Eva Tsui Yuen. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 1995. / Includes bibliographical references (leaves 124-140). / SUMMARY / ACKNOWLEDGEMENT / Chapter CHAPTER I --- INTRODUCTION --- p.1 / Chapter CHAPTER II --- LITERATURE REVIEWS --- p.5 / Chapter 2.1 --- Anatomy and Histology of Uterine Cervix --- p.6 / Chapter 2.2 --- Premalignant and Malignant Lesions of Uterine Cervix --- p.9 / Chapter 2.2.1 --- Incidence --- p.9 / Chapter 2.2.2 --- Etiological Factors --- p.10 / Chapter 2.2.3 --- Classification and Histopathology --- p.13 / Chapter A. --- Condyloma --- p.13 / Chapter B. --- Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) --- p.16 / Chapter C. --- Microinvasive Squamous Cell Carcinoma --- p.19 / Chapter D. --- Invasive Squamous Cell Carcinoma --- p.22 / Chapter E. --- Adenosquamous Carcinoma --- p.25 / Chapter F. --- Adenocarcinoma --- p.26 / Chapter 2.3 --- Human Papillomavirus (HPV) --- p.28 / Chapter 2.3.1 --- Organization of the Viral Genome --- p.28 / Chapter 2.3.2 --- Classification --- p.35 / Chapter 2.4 --- The Impact of Human Papillomavirus (HPV)in Premalignant and Malignant Lesions of Uterine Cervix --- p.35 / Chapter 2.5 --- Cervical Screening --- p.40 / Chapter 2.5.1 --- Cervical Smear --- p.40 / Chapter 2.5.2 --- Cervicography --- p.41 / Chapter 2.5.3 --- HPV Detection --- p.43 / Chapter CHAPTER III --- MATERIALS AND METHODS --- p.54 / Chapter 3.1 --- Study Population --- p.55 / Chapter 3.2 --- Specimen Collection --- p.56 / Chapter 3.3 --- Extraction of Genomic DNA --- p.56 / Chapter 3.4 --- Polymerase Chain Reaction (PCR) --- p.60 / Chapter 3.4.1 --- Oligonucleotide Primers and Positive Controls --- p.60 / Chapter 3.4.2 --- Polymerase Chain Reaction Procedure --- p.62 / Chapter A. --- PCR Optimization --- p.62 / Chapter B. --- Multiplex PCR --- p.63 / Chapter C. --- Single Primer PCR --- p.64 / Chapter 3.4.3 --- Gel Electrophoresis --- p.65 / Chapter 3.5 --- Southern-blot and Hybridization --- p.69 / Chapter 3.5.1 --- Southern-blot --- p.69 / Chapter 3.5.2 --- Nucleic Acid Hybridization --- p.71 / Chapter A. --- Oligonucleotide Probes --- p.71 / Chapter B. --- Radioactive Labelling of Probes --- p.73 / Chapter C. --- Hybridization --- p.74 / Chapter D. --- Removal of Labelled Probes --- p.77 / Chapter CHAPTER IV --- RESULTS --- p.78 / Chapter 4.1 --- Cytological Findings of Cervical Scrapes --- p.79 / Chapter 4.1.1 --- Colposcopy Group --- p.79 / Chapter 4.1.2 --- General Gynaecology Group --- p.81 / Chapter 4.1.3 --- Antenatal Group --- p.81 / Chapter 4.2 --- PCR Optimization --- p.84 / Chapter 4.3 --- Detection of HPV DNA by Multiplex PCR --- p.86 / Chapter 4.3.1 --- Colposcopy Group --- p.86 / Chapter 4.3.2 --- General Gynaecology Group --- p.89 / Chapter 4.3.3 --- Antenatal Group --- p.91 / Chapter 4.4 --- Detection of HPV DNA by Southern-blot Hybridization --- p.91 / Chapter 4.5 --- Detection of HPV DNA by Single Primer PCR --- p.104 / Chapter CHAPTER V --- DISCUSSION --- p.110 / Chapter CHAPTER VI --- CONCLUSION --- p.121 / REFERENCES --- p.124

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-08-21T20:57:06Z No. of bitstreams: 1 VicenilmaMartins.pdf: 7618309 bytes, checksum: 3d94fb00454be15b5872822df938424e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T20:57:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VicenilmaMartins.pdf: 7618309 bytes, checksum: 3d94fb00454be15b5872822df938424e (MD5) Previous issue date: 2017-04-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Infection by HPV is described in the literature in 30-50% of cases of penile cancer. The immunohistochemical of p16INK4a is used as an indication of the presence of HPV and prognostic marker for squamous carcinomas various sites. However, its role in penile carcinoma has not yet been completely elucidated. The aim of the study was to prospectively analyze whether the expression of p16INK4a is associated with the presence of HPV and histological parameters in penile cancer. A prospective study was conducted in the period 2014 to 2016 with 55 cases of patients with penile carcinoma. HPV DNA was detected by PCR in fresh tumor tissue and immunohistochemistry for analysis of p16INK4a protein in paraffin waxed tissue. The evaluation of histological parameters was performed after total inclusion of the tumor tissue. HPV DNA (lowrisk and high-risk genotypes) was found in 49 (89.1%) cases, 46 (83.6%) HR-HPV. Of the 22 p16INK4a positive cases, HR-HPV DNA