fluidized beds have been applied in many industrial processes (e.g. coal combustion, gasification and granulation) as an effective means for providing excellent gas and solids contact and mixing, as well as good heat transfer. Although research on the fluidized bed has been carried out for more than 70 years, uncertainties and difficulties still remain. These challenges exist primarily due to the complex and dynamic flow structure within fluidized beds and the lack of reliable measurement techniques. The positron emission particle tracking (PEPT) technique, developed at the University of Birmingham, enables individual particles to be tracked non-invasively in opaque three-dimensional (3-D) fluidized beds and offers favourable temporal and spatial resolutions. PEPT is considered to be a powerful tool for fluidized bed studies and was utilized in the current study to investigate the dynamic behaviour of solid and gas in fluidized beds. The experiments in this study were conducted in a 150-mm inner diameter (I.D.) column and operated in the bubbling fluidization regime at ambient conditions. The effects of various factors on the solid flow structure were examined: solid properties, superficial gas velocity, bed height-to-diameter aspect ratio (H/D) and pore size of the air distributor. The solid flow structure was classified into four patterns, namely patterns A, B, C and D, in which pattern C was newly observed in this thesis. The solid motion, bubble behaviour (i.e., bubble spatial distribution, bubble size and bubble rise velocity) and solid mixing were assessed for each flow pattern to understand their unique fluidization behaviours. This assessment was achieved by the development of three methods: a method to reconstruct bubble behaviours based on solid motion, and two methods for estimating the solid mixing profile in this thesis. The results were discussed and compared with the published literature. The bubble rise velocity and bubble size calculated in this research from the PEPT-measured data was in agreement with other research, particularly that of Kunii and Levenspiel, Yasui and Johanson, and Mori and Wen. Finally, a parameter was developed to predict and control flow patterns based on particle kinetic energy and various factors. The outcomes of this study advance the understanding of the complicated dynamics of bubbling fluidized beds and may benefit several industries in the enhancement of fluidized bed design and control to achieve desirable qualities and efficiencies.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-19T19:42:39Z No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T19:42:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The gastrin-releasing peptide (GRP) and its receptor (GRPR) were recently identified as specific components of pruritus, suggesting an important pharmacological potential for this system; however, the mechanisms underlying GRP/GRPR activity remain undefined. Herein, we evaluated GRPR localization and downstream signaling pathways. Our data show that GRP directly activates small-size capsaicin-sensitive DRG neurons, an effect that translates into transient calcium flux and membrane depolarization. Expression profile revealed that PI3K? is downstream of the GRP/GRPR axis, observed by GRP-induced Akt phosphorylation in ex vivo naive mouse spinal cords and in GRPR transiently expressing HEK293 cells. However, ex vivo mouse spinal cord stimulation by GRP failed to induce the activation of MAP-kinases, namely ERK 1/2 and p38. Intrathecal GRP administration led to intense scratching behavior, an effect significantly reduced by either GRPR antagonism or the PI3K? inhibition. We assessed whether the GRP/GRPR system is involved in chronic itching using the dry skin model and found that GRPR blockade or PI3K? inhibition reversed the scratching. We also found that p-Akt and GRPR are co-expressed in the spinal cord and in DRG neurons from dry skin mice, and that p-Akt levels are increased in these animals, an effect prevented by GRPR blockade. The intradermal injection of GRP also triggers scratching behavior, which was significantly decreased after treatment with PI3K? inhibitor. The itching response was also induced by the intrathecal injection of an Akt activator. Altogether, these findings are highly suggestive that GRPR is expressed by the peripheral and central terminals of DRG nociceptive afferents, which transmit itch via the PI3K?/Akt pathway. / O pept?deo liberador de gastrina (GRP) e seu receptor (GRPR) foram recentemente identificados como componentes espec?ficos do prurido, com importante potencial farmacol?gico; no entanto, os mecanismos intracelulares que medeiam a atividade do sistema GRP/GRPR permanecem desconhecidos. O presente estudo avaliou a localiza??o do GRPR e as vias de sinaliza??o downstream ativadas por este receptor. Os dados obtidos mostram que o GRP ativa diretamente neur?nios de pequeno di?metro do DRG, sens?veis a capsaicina, um efeito demonstrado pelo fluxo transit?rio de c?lcio e pela despolariza??o da membrana. O perfil de express?o observado sugere que a PI3K? ? ativada downstream ao sistema GRP/GRPR, como indicado pela fosforila??o de Akt (marcador de atividade de PI3K?) induzida por GRP, em medulas de camundongos ex vivo e, em c?lulas HEK293 transfectadas com GRPR. Contudo, a aplica??o de GRP em medulas de camundongos, ex vivo, n?o parece depender da ativa??o das MAP-quinases, ERK1/2 ou p38. A inje??o intratecal de GRP leva a um comportamento de co?ar intenso, que ? significativamente reduzido por antagonistas de GRPR ou pela inibi??o farmacol?gica de PI3K?. Para avaliar se o sistema GRP/GRPR estaria envolvido no prurido cr?nico, foi empregado o modelo de pele seca em camundongos. Neste paradigma experimental, o bloqueio de GRPR ou de PI3K? reverteu o comportamento de co?ar. Os dados obtidos tamb?m mostram que p-Akt e GRPR est?o co-localizados na medula espinhal e em neur?nios do DRG de animais com pele seca e, que os n?veis de p-Akt est?o aumentados nesses animais, um efeito que foi prevenido pelo bloqueio de GRPR. A inje??o intrad?rmica de GRP tamb?m induziu o comportamento de co?ar, que foi significativamente reduzido ap?s o tratamento com inibidor de PI3K?. Finalmente, foi demonstrado que a inje??o intratecal de um ativador de Akt foi capaz de induzir coceira em camundongos. O conjunto de resultados obtidos sugere que o GRPR ? expresso por terminais perif?ricos e centrais de neur?nios nociceptivos do DRG, transmitindo o prurido atrav?s da ativa??o da via PI3K?/Akt.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-06-09T16:27:04Z No. of bitstreams: 1 ISABELE DA COSTA ANGELO.pdf: 4140152 bytes, checksum: bbd35489ea24b040be77df36cd797987 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T16:27:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ISABELE DA COSTA ANGELO.pdf: 4140152 bytes, checksum: bbd35489ea24b040be77df36cd797987 (MD5) Previous issue date: 2011-03-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The study evaluated the protein and lipid profiles of Rhipicephalus microplus engorged females after infection by Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Fusarium oxysporum. The treatments were immersion or inoculation of conidial suspension in R. microplus. The hemolymph was collected 24 and 48 hours after treatment. The cell-free hemolymph was separated of hemocytes by centrifugation and hemocytes resuspended in phosphate buffer pH 7.2. The amount of total protein was determined in both fractions of hemolymph and hemocytes were quantified. The cell-free hemolymph was filtered through a 100 kDa and 10 kDa membranes, and analyzed by electrophoresis and liquid chromatography (HPLC). The proteome of cell-free hemolymph (treatment by injection) was evaluated by 2DPAGE. Changes were observed in amount total protein and the amount of hemocytes, but no difference was observed in the electrophoretic profile (1D-PAGE) of the cell-free hemolymph. In haemocytes, the entomopathogens reduced the amount of serpins, while F. oxysporum caused increased. In 2D-PAGE variations were observed in both expression and presence/absence of protein between the groups. The cell-free hemolymph antimicrobial activity was tested against Escherichia coli and Staphylococcus aureus and against the fungus used in the treatment of engorged ticks. The hemolymph collected 48 hours after the immersion treatment with B. bassiana apresented activity anti-B. bassiana with 48 hours of evaluation. This hemolymph was subjected to Superose column to HPLC and peak was collected and analyzed on the analytical column C18. The fractions were collected from the C18 and its apresented activity anti-B. bassiana, but showed no activity against Candida albicans. These fractions were analyzed by Maldi-Tof and most of them had in common an ion with m/z 1,119.5; however, other ions may be involved with this activity antimicrobial. The lipids present in cell-free hemolymph, in the hemocyte and fat body were extracted and analyzed by thin layer chromatography (TLC) or HPTLC for neutral lipids and phospholipids. The classes of neutral lipids in the cell-free hemolymph were cholesterol ester, cholesterol (CHO) and fatty acids (FA), which have varied depending on the fungus used, type of treatment and observation time. Phospholipids found were phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine, its were not significantly altered after the fungal infection. In hemocytes, the same classes of lipids were found and B. bassiana modified phospholipids, while M. anisopliae s.l. altered FA and CHO. The fat body showed, in addition to these classes of neutral lipids, the triglycerides, which increased significantly 48 hours after inoculation with M. anisopliae s.l. The lipase activity in fat body was measured and it was demonstrated that increased activity 48 hours after inoculation, mainly in the group inoculated with Metarhizium. Therefore, the results showed alterations related to the proteins expression in the hemocytes and the cell-free hemolymph after inoculation with fungi, immunosuppression of hemocytes and antimicrobial peptides induction after infection with B. bassiana, besides changes in the lipid profile of R. microplus after infection. However, further studies are necessary to understand these changes. / O trabalho avaliou os perfis prot?ico e lip?dico de f?meas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus ap?s infec??o com Metarhizium anisopliae s.l., Beauveria bassiana ou Fusarium oxysporum. Os tratamentos foram imers?o ou inocula??o da suspens?o conidial em R. microplus. A hemolinfa foi coletada 24 e 48 horas ap?s os tratamentos. O plasma foi separado dos hem?citos por centrifuga??o e os hem?citos resuspensos em tamp?o fosfato pH 7,2. A concentra??o de prote?na total foi determinada em ambas as fra??es da hemolinfa e os hem?citos quantificados. O plasma da hemolinfa foi filtrado em membrana de 100 kDa e 10 kDa, sendo analisados por eletroforese e cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE). O proteoma do plasma da hemolinfa (tratamento por inocula??o) foi avaliado por gel 2D. Foram observadas varia??es na quantidade de prote?na total de ambas as fra??es da hemolinfa, na quantidade de hem?citos bem como na intensidade de prote?nas/pept?deos expressos no plasma da hemolinfa. Nos hem?citos, os entomopat?genos reduziram a quantidade de serpinas, enquanto F. oxysporum causou aumento. No gel 2D foram observadas varia??es na express?o bem como na aus?ncia/presen?a de prote?nas entre os grupos. O plasma da hemolinfa teve sua atividade antimicrobiana testada contra Escherichia coli e Staphylococcus aureus e contra o fungo utilizado no tratamento das f?meas ingurgitadas. A hemolinfa coletada 48 horas ap?s o tratamento por imers?o com B. bassiana apresentou atividade anti-B. bassiana com 48 horas de avalia??o. Esta hemolinfa foi submetida ? coluna Superose de CLAE e o pico coletado analisado na coluna anal?tica C18. As fra??es coletadas da C18 apresentaram atividade anti-B. bassiana, por?m n?o apresentaram atividade contra Candida albicans. Essas fra??es foram analisadas por Maldi-Tof e a maioria delas apresentou um ?on com raz?o m/z 1.119,5; no entanto, outros ?ons podem estar envolvidos com essa atividade antimicrobiana. Os lip?deos presentes no plasma da hemolinfa, nos hem?citos e no corpo gorduroso foram extra?dos e analisados por cromatografia em camada delgada (CCD) ou CCD de alta performance para lip?deos neutros e fosfolip?deos. As classes de lip?deos neutros encontradas no plasma da hemolinfa foram colesterol-?ster, colesterol (CHO) e ?cidos graxos (AG), que sofreram altera??es em fun??o do fungo utilizado, tipo de tratamento e tempo de observa??o. Os fosfolip?deos encontrados foram fosfatidilcolina e fosfatidiletanolamina, que n?o foram significativamente alterados ap?s a infec??o f?ngica. Nos hem?citos, as mesmas classes de lip?deos foram encontradas e B. bassiana alterou os fosfolip?deos, enquanto M. anisopliae s.l. alterou os AG e CHO. O corpo gorduroso apresentou, al?m destas classes de lip?deos neutros, o triacilglicerol, que aumentou significativamente 48 horas ap?s a inocula??o com M. anisopliae s.l. A atividade lipase no corpo gorduroso foi mensurada, sendo evidenciado um aumento 48 horas ap?s a inocula??o, principalmente no grupo inoculado com Metarhizium. Portanto, os resultados demonstraram altera??es na express?o de prote?nas no plasma da hemolinfa e nos hem?citos ap?s inocula??o com os fungos, imunossupress?o dos hem?citos, indu??o de pept?deos com atividade antimicrobiana ap?s infec??o com B. bassiana, al?m de altera??es no perfil lip?dico de R. microplus ap?s infec??o. No entanto, maiores estudos s?o necess?rios para o entendimento dessas altera??es.