Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438127-Texto+Completo-0.pdf: 909961 bytes, checksum: 5f9f40febc8291b363b759367f823d98 (MD5) Previous issue date: 2012 / In this study the SNPs rs640098, rs491714, rs611307 into the FLI1 gene were genotyped in a sample of 201 subjects from southern Brazilian population, in 24 Ewing’s sarcoma patients (geographically matched with control group) and 54 of their family members, including parents and siblings. We performed association studies comparing genotypic frequencies of rs640098, rs491714, rs611307 into the FLI1 gene, and all possible genotype combinations between Ewing’s Sarcoma patients and control group. Of the three SNPs investigated individually, only one of them showed a significant result when compared to the control group; our non-combined analysis revealed a significantly higher presence of homozygote A-rs497714 among Ewing’s Sarcoma patients (p=0. 0065; Chi square Test). In all other tested clusters, we always noticed a higher rate of homozygote A-rs497714 among Ewing’s Sarcoma patients independent of the other SNP-arrangements and/or haplotype combinations. In addition, we performed transmission disequilibrium tests comparing data from Ewing’s Sarcoma patients and from their families (parents and siblings), but no statistically significant result was found. In conclusion, the present study provides evidence statistically founded that the AA-rs497714 FLI1 genotype can associated with Ewing's sarcoma. And that this polymorphism can be clinically useful as a potential genetic marker to the prognostic of risk to develop this cancer or to provide insights into FLI1 chromosome breakage context of tumorigenesis. / Neste estudo, os SNPs rs640098, rs491714, rs611307 no gene FLI1 foram genotipados em uma amostra de 201 indivíduos da população do sul do Brasil, e em 24 pacientes portadores de Sarcoma Ewing (geograficamente comparado com grupo controle) e 54 de seus familiares, incluindo pais e irmãos. Realizamos estudos de associação, comparando as freqüências genotípicas do rs640098 e rs491714 e rs611307 no gene FLI1, e todas as combinações possíveis entre o genótipo de pacientes Sarcoma de Ewing e grupo controle. Dos três SNPs investigados individualmente, apenas um deles apresentou um resultado significativo quando comparado com o grupo controle; nossa análise não-combinada revelou uma presença significativamente maior de homozigoto A-rs497714 entre os pacientes de Sarcoma Ewing (p = 0,0065; Chi quadrado). Em todos os outros grupos testados, foi notada uma maior taxa de homozigoto A-rs497714 entre os pacientes com Sarcoma de Ewing, independentemente dos outros arranjos e / ou combinações de SNP e haplótipos. Além disso, foram realizados testes de desequilíbrio de transmissão, comparando dados de pacientes portadores de Sarcoma de Ewing e de suas famílias (pais e irmãos), mas nenhum resultado estatisticamente significativo foi encontrado. Em conclusão, o presente estudo fornece evidências estatisticamente fundada de que o genótipo AA-rs497714 FLI1 pode associado ao sarcoma de Ewing. E que este polimorfismo pode ser clinicamente útil como um potencial marcador genético para o prognóstico de risco para desenvolver este câncer ou para fornecer insights no contexto de quebras cromossômicas de tumorigênese no gene FLI1.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437673-Texto+Completo-0.pdf: 92662 bytes, checksum: 2b30c84319d430865447f76a9dfff88b (MD5) Previous issue date: 2011 / Forensic genetics has developed in recent years due to its recognized importance in helping to solve a wide variety of criminal cases. This recognition has led to an increase in demand and hence the need to achieve results on samples that previously were not worked (due to the high degree of degradation) or inconclusive reports generated. The development of new methods of analysis and search for new genetic markers for forensic use is constant, and the biallelic markers of have shown great capacity for individualization and identification of a sample. We studied the frequencies of 47 autosomal and 13 X-chromosome insertiondeletion polymorphism (InDel) markers in a sample of 90 individuals in the population of Rio Grande do Sul state, to evaluate its applicability in forensic cases. Haplotype (DH) and haploid genetic (h) diversity, and information index (I) for X-chromosome markers, and observed heterozygosity (Ho), power of discrimination (PD), power of exclusion (PE) matching probability (MP), typical paternity index (TPI) and polymorphism information content (PIC) for autosomal markers, were calculated. For the 47 autosomes indels studied, the combined power of discrimination and the combined power of exclusion were 99. 999999999999998956% and 99. 64%, respectively. We did not observe a significant substructure in the population studied, and the global estimated admixture components for the sample were 72. 35%, 18. 10%, and 9. 54% for European, Native American, and African DNA. / A genética forense tem se desenvolvido muito nos últimos anos devido à sua reconhecida importância no auxílio para resolver os mais diversos casos criminais. Este reconhecimento levou a um aumento na demanda e, consequentemente, na necessidade de se obter resultados em amostras que anteriormente nem eram trabalhadas (devido ao alto grau de degradação) ou geravam laudos inconclusivos. O desenvolvimento de novas metodologias de análise e busca de novos marcadores genéticos para o uso forense é constante, e os marcadores bialélicos têm mostrado grande capacidade de individualização e identificação de uma amostra. Neste estudo foram analisadas as frequências de 47 marcadores autossômicos e 13 marcadores do cromossomo X de polimorfismos bialélicos do tipo inserção-deleção (Indel) em uma amostra de 90 indivíduos da população do Rio Grande do Sul, para avaliar sua aplicabilidade em casos forenses. Diversidade genética haplotípica (DH) e haplóide (h), e informações de índice (I) para marcadores do cromossomo X, e heterozigosidade observada (Ho), poder de discriminação (PD), poder de exclusão (PE), probabilidade de correspondência (MP), índice de paternidade (TPI) e conteúdo de informação de polimórfica (PIC) para os marcadores autossômicos foram calculados. Para os 47 indels autossômicos estudados, o poder combinado de discriminação e o poder combinado de exclusão foram de 99,999999999999998956% e 99,64%, respectivamente. Não foi observada uma subestruturação significativa na população estudada, e os componentes da mistura global estimados para a amostra foram 72,35%, 18,10% e 9,54% de DNA de europeus, nativo-americanos e africanos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000401555-Texto+Completo-0.pdf: 2665347 bytes, checksum: 54a1f015b8e051e3e55fe6965ea02f9d (MD5) Previous issue date: 2008 / Introduction: The formation of the fibrin clot in the site of the endothelial lesion constitutes a crucial process for the maintenance of the vascular integrity. However, the mechanisms of the hemostatic system should be regulated, simultaneously, to oppose the excessive loss of blood and to avoid formation of intravascular thrombus, due to excessive formation of fibrin. Therefore, a balance between the coagulation and the fibrinolysis is essential. The tissue plasminogen activator (t-PA) is the main activator of the fibrinolytic system derived from endothelial cells, playing important role in the fibrinolysis. In the last years, the I/D polymorphism (insertion or deletion of an Alu sequence) of the t-PA gene has been studied as a potential risk factor for developing cardiovascular diseases, as myocardial infarction and venous thrombosis, in different populations of the world. Objective: This study investigate the relationship between the insertion/deletion polymorphism of the t-PA gene and venous thrombosis (VT), comparing a group of individuals with episode of pulmonary thromboembolism (PTE) or deep venous thrombosis (DVT) and a group of individuals with no history of VT. Material and methods: Case group was composed of 89 individuals with episode of venous thromboembolism and control group represented 81 individuals with no history of thromboembolic disease. The t-PA genotype was determined by polymerase chain reaction (PCR). All samples identified as DD genotype were retested for confirmation by means of a PCR using an internal primer that recognizes and hybridizes specifically with the inserted sequence, assuring an accurate genotype identification. Results: The frequency of D allele among patients was 41. 6% and controls, 46. 9%; for I allele, frequency was 58. 4% and 53. 1%, respectively. The DD genotype was found in 14. 6% of patients and 17. 3% of controls, and the ID genotype, in 53. 9% of the cases and 59. 3% of the controls. The II homozygote represented 31. 5% individuals in the case group and 23. 4% individuals in the control group. Discussions and Conclusions: No statistically significant difference was observed among genotypes of the t-PA gene in individuals of studied groups. However, the II genotype was more frequent in the case group than in the control group, suggesting a tendency of association between the II genotype of t-PA gene and the development of thromboembolic diseases. As no data was found in the literature on the frequency of the I/D polymorphism of t-PA gene in the Brazilian population, we consider this report as the first study involving the frequency of this polymorphism in groups of individuals with and without thrombosis historical event in Brazil, contributing to the knowledge of the relationship between this polymorphism and VTE in our country. / Introdução: A formação do coágulo de fibrina no sítio de lesão endotelial constitui um processo crucial para a manutenção da integridade vascular. Porém, os mecanismos do sistema hemostático devem ser regulados para, simultaneamente, contrapor-se à perda excessiva de sangue e evitar a formação de trombos intravasculares, decorrentes de formação excessiva de fibrina. Por isso, um equilíbrio entre a coagulação e a fibrinólise é essencial. O ativador do plasminogênio tecidual (t-PA) é o principal ativador do sistema fibrinolítico derivado de células endoteliais, desempenhando importante papel na fibrinólise. Nos últimos anos, tem sido estudada a relação entre o polimorfismo de inserção e deleção (I/D) de uma sequência Alu do gene t-PA e o risco de desenvolver doenças relacionadas ao sistema cardiovascular, como infarto do miocárdio e trombose venosa, em diferentes populações do mundo. Objetivo: Esse estudo tem por objetivo pesquisar a relação entre o polimorfismo de inserção/deleção do gene t-PA e trombose venosa (TV), comparando um grupo de indivíduos com episódio de tromboembolismo pulmonar (TEP) ou trombose venosa profunda (TVP) e um grupo de indivíduos sem história de TV. Materiais e Métodos: Foram avaliados 89 indivíduos com episódio de tromboembolismo venoso (grupo caso) e 81 indivíduos sem histórico de doença tromboembólica (grupo controle). O genótipo do t-PA foi determinado por reação em cadeia da polimerase (PCR). Todas as amostras identificadas como genótipo DD eram confirmadas mediante a realização de uma nova PCR utilizando um primer interno que reconhece e hibridiza