Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:04:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339549.pdf: 818402 bytes, checksum: 6b71cd252342310ae9b208c35b73bd6f (MD5) Previous issue date: 2016 / Objetivo: Revisar de forma sistemática a literatura de estudos pré-clínicos com animais que avaliem o potencial das células-tronco da polpa dental na regeneração periodontal. Materiais e Métodos: Foram desenvolvidas estratégias de busca individuais para cada uma das seguintes bases de dados bibliográficos: PubMed, LILACS, Scopus, Web of Science e na literatura cinzenta utilizando o ProQuest. Os critérios de inclusão abrangeram estudos em animais que utilizaram células-tronco de polpa dental para regeneração de defeitos periodontais criados. Estudos publicados em todas as línguas foram considerados. Um guia de diretrizes para Revisões Sistemáticas e Meta-análises foi utilizado (PRISMA). A avaliação da qualidade dos artigos incluídos foi realizada com a ferramenta SYRCLE que avalia o risco de viés em estudos com animais. Resultados: Foram identificados 1.007 títulos. Após triagem minuciosa 2 artigos foram incluídos. Avaliou-se a formação de osso alveolar, cemento e ligamento periodontal. O primeiro estudo relatou que células-tronco da polpa dental mostraram resultados semelhantes ao grupo que não recebeu tratamento do defeito periodontal. O segundo artigo sugeriu que estas células associadas a um biomaterial aumentaram a formação de cemento e ligamento periodontal enquanto não influenciaram a formação de osso alveolar. Conclusão: Devido aos diferentes desenhos metodológicos empregados nos estudos incluídos, não foi possível inferir que o uso de células-tronco da polpa dental seja vantajosa na regeneração periodontal. Pesquisas adicionais são necessárias para verificar o potencial destas células para a regeneração de defeitos periodontais.<br> / Abstract : Aim: To systematically review the literature for preclinical animal studies evaluating the potential of dental pulp stem cells transplantation on periodontal regeneration. Materials and Methods: Individual search strategies for each of the following bibliographic databases were developed: PubMed, LILACS, Scopus, Web of Science and gray literature using ProQuest. Inclusion criteria were animal studies that applied dental pulp stem cells into created periodontal defects for periodontal regeneration. Studies published in any language were considered. Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses guidelines were used and quality assessment was performed based on SYRCLE s risk of bias tool for animal studies. Results: Search identified 1,007 titles. After comprehensive screening, 2 articles were included. Outcome measures included alveolar bone, cementum and periodontal ligament formation. One study reported that dental pulp stem cells showed outcomes similar to the untreated group. The other research reported that these cells associated to a biomaterial enhanced cementum and periodontal ligament formation while not influenced the formation of alveolar bone. Conclusion: Due to different methodological designs of the included studies, it is not possible to infer that the use of dental pulp stem cells may be an advantage for periodontal regeneration. Additional research is needed to verify the potential of these cells for the regeneration of periodontal defects.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-15T19:13:01Z No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-05-18T16:33:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T16:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MaurícioGonçalvesdaCostaSousa.pdf: 3712664 bytes, checksum: 5241969273057f8bbafbab7a9b03bb79 (MD5) / Terapias regenerativas recentes como a revascularização pulpar vem ganhando espaço na endodontia em dentes permanentes imaturos. Porém o uso das medicações difundidas para técnica como a pasta dupla antibiótica (DAP) contendo metronidazol (MTZ) e ciprofloxaxino (CIP) ou tripla antibiótica (TAP) contendo CIP, MTZ e minociclina pode causar resistência, citotoxicidade e manchamento dentinário. Em contrapartida, peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) podem apresentar atividade antimicrobiana e imunomodulatória, surgindo como uma opção para a revascularização pulpar. Desta forma, este estudo objetivou avaliar o potencial antimicrobiano e imunomodulador de peptideos sintéticos (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 e LL-37), comparados à TAP e DAP em um modelo de infecção endodôntica in vitro. O estudo foi dividido em 3 etapas: (1) avaliação do potencial antimicrobiano dos fármacos de TAP e DAP (sozinhos ou em combinação) e dos PDHs contra as bactérias Staphylococcus