Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Resumo: O papel de citocinas sobre a atividade antifúngica de polimorfonucleares (PMNs) humanos contra o Paracoccidioides brasiliensis não está ainda totalmente esclarecido. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel das citocinas: IFN-g, TNF-a e GM-CSF sobre a atividade fungicida e fungistática de neutrófilos humanos contra a cepa de alta virulência ( cepa 18) do P. brasiliensis. Estes efeitos foram testados em coculturas de curta (4h) e longa duração (24 e 48h). PMNs não ativados não apresentaram atividade antifúngica. Porém, células pré-ativadas com IFN-g apresentaram efeito fungicida em cocultura de curta duração (4h). Entretanto, não foi observada atividade fungicida ou fungistática nas coculturas de longa duração (24 e 48h).Os PMNs ativados com TNF-a exibiram atividade fungicida em coculturas de curta e longa duração (4 e 24h), enquanto GM-CSF estimulou PMNs tanto para atividade fungicida, como fungistática em coculturas de curta e longa duração (4, 24 e 48h). Os efeitos antifúngicos de IFN-g e TNF-a foram inibidos quando foram adicionadas às coculturas catalase (CAT) ou superóxido dismutase (SOD), demonstrando o papel de H2 O2 e do ânion superóxido no processo. Para as células ativadas com GM-CSF, o ânion superóxido foi o principal metabólito envolvido. Com base nestes dados, o papel das células polimorfonucleares nos estágios iniciais e tardios de desafio com o P. brasiliensis é discutido. / Abstract: Fungicidal and fungistatic activity of human polymorphonuclear leukocytes (PMNs ) against high virulent strain of Paracoccidioides brasiliensis were studied. These effects were tested in short term ( 4h ) and long term cocultures ( 24h and 48h ). Nonactivated PMNs failed to exhibit antifungal activities in all studied periods. However if these cells were IFN-g activated they presented fungicidal effect at 4h of cocultures. However no activity, fungistatic or fungicidal, were detected in further times. TNF-a activated PMNs exhibit fungicidal activity at 4h and 24 h, while GMCSF stimulated PMN to fungicidal and fungistatic activities in short and long terms cocultures. The antifungal effects of IFN-g and TNF-a were inhibited or abrogated when P. brasiliensis challenge occurred in presence of catalase (CAT) and superoxide dismutase ( SOD ) showing the role of H2 O2 and superoxide anion in antifungal activities . For GM-CSF activated cells superoxide anion was the main metabolite involved. Based on these data the role of PMNs cells in early and later stages of P. brasiliensis is discussed. / Mestre

Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Banca: Olga Fichman / Banca: Esther Birman / Banca: Luiz Jacinto da Silva / Banca: Terezinha de Oliveira Nogueira / Resumo: Anticorpos naturais para antígenos próprios e exógenos foram analisados pela técnica de ELISA, em 60 soros de pacientes cronicamente infectados pelo T. cruzi e, em 40 soros de indivíduos sofrendo de uma micose profunda, freqüentemente encontrada na América Latina (Paracoccidioimicose). Cerca de 80% dos indivíduos do primeiro grupo tinham níveis significativamente elevados de anticorpos antilaminina (M=4,75, DP±1,88) quando comparados com os controles saudáveis e, diferentes especificidades de anticorpos estavam associadas com antilaminina nos soros chagásicos. Foram observados anticorpos reativos com as proteínas do citoesqueleto, especialmente com a banda 3 e seus peptídeos, como o de 62 kDa. Por meio de cromatografia, em Proteína-A - Sepharose, mostramos que uma parte significante do antiGal natural pode estar ligada por sua região Fab a outra molécula de imunoglobulina e/ou a sítios alternativos de ligação na Proteína A. O achado de lgG antiGal nos imunocomplexos reforçam a primeira hipótese. Todavia, é possível que algumas lgG aniiGal pertençam ao subgrupo VH111 de imunoglobulinas. Entre os 40 soros de PCM examinados, a maioria tinha níveis normais de anticorpos naturais. Todavia, 30% dos pacientes