Avaliou-se o efeito de diferentes fontes de colostro, caprino e bovino in natura, e bovino liofilizado em 25 cabritas distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos: CCA - colostro caprino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CCB - colostro caprino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG); CBA - colostro bovino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CBB - colostro bovino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG) e CBL - colostro bovino liofilizado (45 a 55 mg/mL de IgG). Os animais receberam 5% do peso vivo de colostro às 0,12 e 24 horas após o nascimento e, em seguida, leite de vaca duas vezes ao dia e concentrado ad libitum até 60 dias de idade. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 de idade. O sangue foi analisado quanto ao valor de hematócrito e a concentração de proteína total (PT). As frações protéicas separadas por eletroforese e a condição de diarréia foi avaliada através de cor, consistência, presença de sangue/muco. As variáveis sanguíneas foram analisadas como medidas repetidas no tempo. Com relação ao valor de hematócrito efeito de período foi observado, o valor no primeiro dia de idade, 28,76±1,76, foi maior que nos 10, 30, 35 e 60 dias de idade, com valores médios de 23,88±0,98, 24,18±0,70, 23,73±0,74 e 24,53±0,79%, respectivamente. Interação entre tratamento e período foi verificado para PT sérica, os tratamentos CCB, CBA, CBB e CBL apresentaram aumento gradativo nas concentrações séricas até os 60 dias de idade, enquanto CCA apresentou valores nos dias 10,15, 40, 50 e 60 dias de idade maiores que o valor ao nascimento. Os valores de albumina sérica foram afetados pelo tratamento e período, sendo o valor em CBL, 2,39±0,12 g/dL, significamente inferior ao dos tratamentos CCA, CCB, CBA e CBB, com 3,20±0,12, 2,94±0,12, 3,25±0,12, 3,08±0,12 g/dL, respectivamente. Um aumento gradativo nas concentrações desta variável foi observado até os 60 dias de idade. Ao 0 e ½ dia de idade os valores de globulina sérica foram menores que os observados na última data experimental, 60 dias de idade. A relação albumina/globulinas sérica foi afetada pelo efeito de tratamento e período, com os valores em CBL significativamente superiores do que em CCA, CCB, CBA e CBB. A relação foi maior ao nascimento diminuindo nas datas subseqüentes, ½ e 1 dia de idade. A variável gamaglobulina apresentou efeito de tratamento e período, com valores em CBL significativamente superiores do que em CCB e CBB, não diferindo dos encontrados em CCA e CBA. Os valores ao 0 e ½ dia de idade foram menores que aos 60 dias de idade. Observando a condição de diarréia nos tratamentos verificou-se que os animais CCB e CBB apresentaram maior frequência de diarréia que os animais dos demais tratamentos, indicando uma relação inversa entre anticorpos no colostro e condição de diarréia. Os resultados indicam que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado para caprinos recém-nascidos como fonte alternativa para a aquisição de proteção inicial. / It was to evaluated the effect of different sources of colostrum, goat and bovine in natura, and lyophilized bovine in 25 newborn female goat kids were randomly allocated to five treatments: GCA - goat colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), GCL - goat colostrum low (15 to 25 mg/mL of IgG), BCA - bovine colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), LBC - bovine colostrum low (15 to 25 mg / mL of IgG) and of treatment CBL, lyophilized bovine colostrum (45 to 55 mg / mL of IgG). The animals received 5% of body weight of colostrum at 0, 12, 24 hr after birth and then, bovine milk twice a day and concentrate ad libitum until 60 days of life. Blood samples were collected in 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 days of age. Blood was analyzed for hematocrit value and total protein (TP). Protein fractions were separated by electrophoresis and the condition of diarrhea was evaluated by color, consistency, blood/mucus presence. Blood variables analyzed as repeated measures on time.Related to hematocrit values effect of period was observed, the value at one day of age, 28.76±1.76, was higher than at 10, 30, 35 and 60 days of age, with average at 23.88±0.98, 24.18±0.70, 23.73±0.74 and 24.53 ± 0.79%, respectively. Interaction between treatment and period was observed for serum TP, treatments GCL, BCA, BCL, and LBC showed a gradual increase in serum concentrations up to 60 days of age, while GCA showed values on days 10, 15, 40, 50 and 60 days of age, greater than the value at birth. The values of serum albumin were affected by treatment and period, being the value in LBC, 2.39±0.12 g/dL, significantly lower than the GCA treatment, GCL, BCA and BCL, with 3.20±0.12 , 2.94±0.12, 3.25±0.12 and 3.08± 0.12 g/dL, respectively. A gradual increase in the concentrations of this variable was observed until 60 days of age. To 0 and ½ day of age values of serum globulin were significantly lower than the observed at last experimental date, 60 days of age. Serum albumin/globulin relation was affected by the treatment and period with the values in CBL significantly higher than observed in GCA, GCL, BCA and BCL. The relation was higher at birth decreasing in the following dates, ½ and 1 day of age. The variable gamma globulin was affected by treatment and period, with values in LBC significantly higher than in GCL and BCL, not differing from the found in GCA and BCA. The values at 0 and ½ day of age were lower than 60 days of age. Observing the diarrhea condition, in the treatments, it was verified that the GCL and BCL animal had showed higher diarrhea incidence than the animals from the other treatments, indicating an inverse relationship between antibodies in the colostrum and condition of diarrhea. The results indicate that lyophilized bovine colostrum can be used to newborns goat kids as an alternative source for the acquisition of initial protection.

