Orientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Fabiana Gaspar Gonzalez / Banca: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: A partir da indicação popular de espécies do gênero Mouriri e Byrsonima para gastrites e distúrbios do trato gastrointestinal, foram realizados experimentos para a avaliação da atividade gastroprotetora, cicatrizante e tóxica do extrato metanólico das folhas de Mouriri elliptica (manapuçá) (EMME) e Byrsonima basiloba (murici-de-ema) (EMBB). As frações derivadas destes extratos (fração acetato de etila de M. elliptica - FAEME e fração aquosa de Byrsonima basiloba - FABB) também tiveram sua ação gastroprotetora avaliada, assim como o comportamento destas frente à expressão de PGE2 pela mucosa gástrica. Após a comprovação dos efeitos gastroprotetores de ambas espécies em modelos experimentais de indução de lesões gástricas por etanol acidificado, etanol absoluto, e piroxicam (p < 0,05), os estudos foram direcionados no intuito de se caracterizar os mecanismos de ação envolvidos. Assim, ambos os extratos apresentaram atividade gastroprotetora relacionada com os grupamentos sulfidrílicos, sendo que o EMBB também exerce proteção mediada pelo óxido nítrico. A gastroproteção conferida pelos extratos também agiu de maneira independente do efeito anti-secretório e também sem causar alterações na velocidade do trânsito intestinal. Na análise imunohistoquímica, o EMME estimula a proliferação celular na região de regeneração e a expressão de COX2, enquanto que o EMBB atua aumentando a angiogênese. No modelo de etanol absoluto, a FAEME conferiu uma dose efetiva 5 vezes menor que a do seu precursor EMME (50 e 250 mg/Kg respectivamente). Para a FABB, a menor dose efetiva foi de 200 mg/Kg contra 500 mg/Kg do EMBB neste mesmo modelo experimental. As frações também foram capazes de melhorar a expressão de PGE2 na mucosa gástrica (no entanto sem significância estatística). Porém, a expressão de PGE2 foi revertida no caso da FABB pela prévia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The medicinal plants evaluated in this work were selected based on their brazilian folk medicine information, which appoints their use for gastritis and gastrointestinal disturbances. Thus, pre-clinical experiments were accomplished for gastroprotective activity, healing gastric mucosal evaluation and toxicity of the methanolic extracts obtained from the leaves of M. elliptica (manapuçá) (EMME) and Byrsonima basiloba (murici-de-ema) (EMBB). Fractions derived from these extracts (M. elliptica ethyl acetate fraction - FAEME and B. basiloba aqueous fraction - FABB) were investigated for their gastroprotective potential and PGE2 quantification on gastric mucosa. After the gastroprotective effect from both extracts were observed, the tests were directed to find information about the mechanisms of action involved. Then, it was found that both extracts presented a gastroprotective activity related to the sulfhydryl compounds, being EMBB also dependent of the protection mediated by nitric oxide. The gastroprotection conferred by the extracts also acted independently of the antisecretory or intestinal mobility alteration effects. At the imunohistochemical analysis, EMME seems to stimulate cell proliferation at the healing area, while EMBB apparently stimulate the local angiogenesis. For the absolute ethanol gastroprotective model, FAEME conferred an effective dose 5 times lower than its precursor EMME (50 and 250 mg/Kg respectively). For FABB, the minor effective dose was 200 mg/Kg against 500 mg/Kg obtained for its originator EMBB, at the same experimental model cited. The fractions were also capable to increase the PGE2 expression at the gastric mucosa, although without statistical significance. However, the expression of PGE2 was antagonized for FABB when a non-steroidal anti-inflammatory drug (piroxicam 60 mg/Kg) was previously administered. Polyphenolic substances (mostly flavonoids) seemed...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-28Bitstream added on 2014-06-13T18:50:17Z : No. of bitstreams: 1 alves_tb_me_araiq_parcial.pdf: 359292 bytes, checksum: 9f6ee8f49467852ffe2fa5d3c89821e1 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-16T11:30:13Z: alves_tb_me_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-16T11:31:00Z : No. of bitstreams: 1 000721783.pdf: 1028730 bytes, checksum: 803d805d48e76655a83c6f107b8d897b (MD5) / A classe dos triterpenos pentacíclicos apresenta uma diversidade de estruturas que é devida ao número de rearranjos que a molécula do precursor oxidoesqualeno sofre durante a ciclização, sendo a friedelina o derivado com maior número de rearranjos. As oxidoesqualeno ciclases (OSCs) são enzimas que catalizam a biossíntese dos triterpenos, gerando essa variedade de estruturas. O objetivo deste estudo foi clonar OSCs a partir de folhas de Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek, uma espécie medicinal brasileira, para posterior análise funcional