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Efecto de una manoproteína sobre la interacción tanino-proteína salivalMeza Candia, Millaray January 2012 (has links)
Memoria para optar al título
Profesional de Ingeniero Agrónomo
Mención: Enología y Vitivinicultura / La astringencia corresponde a una sensación táctil de sequedad, rugosidad y aspereza
percibida en las mucosas de la boca, la cual está estrechamente relacionada con la
interacción de proantocianidinas o taninos presentes en diferentes alimentos, tales como el
vino, con las proteínas de la saliva.
Se ha observado que las manoproteínas, presentes en la pared celular de las levaduras,
podrían interferir en la interacción proantocianidina-proteína salival, uniéndose a las
proantocianidinas, formando estructuras moleculares estables que impiden su unión.
En este estudio se evaluó el efecto de una manoproteína sobre la interacción entre proteínas
salivales y taninos proantocianidínicos de semillas de Vitis vinifera mediante ensayos de
difusión y precipitación en membranas de celulosa.
Los resultados obtenidos, indican que la manoproteína utilizada interactúa tanto con las
proteínas salivales así como con las proantocianidinas provenientes de semillas de Vitis
vinifera.
Asimismo, la manoproteína usada, afecta significativamente la fuerte interacción entre las
proteínas salivales y proantocianidinas de semillas de Vitis vinifera. Sin embargo, su efecto
estaría estrechamente relacionado con el orden en que son mezclados los tres componentes. / Astringency corresponds to a sensation of dryness, roughness and harshness perceived in
the mouth mucous, which is closely related to the interaction of proanthocyanidins or
tannins present in different foods, such as wine, with saliva proteins.
It has been observed that the mannoproteins, present in the cell walls of yeast, might
interfere with the interaction proanthocyanidin-salivary protein, joining the
proanthocyanidins, forming stable molecular structures preventing such union.
The effect of a mannoprotein on the interaction between salivary proteins and tannins of
seed of Vitis vinifera through diffusion and precipitation assays on cellulose membranes
was evaluated in this study.
The results obtained indicate that the mannoprotein interacts with both the salivary proteins
as well as with the proanthocyanidins coming from seeds of Vitis vinifera.
Likewise, the studied mannoprotein, significantly affects the strong interaction between the
salivary proteins and proanthocyanidins of seeds of Vitis vinifera. However, this effect
would be closely related to the order in which the three components are mixed.
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Potencial antimicrobiano de plantas da caatinga utilizadas na medicina tradicional como antiinflamatóriasCABRAL, Daniela Lyra de Vasconcelos 12 September 2014 (has links)
Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-11T14:53:20Z
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Previous issue date: 2014-09-12 / Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE) / A etnobotânica tem demonstrado ser uma ferramenta de grande importância quando se deseja obter plantas com atividade biológica. Espécies vegetais para as quais é atribuída atividade antiinflamatória podem levar a uma melhora no quadro devido a ação antimicrobiana, combatendo o patógeno causador da inflamação. No presente trabalho buscou-se avaliar se um conjunto de plantas utilizadas popularmente como antiinflamatórias já teve sua atividade antimicrobiana testada e comprovada; avaliar o poder antioxidante dessas espécies e a dosagem de fenóis totais, taninos e cumarinas, avaliar a atividade antimicrobiana e modulatória de Crateva tapia L., bem como determinar o perfil químico de seu extrato hidroalcoólico. Baseado em estudo etnobotânico prévio, foram coletadas cascas de caule das espécies vegetais, de um remanescente de Caatinga do estado de Pernambuco, indicadas para o referido uso. A ação antioxidante foi avaliada pela capacidade dos antioxidantes presentes nas amostras de captarem o radical livre DPPH e pelo poder quelante da amostra através do método de FIC. A dosagem de fenóis totais e taninos foi realizada pelo método de Folin-Ciocalteau e a dosagem de cumarinas pelo método de acetato de chumbo. O perfil químico da espécie C. tapia foi avaliado através de testes colorimétricos e de precipitação. A atividade antimicrobiana e moduladora do extrato bruto hidroalcólico de C. tapia foi avaliada frente à cepas multirresistentes de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, todas isoladas de feridas cirúrgicas. Das 24 espécies vegetais descritas em estudo etnobotânico prévio, com uso popular para tratar inflamações, 20 já tiveram sua atividade antimicrobiana avaliada e comprovada por pelo menos um estudo, o que reforça a teoria de que uma espécie utilizada como antiinflamatória pode ser também possuidora de atividade antimicrobiana. No estudo etnobotânico a espécie com maior saliência foi Myracrodruon urundeuva (Aroeira), sendo esta a que obteve maior conteúdo de fenóis totais e taninos. Já em relação à dosagem de cumarinas, a espécie que teve um maior conteúdo deste metabólito foi Guapira laxa (Piranha), sendo essa espécie uma das que obteve a menor saliência. Quanto à atividade antioxidante de captura de radicais livres, a espécie que apresentou maior atividade à uma concentração de 25 μg/mL foi Anadenanthera colubrina (angico). Handroanthus impetiginosus (Ipê-roxo) foi a espécie que apresentou maior atividade quelante, sendo capaz de quelar 44,49% do íon ferro II a uma concentração de 400 μg/mL. Verificamos que os parâmetros químicos avaliados nesse estudo não possuem nenhum tipo de correlação com o índice etnobotânico “saliência”. Dentre as espécies estudadas, selecionamos C. tapia para realizar estudo de atividade antimicrobiana e moduladora de antibiótico. No ensaio fitoquímico detectou-se a presença de fenóis e alcalóides. O extrato modulou a resistência ao antibiótico Amicacina frente a S. aureus sinergicamente, diminuindo o MIC de 312,5 para 39,06 μg/mL (redução de 87,5%). O mesmo aconteceu para o antibiótico Gentamicina, tanto frente a S. aureus, quanto frente a P. aeruginosa. Em ambos os casos o MIC reduziu de 312,5 para 78,12 μg/mL, sendo esta uma redução de 75%. Este estudo forneceu valiosas informações sobre as plantas estudadas permitindo o direcionamento de futuras pesquisas com estas espécies da Caatinga.
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Efecto de una pectina comercial sobre la interacción entre proantocianidinas de semilla de Vitis vinifera var. Carménère y la proteína salivalMartínez Fuentealba, Mario Alejandro January 2012 (has links)
Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / Las proantocianidinas son compuestos fenólicos presentes en frutas y bebidas tales como el vino tinto. Estas interactúan con las proteínas de la saliva en la cavidad oral generando agregados insolubles los que al precipitar obstruyen la lubricación de las superficies orales causando una sensación de sequedad, rugosidad y aspereza conocida comúnmente como astringencia. Esta interacción es altamente dependiente del pH del medio, contenido de alcohol, tipo de proteína, concentración y tamaño de las proantocianidinas y de la presencia de polisacáridos en solución.
En este estudio se evaluó el efecto de un polisacárido comercial de origen vegetal (pectina), sobre la interacción entre proantocianidinas de semilla de Vitis vinifera var. Carménère y la proteína salival mediante ensayos de difusión y precipitación sobre una membrana de celulosa.
Según las condiciones descritas en este estudio, la pectina tiene afinidad e interactúa tanto con las proteínas de las distintas fracciones de la saliva humana (fracción difusible y no difusible), como con las proantocianidinas de Vitis vinifera var. Carménère
Por su parte, al mezclar pectina con extracto de proantocianidinas de semilla Vitis vinifera var. Carménère y adicionar saliva después de 10 min, se observó que la pectina interfiere con la interacción entre las proantocianidinas de semilla y las proteínas salivales, fenómeno que se asociaría a la disminución de la astringencia.
Al variar el orden de los factores y mezclar extracto de proantocianidinas de semilla de Vitis vinifera var. Carménère con saliva y posteriormente adicionar pectina, esta interactúa con agregados de proantocianidinas de semilla/proteínas salivales formando complejos ternarios de pectina/proantocianidinas de semilla/proteína salival con características hidrofílicas.
