Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 464249.pdf: 13663409 bytes, checksum: 370383758e5762e6645f52a510e7dfab (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Lung cancer is the most commonly diagnosed type of cancer and the leading cause of cancer related mortality in the world, causing nearly one million deaths per year. Among all histological types, adenocarcinoma is the most frequent one (75-80%). Gastrin-releasing peptide (GRP) is considered to be a mitogen, capable of inducing cell proliferation, since it is involved in fetal lung development. This neuropeptide had its effect on tumor growth first identified in human cells of small cell lung cancer, acting as an autocrine growth factor for tumor tissues by binding to its receptor GRPR. The receptor has been found in many tumor types such as prostate, breast, stomach, pancreas and colon. Moreover, this peptide acts as a morphogen, in angiogenesis and is related to inflammatory processes and in the regulation of cells of the immune system. Furthermore, asymptomatic smokers have high levels of GRP in bronchoalveolar lavage and urine. However, little is known about its effects in tumorigenesis and metastasis, and which molecular mechanisms and signaling pathways are responsible for the effects found. Our group demonstrated recently that GRP could act as a chemotactic molecule for neutrophils. Thus, we hypothesized that GRP could be also a chemotactic stimulus to tumor cells expressing the GRPR. In this study, we tested this hypothesis by examining the effect of GRP on proliferation, survival and migration of cells from the adenocarcinoma cell line A549, seeking to identify the mechanisms of action of this peptide. These cells express high levels of GRPR and treatment with GRP leads to activation of kinases such as AKT and ERK1/2 that are involved in the cellular processes mentioned. Our results suggest that GRP is a migratory stimulus to these cells without evidence of significant effect on their proliferation or survival to treatment with the chemotherapy drug cisplatin (CDDP). Nonetheless, they become more sensitive to CDDP when the drug is combined with a GRPR antagonist. Thus, we believe that future studies should consider a possible role for GRP in metastasis of NSCLC. / O c?ncer de pulm?o ? o tipo de c?ncer que mais comumente diagnosticado e o que mais mata no mundo levando a quase 1 milh?o de mortes por ano. Entre todos os tipos histol?gicos, o adenocarcinoma ? o mais frequente (75-80%). O pept?deo liberador de gastrina (GRP) ? considerado um agente mitog?nico, capaz de induzir a prolifera??o celular, uma vez que est? envolvido no desenvolvimento fetal dos pulm?es. Este pept?deo teve sua a??o sobre o crescimento tumoral primeiramente identificada em c?lulas humanas de c?ncer de pulm?o de pequenas c?lulas, atuando como fator aut?crino de crescimento de tecidos e tumores atrav?s da liga??o ao seu receptor GRPR. Este receptor foi encontrado em diversos tipos de tumores como pr?stata, mama, est?mago, p?ncreas e c?lon. Al?m disso, este pept?deo atua como um morf?geno, na angiog?nese e, est? relacionado a processos inflamat?rios e na regula??o de c?lulas do sistema imune. E, fumantes assintom?ticos possuem altos n?veis de GRP no lavado broncoalveolar e na urina. No entanto, pouco se conhece sobre os seus efeitos na tumorig?nese e met?stase e, quais os mecanismos moleculares e as vias de sinaliza??o que s?o respons?veis pelos efeitos encontrados. Nosso grupo demonstrou, recentemente, que o GRP pode atuar como uma mol?cula quimiot?tica para neutr?filos. Desta forma, hipotetizamos que o GRP poderia constituir num estimulo quimiot?tico tamb?m para as c?lulas tumorais que express?o o GRPR. Neste trabalho, testamos essa hip?tese, analisando o efeito do GRP sobre a prolifera??o, sobreviv?ncia e migra??o de c?lulas da linhagem de adenocarcinoma A549, buscando identificar mecanismos de a??o desse pept?deo. Esta linhagem expressa altos n?veis de GRPR. O tratamento com GRP leva a ativa??o de quinases como a AKT e ERK1/2 que est?o envolvidas nestes processos celulares. Nossos resultados sugerem que o GRP ? principalmente um est?mulo migrat?rio para estas c?lulas, sem evid?ncias de efeito significativo sobre a sua prolifera??o ou sobreviv?ncia ao tratamento com a droga quimioter?pica cisplatina, mas tornam-se mais sens?veis quando a droga ? combinada com um antagonista do GRPR. Dessa forma, acreditamos que estudos futuros devam considerar um poss?vel papel para o GRP na met?stase.