was present in 21 (95.5%) of them (p = 0.032). Regarding histological parameters, p16INK4a and HR-HPV were significantly associated only with the tumor subtype (p = 0.036 and p = 0.032, respectively), being that, all carcinomas with basaloid characteristics were positive p16INK4a. Using a fresh tissue sample, our sample showed the highest incidence of HPV in the literature. Expression of the p16INK4a protein was significantly associated with the presence of high oncogenic HPV virus and may serve as a marker for the presence of this virus. The p16INK4a protein was not associated with the histological prognostic parameters, except for the tumor subtype. / A infecção pelo HPV é descrita na literatura em 30-50% dos casos de câncer de pênis. A expressão imunohistoquímica de p16INK4a é utilizada como indicativo da presença de HPV e marcador prognostico para carcinomas escamosos de vários sítios. No entanto, seu papel no carcinoma de pênis ainda não está totalmente elucidado. O objetivo do estudo foi analisar, de forma prospectiva, se a expressão de p16INK4a está associada a presença de HPV e parâmetros histológicos no câncer de pênis. Estudo prospectivo realizado no período de 2014 a 2016 com 55 casos de pacientes com carcinoma pênis. Foi realizada a detecção do DNA HPV por PCR em tecido tumoral a fresco e a imunohistoquímica para análise da proteína p16INK4a em tecido parafinado. A avaliação de parâmetros histológicos foi realizada após inclusão total do tecido tumoral. O DNA HPV (genótipos de baixo risco e alto risco) foi encontrado em 49 (89,1%) casos, sendo 46 (83,6%) HRHPV. Dos 22 casos p16INK4a positivo, o DNA HR-HPV esteve presente em 21 (95,5%) deles (p = 0,032). Em relação a parâmetros histológicos, a p16INK4a e o HR-HPV foram significativamente associados apenas ao subtipo do tumor (p = 0,036 e p=0,032, respectivamente), sendo que todos os carcinomas com características basalóides foram p16INK4a positivo. Utilizando amostra de tecido a fresco, a nossa casuística mostrou a mais alta incidência de HPV da literatura. A expressão da proteína p16INK4a foi significativamente associada à presença do vírus HPV de alto risco oncogênico e pode servir como marcador da presença desse vírus. A proteína p16INK4a não foi associada aos parâmetros prognósticos histológicos, exceto ao subtipo do tumor.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-16Bitstream added on 2015-03-03T12:06:21Z : No. of bitstreams: 1 000796740_20150816.pdf: 172709 bytes, checksum: b001c55e421df1956ff1a03e9c959c90 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-17T11:07:04Z: 000796740_20150816.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-17T11:07:53Z : No. of bitstreams: 1 000796740.pdf: 844755 bytes, checksum: 57dac5aa0fed7a3e3886e9c2d4b0f257 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leucoplasia bucal é considerada uma lesão cancerizável para o desenvolvimento do carcinoma espinocelular (CEC), e vários fatores de risco podem estar relacionados a essa carcinogênese, incluindo o papiloma vírus humano (HPV). Na mucosa bucal tem sido feita a associação da leucoplasia bucal com o HPV. O objetivo desse estudo foi detectar a presença do DNA do HPV em amostras de tecidos fresco, saliva, plasma e células exfoliadas orais, extraídas de pacientes com e sem leucoplasia bucal, analisadas através da técnica de nested PCR (nPCR). Para este estudo foram avaliados 32 pacientes portadores de leucoplasia bucal e 24 pacientes selecionados de forma caso-controle. Foi realizada a extração de DNA das amostras, e em seguida a sua amplificação através da PCR. A nPCR para detecção do HPV revelou a presença do vírus em 68,75% das amostras de tecido fresco, 50% no plasma, 28,1% no citobrush, 62,5% na saliva no grupo de pacientes com leucoplasia em comparação com 45,8%, 54,2%, 45,8%, 50% nas amostras de tecido fresco, plasma, citobrush e saliva do grupo controle respectivamente. Baseado no presente estudo o HPV poderia ser um co-fator etiológico na patogênese da leucoplasia oral. / The oral leukoplakia is considered as a pre-malignant lesion for the development of the oral squamous cell carcinoma, and several risk factors can be related to this carcinogenesis, including the human papillomavirus (HPV). HPV is the main cause of cervix cancer, and your role in the oral carcinogenesis is still controversial. The aims of this study was to detect the presence of HPV DNA in fresh tissue samples, plasma and oral exfoliated cells extracted from patients 32 with oral leukoplakia, and 24 controls analyzed through the technique of nPCR and make a comparison among these biological materials sources. It was performed the extraction of DNA from 37 patients with oral leukoplakia, and amplification of the human ?