Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

O desvio apical é um fator bastante relevante na terapia endodôntica pela possibilidade de conduzir o tratamento proposto ao insucesso. Este estudo se propôs a realizar uma avaliação in vitro da ocorrência de desvio apical e sua magnitude nas instrumentações manual com limas de aço-inoxidável, rotatória de giro contínuo com o sistema K3 e rotatória de giro alternado com contra-ângulo NSK e limas de aço-inoxidável, em raízes mésio-vestibulares de molares superiores. A amostra foi formada por 60 raízes que, após a inclusão numa modificação da mufla de Bramante, foram seccionadas longitudinalmente. De acordo com o ângulo e raio da curvatura do seu canal, as raízes foram paritariamente divididas em três grupos. Uma das metades de cada raiz teve sua face interna digitalizada por scanner de mesa. As raízes foram remontadas nas muflas e seus canais instrumentados. A mesma metade de cada raiz teve sua face interna novamente digitalizada em três momentos distintos: primeiro, na confecção do preparo apical com a lima 30, após com a lima 35 e, por fim, com a lima 40. Cada imagem pós operatória (limas 30, 35 e 40) foi sobreposta à imagem pré-opertória no programa Adobe Photoshop. Após, foram transferidas ao programa AutoCad, onde o desvio apical foi mensurado. Para a comparação entre as limas dos três grupos foram utilizados os testes nãoparamétricos de Friedman e Wilcoxon que encontraram diferença significativa. (p=0,000) Para a comparação entre os três grupos foi utilizado o teste não-paramétrico Kruskal-Wallis (p=0,000) que demonstrou haver diferença significativa entre os grupos estudados. / Apical transportation has considerable relevance in endodontic therapy, as it may lead to treatment failure. This study conducted an in vitro comparative analysis of apical transportation produced in mesiobuccal roots of upper molars by (i) manual instrumentation using stainless steel files, (ii) K3 rotary Ni-Ti system, and (iii) a reciprocating NSK handpiece, also with stainless steel files. The sample comprised 60 roots that were inserted in a Bramante muffle and then longitudinally sectioned. Roots were subdivided pair-wise into three groups according to canal angle and radius. The inner surface of one root half was digitized using a scanner. Roots were then reassembled onto the muffles and had their canals instrumented. The same root half had its inner surface digitized again after instrumentation with three different file sizes: 30, 35 and 40. Each image obtained therefrom was superimposed over the pre-operative image using the Adobe Photoshop software. After, images were transferred to the AutoCad software for apical transportation measurements. The non-parametric Friedman and Wilcoxon tests were adopted to compare results for the three different file sizes, and showed the statistically significant differences between the results obtained (p=0,000). Similarly, the comparison between the three treatment groups by the nonparametric Kruskal-Wallis test revealed statistically significant differences.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305391.pdf: 14996835 bytes, checksum: 31d2bf6c91cf1c9a54fb59562700b0a3 (MD5) / Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar, histologicamente, as características morfológicas e comparar a expressão imunoistoquímica de fatores envolvidos na reabsorção radicular: RANKL (ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa B) e OPG (osteoprotegerina), e na inflamação: iNOS (óxido nÌtrico sintase induzida) e MMP-9 (metaloproteinase da matriz 9) do ligamento periodontal e polpa de dentes decíduos com reabsorção fisiológica com aqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória. Dez dentes decíduos hígidos com reabsorção fisiológica (grupo I), dez com reabsorção radicular patológica inflamatória (grupo II) e dez dentes permanentes (controle negativo) (grupo III) foram coletados, processados histologicamente e corados por meio da técnica de hematoxilina e eosina (HE), para caracterização tecidual, e submetidos a reação imunoistoquímica para detecção da expressão de iNOS, MMP-9, OPG e RANKL. Os resultados foram documentados utilizando câmera digital, acoplada ao microscópio de luz. Para a análise dos níveis de expressão dos marcadores, a intensidade total de pixels nas áreas de marcação foi determinada e os índices foram apresentados como densidade óptica (DO) utilizando o aumento de 400x. Os dados foram expressos como média erro padrão da média (EPM) de 10 dentes por grupo. A avaliação estatística dos resultados foi realizada através da análise de variância (ANOVA) de uma via, seguido do teste post hoc de Student Newman-Keuls. Valores de P menores a 0,05 (p<0,05) foram considerados estatisticamente significantes. Nos locais onde o ligamento periodontal e a polpa ainda estavam preservados, as características estruturais e morfológicas foram semelhantes tanto em dentes decíduos com reabsorção fisiológica como naqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória associada e nos elementos