crônicos apresentavam aumentos de pelo menos uma especificidade de anticorpo natural, tal como antiactina, antimiosina e antiGal. Na forma juvenil os anticorpos antiactina estavam aumentados de 2,4 vezes (1,9 a 5,3 vezes), sugerindo uma associação com a doença disseminada. lmunocomplexos foram pesquisados nos soros de PCM utilizando a técnica de precipitação com polietileno glicol 6000. Nos imunocomplexos Isolados foram encontrados principalmente anticorpos específicos para antígenos solúveis de P. brasiliensis / Abstract: Using ELISA technique, natural antibodies against self and non self antigens were determined in 80 patients chronically intected by T. cruzi and 40 individuals suffering from a deep mycosis frequentely found in Latin Amarica (Paracoccidioidomycosis - PCM). Two forms of PCM were investigated: adult forms and juvenil type of disease. Eighty percent (80%) of the former group had significantly elevated anti-laminin antibody levels (M=4.7,SD±1.8) compared with healthy controls and different specificities of antibody were associated with anti-laminin in pathological sera. A notable binding to cytoskeletal proteins was observed, specially with band 3 and their peptides derivates, such as 62 kDa peptide. By means of Protein A chromatography we were able to show that natural anti-Gal antibodies may be bound by their Fab region to other immunoglobulins and/or to Protein A by alternative sites of binding. The finding of lgG anti-Gal antibodies in circulating immune complexes isolated from chagasic sera supported the first alternative. However, it is possible that some of lgG anti-Gal antibodies, belong to VH111 subgroup of immunoglobulins, that bind directly to Protein A. Among the 40 sera from PCM examined, the majority was considered as not exhibiting a signilicantly higher binding than normal sera to antigens tested. However thirty percent (30%) of the chronic patients had an increased levels of natural antibodies at least for one specificity such as actyn, myosin and Gala1,3Gal epitopes. ln juvenil type of PCM the mean value found for actyn was also increased 2,42 (range 1,0 to 5,3). Utilizing the polyethylene glicol precipitation the presence of circulating immune complexes was investigated in PCM sera. Specific antibodies for soluble antigens from P. brasiliensis and natural antibodies against myoglobin, myosin and Gala1,3 Gal epitopes were characterized

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Patologia Molecular, 2010. / Submitted by Jadiana Paiva Dantas (jadi@bce.unb.br) on 2011-06-30T00:12:53Z No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-14T22:29:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-14T22:29:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_ LauraMariaBarbosaGoncalves.pdf: 1387249 bytes, checksum: 55e77b2f20ba208c8e0b1f186285b97d (MD5) / Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), doença granulomatosa crônica que acomete principalmente os pulmões, pele, mucosas e linfonodos. O fungo P. brasiliensis apresenta dimorfismo termo-dependente, desenvolvendo-se na forma de levedura em vida parasitária ou quando cultivado em meios de cultura a 37ºC. A adesão e invasão de células são eventos essenciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. A ativação adequada dos macrófagos alveolares e a expressão de genes que ativam os mecanismos microbicidas dos macrófagos são elementos chaves na erradicação desta doença. Dados previamente descritos na literatura demonstram que a fração F1 isolada do fungo, cujo principal componente é a β-1,3-glicana, é um importante imunomodulador, promovendo o recrutamento de células inflamatórias e estimulando a produção de citocinas pró-inflamatórias incluindo o Tnf-α. Outro componente importante na interação entre o hospedeiro e o fungo é a fração F2, constituída pela α-1,3-glicana que está comumente relacionada à virulência. A mudança na composição da parede celular durante a infecção, como ocorre em P. brasiliensis, pode ser considerada como um mecanismo de escape da resposta imune inata. Com o objetivo de compreender melhor os eventos iniciais desse processo infectivo, o RNA total dos macrófagos tratados e não tratados foram analisados por meio do RT-PCR em Tempo Real avaliando a expressão de genes chaves TNF-α e Cxcl4 (pró-inflamatórios), CD14, Clec2 e Itga5 (proteínas de membrana), Stat6 (transdução de sinal), Nfkb e Nfkr (regulação transcricional), Toll2 e Toll4 (receptores de reconhecimento padrão), MyD88 (molécula adaptadora) envolvidos no processo inflamatório utilizando macrófagos alveolares-MHS numa cinética de interação de 6, 24 e 48 horas com P. brasiliensis e seus componentes de parede. O estudo revelou a indução de genes responsáveis por processos quimiotáticos que facilitam a adesão célula-célula e genes relacionados à internalização e adesão do patógeno como Clec2, sendo importante no intenso recrutamento de fagócitos para o sítio da infecção. Os genes dos receptores de reconhecimento padrão (Toll2, Toll4) e a molécula adaptadora MyD88, não apresentaram um papel relevante no sentido do estabelecimento da imunidade protetora contra o P. brasiliensis. Desta forma este trabalho revelou a indução de genes que codificam para proteínas que irão participar do processo de inflamação tais como migração celular e ativação da capacidade microbicida dos macrófagos, principalmente durante o estágio inicial da cinética de interação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Paracoccidiodes brasiliensis is the agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic granulomatous disease that affects mainly the lungs, skin, mucous membranes and lymph nodes. The fungus P. brasiliensis shows thermo dependent dimorphism, growing as yeast in parasitic life or when cultured in medium at 37°C. The adhesion and invasion of host cells are essentials events involved in infection and dissemination of pathogen. The adequate activation of alveolar macrophages and expression of genes that activate the microbicidal mechanisms of macrophages are key elements in the eradication of this disease. Data previously reported demonstrated that the F1 fraction extracted the fungus, whose the major component is the β-1,3-glucan, is an important immunomodulator by promoting the inflammatory cells recruitment and stimulating the proinflammatory cytokines production, including TNF–α. Another important component in interaction of host and fungus is the fraction F2, consisting of α-1,3-glucan, that is usually associated with virulence. The change in cell wall composition during infection, as occurs in P. brasiliensis, can be considered as escape mechanism to innate immune response. In order to better understand the initial events of this infectious process, total RNAs of macrophages treated and non-treated were analyzed by Real-Time RT-PCR and were evaluated the key genes TNF-α and Cxcl4 (proinflamatory), CD14, Itga5 and Clec2 (membrane proteins), STAT6 (signal transduction), NFkB and Nfkr (transcriptional regulation), Toll2 and Toll4 (pattern recognition receptors), MyD88 (adapter molecule) expression involved in inflammatory process. In these experiments were used alveolar macrophages (MHS) incubated with P. brasiliensis and its wall components, in the interaction kinetics (6, 24 and 48 hours). The study demonstrated gene induction involved in chemotaxis processes, which facilitate cell-cell adhesion, and gene induction related to pathogen internalization and adherence, as Clec2, that triggers intense phagocytes recruitment to the infection site. The genes of pattern recognition receptors (Toll2, Toll4) and the adapter molecule MyD88, did not show significant role towards establishment of protective immunity against P. brasiliensis. Thus this study revealed induction of genes that code for proteins that will participate in the process of inflammation such as cell migration and activation of microbicide activity of macrophage, especially during the initial stage of the kinetic of interaction.

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mamoni_RoneiLuciano_D.pdf: 2710116 bytes, checksum: 0509d4df3007265d7ee581ed17507d5e (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) pode ser classificada em três grupos principais: PCM-infecção (PI); forma adulta (FA) e forma juvenil (FJ). O presente trabalho teve como objetivo comparar a resposta imunológica nesses diferentes grupos, por meio da análise da cinética da expressão do RNA mensageiro (RNAm) de citocinas e quimiocinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-g, TGF-b, TNF-a, CXCL8, CXCL9, CXCL10) por RT-PCR, e caracterizar fenotipicamente as células produtoras dessas citocinas por citometria de fluxo. Como resultado obtivemos que indivíduos do grupo PI expressam precocemente maior quantidade de RNAm para IFN-g, TNF-a, CXCL9 e CXCL10, quando comparados aos pacientes com a FJ da PCM, e níveis similares de CXCL10 e IFN-g e aumentados de CXCL9 e TNF-a quando comparados aos pacientes com a FA. A expressão do RNAm para citocinas Th2 (IL-4, IL-10, IL-5 e TGF-b), de maneira geral, foi maior e mais precoce em indivíduos com a FA ou FJ, quando comparados aos indivíduos do grupo PI. Em relação a expressão proteica, observamos que indivíduos do grupo PI apresentam um número maior de células produtoras de IFN-g, TNF-a, IL-2, CXCL9 e CXCL10 quando comparados aos dois grupos de pacientes. A produção de IFN-g foi observada principalmente em células CD3+CD8+, enquanto que IL-2 e TNF-a foram detectados principalmente em células CD3+CD4+. Em relação à expressão de moléculas de superfície, observamos que monócitos de indivíduos do grupo PI apresentam maior expressão de CD80 e menor expressão de CD86 e CD54, quando comparados aos indivíduos com a FA ou FJ, e maior expressão de HLA-DR e CD11a quando comparados aos indivíduos com a FJ da PCM. Nossos resultados indicam que a cinética diferencial de produção de RNAm para citocinas do tipo Th1 ou Th2 pelos grupos estudados pode direcionar a resposta imunológica após a infecção, originando as diferenças clínicas observadas / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) presents three major forms: PCM-infection (PI); adult form (AF) and juvenile form (JF). The aim of this study was to compare the immunological response in these groups through the analysis of the kinectics of mRNA expression of some cytokines and chemokines (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-lO, IFN-y, TGF p, TNF-a, CXCLS, CXCL9 and CXCLlO) by RT-PCR, as well as, to characterize the phenotype of the cytokines producing cells by flow cytometry. The results showed that PI individuaIs express earlier and higher levels of mRNA for IFN-y, TNF-a, CXCL9 and CXCLIO when compared to JF patients and similar levels of CXCLlO and IFN-y and higher levels of CXCL9 and TNF -a when compared to AF ones. On the other hand, the mRNA expression ofTh2 cytokines (IL-4, IL-IO, IL-5 and TGF-P) was higher and earlier in JF and AF groups when compared to PI individuaIs. In relation to protein expression, we observed that PI group presents a higher percentage of cells producing IFN-y, TNF-a, IL-2, CXCL9 and CXCLIO when compared to both groups ofpatients. The production ofIFN-y was predominantIy done by CD3+CDS+ T cells, whereas IL-2 and TNF-a production was higher in CD3+CD4+ cells. Monocytes ofPI individuaIs also presented higher expression of CDSO and lower expression of CDS6 and CD54 when compared to JF and AF patients, and higher expression of HLA-DR and CDIIa only when compared to JF patients. These results indicate that the differential kinetic of mRNA expression of ThI or Th2 cytokines observed in the different forms of PCM may modulate the immunological response resulting in the different outcomes observed in this disease / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Pedro Bertolini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sugizaki_MariaFatima_M.pdf: 2623810 bytes, checksum: 731401dad432440f82c91b75281af3d1 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Não informado / Abstract: Paracoccidioidomycosis, an infectious disease induced by the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis has drawn a great deal of attention in Brazil, specially in the State of são Paulo, where the infection is endemic. The major difficulty in studying this disease , by the mycological view point, is related to theethiological agent isolation usually provided from clinical samples, which are always contamineted other kinds of microorganisms, whose accelerated growth impedes recuperation from P. brasiliensis ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