dos seus triterpenos pentacíclicos e localização filogenética em relação às OSC já caracterizadas de outras espécies. Para esta finalidade, adotou-se a estratégia de RT-PCR. O RNA total foi extraído a partir das folhas de M. ilicifolia e utilizado na síntese de cDNA. A amplificação de fragmentos “core” de genes de OSCs foi realizada com iniciadores parcialmente degenerados desenhados para amplificar regiões conservadas entre enzimas dessa família. Os fragmentos clonados foram sequenciados e iniciadores específicos foram desenhados para as amplificações das extremidades 5’ e 3’. Posteriormente iniciadores específicos foram desenhados para clonagem dos cDNAs completos. Comparação com banco de dados revelou que uma das ORFs obtida possui alta identidade com cicloartenol sintases de outras espécies de plantas já caracterizadas e que outras três ORFs clonadas possuem alta identidade com triterpeno sintases como beta-amirina, lupeol e isomultiflorenol sintases. As ORFs clonadas serão utilizadas em estudos futuros para expressão por sistema heterólogo permitindo a identificação das oxidoesqualeno ciclases por meio de análise dos produtos gerados / The class of pentacyclic triterpenes presents a diversity of structures due to the number of rearrangements that the molecule of oxidosqualene undergoes during cyclization, being friedelin the derivative with maximum number of rearrangements. The oxidosqualene cyclases (OSCs) are enzymes that catalyze the biosynthesis of triterpenes, generating a wide variety of molecules. This study aims to clone OSC from leaves of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek, a medicinal species from Brazil, for further functional analysis of its pentacyclic triterpenes and phylogenetic localization in comparison of OSCs characterized from other species. For this purpose, we adopted the strategy of RT-PCR. Total RNA was extracted from leaves of M. ilicifolia and used in the synthesis of cDNA. The PCR amplification of core fragments of OSC genes was performed with partially degenerated primers designed to amplify highly conserved regions among this class of enzymes. The cloned fragments were sequenced and specific primers were designed for amplification of 5’ and 3’ ends. Then, specific primers were designed for amplification of full-length cDNAs. Phylogenetic analyzes revealed that TS6 showed high identity with cycloartenol synthase of several other plant species already characterized, and CS4 exhibit high identity to triterpene synthases as beta-amyrin, lupeol and isomultiflorenol synthases from other plant species. The ORFs cloned will be used in future studies for expression in heterologous system allowing identification of the oxidosqualene cyclases by analysis of the products generated.

Resumo: A utilização de plantas medicinais visando atenuar o comprometimento da androgênese masculina faz parte da medicina tradicional e pode substituir as terapias com hormônios sintéticos. .A literatura já dispõe de estudos, tanto em modelo animal quanto humanos, demonstrando que determinadas drogas vegetais podem elevar os níveis de testosterona. O presente estudo avaliou os efeitos (anti) androgênicos e anabólicos da suplementação com o extrato de Pfaffia glomerata em ratos machos intactos e castrados. No experimento crônico, os animais intactos com oito meses de idade receberam três doses diferentes do extrato seco da planta: 8,5mg/kg, 30mg/kg e 85 mg/kg - além do grupo controle tratado com veículo (água destilada). Ao final do experimento foram avaliados parâmetros específicos do sistema reprodutivo masculino: peso de órgãos sexuais, androgênios fecais, testosterona plasmática, produção espermática diária e histologia testicular. Para identificar um possível efeito anabólico foi realizada histologia músculo-esquelética. Adicionalmente, foi realizado o teste de Hershberger com animais de 90 dias, visando identificar uma resposta (anti) androgênica direta do extrato. Ao final do experimento, não foram observadas diferenças significativas nos pesos dos órgãos andrógeno-dependentes (próstata, vesícula seminal, epidídimos, testículos, rins, fígado e músculo levantador do ânus), os níveis de androgênios fecais e séricos não diferiram significativamente entre os grupos (P>0,05). Após a análise de 20 túbulos e 100 fibras musculares por animal, tanto a histologia testicular quanto a músculo-esquelética não revelaram diferenças no diâmetro dos túbulos seminíferos entre os grupos (P = 0,96) e na área total das fibras musculares do músculo sóleo de pata direita dos animais (P = 0,44). Os resultados do teste de Hershberger indicam que a suplementação com o extrato de Pfaffia glomerata não possui efeito androgênico ou anti-androgênico no teste de Hershberger com animais in vivo. Desta forma, esses achados demonstram que o extrato de Pfaffia glomerata não apresenta efeitos estimulantes androgênicos e/ou anabólico muscular, nem tem ações androgênicas e/ou anti-androgênicas diretas.

