Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-30Bitstream added on 2014-06-13T20:03:06Z : No. of bitstreams: 1 politi_fas_dr_arafcf.pdf: 1790424 bytes, checksum: 674d81bbf9bbed74ea04e20c4278b4af (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O carrapato Rhipicephalus sanguineus é a espécie de maior disseminação mundial e está comprovadamente envolvido na transmissão de agentes patogênicos. Estudos têm demonstrado aquisição de resistência a alguns dos princípios ativos usados em formulações comerciais de acaricidas. Neste trabalho, utilizando-se extrato etanólico 70% (PAEtOH70%) e óleo essencial (OE) de partes aéreas de Tagetes patula, avaliamos a ação carrapaticida in vitro contra os diversos estágios de desenvolvimento no ciclo de vida do ixodídeo R. sanguineus. Na concentração de 50,0 mg/mL, PAEtOH70% diminuiu a oviposição em 21,5%, eliminou 99,8% das larvas e destruiu 96,5% dos ovos. O OE a 4% inibiu a oviposição em 33,94%. Apesar da baixa taxa de mortalidade de fêmeas adultas ingurgitadas, análises microscópicas da estrutura dos ovários revelaram importantes alterações morfológicas na estrutura dos ovócitos II-V e células do pedicelo, interferindo diretamente na embriogênese normal, prejudicando ou inviabilizando a formação de larvas sadias. Para garantir o uso seguro em uma possível formulação, avaliamos a atividade citotóxica de PAEtOH70% e do OE frente a macrófagos murinos, obtendo-se IC50 de 210,9 µg/mL e IC50 de 0,04%, respectivamente. O extrato foi caracterizado fitoquimicamente por HPLC-EM, tendo sido identificados 12 favonóides O-glicosilados. O óleo foi caracterizado fitoquimicamente por CG-EM, revelando a presença de 55 compostos, sendo os principais o 4-vinil-guaiacol e o gama-terpineno. Quanto aos ensaios antimicrobianos, o extrato PAEtOH70% não inibiu o crescimento de B. bassiana e M. anisopliae (CIMs > 1250,0 µg/mL) e apresentou a melhor ação contra T. rubrum e T. rubrum (FOC) (312,5 e 468,75 µg/mL, respectivamente) / The tick Rhipicephalus sanguineus is the species most worldwide spread and is proven to be involved in the transmission of pathogens. Studies have shown acquisition of resistance to some of the active ingredients used in commercial formulations of acaricides. In this study, using 70% ethanol extract (PAEtOH70%) and essential oil (EO) from aerial parts of Tagetes patula, we evaluated the in vitro acaricide action against various developmental stages in the life cycle of ixodid R. sanguineus. At the concentration of 50.0 mg/mL, PAEtOH70% decreased the oviposition by 21.5%, eliminated 99.8% of the larvae and destroyed 96.5% of the eggs. The OE 4% inhibited oviposition in 33.94%. Despite the low mortality rate of engorged adult females, microscopic analysis of the structure of the ovaries showed significant morphological changes in the structure of II-V oocytes and cells of pedicel, interfering directly in normal embryogenesis, impairing or invalidating the formation of healthy larvae. To ensure safe use in a possible formulation, we evaluated the cytotoxic activity of PAEtOH70% and OE against murine macrophages, yielding IC50 of 210.9 mg/mL and IC50 of 0.04%, respectively. The extract was phytochemically characterized by HPLC-MS and was identified 12 flavonoids O-glycosylated. The oil was phytochemically characterized by GC-MS, revealing the presence of 55 compounds, the main ones being the 4-vinyl guaiacol and gamma-terpinene. Regarding antimicrobial assays, the extract PAEtOH70% did not inhibit growth of B. bassiana and M. anisopliae (MICs > 1250.0 mg/mL) and showed the best activity against T. rubrum and T. rubrum (FOC) (312.5 and 468.75 mg/mL, respectively)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:51:43Z : No. of bitstreams: 1 madeira_s_me_botfm.pdf: 346816 bytes, checksum: c441db20f2f626542c6470c22fc1ba8e (MD5) / O presente estudo teve por objetivos avaliar a susceptibilidade de camundongos isogênicos das linhagens BALB/c e B10.A à infecção pelo fungo Lacazia loboi (L. loboi), mediante estudo do aspecto histopatológico das lesões produzidas, número de fungos e índice de viabilidade obtidos nos diferentes períodos de sacrifício e também verificar se o padrão de resposta aos parâmetros avaliados, nos animais isogênicos, é homogêneo, de modo a permitir correlação dos resultados entre si. Ambos coxins plantares traseiros de quarenta e quatro camundongos BALB/c e quarenta e quatro B10.A foram intradermicamente inoculados com 0,03ml de uma suspensão fúngica. A suspensão foi obtida a partir de um único fragmento de lesão, coletado de um paciente portador da doença de Jorge Lobo. A biópsia foi macerada em solução salina 0,85% para obtenção da suspensão, sendo imediatamente submetida à técnica de coloração vital com diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo para determinação do índice de viabilidade. A concentração fúngica foi estimada utilizando-se câmara de Neubauer e os resultados foram expressos em números absolutos. A suspensão possuía 9 x 105 