-globin gene was carried out in all samples to confirm the presence and integrity of DNA. Nested PCR assays revealed the presence of HPV DNA in 68.75% of fresh tissue, 50.0% of plasma, 62.5% of saliva, and in 28.1% of oral exfoliated cells extracted from patients. Based on the current experiment, HPV could potentially be an etiologic co-factor in the pathogenesis of oral leukoplakia. / FAPESP: 11/17791-5 / FAPESP: 11/05499-8

CARVALHO, A. Z. F. H. T. Estudo socioepidemiológico, clínico e de genotipagem do papilomavírus humano em mulheres com HIV/AIDS. 2016. 118 f. Tese (Doutorado em Enfermagem) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-20T15:30:12Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_azfhtcarvalho.pdf: 1355980 bytes, checksum: 8fc4b31f6421e7b4035362cfaeb1d1b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-20T15:30:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_azfhtcarvalho.pdf: 1355980 bytes, checksum: 8fc4b31f6421e7b4035362cfaeb1d1b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T15:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_azfhtcarvalho.pdf: 1355980 bytes, checksum: 8fc4b31f6421e7b4035362cfaeb1d1b5 (MD5) Previous issue date: 2016-12-23 / This study determined the cases of Human Papillomavirus (HPV) among women living with HIV / AIDS, as well as investigated the HPV genotypes present in the cervical mucosa of these women. A cross-sectional, descriptive study developed at the Meireles School Health Center with 50 women living with HIV / AIDS treated at the center, as well as those from other services to perform the uterine cervical cancer screening test. The data were collected through an interview that investigated epidemiological variables, sexual behavior and gynecological prevention, ectocervical and endocervical cytopathological data collection for the evaluation of Papanicolau and Molecular Test of Polymerase Chain Reaction (PCR) in order to identify fragments of viral DNA in the Nucleus and / or cytoplasm of infected cells. Descriptive analyzes were used for the analyzes through the frequency distributions (uni and bivariate) and descriptive measures (means, standard deviation and / or medians). To identify the factors associated with changes in precursor lesions of the cervix, tables of association between the dependent variable in question and the other independent variables were elaborated. Associations were checked by chi-square or Fisher exact test, when necessary. Odds Ratio (OR) and respective confidence intervals (95% CI) were determined to expose the strength of the association with the outcome. In all tests, a significance level of 0.05 (5%) was adopted, and a P value <0.05 was considered statistically significant. In the results, the majority of the women were aged ≥ 40 years (62.0%), average of eight years of study (62.0%), browns (52.0%), unemployed (74.0%), Of a minimum wage (74.0%), did not live with their partner (54.0%) and had children (78.0%). There was a predominance of the category of sexual exposure (92.0%) as a mode of HIV acquisition, heterosexual (92.0%), HIV diagnosis time in five years (46.0%), CD4 + (74.0%) and viral load lower than 50 copies / ml (94.0%) and the use of licit drugs such as alcohol and tobacco (66.0%). About preventive measures against cervical cancer most performed the exam at least once throughout life and the minority were immunized against HPV. Cytopathological results indicated that a significant percentage (66.0%) presented a positive result for the schiller test and some type of inflammation between mild, moderate and marked (90.0%). Three women (6.0%) had HPV test results and low grade intraepithelial lesion and one (2.0%) high grade intraepithelial lesion. There was a statistically significant association between the age of Coitarca and history of STI and between atypias of squamous cells and the use of condoms. Of the 50 women with HIV / AIDS who composed the sample, 44 were tested for HPV, identifying a negative HPV result in 30 (68.0%) women and a positive result in 14 (32.0%). Of the 14 women with a positive HPV test, 12 (86.0%) had subgroup A types considered high