A paracoccidioidomicose (PCM) é caracterizada como uma micose profunda e que acomete, principalmente, indivíduos do sexo masculino e de regiões agrícolas. A infecção ocorre através da inalação de propágulos fúngicos presentes no ambiente, atingindo inicialmente os pulmões e podendo se disseminar para outros órgãos. O diagnóstico precoce da doença previne a formação de sequelas e garante que o trabalhador dê continuidade a sua atividade de vida diária. Os testes de intradermorreação, imunodifusão dupla e ELISA são os mais utilizados no diagnóstico da PCM, no entanto, podem apresentar reatividade cruzada com outras doenças, como Histoplasmose, Candidíase e Criptococose. Em ensaios de Dot Blot com gp43 purificada, foi comprovada a eficiência deste teste para o sorodiagnóstico da PCM em pacientes durante terapia antimicótica, apresentando alta sensibilidade e especificidade. Portanto, objetiva-se com este trabalho utilizar a técnica do ensaio de Dot Blot com a glicoproteína de 43 KDa como um método de diagnóstico para a PCM infecção em indivíduos expostos ao Paracoccidioides brasiliensis na área rural de Alfenas. A prevalência de positividade nos testes Dot Blot, ELISA e IDR foi 57,57% 56,71% 68,83% respectivamente. A proporção de positivos no teste de Dot Blot foi maior no gênero masculino. A maioria dos indivíduos positivos situa-se na faixa etária acima dos 30 anos. Os resultados mostram uma maior concordância entre o teste Dot Blot e ELISA. Devido à dificuldade na padronização no teste Dot Blot e a uma melhor reprodutibilidade e rapidez do teste de ELISA, os resultados sugerem que o teste de ELISA seja mais adequado para levantamento da prevalência da PCM em áreas rurais. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is characterized as a deep mycosis and that affects mainly males and agricultural regions. Infection occurs by inhalation of fungal propagules in the environment, initially reaching the lungs and may spread to other organs. Early diagnosis of the disease prevents the formation of sequels and ensures that the worker gives continuity to their activities of daily living. The intradermal tests, immunodiffusion and ELISA are the most used in the diagnosis of PCM, however, may show cross-reactivity with other diseases such as histoplasmosis, candidiasis and cryptococcosis. Therefore, the objective of this study was to use the technique of Dot Blot assay glycoprotein of 43 kDa as a diagnostic method for PCM infection in individuals exposed to P. brasiliensis in rural Alfenas. Different variables were tested in the standardization of Dot Blot assay using sera samples from patient’s positive and negative individuals. The prevalence of positivity in Dot Blot, ELISA and IDR tests was 57.57%, 56.71% and 68.83% respectively. Seropositivity in the Dot Blot test was higher in males. Most positive individuals lie in the age group above 30 years. The results show a better agreement between the Dot Blot and ELISA. Due to the difficulty in standardizing the Dot blot test a better reproducibility and speed of ELISA, the results suggest that ELISA is more suitable for survey of the prevalence of PCM in rural areas.

As Células Gigantes Multinucleadas (CGMs) são consideradas uma característica marcante da inflamação granulomatosa, pois podem desempenhar um papel essencial na resposta do hospedeiro contra patógenos, particularmente o Paracoccidioides brasiliensis (Pb). Este estudo caracteriza as CGMs encontradas na Paracoccidioidomicose (PCM) oral crônica e avalia sua correlação com a quantidade de fungos presentes nos tecidos orais. Foram incluídos neste estudo 26 casos de pacientes portadores de PCM com lesões em mucosa oral. As lesões foram classificadas em granulomas densos e frouxos e avaliou-se o número total de células gigantes, incluindo as do tipo Langhans e corpo-estranho, além do número total de fungos e de fungos intracelulares. Realizou-se a reação imunoistoquímica com o anticorpo antiCD163; as CGMs CD163 positivas foram também quantificadas. Os resultados revelaram que, nos granulomas densos, houve um número maior de células gigantes totais e do tipo corpo-estranho comparado aos granulomas frouxos (p<0,05). O número total de células gigantes demonstrou uma correlação linear positiva com o número de CGMs CD163 positivas (p=0,003; r=0,56) e com a quantidade de fungos localizados no interior das CGMs (p=0,045; r=0,40). Com base nestes resultados, concluiu-se que as lesões orais da PCM crônica contêm principalmente CGMs com fenótipo CD163 positivo, incluindo ambas as células tipo Langhans e corpo-estranho; esse perfil CD163+/M2 pode contribuir para manutenção da forma crônica da doença e persistência das lesões orais. Além disso, quanto maior o número de CGMs, maior a quantidade de fungos no interior das células gigantes, evidenciando que este tipo de CGMs são, de fato, capazes de realizar a fagocitose. / Multinucleated giant cells (MGC) are considered to be a hallmark of granulomatous inflammation; thus they may play an essential role in the host response against pathogens, particularly Paracoccidioides brasiliensis. This study characterizes the MGC found in oral chronic paracoccidioidomycosis and assesses their correlation with the amount of fungi within oral tissues. Twenty-six