Orientador: Cleslei Fernando Zanelli / Coorientador: Tatiana Maria de Souza Moreira / Banca: Alessandro de Mello Varani / Banca: Francis de Morais Franco Nunes / Resumo: A classe dos triterpenos pentacíclicos apresenta uma diversidade de estruturas que é devida ao número de rearranjos que a molécula do precursor oxidoesqualeno sofre durante a ciclização, sendo a friedelina o derivado com maior número de rearranjos. As oxidoesqualeno ciclases (OSCs) são enzimas que catalizam a biossíntese dos triterpenos, gerando essa variedade de estruturas. O objetivo deste estudo foi clonar OSCs a partir de folhas de Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek, uma espécie medicinal brasileira, para posterior análise funcional dos seus triterpenos pentacíclicos e localização filogenética em relação às OSC já caracterizadas de outras espécies. Para esta finalidade, adotou-se a estratégia de RT-PCR. O RNA total foi extraído a partir das folhas de M. ilicifolia e utilizado na síntese de cDNA. A amplificação de fragmentos "core" de genes de OSCs foi realizada com iniciadores parcialmente degenerados desenhados para amplificar regiões conservadas entre enzimas dessa família. Os fragmentos clonados foram sequenciados e iniciadores específicos foram desenhados para as amplificações das extremidades 5' e 3'. Posteriormente iniciadores específicos foram desenhados para clonagem dos cDNAs completos. Comparação com banco de dados revelou que uma das ORFs obtida possui alta identidade com cicloartenol sintases de outras espécies de plantas já caracterizadas e que outras três ORFs clonadas possuem alta identidade com triterpeno sintases como beta-amirina, lupeol e isomultiflorenol sintases. As ORFs clonadas serão utilizadas em estudos futuros para expressão por sistema heterólogo permitindo a identificação das oxidoesqualeno ciclases por meio de análise dos produtos gerados / Abstract: The class of pentacyclic triterpenes presents a diversity of structures due to the number of rearrangements that the molecule of oxidosqualene undergoes during cyclization, being friedelin the derivative with maximum number of rearrangements. The oxidosqualene cyclases (OSCs) are enzymes that catalyze the biosynthesis of triterpenes, generating a wide variety of molecules. This study aims to clone OSC from leaves of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek, a medicinal species from Brazil, for further functional analysis of its pentacyclic triterpenes and phylogenetic localization in comparison of OSCs characterized from other species. For this purpose, we adopted the strategy of RT-PCR. Total RNA was extracted from leaves of M. ilicifolia and used in the synthesis of cDNA. The PCR amplification of core fragments of OSC genes was performed with partially degenerated primers designed to amplify highly conserved regions among this class of enzymes. The cloned fragments were sequenced and specific primers were designed for amplification of 5' and 3' ends. Then, specific primers were designed for amplification of full-length cDNAs. Phylogenetic analyzes revealed that TS6 showed high identity with cycloartenol synthase of several other plant species already characterized, and CS4 exhibit high identity to triterpene synthases as beta-amyrin, lupeol and isomultiflorenol synthases from other plant species. The ORFs cloned will be used in future studies for expression in heterologous system allowing identification of the oxidosqualene cyclases by analysis of the products generated. / Mestre

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: José Carlos Pelielo de Mattos / Banca: Maria Stella Gonçalves Raddi / Resumo: Davilla nitida Vahl. e D. elliptica St. Hil (Dilleniaceae) são plantas distribuídas, predominantemente, no Cerrado Brasileiro, utilizadas, na medicina popular, para tratar distúrbios gástricos, intestinais e inchaços, principalmente na região dos testículos e linfonodos. Considerando a importância de investigar os efeitos farmacológicos e toxicológicos de espécies vegetais utilizadas com fins terapêuticos, que podem tornar-se alvo na pesquisa de novos fármacos, foi objetivo do presente trabalho avaliar a atividade fitoestrogênica e genotóxica dessas duas espécies de Davilla, utilizando, para tanto, ensaios de proliferação celular com células MCF-7 de tumor de mama humano, ensaios de mutação gênica reversa com Salmonella typhimurium (teste de Ames) e ensaios com plasmídeo pUC9.1, para analisar quebras nas fitas de DNA. A atividade fitoestrogênica de flavonóides isolados de D. elliptica (quercetina, quercetina-3-O-α-L-rhamnopiranosídeo, miricetina e miricetina-3-O-α-L-rhamnopiranosídeo) não pôde ser propriamente caracterizada devido ao perfil de resposta da linhagem celular MCF-7, utilizada nos ensaios de proliferação. No teste de Ames, os extratos metanólico, hidroalcoólico e a fração acetato de etila de D. nitida, bem como os extratos metanólico, etanólico e clorofórmico de D. elliptica induziram mutações nas linhagens de S. typhimurium. Na presença de cobre, as frações aquosa e acetato de etila das duas plantas, e as substâncias puras, quercetina, quercetina-3- O-α-L-rhamnopiranosídeo, miricetina, miricetina-3-O-α-L-rhamnopiranosídeo e ácido gálico, isoladas de D. elliptica, apresentaram potencial genotóxico, promovendo quebras nas cadeias do DNA, em ensaios realizados com plasmídeo pUC9.1. Tais respostas são compatíveis com a literatura, que relata que algumas classes de metabólitos secundários...