oncogenic risk, one (7.0%) presented only type 16 and one (7.0%) presented Type 16 and associated subgroup A. Four (100%) women identified with cervical intraepithelial lesions (ILE) also had HPV, three (6.0%) of them with low-grade cervical LV and high-risk HPV and one (2.0%) with High-grade cervical LIE and HPV 16. It is concluded that women with HIV are vulnerable to cytological alterations, among them cervical intraepithelial lesions and because they present HPV and among them oncogenic subtypes, it is demonstrated that women living with HIV / AIDS of the sample studied are at risk for the development of cervical cancer. / Esta pesquisa determinou os casos de Papilomavírus Humano (HPV) entre mulheres que vivem com HIV/aids, bem como investigou os genótipos de HPV presentes na mucosa cervical destas mulheres. Estudo transversal, descritivo desenvolvido no Centro de Saúde Escola Meireles com 50 mulheres que vivem com o HIV/aids atendidas no referido centro, bem como aquelas advindas de outros serviços para realização do exame de prevenção de câncer cérvico uterino. Os dados foram coletados mediante entrevista que investigou variáveis epidemiológicas, de comportamento sexual e prevenção ginecológica, coleta Citopatológica do raspado ectocervical e endocervical para avaliação de Papanicolau e Teste molecular de Reação Cadeia Polimerase (PCR) com o intuito de identificar fragmentos de DNA-viral no núcleo e/ou citoplasma de células infectadas. Para análises utilizaram-se análises descritivas mediante as distribuições de frequências (uni e bivariada) e medidas descritivas (médias, desvio padrão e/ou medianas). Para identificar os fatores associados às alterações das lesões precursoras do colo uterino, foram elaboradas tabelas de associação entre a variável dependente em questão e as demais variáveis independentes. As associações foram verificadas por meio do teste qui-quadrado ou exato de Fisher, quando necessário. Foram determinadas as Odds Ratio (OR) e respectivos intervalos de confiança (IC95%) para expor a força da associação com o desfecho. Em todos os testes foi adotado o nível de significância de 0,05 (5%), sendo considerado estatisticamente significante um valor P < 0,05. Nos resultados a maioria das mulheres tinham idade ≥ 40 anos (62,0%), média de oito anos de estudo (62,0%), pardas (52,0%), desempregadas (74,0%), renda média familiar de um salário mínimo (74,0%), não viviam com o companheiro (54,0%) e possuíam filhos (78,0%). Houve predomínio da categoria de exposição sexual (92,0%) como modo de aquisição do HIV, heterossexuais (92,0%), tempo de diagnóstico do HIV em média de cinco anos (46,0%), contagem de linfócitos T CD4+ superior a 500 células/mm³ (74,0%) e carga viral inferior a 50 cópias/ml (94,0%) e o uso de drogas lícitas como álcool e tabaco (66,0%). Acerca de medidas preventivas contra o câncer de colo do útero a maioria realizou o exame pelo menos uma vez ao longo da vida e a minoria foram imunizadas contra o HPV. Os resultados citopatológicos apontaram que uma parcela significativa (66,0%) apresentou resultado positivo para o teste de schiller e algum tipo de inflamação entre leve, moderada e acentuada (90,0%). Três mulheres (6,0%) tiveram resultados de exames indicando HPV e lesão intraepitelial de baixo grau e um (2,0%) lesão intraepitelial de alto grau. Houve associação estatisticamente significante entre a idade da Coitarca e histórico de IST e entre atipias de células escamosas e o uso de preservativo. Das 50 mulheres com HIV/aids que compuseram a amostra, 44 foram testadas para o HPV, identificando-se resultado negativo de HPV em 30 (68,0%) mulheres e positivo em 14 (32,0%). Das 14 mulheres com teste positivo para o HPV, 12 (86,0%) apresentaram os tipos do subgrupo A considerados de alto risco oncogênico, uma (7,0%) apresentou apenas o tipo 16 e uma (7,0%) o tipo 16 e o subgrupo A associados. Quatro (100%) mulheres identificadas com Lesões Intraepiteliais (LIE) cervical, também apresentavam o HPV, sendo três (6,0%) delas com resultado LIE cervical de baixo grau e HPV de alto risco e uma (2,0%) com LIE cervical de alto grau e HPV 16. Conclui-se que as mulheres com HIV são vulneráveis a alterações citológicas, dentre estas as Lesões Intraepiteliais cervicais, e por apresentarem HPV e entre eles subtipos oncogênicos, demonstra-se que as mulheres vivendo com HIV/aids da amostra estudada possuem risco para o desenvolvimento do câncer do colo do útero.