fungos/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) e 45% de índice de viabilidade. Os animais foram sacrificados vinte e quatro e setenta e duas horas, sete e quinze dias, um, quatro, sete, dez, treze, dezesseis e dezoito meses após inoculação. Ambos coxins plantares foram excisados, sendo um deles enviado para análise histopatológica e o outro macerado em solução salina para determinação do número de fungos e do índice de viabilidade. A linhagem BALB/c apresentou extenso infiltrado... / The objectives of the present study were to evaluate the susceptibility of the inbred mice strains BALB/c and B10.A to the infection by the fungus Lacazia loboi (L. loboi) studying the histopathological aspects of lesions produced, number of fungi and viability index at each time of sacrifice, and also verify if the pattern of response among the isogenic strains is homogeneous, allowing a correlation of the results. Both hind foot pads of 44 BALB/c and 44 B10.A mice were intradermically inoculated with 0,03 ml of a fungal suspension. The fungal suspension was obtained from a single lesion fragment of a Jorge Lobo’s disease patient. The biopsy was macerated in 0.85% saline and the suspension was immediately submitted to viability determination through the ethidium bromidefluorescein diacetate vital staining. The fungal concentration was estimated in Neubauer chamber and the results expressed in absolute numbers. The suspension contained 9x105 fungi/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) and 45% of viable fungi. The animals were sacrificed at 24 and 72 hours, 7 and 15 days, 1, 4, 7, 10, 13, 16 and 18 months after inoculation. Both foot pads were excised, being one submitted to histopathological examination and the other macerated for fungal counting and viability index determination. The BALB/c strain presented an extensive granulomatous... (Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Diltor Vladimir Araujo Opromolla / Resumo: O presente estudo teve por objetivos avaliar a susceptibilidade de camundongos isogênicos das linhagens BALB/c e B10.A à infecção pelo fungo Lacazia loboi (L. loboi), mediante estudo do aspecto histopatológico das lesões produzidas, número de fungos e índice de viabilidade obtidos nos diferentes períodos de sacrifício e também verificar se o padrão de resposta aos parâmetros avaliados, nos animais isogênicos, é homogêneo, de modo a permitir correlação dos resultados entre si. Ambos coxins plantares traseiros de quarenta e quatro camundongos BALB/c e quarenta e quatro B10.A foram intradermicamente inoculados com 0,03ml de uma suspensão fúngica. A suspensão foi obtida a partir de um único fragmento de lesão, coletado de um paciente portador da doença de Jorge Lobo. A biópsia foi macerada em solução salina 0,85% para obtenção da suspensão, sendo imediatamente submetida à técnica de coloração vital com diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo para determinação do índice de viabilidade. A concentração fúngica foi estimada utilizando-se câmara de Neubauer e os resultados foram expressos em números absolutos. A suspensão possuía 9 x 105 fungos/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) e 45% de índice de viabilidade. Os animais foram sacrificados vinte e quatro e setenta e duas horas, sete e quinze dias, um, quatro, sete, dez, treze, dezesseis e dezoito meses após inoculação. Ambos coxins plantares foram excisados, sendo um deles enviado para análise histopatológica e o outro macerado em solução salina para determinação do número de fungos e do índice de viabilidade. A linhagem BALB/c apresentou extenso infiltrado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of the present study were to evaluate the susceptibility of the inbred mice strains BALB/c and B10.A to the infection by the fungus Lacazia loboi (L. loboi) studying the histopathological aspects of lesions produced, number of fungi and viability index at each time of sacrifice, and also verify if the pattern of response among the isogenic strains is homogeneous, allowing a correlation of the results. Both hind foot pads of 44 BALB/c and 44 B10.A mice were intradermically inoculated with 0,03 ml of a fungal suspension. The fungal suspension was obtained from a single lesion fragment of a Jorge Lobo's disease patient. The biopsy was macerated in 0.85% saline and the suspension was immediately submitted to viability determination through the ethidium bromidefluorescein diacetate vital staining. The fungal concentration was estimated in Neubauer chamber and the results expressed in absolute numbers. The suspension contained 9x105 fungi/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) and 45% of viable fungi. The animals were sacrificed at 24 and 72 hours, 7 and 15 days, 1, 4, 7, 10, 13, 16 and 18 months after inoculation. Both foot pads were excised, being one submitted to histopathological examination and the other macerated for fungal counting and viability index determination. The BALB/c strain presented an extensive granulomatous... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-19Bitstream added on 2014-06-13T20:22:14Z : No. of bitstreams: 1 000733096.pdf: 1684706 bytes, checksum: f3187a023c62c55ced4cacb9d3f6028c (MD5) / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. O estabelecimento da paracoccidioidomicose-infecção ou paracoccidioidomicose-doença depende das interações parasita-hospedeiro que podem resultar em uma resposta imune mais ou menos eficaz por parte deste último. Embora vários dos mecanismos decorrentes dessa interação já estejam descritos, estudos sobre a participação de outros fatores potenciais podem ampliar sobremaneira o nosso entendimento sobre a imunopatogênese da PCM. Nesse sentido, os eicosanóides como as prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) devem ser avaliados. Em trabalhos anteriores detectamos que o fungo induz a produção de PGs e LTs por monócitos humanos que, de uma forma autócrina, suprimem ou aumentam respectivamente, as atividades antifúngicas dessas células. No entanto, os estudos têm mostrado que além de induzir a produção de eicosanóides, os próprios fungos podem produzir esses mediadores, revelando um mecanismo de virulência que tem potencialmente grandes implicações para o entendimento dos mecanismos das infecções fúngicas. Baseados nesses estudos detectamos que o P. brasiliensis produz tanto PGs como LTs, usando fontes endógenas e exógenas de ácido araquidônico, e que ambos são importantes para a manutenção da viabilidade do fungo. Adicionalmente, os resultados sugeriram que o fungo utiliza as vias metabólicas da ciclooxigenase (COX) para a produção de PGs e da lipoxigenase (5-LO) para LTs. No presente trabalho, aprofundamos esses estudos objetivando avaliar se o fungo produz outras classes de eicosanóides, além da PGE2 e LTB4, se as PGs e LTs liberados pelo P. brasiliensis podem ser considerados como PGE2 e LTB4 autênticos, isto é semelhantes aos detectados para os mamíferos, assim como estabelecer de uma forma definitiva se a COX e a 5-LO são as vias metabólicas utilizadas... / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The establishment of paracoccidioidomycosis-infection or the evolution to paracoccidioidomycosis-disease in its more or less severe forms, primarily depends on complex host-parasite interaction, in which immune response mechanisms play an essential role. While many of these mechanisms have been elucidated, studies on the participation of other potential factors can greatly expand our understanding of PCM immunopathogenesis. Accordingly, eicosanoids such as prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) should be evaluated. In previous studies we found that the fungus induces the production of prostaglandins and leukotrienes by human monocytes that in an autocrine way suppress and increase, respectively, the antifungal activities of these cells. However, studies have shown that in addition to inducing the production of eicosanoids, fungi themselves can produce these mediators, showing a mechanism for virulence that has potentially important implications for understanding the mechanisms of fungal pathogenicity. Based on these studies, we found that P. brasiliensis produces both PGs and LTs, using exogenous and endogenous sources of arachidonic acid and that both are important for fungus viability. Additionally, the results suggested that the fungus uses cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase (5-LO) metabolic pathways for PGs and LTs production, respectively. Here, we profound these studies evaluating whether PGs and LTs released by P. brasiliensis can be considered as authentic LTB4 and PGE2, i.e. similar to those detected for mammals. We also asked whether the fungus, in addition to PGE2 and LTB4, produces other classes of eicosanoids. Finally, we intended to definitively determine whether COX and 5-LO are the metabolic pathways used for this production. We found that fungus PGE2 and LTB4 ...

Orientador : Claudio Luiz Messias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T07:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lugli_Juverlande_M.pdf: 2361566 bytes, checksum: 66289e18433c71d51b1d736f0d409180 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: o objetivo do presente trabalho foi reunir duas linhagens diferentes de Metarhizium anisopliae, e através do ciclo parassexual obter diplóides e segregantes, os quais pudessem ser estudados quanto a produção de destruxlnas, utilizando-se decromatografta de camada delgada (CCD) e gasosa, sendo esta última acoplada ao espectrômetro de massa (GC-MS). Para isto foram utilizadas duas linhagens: uma de origem norte-americana (F-84) e a outra brasileira (E-9). Estas foram submetidas à ação da luz ultra-vloleta, de maneira a obter-se mutantes morfológicos e auxotróficos. Os mutantes obtidos foram: E-9 am-pir, F-84 vio-tia e F-84 vio-nic, os quais apresentaram-se bastante estáveis com uma frequência de reversão menor que 10-6 conídios. Testes de complementação de