As plaquetas sangüíneas são fragmentos citoplasmáticos, oriundos da ruptura dos megacariócitos, cuja principal função está relacionada à manutenção da integridade vascular. Os nucleotídeos extracelulares, ATP e ADP, bem como a adenosina, têm sido implicados em um grande número de funções fisiológicas: o ADP é o principal fator recrutador de plaquetas, enquanto que o ATP é um inibidor competitivo da agregação induzida por ADP. A adenosina é uma molécula capaz de induzir vasodilatação e inibir a agregação plaquetária. Desta maneira, a manutenção da sinalização purinérgica normal tem se mostrado importante para o tratamento de doenças cardiovasculares. Os nucleosídeos di e trifosfatos circulantes podem ser hidrolisados por membros de várias famílias de ectonucleotidases de membrana e solúveis, incluindo as ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases) e ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs), que em conjunto com a ecto-5’-nucleotidase, levam à formação de adenosina. Na superfície das plaquetas, ambas enzimas, E-NTPDase e ecto-5’-nucleotidase, estão descritas. O sistema renina-angiotensina é o principal regulador da função renal e cardiovascular, desenvolvendo um papel fundamental na homeostasia da pressão arterial e do balanço eletrolítico. A angiotensina II (ANGII) induz fisiologicamente a ativação das plaquetas, possivelmente devido às suas propriedades vasoconstritoras. Os objetivos deste trabalho foram, portanto: 1) caracterizar cineticamente a enzima E-NPP em plaquetas de ratos, utilizando o substrato marcador p-Nph-5’TMP e 2) esclarecer, mesmo que em parte, os possíveis efeitos da ANGII sobre a hidrólise extracelular de nucleotídeos por plaquetas de ratos. No primeiro capítulo deste trabalho, descrevemos uma atividade enzimática em plaquetas de ratos que compartilha as principais características bioquímicas já descritas para as E-NPPs: pH ótimo alcalino; valores de KM e Vmax calculados de aproximadamente 106.22 ± 17.83 μM e 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectivamente; e dependência de cátions divalentes. Além disso, o AMP inibiu somente a hidrólise do p-Nph-5’TMP. Por outro lado, a azida de sódio, em altas concentrações, a angiotensina II e o cloreto de gadolínio alteraram apenas as hidrólises de ATP ou ADP ou de ambos. No segundo capítulo, mostramos que a ANGII foi capaz de aumentar as hidrólises de ATP, ADP e AMP em plaquetas em todas as doses testadas (5, 50, 500 e 5000 picomóis). Entretanto, nenhuma alteração foi observada com relação à hidrólise do p-Nph-5'TMP. Em adição, observamos um aumento na hidrólise de AMP e uma diminuição na hidrólise de p-Nph-5'TMP em plaquetas de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) quando comparados a ratos Wistar normotensos. De maneira geral, esta dissertação traz a caracterização bioquímica da enzima E-NPP na superfície de plaquetas intactas de ratos como sendo parte de um complexo sistema para a hidrólise de nucleotídeos nestes fragmentos citoplasmáticos, podendo, assim, contribuir para o desenvolvimento de terapias antiplaquetárias e para o tratamento de doenças vasculares. Adicionalmente, apresentamos alguns resultados demonstrando interações entre os sistemas angiotensinérgico e adenosinérgico de plaquetas de ratos, o que poderá contribuir para o entendimento e o tratamento de doenças cardiovasculares como hipertensão e arteriosclerose. / Platelets are cytoplasmic fragments derived from bone marrow megakaryocytes rupture, whose major role is related to the vascular integrity maintenance. The extracellular nucleotides ATP and ADP as well as adenosine have been implicated in a great number of physiological functions: ADP is the major factor recruiting platelet, whereas ATP has been considered as a competitive inhibitor of ADP-induced platelet aggregation. Adenosine is a molecule able to induce vasodilatation and to inhibit platelet aggregation. Thus, the maintenance of normal purinergic signalling has been showed as an important issue for the treatment of cardiovascular diseases. The nucleoside di and triphosphate can be hydrolyzed by members of several families of membrane-bound or soluble ectonucleotidases, including ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases) and ecto-nucleotide pyrophosphatase/ phosphodiesterases (E-NPPs), that together with an ecto-5’-nucleotidase lead to adenosine formation. On the platelets ecto-surface, both E-NTPDase and ecto-5’-nucleotidase are already described. The renin-angiotensin system is the most important regulator of renal and cardiovascular function developing a fundamental role in the arterial blood pressure homeostasis and in the electrolytic balance. Angiotensin II (ANGII) induces physiologically the platelet activation, probably due to its vasoconstrictors properties. The aims of this study were: 1) to kinetically characterize the enzyme E-NPP from rat blood platelet, using the artificial marker substrate p-Nph-5’TMP and 2) to clarify, even though in part, the effects of ANGII upon extracellular nucleotide hydrolysis by rat platelets ectoenzymes. In the first chapter, we describe an enzymatic activity that shares the major characteristics already described for E-NPPs: optimum alkaline pH; KM and Vmax calculated values of approximately 106.22 ± 17.83 μM and 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectively; and divalent cation dependence. Besides, AMP inhibited only p-Nph-5’TMP hydrolysis. On the other hand, sodium azide, in high concentrations, ANGII and gadolinium chloride just changed ATP or ADP or both hydrolysis. In the second chapter, we show that ANGII was able to increase ATP, ADP and AMP hydrolysis in platelets from rats in all tested dosis (5, 50, 500 e 5000 picomoles). However, no modification was observed regarding p-Nph-5'TMP hydrolysis. Additionally, we verified an increase on AMP hydrolysis and a reduction on p-Nph-5'TMP hydrolysis in platelets from spontaneously hypertensive rats (SHR) when compared to Wistar normotensive rats. Finally, this work shows the kinetic and biochemistry characterization of an E-NPP enzyme on the intact platelet surface as being part of a complex system for nucleotide hydrolysis that could contribute for the antiplatelet therapies and vascular diseases treatment. In addition, we present some results showing interactions between rat platelet angiotensinergic and adenosinergic systems that could contribute to the understanding and treatment of cardiovascular diseases such as hypertension and atherosclerosis.

As anormalidades hemostáticas são comumente encontradas em pacientes com doença renal. Ambos, sangramento e estados pró-trombóticos, podem ser observados em pacientes com doença renal crônica (DRC). O principal papel das plaquetas é assegurar a hemostasia primária, a manutenção da integridade do vaso e cessar o sangramento após uma injúria. As plaquetas também estão envolvidas na trombose arterial aguda, na inflamação, na aterosclerose, e na angiogênese. Quando as plaquetas são ativadas elas se aderem à matrix endotelial onde ocorre a ativação e a liberação de agonistas secundários tais como o ATP, ADP, tromboxano A2, serotonina e outras substâncias biologicamente ativas. O ADP possui um papel crucial na ativação plaquetária, atuando em receptores P2. Está liberação pode ser responsável pela ativação, recrutamento e indução da agregação adicional de plaquetas no microambiente de lesão no vaso. Assim, o metabolismo do ADP no sangue é um importante mecanismo de regulação da função plaquetária. A NTPDase (ecto-CD39) hidrolisa o ATP e ADP extracelulares formando monofosfato de adenosina (AMP), que é subseqüentemente convertido para adenosina pela ação da enzima 5’- nucleotidase (CD73). O objetivo deste estudo foi explorar a relação entre a disfunção plaquetária na uremia com as anormalidades hemostáticas e a severidade na doença renal em pacientes com insuficiência renal crônica sob tratamento conservador ND (pacientes que não realizam hemodiálise) e HD (pacientes que realizam hemodiálise) comparando com indivíduos normais de mesma faixa etária. Os resultados demonstraram um aumento na atividade da NTPDase em plaquetas de pacientes HD (52,88%) com o substrato ATP. A hidrólise do ADP apresentou-se diminuída (33,68% e 39,75%) em HD e ND pacientes, respectivamente. Além disso, a atividade da 5’-nucleotidase mostrou-se elevada em HD (160%) e ND (81,49%) quando comparado com o grupo controle. Correlações significativas foram encontradas entre a hidrólise do ATP, ADP e AMP e os níveis plasmáticos de creatinina e uréia. Foram realizadas comparações entre o tempo de hemodiálise a que os pacientes estavam submetido e a alterações na hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP. Encontrou-se aumento na atividade da NTPDase com substrato ATP, diminuição com o substrato ADP e aumento da atividade da 5´-nucleotídase entre 49 e 72 meses em paciente HD. Os resultados sugeriram que as alterações na hidrólise dos nucleotídeos em plaquetas podem contribuir para anormalidades hemostáticas em pacientes com DRC, podendo realçar o risco de complicações tromboembólicas e aterosclerose acelerada em pacientes com DRC. Podemos inferir que tanto a uremia como a hemodiálise têm influência nas desordens hemostáticas apresentadas nesses pacientes, e descritas nesse trabalho. Os conhecimentos sobre estresse oxidativo e seu papel como importante cofator contribuindo para disfunção endotelial, inflamação, aterosclerose e glomeruloesclerose têm substancialmente aumentado nos últimos anos. A doença cardiovascular (DCV) é a maior causa de morte em pacientes com insuficiência renal, sendo que cerca de 50% de todas as mortes em pacientes com terapia substitutiva e que receberam transplante renal estão relacionadas a DCV. A mortalidade por DCV em pacientes com insuficiência renal é aproximadamente 9% por ano, o que chega a ser 30 vezes maior do que da população em geral. O estresse oxidativo é definido como um desequilíbrio entre a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS) e os mecanismos de defesa antioxidante. Nos últimos anos, foi estudado o efeito biológico das ROS, e, em estudos clínicos e experimentais recentes, foram notados sinais de estresse oxidativo em pacientes renais. No entanto, a influência da uremia e do procedimento de hemodiálise não foi elucidada. Nesse estudo, avaliou-se a influência da uremia e da hemodiálise sobre o estresse oxidativo e a atividade da enzima delta aminolevulinato deidratase (δ- ALA-D) em pacientes com DRC em HD e ND comparando com o grupo controle. Observou-se um aumento na peroxidação lipídica em soro de pacientes HD e ND. O nível de TBARS em hemácias foi elevado somente em pacientes HD. A atividade da catalase mostrou-se aumentada (83,56% e 61,23%) em pacientes HD e ND, respectivamente. Neste estudo, demonstrou-se a inibição da atividade da δ- ALA-D em pacientes HD e ND quando comparado ao grupo controle. Observouse, uma correlação positiva entre δ-ALA-D e δ-ALA-D/DTT com a quantidade de hemoglobina (r= 0.55, r= 0.42), respectivamente, e também observou-se uma correlação entre δ-ALA-D e δ-ALA-D/DTT e o nível de TBARS em eritrócitos (r= - 0.54, r= -0.51), respectivamente. Além disso, uma correlação negativa foi encontrada entre δ-ALA-D ou δ-ALA-D/DTT e a atividade da enzima CAT (r= - 0.63, r= -0.5), respectivamente. Nesse trabalho, demonstrou-se que a uréia pode ser o principal fator na geração de estresse oxidativo em pacientes com DRC. Além disso, a inibição da atividade d-ALA-D foi positivamente correlacionada com níveis de hemoglobina, demonstrando o papel fundamental da enzima d-ALA-D na biossíntese do heme e no desenvolvimento de anemia em pacientes com CRF. Estudos descreveram que o acúmulo de d-ALA pode levar ao aumento do estresse oxidativo, e a diminuição da eficiência nos mecanismos de defesa celular contra as espécies reativas de oxigênio pode levar a peroxidação lipídica e também a inibição da atividade da d- ALA-D, com concomitante alteração na síntese do heme, formando assim um ciclo de destruição. Esse estudo demonstrou várias alterações em pacientes com insuficiência renal crônica, sendo que muitas delas ajudam a explicar a tendência a desenvolver doença cardiovascular precoce nesses pacientes. / Hemostatic abnormalities are commonly found in patients with renal failure. Both a bleeding diathesis and the uremic prothrombotic state may be caused by renal disease. The main role of blood platelets is to ensure primary hemostasis, which is the maintenance of vessel integrity and cessation of bleeding upon injury. While playing a major part in acute arterial thrombosis, platelets are also involved in inflammation, atherosclerosis, and angiogenesis. When platelets are undergo activation first adhere to the subendothelial matrix where they become activated and release secondary agonists such as ATP, ADP, thromboxane A2, serotonin and several other biologically active substances. ADP and ATP play a crucial role in platelet activation, acting through P2 receptors. This release may be responsible for the activation, recruitment, and induction of aggregation of additional platelets in the microenvironment. Thus, the metabolism of ADP in the blood is important for the regulation of platelet functions. NTPDase (ecto-CD39) is that hydrolyzes extracellular adenosine tri- and diphosphate (ATP, ADP) to adenosine monophosphate (AMP), which is subsequently converted into adenosine by 5’- nucleotidase (CD73). The objectives of this study were to explore the relations between platelet dysfunction in uremia with hemostatic abnormalities and the severity of kidney disease in patients with CRF under conservative treatment (nondialysed - ND) and hemodialysis (HD) treatment companing to heathy subjects with the same age. The activities of the enzymes NTPDase and 5´-nucleotidase were analyzed in platelets from patients with chronic renal failure (CRF), both undergoing hemodialysis treatment (HD) and not undergoing hemodialysis (ND), as well as from a control group. The results showed an increase in platelet NTPDase activity in CRF patients on HD treatment (52.88%) with ATP as substrate. ADP hydrolysis was decreased (33.68% and 39.75%) in HD and ND patients, respectively. In addition, 5’-nucleotidase activity was elevated in the HD (160%) and ND (81.49%) groups when compared to the control group. Significant correlation was found among ATP, ADP and AMP hydrolysis and plasma creatinine and urea levels. Patients were compared statistically according the time of hemodialysis treatment. We found enhanced NTPDase with ATP substrate and decrease with ADP substrate, and increase in 5’-nucleotidase activity between 49 and 72 months on HD patients. Our results suggest the existence of alterations in nucleotide hydrolysis in platelets, which might contribute to abnormal homeostasis in renal failure patients, thus and the enhanced risk of thromboembolic complication and accelerated atherosclerosis in patients with renal failure. Our knowledge about stimuli and sources of oxidative stress, and about its role as an important cofactor contributing to endothelial dysfunction, inflammation, atherosclerosis and glomerulosclerosis has substantially increase over the last years. Cardiovascular disease (CVD) is the major cause of death in patients with renal insufficiency, accounting for 50% of all deaths in renal replacement therapy patients and in recipients of renal transplants. Mortality from CVD in patients with renal insufficiency is approximately 9% per year, which is about 30 times the risk in the general population. Oxidative stress defines an imbalance between formation of reactive oxygen species (ROS) and antioxidative defense mechanisms. In view of the profound biological effects of ROS, in recent years numerous clinical and experimental studies focused on detection of signs of oxidative stress in renal patients. However, the influence of uremia and the hemodialysis procedure, respectively, has not been elucidated. Oxidative stress has been implicated in long-term complications including anemia, amyloidosis, accelerated atherosclerosis, and malnutrition. In this study, we studied the influence of uremia and hemodialysis on oxidative stress and δ-aminolevulinic acid dehydratase (δ-ALA-D) activity in patients with CRF on HD treatment, in patients ND and in a control group. An increased lipid peroxidation was observed in the serum of HD and ND patients, as measured by TBARS serum levels. However, erythrocytic TBARS was only elevated in HD patients. The activity of catalase was increased (83.56%, 61.23%) in HD and ND groups, respectively. This study also showed an inhibition Blood δ--ALA-D activity of HD and ND patients was significantly lower when compared with the control group. A positive correlation was also observed between δ-ALA-D or δ-ALA-D/DTT with hemoglobin (r=0.55, r=0.42), respectively, and a negative correlated were observed between δ-ALA-D or δ-ALA-D/DTT with TBARS level in erythrocytes (r= - 0.54, r=-0.51), respectively. Furthermore, a negative correlation was found between δ-ALA-D or δ-ALA-D/DTT and CAT activity (r= -0.63, r= -0.5), respectively. In this study, it was shown that uremia itself could be the principal factor in generating oxidative stress in CRF patients. Furthermore, the inhibition of d-ALA-D activity was positively correlated with hemoglobin levels, showing the fundamental role of this enzyme in heme biosynthesis and the development of anemia in patients with CRF. Studies reported that the accumulation of d-ALA may lead to increased oxidative stress. In addition an existence of a decreased efficiency in the mechanisms of cellular defense against reactive oxygen species can lead to lipid peroxidation and inhibition of the activity of d-ALA-D with concomitant change in the synthesis of heme, thus forming a cycle of destruction. This study showed several changes in patients with chronic renal failure, which may to explain the tendency to develop cardiovascular disease in these patients early.

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:19:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morganti_RafaelPrada_D.pdf: 740260 bytes, checksum: c6b0779cd2f8af7471aefb0da921a0a6 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A sepsis é a segunda causa de morte em pacientes internados em unidades de tratamento intensivo não coronariano. Pacientes com sepsis apresentam anormalidades plaquetárias como trombocitopenia, prolongamento do tempo de coagulação, coagulação intravascular disseminada, trombose microvascular maciça e sangramentos. Entretanto, os mecanismos envolvidos nestas alterações plaquetárias ainda são mal compreendidos. O objetivo deste trabalho foi investigar as ações do lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, e de enterotoxinas de Staphylococcus aureus (SEA e SEB), na adesão e na agregação de plaquetas humanas, bem como os mecanismos envolvidos nesses fenômenos. As plaquetas foram expostas ao LPS, SEA ou SEB em diferentes concentrações e tempos de incubação para avaliação in vitro da adesão ou agregação. Além disso, realizou-se experimentos para verificar o papel do óxido nítrico (NO) e de espécies reativas de oxigênio nas ações induzidas pelo LPS, SEA e SEB, assim como a sinalização intracelular (mobilização de Ca+2) e ativação do receptor do fibrinogênio glicoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). A incubação de plaquetas com LPS, SEA e SEB por períodos 5 a 120 min inibiu a adesão espontânea das plaquetas ao fibrinogênio, sendo esta inibição dependente da concentração e do tempo de incubação. A adesão de plaquetas ativadas com trombina também foi inibida após incubação com LPS, SEA ou SEB por 5 a 120 min. Porém, a inibição em plaquetas ativadas foi menor quando comparada à inibição da adesão espontânea. Esta inibição ocorreu de forma independente de aumentos intraplaquetários de GMPc e AMPc. Com o objetivo de se entender o mecanismo de ação envolvido na inibição da adesão plaquetária pelo LPS, SEA e SEB as plaquetas foram pré-tratadas com os seguintes agentes farmacológicos: superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido), polietilino glicol superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido intracelular), polietileno glicol catalase (degrada peróxido de hidrogênio), puromicina e ciclohexamida (inibidores de síntese protéica). Em conjunto, nossos dados mostraram que o efeito inibitório do LPS não envolve aumento de anion superóxido (O2 -) e de peróxido de hidrogênio (H2O2), nem a formação de proteínas neo-sintetizadas, e alterações na ativação da GPIIb/IIIa. Por outro lado, o LPS reduziu significativamente o influxo externo de cálcio, sem afetar a mobilização intracelular deste cátion. Em relação às enterotoxinas estafilocócicas, a síntese de neo-proteínas e aumento de O2 - não tem papel direto sobre a inibição plaquetária, embora um aumento nas concentrações de H2O2 intracelulares esteja ligado a esta resposta. Em conclusão, a exposição ao LPS inibiu a adesão a agregação plaquetária, dosee tempo-dependente, inibindo a influxo de cálcio; da mesma forma, a incubação com SEA ou SEB inibiu a adesão de plaquetas ao fibrinogênio, por um mecanismo que envolveria a formação de H2O2 / Abstract: Sepsis is the second major cause of death in intensive care unit. Septic patients show abnormalities in platelet like thrombocytopenia, prolongation in coagulation time, disseminated intravascular coagulation, deep venous thrombosis and bleedings. However, the mechanisms involved in these platelet alterations are not totally clear. The objective of this work was investigate the actions of lipopolysaccharide (LPS) from E. coli and enterotoxins from Staphylococcus aureus (SEA and SEB), in human platelet adhesion and aggregation, likewise the mechanism involved in these phenomenon. The platelets were exposed to LPS, SEA or SEB in different concentrations and times of incubation in vitro evaluations of adhesion and aggregation. Moreover, experiments to elucidate the participation of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species in the actions of LPS, SEA and SEB, likewise the intracellular sinalization (calcium mobilization) and activation of fibrinogen receptor glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa) were carry out. The platelets incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min, inhibited the spontaneous adhesion to fibrinogen and this inhibition was dependent of concentration and time of incubation. The thrombin activated adhesion of platelets was concentration and time dependently also inhibited after incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min. However, the activated platelets inhibition was lower when compared to spontaneous adhesion inhibition. This inhibition was not dependent of intracellular levels increase of cGMP and cAMP. To understand the mechanism of action involved in the platelet adhesion inhibition by LPS, SEA and SEB, the platelets were previously treated with pharmacological agents like: superoxide dismutase (superoxide anion scavenger), superoxide dismutase-polyethylene glycol (superoxide anion intracellular scavenger), catalase-polyethylene glycol (Hydrogen peroxide intracellular scavenger), puromycin and cyclohexamide (protein synthesis inhibitors). Our data suggests that the inhibitory effect of LPS neither involve superoxide anion (O2 -) and hydrogen peroxide (H2O2) increase, nor the formation of neo-proteins, and alterations on activation of glycoprotein IIb/IIIa. In contrast, LPS significantly reduce the external calcium influx, without effecting calcium internal mobilization. With regard to staphylococcal enterotoxin, the protein synthesis and rise in O2 - do not play a role in the platelet inhibition; however the increase of H2O2 intracellular concentration was involved in this response. In conclusion, platelet aggregation and adhesion was inhibited after addition of LPS, concentration and time-dependently, inhibiting calcium influx; similary, incubation with SEA or SEB inhibited platelets adhesion to fibrinogen, by a mechanism involving H2O2 formation / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientadores: Fernando Ferreira Costa, Valder Roberval Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ozelo_MargarethCastro_D.pdf: 10683645 bytes, checksum: d3f023c228cd390367aaa3992b5e629d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As plaquetas estão associadas não só às atividades hemostáticas, como também à resposta inflamatória. O comprometimento funcional das plaquetas está relacionado à ocorrência de patologias hemorrágicas e ao maior risco para desenvolvimento de aterosclerose e doença arterial oclusiva. O primeiro objetivo deste estudo foi estudar as alterações do complexo das glicoproteínas de membrana plaquetária (GP) Ib(a e f3)-IX-V que levam à perda da sua capacidade hemostática, resultando na patologia hemorrágica denominada Síndrome de Bernard-Soulier (SBS). Foram avaliadas as alterações moleculares da GP Iba, que contém os sítios de ligação para fator de von Willebrand (FvW), trombina e integrinas (presentes na região N-terminal globular da GP Iba). Entre os casos com plaquetopenia persistente avaliados no Ambulatório de Hemostasia do Hemocentro da Unicamp, houve a confirmação do diagnóstico de SBS em três pacientes. Em dois destes indivíduos com SBS foi possível identificar duas mutações distintas em homozigose na região N-terminal globular da GP Iba. Uma destas mutações é resultado da troca de T~A, levando à substituição da Cys209 ~ Ser, comprometendo uma das ligações dissulfídicas que ocorrem entre os resíduos Cys209 - Cys248 e Cys211 - Cys268. Esta mesma mutação já havia sido descrita anteriormente por Simsek e cols. (1994). A segunda mutação evidenciou pela primeira vez a ocorrência da troca de T~C, com substituição da Leu115~Pro, na região das repetições ricas em leucina da GP Iba. Em ambos os casos a avaliação por citometria de fluxo mostrou que a GP Iba estava ausente, sugerindo que estes resíduos sejam essenciais para manter a integridade da molécula. o terceiro paciente apesar do diagnóstico clínico e laboratorial de 888, confirmado pela ausência das GP Iba e GP IX pela citometria de fluxo evidenciou exclusivamente uma alteração não descrita no códon iniciador ATG do gene da GP IbB, levando à substituição da -25Met --7 Arg em heterozigose. No entanto, foi observado que outros membros da família, apesar de assintomáticos, eram portadores da mesma alteração. Embora na literatura, a 888 seja relacionada exclusivamente com mutações ocorrendo nos genes da GP Iba, GP IbB e GP IX, é possível que a diferença fenotípica e clínica deste caso possa revelar outros mecanismos reguladores do complexo GP Ib-IX-V possam estar envolvidos na ocorrência da 888. Na outra parte deste estudo, foi estudada a prevalência genotípica de três polimorfismos da GP Iba: seqüência Kozak, HPA-2 e VNTR. A avaliação de 492 indivíduos brasileiros, pertencentes a três grupos étnicos distintos (caucasóides; negróides e indígenas), permitiu a identificação de dez haplótipos distintos, onde: o Kozak-TT/HPA-2aaNNTR-CC foi o mais comum (-40%) entre os caucasóides e negróides e o Kozak- TT/HP A-2aaNNTR-CC e Kozak- TC/HP A-2aaNNTR-CC estiveram presentes na mesma proporção entre os indígenas. Embora anteriormente fosse descrita a presença de uma ligação de desequilíbrio entre os polimorfismos VNTR e HPA-2, neste estudo esta ligação não foi completa em cerca de 10% dos indivíduos de todos os três grupos. Dois indivíduos não relacionados apresentaram uma variante rara, o alelo VNTR - E, onde há perda da seqüência de 39 pb, o que foi confirmado pelo seqüenciamento da região. O estudo funcional das plaquetas destes indivíduos e seus familiares, não evidenciaram diferença em relação às demais variantes do VNTR. alelo VNTR-A com quatro cópias da repetição de 39 pb, presente em populações asiáticas, não foi encontrado em nenhum dos cerca de 1.000 indivíduos aqui estudados. No entanto, entre duas espécies de primatas não humanos (chimpanzé e gorila), ambos apresentaram oalelo VNTR-A em homozigose (Kozak-TT/HPA- 2aaIVNTR-AA). Foi possível desta maneira sugerir um novo mecanismo evolutivo para o surgimento das variantes do gene da GP Iba, onde diferentemente do proposto anteriormente, acreditamos que a variante com maior número de cópias tenha precedido as demais, e com a perda sucessiva destas cópias, as variantes menores foram surgindo. Finalmente em um estudo caso-controle investigou-se o risco para ocorrência de infarto agudo do miocárdio (IAM) relacionado aos três polimorfismos da GP Iba. Foram avaliados 350 indivíduos com antecedente de IAM, divididos em grupo 1, que foram incluídos no momento do primeiro IAM e grupo 2, que sobreviveram a um ou mais episódio de IAM há mais de seis meses. Estes pacientes foram pareados por sexo, idade e raça a 350 controles. O genótipo VNTR-CD, assim como o alelo D, foi mais freqüente entre os pacientes com IAM que entre os controles. Embora esses resultados sejam diferentes do descrito na literatura. A análise da gravidade da doença coronariana oclusiva, baseada no número de vasos com obstrução de pelo menos 50% do lúmen, mostrou um aumento significativo da prevalência do alelo D entre os indivíduos com doença mais grave. Os resultados deste trabalho corroboram com estudos anteriores sobre a influência dos polimorfismos do gene da GP Iba e a função plaquetária / Abstract: Platelets are associated not only with haemostatic activity, but also with inflammatory response. Functional alterations of platelets are related with bleeding diseases and with a greater risk for developing atheriosclerosis and occlusive artery disease. In this study we analyzed the molecular alterations in the platelet membrane glycoprotein (GP) Iba, the subunit of the complex GP Ib(a and ~)-IX-V. The GP Iba contains binding sites for von Willebrand factor (vWF), thrombin and actin-binding proteins. First of ali, we studied the mutations in the complex GP Ib-IX-V related with the 1055of haemostatic function, resulting in a bleeding disease denominated Bernard-Soulier syndrome (BSS). We identified two distinct mutations in homozygous affecting the Nterminal globular region (where the vWF and thrombin biding sites are located) in two unrelated subjects with BSS. One of these mutations, was first describe by Simsek et aI., 1994, where a homozygous single base pair mutation T-7A, resulted in a substitution of a Cys209 -7 Ser, which involving one of the two disulfide loops from the C-terminal flanking sequence between Cys209 - Cys248 and Cys211 - Cys268. The second subject with BSS presented for the first time, the occurrence of a single base pair exchange T-7C, leading to a single amino acid substitution of the Leu115-7Pro, in the region of the leucine-rich repeats of the GP Iba. In both cases a 1055of GP Iba expression was observed, suggesting that these residues, are essential in maintaining the integrity of the molecule. The third case of BSS, presents serious hemorrhagic symptoms and an intense reduce in the platelet number, in addition to a lack of expression of GP Iba and GP IX. Although none of the other family members presented a bleeding history, the mother of the patient, a maternal uncle and her maternal grandfather, presented a mild macrothrombocytopenia. The sequence of the involved genes (GP Iba, GP Ib(3e GP IX), revealed a non described alteration with the exchange of T~G in initial start ATG codon of the GP Ib(3gene exclusively, leading to the substitution of the -25Met ~ Arg in heterozygosity as in the patient and between the affected members of the family. Thus, it may be that the BSS phenotype in this patient involves other proteins or gene regulators related to the complex GP Ib-IX-V. There are no other genes described involving BSS development , except the first three described, GP Iba, GP Ib(3e GP IX. In the other part of this study, we determined the prevalence of the distinct genetic variants of the GP Iba, resulting from three polymorphisms: Kozak sequence, HPA-2 and VNTR. First, 492 subjects from three distinct Brazilian ethnic groups were evaluated, including: Caucasians; African descents, and Indigenous. The presence of 10 distinct haplotypes were determined. The most common (-40%) haplotype was the Kozak-TT/HPA-2aaNNTR-CC for both Caucasian and African descents. However, among Indigenous, Kozak-TT/HPA-2aaNNTR-CC and Kozak-TC/HPA-2aaNNTR-CC were equal/y present. Although a strong linkage disequilibrium between VNTR and HPA-2 polymorphism had been observed at first, here we determined incomplete linkage disequilibrium in 10% of the subjects from ali ethnic groups. Two unrelated subjects presented the allele VNTR - E, arare variant lacking the 39bp repeat, and functional platelet studies among these subjects and their family members revealed no abnormalities. No VNTR-A allele, the largest variant containing 4 copies of the repeats, was identified among approximately 1,000 subjects studied in this population. However, homozygosity for the VNTR-A allele (Kozak-TT/HPA-2aaNNTRAA) was determined in two distinct species of non-human primates (chimpanzee and gorilla). These results suggest a greater complex evolutionary mechanism in the macroglycoprotein region of the GP Iba gene, different from that previously proposed, an hypothesis is that the largest variant, VNTR-A should be considered the oldest allele and that subsequent deletions resulted in the smaller forms. We also carried out a case-control study correlating the three polymorphisms of the GP Iba and the risk for myocardial infarction (MI) occurrence. 350 subjects who had suffered a previously episode of MI, were divided into: group 1, having suffered the first MI at the moment of inclusion and group 2, who had survived to one or more episodes of MI, in which the last episode had occurred at least six months before enrollment. These patients were matched by sex, age and race to 350 controls. Genotype VNTRCD, as well as allele D were more frequent among the patients with MI than among controls. Although this differed from that previously described, it was possible to observe that when the severity of coronary artery disease among these patients was analyzed, assigned by the number of affected vessels by coronary angiography, the allele O was also associated with more extensive disease. Also, it is in accordance to functional data related to the polymorphisms of GP Iba gene previously described / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Manifiesta que el trasplante de progenitores hematopoyéticos (TPH) es un tratamiento empleado tanto en pacientes con tumores sólidos como en enfermedades onco-hematológicas, especialmente leucemias. Para asegurar la estabilidad del pacientes emplea marcadores predictivos de los primeros signos de arraigo y recuperación de TPH siendo principalmente el conteo absoluto de neutrófilos (CAN) y el conteo de plaquetas (PQ). En la última década, los analizadores hematológicos han introducido nuevos parámetros clínicos, como la Fracción de plaquetas inmaduras (% FPI), que determina las plaquetas reticuladas en sangre periférica. Nuestro estudio prospectivo pretende demostrar la utilidad y eficacia del % FPI como predictor de arraigo de injerto en comparación con CAN y PQ. Se realizó un estudio prospectivo analítico-observacional, obteniendo datos de los parámetros CAN, PQ, % FPI y % FRI de un analizador hematológico del laboratorio de Hematología del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas en el periodo de setiembre del 2018 a mayo 2019. Muestra: 56 pacientes con enfermedades onco-hematológicas sometidos a TPH autólogo atendidos en el Servicio de protección al paciente neutropénico- SEPIN/TAMO. La mediana en días de arraigo para CAN fue de 11 y de PQ fue 7. Para FPI ≥ 2 % fue 10 y para FPI ≥ 3.3 %, 14. FPI ≥ 2 % obtuvo arraigo antes que CAN. La mediana del día de arraigo para FRI ≥ 2.5 % fue 11 días y para FRI ≥ 5.5 % fue 12, resultando mayores en relación a los días de arraigo según CAN. Sin embargo, FRI ≥ 2.5 % obtuvo arraigo al mismo tiempo en días que CAN y éste solo fue mayor a FRI ≥ 5.5 % por un día. Se concluye que el parámetro % FPI y % FRI no fueron útiles para predecir la recuperación de respuesta medular, pues no aumentaron su valor antes que los parámetros CAN y PQ. Por lo tanto el uso de estos parámetros para predecir individualmente la recuperación hematopoyética no tiene significancia clínica. / Tesis

Objetivo: Determinar el Recuento plaquetario y valores de sus índices (VPM, PDW, P-LCR E IPF) en casos con diagnostico de Leucemia Mieloide Crónica (LMC) atendidos en el INEN (Instituto Nacional de Enfermedades Neoplasicas) durante Agosto 2013 – Mayo 2014. Métodos: La muestra está conformada por casos con LMC diagnosticados y atendidos en el INEN entre el 01 de agosto del 2013 al 31 de mayo del 2014. Fueron 34 casos que cumplieron los criterios de inclusión, se elabora una ficha de recolección de datos para el registro de la información obtenida tanto de los analizadores hematológicos como de las historias clínicas revisadas. Resultados: Se recolectaron 34 casos de LMC atendidos en INEN. Según el género se colectaron 22 casos (64.7%) masculinos y 12 (35.3%) casos femeninos. Las edades abarcaron entre 12 y 79 con media de 37 años, 4 meses y 6 días. Todos los casos fueron separados en dos grupos, según estado Clínico hallándose 21 casos (61.76%) de pacientes en tratamiento para LMC, considerados como “antiguos”; y 13 casos (38.24%) fueron pacientes con diagnóstico reciente de LMC considerados como “nuevos”.Las características hematológicas en LMC en fase crónica son recuentos plaquetarios e índices en casos antiguos y nuevos respectivamente, se determinó el recuento de Plaquetas por Impedancia: pi 842/845 x103/uL, recuento de plaquetas Ópticas: po 1037/917 x103/uL, para ambas metodologías se halla Trombocitosis; y en los Índices Plaquetarios: Volumen plaquetario medio: VPM 10.40/10.78 fL, Ancho de distribución plaquetaria: PDW 12.30/12.85 fL, relación de plaquetas gigante: P-LCR 27.77/30.82 %, fracción de plaquetas inmaduras: IPF 5.11/4.49 %. Valores de Referencia usados: Rcto Pqt: 150 – 450 x103/uL, VPM: 8.8-12.1 fL, PDW: 9.4-16.2 fL, P-LCR: 14.1-41.9% e IPF: 0.7 – 5.2 %. Conclusiones: Se halla trombocitosis en ambos grupos estudiados, y con respecto a los índices plaquetarios todas las medias obtenidas están dentro de los valores de referencia normales usados. No existe una correlación entre los recuentos plaquetarios medidas por 2 metodologías (Impedancia y Ópticas) y los índices plaquetarios estudiados. / Tesis

El síndrome antifosfolípido (SAF) es una enfermedad autoinmune sistémica, que se caracteriza por la presencia conjunta de trombosis vascular o complicaciones obstétricas (pérdida fetal o abortos espontáneos a repetición) y la presencia de anticuerpos antifosfolípidos (aFLs) en el plasma de los pacientes. El mecanismo por el cual esos anticuerpos producen la enfermedad no se comprende totalmente, y esto se debe a la poli especificidad de estos anticuerpos, la multiplicidad de los sitios de acción y por la variabilidad del contexto clínico en donde se presenta la enfermedad. Mediante estudios in vitro e in vivo se demostró que la actividad trombogénica de los aFLs esta determinada entre otras por la interferencia que producen estos anticuerpos con el sistema hemostático: inhiben el camino de la proteína C activada, impiden la normal fibrinolisis y producen la activación celular, principalmente células endoteliales, monocitos y plaquetas. En las células endoteliales (CE) y en los monocitos, los aFLs incrementan la expresión de FT y moléculas de adhesión, mientras que en las plaquetas se observó un aumento en la producción plaquetaria de TXA2, agregación y liberación de los gránulos plaquetarios en presencia de dosis subagregantes de diferentes agonistas. Con el fin de dilucidar los mecanismos intracelulares involucrados en la activación celular mediada por los aFLs, se estudió el rol de la p38 MAPK, una proteína serina/treonina quinasa, que constituye la mayor cascada de transducción de señales inflamatorias desde la superficie celular hacia el núcleo. En este trabajo de tesis se comprobó que los aFLs producen la activación de la p38 MAPk en las plaquetas y en las CE, y que esta vía de activación intracelular es en gran parte responsable del incremento de la activación plaquetaria y de las CE, debido a que los efectos protrombóticos y proinflamatorios de los aFLs son disminuyen significativamente cuando se inhibe la p38MAPk con el inhibidor especifico SB20380. / Antiphospholipid Syndrome (APS) is a systemic autoimmune disease, characterized by the joint presence of vascular thrombosis or obstetric complications (fetal loss or recurrent spontaneous abortions) and the presence of antiphospholipid antibodies (aPL) in the plasma of patient. The mechanism by which these antibodies cause disease is not fully understood, and this is due to the poly specificity of these antibodies, multiple sites of action and variability of clinical context where the disease occurs. Using in vitro and in vivo showed that the thrombogenic activity of aPL is determined among others by the interference caused by these antibodies with the hemostatic system: the way to inhibit activated protein C, prevent normal fibrinolysis and cell activation occur mainly endothelial cells, monocytes and platelets. In endothelial cells (EC) and monocytes, AFLS increase TF expression and adhesion molecules, whereas in platelets was observed an increase in platelet production of TXA2, platelet aggregation and release in the presence of doses of subagregantes different agonists. In order to elucidate the intracellular mechanisms involved in mediated cell activation by the aPL, we studied the rol of p38 MAPK, a protein serine / threonine kinase, which constitutes the major transduction cascade of inflammatory signals from the cell surface to the nucleus. In this thesis aPLs were found to produce the activation of p38 MAPK in platelets and EC, and that the intracellular activation pathway is largely responsible for the increased platelet activation and EC, because that prothrombotic and proinflammatory effects of aPLs are significantly diminished when p38MAPK was inhibited with specific inhibitor SB20380.

O curto período de armazenamento dos concentrados de plaquetas (CP), de 5 a 7 dias, torna esse hemocomponente crítico para os serviços de hemoterapia. A criopreservação se apresenta então como uma possibilidade para a manutenção dos estoques por período mais prolongado. Essa prática exige a adição de substância crioprotetora e a adequação do volume em relação à concentração de plaquetas. O CP obtido por aférese (CPAF) é um hemocomponente proveniente de um único doador, coletado em sistema automatizado, que equivale a 6-8 unidades de CP obtidas da coleta de doadores convencional. Objetivo: Avaliar o efeito da criopreservação de CPAF no quinto dia do armazenamento, por meio de análises imunofenotípicas e funcionais das plaquetas, utilizando o crioprotetor dimetilsulfóxido (DMSO) a 5%, em freezer a -80°C e descongelamento em banho maria a 37°C, sem a remoção do crioprotetor. Material e Métodos: Foram analisadas 20 unidades de CPAF em quatro fases diferentes do processo: Fase I (pré-redução de volume), Fase II (pós-repouso, agitação e adição do DMSO), Fase III (pós-descongelamento) e Fase IV (após duas horas de descongelamento e agitação). Todas as bolsas foram avaliadas quanto à presença do \"swirling\" plaquetário, e análise microbiológica, contagem de plaquetas e leucócitos, determinação do volume plaquetário médio (VPM), análise do pH, dosagem de desidrogenase lática (DHL) e glicose, a ativação plaquetária por meio de citometria de fluxo com os marcadores CD61, CD62P e anexina V e para a avaliação funcional, as técnicas de microagregação plaquetária e retração do coágulo. Os resultados de cada fase foram analisados e comparados, considerando resultados p< 0,05 de significância estatística, avaliada pelos testes de Wilcoxon e Teste-T pareado. Resultados: Todos os CPs criopreservados apresentaram na inspeção visual presença de \"swirling\" e ausência de grumos. O pH manteve-se com mediana de 7,185 (6,076-7,528) pra fase III, análise microbiológica foi negativa em todas as unidades criopreservadas, o número mediano de plaquetas caiu de 3,04x1011/U na Fase II para 2,27x1011/U na fase III (redução de 25,32%). A ativação plaquetária na fase II foi de 23% CD62P+ para 44% CD62P+ na fase III (p=0,067). O marcador anexina V estava expresso em 13% das plaquetas na fase II e em 11% na fase III, (p=0,33). A LDH aumentou de 747 U/L (4-3079) para 1.428 U/L (662-2303) da fase II para a fase III, respectivamente (p=0,055). A glicose diminuiu em todas as fases (p<0,0001). Os testes de função plaquetária revelaram que a plaquetas descongeladas mantêm sua função. Conclusão: Os resultados obtidos mostraram que, embora tenham ocorrido ativação e redução significativa do número de plaquetas, o produto final conservou quantidade suficiente de plaquetas, cujas funções foram mantidas, o que torna viável a utilização do hemocomponente CP criopreservado. Sugere ainda que os CPAF possam ser criopreservados no quinto dia de armazenamento, com o uso do DMSO a 5%, ideal para que não se faça necessário sua remoção pós-descongelamento. / The concentration time of the platelet concentrates (CP), from 5 to 7 days, makes this blood component critical for hemotherapy services. Cryopreservation presents itself as a possibility of maintaining stocks for a longer period. This practice requires an additional cryoprotectant and a suitability of volume in relation to platelet concentration. The CP collected by the same (CPAF) is a blood component of a single dosage, being collected in an automated system, which is equivalent to 6-8 CP units from the collection of conventional donors. Objective: To evaluate the effect of CPAF cryopreservation on the fifth day of storage, by means of immunophenotypic and functional platelet analysis using the 5% DMSO cryoprotectant in a freezer at -80 ° C and thawing in a Maria bath at 37 ° C, without removal of the cryoprotectant. Material and Methods: 20 units of CPAF were analyzed in four different phases of the process: Phase I (pre-reduction of volume), Phase II (post-rest, agitation and DMSO addition), Phase III (post-thaw) and Phase IV (after two hours of thawing and shaking). All units were evaluated for platelet swirling and microbiological analysis, platelet and leukocyte counts, determination of mean platelet volume (MVP), pH analysis, lactate dehydrogenase (LDH) and glucose, platelet activation by means of flow cytometry with the markers CD61, CD62P and annexin V and for the functional evaluation, platelet microaggregation and clot retraction techniques. The results of each phase were analyzed and compared, considering results p <0.05 of statistical significance, evaluated by the Wilcoxon and Paired T-test. Results: All cryopreserved CPs presented visual presence of \"swirling\" and absence of lumps. The pH was maintained at a median of 7.185 (6.076- 7.528) for phase III, microbiological analysis was negative in all cryopreserved units, the median number of platelets fell from 3.04x1011/U in Phase II to 2.27x1011/U in phase III (reduction of 25.32%). Phase II platelet activation was 23% CD62P + to 44% CD62P + in phase III (p=0.067). The annexin V marker was expressed in 13% of platelets in phase II and 11% in phase III (p=0.33). LDH increased from 747 U/L (4-3,079) to 1,428 U / L (662-2303) from phase II to phase III, respectively (p<0,0055). Glucose decreased in all phases (p <0.0001). Platelet function tests have revealed that thawed platelets maintain their function. Conclusion: The results showed that, although activation and significant reduction of platelet count occurred, the end product preserved sufficient quantity of platelets, whose functions were maintained, which makes the use of the cryopreserved CP blood component viable. It also suggests that CPAFs can be cryopreserved on the fifth day of storage using 5% DMSO, so that their post-thaw removal is not required.