Atualmente, a coqueluche representa um crescente problema de saúde pública em países desenvolvidos. Embora ainda não existam evidências de um aumento do número de casos de coqueluche no nosso país, não se pode descartar a hipótese de uma futura re-emergência da doença, pois dados epidemiológicos de algumas regiões revelam um aumento da incidência, indicando que provavelmente ocorra uma baixa notificação de novos casos ao Ministério da Saúde. A maioria dos casos ainda ocorre em lactentes menores de seis meses de idade, ou seja, crianças ainda não completamente imunizadas. Diversos trabalhos demonstraram a aquisição de anticorpos IgG reativos com Bordetella pertussis pelo recém-nascido através da passagem transplacentária, mas a partir dos dois meses de vida, observa-se um declínio substancial do título destes anticorpos. Neste caso, outro modo de conferir proteção ao neonato é através da transmissão de anticorpos IgA específicos pelo aleitamento materno, que poderia suprir a falta de anticorpos IgG até que o esquema de vacinação esteja completo. Os objetivos deste trabalho foram analisar a transferência passiva de anticorpos IgG e IgA anti-B. pertussis para o recémnascido a termo e investigar a habilidade destes anticorpos em neutralizar a patogenicidade bacteriana em um modelo experimental in vivo utilizando camundongos desafiados por via intracerebral com B. pertussis viável. Foram coletadas 40 amostras pareadas de sangue materno, de cordão umbilical e de colostro. Foram demonstrados títulos equivalentes de anticorpos IgG anti-B. pertussis entre as amostras de soro materno e de cordão (medianas de 1:225 e 1:265, respectivamente) com taxa de transferência de 118%. Foram observados títulos variáveis de anticorpos IgA específicos nas amostras de colostro materno com mediana de 1:74. O Immunoblotting realizado com extrato bruto de B. pertussis e Pools de soro materno, de soro de cordão e de colostro com alto e baixo título de anticorpos específicos revelou um perfil de reconhecimento idêntico entre os Pools de soro materno e dos respectivos neonatos. Os Pools de colostro apresentaram, em seu perfil de reconhecimento, diferentes intensidades que variaram de acordo com os títulos de anticorpos IgA específicos. No desafio intracerebral com B. pertussis, embora todos os Pools de soro materno, de cordão e de colostro tenham apresentado capacidade significativa de neutralizar a patogenia bacteriana quando comparados ao controle positivo, os Pools com alto título de anticorpos revelaram maior capacidade neutralizante. Os Pools de soro e colostro absorvidos com B. pertussis e, portanto, sem anticorpos IgG e IgA específicos, protegeram 30% dos animais testados e anticorpos IgG purificados, apresentando alto título de anticorpos anti-B. pertussis (1:2.560), protegeram 65% dos camundongos. Nossos dados confirmaram a transferência de anticorpos reativos com B. pertussis para o neonato via placenta e aleitamento materno e sua eficácia na neutralização da patogênese bacteriana, o que pode proteger a criança contra infecções respiratórias causadas por Bordetella pertussis. / Pertussis is currently considered an important public health problem in developed countries. Although there is no evidence of an increase in the number of pertussis cases in our country, can not rule out the hypothesis of a future re-emergence of disease, as epidemiological data from some regions show an increase in incidence, indicating that probably there is a low report of new cases to the public health authorities. Most cases still occurs in infants under six months of age, i.e. children not fully immunized. Several works have demonstrated the acquisition of IgG antibodies reactive with Bordetella pertussis by the newborn through placental transfer, but by age of two months it was observed a substantial decay of titers these antibodies. In this case, another way to confer protection the neonate is through the transmission of IgA antibodies via breast-feeding, which could supply the lack of IgG antibodies until the vaccination schedule will be completed. The aims of this work were to analyze the passive transfer of IgG and IgA anti-B. pertussis antibodies to term newborns and to investigate the ability of these antibodies to neutralize the bacterial pathogenicity in an experimental model in vivo using mice intracerebrally challenged with viable B. pertussis. It was collected 40 paired samples of maternal blood, cord umbilical blood and colostrum. Equivalent titers of anti-pertussis IgG antibodies were demonstrated between maternal and cord serum samples (medians of 1:225 and 1:265, respectively) with transfer rate of 118%. It was observed variable specific IgA titers in maternal colostra with a median of 1:74. Immunoblotting performed with B. pertussis crude extract and Pools of maternal serum, cord serum and colostrum with high and low specific antibody titers revealed an identical recognition profile between paired maternal and newborn serum Pools. Colostrum Pools presented, in their recognition profile, different intensities that varied according to specific IgA antibody titers. In the intracerebral challenge with B. pertussis, although all maternal and cord serum and colostrum Pools presented a significant bacterial neutralizing ability when compared with positive control group, Pools with high antibody titers revealed higher neutralizing capacity. Serum and colostrum Pools absorbed with B. pertussis and, thus, without specific IgG and IgA antibodies, protected 30% of the animals tested and purified IgG antibodies, presenting a high anti-pertussis antibody titer (1:2,560), protected 65% of the mice. Our data confirmed the transfer of antibodies reactive with B. pertussis to the neonate via placenta and breast-feeding and their effectiveness in bacterial pathogenesis neutralization, which could protect infants against respiratory infections caused by Bordetella pertussis.

Submitted by IVANA REGINA GONÇALVES null (nanaenf82@hotmail.com) on 2016-12-13T18:58:31Z No. of bitstreams: 1 Tese Ivana Goncalves.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-15T14:52:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 goncalves_ir_dr_bot.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T14:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 goncalves_ir_dr_bot.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / O programa de uso da imunoglobulina palivizumabe teve início em 2007 no Estado de São Paulo e em 2013 estendeu-se nacionalmente, sendo destinado a crianças com maior risco para a infecção pelo Virus Sincicial Respiratório (VSR). Desde seu início, o programa permanece sem avaliação sistemática. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar o programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo. Foram avaliados os 16 locais de aplicação: cinco Centros de Referência para Imunobiológicos Especiais (CRIE) e 11 postos de aplicação existentes no Estado de São Paulo, seguindo o referencial de avaliação proposto por Donabedian. Dados de estrutura e processo foram obtidos por entrevista com os responsáveis pela aplicação da imunoglobulina; para avaliação de resultado foram entrevistadas as mães das crianças do programa, visando identificar a associação entre falha na tomada do palivizumabe e a necessidade de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença ou sintomatologia respiratória no período de sazonalidade do VSR. Participaram desta pesquisa 693 crianças/responsáveis (85,1% da população elegível), que ingressaram no programa entre março e agosto de 2014, sendo a coleta de dados realizada entre março e setembro do mesmo ano. Para análise de resultado foi utilizado o odds ratio pontual e intervalar com intervalo de confiança de 95%, considerando-se associações estatisticamente significativas se p < 0,05. Para avaliação de estrutura foram consideradas 30 variáveis relacionadas a condições preconizadas pelas políticas públicas de saúde e para o processo elencaram-se 10 variáveis relativas aos cuidados com a aplicação e conservação da imunoglobulina e sala de aplicação, sendo em ambos os casos o serviço classificado de acordo com o percentual de desconformidade em: adequado (até 10%), parcialmente adequado (de 10 a 20%) e inadequado (superior a 20%). Apenas dois locais de aplicação (P7 e P9), tiveram estrutura e processo considerados adequados. Apesar de terem estrutura classificada como adequada, nove locais tiveram processo parcialmente adequado (C2, C3, C4, P3 e P10) ou inadequado (C1, P2, P5 e P8). As principais