cases were included. They were classified as loose or dense granulomas and the total MGC, including foreign-body and Langhans giant cells, besides the total and intracellular fungi were taken into consideration. CD163 immunoexpression was performed and CD163+ multinucleated giant cells were also quantified. Our results showed that dense granulomas revealed more foreign-body type and total giant cells than loose granulomas (P < 0.05). Total giant cells showed a positive linear correlation with the CD163+cells (P = 0.003; r = 0.56) and intracellular fungi quantification (P = 0.045; r = 0.40). Oral chronic paracoccidioidomycosis lesions contain MGC that mainly belong to a CD163+ phenotype, also showing both Langhans and foreign-body arrangements; such CD163+/M2 profile may sustain the chronic form and persistence of PCM oral lesions; additionally, the higher the presence of MGC, the higher the amount of phagocyted fungi, evidencing that such kind of giant cells are indeed able to perform phagocytosis.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, com alta prevalência no Brasil. O agente etiológico da doença são fungos do gênero Paracoccidioides. A gp43 é o antígeno principal do Pb e tem sido demonstrado que camundongos imunizados com anticorpos monoclonais anti-gp43 (MAbs) (Ab1) induzem a cascata idiotípica, produzindo anticorpos anti-Id (Ab2) e anti-anti-Id (Ab3). Observou-se que todos os Mabs Ab2 inibiram (>90%) a ligação da gp43 ao Mab 17c (Ab1) sugerindo que estes Mabs anti-Id ligam-se ao parátopo do Mab Ab1, comprovando assim que os Mabs anti-Id obtidos possuem a imagem interna da gp43. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-&#946;, que mimetiza o antígeno gp43 de P.brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv), e a transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental. Visto que a molécula de DC-pMAC/PS-scFv, que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T, mostrou eficiência em modelo murino de terapia na PCM experimental, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com o scFv em associação às nanocápsulas. Para isso, utilizando a levedura Pichia pastoris, obtivemos a expressão da molécula de scFv recombinante que foi posteriormente encapsulada em um composto a base de PLGA, na proporção 50:50 de PLA e PGA, e testada em modelo murino. Nosso modelo de terapia com scFv encapsulado mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição do CFU, maior recrutamento de células dendríticas e macrófagos nos pulmões dos animais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN- &#947; e IL-12, diminuição de IL-10 para os animais tratados com o scFv encapsulado. Para as citocinas IL-4 e IL-17, não obtivemos níveis diferentes entre os grupos de tratamento. Ainda, não observamos diferença na produção de imunoglobulina IgG1. Sendo assim, nossos resultados sugerem a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM e diminuição da carga fúngica pulmonar. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic Mycosis, endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil. The Etiologic Agent of disease are fungus of the genus Paracoccidioides. The main Antigen is gp43 Pb and it has been shown that mice immunized with monoclonal anti-gp43 antibodies (MAbs) (Ab1) induce the all idiotypic, producing antibodies anti-Id (Ab2) and anti-anti-Id (Ab3). It was observed that all the Mabs Ab2 inhibited (90%) the > gp43 by Mab 17 c (Ab1) suggesting that these anti-Id Mabs bind to the Mab paratopo Ab1, proving how the anti-Id Mabs obtained possess the internal image of gp43 (GESZTESI et al., 1996). So, our research group has built a new antibody molecule from Mab anti-idiotypic Ab2-b, which mimics the gp43 Antigen of p. brasiliensis, called single-chain variable fragment (scFv), and transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) proved to be promising in the PCM. Since the molecule of DC-pMAC/PS-scFv, that has the recognition and activation of T lymphocytes, showed efficiency in murine model of therapy in experimental PCM, this study aimed to investigate the effects of therapy with the scFv in association to standard techniques. To do this, using the yeast Pichia pastoris, we obtained the expression of scFv recombinant molecule that was later encapsulated in the base compound of PLGA, 50:50 ratio of PLA and PGA, and tested in murine model. Our model of encapsulated scFv therapy proved to be efficient, since we observe reduction of CFU, greater recruitment of dendritic cells and macrophages in the lungs of animals, as well as increased production of cytokines such as IFN-&#947; and IL-12, IL-10 reduction for animals treated with encapsulated scFv. For the cytokines IL-4 and IL-17, we didn\'t get different levels between treatment groups. Still, it was not observed decrease of IgG1 immunoglobulin. So, our results suggest the modulation of immune response to Th1 type, important in the protection of the PCM.

