Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introducao: Um dos objetivos da Medicina e superar os danos causados ao organismo por doencas, senilidade e traumas, restabelecendo um equilibrio normo-funcional. Nas perdas teciduais, inumeros autores afirmam que o substituto gideal h e o proprio tecido saudavel, de mesma origem ou o tecido produzido por Engenharia Tecidual (ET). Porem, ainda sao necessarias muitas pesquisas para a utilizacao in vivo. Objetivo: Avaliar tres suplementos hemoderivados, empregados em meios de cultivo, quanto a proliferacao celular e o dano celular de celulas-tronco de origem dentaria. Metodos: Foram realizados cinco experimentos a partir de dentes terceiros molares em desenvolvimento. Apos a digestao enzimatica, as celulas-tronco adultas foram cultivadas em quatro diferentes meios de cultivo. Meio I, isento de suplemento hemoderivado; meio II, suplementado com FBS (heterologo); meio III, suplementado com soro humano homologo; meio IV, suplementado com soro humano autologo. Essas culturas foram analisadas comparativamente quanto a proliferacao celular, submetidas a testes com marcadores Von Kossa e Alizarina Vermelha durante quatro semanas (avaliadas semanalmente) e a cada duas semanas quanto as unidades formadoras de colonias (UFCs). No 28o dia as quatro culturas foram submetidas ao teste do gcometa h, analisando-se possivel dano no DNA celular. Os resultados foram submetidos a analise estatistica de Variancia de Friedman, estabelecendo-se significancia para (p) . a 5%. Resultados: O meio de cultivo IV atingiu uma proliferacao celular superior ao Meio I, demonstrando um resultado significante (p*=0,0074). O meio de cultivo II, mostrou proliferacao superior ao meio I e desenvolvimento semelhante ao meio III, porem nenhum demonstrou significancia em relacao ao meio IV. Os resultados do teste do cometa evidenciaram um menor dano celular nas culturas do meio IV em relacao ao meio II e meio III. As UFCs foram numerosas nos meios IV e III respectivamente, havendo maior indice de mineralizacao no meio IV do que nos meios II e III. Conclusao: O meio de cultivo suplementado com hemoderivado autologo favoreceu significativamente a proliferacao celular. O hemoderivado humano mostrou-se viavel como suplemento nas culturas de celulas-tronco dentarias humanas. / Introduction: One among many aims of medicine is to overcome injuries inflicted to the organism by diseases, aging and trauma, re-establishing the usual functions. About tissues losses, several authors claim that the ideal replacement is the healthy tissue itself, originated from the same source or developed by Tissue Engineering (TE). However, much research is needed before in vivo application. Objective: To evaluate three different kinds of sera supplies used in stem cell culture media, as to cellular proliferation and cellular injuries on dental stem cell. Methods: Five experiments were made utilizing incompletely developed third molar teeth. After enzymatic digestion, the adult stem cells were cultivated in four different kinds of culture media. Medium I, serum free (SF); medium II, supplied with FBS (heterologous serum- HeS); medium III, supplied with homologous human serum (homologous serum- HoS) and medium IV, supplied with autologous human serum (autologous serum . AuHS).These cultures were analyzed comparatively as to cellular proliferation; they were submitted Von Kossa (VK) and Alizarin Red (AR) markers tests for four weeks (checked weekly), and each two weeks checked for Colonies Forming Unities (CFUs). On the 28th day, all four cultures were submitted to comet assay, and were inspected for possible cellular DNA injuries. The results underwent a non-parametric statistical Friedman fs variance test, with significance (p) . 5%. Results: Culture medium IV reached a cellular proliferation rate higher than medium I, showing a significant result (p*=0,0074). Culture medium II presented a superior proliferation result than medium I, and similar to medium III, although neither of them presented significant result when compared to medium IV. The comet assay fs results showed minor cellular DNA injury in the medium IV cultures, when compared to medium II and III cultures. The CFUs were numerous in the media IV and III cultures, respectively, and there was higher mineralization rate in the medium IV than in the media II and III. Conclusion: The culture medium supplied with AuHS significantly improved cellular proliferation. Human sera proved to be a viable supply to human dental stem cell culture. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O capeamento pulpar direto busca preservar a vitalidade pulpar. Este trabalho apresenta a resposta tecidual de polpas humanas ao capeamento pulpar direto com o Agregado de Trióxido Mineral (MTA) comparado com o hidróxido de cálcio. Foram utilizados 20 pré-molares de dez pacientes com extração indicada para tratamento ortodôntico. Todos os dentes apresentavam vitalidade pulpar e neles foram feitos capeamentos pulpares diretos com MTA ou com o hidróxido de cálcio. Os dentes foram extraídos num período de 14 dias ou 45 dias, estabelecendo os seguintes grupos experimentais: Ca(OH) 14 dias; Ca(OH) 45 dias; MTA 14 dias e MTA 45 dias. Estes dentes foram analisados microscopicamente por dois examinadores treinados. Os dados obtidos foram tabulados, utilizando-se o teste Kappa para observar o grau de concordância entre os examinadores. Para avaliação comparativa entre as respostas citotóxicas dos materiais testados foi aplicado o teste não paramétrico Kruskal-Wallis e o teste de Dunn para comparações individuais e identificação da significância dos achados. Na análise dos resultados não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos períodos experimentais de 14 e 45 dias, e nem na resposta inflamatória pulpar frente ao hidróxido de cálcio quando comparado ao MTA. Quanto à espessura e à organização da barreira dentinária reparatória com o hidróxido de cálcio, quando comparado com o MTA também não apresenta diferença estatisticamente significante. Conclui-se que o MTA satisfaz os requisitos de um material capeador pulpar em dentes de humanos, apresentando propriedades físicas e biológicas que o indicam para este tratamento. / The direct dental pulp capping aims to preserve the pulp vitality. This work shows the tissue response from human pulps to that procedure with the Mineral Trioxide Agregate (MTA) compared to calcium hydroxide - Ca(OH)2. Twenty premolars from 10 patients with extraction indicated to orthodontic treatment were used. All teeth showed pulp vitality and were treated with direct dental pulp capping with MTA or with calcium hydroxide. The teeth have been extracted within 14 or 45 days, stablishing the following experimental groups: Ca(OH)2 14 days; Ca(OH)2 45 days; MTA 14 days; and MTA 45 days. These teeth were analyzed under microscopy by two observers trained. The data obtained were put in table using the Kappa test to note the agreement degree between the observers. For the comparative assessment between the citotoxic response from material tested has been applied the non-paired Kruskal-Wallis test, and the Dunns test for individual comparisons and identifying the significance of findings. In the analysis of results there had no statistically significant difference between the groups in experimental periods of 14 days and 45 days, not even in the pulp inflammatory response to calcium hydroxide when compared to MTA. The thickness and arrangement of the healing dentin barrier faced with calcium hydroxide, when compared to MTA, also showed no statistically significant difference. It may be concluded that the MTA fulfils the requirements of pulp capping material in human teeth showing biological and physical properties that indicate it for this treatment.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ. / The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste.

Orientador: Prof. Dr. Emery Cleiton Cabral Correia Lins / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2016. / A polpa dental, considerada um tecido mole, é o tecido mais interno do dente. Sua função principal é garantir a formação de dentina (dentinogênese) durante toda a vida do indivíduo. Sendo assim,a informação sobre sua saúde é de extrema relevância no ambiente clínico odontológico. Uma vez que a polpa do dente é diagnosticada não saudável por consequência de infecções e/ou traumas, o procedimento clínico sugere a realização de tratamento com remoção total do tecido degradado. Dessa maneira, a proposta do presente projeto de pesquisa foi a proposição de um novo método diagnóstico utilizando-se da espectroscopia de reflexão com radiações no visível e no infravermelho próximo (VIS/NIR e NIR de 350nm a 1700nm) para discriminação de polpas humanas sadias e polpas patológicas indicadas para procedimento endodôntico. Para isso, fez-se uso do modelo estatístico da Análise de Componentes Principais (PCA) nas bandas espectrais VIS/NIR e NIR para proposições de modelos matemáticos que diferenciasse os dois grupos de amostras. Os modelos apresentaram que a distinção destes dois grupos é possível com uma taxa de acertos de 94,7% no NIR e 95% no VIS/NIR. Além disso, no VIS/NIR a diferenciação dos grupos também se dava ao analisar o comprimento de onda onde ocorria o pico da emissão: observou-se que os picos do grupo sadio patológico estavam sempre acima de 700nm enquanto que os picos do grupo patológico mantinham abaixo de 700nm. Com tudo, o objetivo do presente projeto de pesquisa foi alcançado: os grupos de polpas sadias e patológicas puderam ser separados ao utilizar radiações VIS/NIR e NIR pela técnica de espectroscopia de reflexão, seja pela análise estatística da PCA por parte dos espectros no NIR ou pela análise colorimétrica do pico de emissão por parte dos espectros no VIS/NIR. / The dental pulp, a soft tissue, is the innermost tissue of the tooth. Its main function is to ensure the formation of dentin (dentinogenesis) throughout the life of the individual. Therefore, the information about their health is extremely relevant in the clinical dental environment. Since the pulp of the tooth is diagnosed unhealthy as a result of infections and/or trauma, the clinical procedure suggests performing treatment with total removal of the degraded tissue. In this way, the proposal of the present research project was the proposal of a new diagnostic method using reflection spectroscopy with visible and near infrared (VIS/NIR and NIR from 350nm to 1700nm) for discrimination of healthy human pulps and pathological pulps indicated for endodontic procedure. For this, we used the statistical model of Principal Component Analysis (PCA) in the spectral bands VIS/NIR and NIR for propositions of mathematical models that differed between the two groups of samples. The models showed that the distinction between these two groups is possible with a success rate of 94.7% in NIR and 95% in VIS/NIR. In addition, in the VIS/NIR group differentiation also occurred when analyzing the wavelength where the emission peak occurred: it was observed that the peaks of the pathological healthy group were always above 700nm whereas the peaks of the pathological group maintained Below 700nm. However, the objective of the present research project was reached: the groups of healthy and pathological pulps could be separated by using VIS/NIR and NIR radiation by the reflection spectroscopy technique, or by the statistical analysis of PCA by the NIR spectra or by the colorimetric analysis of the emission peak by the VIS/NIR spectra.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-12-01Bitstream added on 2014-06-13T20:01:54Z : No. of bitstreams: 1 reston_eg_dr_arafo.pdf: 3409643 bytes, checksum: 8f1fae9c8cf65d5cd2e99d8e4ddf01ee (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade de formação de barreira de tecido duro quando da realização de pulpotomias, onde as feridas pulpares foram capeadas com três diferentes materiais. Hidróxido de cálcio, Agregado de Trióxido Mineral (MTA), e PROROOT® MTA foram estudados quanto à morfologia e localização da barreira de tecido reparador formada, e também quanto à extensão do reparo. Três métodos de avaliação (microscopia eletrônica de varredura, lupa estereoscópica e microscópio de luz) foram empregados para analisar as imagens da barreira de tecido duro, e comparados entre si para avaliar a abrangência do espectro de leitura de cada método. Cinco cães Beagle, com idade de doze meses foram utilizados, sendo as pulpotomias realizadas nos segundos, terceiros e quartos pré-molares. Os dentes foram capeados com os materiais experimentais e controle e as cavidades restauradas com amálgama de prata. Após o período mínimo de 90 dias e máximo de 105 os animais foram sacrificados e os dentes submetidos ao processamento laboratorial para avaliação em microscopia eletrônica de varredura. Um programa analisador de imagens foi empregado para delimitar e determinar as áreas dos condutos e compará-las com as áreas das barreiras de tecido duro formadas no local. Os dados da microscopia eletrônica de varredura foram utilizados para verificar a morfologia da barreira. A localização e extensão desta estrutura reparadora foi também avaliada com auxílio de lupa esteroscópica e microscópio de luz. Os resultados obtidos permitiram demonstrar que nos espécimes pertencentes ao grupo PROROOT® ocorreu maior número de reparações completas, caracterizadas pela deposição de barreira de tecido duro, a qual apresentava característica tubular, quando comparado ao grupo hidróxido de cálcio.... / This in vivo study was carried out to evaluate the reparative potential of pulps mechanically exposed following pulpotomy with three different capping agents. Calcium hydroxide, Mineral Trioxide Aggregate (MTA), and PROROOT® MTA were evaluated regarding the morphology, location, and extension of the reparative hardbarrier deposition. Three methods were used to evaluate the images from the reparative area (scanning electron microscope - SEM, stereo microscope - Lupe, and optical microscope). The methods were compared to evaluate the reading spectrum of each applied method. Five Beagle dogs, twelve months-old were used. Pulpotomies were performed in the second, third and forth premolars. The exposed pulps were capped with the selected experimental or control materials and the cavities restored with amalgam. After 90 to 106 days the animals were sacrificed and the teeth surgically removed in bloc were processed for SEM assessment. An image analyzer was used to measure the total area of the exposition and compare it to the area occupied by the hard-barrier. Data from SEM were used to evaluate morphology and location of the hard-barrier formation as well as the percentage of pulpal wound obliteration, which was also measured by stereo microscope and optical microscope. Larger number of samples in which PROROOT® was applied as pulp-capping agent exhibited complete hard-barrier formation when compared to calcium hydroxide and MTA. For most of PROROOT® samples, the hardbarrier exhibited several dentinal tubules. On the other hand, calcium hydroxide samples presented the lowest number of total repairs and the hard-barrier observed in a few samples exhibited amorphous histological characteristics. Finally, it was demonstrated that SEM evaluation does not allow detailed assessment of the hard-barrier formation such as its extension and location... (Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-25Bitstream added on 2014-06-13T20:44:35Z : No. of bitstreams: 1 lima_lm_dr_arafo.pdf: 12608826 bytes, checksum: 6a6a6f942941a1dbbddbe92d7ac3a87e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Dentre os instrumentos de corte alternativos aos rotatórios de baixa e alta rotação que foram introduzidos na Odontologia, o uso do ultra-som associado à ponta de diamante CVD (Chemical Vapor Deposition) vem apresentando desempenho positivo, especialmente em relação à preservação da estrutura dentária e à satisfação dos pacientes. Diante de uma tecnologia ainda pouco explorada, o objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da ponta de diamante CVD em ultra-som, buscando evidências científicas que suportem a sua utilização no tratamento odontológico, por meio de 3 artigos seqüenciais. Estes artigos abordaram as implicações desta nova técnica de preparo cavitário na efetividade de corte de esmalte e dentina, na resistência de união por microtração e microinfiltração de restaurações de resina composta e na resposta do complexo dentino-pulpar de dentes humanos, tendo como grupo controle a ponta diamantada convencional associada à turbina de alta rotação. Os resultados evidenciaram que os preparos cavitários em esmalte e dentina confeccionados com ponta de diamante CVD em ultra-som foram mais conservadores do que os preparos com a ponta diamantada em alta rotação. As restaurações em resina composta confeccionadas após o preparo cavitário com a ponta de diamante CVD em ultrasom apresentaram valores de resistência de união