Submitted by Kelson Anthony de Menezes (kelson@ucb.br) on 2016-12-19T17:56:31Z No. of bitstreams: 1 SuzanaMeiraRibeiroTese2014.pdf: 4980549 bytes, checksum: df9c1eaadc1ba65bf7c17235d91dc3d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T17:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SuzanaMeiraRibeiroTese2014.pdf: 4980549 bytes, checksum: df9c1eaadc1ba65bf7c17235d91dc3d7 (MD5) Previous issue date: 2014-05-19 / Multi-drug resistant Klebsiella pneumoniae that produce the enzyme K. pneumoniae carbapenemase (KPC) are becoming a common cause of infections in health care centers. Furthermore, Klebsiella can develop multicellular biofilms, which lead to elevated adaptive antibiotic resistance. Here, it was described the antimicrobial and anti-biofilm activities of synthetic cationic peptides against K. pneumoniae strains susceptible and carbapenens resistant through in vitro and in vivo assays. By using static microplate assays, it was observed that the concentration of the peptides IDR-1018, DJK-5 and DJK-6 required to prevent biofilm formation by these clinical isolates was below the minimum inhibitory concentration (MIC) of these peptides. Flow cell experiments confirmed the anti-biofilm activity of the peptides against 2 day-old biofilms of different KPC producing isolates and, in some cases, the peptides induced biofilm cell death. Combinations of DJK-6 together with ??-lactam antibiotics, including the carbapenem meropenem, also prevented planktonic growth and biofilm formation of KPC producing strain 1825971. Interestingly, the peptide DJK-6 was able to enhance, by at least 16-fold, the ability of meropenem to eradicate pre-formed biofilms formed by this strain. Although, this combination between meropenem, DJK-6 was effective in vitro, any reduction of bacterial load was observed in murine lung model of infection. Similarly, the peptides HHC-10, IDR-1018 e IDR-1002 was effective in vitro, but ineffective in vivo. The results in vivo, using the peptides HHC-10 and IDR-1018 after infection were contrasting (significant reduction or non-reduction of bacterial load) between two models of lung infection. Others approaches using the peptides IDR-1018 prophylactically or the peptide IDR-1002 (effective in inhibit bacterial growth) before the induction of the infection, as a preventive approach or IDR-1002 (peptide that reduced the bacterial counts in vitro) after infection, also was unable to reduce the bacterial load in lungs of mice. Despite ineffective in acute model of lung infection, the use of cationic peptides, such DJK-6, to potentiate the activity of ??-lactams including meropenem, represents a promising strategy to prevent biofilm formation or eliminate existent biofilms both in medical devices and in body surfaces. / Klebsiella pneumoniae resistente a m??ltiplos antibi??ticos, que produzem a enzima K. pneumoniae carbapenemase (KPC), est??o se tornando uma causa comum de infec????es em centros de cuidado a sa??de. Al??m disso, K. pneumoniae pode desenvolver biofilmes multicelulares, que levam o aumento da resist??ncia adaptativa a antibi??ticos. Aqui foi descrito a atividade antimicrobiana e antibiofilme de pept??deos cati??nicos sint??ticos contra isolados de K. pneumoniae suscept??vel e resistente a carbapenens em ensaios in vitro e in vivo. Usando ensaios de microplaca est??tico, foi observado que a concentra????o dos pept??deos IDR-1018, DJK-5 e DJK-6, requerida para prevenir a forma????o de biofilmes de isolados resistentes foi abaixo da concentra????o inibit??ria m??nima (CIM) desses pept??deos. Experimentos de fluxo de c??lula confirmaram a atividade antibiofilme dos pept??deos contra biofilmes pr??-formados de diferentes isolados de K. pneumoniae produtores de KPC e, em alguns casos, os pept??deos induziram morte celular. Combina????es de DJK-6 e antibi??ticos ??-lact??micos, incluindo o carbapenem meropenem, tamb??m preveniram o crescimento planct??nico e a forma????o de biofilmes do isolado produtor de KPC 1825971. Interessantemente, o pept??deo DJK-6 foi capaz de aumentar, em pelo menos 16 vezes, a habilidade de meropenem erradicar biofilmes pr??-formados desse isolado. Embora, essa combina????o tenha sido efetiva in vitro, nenhuma redu????o da carga bacteriana foi observada em modelo murino de infec????o pulmonar por K. pneumoniae. Os resultados dos pept??deos HHC-10 e IDR-1018 (os quais inibiram o crescimento bacteriano in vitro a concentra????o que apresentou baixa citotoxicidade) foram contrastantes entre os dois modelos de infec????o pulmonar (significando redu????o ou n??o redu????o da carga bacteriana). Outras abordagens utilizando os pept??deos IDR-1018 profilaticamente ou o pept??deo IDR-1002 (efetivo em inibir o crescimento bacteriano in vitro) ap??s a infec????o, tamb??m foram incapazes de reduzir a carga bacteriana em pulm??es de camundongos. Apesar da inefetividade em modelo agudo de infec????o pulmonar, o uso de pept??deos cati??nicos, tal como DJK-6, para potencializar a atividade de ??-lact??micos, incluindo meropenem, representa uma estrat??gia promissora para prevenir a forma????o de biofilmes ou eliminar biofilmes existentes tanto em equipamentos m??dicos quanto em superf??cies do corpo.

