Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T18:48:10Z : No. of bitstreams: 1 bassi_apf_dr_aracadg.pdf: 3217175 bytes, checksum: 15fcc347b8288375940d5c7fe01b2d57 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho foi desenvolvido para verificar a ação do PRP isolado ou associado ao osso bovino anorgânico ou vidro bioativo. Foram utilizados, neste trabalho, 4 cães, machos, e neles foram confeccionadas 4 cavidades bilaterais na mandíbula, e depois divididos em 4 grupos: controle; PRP; PRP/Bio-Oss®; PRP/Bio-Gran®. Após 120 dias, os animais foram sacrificados e a análise histológica demostrou que o processo de reparo foi completo somente para o grupo Controle. Nos demais grupos não foi possível verificar o completo reparo das cavidades. Em nível biológico, os melhores resultados obtidos estão apontados em seqüência; PRP/Bio- Oss®; PRP/Bio-Gran®; e PRP. Esses achados foram confirmados por meio de análise histomorfométrica, onde as diferenças entre os grupos se mostraram estatisticamente signicantes na comparação do grupo Controle. Foi possível concluir neste estudo que o PRP isolado ou associado ao vidro bioativo e ao osso bovino anorgânico não favoreceu o processo de reparo. / This study evaluated the effect of PRP associeted to bovine anorganic bone or bioglass on bone healing. From adult male dogs leid form bone cavities prepared in earl side of the mandible, which were divided into four groups, according to the fillig material, as follows: control, PRP, PRP/ Bio-Oss, PRP/Bio-Gran. The animals were sacrified after 120 days, and healing was complete only in the control cavities. Among the treat groups, the better results were found for PRP/Bio-Oss, followed by PRP/Bio-Gran and PRP. Those findings were confirmed by histometric analysis, which showed statistically significant difference in the amount of bone formation favorable to the control cavities. Thus, PRP, associetd or not with bovine anorganic bone or bioglass did not favorable affect bone healing.

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Claudia Maria Coelho Alves / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração da aspirina (AAS), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre a evolução da periodontite experimental em ratos. Cinquenta ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 5 grupos (n=10), sendo 1 controle e 4 submetidos à periodontite através da instalação de ligadura bilateral na região de primeiro molar inferior. Os ratos submetidos à periodontite experimental foram tratados com solução de NaCl 0.9%, AAS (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), com uma única dose e diariamente, via gavagem. Após 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemimandíbulas do lado direito removidas para análise histológica e as gengivas do lado esquerdo para avaliação da expressão de TNF-α, IL-6 e TXA-2 por ELISA. O tratamento com as drogas antiplaquetárias induziu diminuição da expressão dos mediadores próinflamatórios analisados. Histologicamente, os animais tratados com drogas antiplaquetárias apresentaram gengiva com menor quantidade de células inflamatórias e maior quantidade de feixes de fibras colágenas suprajacentes ao osso alveolar. Os valores das medidas morfométricas foram significativamente menores nos animais tratados com derivados tienopiridínicos , enquanto os animais tratados com AAS apresentaram apenas uma tendência a menor reabsorção óssea quando comparados ao grupo NaCl 0,9%.Esses dados despertam o potencial anti-inflamatório das drogas antiplaquetárias e confirmam o envolvimento plaquetário no desenvolvimento da doença periodontal. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (AAS), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) on the evolution of experimental periodontitis in rats. Fifty rats (Rattus norvegicus albinos, Holtzman) were randomly divided into 5 groups (n = 10), with 1 control and 4 subjected to periodontitis through the installation of bilateral ligature in the region of first molar. The rats subjected to experimental periodontitis were treated with NaCl 0.9%, AAS (30 mg / kg), Clo (75 mg / kg) and Tic (300 mg / kg), with a single dose and daily by gavage. After 15 days of treatment, the animals were killed, the right hemi-jaw removed for histological analysis and gingival tissues on the left to evaluate the expression of TNF-α, IL-6 and TXA-2 by ELISA. Treatment with antiplatelet drugs induced decrease in expression of proinflammatory mediators analyzed. Histologically, the animals treated with antiplatelet drugs had gingival tissues with fewer inflammatory cells and larger bundles of collagen fibers overlying the alveolar bone. The values of morphometric measurements were significantly lower in animals treated with thienopyridine derivatives, while animals treated with AAS showed only a trend to lower bone resorption when compared with 0.9% NaCl. These data awaken the potential anti-inflammatory drugs antiplatelet and confirm the involvement of platelets in the development of periodontal disease. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:35:52Z : No. of bitstreams: 1 coimbra_ls_me_arafo.pdf: 5964104 bytes, checksum: 3c09044b764aa34e6190582152ee354a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administracao da aspirina (Asp), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre o processo de reparacao dos tecidos periodontais apos inducao experimental de periodontite em ratos. Primeiramente avaliou-se a acao destas drogas sobre a expressao das citocinas pro-inflamatorias: TNF-α, IL-6 e TXA2 no tecido gengival de 25 ratos subdivididos em 5 grupos (n=5), 15 dias apos a instalacao da ligadura ao redor do primeiro molar inferior. Para avaliacao do reparo dos tecidos periodontais, setenta e dois ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 6 grupos (n=12), sendo 1 controle e 5 submetidos a periodontite atraves da instalacao de ligadura bilateral na regiao de primeiro molar inferior. Apos 15 dias, o grupo controle e um grupo com periodontite foram sacrificados. Para a inducao do reparo dos tecidos periodontais, as ligaduras dos animais dos outros 4 grupos foram removidas e os ratos foram tratados com solucao de NaCl 0.9%, Asp (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), diariamente, via gavagem. Apos 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemi- mandibulas do lado direito removidas para analise histologica e as do lado esquerdo para avaliacao macroscopica, microtomografia computadorizada e analise da expressao, atividade especifica e co-localizacao das metaloproteinases de matriz (MMPs) -2 e -9 atraves de zimograma e zimografia in situ. Apos a retirada da ligadura, houve reparacao do osso alveolar e reparacao do tecido gengival representado pela recomposicao da arquitetura tecidual do epitélio e do tecido conjuntivo. O tratamento com Asp comprometeu a reparacao óssea alveolar na face mesial e acelerou na area de furca, ao passo que nao influenciou na recomposicao da arquitetura do tecido epitelial e... / The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (Asp), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) in the process of periodontal tissue repair after induction of experimental periodontitis in rats. First, we evaluated the action of these drugs on the expression of pro-inflammatory cytokines: TNF-α, IL-6 and TXA2 in the gingival tissue of 25 rats randomly distributed in five equal groups (n=5), 15 days after ligature placement around lower first molars. For periodontal tissue evaluation, seventy-two rats (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) were randomly distributed in 6 equal groups (n=12). One control and 5 submitted to a ligature-induced periodontitis model in the region of lower first molar bilaterally. After 15 days, the control group and a group with periodontitis were sacrificed. To induce periodontal tissue repair, ligatures from the other 4 groups were removed and the rats treated with NaCl 0.9%, Asp (30 mg/kg), Clo (75 mg/kg) and Tic (300 mg/kg) daily by gavage. After 15 days of treatment, animals were killed, the right mandibles were removed for histological analysis and the left side to macroscopic, microtomography evaluation and expression, activity and colocalization of matrix metalloproteinases (MMPs) -2 and -9 by zymogram and in situ zymography. After removal of the ligature, there was repair of the alveolar bone and gingival tissue represented by the restoration of tissue architecture of the epithelium and connective tissue. Treatment with Asp undertook the repair of the mesial alveolar bone and accelerated the repair of furcation area, while not influenced the restoration of tissue architecture and epithelial tissue. Treatment with Tic undertook the repair of mesial alveolar bone and furcation the area, as well as the repair of gingival epithelial... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-24Bitstream added on 2014-06-13T20:36:52Z : No. of bitstreams: 1 figueiredo_mn_me_arafo.pdf: 505100 bytes, checksum: eada950ead77995efc3596398acffd43 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração da aspirina (AAS), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre a evolução da periodontite experimental em ratos. Cinquenta ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 5 grupos (n=10), sendo 1 controle e 4 submetidos à periodontite através da instalação de ligadura bilateral na região de primeiro molar inferior. Os ratos submetidos à periodontite experimental foram tratados com solução de NaCl 0.9%, AAS (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), com uma única dose e diariamente, via gavagem. Após 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemimandíbulas do lado direito removidas para análise histológica e as gengivas do lado esquerdo para avaliação da expressão de TNF-α, IL-6 e TXA-2 por ELISA. O tratamento com as drogas antiplaquetárias induziu diminuição da expressão dos mediadores próinflamatórios analisados. Histologicamente, os animais tratados com drogas antiplaquetárias apresentaram gengiva com menor quantidade de células inflamatórias e maior quantidade de feixes de fibras colágenas suprajacentes ao osso alveolar. Os valores das medidas morfométricas foram significativamente menores nos animais tratados com derivados tienopiridínicos , enquanto os animais tratados com AAS apresentaram apenas uma tendência a menor reabsorção óssea quando comparados ao grupo NaCl 0,9%.Esses dados despertam o potencial anti-inflamatório das drogas antiplaquetárias e confirmam o envolvimento plaquetário no desenvolvimento da doença periodontal. / The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (AAS), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) on the evolution of experimental periodontitis in rats. Fifty rats (Rattus norvegicus albinos, Holtzman) were randomly divided into 5 groups (n = 10), with 1 control and 4 subjected to periodontitis through the installation of bilateral ligature in the region of first molar. The rats subjected to experimental periodontitis were treated with NaCl 0.9%, AAS (30 mg / kg), Clo (75 mg / kg) and Tic (300 mg / kg), with a single dose and daily by gavage. After 15 days of treatment, the animals were killed, the right hemi-jaw removed for histological analysis and gingival tissues on the left to evaluate the expression of TNF-α, IL-6 and TXA-2 by ELISA. Treatment with antiplatelet drugs induced decrease in expression of proinflammatory mediators analyzed. Histologically, the animals treated with antiplatelet drugs had gingival tissues with fewer inflammatory cells and larger bundles of collagen fibers overlying the alveolar bone. The values of morphometric measurements were significantly lower in animals treated with thienopyridine derivatives, while animals treated with AAS showed only a trend to lower bone resorption when compared with 0.9% NaCl. These data awaken the potential anti-inflammatory drugs antiplatelet and confirm the involvement of platelets in the development of periodontal disease.

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Sonia Regina Panzarini Barioni / Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs. / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo de Abreu Machado / Resumo: A hepatite C acomete cerca de 130-150 milhões de pessoas em todo o mundo, sendo que grande parcela dos portadores do vírus da hepatite C (VHC) permanecem assintomáticos por longos períodos. O diagnóstico da doença acontece muitas vezes devido a sintomas extra-hepáticos como fadiga crônica, alterações endócrinas, dermatológicas e hematológicas, porém, a patogênese das manifestações extra-hepática é pouco conhecida. Assim, modelos que reproduzam a infecção in vitro pelo VHC se tornam necessários para que se possa compreender e esclarecer a relação entre estas desordens e o VHC. O VHC é um Hepacivírus da família Flaviviridae, sua entrada em células suscetíveis, como os hepatócitos, pode ocorrer por infecção direta, mediada principalmente pelos receptores CD81 e Claudina-1 (CLDN1), desencadeando uma série de processo para internalização e replicação viral, ou por infecção por contato célula-a-célula, mediada por CLDN1 e Ocludina (OCLN), não sendo necessário, por esta via, CD81. Estudos evidenciam a interação entre plaquetas e VHC, no entanto, não demonstram claramente se estas células somente aderem às partículas virais ou se são infectadas pelo vírus. Assim, estudos que contribuam à elucidação deste processo são salutares. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a infecção de megacariócitos e plaquetas pelo VHC e verificar a influência na fisiopatologia da hepatite C. Amostras de megacariócitos, provenientes de doadores de medula óssea, e amostras de plaquetas perif... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatitis C affects about 130-150 million people worldwide. It´s caused by Hepacivirus and the diagnosis are by extrahepatic symptoms such as chronic fatigue, endocrine, dermatologic and hematologic changes. However, the pathogenesis of extrahepatic manifestations is little known and requires further studies on the relationship of these disorders and the hepatitis C vírus (HCV), therefore infection in vitro model can improve this kind of knowledge. HCV is a family of Flaviviridae, its entry into susceptible cells, such as hepatocytes, can occur by direct infection mediated primarily by CD81 receptors and Claudin-1 (CLDN1), triggering a process serie for internalization and viral replication ocurr. Other road is by cell-to-cell mediated CLDN1 and occludin (OCLN), not being necessary the presence of CD81. Studies describe the interaction between platelets and HCV, however, does not clearly denotes how this process happens, due to this, studies can contribute to the elucidation of this process relevance. The aim of this study is the evaluation of the infection of megakaryocytes and platelets HCV and the influence in pathophysiology of hepatitis C. Megakaryocytes samples, from bone marrow donors, and samples of peripheral platelets, both obtained from healthy donos are infected in vitro with HCV positive plasma. Infected samples were evaluated by flow cytometry and confocal microscopy. The parameters analyzed were the presence or absence of viral and expression of CLDN1 and CD81... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O curto período de armazenamento dos concentrados de plaquetas (CP), de 5 a 7 dias, torna esse hemocomponente crítico para os serviços de hemoterapia. A criopreservação se apresenta então como uma possibilidade para a manutenção dos estoques por período mais prolongado. Essa prática exige a adição de substância crioprotetora e a adequação do volume em relação à concentração de plaquetas. O CP obtido por aférese (CPAF) é um hemocomponente proveniente de um único doador, coletado em sistema automatizado, que equivale a 6-8 unidades de CP obtidas da coleta de doadores convencional. Objetivo: Avaliar o efeito da criopreservação de CPAF no quinto dia do armazenamento, por meio de análises imunofenotípicas e funcionais das plaquetas, utilizando o crioprotetor dimetilsulfóxido (DMSO) a 5%, em freezer a -80°C e descongelamento em banho maria a 37°C, sem a remoção do crioprotetor. Material e Métodos: Foram analisadas 20 unidades de CPAF em quatro fases diferentes do processo: Fase I (pré-redução de volume), Fase II (pós-repouso, agitação e adição do DMSO), Fase III (pós-descongelamento) e Fase IV (após duas horas de descongelamento e agitação). Todas as bolsas foram avaliadas quanto à presença do \"swirling\" plaquetário, e análise microbiológica, contagem de plaquetas e leucócitos, determinação do volume plaquetário médio (VPM), análise do pH, dosagem de desidrogenase lática (DHL) e glicose, a ativação plaquetária por meio de citometria de fluxo com os marcadores CD61, CD62P e anexina V e para a avaliação funcional, as técnicas de microagregação plaquetária e retração do coágulo. Os resultados de cada fase foram analisados e comparados, considerando resultados p< 0,05 de significância estatística, avaliada pelos testes de Wilcoxon e Teste-T pareado. Resultados: Todos os CPs criopreservados apresentaram na inspeção visual presença de \"swirling\" e ausência de grumos. O pH manteve-se com mediana de 7,185 (6,076-7,528) pra fase III, análise microbiológica foi negativa em todas as unidades criopreservadas, o número mediano de plaquetas caiu de 3,04x1011/U na Fase II para 2,27x1011/U na fase III (redução de 25,32%). A ativação plaquetária na fase II foi de 23% CD62P+ para 44% CD62P+ na fase III (p=0,067). O marcador anexina V estava expresso em 13% das plaquetas na fase II e em 11% na fase III, (p=0,33). A LDH aumentou de 747 U/L (4-3079) para 1.428 U/L (662-2303) da fase II para a fase III, respectivamente (p=0,055). A glicose diminuiu em todas as fases (p<0,0001). Os testes de função plaquetária revelaram que a plaquetas descongeladas mantêm sua função. Conclusão: Os resultados obtidos mostraram que, embora tenham ocorrido ativação e redução significativa do número de plaquetas, o produto final conservou quantidade suficiente de plaquetas, cujas funções foram mantidas, o que torna viável a utilização do hemocomponente CP criopreservado. Sugere ainda que os CPAF possam ser criopreservados no quinto dia de armazenamento, com o uso do DMSO a 5%, ideal para que não se faça necessário sua remoção pós-descongelamento. / The concentration time of the platelet concentrates (CP), from 5 to 7 days, makes this blood component critical for hemotherapy services. Cryopreservation presents itself as a possibility of maintaining stocks for a longer period. This practice requires an additional cryoprotectant and a suitability of volume in relation to platelet concentration. The CP collected by the same (CPAF) is a blood component of a single dosage, being collected in an automated system, which is equivalent to 6-8 CP units from the collection of conventional donors. Objective: To evaluate the effect of CPAF cryopreservation on the fifth day of storage, by means of immunophenotypic and functional platelet analysis using the 5% DMSO cryoprotectant in a freezer at -80 ° C and thawing in a Maria bath at 37 ° C, without removal of the cryoprotectant. Material and Methods: 20 units of CPAF were analyzed in four different phases of the process: Phase I (pre-reduction of volume), Phase II (post-rest, agitation and DMSO addition), Phase III (post-thaw) and Phase IV (after two hours of thawing and shaking). All units were evaluated for platelet swirling and microbiological analysis, platelet and leukocyte counts, determination of mean platelet volume (MVP), pH analysis, lactate dehydrogenase (LDH) and glucose, platelet activation by means of flow cytometry with the markers CD61, CD62P and annexin V and for the functional evaluation, platelet microaggregation and clot retraction techniques. The results of each phase were analyzed and compared, considering results p <0.05 of statistical significance, evaluated by the Wilcoxon and Paired T-test. Results: All cryopreserved CPs presented visual presence of \"swirling\" and absence of lumps. The pH was maintained at a median of 7.185 (6.076- 7.528) for phase III, microbiological analysis was negative in all cryopreserved units, the median number of platelets fell from 3.04x1011/U in Phase II to 2.27x1011/U in phase III (reduction of 25.32%). Phase II platelet activation was 23% CD62P + to 44% CD62P + in phase III (p=0.067). The annexin V marker was expressed in 13% of platelets in phase II and 11% in phase III (p=0.33). LDH increased from 747 U/L (4-3,079) to 1,428 U / L (662-2303) from phase II to phase III, respectively (p<0,0055). Glucose decreased in all phases (p <0.0001). Platelet function tests have revealed that thawed platelets maintain their function. Conclusion: The results showed that, although activation and significant reduction of platelet count occurred, the end product preserved sufficient quantity of platelets, whose functions were maintained, which makes the use of the cryopreserved CP blood component viable. It also suggests that CPAFs can be cryopreserved on the fifth day of storage using 5% DMSO, so that their post-thaw removal is not required.

Orientadores: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T12:14:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Proenca-Ferreira_Renata_M.pdf: 950238 bytes, checksum: 21ee0800d218d95b35b72ea1eeaab7e3 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Anemia falciforme (AF) é uma doença causada por uma mutação de ponto, que resulta na formação de hemoglobina S (HbS). A polimerização de HbS desoxigenada resulta na deformação, enrijecimento e fragilização das células vermelhas, anemia hemolítica e eventos vasos-oclusivos, principal causa de morbidade nos pacientes com AF. A adesão anormal das células brancas e vermelhas ao endotélio diminui o fluxo de sangue na circulação micro-vascular, principal fator envolvido na vaso-oclusão. O objetivo deste trabalho foi comparar as propriedades adesivas de plaquetas de indivíduos sadios (AA) com as plaquetas de pacientes com AF (SS) e em terapia com hidroxiuréia (HU), e quais moléculas de adesão e sinalização estão envolvidas nesta adesão. A adesão basal de plaquetas ao fibrinogênio (FB) do grupo de pacientes SS foi significativamente maior em relação às plaquetas AA, entretanto, as plaquetas de pacientes SSHU mostraram uma adesão similar às plaquetas AA. As plaquetas AA, SS e SSHU quando estimuladas com trombina (TB), apresentaram uma adesão significativamente maior em relação às suas adesões basais. Por outro lado, não houve diferenças significativas entre as adesões basais das plaquetas AA, SS e SSHU ao colágeno como ligante. A citometria de fluxo foi utilizada para comparar a expressão e ativação das principais moléculas de adesão nestas plaquetas, e identificou-se um aumento de expressão da integrina aIIbß3 na sua conformação de ativação, na superfície das plaquetas SS, em relação às plaquetas AA e SSHU. A molécula P-selectina (CD62P) foi encontrada com maior expressão também na superfície das plaquetas SS. Ensaios de adesão utilizando anticorpos específicos para as moléculas de adesão indicaram um possível papel para a integrina aIIbß3 na adesão de plaquetas ao FB. O AMPc é um importante inibidor de ativação plaquetária, e os níveis intraplaquetários de adenosina manofosfato cíclica (AMPc) das plaquetas SS foram significativamente menores em relação às plaquetas AA e SSHU. A co-incubação das plaquetas com TB reduziu significativamente os níveis de AMPc nas plaquetas AA, e SSHU, e nas plaquetas SS essa redução não foi significativa. Além disso, foi interessante notar que os níveis de hemoglobina fetal (HbF) em pacientes SS e SSHU apresentaram uma significativa correlação com os níveis de AMPc. Em relação aos níveis intraplaquetários de guanosina monofosfato cíclica (GMPc), importante inibidor de agregação plaquetária, das plaquetas AA, SS e SSHU não houve diferenças estatisticamente significativas, entretanto com estímulo de trombina houve um aumento significativo de GMPc nas plaquetas AA. A incubação das plaquetas com o cilostazol (inibidor específico da fosfodiesterase 3A, PDE3A) levou a uma redução da adesão de plaquetas SS, e sugere-se que as plaquetas SS possuem a atividade de fosforilação da PDE3A aumentada, e esteja relacionada com a degradação de AMPc nessas plaquetas. Além disso, dados indicam que as vias de sinalização dependentes de PKA, PKG e PKC não estão envolvidas na adesão alterada das plaquetas SS. A atividade funcional nos ensaios com agregação plaquetária de pacientes com AF está alterada, mas será necessário que novos experimentos sejam realizados para maiores conclusões. Os resultados sugerem que as plaquetas de pacientes AF circulam num estado ativado e que elas possuem maior capacidade de aderirem às proteínas que podem ser encontradas na matriz extracelular (MEC) e na superfície da parede vascular. Esta adesão aumentada está associada com os níveis diminuídos de AMPc intraplaquetários e ativação da integrina aIIbß3. Estas mesmas alterações parecem ser revertidas nos pacientes em uso de HU. Resultados sugerem que as plaquetas podem ter um papel importante no processo de vaso-oclusão. Quando estão ativadas, estas plaquetas servem como fonte importante para mediadores inflamatórios que, por sua vez, podem levar à exacerbação da inflamação e ativação celular no local. / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is caused by a point mutation that results in the formation of Hemoglobin S (HbS). The polymerization of deoxygenated HbS causes deformation of red cells, which then adopt a sickle shape and become rigid and fragile. Hemolytic anemia and vaso-occlusive events are the main cause of morbidity in SCD; abnormal adhesion of white and red cells to the endothelium decreases the blood flow in the microcirculation and appears to be the main factor involved in vaso-occlusion. The objective of this study was to compare the adhesive properties of platelets from healthy individuals (AA platelets) with those of platelets from SCD patients (SS platelets) and from patients on HU therapy (SSHU platelets), as well as the adhesion molecules and signaling pathways that may be involved in this adhesion. The basal adhesion of SS platelets to fibrinogen (FB) was significantly higher than that of AA platelets; in contrast, SSHU platelets demonstrated a similar adhesion to that of AA platelets. Platelets from AA, SS and SSHU individuals, when stimulated with thrombin (TB), all presented significantly higher adhesions when compared with their basal adhesions. In contrast, there were no significant differences between the adhesions of AA, SS and SSHU platelets when collagen was used as a ligand. Flow cytometry was utilized to compare the expression and activation of the main adhesion molecules on AA, SS and SSHU platelets and identified a significantly higher expression of the ?IIb?3 integrin in its activated conformation on the surface of the SS platelets, in relation to the AA and SSHU. Expression of the P-selectin adhesion molecule (CD62P) was also found to be increased on the surface of SSHU platelets. Adhesion assays utilizing specific antibodies for the activated ?IIb?3 and P-selectin indicated a possible role for the ?IIb?3 integrin in the adhesion of platelets to FB. The cyclic nucleotide, cyclic adenosine monophosphate (cAMP) is an important inhibitor of platelet aggregation. Intraplatelet levels of cAMP were found to be significantly lower in SS platelets compared to AA and SSHU platelets. Co-incubation of platelets with TB significantly reduced levels of cAMP in the AA and SSHU platelets, but in SS platelets this decrease was not significant. Interestingly, levels of fetal hemoglobin (HbF) in SCD patients (both SS and SSHU) were found to correlate significantly with levels of platelet AMPc. With regard to intraplatelet levels of cyclic guanosine monophosphate (cGMP), there were no significant differences found between AA, SS and SSHU platelets, however following a TB stimulus AA platelets demonstrated a significant increase in intracellular cGMP. Phosphodiesterase 3A (PDE3A) is the main cyclic nucleotide hydrolyzing enzyme in platelets. Incubation of SS platelets, but not AA or SSHU platelets, with cilostazol (specific inhibitor of PDE3A) resulted in a significant reduction in their adhesion to FB, suggesting that PDE3A activity in SS platelets may be activated and that augmentation of cAMP is capable of reverting increased SS platelet adhesion. Additional experiments indicate that Protein kinase A (PKA), PKG and PKC dependent signaling pathways are not involved in the altered adhesion of SS platelets. The functional activity of SS platelets was found to be altered in platelet aggregation assays, however further experiments are required to draw conclusions from these data. Results of this study suggest that platelets from SCD individuals circulate in an activated state and that they present a greater ability to adhere to proteins that may be encountered on the vessel wall. This augmented adhesion is associated with decreased levels of intraplatelet cAMP and activation of the ?IIb?3 integrin. These alterations appear to be reversed in patients on HU therapy. Results suggest that platelets may have an important role in the vaso-occlusive process.When activated these cells are an important source of inflammatory mediators that may, in turn, result in an exacerbation of cellular activation at the vaso-occlusive site. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-01Bitstream added on 2014-06-13T20:08:37Z : No. of bitstreams: 1 pola_nm_me_araca_parcial.pdf: 170016 bytes, checksum: e13ec1e3d138f22d976c2b91751b1c20 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-16T11:30:07Z: pola_nm_me_araca_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-16T11:30:58Z : No. of bitstreams: 1 000619909.pdf: 461103 bytes, checksum: b87e4d11fd729dc2c792fbb094e8e02d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo avaliou, histomorfometricamente, o reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC) criados cirurgicamente em calvárias de ratos e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) derivado do sangue periférico (SP) ou do aspirado de medula óssea (AMO) associado ou não ao enxerto de osso autógeno (OA). 60 ratos foram divididos em 6 Grupos: Grupo C (controle), Grupo OA, Grupo PRP-sp, Grupo PRP-amo, Grupo OA/PRP-sp e Grupo OA/PRP-amo. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido somente com coágulo sangüíneo. No Grupo OA, o defeito foi preenchido com enxerto de OA particulado. Nos grupos PRP-sp e PRP-amo, os defeitos cirúrgicos foram preenchidos com PRP-sp e PRP-amo, respectivamente. Nos grupos OA/PRP-sp e OA/PRP-amo, os defeitos foram preenchidos com enxerto de OA particulado associado ao PRP-sp e ao PRP-amo, respectivamente. Todos os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. A quantidade de osso neoformado foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Esses valores foram transformados em arcoseno para a análise estatística (ANOVA, Tukey, p<0,05). O Grupo C apresentou formação óssea significativamente menor (12,34 ± 2,51%) que os grupos OA (48,94 ± 3,91%), PRP-sp (31,48 ± 14,05%), PRP-amo (35,38 ± 17,19%), OA/PRP-sp (60,27 ± 9,12%) e OA/PRP-amo (44,19 ± 16,49%). A quantidade de formação óssea do Grupo OA/PRP-sp foi significativamente maior que a do Grupo PRP-sp. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que todos os tratamentos realizados potencializaram o reparo ósseo em DTC em calvárias de ratos. A associação enxerto de OA/PRP-sp demonstrou uma tendência de apresentar a maior AO / This study histomorphometrically evaluated the bone healing of critical-size defects (CSD) surgically created in rat calvaria and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) derived from either the peripheral blood (PB) or bone marrow aspirate (BMA) combined or not with autogenous bone (AB) grafts. 60 rats were divided into 6 groups: Group C (control), Group AB, Group PRP-pb, Group PRP-bma, Group AB/PRP-pb and Group AB/PRP-bma. A 5-mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled with blood clot only. In Group AB, the defect was filled with AB graft. In groups PRP-pb and PRP-bma, the defects were filled with PRP derived from PB and BMA, respectively. In groups AB/PRP-pb and AB/PRP-bma, the defects were filled with AB grafts combined with PRP-pb and PRP-bma, respectively. All animals were euthanized at 30 days post-operatively. Bone Area (BA) was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, Tukey, p<0.05). Group C presented significantly less bone formation (12.34 ± 2.51%) than groups AB (48.94 ± 3.91%), PRP-pb (31.48 ± 14.05%), PRP-bma (35.38 ± 17.19%), AB/PRP-pb (60.27 ± 9.12%) and AB/PRP-bma (44.19 ± 16.49%). Bone formation in Group AB/PRP-pb was significantly greater than in Group PRP-pb. Within the limits of this study, it can be concluded that all treatments promoted bone formation in CSD in rat calvaria. The combination AB/PRP-pb demonstrated a trend to present the largest BA

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-27Bitstream added on 2014-06-13T19:57:15Z : No. of bitstreams: 1 esper_la_me_araca.pdf: 415604 bytes, checksum: 36bcb3441620df6465aef668552a719f (MD5) / Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs.