As plantas pertencentes à família das leguminosas apresentam um grande interesse econômico, sendo que o Brasil é um país com vasta utilização de plantas desta família. Neste contexto, destaca-se a leguminosa Phaseolus vulgaris L. popularmente conhecida como feijão, que contém uma boa fonte de constituintes bioativos. Espécie nativa da América Central e dos Andes peruanos possui grande importância econômica para o Brasil. Em sua composição química podemos encontrar os flavonóides. Inúmeros artigos científicos descrevem as atividades dos flavonóides como antioxidantes, antimutagêncio, anticarcinogênico e na captação de nitrogênio durante o desenvolvimento da planta. Sendo esta leguminosa um dos alimentos mais consumidos no mundo e de larga importância econômica, o presente trabalho visou avaliar o perfil cromatográfico do extrato metanólico de 47 cultivares de feijão através da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e também a validação do seu método. O material vegetal, sementes, teve seu teor de umidade estabelecido pelo método gravimétrico. Através do perfil cromatográfico das sementes dos cultivares de feijão, foi possível identificar a presença de flavonóides como a astragalina, um heterosídeo do canferol. O método foi devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) de acordo com os métodos preconizados na literatura. Os cultivares TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce e Amarelo Iolanda, foram os que apresentaram teor maior de astragalina, demonstrando que os feijões de cor possuem maior composição de deste composto. / Plants belonging to the legume family have a big economic interest, being Brazil is a country with extensive use of plants in this family. In this context, we highlight the legume Phaseolus vulgaris L. popularly known as beans, which are a good source of bioactive compounds. This species is native of southern Brazil and the main food consumed by the population. In its chemical composition can meet the flavonoids. Numerous scientific articles describing the activities of flavonoids as antioxidants, antimutagênic, anticarcinogenic and nitrogen uptake during plant development. Since this is a legume consumed more food in the world and of great economic importance, this study sought to evaluate the chromatographic profile of the methanol extract of 47 cultivars of beans through the technique of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and also the validation of their method. The plant material, seeds, water content was established by gravimetric method. Through the chromatographic profile of the seeds of bean cultivars, it was possible to identify the presence of flavonoids and astragalin, a kaempferol heteroside. The method was validated for High Performance Liquid Chromatography (HPLC) according to the methods suggested in the literature. The cultivars with colored TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce and Amarelo Iolanda, were those with a higher content of astragalin, demonstrating that colored beans have a higher composition of astragalin.

As diferentes intensidades de luz ou até mesmo a sua qualidade podem desempenhar um papel importante em algumas das principais vias metabólicas envolvidas na síntese de compostos bioativos. A radiação ultravioleta B (UV-B), além de influenciar mudanças no DNA, na atividade fotossintética e no crescimento das plantas, pode induzir a síntese e o acúmulo de metabólitos secundários. Assim, para investigar a efetividade da radiação UV-B suplementar na pós-colheita, cáqui (Diospyros kaki) e goiaba (Psidium guajava) foram submetidos a 48 horas de tratamento e posteriormente analisados em relação ao seu conteúdo de carotenoides. O acúmulo de carotenoides ocorreu de forma significativa para ambas as frutas, porém em momentos diferentes. A fim de entender os efeitos exercidos pela radiação UV-B suplementar em alimentos fontes de outros compostos bioativos, maçãs (Malus domestica) foram submetidas a 36 horas de tratamento e acompanhadas por 21 dias de armazenamento. Os parâmetros de qualidade durante o armazenamento das frutas não foram influenciados pela radiação UV-B, ocorrendo apenas perda de firmeza e de peso em todas as frutas As diferentes classes de compostos fenólicos identificados e quantificados por HPLC-MS apresentaram comportamentos diversos após o tratamento. Ácidos hidroxicinâmicos e antocianinas foram positivamente afetados pela suplementação de radiação UV-B. Para avaliar os efeitos da radiação UV-B suplementar sobre os compostos bioativos durante a pré-colheita de alimentos, alfaces verdes e roxas (Lactuca sativa) foram submetidas a 1 hora de tratamento por dia durante duas semanas. O conteúdo de carotenoides nas alfaces verdes e de compostos fenólicos nas alfaces roxas foi significativamente maior após o tratamento com radiação suplementar. Neste contexto, a radiação UV-B pode ser considerada uma tecnologia promissora no que diz respeito à modulação de compostos bioativos em alimentos, tanto durante o cultivo quanto após a colheita. / Different light intensities or even their quality may play an important role in some of the major metabolic pathways involved in the synthesis of bioactive compounds. In addition to influencing changes in DNA, photosynthetic activity and plant growth, ultraviolet B radiation (UV-B) may induce the synthesis and accumulation of secondary metabolites. Therefore, to investigate the effectiveness of post-harvest UV-B radiation, kaki (Diospyros kaki) and guava (Psidium guajava) were submitted to 48 hours of treatment and then analyzed for their carotenoid content. The accumulation of carotenoids occurred in a significant way for both fruits, but at different times. In order to understand the effects exerted by supplemental UV-B radiation on food sources of other bioactive compounds, apples (Malus domestica) were subjected to 36 hours of treatment and accompanied by 21 days of storage. The quality parameters during fruit storage were not influenced by UV-B radiation, with only loss of firmness and weight occurring in all fruits. The different classes of phenolic compounds identified and quantified by HPLC-MS showed different behavior after treatment. Hydroxycinnamic acids and anthocyanins were positively affected by the supplementation of UV-B radiation. To evaluate the effects of supplemental UV-B radiation on bioactive compounds during food cultivation, green and red lettuces (Lactuca sativa) were subjected to 1 hour of treatment per day for two weeks. The carotenoid content in green lettuce and phenolic compounds in red lettuce was significantly higher after treatment with supplementary radiation. In this context, UV-B radiation can be considered a promising technology for the modulation of bioactive compounds in food, both during and after harvest.