?rea de Concentra??o: Qu?mica Anal?tica. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-06T16:39:24Z No. of bitstreams: 2 catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-07T11:55:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T11:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Neste trabalho foi investigada a eletropolimeriza??o do ?cido 4-aminobenz?ico (4-ABA), visando sua aplica??o como plataforma funcionalizada para imobiliza??o de biomol?culas, para o desenvolvimento de sensores biol?gicos. Foi utilizado o mon?mero 4-ABA, e por meio deste a eletrogera??o foi conduzida sobre a superf?cie do eletrodo de grafite (EG), utilizando-se as t?cnicas de voltametria c?clica (VC) e cronoamperometria (CA), onde nesta, foi investigado o tempo de eletrodeposi??o. Associado a este estudo, foi investigado a imobiliza??o de pequenos fragmentos de DNA (oligonucleot?deos), observando a atua??o da plataforma funcionalizada na resposta do biossensor em rela??o ? detec??o dos oligonucleot?deos, bem como avalia??o do reconhecimento do evento de hibridiza??o, com o alvo complementar. Para a VC, os EG foram modificados com 100 ciclos consecutivos de potencial, em velocidade de varredura de 50 mV/s, na faixa de potencial de +0,00 a +1,20 V, enquanto que na CA, os EG foram modificados nos potenciais de +0,95 V; +1,05 V e +1,15 V, onde tempo de polimeriza??o foi investigado em 4800 segundos e 2400 segundos. Observou-se que dentre os tr?s potenciais pr?-estabelecidos, o que apresentou maior eletroatividade, foi no eletrodo modificado ? +1,05 V, seguido dos potenciais de +1,15 V e +0,95 V, respectivamente. Para o filme formado em +0,95 V, h? um ligeiro aumento da corrente na atividade do par redox, sendo tamb?m observado que um maior deslocamento de potencial e corrente, ocorreu para o eletrodo modificado em +1,05 V seguido do potencial +1,15 V. A atividade eletroqu?mica dos filmes polim?ricos ? praticamente da mesma magnitude quando a eletropolimeriza??o por CA, ocorre a 4800 segundos e 2400 segundos. O eletrodo que apresentou as melhores respostas para imobiliza??o e detec??o das bases p?ricas, guanina e adenina, foi o eletrodo modificado por VC, seguido do eletrodo modificado no potencial de +1,05 V, uma vez que mostrou-se maiores amplitudes nos valores de corrente de pico an?dica (Ipa) dentre os potenciais constantes. Os filmes formados a 2400 segundos apresentam menor sensibilidade para a imobiliza??o e detec??o da guanina, biomarcador. Medidas de espectroscopia de imped?ncia eletroqu?mica (EIE) mostraram maior resist?ncia ? transfer?ncia de carga (Rtc) para o eletrodo modificado no potencial +1,05 V, seguido do eletrodo modificado por VC. Imagens de microscopia eletr?nica de varredura (MEV) mostraram que em todos os casos n?o h? total recobrimento da superf?cie do EG. Para o poli(4-ABA) eletropolimerizado por VC, as imagens de MEV mostraram morfologia completamente distinta, pois se observa uma maior cobertura da superf?cie do grafite, quando comparado aos filmes polim?ricos formados por CA. ? n?tido que para os filmes formados a 4800 segundos, h? maior presen?a de material depositada para a plataforma desenvolvida em +1,05 V. A plataforma Poli(4-ABA)/EG mostrou-se eficiente e sens?vel para a imobiliza??o do oligonucleot?deo (poliGA), bem como a detec??o do evento de hibridiza??o com o oligonucleot?deo complementar (poliCT). A ssDNA apresentou melhor afinidade pelo azul de metileno (AM) devido aos pares de bases da guanina presentes na sonda, comparada a dsDNA, onde a forma??o do h?brido diminui o acesso de intercala??o do azul de metileno (AM) ?s bases guanina, enquanto que a resposta eletroqu?mica do brometo de et?dio (BE) foi melhor observada na dsDNA. Estudos da imobiliza??o do pept?deo DD K, com o alvo espec?fico (fosfolip?deo POPC), e o alvo n?o espec?fico (fosfolip?deo POPC + colesterol), mostraram-se bastante promissores. A imobiliza??o do pept?deo sobre o poli(4-ABA) n?o gerou grandes altera??es no perfil dos espectros de EIE. Foi poss?vel observar uma semelhan?a entre os diagramas de Bode para as medidas da sonda e da sonda + alvo espec?fico devido ? forte intera??o existente entre pept?deo/LUVs sem colesterol. Contudo, para o eletrodo contendo a sonda + alvo n?o espec?fico (LUVs com colesterol), o espectro foi alterado. Tais resultados indicam promissora aplica??o da plataforma desenvolvida no reconhecimento de alvos biol?gicos, bem como o desenvolvimento de biossensores. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT The electropolymerization of 4-aminobenzoic acid (4-ABA) on graphite electrodes (GE) was investigated for the development of electrochemically functionalized platforms applied in the immobilization of biomolecules. The electrogeneration of 4-ABA was carried out in perchloric acid solutions using cyclic voltammetry (CV) and chronoamperometry (CA) techniques. In the case of CV studies, the GEs were modified by applying 100 consecutive potential cycles, while in the case of CA studies the electrodes were modified at different potentials (E/V vs. Ag/AgCl): +0.95, +1.05 and +1.15. The modified GEs were characterized using CV and electrochemical impedance spectroscopy (EIS) techniques in HClO4 solutions in the presence and absence of the ferricyanide/ferrocyanide redox couple (redox probe). Scanning electron microscopy (SEM) was used for morphological characterization. In case of CA, the best electrochemical activities for the electropolymerization reaction were verified at +1.05 V > +1.15 V > +0.95 V. The poly(4-ABA) platforms were investigated for the immobilization and direct detection of purine bases (adenine and guanine), where the higher values of the anodic peak current (Ip,a) were observed for the transducers electroformed using CV. For immobilization of oligonucleotides poly(GA) and recognition of hybridization event with the complementary target poly(CT), methylene blue (MB) and ethidium bromide (EB) were used as indicator and intercalator, respectively. MB was reduced at ?0.26 V resulting in the cathodic peak current (Ip,c) for the ssDNA, while in the case of EB the oxidation was observed at +0.58 V thus resulting in the higher values of Ip,a for the dsDNA. The platforms were also evaluated for immobilization of the DD K peptide, whose antibacterial activity and biological recognition were verified using the complementary (phospholipid 1- palmitoyl - 2 - oleoyl phosphatidylcholine - POPC) and non-complementary (phospholipid POPC + cholesterol) targets. The recognition mechanism was monitored using impedance measurements, where it was verified a good interaction of the peptide DD K with the POPC mimetic membrane. In addition, the interaction was affected by the presence of cholesterol, thus revealing that the use of poly(4-ABA) platforms is very promising for the development of biosensors.

Data de aprova??o ausente. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-21T16:01:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) isabela_pereira_gomes.pdf: 4600043 bytes, checksum: 3419d89b2ca19457442da4e144781e1b (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-21T11:24:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) isabela_pereira_gomes.pdf: 4600043 bytes, checksum: 3419d89b2ca19457442da4e144781e1b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-21T11:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) isabela_pereira_gomes.pdf: 4600043 bytes, checksum: 3419d89b2ca19457442da4e144781e1b (MD5) Previous issue date: 2016 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Micro-organismos resistentes a antibi?ticos v?m atingindo ?ndices elevados nos ?ltimos anos, agravando problemas de sa?de p?blica e econ?micos. O impacto na sociedade devido ? resist?ncia de bact?rias aos antibi?ticos convencionais tem mobilizado a pesquisa para o desenvolvimento de novas drogas. Nesse contexto, surgem os pept?deos antimicrobianos, que s?o mol?culas efetoras do sistema imune inato e podem ser encontrados em praticamente todos os seres vivos. Para prote??o contra os micro-organismos presentes em seu habitat, a pele de anuros apresenta um verdadeiro arsenal qu?mico, constitu?do, em sua maioria, de diferentes classes de pept?deos. Dentre esses, os antimicrobianos s?o considerados os mais avan?ados participantes do sistema imunol?gico. V?rios estudos sugerem que os pept?deos antimicrobianos podem atuar por diferentes mecanismo como miceliza??o, forma??o de poros na superf?cie da membrana ou, ainda, pelo ataque a algum alvo intracelular. Embora a maioria dos modelos existentes proponham que pept?deos antimicrobianos exercem suas atividades biol?gicas por meio da intera??o com a membrana bacteriana, o mecanismo de a??o dessas mol?culas ainda n?o ? completamente compreendido. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo obter informa??es estruturais, conformacionais e de intera??o em ambientes que mimetizam membranas biol?gicas, do pept?deo Hylaseptina P1 (HSP-1), composto por 14 res?duos de amino?cidos e isolado do anuro da esp?cie Hyla punctata visando o entendimento do seu mecanismo de a??o. Neste trabalho, o pept?deo HSP-1 foi sintetizado manualmente atrav?s da s?ntese de pept?deos em fase s?lida via estrat?gia Fmoc. As prefer?ncias conformacionais do pept?deo em meios micelares de dodecilsulfato de s?dio (SDS), dodecilfosfocolina (DPC) e ves?culas fosfolip?dicas de 1-palmitoil-2-oleilfosfatidilcolina (PC) e 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilglicerol (PG) foram avaliadas por Dicro?smo Circular. Observou-se que em meio aquoso HSP-1 adota estrutura desenovelada, enquanto que, em meios micelares e ves?culas fosfolip?dicas, apresentou conforma??o ?-h?lice. A estrutura tridimensional foi estudada na presen?a de micelas de SDS e DPC por Espectroscopia de Resson?ncia Magn?tica Nuclear em solu??o, revelando que, em micelas de SDS o pept?deo HSP-1 exibe conforma??o helicoidal mais prolongada do que em micelas de DPC, no qual foi poss?vel verificar pequena dobra da h?lice na regi?o N-terminal da cadeia pept?dica, sugerindo maior inser??o do pept?deo em micelas zwiteri?nicas. O efeito da adi??o de pept?deo no tamanho e na carga superficial de ves?culas fosfolip?dicas de PC e PC:PG (3:1) foi investigado por medidas de espalhamento de luz din?mica e Potencial Zeta. Verificou-se que a adi??o de HSP-1 resulta no aumento do di?metro hidrodin?mico (?Dh ? 20 nm) e aumento do potencial Zeta (?? ? 15 mV) de ves?culas unilamelares (LUV?s) de PC:PG, indicando intera??o eletrost?tica com a superf?cie das ves?culas. Quando ves?culas de PC foram tituladas com HSP-1, foi observada maior altera??o no di?metro hidrodin?mico das LUVs (?Dh ? 22 nm), enquanto que n?o se observaram altera??es significativas nos valores de potencial Zeta (?? ? 0 mV), sendo indicativo de uma maior inser??o do pept?deo em membranas zwiteri?nicas. Conforme observado nos resultados de Calorimetria de Titula??o Isot?rmica, a intera??o com ves?culas zwiteri?nicas foi da ordem de 102 maior do que o valor encontrado para intera??o com ves?culas negativas. Contudo, os dados termodin?micos revelaram a predomin?ncia de intera??es eletrost?ticas de HSP-1 com ves?culas de PC:PG e hidrof?bicas com ves?culas de PG. Finalmente, a capacidade de forma??o de poros de HSP-1 foi examinada por meio de medidas de extravasamento de carboxifluoresce?na (CF) em ves?culas de PC e PC:PG. Em PC-LUVs observou-se uma maior intensidade de fluoresc?ncia em compara??o com PC:PG-LUVs, sugerindo uma maior atividade l?tica do pept?deo em ves?culas zwiteri?nicas. A porcentagem m?xima de CF liberada foi superior em LUVs-PC (65%) quando comparado a LUVs de PC:PG (50%), confirmando que HSP-1 tem maior capacidade de permeabiliza??o em meio zwiteri?nico. Os dados de extravasamento demostraram tamb?m menor cin?tica de libera??o de CF em PC-LUVs, condizente com um mecanismo no qual h? maior inser??o do pept?deo na interface da bicamada lip?dica, e maior cin?tica de libera??o de CF em PC:PG-LUVs, de acordo com um mecanismo tipo carpete, o qual envolve apenas intera??o superficial do pept?deo com a membrana. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / The resistance of microorganisms to antibiotics have reached high levels in recent years, exacerbating public health and economic problems. The impact of bacterial resistance on the global society has mobilized the research community for the development and new drugs discovery. In this context, antimicrobial peptides appear as an alternative antibiotics class, which are effector molecules of the innate immune system in almost every living beings. In order to protect against microorganisms present in their habitat the skin of frogs presents a real chemical arsenal consisting mostly of different peptides classes, which are considered the most advanced participants of the immune system. Several studies suggest that antimicrobial peptides may act by different models such as micellization, pore formation in membrane surface or also intracellular target attack. Although most of models propose that antimicrobial peptides exert their biological activities by interacting with the bacterial membrane, the mechanism of action is not still fully understood. In order to study the action mechanism of antimicrobial peptide Hylaseptina P1 (HSP-1), composed of 14 amino acid residues and isolated from Hyla punctate species, this work presents conformational and thermodynamic analysis of peptide-membrane interaction in biomimetic environments. In this work, the HSP-1 peptide was synthesized manually by solid phase peptide synthesis using Fmoc strategy. The conformational preferences of peptide were evaluated by Circular dichroism in sodium dodecylsulfate (SDS) and dodecilfosfocolina (DPC) micellar media or 1-palmitoyl-2-oleilfosfatidilcolina (PC) and 1-palmitoyl-2-oleoyl-phosphatidylglycerol (PG) phospholipid vesicles. A random conformation was observed to HSP-1 in aqueous medium while in micellar or phospholipid vesicles media HSP-1 showed a predominant ?-helix conformation. The three dimensional structure were obtained by solution Nuclear Magnetic Resonance in the presence of SDS and DPC micelles, revealing that HSP-1 exhibits a longer helical conformation in SDS than DPC micelles. In zwiterionic medium could be verified a subtle bend at the N-terminus, suggesting a partial insertion of the peptide in DPC micelles. The effects of adding peptide in size or surface charge of PC and PC:PG phospholipid vesicles were investigated by Dynamic Light Scattering and Zeta Potential measurements. The addition of HSP-1 to PC:PG-LUVs results in increasing of both hydrodynamic diameter (?Dh ? 20 nm) and zeta potential (?? ? 15 mV), indicating an electrostatic interaction with the surface vesicles. On the other hand, when PC-LUVs were titrated with HSP-1 a greater change in hydrodynamic diameter (?Dh ? 22 nm), no significant variations were observed in superficial charge, indicating a partial insertion of the peptide in zwitterionic PC membranes. In addition, the thermodynamic studies carried out by isothermal titration calorimetry showed a peptide-membrane interaction approximately 102 higher with PC-LUVs when compared to negative PC:PG-LUVs. Nevertheless, whereas the greater enthalpic contribution in PC:PG-LUVs revealed the predominance of electrostatic interactions with HSP-1, in PC vesicles predominate hydrophobic interactions. Finally, the ability of poring formation of HSP-1 was examined by carboxyfluorescein (CF) release from PC and PC:PG vesicles. It was observed a higher fluorescence intensity in PC-LUVs compared to PC:PG-LUVs, suggesting a greater lytic activity of the peptide in zwiterionic vesicles. The maximum percentage of CF released was approximately 65% to PC-LUVs and 50% to PC:PG-LUVs, confirming a greater membrane permeabilization in zwiterionic medium. Furthermore, this study has also demonstrated a lesser kinetics of CF leakage in PC-LUVs, consistent with a mechanism in which there is greater insertion of the peptide in the lipid bilayer interface. On the other hand, the higher kinetics of CF leakage in PC:PG?LUVs is in accordance with a carpet-like mechanism, which involve only superficial interaction between peptide and membrane.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-04-02T15:02:41Z No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-04-05T13:08:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-05T13:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Tityus stigmurus corresponde ? esp?cie de escorpi?o predominante na regi?o Nordeste do Brasil, sendo considerado um dos principais causadores de acidentes escorpi?nicos. Na pe?onha do T. stigmurus, que ? composta de uma mistura complexa de mol?culas de alta e baixa massa molecular, foi identificado e caracterizado um pept?deo antimicrobiano denominado Stigmurina (FFSLIPSLVGGLISAFK-NH2). Pept?deos antimicrobianos s?o pequenas mol?culas consideradas a primeira linha de defesa contra micro-organismos, apresentando amplo espectro de a??o antimicrobiana. A literatura reporta tamb?m a atividade desses pept?deos contra c?lulas cancer?genas. Sequ?ncias nativas de pept?deos bioativos como prot?tipo para a obten??o de novas mol?culas t?m sido utilizadas com o intuito de potencializar a sua atividade e reduzir a toxicidade. Nesse contexto, realizou-se a caracteriza??o estrutural in silico e por dicro?smo circular, bem como a avalia??o da atividade antimicrobiana, antiparasit?ria, antiproliferativa e hemol?tica de dois pept?deos an?logos obtidos ? partir da Stigmurina, denominados StigA3 e StigA4. A an?lise da conforma??o tridimensional in silico do StigA3 e StigA4 demonstrou uma estrutura helicoidal, sendo este resultado confirmado por dicro?smo circular. O aumento da carga superficial e do momento hidrof?bico de ambos os pept?deos an?logos quando comparado com a Stigmurina resultaram na potencializa??o da atividade antimicrobiana e antiparasit?ria. Os pept?deos StigA3 e StigA4 apresentaram a??o antiproliferativa semelhante ao pept?deo nativo, com exce??o para a c?lula normal, para qual os pept?deos an?logos se mostraram menos t?xicos. Portanto, estes resultados indicam uma potencial aplica??o terap?utica destes pept?deos an?logos, demonstrando a efici?ncia do desenho racional de f?rmacos para a obten??o de novos agentes antiproliferativos e anti-infecciosos. / Tityus stigmurus it?s the predominant scorpion specie in Northeast region from Brazil, it?s considered one of the main cause of scorpion accidents in this region. In T. stigmurus venom, which is a complex mixture of high and low molecular mass molecules, was identified an antimicrobial peptide denominated Stigmurin. Antimicrobial peptides are small molecules considered the first line of defense against microorganisms, they show broad spectrum action. Many authors have proved that these peptides can also be effective on cancerous cells. Mutation in these molecules sequence has been held aiming the increase in the activity maintaining its low toxicity. Therefore, it is proposed the characterization of the structure in silico and by circular dichroism, as well the antimicrobial, antiparasitic, anti-proliferative and hemolytic activities of two analog peptides from Stigmurin, denominated StigA3 and StigA4. We performed an in silico analysis for these peptides, where we were able to observe ?