aures (S.a.) e Enterococcus faecalis (E.f.) e o potencial sinérgico do CIP juntamente com IDR-1002; (2) comparação das concentrações encontradas neste estudo com as concentrações clínicas de TAP e DAP, através da viabilidade celular por MTT e produção de óxido nítrico (NO) pela reação de Griess, em linhagem de macrófagos RAW 264.7 e fibroblastos L929; (3) avaliação imunomodulatória, pela produção das citocinas IL-1α, IL-6, IL-12 e IL-10 e fator de necrose tumoral (TNF-α), por ELISA, além do NO em RAW 264.7 (RAW) e da IL-6 e NO em L929, com ou sem o recombinante de interferon gama (rIFN-γ) e antígenos mortos pelo calor (heat killed - HK)-S.a. ou HK-E.f. Na primeira etapa, o CIP se apresentou como o melhor antimicrobiano presente nas pastas e o IDR-1002, como o melhor PDH. Ademais, a combinação entre CIP e IDR-1002 apresentou ação sinérgica. A viabilidade celular não foi reduzida por nenhum dos grupos e TAP estimulou a produção de NO em RAW. Finalmente o PDH LL-37 reduziu significamente a viabilidade de células L929 e TAP, a viabilidade de RAW. Na ausência de estímulos antigênicos, TAP e DAP apresentaram um perfil pró-inflamatório na ausência dos estímulos antigênicos, aumentando na produção de IL-1α, TNF-α e IL-6 em células RAW e IL-6 em L929. Na adição dos estímulos antigênicos e rIFN-γ, as pastas apresentaram um perfil pró e anti-inflamatório: TAP reduziu a produção de IL-1α, IL-12 e IL-6 em RAW e aumentou TNF-α e NO, e a DAP reduziu a produção de IL-1α, IL-10 e IL-6 em RAW e aumentou IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 e a combinação de CIP com IDR-1002 apresentaram um perfil anti-inflamatório, reduzindo principalmente IL-6 e IL-12 na presença dos estímulos antigênicos e rIFN-γ. Em suma, a combinação sinérgica de CIP com IDR-1002 foi eficaz contra ambas bactérias e apresentou um papel anti-inflamatório neste modelo de infecção in vitro, podendo surgir como uma opção promissora para aplicações biotecnológicas envolvendo a revascularização pulpar. / Recent regenerative therapies such as pulpal revascularization have been diffused in endodontics in immature permanent teeth. However, the use of medications such as double antibiotic paste (DAP) containing metronidazole (MTZ) and ciprofloxaxin (CIP) or triple antibiotic paste (TAP) containing CIP, MTZ and minocycline may cause resistance, cytotoxicity and dentin discoloration. On the other hand, host defense peptides (HDPs) have antimicrobial and immunomodulatory effects, emerging as an option for pulpal revascularization. Thus, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial and immunomodulatory potential of synthetic peptides (DJK-6, IDR-1018, IDR-1002 and LL-37) compared to TAP and DAP, in an in vitro endodontic infection model. For this, the study was divided in three stages: (1) antimicrobial potential of TAP and DAP drugs (alone or in combination) and HDPs against the bacteria Staphylococcus aures (S.a.) and Enterococcus faecalis (E.f.) and the synergistic potential of CIP and IDR-1002; (2) comparison of the findings of this study with TAP and DAP clinical concentrations, through cell viability by MTT and nitric oxide (NO) production by the Griess reaction, in RAW 264.7 macrophages and L929 fibroblasts; (3) immunomodulatory stage, by the evaluation of cytokines by ELISA: IL-1α, IL-6, IL-12, IL-10 and tumor necrosis factor (TNF-α), as well as NO in RAW 264.7 (RAW) and IL-6 and NO, in L929 with or without the recombinant interferon gamma (rIFN-γ) and heat killed antigens HK-S.a. or HK-E.f. In the first stage, CIP presented the best antimicrobial activity comparing to TAP and DAP containing antibiotics and IDR-1002, the best HDP. In addition, the combination between CIP and IDR-1002 was synergistic. The viability was not reduced by any groups and TAP stimulated NO production in RAW cells. Finally, LL-37 significantly reduced the viability of L929 and TAP, the RAW viability. Without any antigenic stimuli, TAP and DAP presented a pro-inflammatory profile up regulating IL-1α, TNF-α and IL-6 in RAW and IL-6, in L929. However, the addition of antigenic stimuli and rIFN-γ, TAP and DAP presented pro and anti-inflammatory profile reducing IL-1α, IL-12 and IL-6 in RAW and increasing TNF-α and NO, and reducing IL-1α, IL-10 and IL-6 in RAW and increasing IL-12. CIP, LL-37, IDR-1002 and the combination of CIP with IDR-1002 showed an anti-inflammatory profile, mainly reducing IL-6 and IL-12 with antigenic and rIFN-γ stimuli. In conclusion, the synergistic combination of CIP with IDR-1002 was effective against both bacteria and presented an anti-inflammatory role in this in vitro infection model may emerge as a promising option for biotechnological applications involving pulp revascularization.

