Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: A cicatrização da pele é o objetivo de estudos e pesquisas, devido ao seu interesse clínico, científico e econômico, principalmente devido à grande freqüência de feridas causadas por lesões em cavalos. A cura da ferida é um fenômeno fisiológico que se inicia a partir da perda da integridade da pele, gerando uma solução de continuidade que atinge as camadas subjacentes em diversos graus e depende de uma série de reações químicas (BERTONE,1989). Vários fatores influenciam a cicatrização após lesão traumática ou cirúrgica. Feridas abaixo do jarrete ou joelho nos eqüinos são um problema, mesmo em animais sadios. Contudo esta dificuldade não ocorre na parte superior do corpo, isto pode ser explicado ao baixo suprimento sanguíneo, baixa oxigenação, temperaturas mais baixas e um desequilíbrio de fatores de crescimento (DYSON, 1997). É essencial na reparação tecidual uma fonte rica em fatores de crescimento. As plaquetas atuam na hemostase, cicatrização de feridas, reepitelização, liberadora de diversos fatores de crescimento que estimulam a angiogênese, promotores de crescimento e proliferação de fibroblastos que por sua vez proporciona um aumento na síntese de colágeno, sendo o PRP uma fonte natural e segura, pois é plasma do próprio animal (DYSON, 1997). Esse trabalho tem como objetivo a avaliação de eqüinos induzidos com uma solução de continuidade, ferida, na face dorsal da região metacarpiana dos membros torácicos, onde foram utilizados 6 animais da espécie eqüina, SRD, tendo como tratamento o uso de plasma rico em plaqueta (PRP) centrifugado e solução fisiológica. Os animais serão avaliados por parâmetros clínicos, morfométricos, avaliações histopatológicas e imunoistoquímicas durante 30 dias / Abstract: The healing of the skin is the purpose of study and research, due to its clinical, scientific and economic interest, mainly due to the high frequency of wounds caused by injuries in horses. The wound healing is a physiological phenomenon which starts from the loss of skin integrity, generating a continuous flow that reaches the underlying layers to different degrees and depends on a series of chemical reactions (Bertone, 1989). Several factors influence healing after traumatic or surgical injury. Wounds below the knee or hock in horses are a problem, even in healthy animals. However, this difficulty does not occur in the upper part of the body, this can be explained by low blood supply low oxygenation, lower temperatures and an imbalance of growth (DYSON, 1997) factors. It is essential in tissue repair a rich source of growth factors. Platelets act in hemostasis, wound healing, re-epithelialization, releasing several growth factors that stimulate angiogenesis, growth promoters and proliferation of fibroblasts which in turn provides an increase in collagen synthesis, the PRP being a natural source and secure because it is the animal's own plasma (DYSON, 1997). This study aims to evaluate horses induced with a solution of continuity, wound on the dorsal surface of the metacarpal region of the forelimb, where 6 animals of the equine species, SRD were used, with treatment as the use of platelet rich plasma (PRP) saline and centrifuged. The animals will be evaluated by clinical, morphometric, histopathological and immunohistochemical reviews for 30 days / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Wilson Roberto Poi / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Maria Lucia Rubo de Rezende / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Banca: Mario Taba Júnior / Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar, histologicamente, a cicatrização de enxertos de osso alógeno fresco congelado (OAFC) associados ou não ao plasma rico em plaquetas (PRP) em defeitos ósseos criados cirurgicamente em mandíbulas de cães. Defeitos ósseos bilaterais, medindo 1,5 cm de largura x 1 cm de altura, foram criados na borda inferior da mandíbula de 10 cães adultos machos. Os defeitos foram divididos em 3 grupos experimentais: C (controle), OAFC, OAFC/PRP. No Grupo C (n=7), os defeitos foram preenchidos apenas com coágulo sangüíneo. No Grupo OAFC (n=7), os defeitos foram preenchidos com enxertos de OAFC. No Grupo OAFC/PRP (n=6), os defeitos foram preenchidos com enxertos de OAFC associados ao PRP. A eutanásia dos animais foi realizada em 12 semanas pós-operatórias. Foram realizadas análises histológica e histométrica. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA, Tukey, p < 0,05). Nenhum defeito regenerou completamente com tecido ósseo. Os enxertos de OAFC foram bem incorporados. A quantidade média de osso neoformado e os desvios-padrão dos Grupos C, OAFC e OAFC/PRP foram 70,55 8,01%, 71,31 14,36% e 65,57 11,55%, respectivamente. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (ANOVA, p = 0,642). Os enxertos de OAFC foram biocompatíveis e bem incorporados, mas não proporcionaram maior formação óssea que os defeitos controle em mandíbulas de cães. O uso do PRP não promoveu nenhum benefício adicional à cicatrização desses enxertos em 12 semanas pós-operatórias. / Abstract: The purpose of this study was to histologically analyze the healing of fresh frozen bone allograft (FFBA) with or without platelet-rich plasma (PRP) in bony defects surgically created in mandible of dogs. Bilateral bony defects, measuring 1.5 cm in width vs. 1 cm in height, were created in the inferior border of the mandible of 10 adult male dogs. The defects were divided into three groups: C (control), FFBA and FFBA/PRP. In Group C (n=7), the defect was filled with blood clot only. In Group FFBA (n=7), the defect was filled with FFBA. In Group FFBA/PRP (n=6), the defect was filled with FFBA combined with PRP. All animals were euthanized at 12 weeks post-operative. Histologic and histometric analyses were performed. Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p < 0.05). No defect completely regenerated with bone. The FFBA was well incorporated. The mean percentage of newly formed bone and the standard-deviations of Groups C, FFBA and FFBA/PRP were 70.55 8.01%, 71.31 14.36% and 65.57 11.55%, respectively. Statistically significant differences were not found among the groups (ANOVA, p = 0,642). FFBA were biocompatible and well incorporated. However, these grafts did not promote a greater bone formation than the control defects in mandible of dogs. The use of PRP promoted no additional benefit to the healing of these grafts at 12 weeks post-operative. / Doutor

Orientador: Célio Percinoto / Coorientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Celso Koogi Sonoda / Banca: Elenice Deffune / Banca: Saul Martins de Paiva / Resumo: A avulsão dentária é um tipo de trauma que resulta na perda da continuidade de um complexo e múltiplo compartimento de tecidos. Componentes derivados do sangue, incluindo o plasma pobre em plaquetas (PPP) e o plasma rico em plaquetas (PRP) constituem uma opção terapêutica para o reparo tecidual. O gel de PRP tem sido usado como arcabouço para células-tronco da medula óssea em Engenharia Tecidual. O propósito da presente investigação foi avaliar o efeito do PPP, PRP ativado ou não por trombina e células-tronco (CT) originárias da medula óssea associadas ao PRP no reparo de reimplantes dentários. Quatro cães foram utilizados neste estudo. PRP e PPP foram obtidos pelo método de dupla centrifugação a partir do sangue coletado da veia jugular dos animais. CT foram obtidas por aspiração da medula óssea (AMO) e isoladas pelo método de centrifugação por densidade de gradiente. A citometria de fluxo (CF) foi realizada após AMO utilizando marcadores celulares CD34 e CD90. Após 30 minutos da extração, os dentes foram reimplantados e, de acordo com a proposta metodológica, divididos em 5 grupos: Grupo I - dentes reimplantados sem material (Controle); Grupo II - dentes reimplantados com o Plasma Pobre em Plaquetas (PPP); Grupo III - dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por cloreto de cálcio (PRP); Grupo IV - dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por trombina de origem bovina e cloreto de cálcio (PRP + TR) e Grupo V - dentes reimplantados com células-tronco da medula óssea associadas ao PRP ativado por cloreto de cálcio (CT + PRP). Análises histológica, histomorfométrica e imuno histoquímica foram realizadas 120 dias após o reimplante. Análise de variância (ANOVA) e o teste post-hoc de Tukey foram utilizados para a análise estatística, com nível de significância de 5%. CF mostrou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental avulsion constitutes a traumatism which results in the loss of a complex