pigmentos dos mutantes foram conduzidos e pode-se verificar que os mesmos não produzem a enzima lacase, que tem ação na formação do pigmento selvagem, e assim sendo os diplóides não apresentaram pigmentação verde. Os diplódes foram formados dos cruzamentos de E-9 am-pir x F-84 vio-tia e E-9 ampir x F-84 vto-nic. Ambos apresentaram coloração de um dos parentais (amarelo); estes foram haploidizados com Cloroneb (150µg/ml), surgindo setores amarelos e violetas de formato irregular. Para as destruxinas, foram utilizados os extratos das linhagens selvagens, mutantes, diplóides e segregantes, que foram cromatografados em CCD, apresentando um Rf próximo ao padrão 0,50. Um deles demonstrou Rr abaixo do padrão, (O,44). Na espectrometria de massa, os íons formados determinaram a presença das destruxinas A e B dada pelas frações 576, 7-577,6 e 592,7-593,b respectivamente. Todos os extratos das linhagens analisadas produziram destruxinas, com excecão de dois segregantes S/B-1a e S/B-1b, em cujos extratos não encontradas as duas destruxinas B e A e B. respectivamente / Abstract: In this work the main object was the study of destruxlns production, by diploids and segregants obtained through parasexual cycle in Metarhizium anisopliae. The two parantal strains utilized were E-9 (Brazil) and F-84 (USA), which after induction with UV-radiation produced conidial color and auxotrophic mutants. The mutants E-9 am-pir, F-84 vio-tia and F-84 vio-nic were utilized because they showed a reversion frequency of auxotrophlc markers lower than 10-6 conidia. The diploids Isolated (E-9 am-pir x F-84 vio-tia and E-9 am-pir x F-84 vio-nic) were all yellow conidiating and showed yellow and violet irregular segregants on Chloroneb (150µg/ml) . As only yellow conidia diploids were isolated it can be suggested that they are not able to produce laccase, which Is the enzyme responsible for wild type (green) pigment formation. Additional tests for laccase production were made with color mutants growing together in a same Petri dish and tt could be deduced that leccase was absent. Destruxtins were analyzed by Thin-layer chromatography (TLC), showing Rf close to the pattern 0,50 and gas chromatography combined with mass spectrography. The mass spectrography showed the presence of destruxins A and B by lons formation in fractions 576,7-577,6 and 592,7-593,6 respectively. One of them showed Rf below to the pattern (0,44). Mass spectrography showed the presence of the destruxin A and B by fractions 576,7-577,& and 592,7-593,6 respectively. AI) the strains analysed produced destruxins, but the sectors S/B-la and S/B-lb, which extracts didn't have destruxlns B and A and B, respectively / Mestrado / Mestre em Biologia

Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Coorientador: Derlene Attili de Angelis / Banca: Márcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Odair Corrêa Bueno / Resumo: As formigas da tribo Attini são conhecidas como "cultivadoras de fungos" devido à complexa simbiose que mantém com um fungo basidiomiceto, cultivado como alimento. Além do fungo mutualista, cresce continuamente a lista de micro-organismos encontrados nos ninhos e na cutícula desses insetos. Recentemente, leveduras negras, relacionadas ao gênero Phialophora, foram consideradas componentes da simbiose formiga-fungo por comprometerem a habilidade das formigas em lidar com o micoparasita Escovopsis. Os fungos melanizados estão frequentemente relacionados a infecções humanas e, por isso, tem sido questionada a possibilidade desses insetos atuarem como vetores de dispersão de fungos negros patógenos no ambiente urbano. Esta dissertação marca o início de um esforço no qual procuramos investigar a diversidade de fungos negros presentes na cutícula de formigas cortadeiras, bem como verificar o grau de virulência das estirpes obtidas. Este último aspecto, ou seja, a possibilidade das formigas cortadeiras abrigarem e dispersarem micro-organismos patogênicos pode ser o início de um novo ramo de investigação. Analisando fêmeas aladas (içás) de Atta capiguara e A. laevigata, coletadas antes do início do voo nupcial, verificou-se que elas abrigam em suas cutículas uma comunidade diversa de fungos negros, como os gêneros Cladophialophora, Cladosporium, Cochliobolus, Exophiala, Ochroconis, Phaeococcomyces, Phialophora, Penidiella e Pyrenochaeta. Num segundo estudo, os resultados indicaram que leveduras negras do gênero Exophiala, presentes na cutícula de içás e em ambientes contaminados por derivados de petróleo, apresentam características que as tornam potenciais oportunistas humanos, como consistente crescimento a 40°C e produção de lacases. Espera-se que os resultados deste trabalho... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Attini ants are known as basidiomycete fungus cultivated as a food source. Besides the mutualistic fungus, there is a continuous growth in the list of microorganisms found in nests and cuticles of these insects. Phialophora-related black yeasts have recently been considered as components of the antfungus symbiosis by compromising the ability of ants to deal with the mycoparasite Escovopsis. Melanized fungi are frequently related to human infections and, therefore, the ability of these insects act as vectors for dispersal of pathogenic black fungi in the urban environment has been questioned. This dissertation makes a start at assessing the diversity of black fungi derived from the cuticle of leaf-cutting ants, as well as verifying the virulence degree of the strains obtained. The latter, i.e., the possibility of ants sheltering and dispersing pathogenic microorganisms can be the start of a new research field. Our microbial profile of Atta capiguara and A. laevigata winged females, collected prior to the mating flight, revealed that the cuticle of ants can harbor a diverse community of black fungi, such as the melanized genera Cladophialophora, Cladosporium, Cochliobolus, Exophiala, Ochroconis, Phaeococcomyces, Phialophora, Penidiella and Pyrenochaeta. Moreover, we demonstrated that Exophiala species, associated with gynes' cuticle and hydrocarbon-polluted environments, have characteristics that make them potential human opportunists, like consistent growth at 40°C and laccase production. Our results will certainly serve as a basis for more detailed future studies to explore how these fungi reach the interior of the nest, how they survive... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-06Bitstream added on 2014-06-13T19:37:29Z : No. of bitstreams: 1 garcia_lc_me_botfca.pdf: 627408 bytes, checksum: 6e8090157ad35eb0a16ecfae89cd91f4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A tecnologia de aplicação desenvolvida para produtos químicos têm sido utilizada para organismos entomopatogênicos sem o estudo prévio das necessidades de adaptações que visem a manutenção da viabilidade desses agentes de controle biológico. O experimento teve por objetivo avaliar a influência da pressurização e despressurização da calda de pulverização na viabilidade dos seguintes microrganismos entomopatogênicos: Metarhizium anisopliae, Bacillus thuringiensis, AgMNPV e Steinernema glaseri. Foi utilizado o sistema hidráulico de um pulverizador, sem filtros, equipado com ponta de pulverização de jato cônico JA-2, com 15 minutos de agitação da calda antes da coleta. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com sete tratamentos: pressurização da calda em zero; 175,8; 351,6; 527,4; 703,2; 1.054,9; 1.406,5 kPa (zero, 25, 50, 75, 100, 150 e 200 lbf.pol-2). A avaliação da viabilidade de M. anisopliae se deu através da porcentagem de conídios germinados. Para B. thuringiensis foi considerado o número de colônias formadas. A eficácia do AgMNPV foi estimada indiretamente, pela mortalidade causada às lagartas de Anticarsia gemmatalis no início do terceiro ínstar, alimentadas com dieta artificial impregnada com a suspensão viral. No experimento com o S. glaseri foi calculada a porcentagem de indivíduos vivos, determinada através de microscopia óptica, em lâmina de peters. Conclui-se que se pode pulverizar os entomopatógenos M. anisopliae, B. thuringiensis, AgMNPV e S. glaseri, até a pressão de 1.406,5 kPa, sem que haja perda na viabilidade desses organismos utilizados como agentes de controle biológico. / Application technology developed to chemical products has been employed for entomopathogenic organisms without the previous studies on the necessities of adaptations aiming at viability maintenance of these biological control agents. The objective of the research was to evaluate the influence of pressurization and decompression of spraying suspension in the viability of the following entomopathogenic microorganisms: Metarhizium anisopliae, Bacillus thuringiensis, AgMNPV and Steinernema glaseri. The sprayer hydraulical system was used without filters and equipped with JA-2 hollow-cone nozzle type with 15 minutes of spray agitation before it collects. The experimental design was completely randomized, with seven treatments: pressurization of spraying suspension at 0.0; 175.8; 351.6; 527.4; 703.2; 1,054.9 and 1,406.5 kPa. Evaluation of the viability of M. anisopliae was estimated by the percentage of conidia germinated. For B. thuringiensis, the number of colonies formed. Efficiency on AgMNPV was estimated indirectly, by means of mortality caused to velvet bean caterpillar (Anticarsia gemmatalis) in early third ínstar; the specimens were fed with artificial diet impregnated with viral suspension. For the experiment with the S. glaseri it was calculated the percentage of live specimens; observation were performed through optic microscopy, on Peters slide-blade. It was concluded that the entomopathogens M. anisopliae, B. thuringiensis, AgMNPV and S. glaseri can be sprayed up to the pressure of 1,406.5 kPa without loss in the viability of those organisms as agents of biological control.