Orientador: Mario Tanomaru Filho / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Raquel Assed Bezerra da Silva / Resumo: Os objetivos deste estudo foram o isolamento e diferenciação de células da polpa (hDPCs) e do folículo (hDFCs) dentário de terceiros molares humanos e utilização para avaliação da citotoxicidade e bioatividade de novos cimentos endodônticos. (Capítulo 1) - Após a obtenção das culturas primárias foram realizados os ensaios vermelho de Alizarina, atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP). A expressão gênica de proteína morfogenética óssea (bmp7), sialofosfoproteína dentinária (dspp) e alp foi avaliada. Os ensaios de bioatividade demonstraram maior atividade para hDPCs, além de maior expressão de dspp e alp; a expressão de bmp7 foi semelhante nas duas linhagens. Conclui-se que hDPCs demonstram maior capacidade de diferenciação em células com potencial de mineralização, quando comparadas com hDFCs. (Capítulo 2) - Foram utilizadas linhagens primárias (hDPCs e hDFCs), em comparação com linhagens imortalizadas (células osteoblásticas humanas Saos-2, e do ligamento periodontal de ratos mPDL) para análise dos materiais: 1) Cimento Portland branco (CP); 2) MTA; 3) CP/ óxido de nióbio microparticulado (Nb2O5μ); 4) CP/ óxido de nióbio nanoparticulado (Nb2O5n). A citotoxicidade foi avaliada pelos ensaios MTT e Azul de Trypan e a bioatividade pela atividade da ALP. Viabilidade celular foi observada em todas as linhagens; e a atividade de ALP apresentou maior resposta na linhagem Saos-2. Conclui-se que as diferentes linhagens celulares são similares para avaliação da citotoxicidade; entretanto, para avaliação da bioatividade o uso de uma linhagem celular osteoblástica é mais indicado. Além disso, observa-se que materiais à base de Nb2O5μ e Nb2O5n mostram potencial como radiopacificador alternativo no MTA. / Abstract: The aims of this study were to isolate and differentiate pulp (hDPCs) and follicle (hDFCs) cells obtained from human third molars and to use them in cytotoxicity and bioactivity assays of new dental materials. (Chapter 1) - After obtaining the stem cultures, Alizarin Red, alkaline phosphatase (ALP) activity and gene expression by Real Time PCR of bone morphogenetic protein (BMP7), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and ALP were performed. The bioactivity asssays showed greater activity for hDPCs, and increased expression of dspp and alp; the expression of bmp7 was similar in both cell lines. We conclude that hDPCs demonstrate greater ability to differentiate into cells with mineralization potential when compared with hDFCs. (Chapter 2) - stem lineages (hDPCs and hDFCs) were used, compared to immortalized lineages (human osteoblastic cells Saos-2, and periodontal ligament of mice cells mPDL) for analysis of the following materials: 1) white Portland cement (PC); 2) MTA; 3) C/ microparticulated of niobium oxide (Nb2O5μ); 4) CP/nanoparticulated niobium oxide (Nb2O5n). Cytotoxicity was performed by MTT and Trypan Blue assays and bioactivity by ALP activity assay. Cell viability was observed in all cell lines, and ALP activity showed greater response in Saos-2. We conclude that the different cell lines are similar in cytotoxicity, however, to evaluate the bioactivity, using an osteoblastic cell line is more appropriate. Moreover, it is observed that materials based on Nb2O5μ and Nb2O5n show potential for alternative use to MTA. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-07-23T02:01:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459627-Texto+Completo-0.pdf: 7400131 bytes, checksum: 7fad83acbbcc467bba6b608474393763 (MD5) Previous issue date: 2014 / The dental pulp activates inflammatory and immunopathologic defenses owing to microorganisms. However, pulp tissue is confined by rigid walls and inflammation may perpetuate or extend pathologic alteration due to its own events. Within this context, the enzyme Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) is related to a chain of events that generate activated T cells, thus it becomes an interesting target for pulp inflammation control. Under these circumstances, the present study aimed to characterize the PNP enzyme in rat pulp tissue, by immunohistochemistry, as well as establish a correlation among the inflammatory events with the enzyme, by histologic methods. Eighteen animals were divided into 3 groups: group 1 (n=6) – no cavity opening was performed; group 2 (n=6) – pulp tissue exposure for 24 hour; group 3 (n=6) – pulp tissue exposure for 7 days. Qualitative analysis was applied for histologic observations, which has indicated the same intensity of inflammation for groups 2 and 3. However, in group 3, inflammation was further extended