permanentes. Contudo, o nível de iNOS, no ligamento periodontal e polpa dos dentes do grupo II foi significativamente maior (p<0,05). Em relação à expressão de RANKL, no ligamento dos dentes do grupo II foi estatisticamente superior quando comparado, tanto ao observado no grupo I (p<0,05), como no grupo III (p<0,001). Ainda, houve diferença expressiva entre os grupos I e III, onde o grupo I apresentou maior expressão (p<0,001). O nível de RANKL no tecido pulpar dos dentes do grupo II também foi significativamente maior, quando comparado aos demais grupos (p<0,05). A expressão de OPG nos dentes do grupo II foi menor em relação aos demais grupos, tanto no ligamento periodontal (p<0,001) quanto no tecido pulpar (p<0,05). O nível de MMP-9 no ligamento periodontal dos dentes do grupo II foi estatisticamente maior, quando comparado, tanto ao observado no grupo I (p<0,001) como no grupo III (p<0,05) enquanto que na polpa não houve diferença entre os grupos. Pode-se concluir que o ligamento periodontal e a polpa de dentes decíduos com reabsorção fisiológica apresentam características estruturais e morfológicas semelhantes àqueles com reabsorção radicular patológica inflamatória associada e dentes permanentes, quando comparadas áreas sem reabsorção. O ligamento periodontal e a polpa de dentes decíduos com reabsorção radicular patológica inflamatória parecem apresentar características estruturais e moleculares que podem estar associadas a uma maior susceptibilidade à reabsorção radicular, quando comparado aos dentes decíduos com reabsorção radicular fisiológica. O tecido pulpar dos dentes decíduos parece ter participação ativa no processo de reabsorção radicular, seja este fisiológico ou inflamatório. / The aim of this study was to analyze, histologically, morphological characteristics, and to compare the immunohistochemical expression of factors related to root resorption: RANKL (ligand of the receptor activator of nuclear kappa B fator) and OPG (osteoprotegerin), as well as to inflammation: iNOS (inducible nitric oxide synthase) and MMP-9 (matrix metalloproteinase 9) in periodontal ligament and pulp tissues of primary teeth with physiological root resorption and those undergoing pathological inflammatory root resorption. Ten healthy primary teeth with physiological root resorption (GI), 10 teeth undergoing pathological inflammatory root resorption (GII) and 10 permanent teeth (negative controls) (GIII) were collected, histologically processed and stained with H&E for tissue characterization or submitted to immunohistochemistry for the detection of iNOS, MMP-9, OPG e RANKL expressions. Data were documented using a digital camera attached to a light microscope. To analyze the expression levels of the studied molecules, total intensity of pixels in areas showing immunoreactivity was determined and data were presented as optical density (O.D.) using a 400x magiification. Data were expressed as mean ± standard error of the mean (SEM) of 10 teeth per group. Statistical evaluation of the results was performed by one-way analysis of variance (ANOVA), followed by Student Newman-Keuls#s post hoc test. P values less than 0.05 (p<0.05) were considered as statistically significant. In areas where the periodontal ligament and the pulp were still preserved, morphological and estructural characteristics of those tissues were similar in both primary teeth with pysiological root resorption and those undergoing pathological inflammatory root resorption, as well as in the permanent teeth. However, the level of iNOS, in the periodontal ligament and pulp of GII specimens was significantly higher (p<0.05). Regarding the expression of ANKL, it was statistically more expressed in the periodontal ligament of GII teeth, comparing to GI (p<0.05) and GIII (p<0.001). Moreover, there was a significant difference between GI and GIII, where GI presented higher expression (p<0.001). The level of RANKL in the pulp tissue of teeth from GII was also significantly higher when compared to the other two groups (p<0.05). OPG expression in teeth of GII was lower compared to the other groups, both in periodontal ligament (p<0.001) and pulp tissue (p<0.05). The level of MMP-9 in the periodontal ligament of GII teeth were statistically higher, when compared to GI (p<0.001) and GIII (p<0.05) while there was no difference in pulp among groups. It may be concluded that the periodontal ligament and pulp tissues of primary teeth undergoing physiological root resorption show similar structural and morphological characteristics as teeth with pathological inflammatory root resorption and ermanent elements, when considering not resorbed areas. These tissues in primary teeth undergoing pathological inflammatory root resorption seem to have molecular characteristics that may be related to a higher susceptibility to root resorption, when compared to physiologically resorbing teeth. The pulp tissue of deciduous teeth seems to have an active participation in the process of root resorption, both physiological and pathological inflammatory root resorption.

Tese (doutorado) - Universidade de São Paulo, Faculdade de Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-21T04:47:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T19:30:03Z : No. of bitstreams: 1 199122.pdf: 3323704 bytes, checksum: 924447822df997737334bd6025286fec (MD5)

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1994-12-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:36Z : No. of bitstreams: 1 000023949.pdf: 4351925 bytes, checksum: 33bebaef27e694418223c1324c9f2eb1 (MD5) / A biocompatibilidade de dois adesivos dentinários (Scotchbond MultiPurpose- 3M e Optibond Multi-Use - Kerr) foi avaliada por meio de implantes em tecido conjuntivo subcutâneo de ratos. Os implantes foram realizados, utilizando-se tubos de polietileno preenchidos com os respectivos adesivos e inseridos em lojas cirúrgicas preparadas no dorso dos animais, os quais foram sacrificados nos periodos de observação de 14, 30, 60 e 84 dias. Os tecidos circunjacentes aos implantes foram removidos, incluídos em parafina e corados com hematoxilina e eosina para análise em microscopia óptica. Os resultados mostraram moderado a discreto infiltrado inflamatório nos períodos iniciais de observação (14 e 30 dias) e reparação da área nos períodos posteriores (60 e 84 dias), com formação de cápsula fibrosa envolvendo todos os implantes. Os resultados obtidos nos permitiram concluir que: a) os dois adesivos dentinários são biologicamente aceitáveis quando colocados em contato com o tecido conjuntivo subcutâneo de ratos; b) houve reação moderada do tecido conjuntivo subcutâneo de ratos aos dois adesivos dentinários no período de observação de 14 dias, a qual persistiu com o adesivo Optibond MultiUse-light cure- (Kerr) aos 30 dias; c) as reações teciduais provocadas pelos dois adesivos nos períodos de observação de 60 e 84 dias foram semelhantes e biologicamente aceitáveis / The biocompatibility of two dentin adhesives (Scotchbond MultiPurpose- 3M and Optibond Multi-Use - Kerr) was evaluated in rats subcutaneous connective tissue implants. Polyethylene tubes filled with the adhesives were surgically implanted into the dorsal subcutaneous tissues of rats. The tubes were left implanted for periods of 14, 30, 60 and 84 days, following wich the animais were killed and the implants, together with the surrounding tissue, were excised. The specimens were then fixed in 10 per cent formalin, sectioned serially and stained with hematoxylin and eosin and then, examined by light microscopy. After 14 and 30 days the tubes were surrounded by a mild to moderate inflammatory infiltration. After 60 and 84 days microscopic examination revealed the formation of a connective tissue capsule around each tube. The microscopic examination of the biopsy specimens allowed to conclude that: a) both dentin adhesives are considered biologically acceptable when placed in contact with rats subcutaneous connective tissue; b) in the observation period of 30 days there were moderate tissue reaction to the Optibond Multi-Use -light cure- (Kerr); c) after 60 and 84 days the use of both dentine adhesives did not interfere in the healing of the surrounding connective tissue

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-22Bitstream added on 2014-06-13T19:03:57Z : No. of bitstreams: 1 aranha_amf_dr_arafo.pdf: 1542988 bytes, checksum: f2f39ee479d45042c9c9592f819d0503 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Luxações dentárias resultam em injúrias ao feixe vásculo-nervoso, o que pode causar redução significante no nível de oxigênio das polpas dentárias, ou mesmo morte deste tecido conjuntivo especializado. O conhecimento dos mecanismos envolvidos na resposta das células pulpares à hipóxia pode melhorar o prognóstico dos tratamentos das luxações dentárias. O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento de células-tronco (DPSC) e de fibroblastos (HDPF) de polpas dentárias humanas em condições de hipóxia e a capacidade destas em estimular a proliferação e formação de tubos capilares por células endoteliais microvasculares dérmicas humanas (HDMEC). As análises do western blot e imunocitoquímica foram realizadas para avaliar o efeito da hipóxia na ativação do fator de transcrição induzido pela hipóxia 1 (HIF-1alfa). A expressão dos fatores de crescimento vascular endotelial (VEGF) e fibroblástico básico (bFGF) foi avaliada pelos testes de imunoensaio ELISA. O efeito do HIF-1alfa na expressão do VEGF foi avaliado pelo tratamento das células DPSC e HDPF com 40 μM YC-1, inibidor do HIF-1alfa. Para a avaliação da angiogênese in vitro, os testes de proliferação celular (WST-1) e de formação de tubos capilares em gel de colágeno foram realizados após tratamento das células HDMEC com os meios de acondicionamento das células DPSC ou HDPF, em condições de normóxia ou hipóxia.. A análise dos dados obtidos foi realizada por testes estatísticos não-paramétricos com nível de significância de 5%. Aumento da atividade do HIF-1alfa e da expressão de VEGF foram observados nas células DPSC e HDPF em condições de hipóxia. Entretanto, não foram observadas alterações nos níveis de expressão de bFGF. A expressão do HIF-1alfa foi inibida... / Dental luxations can result in the severing of the dental pulp and the creation of a hypoxic environment that might lead to the death of the pulp tissue. Improved understanding of the mechanisms underlying the response of dental pulp cells to hypoxic conditions might lead to better treatment of dental luxations. The purpose of this work was to evaluate the behavior of Dental Pulp Stem Cells (DPSC) and Human Dental Pulp Fibroblasts (HDPF) under hypoxia and their ability to stimulate proliferation and sprouting of endothelial cells. Western blots and immunohistochemistry were used to evaluate the effect of hypoxia on the activation of the transcriptional factor HIF-1α. Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) and Basic Fibroblastic Growth Factor (bFGF) expression was evaluated by ELISA. The effect of HIF-1αon VEGF expression was evaluated by treating DPSC or HDPF with 40 μM YC-1, an inhibitor of HIF-1α. To evaluate the angiogenic potential of dental pulp cells in vitro, human dermal microvascular endothelial cells (HDMEC) were treated with conditioned medium from DPSC or HDPF in normoxia or hypoxia. Sprouting and WST-1 assays were used to evaluate capillaries tubes-like formation and cell proliferation rate,respectively. The statistic analysis was performed by non-parametric tests. HIF-1αactivity and VEGF expression were up-regulated in DPSC and HDPF under hypoxic conditions. However, no changes in the expression levels of bFGF were observed. YC-1 40μM was able to inhibit HIF-1alpha in both cell lines and it also reduced VEGF expression in DPSCs in hypoxia. HDPF under hypoxia increased HDMEC sprouting by 50% when compared to HDPF in normoxia, and by 30% when compared to DPSC in hypoxia. Notably, HDPF under hypoxia stimulated HDMEC proliferation by 30% when compared to DPSC in hypoxia. It was concluded... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-03Bitstream added on 2014-06-13T19:23:26Z : No. of bitstreams: 1 zuza_ep_dr_arafo.pdf: 398544 bytes, checksum: 41ecbab8155e840230110f2980240df9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Apesar de haver muitos estudos que mostrem a prevalência e o diâmetro dos canais acessórios na região de furca, há escassez de trabalhos que observem o trajeto e os diferentes tipos de canais cavo inter-radiculares. Assim, o objetivo de nosso estudo foi verificar a ocorrência dos diferentes tipos morfológicos de canais acessórios na região de furca, na tentativa de mostrar os seus trajetos, através de cortes histológicos em molares de humanos. Foram utilizados 40 terceiros molares inferiores inclusos com separação radicular, os quais foram extraídos e descalcificados para a realização de microtomia no plano axial mésio-distal, obtendo-se cortes semi-seriados com espessura de 5mm. Os cortes foram corados com Hematoxilina e Eosina e observados em microscopia ótica em 40X, 100X, 200X e 400X. Os resultados mostraram que todos os tipos morfológicos foram encontrados, sendo que os canais acessórios verdadeiros, do tipo A estavam presentes em 10% dos espécimes. Os canais mais prevalentes foram os microcanais do tipo E, com prevalência de 100%, seguidos pelos fechados do tipo D com 87,5%, e pelos cegos do tipo B, com 75%. Os canais acessórios em alça, do tipo C, foram observados em apenas 5% dos dentes, sendo os menos prevalentes. / Although there are several studies that show prevalence and diameter of accessory root canals in the furcation area, there is a scarceness of studies which observe the trajectory and different types of cavo inter-radicular canals. The objective of the present study was to verify the occurrence of different morphologic types of accessory root canals in the furcation area, in an attempt to show their trajectories, through histological sections in human molar teeth. Forty unerupted mandibular third molar teeth with radicular separation were used. They were extracted and decalcified so that microtomy could be performed towards mesio-distal axial plane, obtaining semi-serial sections with thickness of 5mm. The sections were stained with Hematoxylin and Eosin, and were observed under optical microscopy at 40X, 100X, 200X and 400X magnifications. The results showed that all morphologic types were found; the real accessory canals, type A, were present in 10% of the specimens. The most prevalent canals were type-E microcanals, with prevalence of 100%, followed by sealed type-D canals, with 87.5%, and by blind type-B canals, with 75%. The loop type-C accessory canals were observed in only 5% of the teeth and were the least prevalent.