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-22Bitstream added on 2014-06-13T18:35:04Z : No. of bitstreams: 1 silva_rb_me_botfca.pdf: 752709 bytes, checksum: 1c8874b0cf7a904e4abe6060f9ec4cc0 (MD5) / A cultura do chá na região do Vale do Ribeira está localizada ao Sul do Estado de São Paulo, onde se concentra uma grande área de Floresta Mata Atlântica do Brasil. A ‘Queima dos fios’ causada pelo fungo Rhizoctonia binucleada (Ceratobasidium spp.; sin. Pellicularia koleroga) é a principal doença que ataca a cultura. A espécie deste fungo ainda não é totalmente conhecida, bem como as informações sobre sua biologia. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi elucidar aspectos da biologia do fungo, realizando a caracterização citomorfológica, cultural, patogênica e molecular de Rhizoctonia binucleada associada a queima dos fios do chá no Vale do Ribeira - SP. Em uma área de cultivo do chá, rodeado por um fragmento de Floresta Mata Atlântica, realizou-se a coleta de ramos e folhas atacadas pela queima do fio e o isolamento em laboratório, obtendo cinco isolados com características específicas de Rhizoctonia spp. Verificou-se que todos os isolados apresentaram dois núcleos por célula, sendo considerados binucleados. A indução da fase teleomórfica foi realizada, mas não houve sucesso na formação completa das estruturas sexuadas de Ceratobasidium spp., porém, houve escassa formação de himênio e metabasidios por alguns isolados, nos meios de cultura Batata dextrose ágar, Agua ágar, Corn meal ágar e Czapeck dox ágar, sob maior ocorrência na condição de fotoperíodo 12h luz/12h escuro a 24°C. Todos os isolados do chá não apresentaram interação de anastomose de hifas com os isolados padrões de Rhizoctonia binucleada GA-A, GA-Bo, GA-P e GA-Q, não pertencendo a estes grupos. A compatibilidade somática entre os isolados do chá apresentaram a formação de três grupos de compatibilidade somática:... / The tea culture in the Vale do Ribeira is located in south of Sao Paulo State which concentrates the large area of Brazil Atlantic Forest. The ‘Thread blight ' caused by the fungus binucleate Rhizoctonia (Ceratobasidium spp.; Sin. Pellicularia koleroga) is the main disease that attacks the culture. The species of this fungus is not yet fully known, as well as information about its biology. Thus, the aim of this study was to elucidate the fungus biology, by the characterization of cytomorphological, cultural, molecular and pathogenic binucleate Rhizoctonia associated with the tea thread blight in the Ribeira Valley - SP, Brazil. In a area of growing tea, surrounded by a fragment of Atlantic Forest was collect branches and leaves attacked by thread blight and forwarded by laboratory isolation, obtaining five isolates with specific characteristics of Rhizoctonia spp. It was verified that all isolates showed two nuclei per cell being considered binucleate. The teleomorph induction was performed, but there was no success in the complete formation of sexed Ceratobasidium sp structures. However, there was scarce formation of hymenium and metabasidias by some isolates in culture medium Potato dextrose agar, Water agar, Corn meal agar and Czapeck dox agar, under increased occurrence in photoperiod condition 12h light /12h dark at 24 ° C. All isolates of tea showed no interaction of hyphal anastomosis with the standard isolates of binucleate Rhizoctonia GA-A, GA-Bo, GA and GA-P-Q not belonging to these anastomosis groups. The somatic compatibility among isolates of tea showed the formation of three somatic compatibility groups: GCS-1, GCS-2 and GCS-1 among the five isolates showing similarity between the microscopic and macroscopic reactions. The morphological characteristics of the colonies also allowed the... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Carlos Gilberto Raetano / Resumo: A tecnologia de aplicação desenvolvida para produtos químicos têm sido utilizada para organismos entomopatogênicos sem o estudo prévio das necessidades de adaptações que visem a manutenção da viabilidade desses agentes de controle biológico. O experimento teve por objetivo avaliar a influência da pressurização e despressurização da calda de pulverização na viabilidade dos seguintes microrganismos entomopatogênicos: Metarhizium anisopliae, Bacillus thuringiensis, AgMNPV e Steinernema glaseri. Foi utilizado o sistema hidráulico de um pulverizador, sem filtros, equipado com ponta de pulverização de jato cônico JA-2, com 15 minutos de agitação da calda antes da coleta. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com sete tratamentos: pressurização da calda em zero; 175,8; 351,6; 527,4; 703,2; 1.054,9; 1.406,5 kPa (zero, 25, 50, 75, 100, 150 e 200 lbf.pol-2). A avaliação da viabilidade de M. anisopliae se deu através da porcentagem de conídios germinados. Para B. thuringiensis foi considerado o número de colônias formadas. A eficácia do AgMNPV foi estimada indiretamente, pela mortalidade causada às lagartas de Anticarsia gemmatalis no início do terceiro ínstar, alimentadas com dieta artificial impregnada com a suspensão viral. No experimento com o S. glaseri foi calculada a porcentagem de indivíduos vivos, determinada através de microscopia óptica, em lâmina de peters. Conclui-se que se pode pulverizar os entomopatógenos M. anisopliae, B. thuringiensis, AgMNPV e S. glaseri, até a pressão de 1.406,5 kPa, sem que haja perda na viabilidade desses organismos utilizados como agentes de controle biológico. / Abstract: Application technology developed to chemical products has been employed for entomopathogenic organisms without the previous studies on the necessities of adaptations aiming at viability maintenance of these biological control agents. The objective of the research was to evaluate the influence of pressurization and decompression of spraying suspension in the viability of the following entomopathogenic microorganisms: Metarhizium anisopliae, Bacillus thuringiensis, AgMNPV and Steinernema glaseri. The sprayer hydraulical system was used without filters and equipped with JA-2 hollow-cone nozzle type with 15 minutes of spray agitation before it collects. The experimental design was completely randomized, with seven treatments: pressurization of spraying suspension at 0.0; 175.8; 351.6; 527.4; 703.2; 1,054.9 and 1,406.5 kPa. Evaluation of the viability of M. anisopliae was estimated by the percentage of conidia germinated. For B. thuringiensis, the number of colonies formed. Efficiency on AgMNPV was estimated indirectly, by means of mortality caused to velvet bean caterpillar (Anticarsia gemmatalis) in early third ínstar; the specimens were fed with artificial diet impregnated with viral suspension. For the experiment with the S. glaseri it was calculated the percentage of live specimens; observation were performed through optic microscopy, on Peters slide-blade. It was concluded that the entomopathogens M. anisopliae, B. thuringiensis, AgMNPV and S. glaseri can be sprayed up to the pressure of 1,406.5 kPa without loss in the viability of those organisms as agents of biological control. / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328651.pdf: 3974382 bytes, checksum: bfb7bd8797ae99923d3c35c17fcdab1c (MD5) Previous issue date: 2014 / O consumo de ostras pode ser responsável pela veiculação de doenças para humanos, pois estes animais podem acumular substâncias tóxicas e microrganismos patogênicos em seus tecidos. Vírus entéricos humanos podem apresentar padrões distintos de acumulação nas ostras, dificultando que sejam removidos durante a depuração. Estudos da cinética de decaimento de contaminantes microbiológicos e químicos nas ostras, durante a depuração, são escassos. O objetivo desse trabalho foi estudar a dinâmica de aquisição e eliminação de contaminantes químicos e microbiológicos, no meio ambiente e durante os processos de depuração. Esta pesquisa abrangeu duas etapas distintas, envolvendo a alocação de ostras por 14 dias em quatro locais na baía de Florianópolis-SC: dois liberados ao cultivo (RIB-Ribeirão da Ilha e SAL-Santo Antônio de Lisboa) e dois impróprios (TAP-Tapera e BUC-estuário do rio Bücheler). Na primeira etapa (capítulo I) foi medida a contaminação ambiental destes locais e na segunda (capítulo II), realizada a contaminação (diferentes níveis) das ostras, para que fossem submetidas aos testes de depuração, com diferentes tratamentos (7 dias). No capítulo I foram analisadas: ostras, água e sedimento marinhos dos locais, sendo que as amostras procedentes diretamente do laboratório fornecedor das ostras (Laboratório de Cultivo de Moluscos Marinhos/UFSC-LCMM) funcionaram como o tempo zero da contaminação (T0 dia). Foram detectados: (1) Bactérias: E. coli na água do mar (acima de 43 UFC/100 mL em TAP e BUC) e Salmonella sp. nas ostras (em BUC), por cultura bacteriana; (2) Protozoários: Cryptosporidium nas ostras (TAP) e Giardia na água do mar (BUC), pela Imunoseparação Magnética e Imunofluorescência tendo esta última sido sequenciada para a confirmação da espécie (G.duodenalis); (3) Vírus entéricos: Adenovírus Humano/HADV (nos quatro locais), Vírus da Hepatite A nas ostras (BUC), Norovírus Humano (NoV) GI nas ostras (TAP e BUC) e GII na água do mar (BUC), Poliomavírus-JC nas ostras (LCMM), todos por (RT) qPCR. Também se verificou a ausência de HAdV infecciosos nas ostras, por teste de Placa de Lise. (4) Pesticidas Organoclorados; Hidrocarbonetos Alifáticos/HAs e Policíclicos Aromáticos/HPAs; Alquibenzenos Lineares/LABs foram detectados em vários locais, por Cromatografia Gasosa, nas ostras e sedimentos. No capítulo II, somente ostras foram analisadas, antes e durante a depuração. Foram utilizadas lâmpadas UV (18 e 36 W) na descontaminação das águas de depuração e comparadas as cinéticas de decaimento dos contaminantes nos tecidos das ostras. Parte dos animais de cada local, foi artificialmente contaminada com HAdV2 e Norovírus Murino/MNV-1, funcionando como controles positivos de contaminação viral durante as depurações. Não houve eliminação dos HAdV e protozoários das ostras durante a depuração. MNV-1 foi eliminado após quatro dias de depuração. Também foram detectados