through the pulp. The main inflammatory cells observed were neutrophils, for both experimental periods. No pathologic alterations were shown for the control group. Immunolocalization detected the presence of PNP in endothelial cells of group 3 at the transition period from acute to chronic inflammation. No PNP basal expression was observed for the groups 1 and 2. In conclusion, PNP is activated in rat pulp tissue. Our findings show a novel endodontic target and contribute with ongoing and future endodontic scientific studies that aim drugs development for pulp damage control. / Dentre as funções do tecido pulpar, o papel de defesa contra as injúrias provocadas por microorganismos ocorre com o desenvolvimento dos processos inflamatório e imunológico. No entanto, a polpa encontra-se confinada por paredes rígidas e a inflamação pode perpetuar ou ampliar a alteração patológica em função de seus próprios eventos. Dentro deste contexto, a enzima Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNF) é um alvo interessante para o controle de inflamação pulpar, pois está relacionada a cascata de eventos que gera células T ativadas. Sendo assim, o presente estudo objetivou caracterizar a enzima PNF em tecido pulpar de ratos wistar, através de imunohistoquímica, bem como estabelecer correlação entre a presença da enzima PNF e os eventos inflamatórios observados por método histológico. Foram utilizados 18 animais divididos em 3 grupos: grupo 1 [n=6]: sem exposição pulpar; grupo 2 [n=6]: com exposição pulpar por 24h; grupo 3 [n=6]: com exposição pulpar por 7 dias. A análise qualitativa aplicada para o método histológico indicou maior extensão inflamatória para o grupo 3, sendo que a intensidade de inflamação permaneceu a mesma para os grupos 2 e 3. O principal tipo celular inflamatório encontrado foi o neutrófilo, para ambos períodos experimentais. O grupo controle não apresentou alterações patológicas. A imunolocalização detectou a presença da enzima PNF em células endoteliais no grupo 3. Não houve expressão basal da enzima nos grupos 1 e 2. Sendo assim, concluiu-se que há presença da enzima PNF no tecido pulpar já no evento de transição do período agudo para o período crônico. A partir deste achado, a enzima torna-se alvo interessante de estudos endodônticos futuros que elucidem seu o papel, objetivando assim, o desenvolvimento de fármacos que controlem o dano pulpar.

Orientador: Jose Merzel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T20:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_CarlosAlbertodeSouza_D.pdf: 2234718 bytes, checksum: 6c1ddc289ed7c1484e781f2d428e2831 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: o objetivo deste trabalho foi avaliar a compatibilidade biológica da resina resorcina-formaldeído quando aplicada diretamente sobre dentina. Trinta e seis premolares humanos íntegros, indicados para extração por motivos ortodônticos, foram divididos em três grupos: no grupo experimental, 22 cavidades classe V foram preparadas e forradas com a resina resorcina formaldeído; no grupo controle I, 8 cavidades foram forradas com cimento de hidróxido de cálcio. As cavidades destes dois grupos foram restauradas com amálgama. No grupo controle 11, 6 premolares foram mantidos íntegros. Os dentes foram extraídos após 7, 15, 30 e 120 dias da realização das restaurações e cortes histológicos foram preparados para avaliação em M.E.T.. Outros ainda, com 6 Ilm de espessura, foram corados com hematoxilina e eosina, tricrômico de Masson e pela técnica de Brown e Brenn para evidenciar bactérias. No grupo experimental, aos 7 dias, observou-se desarranjo da camada odontoblástica, aspiração de corpos celulares para o interior dos túbulos dentinários, degeneração hidrópica das células, hialinização do interstício, necrose e neutrófilos. Aos 15 e 30 dias, a intensidade das alterações pulpares diminuiu. Aos 120 dias, houve reparação pulpar, com deposição de dentina reacional. No grupo controle I, houve discreta alteração pulpar aos 7 dias, porém nos demais períodos o tecido pulpar exibia características normais, semelhante aos dentes não tratados do grupo controle 11. Não houve relação entre a irjfnsidade da reação pulpar com a espessura de dentina remanescente, nem com a presença de bactérias coradas nas paredes cavitárias ou no interior dos túbulos dentinários. A resina resorcina-formaldeído, usada como forrador cavitário, causou significante reação pulpar aos 7 e 15 dias. Novas pesquisas "in vivo" e "in vitro" devem ser realizadas para que seja avaliada a biocompatibilidade da resina quando aplicada. sobre variados substratos dentinários, permitindo determinar outras possíveis indicações de uso deste produto em teste / Abstract: The purpose of this investigation was to evaluate the biological compatibility of a resorcin-formaldehyde resin when applied directly on dentin cavity floor. Thirty six healthy human premolars due to be extracted for orthodontic reasons were selected for the study. This sample was divided into three groups: in experimental group, class V cavities were prepared, lined with resorcin formaldehyde resin; in control group I, the cavities were lined with calcium hydroxide cements. The cavities were restored with amalgam; in control group 11, the remaining 6 prelomars were used as a negative control, having no treatment. The teeth were extracted at 7, 15, 30 and 120 days afier the placement of restorations and sections were obtained, stained with haematoxylin and eosin, Masson's Trichrome, with the Brown and Brenn technique for the identification of bacteria. The specimens were evaluated in O.M. and T.E.M. and histological observations showed at 7 day for experimental group, odontoblastic disappearance with aspiration into dentinal tubules, hidropic degeneration cells, hyalin alteration, necrosis and neutrophils in the region. At 15 and 30 days was" determined that the intensity of the reactions decreased with time, so at 120 days was observed the pulpal healing with reactional dentinal deposition. For the control group I the histological observation showed slight pulpal reaction at 7 days but in the others periods the pulpal tissue exibed normal characteristics, similar the teeth no treated for control group 11. This study showed neither a potential relationship between the intensity of the reactions and the thickness of the residual dentin nor between the intensity of reactions and the presence of bacteria on the cavity walls or into the dentinal tubules. The resorcin-formaldehyde resin, used as cavity liner, showed a significant pulpal reaction at 7 and 15 days. So, more "in vivo" and "in vitro" studies should be made to observe pulp reactions when resin is applied on enamel or cement / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Ciências

A idéia de se proteger e manter a vitalidade pulpar não é recente. Vários materiais têm sido preconizados com tal finalidade, no entanto, nenhum ainda pode ser considerado o material ideal, por este motivo compreende-se a importância e o interesse sempre crescente pela evolução dos estudos em torno deste assunto. Levando-se em consideração alguns relatos sobre a semelhança de composição química entre o agregado trióxido mineral (MTA) e o cimento de Portland, foi objetivo deste estudo desenvolver novas estratégias de tratamento na terapia da polpa vital, analisando o comportamento da polpa dentária de dentes de cão após pulpotomia e proteção direta do remanescente pulpar com o MTA Ângelus, ProRoot MTA, cimento Portland e cimento Portland branco. Foram utilizados 76 dentes, divididos de maneira aleatória para cada material. Após o período de 120 dias os animais foram sacrificados, os espécimes removidos e preparados para análise histológica para verificação do reparo do complexo dentino-pulpar. Os resultados obtidos demonstraram que os efeitos sobre o complexo dentino-pulpar após pulpotomia em dentes de cães e recobrimento pulpar com ProRoot MTA, MTA Angelus, cimento Portland e cimento Portland branco foram semelhantes entre si, permitindo a neoformação de tecido mineralizado e a manutenção da vitalidade do tecido conjuntivo pulpar subjacente. / The success of the pulpotomy is related to preserving vitality and function of the dental pulp after complete removal of its coronary portion and protection of the radicular pulp. Several materials have been used with such purpose, however, none of them present all physical, chemical and biologic properties desired, thus stimulating a search for alternative materials. Considering some reports about the similarity in composition of the mineral trioxide aggregate (MTA) and Portland cement, the purpose of this study was to develop new treatment strategies in vital pulp therapy, analyzing the behavior of the dental pulp of dog’s teeth after pulpotomy and direct protection of the radicular pulp with MTA Angelus, ProRoot MTA, Portland cement and white Portland cement. Seventy six teeth were divided ramdomly for each material. After a period of 120 days the animals were sacrificed, the samples were removed and prepared for histologic evaluation to verify reparation of the dentin-pulp complex. The results demonstrated that the effects on the dentin-pulp complex after pulpotomy and pulp protection with ProRoot MTA, MTA Angelus, Portland cement and white Portland cement in dog’s teeeth were very similar, allowing formation of mineralized tissue and preservation of the vitality of the pulpal connective tissue below.