-helix structure, which was confirmed by circular dichroism. We were also able to find that the analog peptides net charge and hydrophobic moment were higher than Sitgmurin?s, which can explain the increase in antimicrobial and antiparasitic activity. The peptides StigA3 e StigA4 showed activity on cancerous cells similiar to the native peptide, except when tested on a normal cell we were able to find that they?re less toxic. Therefore, these results indicate a potential biotechnological application for the analogs peptides, even as prototype to new therapeutic agents.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 464804.pdf: 1590458 bytes, checksum: e5fa70202dba1d1fd2d06ce2fd978999 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / Introduction: Heart failure (HF) is the final pathway of most diseases affecting the heart. It is estimated that this syndrome, with high mortality rate, affects 80% of the elderly people in the world within five years of disease evolution. Objective:The objective was to evaluate the role of natriuretic peptide NT - proBNP in the diagnosis of HF in the elderly. Method: Cross-sectional study of diagnosis to determine the accuracy (sensitivity, specificity and predictive value) in serum BNP level, checking if there is a correlation between the serum BNP level and severity of heart failure. While testing patients, in the NT-proBNP study, the NT-proBNP serum level was determinedby the blood. Chest X-rays, transthoracic echocardiography and clinical examination were used to define groups with and without HF. A total of 74 elderly were researched in this group, 46 had HF and 28 had noHF. Results: Female gender was more prevalent 92,9% (p = 0.001), the age range was 60-69 years old (with/HF=37%) (without/HF=57.1%) (p=0.025). They had no active physical activities (95.7% w/HF) (p < 0.001 ), both groups had hypertension (p<0.001); dyslipidemic ( 10.9 % with HF ) and ( 39.3 % without HF ) ( p = 0.004 ), diabetic ( 47.8 % w/HF) and (21.4 % without/HF) (p=0.023); acute myocardial infarction, coronary artery disease (87% w/HF) (p < 0.001). Ejection fraction > 50% (average 363.2) and < 50 % (average 678.2). Ranked using the New York Heart Association I (20 to 344.2 average), IV (12 to 664.9 average) (p=0.412), with sensitivity 58.7 % and specificity 82.1 %, linear regression (r=-0.291, p=0.05) between BNP andEF. Conclusion: The NT-proBNP serum level was useful in aiding the diagnosis of HF in the elderly, with prediction capacity approximately 74%, according to the area under the ROC curve. A low correlation between the NT-proBNP serum level and the ejection fraction in patients with HF was observed. Further clinical studies are necessary so as to define the role of NT-proBNP in the clinical practice with elderly patients / Introdu??o: A insufici?ncia card?aca (IC) ? a via final da maioria das doen?as que acometem o cora??o. Estima-se que 80% de idosos do mundo sejam afetados por essa s?ndrome, com taxa de mortalidade elevada entre um e cinco anos do diagn?stico da doen?a. Objetivo: Avaliar o papel do Pept?deo Natriur?tico NT proBNP no diagn?stico da IC em idosos. M?todo: Estudo transversal de diagn?stico, para determinar a acur?cia (sensibilidade, especificidade e valor preditivo) do n?vel s?rico NT proBNP, verificando se existe correla??o entre o n?vel s?rico do NT proBNP e a gravidade da IC, neste estudo. Na realiza??o dos exames dos pacientes do estudo, o n?vel s?rico do pept?deo foi dosado atrav?s do sangue. Radiografia do t?rax, ecocardiograma transtor?cico e exame cl?nico foram utilizados para definir grupos com e sem a IC. O total de 74 idosos, 46 com IC e 28 sem IC, foi estudado neste grupo. Resultados: O sexo feminino foi mais prevalente 92,9% (p=0,001), a faixa et?ria 60 a 69 anos, (c/ IC= 37%) (s/IC=57,1%) (p=0,025). N?o praticavam atividade f?sica (95,7% c/IC) (p <0,001), hipertens?o ambos os grupos (p <0,001); dislip?micos (10,9% com IC) e (39,3% sem IC) (p=0,004), diab?ticos (47,8% c/IC) e (21,4% s/IC) (p=0,023); IAM/DAC (87% c/IC) (p<0,001). Fra??o de Eje??o>50% (m?dia de 363,2) e <50% (m?dia de 678,2). Classificados usando a NYHA I(20-344,2 m?dia), IV(12-664,9 m?dia) (p=0,412) com sensibilidade 58,7% e especificidade de 82,1%, regress?o linear (r= -0,291 e p=0,05) entre BNP e FE. Conclus?o: O n?vel s?rico de NT-proBNP se mostrou ?til no aux?lio ao diagn?stico de IC em idosos, com capacidade de predi??o de aproximadamente 74%, segundo a ?rea sob a curva ROC. Foi observada uma correla??o fraca entre o n?vel s?rico de NT-proBNP e a fra??o de eje??o nos pacientes com IC. Estudos cl?nicos adicionais s?o necess?rios para definir o papel do NT-proBNP na pr?tica cl?nica em pacientes idosos

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434382.pdf: 1595815 bytes, checksum: e9f7e7d4a7dcd6de22b69890074a8785 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Neutr?filos s?o os principais personagens do processo inflamat?rio, tanto na imunidade inata como adaptativa. Sua migra??o para os s?tios inflamat?rios ? crucial para o in?cio da inflama??o, assim como para o controle de infec??es, apresentando envolvimento na perpetua??o de diferentes doen?as inflamat?rias cr?nicas. O pept?deo liberador de gastrina (GRP: Gastrin-releasing peptide) ? um neuropept?deo que atua via receptores ligados a prote?na G e que est? envolvido em diferentes fun??es fisiol?gicas, atuando da motilidade gastrointestinal ? modula??o da mem?ria. Seu receptor preferencial, GRPR (Gastrin-releasing peptide receptor), ? expresso em v?rios tipos celulares, incluindo os sistemas g?strico, respirat?rio e nervoso, tendo sua express?o aumentada em c?lulas tumorais. RC-3095 ? um dos antagonistas seletivos de GRPR, desenvolvido para o tratamento de c?ncer. Mais recentemente, o RC-3095 mostrou-se com propriedades anti-inflamat?rias no tratamento de artrite e sepse.Os mecanismos pelos quais o GRP e o RC-3095 afetam o crescimento tumoral e o sistema imune ainda n?o foram totalmente determinados. Neste estudo, n?s propomos caracterizar os efeitos pr?