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Mário Taba Júnior / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente e tratados com a associação do Plasma Rico em Plaquetas (PRP), partículas esféricas de Novo Vidro Bioativo (NVB) e Sulfato de Cálcio (SC). Os segundos e quartos prémolares mandibulares de 8 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Usando o modelo de boca dividida, os dentes foram aleatoriamente divididos em 2 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo e Grupo T (teste): o defeito foi preenchido com a associação de PRP, NVB e SC. Os retalhos foram reposicionados para cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pósoperatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com Hematoxilina e Eosina. Foram realizadas análises histométrica, usando um software analisador de imagens, e histológica. Foram avaliadas medidas lineares e de área da cicatrização periodontal, calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados percentuais foram transformados em arcoseno para análise estatística (análise de variância, p < 0,05). A regeneração óssea e de tecido conjuntivo nos defeitos de furca foi incompleta na maioria dos espécimes. O Grupo C apresentou quantidade de neoformação óssea e regeneração periodontal significativamente maior que o Grupo T. Quantidade considerável de partículas remanescentes de NVB foi observada na maioria dos espécimes do Grupo T. Dentro dos limites do presente estudo, pode-se concluir que a associação do PRP, NVB e SC não foi mais efetiva que o debridamento cirúrgico somente no tratamento de defeitos de furca Classe II. / Abstract: The purpose of this study was to histologically evaluate the healing of surgically created Class II furcation defects treated using a combination of platelet-rich plasma (PRP), new spherical bioactive glass (NBG) particles and calcium sulfate (CS). The second and fourth mandibular premolars of eight mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Using a split-mouth design, teeth were randomly divided into two groups: group C (control) - defect filled with blood clot only; and group T (test) - defect filled with a combination of PRP, NBG and CS. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized 90 days post-surgery. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either hematoxylin and eosin. Histometric, using image-analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (analysis of variance; P<0.05). Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Group C had significantly more bone formation and periodontal regeneration than group T. A considerable amount of remaining NBG particles was observed in most specimens of group T. Within the limits of this study, it can be concluded that the combination of PRP, NBG and CS was not more effective than the surgical debridement alone in the treatment of Class II furcation defects. / Doutor

Orientador: Leonardo Perez Faverani / Coorientador: Osvaldo Magro Filho / Banca: Roberta Okamoto / Banca: Ana Paula Farnezi Bassi / Banca: Marisa Aparecida Cabrini Gabrielli / Banca: Adriano Rocha Germano / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da Fibrina Rica em Plaqueta (FRP) no processo inflamatório em defeitos críticos em calotas de ratos e sua consequente reparação tecidual. Foram utilizados 128 (cento e vinte e oito) ratos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar), adultos, com peso corporal entre 450 e 500g. Os animais foram divididos aleatoriamente em 4 grupos equitativos que compuseram a amostra do trabalho, onde no grupo coágulo (GC) foi realizado o defeito ósseo de tamanho crítico preenchido com coágulo sanguíneo; grupo anti-inflamatório não esteroidal (AINE) que teve os defeitos de tamanho crítico preenchidos com coágulo sanguíneo e administrado cetoprofeno (10mg/kg dia); o grupo fibrina rica em plaquetas (FRP) com defeitos de tamanho crítico preenchidos com preparado de fibrina rica em plaquetas autóloga; e o grupo fibrina rica em plaquetas mais AINE (FRP + AINE) com defeitos de tamanho crítico preenchidos com preparado de fibrina rica em plaquetas autóloga e administrado cetoprofeno (10mg/kg dia). Cada grupo foi avaliado nos períodos de 2, 7, 14 e 28 dias e os espécimes analisados através da histometria, micro-CT e teste ELISA para presença de TNFα. Os dados quantitativos foram submetidos aos testes estatísticos ANOVA 1/2 fatores ou Kruskal-Wallis e pos Tukey e Dunn (p<0,01). Os resultados histométricos e microtomográficos evidenciaram maior formação óssea para o grupo PRF em comparação aos demais grupos (p<0,05) e menor presença de TNF-alfa no período inicia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The objective of this study was to evaluate the influence of Platelet Rich Fibrin (PRF) on the inflammatory process in critical defects in rat calvaria and its consequent tissue repair. One hundred twenty-eight adult rats (Rattus norvegicus, albinus, Wistar) with body weight between 450 and 500g were used for the study. The animals were randomly divided into 4 equitable groups that composed the work sample. In the clot group (GC) the critical size defect was filled with blood clot; the non-steroidal anti-inflammatory group (NSAID) had the critical size defects filled with blood clot and ketoprofen was given pos-operatively (10mg / kg day); the platelet-rich fibrin group (FRP) had the critical-size defects filled with autologous platelet-rich fibrin preparation; and platelet-rich fibrin group plus NSAIDs (FRP + NSAID) had the critical-size defects filled with autologous platelet-rich fibrin preparation and administered ketoprofen post-operatively (10mg / kg day). Each group was evaluated at 2, 7, 14 and 28 days after the surgical procedures. The samples were evaluated through histometry, micro- CT and ELISA for the presence of TNFα. The quantitative data were submitted to the statistical test ANOVA 1/2 factors or Kruskal-Wallis and post Tukey and Dunn (p <0.01). The histometric and microtomographic results showed higher bone formation for the PRF group compared to the other groups (p <0.05) and lower TNF-alpha in the initial period in the PRF group compared to the control group (p <0.05). It was concluded that the PRF was favorable since the beginning through the later periods, aiding in the inflammatory response and bone neoformation. (Complete abstract electronic access below) / Doutor