and multiple tissue compartments. Blood-components products, including platelet-poor plasma (PPP) and platelet-rich plasma (PRP), constitute a therapeutic option for tissue healing. PRP gel has also been used as a scaffold for bone marrow stem cells in Tissue Engineering. This study aimed to evaluate the effect of PPP, PRP activated or not with thrombin and bone marrow stem cells (BMSC) associated with PRP on the healing of replanted teeth. Four adult hybrid dogs were used in this study. PRP and PPP were obtained trough double centrifugation technique of blood collected from the jugular vein of the animals. CTM were obtained from bone marrow aspiration (BMA) and isolated by density gradient centrifugation method. Flow Cytometry Analysis (FCA) was performed after BMA using CD34 and CD90 cells markers. After 30 minutes of extraction, teeth were replanted and, according to the methodological proposal, divided into 5 Groups: Group I - teeth replanted without any material (Control); Group II - teeth replanted with Platelet-poor Plasma (PPP); Group III - teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by sodium chloride (PRP); Group IV - teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by bovine thrombin and sodium chloride (PRP + TR) and Group V - teeth replanted with bone marrow stem cells associated with PRP activated by sodium chloride (BMSC + PRP). Histological, histomorphometric and immunohistochemical analysis were assessed 120 days after reimplantation. Analysis of variance (ANOVA) and Tukey post-hoc test were used for the statistical analysis, with the level of significance set at 5%. FCA showed 55.98% of CD34+ and 33.28% of CD90+ after BMA. Group V (BMSC + PRP) presented the largest areas of replacement resorption, confirmed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Este estudo avaliou, histomorfometricamente, o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em ratos e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP), Laser de Baixa Intensidade (LBI) ou a associação de ambos. Defeitos de fenestração periodontal foram realizados na mandíbula de 80 ratos, divididos em 4 grupos: Grupo C (Controle) - o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo PRP - o defeito foi preenchido com PRP; Grupo LBI - o defeito recebeu a aplicação de LBI, foi preenchido com coágulo sangüíneo e irradiado novamente; Grupo PRP/LBI - o defeito recebeu a aplicação de LBI, foi preenchido com PRP e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 e 30 dias pós-operatórios. A porcentagem de preenchimento ósseo (NO), densidade do novo osso (DNO), formação de novo cemento (NC) e a extensão remanescente do defeito (ERD) foram histometricamente avaliadas. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, Tukey, p < 0,05). Aos 10 dias, o Grupo PRP apresentou ERD significativamente menor que o Grupo C. Aos 30 dias, o Grupo PRP apresentou NO e DNO significativamente maiores que o Grupo C. Todos os espécimes do Grupo C, aos 10 e 30 dias, apresentaram ausência total de formação de cemento. Já os espécimes dos grupos LBI, PRP e PRP/LBI apresentaram, aos 30 dias, significativa neoformação de cemento. LBI, PRP e PRP/LBI promoveram formação de cemento em defeitos de fenestração periodontal aos 30 dias. O PRP acelerou a regeneração óssea aos 10 dias e resultou em densidade e volume ósseos significativamente maiores que o LBI e o controle aos 30 dias. A associação PRP/LBI não foi vantajosa quando comparada ao uso isolado dessas terapias / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the influence of platelet-rich plasma (PRP), low-level laser therapy (LLLT) or their combination on the healing of surgically created periodontal fenestration defects in rats. Periodontal fenestration defects were created in the mandible of 80 rats divided into 4 groups: Group C (control) - the defect was filled by blood clot only; Group PRP - the defect was filled with PRP; Group LLLT - the defect received laser irradiation, was filled with blood clot and then irradiated again; Group PRP/LLLT - the defect received laser irradiation, was filled with PRP and then irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days postoperatively. The percentage of bone fill (NB) and density of newly formed bone (DNB), new cementum formation (NC) and the extension of the remaining defect (ERD) were histometrically evaluated. Data were statistically analyzed (analysis of variance; Tukey p < 0.05). At 10 days, Group PRP presented ERD significantly lower than Group C. At 30 days, Group PRP presented NB and DNB significantly greater than Group C. Cementum formation was not observed in any specimen of Group C at either 10 or 30 days. The specimens of groups LLLT, PRP and PRP/LLLT showed significant formation of new cementum at 30 days. LLLT, PRP and PRP/LLLT promoted new cementum formation in periodontal fenestration defects at 30 days. PRP enhanced bone regeneration at 10 days and resulted in bone volume and density significantly greater than LLLT and control at 30 days. The combination PRP/LLLT did not show additional effects when compared to the use of each therapy separately / Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Michel Reis Messora / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Mestre

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Mário Taba Júnior / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente e tratados com a associação do Plasma Rico em Plaquetas (PRP), partículas esféricas de Novo Vidro Bioativo (NVB) e Sulfato de Cálcio (SC). Os segundos e quartos prémolares mandibulares de 8 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Usando o modelo de boca dividida, os dentes foram aleatoriamente divididos em 2 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo e Grupo T (teste): o defeito foi preenchido com a associação de PRP, NVB e SC. Os retalhos foram reposicionados para cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pósoperatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com Hematoxilina e Eosina. Foram realizadas análises histométrica, usando um software analisador de imagens, e histológica. Foram avaliadas medidas lineares e de área da cicatrização periodontal, calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados percentuais foram transformados em arcoseno para análise estatística (análise de variância, p < 0,05). A regeneração óssea e de tecido conjuntivo nos defeitos de furca foi incompleta na maioria dos espécimes. O Grupo C apresentou quantidade de neoformação óssea e regeneração periodontal significativamente maior que o Grupo T. Quantidade considerável de partículas remanescentes de NVB foi observada na maioria dos espécimes do Grupo T. Dentro dos limites do presente estudo, pode-se concluir que a associação do PRP, NVB e SC não foi mais efetiva que o debridamento cirúrgico somente no tratamento de defeitos de furca Classe II. / Abstract: The purpose of this study was to histologically evaluate the healing of surgically created Class II furcation defects treated using a combination of platelet-rich plasma (PRP), new spherical bioactive glass (NBG) particles and calcium sulfate (CS). The second and fourth mandibular premolars of eight mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Using a split-mouth design, teeth were randomly divided into two groups: group C (control) - defect filled with blood clot only; and group T (test) - defect filled with a combination of PRP, NBG and CS. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized 90 days post-surgery. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either hematoxylin and eosin. Histometric, using image-analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (analysis of variance; P<0.05). Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Group C had significantly more bone formation and periodontal regeneration than group T. A considerable amount of remaining NBG particles was observed in most specimens of group T. Within the limits of this study, it can be concluded that the combination of PRP, NBG and CS was not more effective than the surgical debridement alone in the treatment of Class II furcation defects. / Doutor

Orientador: Saulo Santesso Garrido / Coorientador: Gildásio de Cerqueira Daltro / Banca: Mário Castro Carreiro / Banca: Ademario Galvão Spínola / Resumo: Pseudoartrose é o termo usado para designar a não consolidação de uma fratura, quando o processo de reparação óssea, por algum motivo deixou de atuar. A falta da união das superfícies ósseas fraturadas decorre da presença de um tecido fibroso ou fibro-cartilaginoso entre as extremidades. Portanto, não há união dos fragmentos de uma fratura, levando à formação de uma pseudocápsula com sinóvia e líquido sinovial. Apesar do desenvolvimento de numerosas técnicas de reparação óssea na cirurgia traumatológica, ainda é bastante desafiador a busca da melhor terapêutica a ser utilizada para o tratamento dos grupos de fraturas que apresentam alterações no processo de consolidação e que culminam em pseudoartrose. Estima-se que cerca de 5 a 10% das fraturas de ossos longos evoluem para a disfunção no processo de consolidação, sendo mais comum na tíbia, fíbula e úmero. Novos métodos de tratamento baseados em biotecnologia têm despertado interesse em todo o mundo. Atualmente existe uma gama heterogênea de biomaterias que podem ser utilizados como facilitadores da consolidação óssea no tratamento das fraturas complexas. Estes biomaterias apesar de não representarem o tratamento principal, auxiliam na consolidação ou estimulação dos fenômenos que envolvem o reparo ósseo. Dentre eles, nos últimos anos diversos estudos têm demonstrado o potencial terapêutico do Plasma Rico em Plaquetas na regeneração de tecidos moles, cartilagem e ósseo. O plasma rico em plaquetas é um concentrado de plaquetas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pseudoarthrosis is the term used to designate non-consolidation of a fracture, when the bone repair process for some reason ceased to act. The lack of union of the fractured bone surfaces results from the presence of a fibrous or fibro-cartilaginous tissue between the extremities. Therefore, there is no union of the fragments of a fracture, leading to the formation of a pseudocapsule with synovium and synovial fluid. Despite the development of numerous bone repair techniques in trauma surgery, it is still quite challenging to seek the best therapy to be used for the treatment of fracture groups that present changes in the consolidation process and culminate in pseudoarthrosis. It is estimated that approximately 5 to 10% of the fractures of long bones evolve to the dysfunction in the consolidation process, being more common in the tibia, fibula and humerus. New biotechnology-based treatment methods have attracted interest all over the world. There is currently a heterogeneous range of biomaterials that can be used as facilitators of bone healing in the treatment of complex fractures. These biomaterias, although they do not represent the main treatment, help in the consolidation or stimulation of the phenomena that involve the bone repair. In recent years, several studies have demonstrated the therapeutic potential of Platelet Rich Plasma in the regeneration of soft tissues, cartilage and bone. Platelet-rich plasma is in autogenous platelet concentrate obtained by centrifugatio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Tadeu Ribeiro Paes / Banca: Monica Rosa Bertao / Banca: Kamilla Swiech Antonietto / Resumo: Vários estudos têm apontado que a interação de plasma rico em plaquetas (PRP) com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo humano (CT-TAs) é capaz de otimizar o processo regenerativo, estimulando a angiogênese e o recrutamento de células para o local da lesão. O avanço no conhecimento sobre os aspectos físico-químicos do gel de PRP, bem como na interação e no comportamento das CT-TAs quando associadas ao gel poderão resultar em aplicações práticas em processos de regeneração tecidual. Em função disso, objetivou-se analisar diferentes parâmetros relativos a aspectos morfológicos, físico-químicos e estrutural do gel de PRP isolado ou em associação com CT-TAs (PRP/CT-TAs). As análises dos géis foram realizadas por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV) e da técnica de espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). Também foi avaliada a viabilidade e migração das CT-TAS após associação ao gel de PRP. Os resultados mostraram que as CT-TAs continuam viáveis, mantendo suas propriedades, assim como o gel de PRP, após a associação. Não foram observadas alterações estruturais nos géis de PRP isolado e PRP/CT-TAs, preservando os perfis físico-químicos das amostras. Concomitantemente com estes resultados, observou-se que o gel de PRP pode proporcionar um ambiente favorável às células, permitindo proliferação e migração celular. Os resultados obtidos permitem concluir que o gel de PRP pode ser usado como um potencial scaffold, mantendo as células viáve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several studies have shown that the platelet-rich plasma (PRP) in association with human adipose-derived mesenchymal stem cells (h-AdMSCs) is able to optimize the regenerative process, stimulating angiogenesis and the recruitment of cells to the lesion site. Advancing in the knowledge of the physico-chemical aspects of PRP-gels, as well as in the interaction and behavior of h-AdMSCs when associated to the gel will result in practical applications in tissue regeneration processes. Therefore, the aim of this study was to evaluate different morphological, physic-chemical and structural parameters of the isolated PRP-gel or in association with h-AdMSCs (PRP/h-AdMSCs). The PRP-gels were submitted to scanning electron microscopy (SEM) and Fourier transform infrared spectroscopy technique (FTIR). The h-AdMSCs viability and migration after association with the PRP-gel were also evaluated. The results showed that as h-AdMSCs remain viable, retaining their properties, as the PRP gel, after association. There were no structural changes in the PRP gels isolated and PRP/h-AdMSCs, so maintaining the physical-chemical profiles of the samples. Additionally to these results, it was observed that the PRP-gel can provide a favorable environment for cells, allowing its proliferation and migration. In summary, it is possible to conclude that PRP-gel can be used as a potential scaffold, maintaining cell viability when encapsulated and preserving the physical-chemical aspects of h-AdMSCs and PRP wh... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-25T13:49:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T13:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / CAPES;FAPESB / A enxertia dos maxilares com osso córtico-medular aposicionado condiciona o rebordo para receber implantes de titânio. O osso alógeno congelado tem conquistado espaço por eliminar a necessidade de área doadora. Clinicamente, os enxertos aposicionados sofrem absorção, e o plasma rico em plaquetas (PRP) poderia minimizar esse fenômeno. Nesta tese, foram realizadas três pesquisas. A principal delas estudou a incorporação de enxertos autógenos e alógenos aposicionados à mandíbula de coelho em associação ou não com PRP. As alterações que o congelamento promoveu no osso e o processo de preparação do PRP também foram investigados. Utilizaram-se 54 coelhos. Enxertos córtico-medulares foram removidos do osso ilíaco e aposicionados bilateralmente à cortical externa da mandíbula. Parte dos animais recebeu osso autógeno fresco e outra parte recebeu osso alógeno congelado a -70°C por 120 dias. Em um lado da mandíbula, foi colocado PRP. A eutanásia ocorreu após 3, 7, 14, 28 e 56 dias. A diferença entre os grupos foi ponderada pelo teste de Bonferroni. O osso alógeno foi menos absorvido, mais osteogênico e fibrogênico que o osso autógeno. Sua cortical estava mais espessa e ele induziu maior quimiotaxia de macrófagos e osteoclastos. O PRP, apesar de melhorar, não interferiu significativamente nessas variáveis. Não houve reação de células T e B contra os enxertos. O efeito da criopreservação foi analisado no osso congelado a -20°C e -70°C por 30, 60, 90 e 120 dias e foi comparado ao osso fresco. A diferença foi estimada pelo teste de Tukey. O congelamento aumentou a área das células e dos núcleos na medular e diminuiu a área dos núcleos da cortical. O colágeno da cortical desnaturou com a diminuição da temperatura e o aumento do tempo de congelamento. Essas alterações só comprometeram a morfologia do tecido após 90 ou 120 dias na temperatura de -70°C. O sangue total e o PRP foram comparados pelo teste de correlação de Pearson. A plaquetometria do PRP não dependeu dos eritrócitos e do plasma pobre em plaquetas removidos, mas do hematócrito e da plaquetometria do sangue total. O hematócrito do PRP não interferiu na sua plaquetometria e leucometria, que foi dependente da leucometria inicial. Concluiu-se que o osso alógeno congelado foi bom material para enxertia aposicionada dos maxilares e não induz uma rejeição imunológica. O PRP apresentou apenas uma tendência em melhorar o reparo de enxertos aposicionados, e o congelamento foi eficaz em diminuir a antigenicidade do osso.

As lesões de nervos periféricos são comuns, resultando em comprometimento motor, sensorial e autonômico. Nas lesões em que ocorre grande perda de tecido neural, a reparação através de sutura primária não é permitida, sendo a auto-enxertia de nervo o tratamento de escolha. A utilização de um enxerto venoso autólogo utilizado como tubo condutor entre os cotos nervosos lesados preenchidos com substâncias que estimulem a regeneração nervosa apresenta-se como uma técnica alternativa. O Plasma Rico em Plaquetas é um produto derivado do sangue autógeno por processo laboratorial, rico em fatores de crescimento originados dos grânulos α- plaquetários. O objetivo deste trabalho experimental foi estudar a influência do Plasma Rico em Plaquetas na regeneração do nervo periférico seccionado e reparado com veia ao avesso, comparado ao uso da veia ao avesso vazia e à sutura direta das extremidades nervosas. A avaliação foi obtida com a interposição de veia jugular externa ao avesso vazia (Grupo 3) e preenchida com plasma rico em plaquetas (Grupo 4) em defeitos de 10 mm de nervo ciático de ratos Wistar, comparados à sutura direta (Grupo 2) das extremidades seccionadas, utilizando técnica histológica para identificação da coaptação ou não dos cotos nervosos. Os grupos 2 e 4 apresentaram coaptação dos cotos nervosos, concluindo-se que a veia ao avesso preenchida como Plasma Rico em Plaquetas é uma alternativa vantajosa no tratamento de lesões nervosas periféricas. / The peripheral nerve injuries are common, resulting in motor, sensorial and autonomic impairment. In lesions occurring heavy loss of neural tissue, repair by primary suture is not allowed, being the nerve autograft treatment the choice. The use of autologous vein grafts used as a conductor pipe between injured nerve stumps filled with substances stimulating nerve regeneration is presented as an alternative technique. The platelet rich plasma is an autologous blood product for the laboratorial process, rich in growth factors originated from α-granules of platelet. The aim of this study was to study the influence of platelet rich plasma in the regeneration of peripheral nerve transected and repaired with an inside-out vein, compared to the utilization of inside-out empty vein and the direct suture of the nerve endings. The evaluation was performed by interposing a jugular inside out empty vein (Group 3) filled with platelet-rich plasma (Group 4)in 10-mm defects in a sciatic nerve of rats, in comparison to the direct suture (Group 2) of divided ends, using histological technique for the identification of coaptation of nerve stumps or not. Groups 2 and 4 showed coaptation of the nerve stumps, being concluded that the inside-out vein completed as platelet rich plasma is an attractive alternative for the treatment of peripheral nerve injuries.

Orientadora: Profa. Dra. Christiane Bertachini Lombello / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2015. / A engenharia de tecidos visa cultivar celulas sobre substratos tridimensionais, para implantacao no organismo, restaurando desta forma partes danificadas. Os materiais utilizados como substratos devem apresentar caracteristicas propicias ao cultivo celular. Na cultura de celulas e necessario o estabelecimento de certas condicoes, como o modo de suplementacao do meio de cultura. Sendo assim, este estudo avaliou sistemas de cultura autologo (coagulo e soro do plasma rico em plaquetas) e xenogeno (gelatina e soro fetal bovino), como substratos e suplementos para a cultura de celulas. O plasma rico em plaquetas (PRP) apos ativacao da cascata de coagulacao apresenta uma estrutura tridimensional, o coagulo. Com a retracao do coagulo, ocorre a liberacao do soro do PRP. A gelatina e uma substancia com capacidade de gelificacao. Para manutencao de sua estrutura, a gelatina foi reticulada com glutaraldeido. A caracterizacao do substrato de gelatina e a liberacao de glutaraldeido foram avaliadas por espectroscopia. Foram realizadas avaliacoes do intumescimento e da degradacao do coagulo e da gelatina por 24 horas e cinco dias, respectivamente. A analise da ultraestrutura dos substratos foi realizada por microscopia eletronica de varredura (MEV). O diametro das fibras do coagulo e a rugosidade superficial da gelatina tambem foram examinados. Para as analises biologicas foram utilizadas celulas Vero. Nas culturas com o coagulo, o meio foi suplementado com 10% do soro do PRP e as culturas com gelatina tiveram o meio suplementado com 10% de SFB. A avaliacao da citotoxicidade foi realizada atraves do teste do extrato e de contato direto das celulas com os substratos. Nas analises do comportamento celular com os substratos, as celulas foram inoculadas sobre o coagulo e a gelatina. As culturas foram mantidas a 37¿C com 5% CO2. As avaliacoes por espectroscopia da gelatina nao identificaram alteracao da estrutura primaria e a presenca do agente reticulador. Os substratos do coagulo e da gelatina exibiram intumescimentos superiores a 200% e ambos demonstraram boa estabilidade, nao apresentando uma degradacao significativa no periodo de cinco dias. A ultraestrutura do coagulo e formada por uma rede irregular de fibras de diferentes diametros, com um valor medio de 0,210}0,097 ¿Êm. A gelatina apresentou uma estrutura densa e plana, exibindo uma micro-rugosidade de 0,11}0,02 ¿Êm. As avaliacoes da citotoxicidade confirmaram que os sistemas de cultura nao foram toxicos para as celulas Vero, exibindo valores de viabilidade celular superiores a 90%. Na analise da interacao celular com os substratos foi verificado que as celulas aderiram e se espalharam sobre os materiais. As celulas presentes na gelatina exibiram maior area superficial (866,32}390,53 ¿Êm) do que as celulas aderidas no coagulo (425,53}245,21 ¿Êm), indicando maior interacao com o substrato. Portanto, os resultados sugerem que ambos os sistemas de cultura sao promissores para utilizacao em engenharia de tecido. Todavia o sistema autologo apresenta a vantagem de ser proprio do organismo. / Tissue engineering aims to grow cells on three dimensional substrates for implantation in the body, restoring damaged parts. The materials used as substrates must have favorable characteristics to the cell culture. In cell culture, it is necessary to establish certain conditions, such as supplementation of the culture medium. Thus, this study evaluated autologous culture systems (clot and serum platelet-rich plasma) and xenogeneic (gelatin and fetal bovine serum) as substrates and supplements for cell culture. The platelet-rich plasma (PRP) upon activation of the coagulation cascade has a three dimensional structure, the fibrin clot. With clot retraction, the serum PRP is released. Gelatin is a substance with gelling capacity. To maintain its structure, gelatin was crosslinked with glutaraldehyde. Characterization of the gelatin substrate and the release glutaraldehyde were assessed by spectroscopy. For the characterization of the substrates were performed assessments of swelling and degradation for 24 hours and five days, respectively. The analysis of the ultrastructure of the substrates was performed by scanning electron microscopy (SEM). The diameter of the clot fiber and the surface roughness of gelatin were also examined. For biological testing, Vero cells were used. In cultures with the clot the medium was supplemented with 10% serum from PRP and gelatin medium were supplemented with 10% FBS. Assessment of cytotoxicity was performed using the test extract and direct contact of the cells with the substrates. In cellular behavior analysis with the substrates, the cells were inoculated onto the clot and gelatin. Cultures were maintained at 37°C with 5% CO2. The evaluations of gelatin by spectroscopy have not identified change in the primary structure and the presence of the crosslinking agent. The substrates of the clot and gelatin exhibited swellings higher than 200% and both demonstrated good stability, showing no significant degradation over a five day period. The ultrastructure of the clot is formed by an irregular network of fibers of different diameters, with an average value of 0.210±0.097 ìm. The gelatin presented a dense and planar structure, showing a micro-roughness of 0.11±0.02 ìm. The evaluation of cytotoxicity confirmed that culture systems were not toxic to Vero cells, exhibiting cell viability higher than 90%. In the analysis of cell interaction with the substrates, was found that the cells adhered and spread on the materials. Cells present in the gelatin exhibited a greater surface area (866.32±390.53 ìm) than the cells adhered in the clot (425.53±245.21 ìm), indicating a greater interaction with the substrate. Therefore, the results suggest that both culture systems are promising for use in tissue engineering. However autologous system has the advantage of being the body itself.