significantemente maiores, no entanto, a microinfiltração nas margens em esmalte e dentina não foram diferentes entre os instrumentos de corte. Além disso, não foram observadas características de inflamação nas respostas pulpares após a utilização de ambos os instrumentos de corte, apenas uma discreta a moderada desorganização celular. / The CVD (Chemical Vapor Deposition) diamond tip coupled in ultrasound device by means of a specific connector has been an alternative to conventional diamond bur in high-speed. Besides the few scientific evidences, this new technology has been used in dental offices with good results, especially regarding the preservation of dental tissues and patient’s satisfaction. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the CVD diamond tip in ultrasound on dental treatment, through 3 sequential articles. These articles evaluated the implications of this new cavity preparation technique in enamel and dentin cutting effectiveness, in microtensile bond strength and microleakage of composite resin restorations, and in dentin-pulp complex response of human teeth, having the high-speed conventional diamond bur as control group. The results showed that the cavity preparations made by CVD diamond tip in enamel and dentin were more conservative than those prepared by conventional diamond bur. The resin composite restorations placed after cavity preparation with CVD diamond tip in ultrasound showed significantly higher bond strength values, however, the microleakage in enamel and dentin margins were similar for both cutting instruments. Besides, pulp response for both instruments did not show inflammatory characteristics, only a discrete or moderate cellular disorganization.

O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-lático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCl a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x104) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x105) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x104 células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP- 2, -4, ou -7 (2 μg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x105 células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaOCl e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células tratadas com rhBMP-2, e DSPP e DMP-1 por células tratadas com rhBMP-4 e -7. Células sem tratamento não expressaram os marcadores. O modelo fatia-dental/matriz-polimérica demonstrou ser adequado para o estudo da diferenciação de células-tronco pulpares, sugerindo que a dentina possa fornecer um microambiente favorável para a diferenciação de celular. As proteínas ósseas morfogenéticas dentinárias BMP-2 e BMP-4 parecem exercer um papel relevante nesse processo. / The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCl or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice (PSS) were used as control. SHED (5x104) were seeded in TSS and PSS and after 7, 14, 21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x105) were seeded in TSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentinderived BMPs bioactivity, SHED (5x104) were cultured in TSS in the presence of antihuman BMP-2, -4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCl or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.

Orientador: Hernane da Silva Barud / Resumo: Os cimentos de silicato de cálcio têm se desenvolvido rapidamente durante as últimas décadas; com a aparição de novos cimentos para uso em odontologia restauradora. Estes cimentos apresentam diferentes composições químicas e por tanto provavelmente diferente radiopacidade. A incorporação de nanopartículas de vidro bioativo poderia melhorar a bioatividade dos cimentos de silicato de cálcio. O objetivo foi avaliar a composição química e radiopacidade dos cimentos a base de silicato de cálcio Biodentine (BD) e TheraCal LC e a contribuição do acréscimo de nanopartículas de vidro bioativo (nVB) no BD. Método: Foram realizados testes de radiopacidade de acordo com norma ISO 9917 e caracterização com microscopia eletrônica de varredura e análise elementar (MEV/EDX) dos novos cimentos de silicato de cálcio BD e TheraCal LC. Posteriormente, nVB foram sintetizadas com técnica sol-gel, e foram preparados nanocompósitos do BD com 1 