A partir de lo anteriormente expuesto, es posible concluir que la pectina modifica la interacción entre las proantocianidinas de semilla Vitis vinifera var. Carménère y la proteína salival.
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Análise química e biológica dos constituintes fenólicos de Croton celtidifolius baillHorst, Heros 23 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-graduação em Química, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:40:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1
269342.pdf: 759986 bytes, checksum: 22cf26fbffe3b42c64a0c6eb8c01e739 (MD5) / O estudo fitoquímico das cascas de Croton celtidifolius foi realizado com o objetivo de investigar a composição química e avaliar as frações obtidas quanto às atividades antioxidante, antinociceptiva e vasorelaxante. O particionamento do extrato bruto, originou as frações clorofórmio (Fr.-CHCl3), acetato de etila (Fr.-AcOEt), acetona (Fr.-acet) e resíduo (Res.). As Fr.-AcOEt e Fr.-acet foram submetidos ao procedimento específico para isolamento de compostos fenólicos, originando frações ricas em proantocianidinas FRP. Estas frações foram cromatografadas em coluna flash, levando ao isolamento e identificação de catequina (A), galocatequina (B), catequina-(4a-8)-epicatequina (C) e proantocianidinas poliméricas (D). A FRP foi analisada em eletroforese capilar revelando sua composição em proantocianidinas. Os teores de compostos fenólicos totais, de proantocianidinas totais e de flavonódes variaram de 257,75 a 473,82 mg /g, 3,45 a 75,65 % e de 2,06 a 7,79 mg/g, respectivamente. Com relação ao potencial antioxidante (teste do DPPH), a catequina foi o composto mais ativo. FRP apresentou excelente atividade antinociceptiva com inibição de 83% e 99,5% da nocicepção induzida pela formalina, respectivamente, com aumento significativo da latência dos animais quando avaliados no teste da placa quente, comparável a morfina. A FRP mostrou um importante efeito vasorelaxante no modelo de aorta isolada de ratos. Os resultados obtidos demonstram que a espécie C. celtidifolius é uma boa fonte de compostos bioativos, dentre os quais encontram-se flavan-3-ol, que possuem atividade antioxidante.
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Efeito de diferentes agentes naturais biomodificadores na adesão à dentina hígida e afetada por cárie / Influence of plant-derived biomodification agents on bonding to sound and caries-affected dentinLemos, Marcelo Victor Sidou 19 February 2016 (has links)
LEMOS, M. V. S. Efeito de diferentes agentes naturais biomodificadores na adesão à dentina hígida e afetada por cárie. 2016. 52 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-04-18T13:35:35Z
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Previous issue date: 2016-02-19 / Minimally invasive dentistry has been prioritizing more conservative cavity preparations. For this reason, the employment of strategies as dentin biomodification, to ameliorate the mechanical properties of resin-dentin interface and to protect collagen fibrils from biodegradation, is highlighted as a promising technique. The present study aimed to evaluate the influence of different natural biomodification agents on resin-dentin bond strength, nanoleakage and micropermeability at sound and caries-affected dentin. The variable investigated were (1) dentin pre-treatment: absolute ethanol (control), proanthocyanidins (PACs) 2%, cardol (from cashew nut shell liquid) 2%, cardol-methacrylate 2%, cardanol-methacrylate 2% and epigallocatechin-3-gallate (EGCG) 0.1%; and (2) dentin substrate: sound dentin and artificial caries-affected dentin. Microtensile bond strength (n=6), dentin micropermeability (n=3) and interfacial nanoleakage (n=6) were assessed on a universal testing machine, confocal-laser scanning microscope and scanning electron microscope respectively. The bond strength on sound dentin was higher by using cardol-methacrylate and EGCG. On caries-affected dentin, pre-treatment using cardol-methacrylate achieved the highest bond strength. All biomodification agents reduced the nanoleakage in comparison with control, except cardanol-methacrylate. On