Este trabalho de pesquisa teve por objetivo avaliar histologicamente a resposta inflamatória da polpa dos primeiros molares inferiores de ratos Wistar após a realização de pulpotomia utilizando Agregado Trióxido Mineral (MTA) branco e Sulfato Férrico (SF) à 15,5% como materiais capeadores, nos períodos de 15 e 30 dias. Dezesseis ratos Wistar foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos experimentais (MTA e SF) e divididos novamente em dois subgrupos de acordo com o tempo experimental (15 e 30 dias). Após a eutanásia dos animais, os dentes foram removidos em bloco com osso circundante, preparados e corados com Hematoxilina e Eosina (HE) para a análise histológica. Apenas um dente do grupo SF 15 dias apresentou lesão periapical, todos os outros dentes mantiveram vitalidade com algum grau de inflamação no remanescente pulpar. O infiltrado inflamatório foi maior no período de 15 dias, havendo uma regressão no período de 30 dias em ambos os materiais testados e as características de normalidade histológica do remanescente pulpar dos dentes tratados com MTA foram superiores às dos dentes tratados com SF, que mostraram uma substituição de parte do tecido pulpar por coágulo e com remanescentes de tecido necrótico. Entretanto, nenhuma diferença estatisticamente foi encontrada entre os grupos. / This research aimed to evaluate histologically the inflammatory response at 15 and 30 days of Wistar rats mandibular first molars pulp after pulpotomy using white Mineral Trioxide Aggregate (MTA) and 15,5% Ferric Sulphate (FS) as capping materials. Sixteen male Wistar rats were randomly divided into two experimental groups (MTA and FS) and then divided into two subgroups according to the experimental period (15 and 30 days). After the euthanasia of the animals, the teeth were extracted in block with surrounding bone, prepared and stained with Hematoxylin and Eosin (HE) for histological analysis. Only one tooth of the SF 15 days group showed apical periodontitis, all other teeth kept their vitality with some degree of inflammation in the remaining pulp. The inflammatory infiltrates was higher in the 15 days period, there was a regression in the 30 days period at both tested materials and the histological normality of the remaining pulp were better on the teeth treated with MTA than on those treated with FS, wich showed a replacement of part of the pulp tissue for blood clot and remaining of necrotic tissue. However, no statistically difference was found between the groups. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by MARIA LUISA DE ALENCAR E SILVA LEITE null (marialuisa_asl@hotmail.com) on 2017-03-17T12:03:46Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maria Luisa (BIBLIOTECA 14.03.2017 - FINAL).pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-21T19:05:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leite_mlas_me_arafo.pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T19:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leite_mlas_me_arafo.pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar se o pré-tratamento da dentina com sinvastatina (SV) antes de aplicar o cimento de inômero de vidro (CIV) permitiria a difusão transdentinária desta droga em concentrações capazes de promover aumento da capacidade de células odontoblastóides em depositar e mineralizar matriz de dentina. No Estudo 1, foram determinadas concentrações de sinvastatina que fossem bioativas e citocompatíveis quando em contato com células odotoblastóides MDPC-23. Duas concentrações (0,01 e 0,1 μM) e três tempos de tratamento (24 h, 72 h e contínuo – até 14 dias) foram avaliados. No Estudo 2, diante da confirmação da hipótese da difusão transdentinária da SV por análise em cromatografia liquida em espectro de massa (LC-MS/MS), concentrações de 2,5 e 1,0 mg/mL foram selecionadas para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células odontoblastóides MDPC-23 após pré-tratamento ou não da superfície dentinária com EDTA. Também nesse estudo foi avaliada a ação antimicrobiana (teste de disco-difusão) das concentrações de 2,5 e 1,0 mg/ml de SV sobre Streptococcus mutans e Lactobacillus acidophilus. No Estudo 3, a concentração que apresentou os melhores resultados no estudo anterior foi selecionada para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células MDPC-23 associado ao protocolo de forramento cavitário com Ketac Molar (3M ESPE). Nos estudos que avaliaram o efeito bioativo da SV foram analisados os seguintes parâmetros celulares: viabilidade celular (MTT), atividade de ALP (timolftaleína monofosfato) e deposição de matriz mineralizada (alizarin red) (n = 6). A concentração de 2,5 mg/ml de SV também foi selecionada para avaliação da resistência de união ao microcisalhamento do CIV Ketac Molar à dentina, aplicando-a sobre a dentina pré-tratada ou não com EDTA. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey (p < 0,05). Os resultados do Estudo 1 demonstraram que baixas concentrações de SV em curto período de tratamento apresentaram efeito bioativo e citocompatível sobre células odontoblastóides MDPC-23. Em sequência, os estudos transdentinários demonstraram aumento na atividade de ALP e na deposição de matriz mineralizada quando a dentina foi tratada com SV; no entanto, apenas a SV 2,5 mg/mL, associada ou não ao EDTA, resultou em valores significativamente superiores ao controle negativo, para ambos os parâmetros testados. Desta forma, a concentração de 2,5 mg/mL de SV foi selecionada para realização dos experimentos subsequentes, onde foi possível observar que o forramento da dentina com CIV, realizado após tratamento do substrato com EDTA e SV apresentou a melhor resposta quanto a expressão dos marcadores fenotípicos testados. De modo complementar, observou-se ação antimicrobiana da SV nas concentrações testadas contra as linhagens avaliadas e que o pré-tramento da dentina com EDTA previamente a aplicação da SV resultou em valores de resistência de união significativamente superiores comparado ao tratamento isolado com SV. Assim, conclui-se que o tratamento da dentina com SV previamente ao forramento do substrato com CIV é capaz de aumentar a capacidade de células odontoblastóides em depositar matriz mineralizada rica em cálcio. / The aim of the present study was to determine whether the treatment of dentin with simvastatin (SV) before application of glass-ionomer cement (GIC), allows transdentinal diffusion of this drug at bioactive concentration capable of increasing the potential of odontoblast-like cells to deposit and mineralize dentin matrix. In the 1st study, the dose-response and time-course of SV were determined for the odontoblast-like MDPC-23 cells. Two concentrations (0.01 and 0.1 μM) of SV and three treatment times (24 h, 72 h and continuous – up to 14 days) were evaluated. In the 2nd study, the SV transdentinal diffusion hypothesis was confirmed by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS / MS). Then, concentrations of 2.5 and 1.0 mg/ml were selected to evaluate the transdentinal bioactivity of this drug with MDPC-23 cells, when dentin was treated or not with EDTA. Also in this study the antimicrobial activity (disc diffusion assay) of 2.5 and 1.0 mg/ml SV against Streptococcus mutans and Lactobacillus acidophilus was evaluated. In the 3rd study, the 2.5 mg/mL SV was selected to analyze the bioactivity of dentin treatment with SV followed by lining with Ketac Molar (3M ESPE). In all the studies, the following cell parameters were analyzed: cell viability (MTT), ALP activity (thymolphthalein monophosphate) and mineralized matrix deposition (alizarin red) (n=6). The concentration of 2.5 mg/ml SV was selected to evaluate dentin microshear-bond strength of GIC Ketac Molar when applied on dentin conditioned or not with EDTA. Data were submitted to ANOVA and Tukey test’s (p<0.05). The results of the 1st study demonstrated that exposing MDPC-23 to low concentrations of SV during short periods of time resulted in a bioactive effect associated with no toxicity to cultured cells. In the transdentinal study, it was detected an increase on ALP activity and mineralized matrix deposition when dentin was treated with SV; however, only SV 2.5 mg/ml, associated or not to EDTA, resulted in values significantly higher than negative control for both cell parameters. Finally, it was observed that lining dentin with GIC associated with pre-treatment with EDTA and SV 2.5 mg/ml resulted in the best cell responses regarding the expression of odontoblastic phenotypic markers. In addition, SV featured antimicrobial activity at both tested concentrations against the bacterial strains evaluated. Finally, pre-treatment of dentin with EDTA + SV resulted in significantly higher bond strength values compared to SV treatment. Therefore, based upon the methodology employed in the present in vitro, it was possible to concluded that the treatment of dentin substrate with a specific concentration of simvastatin before application of glass-ionomer cement enhances the capability of odontoblast-like cells to deposit calcium-rich mineralized matrix / CNPq: 131183/2015-0 / FAPESP: 2015/15635-7