Orientador: Carla Raquel Fontana / Coorientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Kleber Thiago de Oliveira / Resumo: O câncer de colo uterino (ou câncer cervical) é uma neoplasia maligna que tem a infecção pelo HPV como o principal fator de risco para o seu surgimento. As terapias atuais para o tratamento do câncer cervical têm como maior desvantagem a excisão substancial do estroma cervical e muitos efeitos adversos associados aos quimioterápicos, principalmente a cisplatina. Nesse cenário, a terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando uma alternativa promissora, especialmente se combinada a tratamentos convencionais. A técnica é baseada na administração de um agente fotossensibilizador não tóxico ao paciente com posterior exposição a uma fonte de luz de comprimento de onda específico, resultando em resposta citotóxica via dano oxidativo. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade, o tipo de morte induzido e os efeitos genotóxicos e mutagênicos da TFD em monoterapia e associada à cisplatina sobre as linhagens SiHa, C-33 A e HaCaT, utilizando os fotossensibilizadores Photogem e azul de metileno. Observou-se que tanto a terapia fotodinâmica mediada por azul de metileno (AMTFD) quanto a terapia mediada pelo Photogem (PGTFD) foram eficazes em reduzir o número de células viáveis, com a citotoxicidade sendo dependente da dose de luz. A cisplatina teve menor eficácia sobre as três linhagens quando comparada à TFD. Porém, a combinação cisplatina + TFD apresentou efeito sinérgico intenso e provocou maior morte celular em todas as condições testadas. A sequência de aplicação dos tratamentos (cisplatina + TFD ou TFD + cisplatina) demonstrou-se importante e dependente do fotossensibilizador. Com relação ao tipo de morte celular provocado, tanto a AMTFD quanto a PGTFD induziram morte independente de caspases, mas a AMTFD induziu morfologia típica de necrose, enquanto a PGTFD induziu morfologia mais similar à apoptose. A cisplatina induziu predominantemente apoptose e as terapias... / Abstract: Cervical cancer is a malignant tumor that has HPV infection as the main risk factor for its emergence. Current therapies for the treatment of cervical cancer have as major disadvantage substantial excision of cervical stroma and many adverse effects associated with chemotherapy, especially cisplatin. In this scenario, photodynamic therapy (PDT) has proven to be a promising alternative, specially if combined with conventional treatments. The technique is based on the administration of a non-toxic photosensitizing agent to the patient with subsequent exposure to a light source of a specific wavelength, resulting in cytotoxic response by oxidative damage. Thus, the present study intended to evaluate in vitro cytotoxicity, the type of induced death and the genotoxic and mutagenic effects of PDT alone and associated with cisplatin on the cell lines SiHa, C-33 A and HaCaT, using the photosensitizers Photogem and methylene blue. It was observed that both the photodynamic therapy mediated by methylene blue (MBPDT) and Photogem mediated therapy (PGPDT) were effective in reducing cell viability with cytotoxicity being dependent on the light dose. Cisplatin was less effective over the three lines compared to PDT. However, the combination cisplatin + PDT had a greater synergistic effect and caused greater cell death in all conditions tested. The sequence of treatment application (PDT + cisplatin or cisplatin + PDT) was important and depended on the photosensitizer. Regarding the type of induced cell death, both AMPDT and PGPDT induced caspase-independent death, but AMPDT induced the typical morphology of necrosis, while PGPDT induced morphology was most similar to apoptosis. Cisplatin predominantly induced apoptosis; and combination therapy induced greater apoptosis- or necrosis-like rate according to the cell line, but always with a higher percentage of dead cells than monotherapies. MBPDT, either as monotherapy or in combination with cisplatin was ... / Mestre

Banca: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Fábio de Abreu Alves / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Luiz Paulo Kowalski / Banca: Márcio Ajudarte Lopes / Resumo: O objetivo desta tese foi reunir os resultados de estudos clínicos, imunohistoquímicos e moleculares que investigaram o perfil demográfico e a etiopatogenia do carcinoma de células escamosas primário (CEC) de boca em pacientes jovens (com idade ≤40 anos). Além disso, a data do tratamento primário foram próximas. Inicialmente, foi realizado um levantamento epidemiológico através dos prontuários dos pacientes atendidos no ambulatório de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do AC Camargo Cancer Center. Foram encontrados 125 pacientes jovens (grupo teste) que foram pareados com 250 pacientes com idade ≥50 anos (grupo controle) que apresentaram tumores em topografia, estadiamento clínico e época de tratamento similares. Em ambos os grupos, a o sexo masculino foi o mais afetado, sendo a língua seguida do soalho bucal os locais acometidos. Tumores em estadios clínicos