Malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium que causa um milhão de mortes anualmente. Quase 3 bilhões de pessoas vivem em áreas tropicais de risco de infecção com uma das 5 espécies evidenciando um problema mundial carente de solução imediata. Esse parasita apresenta um potencial para o rápido desenvolvimento de resistências contra os fármacos utilizados em seu tratamento, por isso uma das soluções preconizadas pela Organização Mundial de Saúde é o desenvolvimento de vacinas eficazes para seu controle.O objetivo desse trabalho foca-se no aperfeiçoamento de uma metodologia mais efetiva para a formulação de vacinas contra malária. Inicialmente no modelo roedor, foi utilizado o método de carregamento em nanopartículas lipossomais , com proteínas oriundas de merozoítos do gênero Plasmodium. Além da avaliação do potencial vacinal das nanopartículas (sobrevida/morbidade), avaliamos o efeito da vacina contra toxinas (por exemplo, domínios GPI). Concluímos de maneira concisa que proteolipossomos gerados com proteínas GPI ancoradas do gênero Plasmodium possuem efeitos notáveis em relação a controle de crescimento parasitológico, mostrando-se efetivo também em desafios de letalidade in vivo. No que diz respeito a aspectos que afetam humanos, os soros gerados contra proteínas do parasita são capazes de diminuir interleucinas relacionadas com sintomas graves e parecem ter grandes efeitos antiparasitários que se correlacionam diretamente com o perfil genético do hospedeiro imunizado em ensaios in vitro. / Malaria is a tropical disease caused by species of the protozoan Plasmodium and around one million people die of the disease each year, while 3 billion individuals live at risk to acquire infection with one of the five species known to infect humans. Due to the parasite\'s looming resistance against most of the antimalarial compounds used in therapy, the WHO preconizes the development of effective vaccine as an important goal. The purpose of this work was to evaluate the potential of a new method of vaccine formulation against malaria. Initially tested in the rodent model, we loaded liposomal nanostructures with merozoite-derived GPI-anchored proteins. We then monitored parameters such as survival and morbidity after challenge and measured the effect against parasite derived toxines. We observed significant effects in terms of control of parasitemy and in one model complete survival of mice. We also detected the generation of antiGPI antibodies which showed to be functional in decreasing TNF-<font face=\"Symbol\">a production in an in vitro model, however, we detected that this function was dependent on the genetic background of the antibody producing immunized animal.

A malária é uma doença tropical negligenciada causada por protozoários do gênero Plasmodium spp, afeta populações em mais de 100 países ao redor do globo, apresentando 219 milhões de novos casos por ano sendo, portanto, um grave problema de saúde pública. Apresenta um ciclo complexo e digenético, necessitando do mosquito vetor e do hospedeiro vertebrado para se completar - ciclo este que envolve etapas de transformação e adaptação, já que o patógeno passa por 28 formas diferentes ao longo do ciclo, além de enfrentar situações de stress térmico, no momento do contágio e durante os picos febris. Sendo assim, é necessário que o protozoário garanta sua sobrevivência e possibilite a infecção do hospedeiro. Isso é realizado com a assistência de chaperonas moleculares, proteínas estas que são superexpressas no estágio intra-eritrocitário. Uma dessas proteínas é a Hsp90, uma Heat shock protein com diferentes funções, entre elas, maturação de proteínas clientes, encaminhamento de proteínas para translocação por membranas e marcação de proteínas para degradação. Para cumprir adequadamente as diversas funções, as Hsp90 contam com o auxílio de co-chaperonas, como a Hsp70/Hsp90 Organizing Protein (Hop) que modulam sua função. A Hop é uma co-chaperona do sistema foldossoma formado pelas Hsp70 e Hsp90 citoplasmáticas e que atua como proteína adaptadora transferindo proteínas clientes da primeira para a segunda chaperona molecular. A interação da Hop com Hsp70 e Hsp90 ocorre via domínios TPR, que se ligam ao motivo EEVD presente na extremidade C-terminal de ambas as chaperonas citoplasmáticas. É encontrada em diversos organismos, incluindo Plasmodium falciparum, o agente etiológico da malária. Sendo assim, conhecer a Hop de P. falciparum (PfHop), estrutural e funcionalmente, é importante para o entendimento do funcionamento das Hsp90 e Hsp70, proteínas essenciais para a sobrevivência do patógeno e, portanto, possíveis alvos terapêuticos. A PfHop recombinante foi obtida com pureza superior a 95%. A caracterização biofísica da mesma foi feita através de diferentes técnicas. Como outras Hops, a PfHop é majoritariamente constituída por hélices alfa. Os parâmetros hidrodinâmicos determinados sugerem que a PfHop se comporta como um equilíbrio monômero-dímero quando em solução. Dados de espalhamento de raios X a baixo ângulo mostram a PfHop como uma proteína dimérica e alongada. Este trabalho de dissertação de mestrado permitiu alcançar a caracterização estrutural da PfHop e com este conhecimento, espera-se avançar na caracterização funcional da mesma sobre a Hsp70 e Hsp90. / Malaria is a neglected tropical disease caused by protozoa of the genus Plasmodium spp, affects populations in more than 100 countries around the globe, presenting 219 million new cases per year and is therefore a serious public health problem. It presents a complex and digenetic cycle, necessitating the vector mosquito and the vertebrate host to complete - this cycle involves transformation and adaptation stages, since the pathogen goes through 28 different forms along the cycle, besides facing situations of thermal stress , At the time of the contagion and during the feverish peaks. Thus, it is necessary that the protozoan guarantees its survival and makes possible a host infection. This is accomplished with the assistance of molecular chaperones, proteins that are overexpressed in the intra-erythrocyte stage. A life of proteins and Hsp90, a protection of thermal shock with different functions, among them, maturation of client proteins, routing of proteins for membrane translocation and labeling of proteins for degradation. To comply properly, for example, as Hsp90 rely on the help of co-chaperones, such as Hsp70 / Hsp90 Organizing Protein (Hop) that modulate their function. The Hop is a co-chaperone system folded by Hsp70 and Hsp90 cytoplasmic and which acts as an adapter protein transferring client proteins from the first to the second molecular chaperone. The interaction of Hop with Hsp70 and Hsp90 occurs via TPR domains, which bind to the EEVD motif present at the C-terminus of both as cytoplasmic chaperones. It is found in several organisms, including Plasmodium falciparum, the etiologic agent of malaria. Therefore, knowing a Hop of P. falciparum (PfHop), structurally and functionally, is important for the understanding of the functioning of Hsp90 and Hsp70, essential proteins for a pathogen survival and, therefore, in all the therapeutic aspects. A recombinant PfHop was obtained in greater than 95% purity. The biophysical characterization by the same brand made through different techniques. As there is Hops, a PfHop is mostly constituted by alpha helices. The indicated parameters are a PfHop behaves as a monomer-dimer balance when in solution. Higher low-angle X-ray scattering data on PfHop as a dimeric and elongated protein. This work of master\'s dissertation allowed to reach a structural characterization of the PfHop and with this knowledge, it is expected to advance in the functional characterization of the same in Hsp70 and Hsp90.

A malária acompanha os seres humanos há cerca de 50 mil anos. Diferentes fatores genéticos do hospedeiro humano já foram relacionados à suscetibilidade ou resistência a malária: hemoglobinas S, C e E; Duffy; G6PD; TNF; TLRs; entre outros. Poucos estudos genético-epidemiológicos foram, até agora, conduzidos em populações misturadas, como a população brasileira e, em regiões com predominância da infecção por P. vivax. Estudos anteriores mostraram a presença de um fator genético principal, possivelmente localizado no cromossomo 4, relacionado ao número de episódios de malária no município de Monte Negro (RO). O presente trabalho buscou fatores genéticos relacionados à característica em questão em Monte Negro (RO). A análise do polimorfismo I602S do gene TLR1 (4p) pela técnica de RFLP mostrou ausência de associação. O GWAS encontrou sugestões de marcadores, que devem ser replicados em futuros estudos para verificar possíveis associações verdadeiras, sendo os mais relevantes os rs3796504, rs17518475, rs17527389, rs17660753, rs221188, rs7918405, rs7068695. / Malaria is present in humans since 50,000 years ago. Different Human host genetic factors are known to be related to susceptibility or resistance to malaria: S, C and E hemoglobins, Duffy, G6PD, TNF, TLRs, among others. Otherwise, few studies have been conducted in admixed populations, such as Brazilian populations and, in P. vivax predominance regions. Previous studies have shown the presence of a major genetic factor related to the number of malaria episodes of in the municipality of Monte Negro (RO) and, it was also suggested that this genetic factor may be located on chromosome 4. Thus, this study aimed to search genetic factors related to the number of individual malaria episodes in Monte Negro TLR1 candidate gene (4p) using RFLP and by GWAS. The first approach did not show any association with the studied phenotype, whereas GWAS data was able to suggest candidate markers that can be replicated in further studies in order to identify truly associations. The more relevant ones were rs3796504, rs17518475, rs17527389, rs17660753, rs221188, rs7918405, rs7068695.

Plasmodium malariae é um parasita protozoário que causa malária em humanos e é geneticamente indistinguível de P. brasilianum, um parasita que infecta macacos do Novo Mundo nas Américas do Sul e Central. P. malariae possui uma ampla distribuição mundial em regiões tropicais e subtropicais, porém de forma pontual, sendo encontrado na América do Sul, Ásia e África. Entretanto, pouco se sabe sobre a genética destes parasitas e a similaridade entre eles pode devido ao pequeno número de sequências genômicas disponíveis para essas espécies de Plasmodium. Recentemente, seis marcadores microssatélites e a sequencia completa do gene que codifica a proteína de superfície do merozoíta 1 (MSP1) foram descritos para estes parasitas. Neste estudo, o polimorfismo genético de 24 isolados brasileiros de P. malariae e P. brasilianum obtidos de diferentes hospedeiros foi analisado através da utilização desses marcadores microssatélites e da região correspondente ao oitavo bloco da MSP1. Os dados epidemiológicos moleculares foram explorados em relação à origem geográfica e hospedeiros. Para todos os marcadores estudados, as amostras de símios apresentaram um polimorfismo mais elevado que as amostras humanas. Na análise de microssatélites, as amostras humanas foram polimórficas em apenas dois alelos, enquanto as amostras de símios foram polimórficas em cinco alelos. O alelo Pm42- 331 foi monomórfico em todas as amostras analisadas. Na análise do bloco 8 da MSP1, as amostras símias foram altamente polimórficas e as amostras humanas apresentaram quatro tipos alélicos, sendo que dois tipos alélicos (A5 e A7) foram encontrados em alta frequência (90%). Em ambas as análises, a amostra de mosquito foi mais similar a amostras simianas. Nossos dados também mostram que há uma possível ausência de dimorfismo alélico na MSP1 de P. malariae e P. brasilianum, ao contrário de outras espécies de Plasmodium. Pela primeira vez, amostras de humanos, símios e mosquito foram analisadas em conjunto e utilizadas para o primeiro estudo de polimorfismos genéticos de isolados de P. malariae e P. brasilianum do Brasil. / Plasmodium malariae is a protozoan parasite that causes malaria in humans and is genetically indistinguishable from P. brasilianum, a parasite infecting New World monkeys in Central and South America. P. malariae has a wide and patchy global distribution in tropical and subtropical regions, being found in South America, Asia, and Africa. However, little is known regarding the genetics of these parasites and the similarity between them could be because until now there are only a very few genomic sequences available from these Plasmodium species. Recently, six microsatellite markers and the complete sequence of the merozoite surface protein 1 (MSP1) gene have been described for these parasites. In this study, the genetic polymorphism of 24 P. malariae and P. brasilianum isolates obtained from different hosts was analyzed using these microsatellite markers and the corresponding region on the block 8 of MSP1. The molecular epidemiological data were explored in relation to geographical origin and hosts. For all markers studied, the simian samples showed a higher polymorphism than human samples. In microsatellite analysis, the human samples were polymorphic only in two alleles, while simian samples were polymorphic in five alleles. The allele Pm42-331 was monomorphic in all samples analyzed. In the analysis of Block 8 of MSP1, the simian samples were highly polymorphic and human samples showed four allele types with two allelic types (A5 and A7) frequently found (90%). In both analyzes, the mosquito sample was more similar to simian samples. Our data also show that there is a likely absence of allelic dimorphism of MSP1 from P. malariae and P. brasilianum, as opposed to other Plasmodium species. For the first time, samples of humans, monkeys and mosquito were analyzed together and used for the first study of genetic polymorphisms in P. malariae and P. brasilianum isolates from Brazil.

O objetivo do estudo foi confirmar se a redução da fecundidade dos mosquitos Aedes aegypti infectados por Plasmodium gallinaceum ocorre por morte das células foliculares dos ovários. Mosquitos infectados produzem menos ovos quando comparado aos mosquitos sadios. Uma explicação é a redução da viabilidade celular que ocorre nos ovários de fêmeas 18, 22 e 24 horas após o repasto sanguíneo infectado (RSI) como foi observado pela técnica MTT. Utilizando o acridine orange, não foi possível observar a morte das células foliculares no intervalo de 18 horas, mas 22 e 24 horas após o RSI essas células estão em morte em relação ao mesmo intervalo do repasto sanguíneo controle (RSC). A análise do DNA fragmentado foi realizada através do TUNEL. Ovários de 22 e 24 horas após RSC e RSI foram negativos nas regiões dos cortes histológicos examinados. Sendo assim, podemos concluir que, utilizando esses ensaios foi possível identificar a morte das células foliculares como uma resposta a redução da fecundidade, porém não foi possível determinar que o tipo de morte é apoptose. / The objective of this study was to confirm the hypothesis that the fertility reduction in Plasmodium gallinaceum-infected Aedes aegypti occurs by follicular cells death. A significant reduction in the number of eggs laid by infected mosquitoes was confirmed. It was observed a reduction of viable cells in 18, 22 and 24 hours PBM infected by MTT assay. It was not possible to observe cell death in ovary tissue 18 hours PBM infected, but the follicular cells showed orange color 22 and 24 hours indicating they are in death in relation to the same interval of PBM control. To determine if these cells exhibit apoptosis, we use the TUNEL which mark the fragmented DNA, a characteristic of the apoptosis process. Ovaries 22 and 24 hours PBM infected and control were negative for TUNEL marker from ovary histological preparations. Thus, we conclude that fecundity reduction occurs as a response to follicular cells death caused by P. gallinaceum infection but it was not possible to affirm if the type of follicular cells death is apoptosis.

O ligante de merozoítos de Plasmodium vivax em DARC nos eritrócitos é PvDBPII. Aqui, nós testamos se anticorpos naturalmente adquiridos contra PvDBPII conferem proteção para malária vivax clínica em indivíduos da Amazônia. Para tanto, foram realizados ensaios multiplex com 466 indivíduos revelando uma alta proporção de respondedores. Porém, nenhuma associação entre níveis de anticorpos anti-PvDBPII e atraso para o próximo episódio de malária vivax foi encontrad a. Dessas amostras, 27,8% mostraram alta atividade inibitória e a presença desses anticorpos foi associada com atraso no próximo episódio de malária vivax. Para produzir um painel de anticorpos monoclonais (mAbs) anti-PvDBPII de indivíduos do Amazonas foi realizado um sorting de células B especificas de indivíduos com respostas inibitórias. Um desses mAbs competiu pelo mesmo sitio de ligação ou similar com anticorpos inibitórios naturalmente adquiridos. Em culturas P. vivax esse mAb foi capaz de reduzir a invasão de merozoítos em eritrócitos. / Merozoites of Plasmodium vivax has a critical parasite ligand (PvDBPII) that binds to DARC on erythrocytes. Here, we tested whether naturally acquired antibodies to PvDBPII conferred protection against clinical vivax malaria among rural Amazonians. We measured IgG antibodies from 466 individuals using a multiplex assay. A high proportion of samples tested had IgG antibodies to PvDBPII. However, found no association between high-level antibody response to PvDBPII and time to the next malaria episode. Of these samples, 27.8% displayed high blocking activity against PvDBP and these subjects had a statistically significant longer time to the next clinical P. vivax episode. To produce a panel of monoclonal antibodies (MoAbs) against PvDBPII from Amazon individuals, we sorted single PvDBPII-specific B-cell from subjects with BIAb responses. One of these MoAb generated recognizes PvDBPII and compete with naturally acquired antibodies from plasma samples to the same epitope recognized by MoAb. In short-term culture of Plasmodium vivax this Moab can reduced invasion.

<p>Hemosporidije&nbsp; kao&nbsp; krvno&nbsp; prenosivi&nbsp; paraziti, veoma su rasprostranjeni u populacijama ptica &scaron;irom&nbsp; planete.&nbsp; Izazivaju&nbsp; avijarnu&nbsp; malariju&nbsp; ili stanje&nbsp; slično&nbsp; njoj,&nbsp; a&nbsp; prenose&nbsp; se&nbsp; preko insekatskih&nbsp; vektora.&nbsp; Hemosporidije&nbsp; su&nbsp; veoma dobro&nbsp; proučene&nbsp; u&nbsp; severnoj&nbsp; i&nbsp; zapanoj&nbsp; Evropi&nbsp; i Severnoj&nbsp; Americi.&nbsp; S&nbsp; obzirom&nbsp; da&nbsp; su hemosporidije&nbsp; slabije&nbsp; izučavane&nbsp; u Palearktičkom&nbsp; migratornom&nbsp; sistemu&nbsp; zapadnog Balkana, osnovni cilj bio je da se istraži koje su vrste&nbsp; tri&nbsp; ispitivana&nbsp; roda&nbsp; hemosporidija <em>Plasmodium</em>,&nbsp; <em>Haemoproteus&nbsp;</em> i<em>&nbsp; Leucocytozoon</em> zastupljene&nbsp; kod&nbsp; različitih&nbsp; migratornih&nbsp; grupa ptica&nbsp; pevačica&nbsp; u&nbsp; Srbiji.&nbsp; Rasprostranjenje,prevalenca&nbsp; i&nbsp; parazitemija&nbsp; ustanovljene&nbsp; su&nbsp; na dva načina: pregledanjem krvnih razmaza ptica i&nbsp; pomoću&nbsp; molekularne&nbsp; (PCR)&nbsp; metode. Sakupljeno&nbsp; je&nbsp; 202&nbsp; uzorka&nbsp; krvi&nbsp; sa&nbsp; sedam lokaliteta.&nbsp; Zaraza&nbsp; rodovima <em>Plasmodium,Haemoproteus</em>&nbsp; i&nbsp; <em>Leucocytozoon</em>&nbsp; ustanovljena je kod&nbsp; 66&nbsp; jedinki,&nbsp; sa&nbsp; ukupnom&nbsp; prevalencom&nbsp; od 32,7%.&nbsp; Najče&scaron;ći&nbsp; rod&nbsp; hemosporidija&nbsp; bilo&nbsp; je <em>Haemoproteus</em>&nbsp; sa&nbsp; prevalencom&nbsp; od&nbsp; 26,1%.&nbsp; Sve zaražene&nbsp; ptice&nbsp; bile&nbsp; su&nbsp; adultne.&nbsp; Samo&nbsp; je&nbsp; jedna ptica&nbsp; imala&nbsp; ko-infekciju.&nbsp; Ustanovljena&nbsp; je&nbsp; 31 loza,&nbsp; od&nbsp; čega&nbsp; su&nbsp; dve&nbsp; potpuno&nbsp; nove&nbsp; i neotkrivene&nbsp; do&nbsp; sada.&nbsp; Loza&nbsp; CCF25&nbsp; iz&nbsp; roda <em>Plasmodium,</em>&nbsp; izolovana&nbsp; je&nbsp; kod&nbsp; obične&nbsp; zebe (<em>Fringilla&nbsp; coelebs)</em>,&nbsp; a&nbsp; dok&nbsp; ORIORI04&nbsp; pripada rodu&nbsp; <em>Leucocytozoon</em>&nbsp; i&nbsp; izolovana&nbsp; je&nbsp; kod vuge(<em>Oriolus&nbsp; oriolus</em>).&nbsp; Loza&nbsp; GRW06<br />(<em>Plasmodium&nbsp; elongatum)&nbsp;</em> izolovana&nbsp; je&nbsp; po&nbsp; prvi put&nbsp; kod&nbsp; obične&nbsp; zebe,&nbsp; dok&nbsp; su&nbsp; loze&nbsp; PARUS20&nbsp; i PARUS25&nbsp; (<em>Leucocytozoon&nbsp; sp</em>.)&nbsp; po&nbsp; prvi&nbsp; put zabeležene&nbsp; kod&nbsp; planinske&nbsp; sive&nbsp; (<em>Poecile montanus)</em>&nbsp; i&nbsp; ćubaste&nbsp; senice&nbsp; (<em>Lophophanes cristatus)</em>.&nbsp; Većina&nbsp; ptica&nbsp; (29)&nbsp; imala&nbsp; je&nbsp; srednji nivo&nbsp; parazitemije.&nbsp; Ustanovljena&nbsp; je&nbsp; značajna razlika&nbsp; u&nbsp; prevalenci&nbsp; između&nbsp; stanarica&nbsp; i delimičnih&nbsp; selica.&nbsp; Razlika&nbsp; u&nbsp; srednjoj parazitemiji bila&nbsp; je&nbsp; značajna&nbsp; takođe&nbsp; između stanarica i delimičnih selica.</p> / <p>Avian&nbsp; haemosporidians&nbsp; are&nbsp; vector-transmitted blood&nbsp; parasites&nbsp; distributed&nbsp; worldwide,&nbsp; abundant in&nbsp; many&nbsp; bird&nbsp; families&nbsp; and&nbsp; well-studied&nbsp; across Europe and&nbsp; North&nbsp; America.&nbsp; Since&nbsp; avian&nbsp; hemosporidians&nbsp; were&nbsp; poorly&nbsp; examined&nbsp; in&nbsp; the Palearctic&nbsp; migratory&nbsp; flyways&nbsp; of&nbsp; the&nbsp; Western Balkans, the goal of this study was to&nbsp; investigate what&nbsp; species&nbsp; of&nbsp; three&nbsp; haemosporidian&nbsp; genera<em> Plasmodium,</em>&nbsp; <em>Haemoproteus</em>&nbsp; and&nbsp;<em> Leucocytozoon</em> infect&nbsp; both&nbsp; resident&nbsp; and&nbsp; migratory&nbsp; passerine birds in Serbia. The&nbsp; prevalence, distribution and parasitemia&nbsp; of&nbsp; avian&nbsp;&nbsp; haemosporidian&nbsp; infections were&nbsp; screened&nbsp; using&nbsp; both&nbsp; nested&nbsp; PCR&nbsp; method and microscopy observation. Out of 202 sampled birds&nbsp; at&nbsp; seven&nbsp; localities,&nbsp; 66&nbsp; were&nbsp; positive&nbsp; for haemosporidians.&nbsp; Total&nbsp; prevalence&nbsp; was&nbsp; 32.7%. Great majority of infected birds (29 individuals) had&nbsp; moderate&nbsp; level&nbsp; of&nbsp; parasitemia.&nbsp; The&nbsp; most abundant&nbsp; haemosporidian&nbsp; genus&nbsp; was Haemoproteus&nbsp; with&nbsp; prevalence&nbsp; of&nbsp; 26.1%.&nbsp;&nbsp;&nbsp; All infected&nbsp; birds&nbsp; were&nbsp; adults,&nbsp; whereas&nbsp; none&nbsp; of tested&nbsp; juveniles&nbsp; were&nbsp; infected.&nbsp; Mixed&nbsp; infection was recorded only in one bird. We identified 31 genetic&nbsp; lineages&nbsp; of&nbsp; haemosporidian&nbsp; parasites. Two new cytochrome&nbsp; b&nbsp; lineages of&nbsp; <em>Plasmodium</em> and&nbsp;<em> Leucocytozoon</em>&nbsp; were identified and found in hosts Common Chaffinch (<em>Fringilla coelebs</em>) and Golden&nbsp; Oriole&nbsp; (<em>Oriolus&nbsp; oriolus)</em>.&nbsp; We&nbsp; identified three&nbsp; new&nbsp; host&nbsp; records&nbsp; for&nbsp; previously&nbsp; known lineages.&nbsp; The&nbsp; lineage&nbsp; GRW06&nbsp; (<em>Plasmodium elongatum</em>)&nbsp; occurred&nbsp; in&nbsp; Common&nbsp; Chaffinch, while&nbsp; the&nbsp; lineages&nbsp; PARUS20&nbsp; and&nbsp; PARUS25 (<em>Leucocytozoon sp</em>.) were recorded in Willow Tit (<em>Poecile&nbsp;</em> <em>montanus</em>)&nbsp; and&nbsp; Crested&nbsp; Tit (<em>Lophophanes cristatus)</em>,&nbsp; respectively. We found statistically&nbsp; significant&nbsp; differences&nbsp; in&nbsp; the prevalence&nbsp; of&nbsp; three&nbsp; haemosporidian&nbsp; genera among resident and partial migratory birds.&nbsp; The difference&nbsp; in&nbsp; mean&nbsp; parasitemia&nbsp; was&nbsp; significant only between resident and partial migrants.</p>

Embora não existam colônias reprodutivas de pinguins na costa do Brasil, o país é uma importante área de invernada para o pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus), uma espécie nativa do sul da América do Sul. Quando encontradas debilitadas em praias brasileiras, estas aves são comumente levadas a centros de reabilitação especializados para receber cuidados veterinários e, posteriormente, serem liberadas à natureza. Durante esta permanência em reabilitação, no entanto, enfermidades infecciosas como a malária aviária podem ser importantes limitantes à recuperação destas aves. A malária aviária é uma enfermidade causada por protozoários do gênero Plasmodium (Apicomplexa: Haemosporida), veiculados às aves por meio da picada de mosquitos. Enquanto estes parasitas são relativamente pouco patogênicos para a maioria das espécies aviárias, algumas aves como os pinguins são excepcionalmente mais suscetíveis a estes patógenos, podendo constituir uma significativa ameaça à sua conservação. O presente estudo investiga a ocorrência de Plasmodium spp. e outros hemoparasitas em pinguins-de-Magalhães em centros de reabilitação na costa brasileira, assim como outras espécies de pinguins em vida livre nas Ilhas South Shetland. Métodos diagnósticos morfológicos (esfregaços sanguíneos, histopatologia) e moleculares (reação em cadeia de polimerase aninhada, sequenciamento genético) foram utilizados para estudar pinguins reabilitados em diferentes instituições em seis estados do Brasil entre 1999 e 2013. Um surto de malária aviária particularmente relevante foi estudado em detalhes em um centro de reabilitação em Florianópolis, SC, tendo sido demonstrado o envolvimento de três diferentes linhagens de Plasmodium spp. em um único evento epizoótico, com elevada morbidade e mortalidade. Além disto, a ocorrência de Plasmodium spp. foi documentada em pinguins-de-Magalhães em centros de reabilitação ao longo de grande parte da costa brasileira, do extremo sul do Rio Grande do Sul à Bahia, com uma prevalência estimada entre 6.6% e 13.5%. Estas infecções apresentam marcante sazonalidade, incidindo exclusivamente nos meses mais quentes do ano (outubro a abril), e podem envolver uma grande variedade de linhagens de Plasmodium spp., algumas das quais nunca haviam sido reportadas em pinguins como P. cathemerium, P. nucleophilum e P. tejerai. Em contraste não foram encontrados hemoparasitas em pinguins amostrados nas Ilhas South Shetland, um achado consistente com estudos anteriores. À parte destas investigações epidemiológicas, foi realizada uma extensa revisão e compilação dos aspectos da literatura científica acerca desta enfermidade e outras hemoparasitoses em pinguins buscando estabelecer um panorama mais claro acerca da sua distribuição geográfica e implicações epidemiológicas e para a conservação. Com base nisto, torna-se possível desenvolver uma discussão crítica do atual estado da arte e apontar as atuais lacunas de conhecimento que possam direcionar estudos futuros. Em suma, a malária aviária é uma enfermidade relevante para as mais diversas espécies de pinguins em todo o mundo, e possui particular importância para a reabilitação e conservação destas aves na América do Sul. / Despite no penguin breeding colonies along the Brazilian coast, the country is an important wintering area for the Magellanic penguin (Spheniscus magellanicus), a species native to the south of South America. When Magellanic penguins are found alive ashore on Brazilian beaches, they are taken to rehabilitation centers to receive veterinary care and then are released back into the wild. However, while in rehabilitation, infectious diseases such as avian malaria may become important limiting factors for the recovery of these birds. Avian malaria is a disease caused by protozoa of the genus Plasmodium (Apicomplexa: Haemosporida), which are transmitted to birds through mosquitoes. While these parasites are relatively non-pathogenic for most avian species, some birds such as penguins are exceptionally susceptible, such that Plasmodium poses a significant conservation threat. This study investigates the occurrence of Plasmodium spp. and other blood parasites in Magellanic penguins at rehabilitation centers along the coast of Brazil, and in other species of penguins at the South Shetland Islands, South Atlantic Ocean. In Brazil, a combination of morphological (blood smears, histopathology) and molecular (nested polymerase chain reaction, gene sequencing) diagnostic methods were employed to investigate the presence of haemoparasites in penguins undergoing rehabilitation in six states between 1999 and 2013. A particularly significant avian malaria outbreak was studied in detail at a rehabilitation center in Florianópolis, SC, where the involvement of three distinct Plasmodium spp. in a single epizootic event was demonstrated, with resultant high morbidity and mortality. The occurrence of Plasmodium spp. was documented in Magellanic penguins at rehabilitation centers along most of the Brazilian coast, from southernmost Rio Grande do Sul to Bahia, with an estimated prevalence between 6.6% and 13.5% of captive penguins. These infections were markedly seasonal, with the incidences exclusively restricted to the warmer months of the year (October to April), and involving a broad variety of Plasmodium spp. lineages, some of which had not yet been reported in penguins, such as P. cathemerium, P. nucleophilum and P. tejerai. In contrast, no blood parasites were detected in the penguins sampled at the South Shetland Islands, a finding that is consistent with previous studies. Aside from these epidemiological investigations, an extensive revision and compilation of the scientific literature was conducted for this disease and other penguins haemosporidioses, aiming to establish an integrated understanding of their geographic distribution and epidemiological and conservation implications. On this basis, it is possible to critically examine the state of the art and identify knowledge gaps that can be addressed in future studies. Avian malaria is a significant disease and conservation threat for most penguin species throughout the world, and has particular importance for the rehabilitation and conservation of penguins in South America.

O rompimento eritrocítico característico do ciclo de vida do Plasmodium resulta na liberação de ATP, o qual é reconhecido pelo receptor P2X7. Este estudo da malária experimental causada pelo P. chabaudi em camundongos P2X7-/- mostraram que estes animais são mais suscetíveis à infecção. Tanto in vitro, como ex vivo, as populações celulares fagocíticas mostraram-se sensíveis ao ATP extracelular, de uma forma P2X7 dependente, e a infecção pelo P. chabaudi mostrou ser um fator que aumenta esta sensibilidade. Estudos fenotípicos do baço e do fígado dos animais P2X7-/- indicaram que, com exceção da população CD11b+ Ly6G+, estes animais apresentam número inferior de células fagocíticas quando comparados aos animais C57BL/6. Além disso, há uma leve deficiência na ativação dos fagócitos, na produção de IFN-g e no número de células produtoras de IFN-g, TNF-a e IL-10 no baço dos animais P2X7-/- em relação aos C57BL/6. A maior suscetibilidade dos camundongos P2X7-/- à infecção pelo P. chabaudi deve-se, portanto, a uma resposta imunológica deficiente nestes animais. / The erythrocyte rupture is a step of the life cycle of Plasmodium in which ATP is released and is recognized by the P2X7. This study of experimental malaria caused by P. chabaudi in P2X7-/- mice showed that these mice are more susceptible to the infection. Either in vitro or ex vivo, the phagocyte cell populations were sensible to extracellular ATP in a P2X7-dependent way and the P. chabaudi infection acted as a component that increases this sensitivity. Phenotypic analysis of the spleen and liver from P2X7-/- mice showed that, excepted for the CD11b+ Ly6G+ population, these mice have a lower number of phagocyte cells when compared to C57BL/6 mice. Furthermore, there was a slight deficiency in phagocyte activation, IFN-g production and number of cells that produce important cytokines as IFN-g, IL-10 and TNF-a in P2X7-/- mice in comparison with C57BL/6 mice. The increased susceptibility of P2X7-/- mice to the P. chabaudi infection is due to a deficient immune response.

A malária é uma doença tropical negligenciada causada por protozoários do gênero Plasmodium spp, afeta populações em mais de 100 países ao redor do globo, apresentando 219 milhões de novos casos por ano sendo, portanto, um grave problema de saúde pública. Apresenta um ciclo complexo e digenético, necessitando do mosquito vetor e do hospedeiro vertebrado para se completar - ciclo este que envolve etapas de transformação e adaptação, já que o patógeno passa por 28 formas diferentes ao longo do ciclo, além de enfrentar situações de stress térmico, no momento do contágio e durante os picos febris. Sendo assim, é necessário que o protozoário garanta sua sobrevivência e possibilite a infecção do hospedeiro. Isso é realizado com a assistência de chaperonas moleculares, proteínas estas que são superexpressas no estágio intra-eritrocitário. Uma dessas proteínas é a Hsp90, uma Heat shock protein com diferentes funções, entre elas, maturação de proteínas clientes, encaminhamento de proteínas para translocação por membranas e marcação de proteínas para degradação. Para cumprir adequadamente as diversas funções, as Hsp90 contam com o auxílio de co-chaperonas, como a Hsp70/Hsp90 Organizing Protein (Hop) que modulam sua função. A Hop é uma co-chaperona do sistema foldossoma formado pelas Hsp70 e Hsp90 citoplasmáticas e que atua como proteína adaptadora transferindo proteínas clientes da primeira para a segunda chaperona molecular. A interação da Hop com Hsp70 e Hsp90 ocorre via domínios TPR, que se ligam ao motivo EEVD presente na extremidade C-terminal de ambas as chaperonas citoplasmáticas. É encontrada em diversos organismos, incluindo Plasmodium falciparum, o agente etiológico da malária. Sendo assim, conhecer a Hop de P. falciparum (PfHop), estrutural e funcionalmente, é importante para o entendimento do funcionamento das Hsp90 e Hsp70, proteínas essenciais para a sobrevivência do patógeno e, portanto, possíveis alvos terapêuticos. A PfHop recombinante foi obtida com pureza superior a 95%. A caracterização biofísica da mesma foi feita através de diferentes técnicas. Como outras Hops, a PfHop é majoritariamente constituída por hélices alfa. Os parâmetros hidrodinâmicos determinados sugerem que a PfHop se comporta como um equilíbrio monômero-dímero quando em solução. Dados de espalhamento de raios X a baixo ângulo mostram a PfHop como uma proteína dimérica e alongada. Este trabalho de dissertação de mestrado permitiu alcançar a caracterização estrutural da PfHop e com este conhecimento, espera-se avançar na caracterização funcional da mesma sobre a Hsp70 e Hsp90. / Malaria is a neglected tropical disease caused by protozoa of the genus Plasmodium spp, affects populations in more than 100 countries around the globe, presenting 219 million new cases per year and is therefore a serious public health problem. It presents a complex and digenetic cycle, necessitating the vector mosquito and the vertebrate host to complete - this cycle involves transformation and adaptation stages, since the pathogen goes through 28 different forms along the cycle, besides facing situations of thermal stress , At the time of the contagion and during the feverish peaks. Thus, it is necessary that the protozoan guarantees its survival and makes possible a host infection. This is accomplished with the assistance of molecular chaperones, proteins that are overexpressed in the intra-erythrocyte stage. A life of proteins and Hsp90, a protection of thermal shock with different functions, among them, maturation of client proteins, routing of proteins for membrane translocation and labeling of proteins for degradation. To comply properly, for example, as Hsp90 rely on the help of co-chaperones, such as Hsp70 / Hsp90 Organizing Protein (Hop) that modulate their function. The Hop is a co-chaperone system folded by Hsp70 and Hsp90 cytoplasmic and which acts as an adapter protein transferring client proteins from the first to the second molecular chaperone. The interaction of Hop with Hsp70 and Hsp90 occurs via TPR domains, which bind to the EEVD motif present at the C-terminus of both as cytoplasmic chaperones. It is found in several organisms, including Plasmodium falciparum, the etiologic agent of malaria. Therefore, knowing a Hop of P. falciparum (PfHop), structurally and functionally, is important for the understanding of the functioning of Hsp90 and Hsp70, essential proteins for a pathogen survival and, therefore, in all the therapeutic aspects. A recombinant PfHop was obtained in greater than 95% purity. The biophysical characterization by the same brand made through different techniques. As there is Hops, a PfHop is mostly constituted by alpha helices. The indicated parameters are a PfHop behaves as a monomer-dimer balance when in solution. Higher low-angle X-ray scattering data on PfHop as a dimeric and elongated protein. This work of master\'s dissertation allowed to reach a structural characterization of the PfHop and with this knowledge, it is expected to advance in the functional characterization of the same in Hsp70 and Hsp90.