Orientador: James Venturini / Resumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides; suas principais formas clinicas são aguda/subaguda, crônica (FC) e residual. A maioria dos pacientes com a FC da doença, mesmo após tratamento eficaz, apresenta sequelas, principalmente fibrose pulmonar (FP) e enfisema. Os problemas sociais, econômicos e psicológicos desencadeados pela FP são subestimados. Apesar da fibrogênese na PCM ser reconhecida como um processo precoce, seus mecanismos não são totalmente conhecidos. No presente estudo, determinamos o perfil proteômico sérico de pacientes com PCM-FC com diferentes desfechos de FP. Vinte e nove pacientes com PCM pulmonar foram acompanhados periodicamente e as amostras de soro sanguíneo foram coletadas em quatro momentos: antes do tratamento (M0), cura clínica (M1), cura sorológica (M2) e cura aparente (M3). O grupo controle foi constituído por amostras de quinze indivíduos fumantes, pareados com idade e sexo dos pacientes avaliados. Ao final do tratamento (M3), os pacientes foram submetidos à avaliação de tomografia computadorizada e dois grupos de pacientes foram formados com base nos resultados de PF: PF menor (n = 17) e PF maior (n = 12). As proteínas de elevada abundância no soro foram removidas e, em seguida, submetidas à análise proteômica shotgun através do sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS. A identificação e quantificação das proteínas foram realizadas usando o software PLGS Expression E. Análise de enriquecimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by fungi of the genus Paracoccidioides; its main clinical forms are acute / subacute, chronic (CF) and residual. Most FC-PCM patients, even after effective treatment, present sequelae, mainly pulmonary fibrosis (PF) and emphysema. The social, economic and psychological problems triggered by PF are underestimated. Although fibrogenesis in PCM is recognized as an early process, its mechanisms are not fully known. In the present study, we aimed to determine the serum proteomic profile of patients with FC-PCM with different (PF) outcomes. Twenty-nine patients with pulmonary PCM patients were followed up periodically, and blood serum samples were collected in four moments: before treatment (M0), clinical cure (M1), serological cure (M2), and apparent cure (M3). For control group (n=15), serum samples of sex and age-matched smokers were also collected. At the end of treatment (M3), the patients were submitted to CT Scan evaluation and two groups of patients were formed based on PF outcomes: minor PF (n=17) and major PF (n=12). High-abundance proteins were removed from serum and submitted to shotgun proteomic assay using a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system. The identification and quantification of proteins were performed using PLGS Expression E software. Enrichment analysis and protein-protein interaction (PPI) network analysis were performed using String software. Before treatment, patients with minor PF, in comparison to c... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) podem apresentar comorbidades de natureza não infecciosa, tais como a doença de Hodgkin, leucemias e carcinomas. Neste sentido, o presente trabalho tem como objetivo avaliar clinicamente a associação entre paracoccidioidomicose e neoplasia. Foi realizado um estudo retrospectivo durante um período de 35 anos (1972- 2007), das fichas clínicas de 802 pacientes com diagnóstico da micose, provenientes dos arquivos do Laboratório de Micologia, Santa Casa - Complexo Hospitalar, Porto Alegre. Vinte e quatro casos (3,18%) apresentaram concomitantemente algum tipo de neoplasia. Foram estudados aspectos demográficos, hábitos de vida, manifestações clínicas, radiológicas e laboratoriais, evolução e tratamento realizado em ambas as doenças. O diagnóstico da paracoccidioidomicose foi feito através do exame