e 2% em peso de nVB (1%nVB/BD e 2%nVB/BD). A bioatividade dos nanocompósitos foi avaliada in vitro e caracterizado com MEV/EDX, análise de espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier e difração de raios-X (DRX). Também os nanocompósitos foram aplicados em discos de dentina e a interface caracterizada com MEV-EDX. Resultados: BD apresentou zircônio como elemento radiopacificante e maiores valores de radiopacidade do que o TheraCal LC, que apresentou bário, estrôncio e zircônio como radiopacificadores. A incorporação de nVBs em BD melhorou a bioa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Sapota-do-Solimões (Quararibea cordata) is a fruit found in the Amazon region of Brazil consumed only by the local population. The production of vegetable pulp is a viable operation in harvest period and able to serve the consumer at any time of year, even in distant places of origin. It is a fruit still little known worldwide and presents a high agroindustrial potential. Thus, the present work aims to analyze the parts of sapota-do-Solimões (peel, pulp and seeds), the stability of elaborated pulps and the bioactive and volatile compounds of the pulp in different ripening stages. The samples were collected from the city of Tefé-AM in three distinct ripening stages: unripe (U), ripe and collected from the tree (R); and ripe and collected from the ground, i.e. when the fruit fell naturally to the ground from the tree (RG), and transported to Santa Maria-RS. In the first study, the fruits R were used and the biometric parameters, the chemical composition and the mineral content were characterized. In the second, fruits R were pulped and submitted to the treatments: freezing, pasteurization + freezing, refrigeration and pasteurization + refrigeration, physicochemical and microbiological characteristics and bioactive compounds were analyzed in seven different storage times during 180 days. The third study, one comprised pulp analysis (U, R and RG) of biometric parameters, of quality, bioactive compounds, chemical composition, fatty acids and volatile profile. The percentages of peel, pulp and seeds were, respectively, 53.2%, 39.6% and 7.2%. The chemical composition in 100 g of sapota-do-Solimões was 85.01% moisture; 0.79% ash; 0.67% protein; 0.10% lipids, 4.10% dietary fiber; 9.34% carbohydrate and 40.94 calories. Magnesium was the most important mineral in the pulp. In the elaborated pulps, the treatments affected the physical-chemical parameters during the storage. Ascorbic acid remained stable during freezing and total carotenoid levels were maintained in pasteurization + freezing. Total phenols remained stable for up to 150 days and antioxidant activity decreased during storage for all treatments. The pasteurization + freezing treatment, as well as the freezing treatment, maintained pulp quality for 180 days of storage. With the ripening of the sapota-do-Solimões, there was an increase in water activity (0.977-0.996), pH (6.53-7.04), soluble solids (8.53-12.65%), total sugars (4.26-7.98%), reducing sugars (0.99-3.14%), non-reducing sugars (3.11-4.60%), total carotenoids (0.67-1.24 μg/g of pulp). The lipids increased with respect to ripening stage U (0.16%) and RG (0.30%). Eleven fatty acids were detected in the pulps. A total of 86 volatile compounds were identified, of which 57 were found in U fruits, 54 in R fruits and 68 in RG fruits. Methyl and ethyl benzoate esters were found in the RG fruits. There was an increase in terpene compounds; from 0.4% for U fruit to 5.6% for RG fruit. The data showed that the composition of the fruit was influenced by the ripening stage of the pulp. / A sapota-do-Solimões (Quararibea cordata) é uma fruta encontrada na região Amazônica do Brasil consumida apenas pela população local. A produção de polpa vegetal é uma operação viável em período de safra e capaz de atender o consumidor em qualquer época do ano, mesmo em locais distantes de sua origem. É uma fruta ainda pouco conhecida mundialmente e apresenta um elevado potencial agroindustrial. Assim, o presente trabalho teve por objetivo caracterizar as partes (casca, polpa e sementes) da sapota-do-Solimões, a estabilidade de polpas elaboradas e os compostos bioativos e voláteis da polpa em diferentes estádios