Orientador: Clóvis Pagani / Coorientadora: Márcia Carneiro Valera / Texto completo disponível em: http://www.dominiopublico.gov.br/pesquisa/DetalheObraForm.do?select_action=&co_obra=99401 / Doutor

Orientador: Josimeri Hebling / Banca: Pedro Paulo Chaves de Souza / Banca: Adriano Fonseca de Lima / Resumo: Objetivo: Avaliar o efeito do LED infravermelho (855 nm), aplicado em diferentes doses de energia, na produção e expressão de mediadores inflamatórios por células pulpares humanas (HDPC) em cultura. Metodologia: HDPC obtidas de dentes decíduos foram semeadas (105 células/well) e após 24 h foram colocadas em contato com LPS (10 μg/mL α-MEM) ou TNF-α (25 ng/mL α-MEM). Em seguida, as células foram submetidas a uma única irradiação com LED infravermelho (855 nm) nas diferentes doses de energia: 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2. Gupos não irradiados, com e sem LPS/TNF-α, serviram como controles. Decorridas 24 h, as células estimuladas com LPS foram avaliadas quanto à produção de óxido nítrico (NO), de espécies reativas de oxigênio (EROs) e viabilidade celular (ensaio de MTT) (n=8 por grupo). As células estimuladas com TNF-α foram avaliadas quanto à produção de citocinas pelos métodos de antibody array e q-PCR (n=5 por grupo). Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α=0,05). Resultados: O contato com LPS resultou em aumento significativo da produção de NO sem causar qualquer dano ao metabolismo respiratório das células. Independentemente da dose de energia aplicada, a produção de NO foi significativamente reduzida quando as células foram irradiadas. O melhor efeito foi observado para a dose de 15 J/cm2. A irradiação também promoveu uma diminuição na produção de EROs, enquanto o metabolismo das HDPC não foi alterado. Nas células em contato com TNF-α verificou-se que as citocinas mais produzidas foram: GROα, IL-6, IL-8, TNF-α, MCP-1 e Serpin E1. Na análise por q-PCR redução foi observada para a expressão de IL-1 β, quando as células foram irradiadas com 4 J/cm2. Conclusão: O estresse oxidativo de HDPC pode ser biomodulado por uma única dose de irradiação com LED infravermelho. Quanto a expressão de citocinas inflamatórias... / Abstract: Aim: To investigate the effect of infrared light emitting diode (LED) irradiation (855nm), at different energy doses, on the production and expression of inflammatory mediators by cultured human dental pulp cells (HDPC). Methodology: HDPC were harvested from sound, near-exfoliation primary teeth. Cells were seeded (105 cells/well) using α-MEM supplemented with 10% FBS and after 24h, were exposed to LPS (10 μg/mL α-MEM) or TNF-α (25ng/mL α- MEM). Then, HDPC were submitted to a single irradiation with an infrared LED (855 nm) delivering different doses of energy: 0, 2, 4, 8, 15 or 30 J/cm2. Nonirradiated cells, with and without LPS/TNF-α, served as controls. Followed 24h, the cells stimulated with LPS were tested for nitric oxide (NO) quantification, cell viability (MTT assay), and reactive oxygen species (ROS) production (n=8 per group). Cells stimulated with TNF-α were analyzed regarding cytokine production and expression using antibody array and q-PCR (n=5 per group). Data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (α=0.05). Results: LPSinduced stress resulted in significant increase in NO production by HDPC without causing any damage to cell respiratory metabolism. Irrespective of the energy dose delivered, NO production was significantly reduced when LPS-stressed cells were irradiated. The best effect was observed when 15 J/cm2 were delivered to cells. Infrared LED irradiation also promoted decrease in ROS production, while HDPC metabolism was not significantly affected. The most produced cytokines in cells stimulated with TNF-α were: GROα, IL-6, IL-8, TNF α, MCP-1 and E1 Serpin. qPCR analysis showed a decrease in expression of IL- 1 β when the cells were irradiated with the dose of 4 J/cm2. Conclusion: The oxidative stress of HDPC can be biomodulated by a single irradiation of an infrared LED. Regarding the expression of inflammatory cytokines, the delivery of 4 J/cm2 was... / Mestre