HAs, HPAs e LABs, antes e após as depurações. Concluídos os testes, depuradoras com UV 36 W foram disponibilizadas em quatro restaurantes em Florianópolis e realizadas análises virais das ostras depuradas por quatro dias (43 amostras). Somente HAdV foi detectado (uma amostra) e não estava infeccioso. Laudos das análises foram entregues aos comerciantes. As contaminações detectadas ameaçam a produção de ostras em Florianópolis, sendo necessário o aumento na fiscalização nas regiões de cultivo. Embora a depuração tenha removido o MNV-1 (vírus com genoma de RNA, como a maioria dos vírus entéricos humanos veiculados pelas ostras), não eliminou outros patógenos e compostos orgânicos investigados. Além dos ensaios descritos na tese, também foram realizadas outras pesquisas (Apêndice A), referentes à bioacumulação diferencial das espécies de NoV GI e Sapovírus em ostras e inativação termal de Rotavírus em mexilhões durante o cozimento. Estas pesquisas adicionais foram realizadas durante estágio doutoral, 11 meses, no Institut Français de Recherche pour l'Exploitation de la Mer (IFREMER), na França.<br> / Abstract: The consumption of oysters may be responsible for transmission of diseases to humans because these animals can accumulate toxic substances and pathogenic microorganisms in their tissues. Human enteric viruses may exhibit distinct patterns of accumulation in oysters, making it difficult to be removed during depuration. Studies of the decay kinetics of microbiological and chemical contaminants in oysters, during depuration, are scarce. The aim of this work was to study the dynamics of acquisition and disposal of chemical and microbiological contaminants in the environment and during the process of depuration. This research comprised two stages, involving the allocation of oysters for 14 days in four locations in the Bay of Florianópolis-SC: two released for cultivation (RIB-Ribeirão da Ilha and SAL-Santo Antonio de Lisboa) and two improper (TAP-Tapera and BUC-Bücheler river estuary). In the first step (Chapter I), environmental contamination of these sites was measured and in the second (Chapter II), held contamination (different levels) of oysters, that were submitted to the depuration tests with different treatments (7 days). In the Chapter I, were analyzed: oyster, seawater and marine sediments. All samples obtained from the oyster supplier (Laboratory of Cultivation of Marine Mollusks/UFSC-LCMM) were considered time zero of contamination (T0 day). Were detected: (1) Bacteria: E. coli in seawater (above 43 CFU/100 mL in TAP and BUC) and Salmonella sp. in oysters (in BUC) by bacterial culture; (2) Protozoa: Cryptosporidium in oysters (TAP) and Giardia in seawater (BUC), by Immunomagnetic Separation and Immunofluorescence, and this was also been sequenced to confirm the species (G. duodenalis); (3) Enteric Viruses: Human Adenovirus / HAdV (in four locations), Hepatitis A virus in oysters (BUC), Human Norovirus GI (NoV GI) in oysters (TAP and BUC) and GII in seawater (BUC), Polyomavirus-JC in oysters (LCMM), all by (RT) qPCR. It was also verified the absence of infectious HAdV oysters by the Plaque Assay. (4) Organochlorine Pesticides; Aliphatic/AHs and Polycyclic Aromatic/PAHs Hydrocarbons; Linear alkylbenzenes/LABs were detected in several locations, by Gas Chromatography, in oysters and sediments. In Chapter II, only oysters were examined before and during depuration. UV lamps (18 and 36 W) were used in the decontamination of water and the kinetics of decay of contaminants was compared, in the oyster tissues. Part of the animals from each sitewas artificially contaminated with HAdV2 and Norovirus Murino/MNV-1, acting as positive controls of viral contamination during the depurations. There was no elimination of HAdV and protozoa from oysters during depuration. MNV-1 was eliminated after four days of depuration. AHs, LABs and PAHs were detected before and after the depurations. After the end of the laboratory tests, the depuration tanks with UV 36 W were allocated in four restaurants, in Florianopolis and viral analyzes of oysters depurated during four days (43 samples) were performed. Only HAdV was detected (one sample) and was not infectious. Reports of analyzes were delivered to traders. The contamination pointed hazards for oyster consumption and showed the importance for continuous surveillance in mollusks growing areas. Although depuration removed the MNV-1 (viruses with RNA genomes, such as most human enteric viruses transmitted by oysters) it did not eliminate other pathogens and organic compounds investigated. In addition to the tests described in the thesis, other research (Appendix A) related to differential bioaccumulation of NoV GI and Sapovirus species in oysters and the thermal inactivation of Rotavirus in mussels during cooking were performed. These additional studies were conducted during the doctoral stage during 11 months, at the Institut Français de Recherche pour l'Exploitation de la Mer (IFREMER), France.