de maturação. As amostras foram coletadas na cidade de Tefé-AM em três estádios de maturação distintos: verde (V), maduro coletado da árvore (M) e maduro coletado do chão (MC), quando se desprende naturalmente da planta, e transportados para Santa Maria-RS. No primeiro estudo foram utilizados os frutos M e caracterizados os parâmetros biométricos, a composição química e o conteúdo mineral. No segundo, os frutos M foram despolpados e submetidos aos tratamentos: congelamento, pasteurização + congelamento, refrigeração e pasteurização + refrigeração. As características físico-químicas e microbiológicas e os compostos bioativos foram analisados em sete diferentes tempos de armazenamento durante 180 dias. O terceiro estudo compreendeu as análises da polpa (V, M e MC) de parâmetros biométricos, de qualidade, compostos bioativos, composição química, perfil de ácidos graxos e de voláteis. As porcentagens de casca, polpa e sementes foram, respectivamente, de 53,2%, 39,6% e 7,2%. A composição química em 100 g de polpa de sapota-do-Solimões foi de 85,01% de umidade; 0,79% de cinzas; 0,67% de proteína; 0,10% de lípidos, 4,10% de fibra alimentar; 9,34% de carboidratos e 40,94 Kcal. O magnésio foi o mineral de maior relevância na polpa. Nas polpas elaboradas, os tratamentos afetaram os parâmetros físico-químicos durante o armazenamento. O ácido ascórbico permaneceu estável durante o congelamento e os níveis de carotenóides totais foram mantidos na pasteurização+congelamento. Os fenóis totais permaneceram estáveis até 150 dias e a atividade antioxidante diminuiu durante o armazenamento para todos os tratamentos. Os tratamentos de pasteurização+congelamento, bem como o tratamento de congelamento, mantiveram a qualidade da polpa durante 180 dias de armazenamento. Com o amadurecimento da sapota-do-Solimões houve um aumento na atividade de água (0,977-0,996), pH (6,53-7,04), sólidos solúveis (8,53-12,65%), açúcares totais (4,26-7,98%), açúcares redutores (0,99-3,14%), açúcares não redutores (3,11-4,60%), carotenoides totais (0,67-1,24 μg/g de polpa). Os lipídios aumentaram em relação ao estádio de maturação V (0,16%) e MC (0,30%). Onze ácidos graxos foram detectados nas polpas. Foram identificados 86 compostos voláteis, sendo 57 componentes nos frutos V, 54 nos frutos M e 68 nos frutos MC. Os ésteres benzoato de metila e etila foram encontrados nos frutos MC. Houve um aumento de compostos terpênicos, 0,4% do V para 5,6% do MC. Os dados mostraram que a composição dos frutos foi influenciada pelo estádio de maturação das polpas.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Being the harvest time of apples concentrated in a short period, fruit storage is needed for market regulation. New storage technologies are being developed, such as dynamic controlled atmosphere with respiratory quotient (DCA-RQ), that needs to be evaluated under different temperatures and with the application of growth regulators such as aminoethoxyvinylglycine (AVG), naphthalene acetic acid (NAA) and 1-methylcyclopropene (1-MCP). This thesis is composed of four papers, which resulted from studies with the following objectives: to evaluate volatile compounds concentration in ‘Galaxy’ and ‘Royal Gala’ apples stored under DCA-RQ, DCA with chlorophyll fluorescence (DCA-CF), controlled atmosphere (CA) with and without 0,625 μL L-1 of 1-MCP application; to evaluate if DCA-RQ and DCA-CF allow employing higher temperatures during apple storage; to evaluate the effect of the application of AVG (0.83 kg ha-1) in combination with NAA (40g ha-1), as well as the effects of 1-MCP in the production of volatile compounds and physical-chemical quality of apples stored under DCA monitored with chlorophyll fluorescence and respiratory quotient; identify if the stress by low O2 partial pressure during RQ measurement has an effect on apple quality conservation. ‘Galaxy’ and ‘Royal Gala’ apples were stored for 9 months plus 7 days at 20 °C. It is worth noting that ‘Galaxy’ apples stored under DCA-RQ1.5 maintained better quality when compared to CA, ultralow oxygen (ULO – 0.4kPa) and DCA-CF, also increasing the production of esters responsible for the aroma. Besides, 1-MCP reduced volatile compounds concentration, even in apples stored under DCA-RQ1.5. Likewise, DCA-CF