avançados e bem difernciados foram características mais frequente. Interessantemente, o grupo jovem foi menos exposto ao tabaco (p=0.04). Este grupo apresentou mais recorrências (p=0.02), embora não se tenha observado diferenças nas curvas de sobrevidas global (SG) (p=0.86) e livre de doença (SLD) entre os grupos avaliados. Linfonodos comprometidos, tumores avançados, pobremente diferenciados e a radioterapia como tratamento primário exclusivo diminuíram a SLD. A SG foi melhor nas mulheres, não usuárias de tabaco, lesões localizados em gengiva/palato duro e em estadios clínicos precoce. À partir deste levantamento, foi possível realizar os trabalhos subsequentes. No capítulo 3.2, foi realizado investigação da amplificação do CCND1 e expressão protéica da ciclina D1 em CEC de jovens e resultados encontrados foram comparados ao grupo controle. A superexpressão protéica foi observada em 47.7% vs 32.8% (p=0.03) e amplificação foi encontrada em 46.2% vs 18.6% (p<0.01). No grupo jovem, a superexpressão foi correlacionada com diminuição da SG, embora a... / Abstract: The objective of this thesis was to compile results of clinical, immunohistochemical and molecular studies on the demographics and etiopathogeny of primary oral squamous cell carcinoma (SCC) in young people (aged 40 years or younger). Initially, we carried out an epidemiological survey using medical records from patients treated at the ambulatory care unit of the Head and Neck Surgery Department of AC Camargo Cancer Center. We found 125 young patients (test group), who were then matched to 250 patients aged 50 years or older (control group), having tumors of similar topographies, clinical stages, and dates of treatment. Men were the most affected in both groups, being the tongue and the floor of the mouth the most affected regions. Tumors in advanced clinical stages and well differentiated were the most frequent types. Interestingly, the young group was less exposed to tobacco (p=0.04). Although this group showed higher relapse rates (p=0.02), no differences were found between the groups studied in terms of their Overall Survival (OS) (p=0.86) and Disease-Free Survival (DFS) curves. Involvement of lymph nodes, poorly differentiated tumors, tumors in advanced clinical stages, and radiotherapy as the sole primary treatment all brought down DFS rates. OS was higher in non-smoker women, in gingivae and soft palate lesions, and in early clinical stages. From the findings of this survey, we were able to carry out all subsequent research work. In Chapter 3.2, we carried out investigation on CCND1 amplification and cyclin D1 expression in SCC of young people, and compared the findings against the control group. Protein overexpression was found in 47.7% against 32.8% (p=0.03), and amplification was found in 46.2% against 18.6% (p<0.01). In the young group, overexpression was correlated with OS decrease; however, this difference was not statistically significant (p=0.06). Amplification was not correlated with OS in either of the groups. DFS was lower...

O estresse oxidativo reflete um desequilíbrio na manutenção do estado redox intracelular que pode resultar no acúmulo de espécies oxidantes. Nestas condições, estas espécies podem gerar danos na estrutura/função do DNA, disfunções mitocondriais, alterações no enovelamento de proteínas, peroxidação de lipídeos, dentre outros danos. Assim, o estresse oxidativo pode contribuir para diversas condições patológicas, como por exemplo, câncer, desordens neurológicas, aterosclerose, diabetes e asma. A infecção persistente por papilomavírus humano (HPV) de alto risco está etiologicamente associada ao câncer de colo uterino, uma das principais causas de morte por câncer em mulheres no mundo todo. Além disso, esses vírus estão associados a uma porcentagem relevante de cânceres de pênis, vulva, ânus e cabeça e pescoço. Em células infectadas por HPV de alto risco oncogênico, o estresse oxidativo resultante do metabolismo anormal dos queratinócitos e a resposta inflamatória crônica não efetiva, podem contribuir no processo de transformação celular. Além disso, a presença das oncoproteínas E6 e E7 interfere nos mecanismos de reparo de lesões em DNA, favorecendo o acúmulo de mutações. Ainda mais, a instabilidade genômica promovida pelo estresse oxidativo, pode favorecer a integração do HPV no genoma das células infectadas, principal causa da persistência viral e progressão de lesões ao câncer. A proteína superóxido dismutase 2 (SOD2) contribui com a homeostase celular ao catalisar a dismutação de radicais ânion superóxido em oxigênio e peróxido de hidrogênio, prevenindo a inativação direta de biomoléculas. Em estudos anteriores, observamos que o aumento do transcrito de SOD2 está associado à resistência ao efeito antiproliferativo do fator de necrose tumoral (TNF) em células imortalizadas por HPV. Além disso, mostramos que existe uma correlação direta entre o aumento dos níveis da proteína SOD2 e a severidade de lesões da cérvice uterina. Finalmente, identificamos SOD2 como um marcador preditivo independente de metástases linfonodais inguinais em pacientes