especificamente na seqüência de inserção, possibilitando uma identificação precisa dos genótipos. Resultados: A freqüência do alelo D foi de 41,6% entre os pacientes e 46,9% entre os controles; a do alelo I foi 58,4% e 53,1%, respectivamente. O genótipo DD foi encontrado em 14,6% dos pacientes e 17,3% dos controles, e o genótipo ID, em 53,9% dos casos e 59,3% dos controles. Os homozigotos II representaram 31,5% dos indivíduos do grupo caso e 23,4% dos indivíduos do grupo controle. Discussão e Conclusões: Não foi observada diferença estatisticamente significante entre os genótipos do gene t-PA nos grupos de indivíduos estudados. No entanto, o genótipo II foi mais freqüente no grupo caso do que no grupo controle, sugerindo uma tendência de associação entre o genótipo II do gene t-PA e o desenvolvimento de doenças tromboembólicas. Não foram encontrados dados na literatura sobre a freqüência do polimorfismo I/D do gene t-PA na população brasileira. Este relato representa, portanto, o primeiro relato sobre a freqüência deste polimorfismo no Brasil, em grupos de indivíduos com e sem histórico de trombose, contribuindo para o conhecimento da relação entre este polimorfismo e tromboembolismo venoso (TEV).

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000409998-Texto+Completo-0.pdf: 638895 bytes, checksum: 9abf7327c0b1c2233d7c0064062f2d9a (MD5) Previous issue date: 2009 / Tumor necrosis factor (TNF)-a is a multifunctional proinflammatory cytokine secreted predominantly by monocytes/macrophages that has effects on lipid metabolism, coagulation, insulin resistance, and endothelial function. A SNP at position -308 (relative to the transcription start site), believed to alter TNF-a gene transcription, has been associated with enhanced TNF-a production and negative outcome in some severe infections. Our aim is to investigate the frequency of the - 308A allele in critical ill patients to determine whether the allele is associated with the occurrence of sepsis, septic shock and organ dysfunction. Clinical and demographic data (i. e. age, gender, length of ICU and hospital stay, mortality, SOFA and APACHE II scores) and genotyping results for the TNF-a -308G>A SNP were utilized in the analyses. Four hundred and thirty seven critically ill patients admitted to the Intensive Care Unit of the Sao Lucas Hospital – PUCRS (Porto Alegre, Brazil) were investigated. The general genotypic frequencies in our sample were -308GG=0. 71 (n=312); -308AG=0. 28 (n=120); -308AA=0. 01 (n=5) and the allelic frequencies were - 308G=0. 85; -308A=0. 15. The allelic and genotypic frequencies did not differ from the values expected by the Hardy-Weinberg model (P=0. 211). We analyzed the -308G>A TNF-a SNP effect in whole patients group (n=437); in patients with sepsis (n=297; 68%); and in septic shock patients (n=212; 48%). No associations were found between -308GG patients (n=312, 71%) and -308GA+AA patients (n=125; 29%) and sepsis, septic shock, and mortality rates. We also investigate if -308G>A TNF-a genotypes could be affecting organ dysfunction or failure, but no statistical associations were found. Our results suggest that -308G>A TNF-a SNP does not play a major role in the outcome to sepsis, septic shock, higher organ dysfunction or mortality in critically ill patients. / O Fator de Necrose Tumoral (TNF)-a é uma citocina proinflamatória multifuncional, com efeitos no metabolismo de lipídeos, na coagulação sanguínea e na função endotelial. Diferentes estudos sugerem que pacientes com o genótipo - 308AA, do SNP -308G>A do gene TNF-a, possuiriam níveis mais elevados de TNFa no plasma, levando o sistema imune a uma resposta inapropriada e aberrante frente a uma infecção, o que poderia aumentar o risco de sepse, choque séptico ou disfunção orgânica. O objetivo deste estudo foi comparar as condições clínicas (disfunções orgânicas) e a freqüência de sepse, choque séptico e mortalidade em pacientes críticos internados em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI), quanto à pacientes com e sem o alelo -308A do TNF-a. Foram utilizados dados clínicos e demográficos (idade, gênero, tempo de internação, mortalidade durante a permanência total no hospital, escores APACHE II e SOFA), e genotipagem dos pacientes para o SNP -308G>A do TNF-a por PCR-RFLP. Um total de 437 pacientes críticos internados na UTI do Hospital São Lucas da PUCRS (Porto Alegre, Brasil) foram avaliados. As freqüências genotípicas -308GG= 0. 71 (n=312); -308GA=0. 28 (n=120); -308AA=0. 01 (n=5); e alélicas -308G=0. 85 e -308A=0. 15 não diferiram dos valores esperados pelo modelo de Equilíbrio de Hardy-Weinberg (P=0. 211). Do total, 297 (68%) pacientes desenvolveram sepse e 212 (48%) choque séptico. Nenhuma diferença significativa foi encontrada entre pacientes -308GG (n=312; 71%) e - 308GA+AA (n=125; 29%) quanto à suscetibilidade a sepse, choque séptico, falência orgânica ou mortalidade. Os resultados mostram que SNP -308G>A do TNF-a não tem efeito sobre as condições clínicas e na susceptibilidade à sepse e choque séptico ou na mortalidade dos pacientes em estado crítico de saúde.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000381452-0.pdf: 2032428 bytes, checksum: 03c32727b22736414d713a7c6c63acdf (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Cleft lip and palate (CLP) are the most commom craniofacial anomalies among humans. This etiology is complex, involving genetic and environmental factors. Non-syndromic cleft lip and palate (NS-CLP) seem to have a distinct etiology of the CLP associated to some syndrome. Since the late 1980’s, researches have been carried with the objective to identify genes that act in the etiology of the NSCLP, amongst them the TGFA (transforming growth factor alpha). The objective of this study was to test the TGFA/Taq I polymorphism in patients with NS-CLP, and to compare the results with those gotten in a control sample constituted by individuals without CLP, aiming to identify the inquiring the existence of mutations in this locus. A comparison was carried between enters gotten by the techniques of DNA extraction of buccal swab and peripherical blood. Extration of DNA by buccal swab showed itself efficient for the determination genotypical TGFA locus and propicia for the collection in population with CLP. Mutations in TGFA gene are not associated to NS-CLP in the population of Rio Grande do Sul studied, therefore it is not possible to conclude which would be the role of the TGFA in the NS-CLP expression. / As fissuras labiopalatinas (FLP) são as malformações craniofaciais mais comuns em seres humanos. Sua etiologia é complexa, envolvendo tanto fatores genéticos quanto ambientais. As fissuras labiopalatinas em pacientes não-sindrômicos (FLP-NS) parecem ter uma etiologia distinta das FLP associadas a alguma síndrome. Desde o final da década de 1980, são realizadas pesquisas com o objetivo de testar genes que atuem na etiologia das FLP-NS, entre eles o TGFA (fator transformador de crescimento epitelial alfa). O objetivo deste trabalho foi testar o polimorfismo TGFA/Taq I em pacientes portadores de FLP-NS, comparando os resultados obtidos com uma amostra controle de indivíduos sem fissuras para averiguar a ausência ou a presença da mutação gênica nesse lócus. Além disso, foi feita a comparação entre as técnicas de extração de DNA obtidas através de sangue periférico e swab bucal. A extração de DNA a partir de swab bucal se mostrou eficaz na determinação genotípica do lócus TGFA e propícia para a coleta em populações com FLP. Mutações no gene TGFA não estão associadas à FLP-NS na amostra da população do Rio Grande do Sul estudada não sendo, então, possível concluir qual seria o papel do TGFA na expressão da FLP-NS.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412181-Texto+Completo-0.pdf: 1636756 bytes, checksum: 3138ac69bb4f361c6d1b29069af27d7a (MD5) Previous issue date: 2009 / Toll-like receptor 2 (TLR2) is a recognition receptor for the widest repertoire of pathogen-associated molecular patterns. Two polymorphisms of TLR2 could be linked to reduced NF-kB activation and to increased risk of infection (supposed-2029C>T and 2258G>A). We investigated the supposed-2029C>T and 2258G>A TLR2 polymorphisms in 422 critically ill patients with European origin from southern Brazil (295 with sepsis and 127 without sepsis), and we reviewed of 33 studies with these polymorphisms conducting a quality assessment with a score system. Among our patients we found only one heterozygote (1/422) for the supposed-2029C>T and none of 2258G>A (0/422) SNP. We have failed to find a clinical application of supposed-2029T and 2258A allele analysis in our southern Brazilian population. Our review detected that current TLR2 SNP assays had very controversial and contradictory results derivate from reports with a variety of quality criteria of investigation. We suggest that, if analyzed alone, the supposed-2029C>T and 2258G>A TLR2 SNP are not good candidates for genetic markers in studies that search for direct or indirect clinical applications between genotype and phenotype. Future efforts to improve the knowledge and to provide other simultaneous genetic markers might reveal a more effective TLR2 effect on the susceptibility to infections diseases. / O Toll-like receptor 2 (TLR2) é um receptor de reconhecimento de microorganismos que identifica um amplo repertório de padrões moleculares associados a patógenos. Entre os polimorfismos já descobertos no gene que codifica para o TLR2, dois SNPs (single nucleotide polimorphism) (supposed-2029C>T e 2258G>A) podem estar relacionados com a redução da ativação do NF-kB e, consequentemente, com o aumento do risco às doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A do TLR2 em 422 pacientes criticamente doentes oriundos de uma população do sul do Brasil (295 com sepse e 127 sem sepse), e realizar uma revisão sistematizada de 33 trabalhos publicados sobre esses SNPs conduzindo um estudo de avaliação de qualidade com um sistema de escores. Entre os pacientes admitidos no estudo foi encontrado apenas um heterozigoto (0,2%; 1/422) para o SNP supposed-2029C>T e nenhum para o SNP 2258G>A (0%; 0/422). Assim, não foi possível identificar qualquer aplicabilidade clínica entre esses SNPs do TLR2 nos pacientes críticos do sul do Brasil. A revisão sistematizada detectou que os atuais trabalhos com tais SNPs do TLR2 apresentam conclusões controversas e contraditórias resultantes de estudos com uma ampla variedade de critérios de qualidade. Os resultados sugerem que, quando analisados individualmente, os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A não são bons candidatos para os trabalhos que buscam por aplicações clínicas diretas entre genótipo e fenótipo. Esforços futuros para aumentar o conhecimento e para realizar análises simultâneas com outros polimorfismos poderão revelar efeitos mais efetivos do TLR2 na susceptibilidade às doenças infeciosas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431857-Texto+Completo-0.pdf: 2482469 bytes, checksum: b7a25df1538a26027ad365149defa70e (MD5) Previous issue date: 2011 / Critical condition is caused by interactions between genetic and environmental factors. Although each risk factor itself is partially under genetic control, studies propose the existence of additional effects caused by susceptibility genes; these studies begin suggesting isolated genetic variants that was increasing the risk of the critically ill patient. This proposition is now becoming evident. In parallel, there is growing evidence that inflammation plays also a central role in patients with critical health conditions and in their outcome. During the critical condition, the conventional clinic and biochemical risk factors are very important, the inflammatory status can modulates the severity of the pathological process. Inflammation may be involved in all stages of critical ill development and compliances, and the inflammatory process a central agent of morbidity and mortality of critically ill patient. So, controlling inflammatory status may enhance individual chance of to acquire a better/worse outcome. The CD14 (cluster of differentiation 14) receptor is a pattern of recognition molecules involved in the innate immune response against exogenous and endogenous stress factors. The most important CD14 signaling co receptors are the toll-like receptor 2 and 4 (TLR2, TLR4), which are transmembrane receptors that mediate inflammatory responses by endotoxins, and activate the nuclear factor kappaB (NF-kappaB) pathway. Tumor necrosis factor (TNF-α) is another relevant cytokine in the course of the inflammation process. But, besides its protector role in innate immunity, these pro-inflammatory cytokines may exert also pathogenic effects. In 2006, it was evaluated the influence of the -260C>T CD14 single nucleotide polymorphism (SNP) in a sample of 85 critically ill patients. With random genotype distribution for clinical characteristics at Intensive Care Unit (ICU) patient admission, age, and length of hospital stay, we found that -260TT CD14 patients presented higher survivor rates when compared to the -260C CD14 carriers. In 2009 it was tested in a sample of 514 critically ill subjects whether the -260TT CD14 genotype would occur more commonly among ICU survivors than among decease patients. This published study showed that previous 2006 results were robustly confirmed. The -260C>T CD14 SNP was a protective factor towards survival in critically ill patients; there was higher frequency of survivors in -260TT CD14 homozygote. These results emerge with the hypothesis suggested that the higher -260TT CD14 genotype frequency in ICU survivor patients was possibly explained by an effect on innate immunity signaling. In that moment (2009), the current literature was suggesting that the analysis of a lot of polymorphic genetic markers could be more informative than the analysis of a single polymorphism. Aware of this information it was analyzed differential SNPs in other genes that encode CD14 synergic proteins to examine if they could also be informative in patients with critical health conditions. We verified whether the shared inheritance of TLR2, TLR4, and TNF-α variants might act in synergy with -260C>T CD14 SNP on the outcome from critical condition. The results for 2029C>T and 2258G>A of TLR2, 896A>G and 1196C>T of TLR4 and the - 308G>A of TNF-α SNPs alone did show a significantly remarkable role in the outcome not from critical illness. However, when performed a combined analysis with the CD14 inheritance, it was detected a significant higher survivor rate in -260TT CD14/-308GG TNF-α doublehomozygote group. In the adjusted analysis with double-genotype variable and the main clinical predictors to mortality, showing that the -260TT CD14/-308GG TNF-α doublegenotype was a significant protective factor towards survival. Connected to the beneficial effect of -260TT CD14, the -308GG TNF-α genotype was protector against the reported overexpression of TNF-α caused by -308A rare allele. In conclusion, this results supported the hypothesis that the interaction between -260TT CD14 and -308GG TNF-α functional SNPs may be influencing the outcome of critically ill patients. / A condição crítica de saúde é causada pela interação de fatores genéticos e ambientais. Embora cada fator de risco em si já esteja parcialmente sob controle genético, estudos propõem a existência de efeitos adicionais causados por genes de susceptibilidade; estes estudos iniciaram sugerindo variantes genéticas isoladas que poderiam aumentar o risco do paciente criticamente enfermo. Paralelamente, há evidências crescentes de que a inflamação desempenha também um papel central nos pacientes com condições críticas de saúde. Durante a situação crítica, os fatores de risco clínicos e bioquímicos convencionais são muito importantes, mas o estado inflamatório do paciente pode modular a gravidade do processo patológico. A inflamação pode estar envolvida em todas as fases do desenvolvimento e das conseqüências da doença crítica, sendo o processo inflamatório um agente central da morbi-mortandade do paciente criticamente doente. Assim, controlando o estado inflamatório pode-se aumentar a chance do indivíduo ter um melhor / pior desfecho.O CD14 (cluster of diferenciation 14) é um receptor padrão de reconhecimento de moléculas envolvidas na resposta imune inata contra fatores exógenos e endógenos de estresse. Os co-receptoes do CD14 mais importantes são TLR2, TLR4 (Toll-like Receptors), que são receptores transmembrana que mediam a resposta inflamatória por endotoxinas, e ativam a via do fator nuclear kappa B (NF-kappa B). O fator de necrose tumoral (TNF-α) é outra citocina relevante no âmbito do processo de inflamação. Mas, além de seu papel protetor na imunidade inata, essas citocinas pró-inflamatórias podem exercer também efeitos patogênicos. Em 2006, foi avaliada a influência do polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) -260C>T CD14 em uma amostra de 85 pacientes criticamente enfermos. Com uma distribuição aleatória de genótipos para as características clínicas, como tempo de internação do paciente na Unidade de Terapia Intensiva (UTI), idade e tempo de permanência hospitalar, foi observado que os pacientes -260TT CD14 apresentaram maiores índices de sobrevivência quando comparados com os portadores do alelo -260C CD14. Em 2009 foi testado uma amostra de 514 pacientes em estado crítico se o genótipo -260TT CD14 ocorreria mais frequentemente entre os sobreviventes do que entre os pacientes falecidos. Este estudo publicado mostrou que os resultados de 2006 se confirmaram com uma maior robustez. O SNP -260C>T CD14 foi um fator protetor para a sobrevivência em pacientes gravemente doentes: houve uma frequência superior de sobreviventes homozigotos -260TT CD14. Estes resultados surgiram com a hipótese de a maior frequência do genótipo -260TT CD14 em pacientes de UTI sobreviventes seria, possivelmente, explicada por um efeito de sinalização na imunidade inata. Naquele momento (2009), a literatura atual estava sugerindo que a análise de uma série de marcadores genéticos polimórficos poderia ser mais informativa do que a análise de um único polimorfismo. Ciente destas informações buscou-se a analisar SNPs em outros genes que codificam proteínas com ações sinérgicas com o CD14 para verificar se eles também poderiam ser informativos no desfecho dos pacientes com condições críticas de saúde. Verificou-se a herança de variantes nos genes TLR2, TLR4, e TNF-α, os quais poderiam atuar em sinergia com o SNP -260C>T CD14 durante a condição crítica. Foram obtidos resultados que mostraram que SNPs 2029C>T e 2258G>A do TLR2, 896A>G e 1196C>T do TLR4 e o - 308G>A do TNF-α, isoladamente, não desempenham um papel significantemente notável no desfecho da doença crítica. No entanto, ao se realizar uma análise combinada com a herança do -260C>T CD14, foi detectado uma taxa de sobrevivência significativamente maior no grupo de pacientes duplo homozigoto -260TT CD14/-308GG TNF-α. Na análise ajustada com o duplo genótipo as principais variáveis clínicas preditoras de mortalidade, foram observadas que o duplo genótipo -260TT CD14/-308GG TNF-α foi um fator importante de proteção para a sobrevivência. Conectado ao efeito benéfico do -260TT CD14, o genótipo -308GG TNF-α foi protetor contra a relatada superexpressão de TNF-α causada por alelo -308A TNF-α. Em conclusão, os resultados apóiam a hipótese de que a interação entre os SNPs funcionais - 260TT CD14 e -308GG TNF-α pode estar influenciando o desfecho de pacientes criticamente enfermos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000408010-Texto+Completo-0.pdf: 324019 bytes, checksum: a134e04c894f3ac9eaae510c195117e6 (MD5) Previous issue date: 2008 / In order to analyze the effect of the two different versions of the manganese superoxide dismutase gene (SOD2) on sepsis, we determined the 47C>T single nucleotide polymorphism (SNP) frequencies in critically ill patients with (n=356) and without sepsis (n=173), and also investigated the genotype frequencies in adverse outcomes in the septic patient's subgroup. We compared the 47C allele carriers (47CC+47CT genotypes) with 47TT homozygotes and we demonstrated a significant association between 47C allele carriers and septic shock in septic patients (p=0. 025). With an adjusted binary logistic regression, incorporating 47C>T SNP and the main clinical predictors, we showed that only SOFA score [p<0. 001, OR=9. 107 (95%CI=5. 319-15. 592)] and 47C allele [p=0. 011, OR=2. 125 (95%CI=1. 190-3. 794)] were significantly associated with septic shock outcome. Our results and our hypothesis suggest that the higher 47C allele carrier frequency in septic patients with negative outcome is possibly explained by an effect on cellular stress. / Para avaliar as duas versões do gene SOD2 que codifica para a proteína superóxido dismutase dependente de manganês na sepse, nós determinamos a freqüência do polimorfismo de nucleotídeo simples (SNP) 47C>T em pacientes criticamente doentes com sepse (n=356) e sem sepse (n=173), e também investigamos as freqüências genotípicas nos desfechos adversos à sepse (choque séptico e mortalidade) no grupo de pacientes sépticos. Nós comparamos os portadores do alelo 47C (genótipos 47CC+47CT) com homozigotos 47TT e demonstramos uma associação estatisticamente significativa entre os portadores do alelo 47C e a ocorrência de choque séptico no subgrupo de pacientes sépticos (p=0. 025). Na análise ajustada de regressão logística binária, incorporando o SNP 47C>T e os principais preditores clínicos, nós mostramos que somente o escore SOFA [p<0. 001, OR=9. 107 (95%CI=5. 319-15. 592)] e o alelo 47C [p=0. 011, OR=2. 125 (95%CI=1. 190-3. 794)] foram significativamente associados com o desfecho de choque séptico. Nossos resultados e nossa hipótese sugerem que a mais alta freqüência de portadores do alelo 47C em pacientes sépticos com desfecho desfavorável é provavelmente explicada por um efeito no estresse celular.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000385077-Texto+Completo-0.pdf: 420922 bytes, checksum: 0e0a5b00bb03f3c41dbc7f262cf35a36 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introduction: Venous thromboembolism (VTE) is a multigenic and multifactor disease and main clinical presentations include deep venous thrombosis and pulmonary thromboembolism. More than 60% of VTE cases are related to genetic predisposition and hyperhomocysteinemia is an established risk factor for VTE. Methilenetetrahydrofolate redutase (MTHFR) is a key enzyme in the homocysteine (Hcy) and folate metabolism. It catalyses the reduction of 5,10-metilenethetrahydrofolate to 5-metilthetrahydrofolate, a derivative form of folate which acts as a co-factor for remethylation of homocysteine to methyonine. A C ! T base transition at the nucleotide 677 of the MTHFR gene results in an alanine to valine substitution, generating a thermolabile variant of MTHFR. This thermolabile variant presents a decreased enzymatic activity, resulting in elevated plasma homocysteine levels. Materials and Methods: We studied 70 patients with thromboembolic disease (case group) and 74 individuals with no history of thromboembolism (control group). C677T MTHFR polymorphism was analyzed by polymerase chain reaction, followed by HinfI restriction enzyme digestion (PCR-RFLP).Results: T allele frequency was 46. 0% in patients and 38. 0% in controls (P=0. 92; OR 0. 72; 95%CI=0. 45-1. 15). MTHFR genotypes distribution for case and control groups, respectively, was: 40. 0% and 41. 9% normal homozygous (CC) (P=0. 87; OR 0. 92; 95% CI=0. 47-1. 79); 28. 3% and 40. 5% heterozygous (CT) (P=0. 16; OR 0. 58; 95%CI=0. 29-1. 17); 31. 4% and 17. 6% mutant homozygous (TT) (P=0. 08; OR 2. 15; 95% CI=0. 98-4. 70). Discussion and Conclusions: frequencies of C and T alleles were similar in both groups; presence of T allele did not represent a higher risk for TVE. The higher prevalence of the TT genotype in case group, although not statistically significant, suggests an association between the MTHFR C677T polymorphism and a higher risk for thromboembolic disease. The results presented herein represent the first report on the frequency of this polymorphism in the study population, since no data was available in the literature. These results are also a contribution for the understanding of the relationship between the MTHFR C677T polymorphism and VTE. / Introdução: O tromboembolismo venoso (TEV) tem como manifestações clínicas a trombose venosa profunda e o tromboembolismo pulmonar. Trata-se de uma doença multigênica e multifatorial. Mais de 60% dos casos estão relacionados com predisposição genética e a hiperhomocisteinemia é considerada um fator de risco estabelecido. A enzima metilenotetraidrofolato redutase (MTHFR) está envolvida no metabolismo da homocisteína (Hcy) e do ácido fólico. Esta enzima catalisa a redução do 5,10-metilenotetraidrofolato em 5-metiltetraidrofolato, derivado do ácido fólico que atua como co-fator para remetilação da homocisteína em metionina. A transição de uma citosina para uma timina no nucleotídeo 677 do gene da MTHFR resulta na substituição de uma alanina por uma valina, gerando uma variante termolábil da MTHFR. Esta variante termolábil apresenta uma atividade enzimática diminuída, o que resulta em um aumento nos níveis plasmáticos de Hcy. Materiais e Métodos: Foram avaliados 70 indivíduos com episódio de tromboembolismo venoso (grupo caso) e 74 indivíduos sem histórico de doença tromboembólica (grupo controle). O genótipo da MTHFR foi determinado por reação em cadeia da polimerase, seguida de digestão enzimática com a enzima HinfI (PCR-RFLP).Resultados: A freqüência do alelo T foi 46,0% entre os pacientes e 38,0% entre os controles (P=0,92; OR 0,72; 95%CI=0,45-1,15). O genótipo CC (homozigoto normal) foi encontrado em 40,0% dos pacientes e 41,9% dos controles (P=0,87; OR 0,92; 95%CI=0,47-1,79). O genótipo CT estava presente em 28,3% dos casos e 40,5% dos controles (P=0,16; OR 0,58; 95%CI=0,29-1,17). Os homozigotos para a variante termolábil da enzima (genótipo TT) representaram 31,4% dos indivíduos do grupo caso e 17,6% dos indivíduos do grupo controle (P=0,08; OR 2,15; 95%CI=0,98-4,70). Discussão e Conclusões: A freqüência dos alelos C e T foi semelhante entre os grupos estudados e a presença do alelo T não representou aumento no risco para TEV. Entre os genótipos, não houve diferença estatisticamente significativa entre os indivíduos com e sem histórico de trombose. No entanto, o genótipo TT foi mais freqüente no grupo caso que no grupo controle, indicando uma tendência de associação entre o genótipo TT da MTHFR e o desenvolvimento de doenças tromboembólicas. Estes resultados representam o primeiro relato indicativo da freqüência deste polimorfismo na população da região estudada, uma vez que não foram encontrados dados na literatura sobre estas freqüências, contribuindo para a pesquisa da relação entre este polimorfismo e o TEV.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-29T13:17:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ivy_bastos_ramis.pdf: 1360974 bytes, checksum: 5f055cbf4d5ce0a95672ccdf092907c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:50:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ivy_bastos_ramis.pdf: 1360974 bytes, checksum: 5f055cbf4d5ce0a95672ccdf092907c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:50:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ivy_bastos_ramis.pdf: 1360974 bytes, checksum: 5f055cbf4d5ce0a95672ccdf092907c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T19:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ivy_bastos_ramis.pdf: 1360974 bytes, checksum: 5f055cbf4d5ce0a95672ccdf092907c8 (MD5) Previous issue date: 2014-11-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Helicobacter pylori é uma bactéria que infecta a mucosa gástrica de aproximadamente 50% da população humana mundial. A infecção por H. pylori tem sido associada a uma variedade de doenças, tais como gastrite, doença ulcerosa péptica e carcinoma gástrico. Acredita-se que a combinação de variáveis ambientais/comportamentais, fatores genéticos do hospedeiro e genes de patogenicidade bacteriana possa interferir na gravidade da lesão gástrica e no desfecho clínico de infecção por H. pylori. Desta forma, o presente trabalho objetivou determinar a frequência e potenciais fatores de risco da infecção por H. pylori, assim como identificar os polimorfismos nos genes da interleucina (IL)-1, IL-6, IL-8 e IL-10 e suas associações com infecção por H. pylori, com cytotoxin associated gene A (gene cagA) de H. pylori e com patologias gástricas. Para isso, foi conduzido um estudo transversal, incluindo amostras de biópsia gástrica de 227 pacientes, submetidos à endoscopia digestiva alta. Um questionário foi aplicado aos pacientes antes da endoscopia. O diagnóstico de H. pylori baseou-se na histologia e na polymerase chain reaction (PCR). O gene cagA foi identificado por PCR. Os polimorfismos nos genes da IL-1B (nas posições -511, -31 e +3954), IL-6 (na posição -174), IL-8 (na posição -251) e IL-10 (nas posições -819 e -592) foram detectados por PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP). A análise do polimorfismo variable number of tandem repeat (VNTR) no gene IL-1RN foi realizada por PCR, seguida por eletroforese em gel de agarose. Dos 227 pacientes incluídos neste estudo, 151 foram positivos para H. pylori e 76 negativos. Com base nos questionários aplicados aos pacientes, verificou-se existir associação significativa entre a presença de H. pylori e a aglomeração familiar, a idade, e os diagnósticos endoscópicos e histológicos. Quanto aos fatores genéticos do hospedeiro observou-se que os polimorfismos nas regiões promotoras dos genes IL-1B e IL-8 estavam significativamente relacionados à infecção por H. pylori. As cepas de pacientes H. pylori positivos portadores do gene cagA foram significativamente associadas com o polimorfismo da IL-1B na posição -511. Adicionalmente, na presença da infecção pelo H. pylori, demonstrou-se que os polimorfismos na região promotora do gene IL-1B estiveram correlacionados com um risco aumentado de gastrite, enquanto aqueles nos genes da IL-8 e da IL-10 foram associados a um risco elevado da doença ulcerosa péptica. Conclui-se que, provavelmente, os polimorfismos genéticos do hospedeiro exerçam influência sobre o curso e a gravidade das doenças gástricas. Espera-se que os resultados deste trabalho possam contribuir, em breve, tanto para a prevenção dessas desordens quanto para uma terapia mais adequada e eficiente, isto porque o conhecimento das bases moleculares do hospedeiro e do microrganismo viabiliza o desenvolvimento de testes moleculares, os quais poderão ser aplicados em prol de um correto prognóstico das patologias gástricas. / Helicobacter pylori is a bacterium that infects the gastric mucosa of approximately 50% of the world´s human population. H. pylori infection has been associated with a variety of diseases such as gastritis, peptic ulcer disease and gastric carcinoma. It is believed that the combination of environmental/behavioral variables, host genetic factors and bacterial pathogenicity genes can interfere in the severity of gastric damage and in the clinical outcome of H. pylori infection. In this sense, the present study aimed to determine the frequency and potential risk factors of the H. pylori infection, even as identify polymorphisms in the interleukin (IL)-1, IL-6, IL-8 and IL-10 genes and their associations with H. pylori infection, with cagA gene of H. pylori, and with gastric pathologies. For this, it was conducted a cross-sectional study, including gastric biopsy samples from 227 patients, submitted to upper gastrointestinal endoscopy. A questionnaire was applied to the patients before endoscopy. The diagnosis of H. pylori was based in histology and in polymerase chain reaction (PCR). The cagA gene was identified by PCR. The polymorphisms in the genes of IL-1B (at positions -511, -31 and +3954), IL-6 (at position -174), IL-8 (at position -251) and IL-10 (at positions -819 and -592) were detected by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The analysis of the variable number of tandem repeat (VNTR) polymorphism in the IL-1RN gene was performed by PCR followed by electrophoresis agarose gel. Of the 227 patients included in this study, 151 were positive for H. pylori and 76 negative. Based on the questionnaires applied to the patients, it was found a significant association between the presence of H. pylori and the household crowding, the age, and the diagnoses histological and endoscopic. As for host genetic factors was observed that polymorphisms in the promoter region of the IL-1B and IL-8 genes were significantly related with H. pylori infection. The strains from patients H. pylori positive carrying the cagA gene were significantly associated with the polymorphism of IL-1B at position -511. Additionally, in the presence of H. pylori infection, it was demonstrated that polymorphisms in the promoter region of the IL-1B gene were correlated with an enhanced risk of gastritis, while those in the IL-8 and IL-10 genes were associated with higher risk of peptic ulcer disease. We conclude that probably, the host genetic polymorphisms exert influence in the course and gravity of gastric diseases. It is hoped that the results of this work may contribute soon, to the prevention of these diseases and for a more appropriate and effective therapy, this because the knowledge of the molecular basis of the host and the microorganism enables the development of molecular tests that may to be applied toward a correct prognosis of gastric pathologies.