sound dentin, the micropermeability was decreased when using cardanol- and cardol-methacrylate. Cardol-methacrylate has shown to be a promising biomodification agent thereby improving dentin bonding at both sound and caries-affected dentin. / A Odontologia restauradora minimamente invasiva tem priorizado cavidades mais conservadoras. Por isso o uso de estratégias como a biomodificação da dentina com o intuito de melhorar as propriedades mecânicas da camada híbrida e de proteger as fibrilas colágenas da degradação, tem ganhado cada vez mais destaque. O presente estudo tem o objetivo de avaliar a influência de diferentes agentes naturais de biomodificação sobre a resistência de união (RU) resina-dentina, nanoinfiltração e micropermeabilidade em dentina hígida e afetada por cárie. Os fatores sob investigação são (1) pré-tratamento dentinário: álcool absoluto (controle negativo), proantocianidinas a 2%; cardanol-metacrilato a 2%, cardol a 2%, cardol-metacrilato a 2% e epigalocatequina-3-galato (EGCG) a 0,1%; (2) tipo de substrato dentinário: dentina hígida e dentina afetada por cárie artificialmente. Microtração (n=6), micropermeabilidade dentinária (n=3) e nanoinfiltração interfacial (n=6), foram avaliados em uma máquina de ensaios universais, microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura, respectivamente. Os valores de RU em dentina hígida foram superiores nos grupos tratados com cardol-metacrilato e EGCG. Já em dentina afetada por cárie, o grupo pré-tratado com cardol-metacrilato apresentou resultados superiores aos demais grupos. Todos os grupos de dentina hígida apresentaram redução de nanoinfiltração em relação ao controle, exceto o grupo pré-tratado com cardanol-metacrilato. Para selamento, em dentina hígida, os grupos cardol-metacrilato e cardanol-metacrilato apresentaram os melhores resultados. O cardol-metacrilato mostrou-se como um agente promissor para biomodificação dentinária tanto em dentina hígida como em dentina afetada por cárie.
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Caracterización química de vinos del cv. carménère producido a partir de uvas cosechadas en distintos momentos de la maduración / Chemical characterization of wines from cv. carménère produced from grapes harvested at differents moments of the maturityGonzález Munita, Bernardita María January 2013 (has links)
Memoria para optar al título de:
Ingeniero Agrónomo / En este estudio se evaluó el efecto del momento de cosecha sobre la concentración y
composición de compuestos fenólicos en vinos del cv. Carménère. Para esto se realizaron
ensayos independientes entre sí, de los cuales tres de ellos pertenecieron a distintas zonas
del Valle de Colchagua y un cuarto ensayo se realizó en el Valle de Curicó.
Los diversos ensayos constaron de 3 a 5 fechas de cosecha, donde en cada fecha se
realizaron análisis espectrofotométricos y de cromatografía líquida de alta eficacia (HPLCDAD).
Los
valores obtenidos en los análisis químicos y de las concentraciones en las distintas
fracciones de proantocianidinas en los cuatro ensayos, no presentaron una tendencia común
de evolución.
Sin embargo, los resultados muestran que la composición fenólica está estrechamente
influenciada por los distintos momentos de cosecha, debido a que cada ensayo se comportó
de manera diferente. / The effect of harvest date on the concentration and composition of the phenolic compounds
was evaluated in wines from Carménère cultivar. For this study four independent assays
were performed, three of them were done in different areas of Colchagua Valley and the
fourth one was perfomed in the Curico Valley.
The different assay had 3 or 5 harvesting dates, in which spectrophotometric analysis and
high performance liquid chromatography (HPLC- DAD) were performed to each sample.
The values obtained from the chemical analysis and also the concentrations of the different
fractions of proanthocyanidin along the four assay of this study, did not present a common
evolution tendency.
Nevertheless, the results show that the phenolic composition is strongly influenced by the
different harvesting dates, because each assay behaved differently.