Aproximadamente vinte espécies do gênero Hypericum (Guttiferae) têm ocorrência natural no Brasil, e concentram-se principalmente na região Sul do País. Considerando a importância deste gênero como fonte de substâncias com variadas atividades biológicas, tais como analgésica, antidepressiva, antimicrobiana, antiviral, antiproliferativa, entre outras, o presente trabalho teve como objetivos analisar a constituição química e o potencial antioxidante de espécies de Hypericum, desenvolver protocolos para manutenção de algumas espécies nativas através de culturas de tecidos e células e validar metodologia para quantificação de benzopiranos em H. polyanthemum proveniente de cultivo a campo, in vitro e aclimatizado. Utilizando-se métodos cromatográficos e espectroscópicos, foram isolados e identificados o ácido fenólico ácido 5-O-cafeoil-1-metoxi-quínico e os flavonóides 3,7-dimetil-quercetina, 3-Ometil- quercetina, I3,II8-biapigenina, guaijaverina, isoquercitrina e hiperosídeo, todos derivados da quercetina e obtidos da fração acetato de etila das partes aéreas de H. ternum. Ainda desta espécie, porém da fração n-hexano das raízes, obteve-se o derivado de floroglucinol uliginosina B. De H. myrianthum foram isolados e identificados os flavonóides quercetina e hiperosídeo, da fração metanólica das partes aéres, bem como os derivados de floroglucinol japonicina A e uliginosina B, fração n-hexano das raízes. Através do método colorimétrico de Folin-Ciocalteau, foram quantificados os teores de fenólicos totais das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum e H. polyanthemum, verificando-se teores variando entre 37,40 a 228,36 mg EQ/g de extrato seco. Utilizando as técnicas de TRAP (Total Radical-trapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGV (Oxygen Radical Absorbance Capacity) e reação bioautográfica e espectrofotométrica com radicais DPPH• (2,2 difenil-1-picril-hidrazil) evidenciou-se que extratos brutos metanólicos, e frações metanólicas e n-hexânicas das espécies H. caprifoliatum, H. carinatum H. myrianthum e H. polyanthemum, bem como produtos isolados de espécies de Hypericum nativas do Estado apresentam potencial antioxidante. A regeneração in vitro foi obtida em meio Murashige & Skoog modificado (MΔ) para as espécies H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento 6-benzilamino-purina (BAP), ácido naftaleno-acético (ANA) e ácido 2,4 dicloro-fenóxi-acético (2,4-D). Plântulas dessas espécies foram posteriormente aclimatizadas com sucesso, sendo cultivadas a campo. As espécies micropropagadas demonstraram perfis químicos qualitativamente similares aos apresentados pelas plantas desenvolvidas no campo, de modo que o cultivo in vitro apresenta-se como uma alternativa interessante aos métodos convencionais de produção de biomassa para extração de metabólitos secundários bioativos. Culturas de calos foram estabelecidas em meio MΔ para H. myrianthum, H. polyanthemum e H. ternum, utilizando diferentes combinações e concentrações dos reguladores de crescimento cinetina (CIN), BAP, ANA e 2,4-D. Considerando-se as importantes atividades biológicas de produtos obtidos de H. polyanthemum foi estabelecida uma metodologia para quantificação, através da técnica de CLAE, de benzopiranos no extrato apolar desta planta, espécie de ocorrência restrita. A validação analítica foi avaliada conforme o preconizado por normas reconhecidas internacionalmente, com análise dos parâmetros linearidade, seletividade, precisão (repetibilidade e precisão intermediária), exatidão e limites de detecção e quantificação, demonstrando resultados coerentes com os exigidos pela legislação vigente. Foram evidenciadas variações no teor de benzopiranos na planta micropropagada, aclimatizada e desenvolvida a campo, provavelmente devido a fatores, que vão desde a regulação endógena de processos fisiológicos até variações sazonais no cultivo. / Approximately twenty species of Hypericum genus (Guttiferae) are native of Brazil, occurring mainly in the South region. Considering the importance of the genus as a source of compounds with different biological activities, such as analgesic, antidepressant, antimicrobial, antiviral, antiproliferative, among others, the objectives of this work were to evaluate the phytochemistry and antioxidant potential of some Hypericum species, to develop protocols for the maintenance of the species through in vitro cultures and to validate a technique to quantify the benzopyrans in H. polyanthemum grown in field, in vitro and acclimatized plants. Chromatographic and spectroscopic techniques were used for the isolation and identification of the phenolic acid 5-O-caffeoyl-1-methyl ester-quinic acid and the flavonoids quercetin 3,7-dimethyl ether, quercetin 3-methyl ether, I3,II8-biapigenin, guaijaverin, isoquercitrin and hyperoside, all of them quercetin derivatives and obtained from ethyl acetate fraction of H. ternum aerial parts. From n-hexane fraction of the roots of this species the phloroglucinol derivative uliginosin B was obtained. The flavonoids quercetin and hyperoside (from aerial parts of methanolic fraction), and the phloroglucinol derivatives japonicin A and uliginosin B (from n-hexane fraction of roots) were isolated from H. myrianthum. Total phenol concentration ranging from 37.40 to 228.36 mg QE/g dry extract (Folin–Ciocalteu colorimetric method) in H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum was measured. The antioxidant potential of the extracts obtained from H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum and H. polyanthemum and isolated compounds was determined using TRAP (Total Radicaltrapping Antioxidant Parameter), ORAC-PGR (Oxygen Radical Absorbance Capacity) and bioautographic and spectrofotometric reaction with DPPH• (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl radical techniques. In vitro regeneration of H. campestre, H. caprifoliatum, H. carinatum, H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum was obtained in Murashige & Skoog modified medium (MΔ) supplemented with differents combinations and concentrations of the growth regulators 6-benzylaminopurine (BAP), α-naphthalene acetic acid (ANA) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Plantlets were acclimatizated and transferred to open field. The micropropagated species showed chemical pattern qualitatively similar to field grown plants, demonstrating that the in vitro cultures are an alternative to conventional methods for biomass production of bioactive secondary metabolites. Callus cultures of H. myrianthum, H. polyanthemum and H. ternum were established in MΔ medium using different combinations and concentrations of kinetin (CIN), BAP, ANA and 2,4-D. Considering the important biological activities of the benzopyrans isolated from H. polyanthemum, an HPLC quantification methodology was established. Analytical validation was performed according to international rules (linearity, selectivity, precision, accuracy, detection and quantitation limits) showing results coherent with those required by the current legislation. Variation of the benzopyrans concentration was observed among the micropropagated plantlet, acclimatizated and field grown plants, probably due to factors as endogenous regulation of physiological process and seasonal variation of the culture.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-30T14:47:31Z No. of bitstreams: 1 DissVMV.pdf: 2967521 bytes, checksum: 9bebee517d7d20c1b36810aa5e5744df (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T17:34:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVMV.pdf: 2967521 bytes, checksum: 9bebee517d7d20c1b36810aa5e5744df (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T17:34:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVMV.pdf: 2967521 bytes, checksum: 9bebee517d7d20c1b36810aa5e5744df (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T17:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissVMV.pdf: 2967521 bytes, checksum: 9bebee517d7d20c1b36810aa5e5744df (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / The enzymes involved in the conversion process of lignocellulosic biomass into second generation (2G) ethanol add a high cost to the process. Studies reported in the literature indicate that some metal ions, easily found in nature, improve the activity and stability of enzymes and the biomass saccharification process when added to the enzymatic cocktail. In this context, this work aimed to evaluate the strategy of addition of metal ions in the crude enzymatic extract in order to increase the enzyme activity and stability and to improve the saccharification process. For the production of (hemi)cellulase enzymatic complex step, a selected strain of Aspergillus niger was cultivated under solid-state fermentation (SSF), submerged fermentation (SmF) and sequential fermentation (FS). Enzyme production and thermostability were evaluated also considering the effects of pretreatment (using steam-explosion and liquid-hot-water) of the sugarcane bagasse used as carbon source and inducer. For endoglucanase and xylanase enzymes, cultivation under SSF favored production when using steam-exploded and liquid-hot-water pretreated bagasse (both washed). Removal of inhibitors from the pretreated biomass employed in the cultivation media was necessary, because the presence of phenolic compounds restricted fungal growth. The findings revealed that endoglucanase and β-glucosidase produced under SSF were less prone to thermal deactivation. From these results, enzyme complex produced by SSF using the hydrothermal bagasse was selected to evaluate the influence of the divalent metal ions Ca, Co, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, Zn in two concentrations (2 and 10 mM) on enzymatic activity and stability. Most of the ions influenced differently the enzymatic activity and stability, at both concentrations. The most favorable influence was obtained by the Mn+2 ion, increasing by 57% the endoglucanase activity and maintaining the enzyme stable for 72 hours, besides it also showed no negative effects on β-glucosidase and xylanase. The Mn+2 ion was then selected for the saccharification of sugarcane bagasse submitted to different pretreatments. The addition of Mn2+ ion (10 mM) in the saccharification process using enzymatic extracts produced "in house" proved to be very effective by increasing the release of glucose up to 120% when using the acid pretreated bagasse (Bác). The increase was 55% for the washed exploded bagasse (BEXL) and 70% for the liquid-hot-water pretreated bagasse (BHT). Therefore, it was possible to validate that the addition of metal ions is able to positively influence the activity and stability of enzymes, and also the process of enzymatic saccharification of lignocellulose biomass. / As enzimas envolvidas no processo de degradação da biomassa lignocelulósica para a produção do etanol de segunda geração (2G) agregam um alto custo ao processo. Estudos já reportados na literatura indicam que alguns íons metálicos, facilmente encontrados na natureza, ao serem adicionados ao coquetel enzimático atuam na melhoria da atividade e estabilidade das enzimas e no processo de sacarificação da biomassa. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar a estratégia de adição de íons metálicos ao extrato enzimático bruto com o intuito de aumentar a atividade e estabilidade enzimática e a melhoria na conversão do processo de sacarificação. Para a etapa de seleção do complexo (hemi)celulásico foi utilizada uma cepa selecionada de Aspergillus niger cultivada em fermentação em estado sólido (FES), fermentação submersa (FSm) e fermentação sequencial (FS). A produção de enzimas e a termoestabilidade foram avaliadas considerando os efeitos do pré-tratamento (explosão a vapor e hidrotérmico) do bagaço de cana-de-açúcar utilizado como fonte de carbono e indutor. A produção de endoglucanase e xilanase foi favorecida pelo cultivo em FES a partir do bagaço explodido e hidrotérmico (submetidos ao processo de lavagem). A remoção de inibidores da biomassa prétratada mostrou-se necessária, pois a presença de compostos fenólicos restringiu o crescimento fúngico em FES. Os resultados revelaram que endoglucanase e β-glicosidase produzidas sob FES foram menos propensas à desativação térmica. A partir desses resultados, foi selecionado o complexo enzimático produzido por FES utilizando o bagaço hidrotérmico lavado, para avaliação da influência dos íons metálicos bivalentes Ca, Co, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, Zn em duas concentrações (2 e 10 mM) na atividade e estabilidade enzimática. A maioria dos íons metálicos utilizados influenciou, de forma distinta, a atividade e estabilidade enzimática em ambas as concentrações para as enzimas estudadas. O íon Mn2+ se destacou, propiciando um aumento de 57% na atividade de endoglucanase e mantendo a enzima estável por 72 horas, além disso não apresentou efeito negativo para β-glicosidase e xilanase. Assim, o íon Mn2+ foi selecionado para o estudo da sacarificação dos bagaços de cana submetidos a diferentes pré-tratamentos. A adição do íon Mn2+ (10 mM) no processo de sacarificação utilizando extratos enzimáticos produzidos “in house” mostrou-se bastante eficaz no aumento da liberação de glicose, com ganhos percentuais de até 120% para o bagaço pré-tratado em meio ácido (Bác). Para o bagaço explodido lavado (BEXL) o aumento foi de 55 % e para o hidrotérmico (BHT) foi de 70%. Desse modo, foi possível validar que a adição de íons metálicos é capaz de influenciar positivamente tanto a atividade e estabilidade, como o processo de sacarificação enzimática da biomassa lignocelulósica.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-01-30T12:53:53Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 658528 bytes, checksum: ffd305cbccb6b8d7a75431c6f5b47b01 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T12:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 658528 bytes, checksum: ffd305cbccb6b8d7a75431c6f5b47b01 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Phenolic compounds are one of the major classes of secondary metabolites of plants and can be categorized into several classes, including phenolic acids, flavonoids and tannins. Several phenolic compounds have shown antimicrobial properties and capability to inhibit the biofilm formation by pathogenic bacteria, including Staphylococcus aureus. This study evaluated the efficacy of phenolic compounds in inhibiting biofilm formation of S. aureus. Flavonoids have been tested hesperetin, hesperidin, myricetin, myricitrin, phloretin, phloridzin and the tannins tannic acid. RN4220 and S. aureus AS-119B strains, which overexpress efflux protein genes were used as test strain. The S. aureus ATCC259233 strain which does not overexpress genes related to efflux proteins was used in tests. The minimum inhibitory concentration (MIC) of phenolic compounds was determined by the microdilution in broth method, while the minimum concentration for biofilm inhibition (MICB50) was determined by the microdilution in broth method with quantification of biofilm formation by absorbance at 595 nm. The tested phenolic compounds at 512 μg ml-1 showed no inhibitory activity on the growth of the strains tested; however, at lower concentrations showed inhibitory effects on biofilm formation by these same strains, the MBIC50 values varying between 1 to 256 μg ml-1, with lower values (1 and 2 μg ml-1) being observed against S. aureus RN-4220. Aglycone flavonoids showed lower MICB50 values than their respective glycone forms. Myricetin, hesperetin, phloretin and tannic acid exhibited biofilm formation inhibition > 70% for S. aureus RN- 4220. The results indicate that the tested phenolic compounds have the potential of inhibiting biofilm formation by S. aureus strains that overexpress efflux pumps. / Os compostos fenólicos formam uma das principais classes de metabólitos secundários de plantas e podem ser categorizados em várias classes, incluindo os ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. Diversos compostos fenólicos têm demonstrado propriedades antimicrobianas e de inibição da formação de biofilmes por bactérias patogênicas, incluindo Staphylococcus aureus. Este estudo avaliou a eficácia de compostos fenólicos na inibição da formação de biofilmes por S. aureus. Foram testados os flavonoides hesperidina, hesperetina, miricitrina, miricetina, floredzina, floretina e o tanino ácido tânico. As cepas S. aureus RN4220 e S. aureus AS-119B que superexpressa genes para proteínas de efluxo foram utilizadas como cepas teste. Ainda, a cepa S. aureus ATCC259233, que não superexpressa genes conhecidos relacionados à bomba de efluxo, foi utilizada nos ensaios. A concentração inibitória mínima (CIM) dos compostos fenólicos foi determinada por meio do método de microdiluição em caldo, enquanto a concentração mínima inibitória do biofilme (MBIC50) foi determinada por meio do método de microdiluição em caldo seguida de quantificação da formação de biofilme a 595 nm. Os compostos fenólicos testados não apresentaram atividade antimicrobiana em concentrações igual ou inferiores a 512 μg.ml-1 frente as cepas testadas. Entretanto, esses mesmos compostos apresentaram capacidade de inibição da formação de biofilme por parte das cepas testadas, com os valores de MBIC50 variando de 1 a 256 μg.ml-1, onde os valores mais baixos (1 e 2 μg.ml-1) foram observados frente a S. aureus RN-4220. Os flavonoides agliconas apresentaram menores valores de MBIC50 que suas respectivas formas glicosiladas. Miricetina, hesperetina, floretina e ácido tânico apresentaram percentual de inibição da formação de biofilme > 70% para S. aureus RN- 4220. Os resultados mostram que os compostos fenólicos testados apresentam potencial de inibição da formação de biofilme em cepas de S. aureus que superexpressam genes para proteínas de efluxo.

Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-09T02:47:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-07-13T19:22:36Z (GMT) / Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-21T15:25:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-21T17:19:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T17:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Passiflora incarnata encontra-se entre as plantas medicinais mais estudadas no âmbito farmacológico, cujas propriedades medicinais são atribuídas principalmente aos seus fitoconstituintes, tais como compostos fenólicos, alcalóides e flavonoides. Já foi constatado que os fungos endofíticos, aqueles vivem no interior de plantas, compartilhando com as mesmas uma interação simbiótica. Estes endófitos estão presentes em todas as plantas e muitas vezes partilham dos mesmos metabólitos que sua hospedeira. Devido ao seu enorme potencial de exploração, os fungos endofíticos são considerados um dos mais importantes recursos para a obtenção de novos agentes terapêuticos, pois um grande número de metabólitos estruturalmente novos e biologicamente ativos tem sido relatado para esses organismos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar fungos endofíticos presentes em folhas de P. incarnata e avaliar seu potencial biotecnológico, quanto à presença de compostos fenólicos, flavonoides e atividade antioxidante. Das 120 folhas analisadas, um total de 315 fungos endofíticos foi obtido; foi possível identificar 16 táxons distintos, dentre eles Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp e representantes dos Mucoromycotina. A maioria dos isolados não apresentou esporulação. Os 60 endófitos utilizados nos ensaios produziram ao menos um composto fitoquímico, 60% (n=36) foram positivos para saponinas, 76% (n=46) para flavonoides, 93% (n=56) para compostos fenólicos, apenas 3% (n=2) para taninos, e nenhum fungo apresentou alcalóides no filtrado. O teor de flavonoides e fenóis totais do extrato de n-Butanol, determinado espectrofotometricamente revelou que a maioria dos fungos analisados foram bons produtores destes compostos, com destaque para os isolados Trichoderma sp./LMA 1684 e Aspergillus sp. 1/LMA 1720, com 213,69 mg.g-1 e 187,3 mg.g-1 , respectivamente, para flavonoides totais expressos em rutina, enquanto para fenóis totais os isolados LMA 1713 e LMA 1824, ambos fungos não esporulantes, apresentaram os teores 184,94 mg.g-1 e 187,05 mg.g-1 , respectivamente. Todos os endófitos apresentaram atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. O extrato butanólico do fungo Aspergillus versicolor/LMA 1705 (94%) foi maior que o padrão BHT (90,27%) e rutina (91,98%). A fração AcOEt e BuOH de cincos fungos selecionados apresentou metabólitos com atividade antioxidante, entre as amostras, a fração BuOH do fungo Trichoderma sp./LMA 1684 mostrou a atividade de eliminação do radical livre DPPH mais baixa (valor de IC50 de 304,18 mg/mL ), enquanto a fração AcOEt do fungo Chaetomium sp./LMA 1793 com um valor de IC50 de 0,21 mg/mL exibiu uma atividade antioxidante maior que os controles positivo BHT (0,42 mg/mL ), Rutina (0,25 mg/mL ), e Ácido Ascórbico (0,23 mg/mL). Foi realizada CG-EM da fração acetato de etila em cinco fungos previamente selecionados e foi constatada a presença do metabólito orcinol (3,19%) em Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-metoximetilfenol (4,79%), Sorbicillina (33,59%) e ergosterol (23,08%), presentes em Trichoderma sp./LMA 1684 e isopropenil-1,4-dimetil-1,2,3,3a,4,5,6,7-octahidroazuleno no endófito Fusarium sp. 4. O estudo mostrou um grande potencial de aplicação em biotecnologia dos endofíticos de P. incarnata. / Passiflora incarnata is among the most studied medicinal plants in the pharmacological field, whose medicinal properties are attributed mainly to its phytochemicals, such as phenolic compounds, alkaloids and flavonoids. It has been found that endophytic fungi, which are those living inside plants, share a symbiotic interaction with their hosts. These endophytes are present in all plants and often share the same metabolites as the plants they live. Due to their enormous potential for exploitation, endophytic fungi are considered one of the most important resources for obtaining new therapeutic agents, since a large number of structurally new and biologically active metabolites have been reported from these microorganisms. In this context, the objective of this work was to isolate endophytic fungi present in leaves of P. incarnata and to evaluate their biotechnological potential, regarding the presence of phytochemicals, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity. From a total of 120 leaves analyzed 315 endophytic fungi were obtained. It was possible to identify 16 distinct taxa, among them Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp. and Mucoromycotina representatives. Many showed no sporulation at all. All 60 endophytes used in the trials produced at least one phytochemical compound, 60% (n = 36) were positive for saponin, 76% (n = 46) for flavonoids, 93% (n = 56) for phenolic compounds, only 3% (n = 2) for tannins, and no one presented alkali in the filtrate. The total flavonoid and phenol contents of the n-Butanol extract, spectrophotometrically determined, showed that most of the analyzed fungi were good producers of these compounds, especially the isolate Trichoderma sp./LMA 1684 and Aspergillus sp. 1/LMA 1720 213.69 mg.g-1 and 187.3 mg.g-1 respectively, for total flavonoids expressed in rutin, and for total phenols the isolate LMA sp. 6 and LMA sp. 26 with 184.94 mg.g-1 and 187.05 mg.g-1 respectively. All endophytes presented antioxidant activity against free radical DPPH. Butanolic extract of the fungus Aspergillus versicolor/LMA 1720 (94%) was higher than the BHT (90.27%) and routine (91.98%) standard. The AcOEt and BuOH fraction of five fungi presented metabolites with antioxidant activity, among the samples, the BuOH fraction of the Trichoderma sp./LMA 1684. showed the lowest free radical DPPH elimination activity (IC50 value of 304.18 mg/mL), while the AcOEt fraction of Chaetomium sp./LMA 1793 with an IC50 value of 0.21 mg/mL showed better antioxidant activity than the BHT (0.42 mg/mL), rutin (0.25 mg/mL), and ascorbic acid (0.23 mg/mL). CG-MS of the ethyl acetate fraction was performed in five previously selected fungi and the presence of the orcinol (3.19%) in Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-methoxymethylphenol (4.79%), Sorbicillin (33.59%) and ergosterol (23.08%), present in Trichoderma sp./LMA 1684 and isopropenyl-1,4-dimethyl-1,2,3,3a, 4,5,6,7-octahydroazulene in the endophyte Fusarium sp. 4/LMA 1719. This study highlighted a great biotechnological application of the P. incarnata endophytes.