had a similar effect to ULO with 0.4 kPa of O2. The DCA-RQ1.3 and DCA-CF allowed storing ‘Galaxy’ apples under temperatures higher (2.0 and 2.5 °C) than recommended (1.5 °C). In addition, 1-MCP application did not have additional effects when fruit were stored under DCA and higher temperatures. Higher temperatures (2.0 and 2.5 °C) could be used without reducing the production of important volatile compounds. In DCA-RQ, the stress by low O2 employed during RQ measurement has presented a beneficial effects, with fruit maintaining higher flesh firmness, lower mealiness and decay incidence compared to fruit without RQ calculation. ‘Royal Gala’ apples stored under DCA-RQ1.3 and DCA-CF, submitted to the application of AVG and NAA during prehavest did show an increase in the concentration of volatile compounds. However, the combination of AVG plus NAA and the storage under DCA-RQ1.3 or DCA-CF presents an excellent alternative for storing apples, because maintains higher flesh firmness, reduce physiological disorders and maintain higher percentage of healthy fruit. / Devido à colheita de maçãs ser concentrada em curto período, faz-se necessário o armazenamento de uma grande parte dos frutos para regulação do mercado. Existem tecnologias de armazenamento em desenvolvimento, como a atmosfera controlada dinâmica com quociente respiratório (ACD-QR), a qual precisa ser avaliada em diferentes temperaturas e em frutos com aplicação de fitorreguladores como o 1-metilciclopropeno (1-MCP), a aminoetoxivinilglicina (AVG) e o ácido naftaleno acético (ANA). Esta tese é composta por quatro artigos científicos que resultaram de trabalhos com os seguintes objetivos: Avaliar a produção de compostos voláteis em maçãs ‘Galaxy’ e ‘Royal Gala’ armazenadas em ACD-QR, atmosfera controlada dinâmica com fluorescência de clorofilas (ACD-FC), atmosfera controlada (AC) convencional e com aplicação de 1-MCP; avaliar se a ACD-QR e a ACD-FC permitem utilizar temperaturas mais elevadas para o armazenamento das maçãs; avaliar o efeito da aplicação da AVG (0,83 kg ha-1) em combinação com o ANA (40g ha-1), bem como o efeito do 1-MCP na produção de compostos voláteis e qualidade físico-química dos frutos armazenados em ACD monitorada com fluorescência de clorofilas e com quociente respiratório; identificar se o estresse por baixa pressão parcial de O2 durante o período de cálculo do quociente respiratório possui efeito na conservação da qualidade de maçãs. Foram utilizadas maçãs ‘Galaxy’ e ‘Royal Gala’, armazenadas por nove meses mais sete dias de exposição à temperatura de 20 °C. Pode-se destacar que a maçã ‘Galaxy’ quando armazenada em ACD com QR 1,5 (ACD-QR1,5) manteve melhor qualidade, do que o armazenamento em AC convencional com pressões parciais de O2 ultrabaixas (ULO – 0,4 kPa CO2) e em ACD-FC, além de aumentar a produção de ésteres responsáveis pela formação do aroma. Além disso, a aplicação de 0,625 μL L-1 de 1-MCP reduziu a concentração de compostos voláteis, mesmo em frutos armazenados em ACD-QR1,5. A ACD-FC teve efeito similar ao armazenamento em ULO com 0,4 kPa de O2. A ACD-QR1,3 e a ACD-FC permitiram armazenar a maçã ‘Galaxy’ em temperatura mais elevada (2,0 e 2,5 °C) do que a normalmente recomendada (1,5 °C). Além disso, a aplicação de 1-MCP não teve efeito adicional em maçãs armazenadas com temperatura mais elevada quando em ACD. A alta temperatura (2,0 e 2,5 °C) pôde ser usada em ACD-QR1,3 sem perda na produção de compostos voláteis importantes. No armazenamento em ACD-QR, o estresse causado pelas baixas pressões parciais de O2 a que os frutos são submetidos durante o período de cálculo do QR (13 h), que pode atingir 0,0 kPa, possuiu efeito benéfico, pois manteve firmeza da polpa mais elevada, menor incidência de polpa farinácea e podridões, comparado aos frutos que não sofreram esse estresse por baixo O2. O armazenamento de maçãs ‘Royal Gala’ em ACD-QR1,3 e ACD-FC tratadas em pré-colheita com AVG e ANA não aumentaram a concentração de compostos voláteis. Entretanto, a aplicação associada de AVG e ANA e o armazenamento em ACD-QR1,3 ou ACD-FC foram excelentes alternativas para a conservação dos frutos, pois mantiveram a firmeza da polpa, reduziram os distúrbios fisiológicos, proporcionando maior volume de frutos sadios.