micológico direto, histopatologia e/ou soromicologia; todos os casos de neoplasia tiveram confirmação histopatológica e/ou citopatológica. Todos os pacientes eram do sexo masculino, com idade entre 40 e 65 anos, com uma mediana de 53 anos. Manifestações relacionadas ao aparelho respiratório foram as principais queixas quando do diagnóstico da micose. Predominou o envolvimento pulmonar seguido por tegumentar e ganglionar. Em 12 pacientes o diagnóstico da PCM precedeu o da neoplasia, em 10 foram simultâneos, e em dois a neoplasia foi identificada anteriormente à micose. Houve concomitância de lesões entre as duas doenças em 66,6% dos casos. Os carcinomas representaram 95,8% das neoplasias, dos quais o de pulmão foi o mais freqüente, com 15 casos (62,5%); um paciente tinha doença de Hodgkin. A diferença entre a freqüência de carcinoma brônquico na população estudada e na população sem a micose foi estatisticamente significante (p = 0,0015). A terapêutica da PCM consistiu, isoladamente, de sulfas (29,2%), sulfametoxazol-trimetoprim (20,8%), cetoconazol (12,5%), itraconazol (12,5%) e anfotericina B (4,2%); houve combinação entre drogas em dois casos e substituição em uma oportunidade. A conduta antineoplásica mais empregada foi cirúrgica (11/24) seguida da radioterápica (9/24), quimioterápica (3/24) de um não se obteve relato. Cura micológica foi observada em doze casos, em nove a evolução é desconhecida e três pacientes foram ao óbito. Em conjunto, os resultados mostraram que existe uma associação entre a paracoccidioidomicose e neoplasia. / Patients with paracoccidioidomycosis may have comorbidities of non-infectious, such as Hodgkin's disease, leukaemia and cancers. Thus, the present study aims to evaluate the clinical association between the paracoccidioidomycosis and neoplasia. A retrospective study was conducted over a period of 35 years (1972-2007) through the revision of chips clinics from 802 patients with clinical diagnosis of mycosis, from the archives of Mycology Laboratory, Santa Casa - Complex Hospital, Porto Alegre. Twenty-four cases (3.18%) had some form of cancer concurrently. They were studied demographics, habits of life, leading clinical, radiological and laboratory, as well as developments in treatment done in both diseases. Paracoccidioidomycosis was diagnosed based on direct mycological exam, serologic and/or histopathologic evidence. All cases of cancer were confirmed by histopathologic and/or cytopathologic examination. All patients were male, aged between 40 and 65 years, with a median of 53 years. Disturbs related to the respiratory system were the main complaints. Lung involvement was the most predominant, followed by the tegumentary and lymphatic. In 12 patients the diagnosis of paracoccidioidomycosis preceded that of neoplasia, 10 were simultaneous, and in two to neoplasia was identified prior to mycosis. There was a concomitance between both of the illnesses in 66,6% of the cases. The cancers accounted for 95.8% of the cancers of the lung, which was the most frequent, with 15 cases (62.5%); one patient had Hodgkin's disease. The difference between the frequency of bronchial carcinoma in the studied population and the population without mycosis was statistically significant (p = 0.0015). The paracoccidioidomycosis therapy consisted alone of sulfas (29,2%), sulfamethoxazoletrimethoprim (20,8%), ketoconazole (12,5%), itraconazole (12,5%) and amphotericin B (4,2%); there was a drug combination in both cases and a substitution in a given opportunity as well. The most used antineoplastic procedure was the surgical one (11/24), followed by radiotherapy (9/24) and chemotherapy (3/24). The mycological cure was noticed in twelve cases; in nine of the cases the evolution is unknown and three patients died. Together, the results showed that there is an association between paracoccidioidomycosis and cancer.