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2015-05-26T15:04:31Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T15:04:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) Previous issue date: 2015-04-01 / Phenolic compounds are a major class of plant secondary metabolites synthesized for plant and adaptation to environmental stress defense. Are divided into three groups: phenolic acids, flavonoids and tannins. Have been proposed as having a variety of biological effects on human health and microorganisms such as S. aureus. Cases of infections caused by strains of S. aureus multi drug resistant (MDR) has increased over the years. Among the strategies to combat resistance of S. aureus to antibiotics, is the discovery of so-called modifiers resistance (Resistance-Modifying Agents - RMA). In this study, we evaluated the potential modulator and synergistic effect of flavonoids, tannins and phenolic acid on antibiotic activity norfloxanina (NOR), tetracycline (TET) and erythromycin (ERI) in strains of S. aureus. Six flavonoids have been tested - O-glycoside and C-glycoside - and their aglycone derivatives, two tannins (gallotannin and ellagitannin), phenolic acids (hydroxydiphenic acid and cinnamic acid derivatives). The compounds tested showed no antimicrobial activity at 128 μg/mL (MIC between 256 and 512 μg/mL). In the modulation test, the O-glycosylated flavonoids showed no reducing effect of the MIC of antibiotics tested, however, its aglycone derivatives reduced the MIC in the NOR sixteen fold (8 to 128 μg/mL), in contrast, the Cglycosylated flavonoids, quercetin and myricetin, reduced the MIC in the NOR up to four fold (32 to 128 μg/mL) and their aglycone derivatives showed no reducing effect MIC of the tested antibiotics; the hexahydroxydiphenic acid (gallic acid) showed no reducing effect of MIC of the tested antibiotics; among the cinnamic acid derivatives tested, only 3-methoxycinnamic acid, 3,4-dimethoxycinnamic acid and 3,4,5-trimethoxycinnamic acid reduced the MIC in the NOR (64 to 128 μg/mL), while the 3-methoxycinnamic acid presented reducing effect of tetracycline MIC (64 to 32 μg/mL); the ellagitannin (ellagic acid) showed no reducing effect of MIC of antibiotics tested, already the gallotannin (tannic acid - TA) reduced thirty-two fold the MIC NOR (128 to 4 μg/mL), the test checkerboard TA had effect synergistic when applied in combination with NOR (FICI = 0.15) TA MIC decreased from 512 to 64 μg/mL (eight fold) while the MIC of NOR decreased from 128 to 4 μg/mL (thirty-two fold). The results demonstrate that the phenolic compounds have a potential application as an adjunct to antibiotics, particularly when in combination with NOR. / Os compostos fenólicos constituem uma das principais classes de metabólitos secundários de plantas, sintetizados para a defesa vegetal e adaptação ao estresse ambiental. Estão subdivididos em três grupos: ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. Têm sido propostos como tendo uma variedade de efeitos biológicos na saúde humana e sobre microrganismos como S. aureus. Casos de infecções provocadas por cepas de S. aureus multi droga resistentes (MDR) têm aumentando ao longo dos anos. Dentre as estratégias de combate à resistência de S. aureus a antibióticos, está a descoberta dos chamados agentes modificadores da resistência (RMA- resistance-modifying agents). Neste estudo, avaliamos o potencial modulador e efeito sinérgico de flavonoides, taninos e ácido fenólicos sobre a atividade antibiótica de norfloxanina (NOR), tetraciclina (TET) e eritromicina (ERI) em linhagens de S. aureus. Foram testados seis flavonoides - O-glicosídeo e C-glicosídeo - e seus derivados aglicona, dois taninos (galotanino e elagitanino), ácidos fenólicos (ácido hidroxidifênico e derivados do ácido cinâmico). Os compostos testados não apresentaram atividade antimicrobiana a 128 μg/mL (CIM entre 256 e 512 μg/mL). No teste de modulação, os flavonoides O-glicosilados não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, no entanto, seus derivados aglicona reduziram a CIM da NOR em até dezesseis vezes (128 para 8 μg/mL), em contra partida, os flavonoides C-glicosilados, miricetrin e quercetrin, reduziram a CIM da NOR em até quatro vezes (128 para 32 μg/mL) e os seus derivados aglicona não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; o ácido hexahidroxidifênico (ácido gálico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; dentre os derivados do ácido cinâmico ensaiados, apenas o ácido 3-metoxicinâmico, ácido 3,4-dimetoxicinâmico e ácido 3,4,5-trimetoxicinâmico reduziram a CIM da NOR (128 para 64 μg/mL), enquanto o ácido 3- metoxicinâmico, apresentou efeito redutor da CIM da tetraciclina (64 para 32 μg/mL); o elagitanino (ácido elágico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, já o galotanino (ácido tânico – AT) reduziu trinta e duas vezes a CIM da NOR (128 para 4 μg/mL), no teste checkerboard o AT apresentou efeito sinérgico quando aplicado em combinação com NOR (ICIF = 0,15) CIM do AT diminuiu de 512 para 64 μg/mL (oito vezes), enquanto a CIM da NOR diminuiu de 128 para 4 μg/mL (trinta e duas vezes). Os resultados obtidos demonstram que compostos fenólicos, possuem um potencial de aplicação como adjuvante de antibióticos, particularmente quando em uso combinado com NOR.

As diferentes intensidades de luz ou até mesmo a sua qualidade podem desempenhar um papel importante em algumas das principais vias metabólicas envolvidas na síntese de compostos bioativos. A radiação ultravioleta B (UV-B), além de influenciar mudanças no DNA, na atividade fotossintética e no crescimento das plantas, pode induzir a síntese e o acúmulo de metabólitos secundários. Assim, para investigar a efetividade da radiação UV-B suplementar na pós-colheita, cáqui (Diospyros kaki) e goiaba (Psidium guajava) foram submetidos a 48 horas de tratamento e posteriormente analisados em relação ao seu conteúdo de carotenoides. O acúmulo de carotenoides ocorreu de forma significativa para ambas as frutas, porém em momentos diferentes. A fim de entender os efeitos exercidos pela radiação UV-B suplementar em alimentos fontes de outros compostos bioativos, maçãs (Malus domestica) foram submetidas a 36 horas de tratamento e acompanhadas por 21 dias de armazenamento. Os parâmetros de qualidade durante o armazenamento das frutas não foram influenciados pela radiação UV-B, ocorrendo apenas perda de firmeza e de peso em todas as frutas As diferentes classes de compostos fenólicos identificados e quantificados por HPLC-MS apresentaram comportamentos diversos após o tratamento. Ácidos hidroxicinâmicos e antocianinas foram positivamente afetados pela suplementação de radiação UV-B. Para avaliar os efeitos da radiação UV-B suplementar sobre os compostos bioativos durante a pré-colheita de alimentos, alfaces verdes e roxas (Lactuca sativa) foram submetidas a 1 hora de tratamento por dia durante duas semanas. O conteúdo de carotenoides nas alfaces verdes e de compostos fenólicos nas alfaces roxas foi significativamente maior após o tratamento com radiação suplementar. Neste contexto, a radiação UV-B pode ser considerada uma tecnologia promissora no que diz respeito à modulação de compostos bioativos em alimentos, tanto durante o cultivo quanto após a colheita. / Different light intensities or even their quality may play an important role in some of the major metabolic pathways involved in the synthesis of bioactive compounds. In addition to influencing changes in DNA, photosynthetic activity and plant growth, ultraviolet B radiation (UV-B) may induce the synthesis and accumulation of secondary metabolites. Therefore, to investigate the effectiveness of post-harvest UV-B radiation, kaki (Diospyros kaki) and guava (Psidium guajava) were submitted to 48 hours of treatment and then analyzed for their carotenoid content. The accumulation of carotenoids occurred in a significant way for both fruits, but at different times. In order to understand the effects exerted by supplemental UV-B radiation on food sources of other bioactive compounds, apples (Malus domestica) were subjected to 36 hours of treatment and accompanied by 21 days of storage. The quality parameters during fruit storage were not influenced by UV-B radiation, with only loss of firmness and weight occurring in all fruits. The different classes of phenolic compounds identified and quantified by HPLC-MS showed different behavior after treatment. Hydroxycinnamic acids and anthocyanins were positively affected by the supplementation of UV-B radiation. To evaluate the effects of supplemental UV-B radiation on bioactive compounds during food cultivation, green and red lettuces (Lactuca sativa) were subjected to 1 hour of treatment per day for two weeks. The carotenoid content in green lettuce and phenolic compounds in red lettuce was significantly higher after treatment with supplementary radiation. In this context, UV-B radiation can be considered a promising technology for the modulation of bioactive compounds in food, both during and after harvest.