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Davilla nitida Vahl. and Davilla elliptica St. Hil (Dilleniaceae) are plants distributed predominantly in Brazilian cerrado region and they are used in popular medicine to treat stomach diseases, diarrhea and swelling, particularly of the lymph nodes and testicles. Considering the importance of investigations about pharmacological and toxic effects of vegetable species used as therapeutic drugs, that may become target on new drugs research, the aim of this work was to evaluate the phytoestrogenic and genotoxic activities of both Davilla species, using human breast tumor MCF-7 cell proliferation assay, Salmonella mutagenicity assay (Ames test) and DNA strand break analysis in pUC9.1 plasmid DNA. Phytoestrogenic activity of flavonoids isolated from D. elliptica (quercetin, quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside, myricetin and myricetin-3-O-α-Lrhamnopyranoside) could not be determined because of the response profile of MCF-7 cell line used in the proliferation assays. In Ames test, methanolic, ethanolic extracts and ethyl acetate fraction of D. nitida and methanolic, ethanolic and chloroformic extracts of D. elliptica induced mutations in S. typhimurium strains. In the presence of copper, aqueous and ethyl acetate fraction of the plants, and compounds, quercetin, quercetin-3-O-α-Lrhamnopyranoside, myricetin, myricetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside and gallic acid, isolated from D. elliptica, showed genotoxic potencial, generating DNA strand breaks in plasmid pUC9.1. Such results are compatible to the literature, which reports that some classes of vegetable secondary metabolites are capable of carrying out mutagenic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Mirtes Costa / Banca: Dejair Caitano do Nascimento / Banca: Ricardo Luiz Nunes de Souza / Resumo: A ansiedade é um dos principais distúrbios do sistema nervoso central (SNC) de alta prevalência, cujas ferramentas terapêuticas disponíveis apresentam efeitos colaterais importantes ou não são ativas em parte dos pacientes. Deste modo, a avaliação de novos compostos com potencial atividade ansiolítica pode trazer novas alternativas de tratamento, mais eficazes e seguras. Preparações com base em informações quimiotaxonômicas podem ser uma promissora fonte de novas moléculas com atividade sobre o SNC. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar, no modelo do teste de esconder esferas e caixa claro e escuro, um possível efeito ansiolítico das espécies de Citrus latifólia (CL) e Citrus reticulata (CR), atividade previamente detectada no Citrus aurantium (CA). O estudo do perfil da atividade farmacológica foi complementado com a avaliação dos possíveis efeitos sedativos, por meio do teste de sono induzido por éter etílico e a integridade do sistema motor foi avaliada com a utilização do teste da barra giratória. Os diferentes modelos experimentais estão relacionados a diferentes aspectos dos transtornos ansiosos. Assim, enquanto o procedimento do teste de esconder esferas parece refletir o transtorno obsessivo-compulsivo, a caixa claro escuro reflete o transtorno da ansiedade generalizada. Os tratamentos dos óleos essenciais (OE) foram todos realizados oralmente por gavagem e os resultados comparados com seus respectivos grupos-controle, tratados com o volume equivalente do veículo utilizado para a solubilização do OE. No procedimento do teste de esconder esferas, o OE das cascas dos frutos de CL apresentou atividade ansiolítica nas doses de 1,0 e 1,5g/kg e CR somente na maior dose de 1,5g/kg. No procedimento da caixa claro escuro, CL demonstrou atividade ansiolítica na dose de 0,5g/kg, porém CR não foi capaz de alterar os parâmetros avaliados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The anxiety is one of the main disturb of the central nervous system (CNS) of high prevalence, whose available therapeutical tools present important collateral effect or are not active in part of the patients. In this way, the evaluation of new compounds with potential anxiolytic activity can bring new alternatives of treatment, more efficient and safe. Preparations with basis of quimiotaxonomy information can be a promising source of new molecule with activity on the CNS. Thus, the objective of this work was to evaluate, in the model of the marble burying test and light/dark box test, a possible anxiolytic effect of the species of Citrus latifolia (CL) and Citrus reticulata (CR), activity previously detected in the Citrus aurantium (CA). The study of the profile of the pharmacology activity was complemented with the evaluation of the possible sedative effect, by means of the sleep induced by diethyl ether test and the integrity of the motor system was evaluated with the use of the rota-rod test. The different experimental models are related with the different aspects of the anxious disturbs. Thus, while the procedure of the marble burying test seems to reflect the obsessive-compulsive disorder, the light/dark box test reflect the generalized anxiety disorder. The treatments of essential oils (EO) had been all realized orally by gavage and the results compared with its respective group-control, treated with the volume equivalent to the vehicle used for the dissolved of the EO. In the procedure of the marble burying test, the EO of the rinds of the fruits of CL only presented anxiolytic activity in the doses of 1,0 and 1,5 g/kg and CR in the high dose of 1,5g/kg. In the procedure of the light/dark box test, CL demonstrated anxiolytic activity in the dose of 0,5g/kg, however CR was not capable to modify the evaluated parameters. In the sleep induced by diethyl ether test, the EO of CL... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Banca: Lúcia Regina Ribeiro / Banca: Augusto Ferreira da Eira / Banca: José Maurício Sforcin / Banca: Maria de Loudes Pires Bianchi / Banca: Mário Sérgio Mantovani / Resumo: Estudos de antimutagenicidade, relatados na literatura, mostram que substâncias isoladas do cogumelo Agaricus brasiliensis S. Wasser et al. (= A. blazei Murrill ss. Heinem.) reduzem a freqüência de mutações em bactéria. Por outro lado, pesquisas com soluções aquosas desse cogumelo também indicam diminuição da freqüência de mutações induzidas, tanto in vivo como in vitro, mas o(s) seu(s) mecanismo(s) de ação ainda são desconhecidos. Dessa forma, avaliamos o efeito protetor de uma solução aquosa do A. brasiliensis (linhagem AB 99/29) em medula óssea, sangue periférico, bexiga, cólon e fígado de ratos Wistar. Diferentes protocolos experimentais (teste do micronúcleo, teste do cometa e teste de focos de criptas aberrantes) foram utilizados para uma avaliação mais ampla do efeito quimiopreventivo do A. brasiliensis. Os animais foram tratados com a solução aquosa (60º C), e com os agentes órgãos-alvo (ENU, MNU, DMH e DEN). Os resultados indicam que a solução aquosa do A. brasiliensis, sob as condições testadas, não revelou efeito mutagênico, genotóxico e carcinogênico. Entretanto, um efeito antimutagênico contra a mutagenicidade do ENU foi observado em células da medula óssea, bem como uma redução significativa no número de criptas aberrantes por foco (4-6 criptas/foco) induzidas pela DMH no cólon dos animais pós-tratados com a solução aquosa do cogumelo. Nesse contexto, nossos resultados sugerem que a solução aquosa do A. brasiliensis (AB 99/29) pode possuir compostos que reduzem significativamente a freqüência de células micronucleadas da medula óssea de ratos Wistar, e que os mesmos podem atuar numa etapa posterior à iniciação do processo de carcinogênese. / Abstract: Antimutagenicity studies in literature have shown that substances isolated from the Agaricus brasiliensis mushroom S. Wasser et al. (= A. blazei Murrill ss. Heinem.) reduce mutation frequency in bacteria. Also in vivo and in vitro studies on aqueous solutions from this mushroom have shown reduced frequencies of induced mutations, however these action mechanisms are still unknown. The aim of this study was to evaluate the protector effect of an aqueous solution of A. brasiliensis (AB 99/29 lineage) in Wistar rat bone marrow, peripheral blood, bladder, colon, and liver. Different experimental protocols (micronucleus test, comet assay, and aberrant crypt foci test) were used for a more extensive evaluation of the chemopreventive effect of A. brasiliensis. Animals were treated with an aqueous solution (60ºC) and target organ agents (ENU, MNU, DMH, and DEN). Results indicated that A. brasiliensis aqueous solution did not have any mutagenic, genotoxic, or carcinogenic effects under test conditions. However an antimutagenic effect against ENU mutagenicity was seen in bone marrow cells, and there was a significant reduction in the number of DMH induced aberrant crypts per focus (4-6 crypts/focus) in the colon of animals post-treated with aqueous mushroom solution. Our results suggest that aqueous solution of A. brasiliensis (AB 99/29) may contain components which significantly reduce the frequency of micronucleated cells in Wistar rat bone marrow, and that they could have an effect on a post-initiation stage of the carcinogenesis process. / Doutor

Plantas da família Asteraceae de diversos gêneros têm demonstrado relevantes propriedades biológicas. O gênero Eupatorium tem sido estudado em todo o mundo e muitos compostos biologicamente ativos já foram isolados de espécies desse gênero. Entre as atividades biológicas descritas para extratos ou compostos desse gênero, merecem destaque as relacionadas à proliferação celular: citotóxica, citostática, antitumoral e antileucêmica. Destacam-se também a atividade antibacteriana, antifúngica, antimalárica e antioxidante. Esse trabalho teve por objetivo verificar a presença de atividade biológica em extratos brutos e semi-purificados de Symphyopappus casarettoi Robinson (sin. Eupatorium casarettoi (B.L. Rob) Steyerm), uma planta nativa do Sul do Brasil e cujas propriedades biológicas e compostos químicos nunca haviam sido pesquisados. O extrato etanólico de inflorescências de S. casarettoi demonstrou atividade antiproliferativa significativa em cinco linhagens celulares derivadas de tumores humanos. O fracionamento com solventes de polaridade crescente sugeriu que tal atividade antiproliferativa ocorreu devido a compostos presentes na fração clorofórmica. Desta forma, preparou-se uma fração enriquecida de lactonas sesquiterpênicas, a qual demonstrou atividade antiproliferativa com doses mais baixas. Três de quatro manchas cromatográficas obtidas a partir dessa fração foram consideradas ativas, com valores de IC50 entre 24.33±3.65 to 1.87±0.32 μg/ml nas cinco linhagens tumorais e em fibroblastos humanos normais. Adicionalmente, não foi observada atividade antiproliferativa em linfócitos humanos. A análise por citometria de fluxo da mancha de cromatografia C2, sugeriu um mecanismo de ação diferente entre os tipos celulares testados. Não foram observadas atividades antibacteriana e antifúngica nos testes com o extrato etanólico de S. casarettoi. Atividade antimalárica foi observada in vitro contra Plasmodium falciparum e in vivo, com a dose de 250 mg/kg em camundongos infectados com P. berghei. A fração clorofórmica foi a que demonstrou melhor atividade e a hexânica demonstrou uma fraca atividade. Adicionalmente, a fração metanólica de S. casarettoi demonstrou um potencial antioxidante maior, quando comparado às outras frações em ensaios in vitro. Já nos testes ex vivo, tanto a fração metanólica, quanto o extrato etanólico atenuaram a morte celular e protegeram contra dano lipídico induzido por ferro. Embora haja a necessidade de estudos adicionais com o intuito de isolar e identificar os compostos bioativos, podemos sugerir que substâncias pertencentes ao grupo das lactonas sesquiterpênicas sejam responsáveis pelas atividades antiproliferativa e antimalárica, e que compostos fenólicos respondam pelas atividades antioxidantes observadas, como descrito previamente para outras espécies do gênero Eupatorium. / Species of the Asteraceae family of many genera have demonstrated a wide array of biological properties. The Eupatorium genus has been studied worldwide and a considerable number of bioactive natural products have been isolated from species of this genus. Among the biological activities reported, special attention was given to the inhibition of cell proliferation, including cytotoxicity, cytostasis and antitumor effects. In addition, antibacterial, antifungal, antimalarial and antioxidant activities have also been described. The aim of this work is to study for the first time the biological properties of crude and partially purified extracts of Symphyopappus casarettoi Robinson (syn. Eupatorium casarettoi (B.L. Rob) Steyerm), a plant native to South Brazil. Notably, the inflorescence ethanolic extract of S. casarettoi showed significant inhibitory activity against five cell lines derived from human tumors. Fractionation with solvents in increasing polarity demonstrated that the antiproliferative activity was due compounds found in chloroformic fraction. This last fraction was separated to get the enriched sesquiterpene lactones fraction, which inhibited cell proliferation with lower dosage. Three of four chromatographic spots from sesquiterpene enriched fraction were considered active with IC50 values ranging from 24.33±3.65 to 1.87±0.32 μg/ml in five human cancer cell lines tested and normal human fibroblasts. Additionally, no cytotoxic activity was found in human lymphocytes. The flow cytometry analysis of C2 chromatographic spot suggested a different mechanism of action of the active compound. We did not observe antibacterial and antifungal activities in the ethanolic extract of S. casarettoi. Antimalarial activity was observed in vitro against Plasmodium falciparum and in vivo, at 250 mg/kg in mice infected with P. berghei. The chloroformic fraction again was the most active one and the hexanic fraction had a weak activity. In addition, methanolic fraction showed a higher antioxidant potential compared to the other fractions in the in vitro assays. In the ex vivo tests, the ethanolic extract and the methanolic fraction attenuated cell death and effectively protected against lipid damage induced by iron. Despite the needs of additional studies to isolate and identify the bioactive compounds, we suggest that substances of the lactone sesquiterpenic class are probably responsible for the antiproliferative and antimalarial activities, while phenolic compounds are responding for the antioxidant activities. These biological properties should be further evaluated.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-29T13:26:39Z No. of bitstreams: 1 2012_LiviaSantosRamalho_Parcial.pdf: 853852 bytes, checksum: c9c516ffdfe589d9ed61425b06be1563 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-29T13:27:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LiviaSantosRamalho_Parcial.pdf: 853852 bytes, checksum: c9c516ffdfe589d9ed61425b06be1563 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-29T13:27:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LiviaSantosRamalho_Parcial.pdf: 853852 bytes, checksum: c9c516ffdfe589d9ed61425b06be1563 (MD5) / Nos últimos anos, vem ocorrendo um retorno ao uso de plantas medicinais e medicamentos fitoterápicos, não apenas em países considerados em desenvolvimento, mas também nos desenvolvidos. No Brasil, a regulamentação em vigor para o registro de medicamentos fitoterápicos é a RDC 14/10, que determina os aspectos essenciais ao registro, como identificação botânica das espécies vegetais utilizadas, padrão de qualidade e identidade e provas de eficácia e segurança que validem as indicações propostas. Nessa perspectiva, as bulas dos medicamentos são consideradas a principal fonte de informação aos usuários do medicamento para um melhor esclarecimento quanto à sua enfermidade e tratamento. As bulas encontradas no mercado não são uniformes e trazem informações distintas e até conflitantes, fazendo com que o mesmo derivado vegetal apresente indicações diferentes de acordo com a empresa comercializadora. Outro aspecto a ser considerado é a propaganda, fonte de informação importante que deve conter apenas os conteúdos científicos aprovados pela Anvisa. A norma vigente que dispõe sobre a propaganda, publicidade, informação e outras práticas cujo objetivo seja a divulgação ou promoção comercial de medicamentos é a RDC 96/08. Os objetivos deste trabalho são: verificar junto ao portal da Anvisa e no Datavisa, a situação de registro de todas as espécies presentes na Renisus, por serem espécies prioritárias para o Sistema único de Saúde (SUS); elaborar bulas padronizadas de acordo com a RDC 47/09 das espécies Chamomilla recutita, Eucaliptus globulus, Mentha piperita, Salix alba, e Zingiber officinale; captar e analisar peças publicitárias dos produtos naturais em revistas populares. Entre as 71 espécies da Renisus, apenas 20 possuem registro na Anvisa. As espécies com maior número de registros são Mikania spp, Passiflora spp e Cynara scolymus. Foram padronizadas bulas para os cinco medicamentos fitoterápicos já citados. A presente pesquisa constatou que, embora algumas mudanças legais tenham ocorrido nos últimos anos, continuam sendo detectadas irregularidades na veiculação de peças publicitárias referentes a plantas medicinais, fitoterápicos e suplementos, influenciando o consumo de medicamentos e, principalmente, induzindo as pessoas à automedicação. Apesar da evolução proporcionada pela modificação na norma de bulas, da padronização de algumas bulas e pela RDC 96/08 e da intensificação das ações fiscalizadoras da Anvisa, é indispensável que novas medidas concretas sejam tomadas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In