-inflamat?rios do GRP na indu??o de migra??o de leuc?citos in vitro e in vivo, demonstrando que o GRPR atua como um receptor quimiot?tico para neutr?filos. Inje??es intraperitoneais de GRP recrutaram neutr?filos em quatro horas, um fen?meno antagonizado pelo RC-3095, deple??o de macr?fagos ou neutraliza??o do TNF-&#945;. Al?m disso, o GRP apresentou um efeito direto in vitro, atuando como quimiocina na indu??o de migra??o atrav?s da sinaliza??o por GRPR, um mecanismo que ? dependente de PI3K, ERK, p38 e independente de prote?na G&#945;i, demonstrando que o GRPR ? um receptor quimiot?tico alternativo. Interessantemente, a migra??o de neutr?filos in vitro em dire??o ao l?quido sinovial de pacientes com artrite foi abolida com o pr?-tratamento com RC-3095, em uma magnitude comparada ao bloqueio do CXCR2. Discutimos aqui as implica??es dessas descobertas para os tratamentos baseados no antagonista de GRPR em doen?as inflamat?rias e propomos que o GRPR ? um novo receptor quimiot?tico alternativo que est? envolvido nessa patog?nese destes dist?rbios.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418546.pdf: 3263858 bytes, checksum: 98405799e09a5518c35fdb38c15ba169 (MD5) Previous issue date: 2009-10-14 / A regenera??o e engenharia de tecidos passam pela aplica??o de c?lulas precursoras multipotentes associadas a biomateriais, os quais devem oferecer a elas um ambiente tridimensional an?logo ? matriz extracelular existente nos organismos vivos. Aprimorar um hidrogel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), agregando a ele duas fun??es caracter?sticas de scaffolds, isto ?, ser mold?vel ou favor?vel ? ades?o celular tridimensional, para o uso em regenera??o e engenharia de tecidos foi a inten??o do presente estudo. O desenvolvimento de uma propriedade mold?vel foi obtido baseado em experi?ncias da literatura que citam a s?ntese de HPMC com silano (HPMC-Si). Esta s?ntese permitiu que o hidrogel assumisse o aspecto de gelatina, atrav?s de autorreticula??o em fun??o do pH, mold?vel de acordo com o defeito a ser corrigido. Paralelamente, seguindo outra tend?ncia no desenvolvimento de scaffolds compostos por hidrog?is, sintetizou-se HPMC com pept?deos R-G-D-S (arginina- glicina- ?cido asp?rtico- serina), atrav?s de rea??o por esterifica??o. Isto conferiu ao hidrogel s?tios de ades?o, visando a sua intera??o com c?lulas dentro de um contexto tridimensional. A partir das s?nteses, avaliou-se a viabilidade de c?lulas aderentes adiposoderivadas humanas (CAADh), cultivadas em 2D na presen?a dos hidrog?is HPMC pura, HPMC-Si e HPMC-RGDS, para se determinar a citotoxicidade dos mesmos (ensaio MTT de acordo com a ISO 10993-5), comparando-os entre si e com grupos-controle negativo (CN) e positivo (CP), em 24, 48 e 72h. Os tr?s hidrog?is presentes nas culturas n?o interferiram na viabilidade das c?lulas (% de atividade MTT), durante os 3 momentos observados, quando comparados com o grupo CP (P< 0,001). Ao mesmo tempo, as c?lulas cultivadas em contato com os g?is demonstraram viabilidade semelhante ao grupo CN. Entretanto, ainda que sejam at?xicos em contato com culturas de c?lulas em monocamada, testes de citotoxicidade em 3D devem confirmar a efetividade dos hidrog?is aprimorados HPMC-Si e HPMC-RGDS como scaffolds aplic?veis em regenera??o e engenharia de tecidos.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-12-15T17:40:31Z No. of bitstreams: 1 GabrielaSalvadorOurique_DISSERT.pdf: 9103307 bytes, checksum: d30f3a32f57ad778a4352a7ac2b010f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2015-12-28T21:29:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GabrielaSalvadorOurique_DISSERT.pdf: 9103307 bytes, checksum: d30f3a32f57ad778a4352a7ac2b010f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-28T21:29:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GabrielaSalvadorOurique_DISSERT.pdf: 9103307 bytes, checksum: d30f3a32f57ad778a4352a7ac2b010f0 (MD5) Previous issue date: 2014-07-18 / Dengue (DENVE) ? um importante v?rus pat?geno pertencente ao g?nero Flavivirus. O genoma do v?rus da Dengue, ? constitu?do de RNA envelopado de fita simples e sentido ?nico (+), possui aproximadamente 10.7-11 Kb. O RNA de DENV ? traduzido como uma ?nica poliprote?na. Esta poliprote?na, ? traduzida em 3 prote?nas estruturais (C, prM e E) e 7 n?o estruturais (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B e NS5). A prote?na NS3 ? uma prote?na multifuncional que al?m de promover o processamento da poliprote?na do genoma viral, tamb?m possui atividade helic?sica, NTP?sica e RTP?sica. A NS3 precisa de cerca de 40 res?duos da prote?na NS2B (que age como cofator) para realizar suas atividades. Os tratamentos de DV atuais s?o principalmente sintom?ticos, n?o existem vacinas eficazes aprovadas e comercializadas, nem drogas antivirais dispon?veis para proteger ou curar a doen?a da dengue. O inibidor tetrapept?dico Bz-Nle-Lys-Arg-Arg-H, (com Ki de 5,8-7,0 ?M) tem sido apresentado na literatura como um potente inibidor da protease NS3 em DV. Sendo uma estrat?gia inteligente para o tratamento da Dengue. O presente trabalho objetivou estudar as intera??es do ligante junto ao s?tio ativo para fornecer uma vis?o mais clara e aprofundada dessas intera??es. Para tal desenvolveu-se um estudo in silico, com utiliza??o de c?lculos de mec?nica qu?ntica, baseada na Teoria do Funcional da Densidade (DFT), com aproxima??es do Gradiente Generalizado (GGA) para descri??o dos efeitos de correla??o e troca. A energia de intera??o de cada amino?cido do s?tio de liga??o, com o ligante foi calculada com base no m?todo de fragmenta??o molecular com capas conjugadas (MFCC). Al?m da energia, foram calculadas as dist?ncias, tipos de intera??es moleculares e grupos at?micos envolvidos. Os modelos te?ricos utilizados foram satisfat?rios e demonstraram uma descri??o mais precisa com a utiliza??o da constante diel?trica ?