As plantas pertencentes à família das leguminosas apresentam um grande interesse econômico, sendo que o Brasil é um país com vasta utilização de plantas desta família. Neste contexto, destaca-se a leguminosa Phaseolus vulgaris L. popularmente conhecida como feijão, que contém uma boa fonte de constituintes bioativos. Espécie nativa da América Central e dos Andes peruanos possui grande importância econômica para o Brasil. Em sua composição química podemos encontrar os flavonóides. Inúmeros artigos científicos descrevem as atividades dos flavonóides como antioxidantes, antimutagêncio, anticarcinogênico e na captação de nitrogênio durante o desenvolvimento da planta. Sendo esta leguminosa um dos alimentos mais consumidos no mundo e de larga importância econômica, o presente trabalho visou avaliar o perfil cromatográfico do extrato metanólico de 47 cultivares de feijão através da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e também a validação do seu método. O material vegetal, sementes, teve seu teor de umidade estabelecido pelo método gravimétrico. Através do perfil cromatográfico das sementes dos cultivares de feijão, foi possível identificar a presença de flavonóides como a astragalina, um heterosídeo do canferol. O método foi devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) de acordo com os métodos preconizados na literatura. Os cultivares TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce e Amarelo Iolanda, foram os que apresentaram teor maior de astragalina, demonstrando que os feijões de cor possuem maior composição de deste composto. / Plants belonging to the legume family have a big economic interest, being Brazil is a country with extensive use of plants in this family. In this context, we highlight the legume Phaseolus vulgaris L. popularly known as beans, which are a good source of bioactive compounds. This species is native of southern Brazil and the main food consumed by the population. In its chemical composition can meet the flavonoids. Numerous scientific articles describing the activities of flavonoids as antioxidants, antimutagênic, anticarcinogenic and nitrogen uptake during plant development. Since this is a legume consumed more food in the world and of great economic importance, this study sought to evaluate the chromatographic profile of the methanol extract of 47 cultivars of beans through the technique of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and also the validation of their method. The plant material, seeds, water content was established by gravimetric method. Through the chromatographic profile of the seeds of bean cultivars, it was possible to identify the presence of flavonoids and astragalin, a kaempferol heteroside. The method was validated for High Performance Liquid Chromatography (HPLC) according to the methods suggested in the literature. The cultivars with colored TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce and Amarelo Iolanda, were those with a higher content of astragalin, demonstrating that colored beans have a higher composition of astragalin.

O Brasil possui diversas frutas nativas, algumas consideradas potentes fontes de compostos bioativos fenólicos (CBF) como, por exemplo, a cagaita (Eugenia dysenterica DC) que é um fruto nativo do bioma cerrado pertencente à família das Mirtáceas. Alguns CBF presentes nos frutos desta família são capazes de inibir as enzimas envolvidas na digestão dos carboidratos &#945;-amilase e &#945;-glicosidase in vitro. A inibição destas enzimas retarda a absorção de glicose sanguínea reduzindo, assim, a glicemia e insulinemia pós-prandial. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de sucos de cagaita, clarificado e não clarificado, ricos em elagitaninos e proantocianidinas, sobre a glicemia e insulinemia pós-prandial de indivíduos pré-diabéticos sem uso de fármacos capazes de influenciar o metabolismo de glicose e insulina, após o consumo de 50 g de pão francês. Três diferentes refeições foram consumidas pelos voluntários (n=14). A primeira foi composta por pão branco (50 g) mais água (300 mL) como controle; a segunda, pão branco (50 g) mais suco cagaita clarificado (300 mL), e a última refeição consistia em pão branco (50 g) mais suco de fruta cagaita não clarificado (300 mL). Os resultados mostraram que ambos os sucos reduziram quantidade total de glicose absorvida (AUC) em 56% (suco clarificado) e 71% (não clarificado) e insulina liberada em 59% (suco clarificado) e 69% (não clarificado), após a ingestão do pão branco. Embora a velocidade de incremento da glicose (VIG) não tenha apresentado diferenças significativas, o incremento absoluto de glucose (IAG), incremento percentual de glicose (IPG) e valores de pico de glicose (VPG) e insulina (VPI) foram significativamente menores do que os de controle (p < 0,05). Além disso, após a ingestão de sucos cagaita observou-se um aumento da capacidade antioxidante do plasma em indivíduos que consumiram as refeições (p < 0,05). / Brazil has several native fruits, some of them are considered potential sources of phenolic compounds. Cagaita (Eugenia dysenterica DC) is a native fruit from Cerrado region belonging to the Myrtaceae family. Some polyphenols presents in fruits of this family may be able to act on inhibition of enzymes related to carbohydrates such as &#945;-amylase and &#945;- glucosidase in vitro. The inhibition of those enzymes activities delays blood glucose absorption, thereby reducing postprandial glycemia and insulinemia. This study aimed to assess the effect of cagaita fruit juices, clarified and non-clarified, rich in phenolic compounds including ellagitannins and proanthocyanidins, on the postprandial blood glucose and insulin responses from a bread meal (50 g), in prediabetic humans who were not taking medications known to influence glucose or insulin metabolism. Three different meals were consumed by volunteers (n=14). The first one consisted of white bread (50 g) plus water (300 mL) as a control; the second one, white bread (50 g) plus clarified cagaita fruit juice (300 mL), and the last one white bread (50 g) plus non-clarified cagaita fruit juice (300 mL). The results showed that both cagaita fruit juices reduced the total amount of glucose absorbed (AUC) by 56% (clarified juice) and 71% (non-clarified) and insulin released by 59% (clarified juice) and 69% (non-clarified), after the ingestion of white bread. Although glucose incremental velocity (GIV) did not show significant differences, absolute increase of glucose (AIg), glucose incremental percentage (GIP) and peak values of glucose (GPV) and insulin (IPV) were significantly lower than those of control (p < 0.05). Also, after ingestion of cagaita juices it was observed an increased antioxidant capacity of plasma in subjects that consumed the meals (p < 0.05).