recent years, there has been a return to the use of medicinal plants and herbal medicines, not only occurs in developing countries, but also in developed countries. In Brazil, the regulations in force for the registration of herbal medicines is the RDC 14/10 laying down the essential aspects of record, such as botanical identification of the species used, quality and standard of identity and proof of efficacy and safety to validate the proposed indications. From this perspective, the labels are considered the main source of information for users of the drug for a better explanation as to his illness and treatment. The labels found in the market are not uniform and bring different information, and sometimes even conflicting, making the same plant derivative shows different directions according to the trading company. Another aspect to consider is advertising, a source of important information that should contain only the scientific content approved by Anvisa, the rule in force that provides advertising, marketing, information and other practices whose purpose is the dissemination and commercial promotion of medicines - RDC 96/08. Our objectives are: check with the Anvisa portal and Datavisa, the state registration of all species present in Renisus because they are priority species for the Unified Health System (SUS) develop standardized labels according to the RDC 47/09 Chamomilla recutita species, Eucalyptus globulus, Mentha piperita, Salix alba, and Zingiber officinale, capturing and analyzing natural products advertising in popular magazines. Among the 71 species of Renisus, only 20 are registered at Anvisa. The species with the highest number of records are Mikania spp, Passiflora spp and Cynara scolymus. Labels were standardized for the five herbal medicines already mentioned. This survey found that while some legal changes have occurred in recent years, are still irregularities in the placement of advertising relating to medicinal plants and herbal supplements, influencing the consumption of drugs and, especially, inducing people to self-medication. Despite the developments provided by the change in the standard labels, the standardization of some labels and the RDC 96/08 and the intensification of surveillance of Anvisa, it is essential that further concrete steps are taken.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-11-06T13:39:00Z No. of bitstreams: 1 Luciana Queiroz de Melo.pdf: 802494 bytes, checksum: 7d71cc4453a6a1451f286bc51665857c (MD5) / Rejected by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com), reason: Falta colocar o abstract no recurso. Atenciosamente, Kell Viana on 2010-06-23T03:36:36Z (GMT) / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-06-23T16:37:39Z No. of bitstreams: 1 Luciana Queiroz de Melo.pdf: 802494 bytes, checksum: 7d71cc4453a6a1451f286bc51665857c (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-06-23T18:16:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Luciana Queiroz de Melo.pdf: 802494 bytes, checksum: 7d71cc4453a6a1451f286bc51665857c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T18:16:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Queiroz de Melo.pdf: 802494 bytes, checksum: 7d71cc4453a6a1451f286bc51665857c (MD5) Previous issue date: 2006-08 / A arnica (Lychnophora ericoides Less) tem uso medicinal e toda a planta em infusão no álcool é usada externamente em machucados ou contusões, como anestésico e cicatrizante. São também produzidas pomadas para os mesmos sintomas. Trabalhos científicos citam que a espécie L. ericoides apresenta um poder antiinflamatório surpreendente. Empresas de cosméticos têm fabricado sabonete de arnica, indicando-o para eliminar asperezas, rachaduras e suavizar hematomas e contusões. Sua exploração é feita por extrativismo. Apresenta baixa germinação de sementes e seu cultivo não é praticado. Devido ao uso intensivo da espécie L. ericoides, torna-se importante e urgente a obtenção de informações sobre o comportamento germinativo de suas sementes para fins de conservação a longo prazo, visando o manejo da espécie. A importância da conservação é reforçada pela identificação de populações de arnica com diferenças de porte da planta e aroma característico da espécie. O estudo da conservação do germoplasma, através da análise do comportamento germinativo de aquênios em diferentes temperaturas e pré-tratamentos, associado ao estudo da variabilidade genética de L. ericoides, poderá fornecer subsídios para a conservação ex situ de aquênios a longo prazo e o manejo sustentado da espécie. Os objetivos deste trabalho foram: (1) analisar e quantificar a variabilidade genética entre as populações de arnica por meio de marcadores RAPD; (2) definir quais as melhores condições para a germinação de arnica bem como avaliar as possibilidade de sua conservação a longo prazo sob temperaturas ambiente a baixas temperaturas (10oC, -20oC e -196oC ). Foram amostradas quatro populações na região geoeconômica do Distrito Federal: Parque Nacional de Brasília (duas populações, uma aromática-APA e outra não aromática- APN), Fazenda Água Limpa - UnB (uma população aromática-FAL) e Jardim Botânico de Brasília (uma população com indivíduos de menor porte e não aromática-JBB). Folhas de 24 indivíduos de cada região foram coletadas. Os DNAs foram extraídos de acordo com o protocolo CTAB 2%. De um total de 147 iniciadores testados foram selecionados 15, xii totalizando 60 bandas polimórficas. Marcadores RAPDs selecionados foram analisados com a utilização dos programas NTSYS e Amova. O dendrograma obtido pelo método UPGMA e o coeficiente de dissimilaridade Dice evidenciaram quatro agrupamentos consistentes. A análise de AMOVA mostrou uma percentagem variabilidade genética entre populações de 35,7% e dentro de populações de 64,3%, evidenciando uma alta variação entre e dentro de populações, sendo um importante resultado para definição de uma estratégia de conservação da espécie que se encontra em situação vulnerável à extinção. No experimento sobre a germinação foram avaliados os efeitos de nove temperaturas e três tratamentos pré-germinativos sobre a germinação que aquênios selecionados pelo teste densimétrico em água destilada: temperaturas constantes de 5C, 10C, 15C, 20C, 25C, 30C, 35C, 40C e alternada de 20-30C em presença de nitrato de potássio (KNO3,) ácido giberélico (GA3) e H2O (testemunha). As maiores porcentagens de germinação foram obtidas a 20oC na presença de água e a 20-30oC em presença de KNO3, 76,5% e 81,5%, respectivamente, não havendo diferença significativa entre estes. A germinação dos aquênios selecionados e dos não selecionados pelo teste densimétrico foi avaliado no experimento de conservação a longo prazo, armazenados a -196oC , -20oC, 10oC e temperatura ambiente durante o período de um ano, com avaliação bimestral. Os dados mostraram que os aquênios de arnica não sofreram redução da germinabilidade quando submetidos às baixas temperaturas nos períodos analisados, demonstrando que as sementes de arnica são ortodoxas. O material selecionado apresentou uma porcentagem média de germinação variando entre 55,5% e 73,5% e uma uniformidade germinativa em todas as condições do experimento. Já os aquênios não selecionados apresentaram uma porcentagem média de germinação, entre 12% e 30,5%, além de um comportamento germinativo desuniforme quando comparado ao material selecionado. O teste densimétrico promoveu uma efetiva seleção de aquênios, aumentando a quantidade de aquênios germinados. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Arnica (Lychnophora ericoides), is a shrub up to 3m height, which is associated with high altitudes (900-1800m) and rocky soils in the Cerrado biome, mainly in the states of Minas Gerais, Goiás and the Federal District. In traditional medicine, arnica leaves are used in alcoholic infusion beverages and extracts as anti-inflammatory and to treat contusions. Also they are produced cosmetic for the same symptoms. Scientific works cite that species L. ericoides presents a surprising antiinflammatory power. Cosmetic companies have manufactured saoap of arnica, indicating it to eliminate cracks and to alleviate hematomas and bruises. Its exploration is made by extrativismo. It presents low germination of seeds and its culture is not practised. Had ericoides the intensive use of species L., the attainment of information becomes in the long run important and urgent on the germinativo behavior of its seeds for conservation ends, aiming at the handling of the species. The importance of the conservation is strengthened by the identification of populations of arnica with differences of transport of the plant and characteristic aroma of the species. Arnica biology and ecology are scarce studied. Considering L. ericoides intensive use, information on the germinative behaviour of L. ericoides achenes became very important for germplasm conservation. The main objectives of this work were (1) to analise and quantify the genetic variability among Arnica populations using RAPD markers; and (2) to evaluate the temperatures and pre-germinative treatments on arnica achenes germination, and the effect of several tempetatures on achenes viability. For the genetic studies, leaves from four populations from the Federal District, Brazil were sampled, based on their geographic distance and organoleptic characteristics: Parque Nacional de Brasília - (2 populations, one scented - APA, and other non-scented - APN), Fazenda Água Limpa - UnB (1 scented population), and Jardim Botânico de Brasília (1 population lower height and non-scented). Scored RAPD markers (Random Amplified Polymorphic DNA) were analised using NTSYS and AMOVA software. The results indicate a high dissimilarity among populations, with an index of 67%. The dendogram obtained by UPGMA method and Dice’s coefficient showed four consistent cluster. An AMOVA analysis presented 35,7% variation among populations, and 64,3% within populations, showing a high variation among populations. For the germination studies, achenes selected based on densimetric method, were used constant temperatures of 5ºC, 10ºC, 15ºC, 20ºC, 25ºC, 30ºC, 35ºC, 40ºC and alternating 20-30ºC in the presence of potassium nitrate (KNO3,) giberelic acid (GA3) and H2O. After the determination of the best germination condition, samples from selected and non selected achenes by densimetric method were stored at -196oC, -20oC, 10oC and environment temperature during one year. Germinability was evaluated every two months. The highest germination percentages were obtained at incubation tempertatures of highest 20oC, in the presence of H2O (76.5%) and 20-30oC, in the presence of KNO3 (81.5%), with no statistical significant difference between these two values. Arnica achenes did not have reduced their germinability when stored at low temperatures, during the experiment time, showing that arnica seeds can be considered ortodox. Selected achenes presented a germination average percentage varying between 55.5% and 73.5%, and a germinative uniformity in all experiemental conditions. Non selected achenes showed a germination average percentage between 12% and 30.5%, besides the desuniform germinative behaviour when compared to the selected achenes. Densimetric test promote an effective selection of achenes, increasing the number of seeds germinated. This is an important result for conservation strategy for such species considered vulnerable to extinction. Also, it indicates that seed collection must consider a large number of populations sampled, preserving a higher genetic diversity of this species from different locations.