falhas de estrutura foram relativas à climatização, disponibilidade de medicamentos e materiais para uso em caso de choque anafilático, sala exclusiva para aplicação de imunobiológicos e protocolo de uso da palivizumabe disponível e, no caso do processo, a não aplicação da imunoglobulina em crianças hospitalizadas, falta de supervisão do médico durante a aplicação, falha na temperatura de conservação do produto e não aplicação no mês anterior à sazonalidade. De acordo com os resultados, pode-se verificar que o risco de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença/sintomatologia respiratória foi diretamente proporcional ao número de falhas (p=0,007; OR=1,29, IC=1,07-1,56). Conclui-se que a avaliação da estrutura do programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo é, em geral, mais favorável que o processo. Os resultados evidenciaram aumento médio da chance de internação por doença/sintomatologia respiratória de 29% a cada falha no recebimento das doses. / The palivizumab immunoglobulin health program was introduced in 2007 in São Paulo State and it was initiated nationally in 2013, aiming at being administered to highly risk children for respiratory syncytial virus infections. Since its beginning, such a program has remained with no systematic evaluation. The objetive of the present research was evaluate the palivizumab immunoglobulin health program in São Paulo State. For doing so, 16 places of palivizumab application in São Paulo State were considered: five of which are reference centers for special immunobiologicals and other 11 places of application. The theoretical framework adopted for the evaluation was the one proposed by Donabedian. Structural and processual data on the program was obtained by interviewing each worker responsible for the immunoglobulin in each application place. As for the evaluation of the program outcomes, the childrens mothers/responsible were also interviewed with the aim of identifying the association between palivizumab dose failure and respiratory-related hospitalizations in the seasonality period of respiratory syncytial virus. A total of 693 children/responsibles (85.1% of the eligible individuals) composed the research, all of which made part of the program in the period March-August of 2014, being the data collection performed between March and September of the same year. The data was analysed by the punctual and intervalar odds ratio, with a confidence interval of 95% and a statistical significance fixed at 5%. To the evaluation of program structure, 30 variables preconized by the public health policies were considerated; regarding the program process, 10 variables related to the immunoglobulin care of application and conservation and room of application were considered. Structure and process were both classificated as its nonconformity rate in: adequate (less than 10%), partially adequate (from 10% to 20%) and inadequate (greater than 20%). Only in two of the application places (P7 and P9) structure and process were found to be inadequate. Despite having an adequate structure, in nine places the process was found to be either partially adequate (C2, C3, C4, P3 and P10) or inadequate (C1, P2, P5 and P8). The main structural failures were the ones related to: climate control, availability of materials and medicines used in anaphylactic shock, exclusive room for immunobiological application and palivizumab usage protocol availability and, regarding the process, the absence of application in hospitalized children, absence of medical care during the immunoglobulin administration, inappropriate temperature for immunoglobulin conservation and absence of application prior to the respiratory syncytial virus seasonality. According to the results, the hospitalization risk in intensive care unit due to respiratory disease and related-symptoms was directly proportional to the number of dose failures (p=0.007; OR=1.29, IC=1.07-1.56). As a conclusion for the evalution, the structure of the São Paulo State palivizumab immunoglobulin health program is in general more favorable than the process. As for the results, they an average increasing of 29% in respiratory-related hospitalizations in intensive unit to each dose failure in palivizumab adminstration.

Avaliou-se o efeito de diferentes fontes de colostro, caprino e bovino in natura, e bovino liofilizado em 25 cabritas distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos: CCA - colostro caprino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CCB - colostro caprino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG); CBA - colostro bovino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CBB - colostro bovino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG) e CBL - colostro bovino liofilizado (45 a 55 mg/mL de IgG). Os animais receberam 5% do peso vivo de colostro às 0,12 e 24 horas após o nascimento e, em seguida, leite de vaca duas vezes ao dia e concentrado ad libitum até 60 dias de idade. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 de idade. O sangue foi analisado quanto ao valor de hematócrito e a concentração de proteína total (PT). As frações protéicas separadas por eletroforese e a condição de diarréia foi avaliada através de cor, consistência, presença de sangue/muco. As variáveis sanguíneas foram analisadas como medidas repetidas no tempo. Com relação ao valor de hematócrito efeito de período foi observado, o valor no primeiro dia de idade, 28,76±1,76, foi maior que nos 10, 30, 35 e 60 dias de idade, com valores médios de 23,88±0,98, 24,18±0,70, 23,73±0,74 e 24,53±0,79%, respectivamente. Interação entre tratamento e período foi verificado para PT sérica, os tratamentos CCB, CBA, CBB e CBL apresentaram aumento gradativo nas concentrações séricas até os 60 dias de idade, enquanto CCA apresentou valores nos dias 10,15, 40, 50 e 60 dias de idade maiores que o valor ao nascimento. Os valores de albumina sérica foram afetados pelo tratamento e período, sendo o valor em CBL, 2,39±0,12 g/dL, significamente inferior ao dos tratamentos CCA, CCB, CBA e CBB, com 3,20±0,12, 2,94±0,12, 3,25±0,12, 3,08±0,12 g/dL, respectivamente. Um aumento gradativo nas concentrações desta variável foi observado até os 60 dias de idade. Ao 0 e ½ dia de idade os valores de globulina sérica foram menores que os observados na última data experimental, 60 dias de idade. A relação albumina/globulinas sérica foi afetada pelo efeito de tratamento e período, com os valores em CBL significativamente superiores do que em CCA, CCB, CBA e CBB. A relação foi maior ao nascimento diminuindo nas datas subseqüentes, ½ e 1 dia de idade. A variável gamaglobulina apresentou efeito de tratamento e período, com valores em CBL significativamente superiores do que em CCB e CBB, não diferindo dos encontrados em CCA e CBA. Os valores ao 0 e ½ dia de idade foram menores que aos 60 dias de idade. Observando a condição de diarréia nos tratamentos verificou-se que os animais CCB e CBB apresentaram maior frequência de diarréia que os animais dos demais tratamentos, indicando uma relação inversa entre anticorpos no colostro e condição de diarréia. Os resultados indicam que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado para caprinos recém-nascidos como fonte alternativa para a aquisição de proteção inicial. / It was to evaluated the effect of different sources of colostrum, goat and bovine in natura, and lyophilized bovine in 25 newborn female goat kids were randomly allocated to five treatments: GCA - goat colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), GCL - goat colostrum low (15 to 25 mg/mL of IgG), BCA - bovine colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), LBC - bovine colostrum low (15 to 25 mg / mL of IgG) and of treatment CBL, lyophilized bovine colostrum (45 to 55 mg / mL of IgG). The animals received 5% of body weight of colostrum at 0, 12, 24 hr after birth and then, bovine milk twice a day and concentrate ad libitum until 60 days of life. Blood samples were collected in 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 days of age. Blood was analyzed for hematocrit value and total protein (TP). Protein fractions were separated by electrophoresis and the condition of diarrhea was evaluated by color, consistency, blood/mucus presence. Blood variables analyzed as repeated measures on time.Related to hematocrit values effect of period was observed, the value at one day of age, 28.76±1.76, was higher than at 10, 30, 35 and 60 days of age, with average at 23.88±0.98, 24.18±0.70, 23.73±0.74 and 24.53 ± 0.79%, respectively. Interaction between treatment and period was observed for serum TP, treatments GCL, BCA, BCL, and LBC showed a gradual increase in serum concentrations up to 60 days of age, while GCA showed values on days 10, 15, 40, 50 and 60 days of age, greater than the value at birth. The values of serum albumin were affected by treatment and period, being the value in LBC, 2.39±0.12 g/dL, significantly lower than the GCA treatment, GCL, BCA and BCL, with 3.20±0.12 , 2.94±0.12, 3.25±0.12 and 3.08± 0.12 g/dL, respectively. A gradual increase in the concentrations of this variable was observed until 60 days of age. To 0 and ½ day of age values of serum globulin were significantly lower than the observed at last experimental date, 60 days of age. Serum albumin/globulin relation was affected by the treatment and period with the values in CBL significantly higher than observed in GCA, GCL, BCA and BCL. The relation was higher at birth decreasing in the following dates, ½ and 1 day of age. The variable gamma globulin was affected by treatment and period, with values in LBC significantly higher than in GCL and BCL, not differing from the found in GCA and BCA. The values at 0 and ½ day of age were lower than 60 days of age. Observing the diarrhea condition, in the treatments, it was verified that the GCL and BCL animal had showed higher diarrhea incidence than the animals from the other treatments, indicating an inverse relationship between antibodies in the colostrum and condition of diarrhea. The results indicate that lyophilized bovine colostrum can be used to newborns goat kids as an alternative source for the acquisition of initial protection.

Orientador: Cristina Maria Garcia de Lima Parada Parada / Resumo: O programa de uso da imunoglobulina palivizumabe teve início em 2007 no Estado de São Paulo e em 2013 estendeu-se nacionalmente, sendo destinado a crianças com maior risco para a infecção pelo Virus Sincicial Respiratório (VSR). Desde seu início, o programa permanece sem avaliação sistemática. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar o programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo. Foram avaliados os 16 locais de aplicação: cinco Centros de Referência para Imunobiológicos Especiais (CRIE) e 11 postos de aplicação existentes no Estado de São Paulo, seguindo o referencial de avaliação proposto por Donabedian. Dados de estrutura e processo foram obtidos por entrevista com os responsáveis pela aplicação da imunoglobulina; para avaliação de resultado foram entrevistadas as mães das crianças do programa, visando identificar a associação entre falha na tomada do palivizumabe e a necessidade de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença ou sintomatologia respiratória no período de sazonalidade do VSR. Participaram desta pesquisa 693 crianças/responsáveis (85,1% da população elegível), que ingressaram no programa entre março e agosto de 2014, sendo a coleta de dados realizada entre março e setembro do mesmo ano. Para análise de resultado foi utilizado o odds ratio pontual e intervalar com intervalo de confiança de 95%, considerando-se associações estatisticamente significativas se p < 0,05. Para avaliação de estrutura foram consideradas 30 variáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Mucosal passive immunization is the transfer of active antibodies from one organism to the mucosal surfaces of another organism for preventing or treating infectious diseases. Mucosal passive immunization has a great potential for the prevention and treatment of enteric infections like Rotavirus, which causes more than 114 million episodes of diarrhoea annually with a death toll of more than 450.000 per year. However, the high cost of recombinant antibodies with the current manufacturing systems based on mammalian cells hampers the production of the high antibody quantities required for passive immunization strategies. Alternative expression platforms such as plants could provide higher scalability and reduced costs. Moreover, the use of edible plant organs, which are Generally¿Regarded¿As¿ Safe (GRAS), could reduce manufacturing costs even further by easing the requirements for antibody purification. We analyze here the feasibility of utilizing fruits as inexpensive biofactories of human antibodies that can be orally delivered as crude extracts or partially purified formulations in mucosal passive immunization strategies. In the first section of this thesis, the construction of tomato plants producing a model human Immunoglobulin A (IgA) against rotavirus in their fruits is described. As a result, an elite homozygous line was obtained whose fruits produced on average 41 ¿g of IgA per gram of fresh weigh, equivalent to 0.69 mg IgA per gram of dry tomato powder. Minimally processed products derived from IgA¿expressing tomatoes were shown to strongly inhibit virus infection in an in vitro neutralization assay. Moreover, in order to make IgA¿expressing tomatoes easily distinguishable from wild¿type tomatoes, they were sexually crossed with a transgenic tomato line expressing the genes encoding Antirrhinum majus Rosea1 and Delila transcription factors, which confer purple colour to the fruit. The resulting transgenically¿labelled purple tomatoes contained not only high levels of recombinant neutralizing human IgA but also increased amounts of anthocyanins. In the second section of the thesis the composition of IgA¿expressing tomatoes was analyzed in search of possible unintended effects that could compromise the GRAS status of the final product. To this end, transgenic IgA¿tomatoes were compared with wild type tomatoes and also commercial tomato varieties using proteomic and metabolomic approaches. 2D¿DIGE gels coupled with LC¿MSMS for protein identification showed that all the uptrend differential proteins detected corresponded only to immunoglobulin chains or antibody fragments. On the other hand, non¿targeted metabolite data obtained by UPLC¿MS / Juárez Ortega, P. (2014). Production of recombinant Immunoglobulin A in plants for passive immunotherapy [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/37015

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.

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