com carcinoma de pênis. No entanto, o papel desta proteína na patogênese associada ao HPV não tem sido estudado em profundidade. O presente estudo visa determinar o envolvimento de SOD2 no processo de transformação celular mediado por HPV e seu valor como marcador preditivo de patologias associadas a este vírus / Oxidative stress reflects a redox imbalance in the cell in favor of oxidant species, which may result in DNA damage, mitochondrial dysfunction, protein misfolding and lipid peroxidation, among others. As a result, oxidative stress is thought to contribute to diverse pathologies such as cancer, neurological disorders, atherosclerosis, diabetes and asthma. Persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV) types is etiologically associated with cervical cancer, one of the leading causes of cancer related female death worldwide. Moreover, HPV infection is associated with a significant percentage of penile, vulvar, anal and head and neck carcinomas. In cells infected with high-oncogenic risk HPV types the oxidative stress generated by the abnormal keratinocytes metabolism and non-efficient chronic inflammatory response may contribute to the cellular transformation process. Furthermore, expression of E6 and E7 oncoproteins interferes with several DNA repair mechanisms, favoring the accumulation of mutations. Moreover, genomic instability promoted by oxidative stress may favor HPV integration in host cell genome, the main cause of viral persistence and of precursor lesions progression to cancer. The protein superoxide dismutase 2 (SOD2) contributes to cellular homeostasis by catalyzing radical super anion dismutation in oxygen and oxygen peroxide preventing the direct inactivation of biomolecules. In previous studies we observed that SOD2 mRNA upregulation is associated with the resistance to tumor necrosis factor (TNF) antiproliferative effect in HPV-immortalized cells. Besides, we showed the existence of a direct correlation between increased SOD2 protein expression and cervical lesions severity. Finally, we identified SOD2 as an independent predictive marker of inguinal lymph node metastases in patients with penile carcinomas. However, the role of this protein in HPV-associated pathologies has not been investigated in depth. The goal of this study is to determine the involvement of SOD2 in HPV-mediated cell transformation and its value as a predictive marker in pathologies caused by this virus

Orientador: Estela Kaminagakura / Coorientadora: Patrícia Pimentel de Barros / Banca: Ana Sueli Rodrigues Cavalcant / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Lia Mizobe Ono / Banca: Luciana Yamamoto de Almeida / Resumo: A papilomatose laríngea é uma neoplasia benigna causada pelo papilomavírus humano (HPV), sendo os tipos 6 e 11 os mais comuns, e que ocorre em dois grupos etários, juvenil e adulto. A possível coinfecção viral tem sido sugerida em lesões de cabeça e pescoço; nesse sentido, o Epstein Barr vírus (EBV), que também apresenta tropismo por células epiteliais vem sendo estudado neste grupo de lesões. Os objetivos deste estudo foram genotipar os HPVs, investigar a presença de EBV-DNA por PCR e EBV-RNA por hibridização in situ. Além disso, associar a presença de EBV com a imunoexpressão de CD21, os resultados obtidos com a escala laringoscópica de Derkay et al. (1998) e com os dados clinicopatológicos. Oitenta casos de papilomatose laríngea, juvenil (n=36) e adulta (n=44), foram retrospectivamente analisados e subdivididos em grupos de menor e maior severidade, baseando-se na escala de Derkay. Todas as amostras foram HPV posivitas, com 49 casos HPV 6, 26 casos HPV 11, 4 casos HPV 6 e 11, e 1 caso HPV 16. A presença de EBV-DNA foi detectada em 9 amostras, entretanto EBV-RNA não foi não foi identificado em nenhuma amostra. Assim como a presença do EBV-DNA, a imunoexpressão de CD21 não se associou estatisticamente com quaisquer variáveis. A presença de HPV 6 foi mais comum em PLA e, o HPV 11 foi mais comum (p=0,02) e maior em casos de maior severidade (p=0,04), no grupo juvenil. A presença do EBV provavelmente não desempenha papel importante na progressão/severidade desta patologia. / Doutor

Resumo: Os resultados da presença do papilomavírus humano (HPV) em relação ao câncer das vias aerodigestivas superiores são muito controversos. Destas vias, a orofaringe tem sido a localização com maior prevalência de HPV, o que desperta grande interesse dos pesquisadores sobre a real participação do vírus na carcinogênese desta região. Este trabalho teve como objetivo verificar a prevalência de HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de orofaringe, através da reação em cadeia polimerase (PCR) e correlacioná-la com dados demográficos, clínico-patológicos e de sobrevida. O estudo foi realizado através da análise de 27 peças oriundas de blocos de parafina obtidos de pacientes portadores de carcinoma espinocelular de orofaringe diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Faculdade de Odontologia de Araçatuba - UNESP. Foram realizadas extrações do DNA com o QIAamp DNA minikit, conforme instrução do fabricante. Após confirmar a presença e integridade do DNA, foi realizada a nPCR para detecção do HPV. Dois grupos foram formados considerando-se a presença ou ausência do HPV. Foram amplificadas 26 amostras para o gene -globina sendo que o HPV foi detectado em 50% dos casos estudados. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos em relação as variáveis clínico-patológicas e a sobrevida. / Abstract: Reports on the presence of human papillomavirus (HPV) in upper aerodigestive tract are very controversial. In this tract, the oropharynx has been the site with the highest prevalence of HPV, which encourage the great interest of researchers for the real role of the virus in the carcinogenesis of this area. This study had the objective of verifying the HPV prevalence in patients with oropharyngeal squamous cell carcinoma using polymerase chain reaction (PCR) and its correlation with demographic data, clinicopathological aspects and survival. This study was accomplished by the analysis of embedded paraffin tissues of oropharyngeal squamous cell carcinoma from 27 patients diagnosed and treated in São Paulo State University, Dentistry College of Araçatuba - UNESP. DNA extraction was accomplished with QIAamp DNA minikit, according to the manufacturer's protocol. After confirming the presence and integrity of DNA, nPCR for HPV was performed. Two groups were formed, considering patients with HPV and without HPV. -globin gene was PCR amplified in 26 samples and the HPV detected in 50% of the studied cases. There was no statistically significant difference between the groups in relation of clinicopathological variables and survival. / Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Eder Ricardo Biasoli / Banca: José Fernando Garcia / Banca: Elaine Maria Sgavioli Massucato / Banca: Denise Tostes Oliveira / Banca: Norberto Nobuo Sugaya / Doutor

Orientador: Estela Kaminagakura Tango / Banca: Ana Lia Anbinder / Banca: Alfredo Ribeiro Silva / Banca: Laura Sichero / Banca: Silvana Pasetto / Resumo: A papilomatose laríngea (PL) é uma doença rara e grave, dividida em dois grupos: juvenil (PLJ) e adulta (PLA), ambas causadas pelo papilomavírus humano (HPV). Seu curso pode ser agressivo, com inúmeras recidivas, risco de malignização, disseminação pulmonar e obstrução das vias aéreas. Para identificar os casos mais agressivos e nortear os tratamentos foram desenvolvidas escalas laringoscópicas, dentre elas; a escala desenvolvida por Derkay et al. (1998). O objetivo deste projeto foi caracterizar a PL e correlacionar suas características clínico-patológicas com com a escala laringoscópica de Derkay. Os dados e biópsias de 36 pacientes com PLJ e 56 com PLA foram coletados e analisados por meio da microscopia de luz. Os pacientes foram separados em grupos de acordo com os índíces de Derkay: ≥20 para os mais agressivos e <20 para os casos menos agressivos. Foram realizadas reações de imuno-histoquímicas anti- Fator XIIIa, CD3, CD4, CD8, CD15, CD20, CD68, FoxP3 e MUM-1. As células inflamatórias foram quantificadas. Todas as características clínico-patológicas e os resultados da reação imuno-histoquímica encontrados foram comparados entre os grupos propostos através do teste estatístico de Qui-Quadradro e correlacionados através do teste de correlação de Spearman. O nível de significância considerado foi de 5%. Ao comprar a severidade entre os grupos PLJ e PLA, o grupo PLJ foi considerado mais agressivo (P=0,02). Os pacientes entre as amostras com score ≥20 apresentaram maior inci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Laryngeal papillomatosis (LP) is a rare and serious disease, divided into two groups: juvenile (JLP) and adult (ALP), both caused by the human papillomavirus (HPV). Its course can be aggressive, with numerous relapses, risk of malignancy, pulmonary dissemination and airway obstruction. To identify the most aggressive cases and guide the treatments, laryngoscopic scales were developed, among them; the scale developed by Derkay et al. (1998). The objective of this project was to characterize LP and to correlate its clinical-pathological characteristics with Derkay's laryngoscopic scale. The data and biopsies of 36 patients with JLP and 56 patients with ALP were collected and analyzed by light microscopy. The patients were separated into groups according to the Derkay indices: ≥20 for the most aggressive and <20 for the less aggressive cases. Anti-Factor XIIIa, CD3, CD4, CD8, CD15, CD20, CD68, FoxP3 and MUM-1 immunohistochemical reactions were performed and the inflammatory cells were quantified. All the clinical-pathological characteristics and the results of the immunohistochemical reaction were compared between the groups proposed using the Chi-Square test and correlated through the Spearman correlation test. The significance level considered was 5%. When comparing aggressivity between the JLP and ALP groups, the JLP group was considered more aggressive (P = 0.02). Patients among the samples with score ≥20 had a higher incidence of tracheostomy and severe respiratory distress... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor