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Estudi de la reactivitat plaquetària en la gestació normal i en els trastorns hipertensius de l'embaràsPalacio i Riera, Montserrat 24 November 1995 (has links)
El tema sobre el qual es desenvolupa aquesta tesi doctoral és l'estudi de l'activitat plaquetària en la gestació normal i en els trastorns hipertensius de l'embaràs. La importància d'aquest tema ve donada, per una banda, per l'impacte que els trastorns hipertensius de l'embaràs tenen sobre l'Obstetrícia d'avui en dia. En un país com el nostre, els trastorns hipertensius de l'embaràs (THE) són la primera causa de morbimortalitat tant materna com fetal. Per altra banda, aquesta és una entitat clínica per la qual no disposem de diagnòstic precoç perquè desconeixem en gran part la fisiopatologia d'aquest procés.L'equilibri tromboxà-prostaciclina (TXA-PGI) i els nivells de calci intraplaquetari han estat relacionats amb la fisiopatologia d'aquest procés. Les discrepàncies presents a la literatura envers aquests paràmetres vindrien donades: l) perquè s'utilitzen diferents mètodes per valorar aquesta reactivitat ja que no disposem d'un mètode estandaritzat; 2) perquè la majoria de treballs són de disseny transversal i utilitzen diferents setmanes gestacionals, i 3) perquè els criteris de selecció de les pacients, sobre tot les del grup de THE són diferents d'un autor a l'altre.Els objectius que ens vam plantejar van ser els seguents:1.- Establir una cronologia o perfil de comportament plaquetari en el decurs de l'embaràs en la dona gestant sense patologia en cada un dels tests.2.- Establir una cronologia o perfil de comportament plaquetari en el decurs de l'embaràs en la dona gestant amb THE en cada un dels tests.3.- Comparar els dos perfils (gestació norma1-gestació patològica) per establir si hi ha diferències significatives en els tests descrits entre els dos grups de gestants.4.- Establir en quin moment cronològic de la gestació amb THE es presenten les modificacions del comportament plaquetari detectades per ambdós mètodes experimentals.5.- Desenvolupar un test de laboratori de relativa simplicitat que sigui útil per demostrar diferències en el comportament plaquetari entre els diferents grups d'estudi.6.- Calcular el valor predictiu ajustat que pot tenir aquest test en el primer o segon trimestre aplicat a la població gestant, per detectar la pacient amb risc de patir algun dels trastorns hipertensius de l'embaràs.El disseny de l'estudi i la selecció de pacients va ser la següent: En l'estudi longitudinal. es va comparar un grup de gestants normals amb un grup de no gestants. Les pacients gestants es van estudiar en el 1er.(</- 15 setm.), 2on. (26-28 setm.), 3er. (34-36 setm.) trimestre i 6-12 setm. postpart. En l'estudi trasversal es va estudiar un grup de gestants amb THE en els diferents trimestres i els resultats es van comparar amb les pacients amb gestació normal i amb les pacients no gestants. Com a classificació dels THE vam utilitzar els criteris descrits per Davey i McGillivray el 1988.Els mètodes utilitzats van ser els seguents:Per tant, les conclusions de l'estudi longitudinal són les següents:Test de sensibilitat a la PGEI: Es comprova que el plasma ric en plaquetes de la pacient respón adequadament a l'agregació induïda per l'AA i s'obté una corba on l'agregació és màxima als 5 minuts. Un cop comprovat això, repetiem l'agregació però afegint prèviament dosis de PGEI fins que s'aconsegueix inhibir l'agregació per sota el 20% als 5 minuts obtenint una corba com aquesta. La dosi mínima de PGEI necessària per inhibir l'agregació és la vanable que estudiem.Quant al calci intrapiaquetari: s'obté una suspensió de plaquetes a la que se li afegeix Fura2. que és un marcador fluorescent que s'uneix al calci. Podem medir així l'emissió de fluorescència de la mostra bé sigui en condicions basals o després d'afegir agonistes, trombina o vasopressina.Els diferents grups d'estudi estàven formats de 30 gestants normals en el grup control, 20 pacients formaven el grup de no gestants i 44 pacients el de THE, les quals es poden dividir en trastorns gcstacionals i crònics o proteinúrics i no proteinúrics segons els criteris de Davey i McGillivray.Resultats de l'estudi longitudinal:- En primer lloc, els resultats del Test de la Sensibilitat a la PGEI van demostrar una predominància de les pacients responedores sobre les no responedorcs en tots els trimestres de la gestació, en el postpart i en el grup no gestant.No va haver-hi diferències significatives entre els diferents trimestres de la gestació, ni entre el postpart i les no gestants.- En segon lloc, la medició del calci en condicions basals va demostrar un augment significatiu dels nivells de calci en la gestació respecte al postpart i d'aquest respecte a la població no gestant. No vam trobar diferències entre els diferents trimestres de la gestació.Quant als nivells de calci després de l'estimulació amb trombina, també es van demostrar diferències entre la gestació i el postpart, però no vam trobar diferències entre els diferents trimestres.Fínalment, els nivells de calci després de l'estimulació amb vasopressina van demostrar, per una banda, i en la mateixa línia que els altres dos paràmetres, un increment de la gestació respecte al postpart i a més, a diferència dels altres paràmetres, trobem un increment significatiu de calci en el segon trimestre.Per tant, les conclusions de l'estudi longitudinal són les següents:1. El text de sensibilitat a la PGEI no demostra canvis significatius respecte a les pacients no gestants i es manté estable durant la gestació normal. 2. El calci intraplaquetari basal està elevat a la gestació respecte a les pacients no gestants i es manté estable durant la gestació.3. El calci intraplaquetari Postrombina està elevat en la gestació respecte a les no gestants i es manté estable durant la gestació.4. El calci intraplaquetari Postvasopresina està elevat en la gestació respecte a les no gestants i augmenta en el segon trimestre de la gestació.5. Tots els paràmetres en el postpart són comparables als que presenta el grup no gestant. En l'estudi transversal els resultats van ser els següents:En el Test de Sensibilitat a la PGEI, quan comparem els resultats del grup amb THE respecte al grup control trobem un augment dramàtic de la població no responedora a cada un dels trimestres. En el postpart, la proporció de pacients no responedores és similar en el grup hipertensiu i en el control. Quan estudiem els subgrups de THE per separat, observem que aquest augment de pacients no responedores no és a expenses de cap subgrup d'hipertensió en concret.Podem aprofitar aquest canvi de patró de comportament plaquetari per utilitzar el Test de Sensibilitat a la PGEI com a test de "screening". Si comparem la S.E., el VPP i el VPN respecte a altres proves proposades com a tests pronòstics en la literatura, trobem que el Test de Sensibilitat a la PGEI presenta una bona sensibilitat i un alt VPN ajustat que ens permet descartar amb tranquilitat del grup de risc les pacients que siguin responedores a la PGEI. Per tant, suggerim que el Test de Sensibilitat a la PGEI podria ser un bon mètode de "screening".Quant al calci intracel.lular en condicions basals, la comparació de la concentració basal entre els grups control i hipertensiu, no presenta diferències significatives en cap trimestre. Si desglobem el grup hipertensiu en els diferents subgrups, tampoc trobem diferències.Pel que fa al calci posttrombina, només trobem diferències significatives entre els grups control i el de THE en el segon trimestre.Finalment, quan valorem els nivells de calci després de l'estimulació amb vasopressina, trobem un increment significatiu en tots els trimestres, el postpart inclòs.Per tant, les condicions de l'estudi transversal són les següents:1. El Test de Sensibilitat a la PGEI en el THE mostra una reducció dràstica en la sensibilitat a aquest inhibidor respecte a les gestants normals.2. Suggerim per tant utilitzar el Test de Sensibilitat a la PGEI com a test de "screening" al primer i segon trimestres en la població general per la predicció de THE.3. El Calci Intraplaquetari Basal en els THE és comparable al de les gestants normals en tots els trimestres.4. El Calci Intraplaquetari Posutrombina en THE està més elevat en el segon trimestre respecte a les gestants normals.5. El Calci Intraplaquetari Postvasopressina en els THE presenta un augment significatiu en tots els trimestres respecte a les gestants normals.6. Tots els paràmetres en el postpart són comparables als que presenten el grup gestant normal excepte en el Calci Vasopressina que està elevat. / BACKGROUND: From data available in the literature, we know that platelets are very much involved in the physiopathology oftlhe hypertensive disorders of pregnancy (HDP). The prostacyclin (PGI2)-thromboxane (TXA2) balance and the intraplatelet calcium seems to be altered in the pregnant with HDP compared to the normal pregnant. Indeed, these changes appear to happen early in the pregnancy.AIM: To study changes in the platelet sensitivity to the inhibitory effect of PGEl (a prostacyclin analogue) and in the levels of intraplatelet calcium either in basal conditions or after thrombin and vasopressin simulation.DESIGN: Longitudinal study: 30 healthy pregnant women were tested at 1st, 2nd, 3rd trimesters and postpartum. The results were compared to 20 non-pregnant women. Cross sectional study: the results of 44 hypertensive pregnants were compared with the healthy pregnant group of women.METHODS: 1. Platelet sensitivity to PGE1 inhibition of the aggreggation induced by arachidonic acid was determined; 2. Basal and thrombin and vasopressin-simulated levels of intraplatelet calcium were also determined.RESULTS: Longitudinal study: The distribution between responders and non-responders to the effect of the PGE1 did not change in the pregnant women compared to the non-pregnant group. The basal and thrombin-simulated levels of intraplatelet calcium are increased in pregnant compared to the non-pregnant and remains stable through the pregnancy. When using vasopressin (a weak simulator), intrcalcium levels was increased only in the second trimester. All parameters went back to normal after 6 weeks postpartum. Cross-sectional study: hypertensive pregnant had a dramatic decrease in the sensitivity to the PGEI. Basal calcium levels did not change while when simulating with thrombin the levels in hypertensive patients increased significantly only in the 2nd trimester. When using vasopressin, the platelet intracalciun levels were increased in all trimesters.DISCUSSION: platelet sensitivity to PGE1 could be a useful test for detecting pregnant at risk for HDP. Features in the profile of the intraplatelet calcium levels suggest that calcium availability is greater in pregnancy compared to non-pregnant and even greater in the HDP patients. Second trimester seems to be the period where this change occur more dramatically.
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Avaluació de la resposta “in vitro” de condròcits humans tractats amb plasma ric en plaquetes (PRP), en presència de LPS o en condicions d’estrés oxidatiuViñals Galí, Laia 13 December 2011 (has links)
INTRODUCCIÓ:
En les patologies articulars que afecten el cartílag existeix una relació bidireccional entre la degradació del teixit i la resposta inflamatòria. El plasma ric en plaquetes conté factors moduladors de la inflamació i promotors de la regeneració. Aquests factors podrien actuar sobre els condròcits modificant-ne l’expressió de citocines i molècules de la matriu cartilaginosa, de forma que es generaria un entorn favorable per la recuperació del dany.
OBJECTIUS:
Establir models in vitro de condròcits tractats amb LPS i de condròcits tractats amb agents oxidants i avaluar l’efecte del plasma ric en plaquetes sobre aquests models cel·lulars.
MATERIAL I MÈTODES:
S’han establert cultius primaris de condròcits a partir de biòpsies de cartílag articular i s’han tractat amb LPS (100 μg/ml) o amb H2O2 (1mM) durant 24 h. S’ha valorat l’activitat metabòlica dels condròcits mitjançant la quantificació de glicosaminoglicans (GAGs) en els sobrenadants dels cultius i també s’ha valorat el patró de citocines i factors de creixement (IL-12p70, TNF-_, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 i TGF-β) alliberats pels condròcits en el sobrenadant, mitjançant citometria de flux o ELISA. S’ha generat plasma ric en plaquetes a partir de sang sencera i se n’ha valorat el contingut en TGF-β. S’han tractat els cultius de condròcits amb PRP (25% i 50%) i s’ha valorat l’activitat metabòlica i el perfil de citocines dels condròcits.
RESULTATS:
El tractament dels condròcits amb LPS provoca un increment de GAGs i de les citocines TNF-α, IL-6, IL-8 i IL-10 en els sobrenadant, mentre que disminueixen els nivells de TGF-β. A l’afegir PRP ric en TGF-β al cultiu, el TNF-α i la IL-10 del sobrenadant disminueixen. L’oxidació dels condròcits amb H2O2 provoca la disminució de GAGs en el sobrenadant però no altera el perfil de citocines. L’efecte del PRP sobre el cultiu de condròcits en condicions d’oxidació genera un increment de la IL-8 i un lleuger augment de la IL-6.
CONCLUSIONS:
Els condròcits participen de forma activa en la resposta inflamatòria ja que quan estan en presència d’un agent com el LPS canvien el perfil de citocines inflamatòries i reguladores que sintetitzen. El PRP, ric en TGF-β, modifica el patró de citocines cap a un perfil menys inflamatori i pot promoure la proliferació dels condròcits. El tractament amb PRP de condròcits en un entorn oxidatiu provoca uns efectes similars als del tractament amb PRP sobre cultius normals, però en menor intensitat. / INTRODUCCIÓN:En las patologías articulares que afectan el cartílago existe una relación bidireccional entre la degradación del tejido y la respuesta inflamatoria, de manera que se generan situaciones de inflamación crónica y de perpetuación de la degradación del tejido. El plasma rico en plaquetas (PRP) contiene factores moduladores de la inflamación y promotores de la regeneración como el TGF-β. La hipótesis de este trabajo es que estos factores podrían actuar sobre los condrocitos modificando la expresión de citocinas y de moléculas de la matriz cartilaginosa, de forma que se generaría un entorno favorable para la recuperación del daño.
OBJETIVOS: Establecer modelos in vitro de condrocitos tratados con LPS y de condrocitos tratados con agentes oxidantes, y evaluar el efecto del plasma rico en plaquetas (PRP) en estos modelos de daño celular.
MATERIALES Y MÉTODOS: Se han establecido cultivos primarios de condrocitos a partir de biopsias de cartílago articular procedentes de pacientes (70-90 años) sometidos a cirugía de reemplazamiento. Se han generado modelos de daño celular tratando cultivos de condrocitos con LPS (100 µg/ml) o con H2O2 (1mM) durante 24 h. Se ha valorado la actividad sintética de los condrocitos con la cuantificación de los glucosaminoglicanos (GAGs) en los sobrenadantes de los cultivos mediante el ensayo colorimétrico DMMB. También se ha valorado el patrón de citocinas inflamatorias y antiinflamatorias, y de factores de crecimiento (IL-12p70, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 y TGF-β) liberados por los condrocitos en el sobrenadante, mediante citometría de flujo (ensayo CBA) o mediante ELISA. Se ha generado plasma rico en plaquetas mediante centrifugación (460 g) de sangre entera y se ha determinado el contenido de TGF-β después de la activación de las plaquetas con 45mM CaCl2. Se han tratado los diferentes cultivos de condrocitos con PRP (25% y 50%) y se ha valorado el efecto de éste sobre la actividad sintética y el perfil de citocinas de los condrocitos.
RESULTADOS:El tratamiento de los condrocitos con LPS provoca un incremento de GAGs y de las citocinas TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-10 en los sobrenadantes, mientras que los niveles de TGF-β disminuyen. Cuando se añade PRP rico en TGF-β al cultivo, la cantidad de TNF-α y de IL-10 en el sobrenadante disminuye, mientras que la cantidad de IL-6 e IL-8 se mantiene elevada, como también se mantiene la capacidad de síntesis de GAGs. La oxidación de los condrocitos con H2O2 provoca la disminución de GAGs en el sobrenadante, pero no modifica el perfil de citocinas. El efecto del PRP sobre el cultivo de condrocitos en condiciones de oxidación recupera la síntesis de GAGs y genera un incremento de la IL-8 y un ligero aumento de la IL-6.
CONCLUSIONES: Los condrocitos participan de forma activa en la respuesta inflamatoria ya que, cuando están en presencia de un agente como el LPS, cambian el perfil de citocinas inflamatorias y reguladoras que sintetizan. Con la adición en el cultivo de PRP, rico en TGF-β, se estaría supliendo la disminución de TGF-β provocada por el LPS en los condrocitos y provocaría el cambio en el patrón de citocinas hacia un perfil menos inflamatorio. Si una situación similar sucediera in vivo, con el uso del PRP, se estaría generando un entorno favorable para la recuperación del daño. El tratamiento in vitro con PRP de condrocitos en un entorno oxidativo, produce efectos similares a los tratamientos con PRP sobre cultivos normales, pero en menor intensidad, pudiendo, eso sí, recuperar la actividad sintética de matriz extracelular. / INTRODUCCIÓN:En las patologías articulares que afectan el cartílago existe una relación bidireccional entre la degradación del tejido y la respuesta inflamatoria, de manera que se generan situaciones de inflamación crónica y de perpetuación de la degradación del tejido. El plasma rico en plaquetas (PRP) contiene factores moduladores de la inflamación y promotores de la regeneración como el TGF-β. La hipótesis de este trabajo es que estos factores podrían actuar sobre los condrocitos modificando la expresión de citocinas y de moléculas de la matriz cartilaginosa, de forma que se generaría un entorno favorable para la recuperación del daño.
OBJETIVOS: Establecer modelos in vitro de condrocitos tratados con LPS y de condrocitos tratados con agentes oxidantes, y evaluar el efecto del plasma rico en plaquetas (PRP) en estos modelos de daño celular.
MATERIALES Y MÉTODOS: Se han establecido cultivos primarios de condrocitos a partir de biopsias de cartílago articular procedentes de pacientes (70-90 años) sometidos a cirugía de reemplazamiento. Se han generado modelos de daño celular tratando cultivos de condrocitos con LPS (100 µg/ml) o con H2O2 (1mM) durante 24 h. Se ha valorado la actividad sintética de los condrocitos con la cuantificación de los glucosaminoglicanos (GAGs) en los sobrenadantes de los cultivos mediante el ensayo colorimétrico DMMB. También se ha valorado el patrón de citocinas inflamatorias y antiinflamatorias, y de factores de crecimiento (IL-12p70, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 y TGF-β) liberados por los condrocitos en el sobrenadante, mediante citometría de flujo (ensayo CBA) o mediante ELISA. Se ha generado plasma rico en plaquetas mediante centrifugación (460 g) de sangre entera y se ha determinado el contenido de TGF-β después de la activación de las plaquetas con 45mM CaCl2. Se han tratado los diferentes cultivos de condrocitos con PRP (25% y 50%) y se ha valorado el efecto de éste sobre la actividad sintética y el perfil de citocinas de los condrocitos.
RESULTADOS:El tratamiento de los condrocitos con LPS provoca un incremento de GAGs y de las citocinas TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-10 en los sobrenadantes, mientras que los niveles de TGF-β disminuyen. Cuando se añade PRP rico en TGF-β al cultivo, la cantidad de TNF-α y de IL-10 en el sobrenadante disminuye, mientras que la cantidad de IL-6 e IL-8 se mantiene elevada, como también se mantiene la capacidad de síntesis de GAGs. La oxidación de los condrocitos con H2O2 provoca la disminución de GAGs en el sobrenadante, pero no modifica el perfil de citocinas. El efecto del PRP sobre el cultivo de condrocitos en condiciones de oxidación recupera la síntesis de GAGs y genera un incremento de la IL-8 y un ligero aumento de la IL-6.
CONCLUSIONES: Los condrocitos participan de forma activa en la respuesta inflamatoria ya que, cuando están en presencia de un agente como el LPS, cambian el perfil de citocinas inflamatorias y reguladoras que sintetizan. Con la adición en el cultivo de PRP, rico en TGF-β, se estaría supliendo la disminución de TGF-β provocada por el LPS en los condrocitos y provocaría el cambio en el patrón de citocinas hacia un perfil menos inflamatorio. Si una situación similar sucediera in vivo, con el uso del PRP, se estaría generando un entorno favorable para la recuperación del daño. El tratamiento in vitro con PRP de condrocitos en un entorno oxidativo, produce efectos similares a los tratamientos con PRP sobre cultivos normales, pero en menor intensidad, pudiendo, eso sí, recuperar la actividad sintética de matriz extracelular.
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Receptores 5HT2 y lugares de unión DE 3H-imipramina Y 3H-paroxetina en membrana de plaqueta en trastorno bipolar.Crespo Blanco, José Manuel 20 November 2007 (has links)
El estudio de modelos neurobiológicos en la fisiopatología del trastorno bipolar es complejo y no ha permitido, hasta la fecha, identificar un modelo válido que justifique la etiopatogenia del trastorno. El estudio de los diferentes niveles de análisis ha permitido conocer alteraciones genéticas, neuroquímicas, estructurales y funcionales pero no ha identificado las causas primarias y específicas del trastorno. El sistema serotoninérgico constituye el sistema de neurotransmisión más estudiado aunque el escaso número de trabajos, la heterogeneidad metodológica de los mismos y la ausencia de un control estricto en relación a los factores que interfieren en los resultados hacen difícil extraer conclusiones definitivas. La similitud entre el transportador de 5HT en plaquetas y neuronas presinápticas nos aportan un elemento muy útil para evaluar este sistema de neurotransmisión a nivel periférico. Existen ligandos (3H-imipramina, 3H-paroxetina) que se fijan específicamente en las terminales nerviosas serotoninérgicas presinápticas y la determinación de sus lugares de unión constituye un atractivo modelo para el estudio de la función serotoninérgica. Los receptores 5HT2 post-sinápticos permiten ampliar este modelo a nivel postsináptico.1) OBJETIVO GENERAL Estudiar la función serotoninérgica plaquetaria a nivel de los lugares de unión de 3H-imipramina, 3H-paroxetina y de los receptores 5HT2 en el trastorno bipolar tipo I y en comparación con una muestra control.2) OBJETIVOS ESPECÍFICOSComparar los parámetros de función serotoninérgica plaquetaria que aparecen en el curso de la enfermedad bipolar con los hallados en una muestra de sujetos control. El mismo objetivo se plantea entre depresión bipolar y grupo control; manía bipolar y grupo control así como entre depresión bipolar y manía bipolar. Se intentará correlacionar las alteraciones serotoninérgicas con variables clínicas de curso previo, curso actual o curso prospectivo a corto plazo.Criterios de inclusión de los casos:Edad entre 18 y 65 años.Criterios DSM-IV para trastorno bipolar tipo I (episodio depresivo, episodio maníaco).Ausencia fármacos que interfieren con el estudio.3) RESULTADOS.Tamaño muestral: 110 sujetos.70 casos (35 episodios depresivos, 35 episodios maníacos): 33 varones (47'1%), 37 mujeres (52'9%).40 controles: 17 varones (42'5%), 23 mujeres (57'5%).Los principales resultados se recogen en las siguientes conclusiones: (se puede ampliar esta información consultando el ejemplar completo de la tesis doctoral)-El trastorno bipolar tipo I se caracteriza por una disminución en la densidad de los lugares de unión de 3H imipramina y un incremento en el número de los receptores 5HT2 (el número de episodios previos, el patrón de inicio o evolución y los antecedentes de tentativas autolíticas son características clínicas relacionadas con estas disfunciones serotoninérgicas).-La depresión en el contexto de un TB I se caracteriza por presentar un marcado descenso en el número de los lugares de unión de 3H imipramina y un aumento de la densidad de los receptores 5HT2 (la duración, la intensidad...)
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Contribución al reconocimiento de la hiperfunción plaquetaria en clínicaIngelmo Morín, Miguel 05 December 1972 (has links)
En esta tesis, fruto de cinco años de trabajo, en los laboratorios de Hemoterapia y Coagulación así como en el de Bioquímica pretendemos el estudio y puesta a punto de las técnicas necesarias para medir algunas de las funciones plaquetarias; aplicación clínica en enfermos con sospecha de padecer procesos trombóticos y con ello su posible profilaxis así como su modificación en trombosis constituidas. Por fin, interrelación entre lípidos y funciones plaquetarias. Dentro de las funciones plaquetarias hemos estudiado la adhesividad y la agregación. Estas dos funciones en dos grupos de sujetos sanos y enfermos con predisposición o trombosis constituidas. Dentro de los enfermos predispuestos hemos estudiado arterioesclerosis, diabetes, enfermedades infecciosas, cáncer, corazón-pulmonares. Entre los sanos, hemos estudiado mujeres que tomaban anticonceptivos (combinación de d,l norgestrel - 0,5 mgs. y etinilestradiol - 0,05 mgs.). En el estudio lipídico se midieron por métodos químicos las cifras de lípidos totales, colesterina, triglicéridos, las lipoproteínas por electroforesis en acetato de celulosa y cromatografía en capa fina. Esta última nos ha servido para control de las determinaciones químicas. Se utilizó un inhibidor de la agregación «in vitro» dipiridamol para in-tentar sensibilizar la prueba y para comprobar si habría efectos diferencia-les sobre la agregación plaquetaria en individuos normales y en los diferentes enfermos. Junto con el Prof. Castillo estudiamos los efectos del Dipiridamol «in vitro», en sujetos sanos con medidas de la agregación previa y a las dos horas de 10 mgs. intramuscular.
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Efecto del plasma rico en plaquetas en la incorporación biológica de una plastia tendinosa en un túnel óseoRuiz Macarrilla, Leonardo 25 February 2011 (has links)
OBJETIVO
El objetivo nuestro proyecto de investigación es demostrar si la presencia de plasma rico en plaquetas (PRP) autólogo, que aporta varios factores de crecimiento en proporciones fisiológicas, en la interfase injerto tendinoso-hueso modifica el proceso de reparación de los tejidos locales en nuestro modelo experimental.
MATERIAL Y MÉTODO
Diseñamos un estudio de tipo experimental, longitudinal y prospectivo.
Diez conejos albinos de Nueva Zelanda son intervenidos en sus 2 extremidades traseras, en una se realiza la técnica Experimental aplicando PRP y la otra sirve de control, sin aplicar PRP . Una vez intervenidos, los animales son divididos en 2 grupos de 5 de forma aleatoria. Un grupo es sacrificado a la 2ª semana y el otro a la 4ª semana postintervención.
El área quirúrgica fue estudiada macroscópica, radiográfica, histológica e inmunohistoquímicamente.
RESULTADOS
El estudio macroscópico y radiográfico de las piezas muestra la presencia de un área de reacción ósea de mayor tamaño en la zona de entrada del tendón en el interior del túnel óseo en el grupo Experimental sacrificado a la 4ª sem. respecto al resto de grupos.
Microscópicamente, en ningún corte histológico, tanto de los grupos Control como Experimental, se observa la línea de separación basófila, denominada tidemark190 entre el fibrocartílago mineralizado y el no mineralizado. Si se evidenció la aparición de una mayor cantidad de los elementos tisulares fibrosos, cartilaginosos y osteoides, y un mayor grado de ordenación celular en el fibrocartílago y sustancia osteoide en los grupos Experimentales respecto a sus correspondientes grupos Control. Además se observa la aparición de zonas de anclaje hueso-tendón en dos extremidades del grupo Experimental sacrificado a la 4ª sem., no encontradas en ningún caso Control.
En el estudio inmunohistoquímico no apreciamos diferencias en el patrón de distribución del colágeno tipo II entre los distintos grupos, aunque si existe una mayor área de tinción de colágeno tipo II en los grupos Experimentales respecto a sus correspondientes grupos Control, ya que la cantidad de tejido fibrocartilaginoso, en sus variadas formas de presentación, también es mayor en los grupos que recibieron PRP.
CONCLUSIONES
El análisis de los resultados concluye que macroscópica, radiográfica y microscópicamente, este estudio demuestra que la administración de PRP como fuente de FC afecta al proceso de reparación del autoinjerto tendinoso dentro de un túnel óseo en nuestro modelo experimental. El PRP aceleró la curación, anticipando en el tiempo la aparición de elementos celulares y tisulares propios de fases posteriores del proceso de cicatrización, y además incrementó la cantidad éstos. / EFFECT OF PLATELET RICH PLASMA IN THE BIOLOGIC INCORPORATION OF A TENDON GRAFT IN A BONE TUNNEL
Objective: To study the effect of the platelet rich plasma (PRP) in the biological process of tendon healing inside a bone tunnel
Material y Methods:
We designed an experimental, longitudinal and prospective research study. Ten animals were operated on their back legs (one as Experimental group and the other as Control group). In the Experimental group the tendon of the internal gastrocnemius muscle was cut, infiltrated with PRP, placed in a tibial bone tunnel filled with PRP, and finally, fixed by a bioabsorbable screw. The same procedure was practiced in the Control group without the use of PRP. Five rabbits were sacrificed on the second week and five on the fourth week after surgery.
The legs were evaluated macroscopic, radiographic, histologic and immunohistochemically.
Results: The macroscopic and radiographic study of the pieces shows the presence of a larger bone reaction area in the entrance of the tendon within the bone tunnel in the Experimental group sacrificed on the fourth week compared to other groups. Microscopically, the "tidemark" isn’t observed between mineralized and unmineralized fibrocartilage in any group . The Experimental group presents a statistically significant greater amount of chondroid tissue, osteoid tissue and trabecular bone, both the second and fourth week. We observe continuity zones between tendinous fibers and bone in some cases of the Experimental group on the fourth week . Immunohistochemically, no appreciable differences in the distribution pattern of type II collagen between the groups could be seen, although there is a greater area of staining in the Experimental group compared to their corresponding Control group
Conclusion:
The analysis of results and assessment of the comparison established between the research groups concludes that macroscopic, radiographic and microscopically, this study demonstrates that administration of PRP affects the repair process of tendon autograft in a bone tunnel in our experimental model. The PRP accelerated the healing time anticipating the emergence of cellular and tissue elements characteristic of later stages of the healing process, and also increased the amount of them.
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