=20 e 80. Os resultados demonstram que a energia de intera??o do sistema atingiu a converg?ncia em 13,5A. Dentro desse raio de intera??o os res?duos mais importantes foram identificados. Met49, Met84 e Asp81 realizam intera??es de hidrog?nio. Os res?duos Asp79 e Asp75 apresentam elevada energia de atra??o. J? res?duos como Arg54, Arg85 e Lys 131 realizam intera??es de hidrog?nio pr?ximas com o ligante, por?m, aparecem no gr?fico do BIRD possuindo elevada energia de repuls?o com o inibidor. Os resultados tamb?m destacam a import?ncia do res?duo Tyr161 e o envolvimento da tr?ade catal?tica constitu?da por Asp75, Ser135 e His51. / Dengue virus is an important patogen that causes Dengue desease in all world, and belongs to Flavivirus gender. The virus consists of enveloped RNA with a single strand positive sense, 11Kb genome. The RNA is translated into a polyprotein precursor, wich is cleaved into 3 structural proteins (C, prM e E) and 7 non-structural proteins (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B e NS5). The NS3 is a multifunctional protein, that besides to promote the polyprotein precursor cleavage, also have NTPase, helicase and RTPase activity. The NS3 needs a hydrophilic segment of 40 residues from the transmembrane NS2B protein (who acts like cofator) to realize this functions. Actually, there's no vacines available on the market, and the treatment are just symptomatic. The tetrapeptide inhibitor Bz-Nle-Lys-Arg-Arg-H (Ki de 5,8-7,0 M) was showed as a potent inhibitor ? for NS3prot in Dengue virus. That is a inteligent alternative to treat the dengue desease. The present work aimed analyse the interactions of the ligand bounded to the activity site to provid a clear and depth vision of that interaction. For this purpouse, it was conducted an in silico study, by using quantum mechanical calculations based on Density Functional Theory (DFT), with Generalized Gradient approximation (GGA) to describe the effects of exchange and correlation. The interaction energy of each amino acid belonging to the binding site to the ligand was calculated the using the method of molecular fragmentation with conjugated caps (MFCC). Besides energy, we calculated the distances, types of molecular interactions and atomic groups involved. The theoretical models used were satisfactory and show a more accurate description when the dielectric constant = 20 ? and 80 was used. The results demonstrate that the interaction energy of the system reached convergence at 13.5 A. Within a radius of 13,5A the most important residues were identified. Met49, Met84 and Asp81 perform interactions of hydrogen with the ligant. The Asp79 and Asp75 residues present high energy of attraction. Arg54, Arg85 and Lys 131 perform hydrogen interactions with the ligand, however, appear in BIRD graph having high repulsion energy with the inhibitor. The data also emphasizes the importance of residue Tyr161 and the involvement of the catalytic triad composed by Asp75, His51 and Ser135

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 419691.pdf: 1447789 bytes, checksum: 5ccd4a3822fedcf2320dfa685397b746 (MD5) Previous issue date: 2008-04-30 / A intera??o de uma c?lula B com uma c?lula T ativada na borda T-B leva a forma??o de um centro germinativo que tem como resultado o aumento da especificidade e afinidade da c?lula B pelo ant?geno. Ap?s a forma??o de uma c?lula B de alta especificidade e afinidade, alguns clones diferenciam-se em c?lulas produtoras de anticorpos. O anticorpo ? a mol?cula efetora da c?lula B e tem como principais finalidades a opsoniza??o, a neutraliza??o, a fixa??o de complemento e a imunomodula??o. Na maioria dos indiv?duos, a resposta imune mediada por anticorpo ? direcionada apenas contra ant?genos n?o-pr?prios, por?m, devido a fatores at? hoje n?o compreendidos, alguns indiv?duos montam respostas auto-imunes. Pouco se sabe quais os mecanismos que est?o por tr?s da forma??o e manuten??o das c?lulas auto-reativas. Em um dos modelos que prop?e como as c?lulas B s?o recrutadas em resposta auto-imunes, como no Lupus Eritematoso Sist?mico, as c?lulas B recebem aux?lio via apresenta??o de pept?deos derivados do receptor de c?lula B. Os linf?citos B podem aleatoriamente combinar diversos segmentos g?nicos para criar um ?nico receptor na superf?cie da c?lula. Devido ? baixa freq??ncia de uma c?lula B expressar um gene V em particular, originalmente foi proposto que as c?lulas T n?o eram tolerantes aos pept?deos derivados da imunoglobulina. Em virtude que a auto-imunidade n?o ? a regra, mecanismos que controlam a resposta de c?lulas T a pept?deos derivados da imunoglobulina se fazem necess?rios. Este trabalho tem como objetivo testar estas duas hip?teses. A primeira quest?o ? a de como as c?lulas T imunoglobulinas espec?ficas s?o tornadas tolerantes. A segunda quest?o ? a de que uma c?lula B auto-reativa pode ser conduzida a uma resposta auto-imune pela apresenta??o de pept?deos derivados da imunoglobulina. Neste modelo, apenas as seq??ncias da imunoglobulina que sofressem hipermuta??es som?ticas teriam o potencial de gerar um epitopo de c?lula T. No segundo cap?tulo, usando uma combina??o de dois animais transg?nicos e a t?cnica de transplante de medula ?ssea, um terceiro animal transg?nico foi gerado. Neste modelo, a freq??ncia de uma c?lula B expressando um gene V em particular (c?lulas B 3671-&#954;Tg) ? semelhante ? diversidade do repert?rio de c?lulas B, e as c?lulas T(CA30) s?o, na grande maioria, espec?ficas para um pept?deo derivado da cadeia &#954; das c?lulas B 3671-&#954;Tg. Os resultados demonstraram que as c?lulas T s?o, na grande maioria, eliminadas no timo destes animais, por?m algumas c?lulas s?o capazes de alcan?ar a periferia. As c?lulas que escapam o timo aparentemente expressam uma cadeia &#945; end?gena, s?o ant?genos experientes, por?m n?o respondem ? estimula??o in vitro com o pept?deo. O terceiro cap?tulo teve como objetivo testar a apresenta??o do receptor como via para as c?lulas B auto-reativas, usando um animal transg?nico parcial para o receptor de c?lula B. Apesar de a auto-imunidade ter sido induzida de forma espont?nea nesses animais, nenhuma c?lula B auto-reativa encontrada na periferia expressava o receptor transg?nico.