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Efecto del pH sobre la interacción proantocianidina-proteína salival y su relación con la sensación de astringenciaLira Olivares, Christian Javier January 2014 (has links)
Tesis para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo y al Grado de Magíster en Enología y Vitivinicultura / La astringencia es una sensación táctil provocada al consumir algunos alimentos como frutas o algunas bebidas, como el vino, asociados a la presencia de polifenoles en su composición. Estas moléculas pueden interactuar con las proteínas de la saliva para producir agregados insolubles. Como consecuencia de esto, la lubricación de la cavidad bucal se pierde generando una sensación que se percibe en la boca como de sequedad o arrugamiento. Un numero de diferentes factores pueden afectar aquellas interacciones, tales como la composición y contenido de polifenoles, el alcohol, polisacáridos, ácidos orgánicos, entre otros. Sin embargo, varios informes han señalado al pH como el factor principal que afecta esas interacciones. En el presente estudio se evaluó el efecto del pH en el rango en el que se encuentran los vinos (2.8-4.0) sobre la interacción entre las proteínas salivares y las proantocianidinas de semillas de Carménère, mediante ensayos de difusión y precipitación en membranas de celulosa. Ambos ensayos fueron relacionados con la percepción de astringencia determinada por un panel sensorial. Los ensayos se realizaron a los pH que normalmente se producen los vinos (2.8, 3.2, 3.6, 4.0), junto con un control a pH 7.0. Los resultados indican que cambios de pH dentro de ese rango podrían cambiar significativamente el modo de difusión y la solubilidad de las proteínas salivares, es decir, a pH más bajos existe una interacción mayor entre proantocianidinas y proteínas salivares, lo que llevaría a una mayor percepción de astringencia. / Astringency is a tactile sensation elicited by some foods, like fruits, and some drinks, like wine, associated to the presence of polyphenols in their composition. These molecules can interact with the salivary proteins to produce insoluble aggregates. As a consequence of this, lubrication of the oral cavity is lost and a sensation of dryness and wrinkling mouth feel is perceived. A number of different factors may affect those interactions, such as the composition and concentration of polyphenols, alcohol, polysaccharides and organic acids, among others. Several reports have pointed to pH as a main factor affecting those interactions. In the present study the effect of changes within a narrow range of wine pH (2.8-4.0) on the interactions between salivary proteins and proanthocyanidins of Carménère seeds was assessed by diffusion and precipitation assays on cellulose membranes. Both assays were contrasted against astringency perception as determined by a sensory panel. Trials were conducted at pH usually occurring in wines (2.8, 3.2, 3.6, 4.0), together with a control condition at pH 7.0. We observed that changes within that range of pH could change significantly the mode of diffusion and solubility of the salivary protein, that is, at lower pH there is a higher interaction between proanthocyanidin and salivary proteins, which would lead to a greater sensation of astringency.
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Efecto de distintos niveles de déficit hídrico sobre la concentración y composición química de proantocianidinas en pieles de bayas de Vitis vinifera L. cv. CarménèrePalacios Peralta, Francisca Valentina January 2015 (has links)
Tesis para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo y al Grado de
Magister en Enología y Vitivinicultura / Las proantocianidinas corresponden a polifenoles de alta relevancia en las características
organolépticas de los vinos, pues participan en las propiedades de astringencia, amargor y
copigmentación. Se ha descrito que diversos factores ambientales y manejos culturales
afectan la biosíntesis de estos compuestos en las bayas de uva. Así, se ha demostrado que la
disponibilidad de agua afecta la concentración de proantocianidinas en los hollejos de las
bayas. Sin embargo, limitada información existe acerca del efecto de la disponibilidad hídrica
sobre la composición de proantocianidinas y no existe ningún estudio realizado con la cepa
Carménère. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de distintos niveles de déficit
hídrico sobre la composición de las proantocianidinas durante la maduración de pieles de
bayas de Carménère. Los tratamientos de distintos regímenes de riego aplicados a las plantas
fueron (T1) 0,8 mm h
-1
; (T2) 1,6 mm h
-1
; (T3) 3,2 mm h
-1
; (T4) 4,8 mm h
-1
, mientras que
los potenciales xilemáticos promedio fueron -1,1MPa (± 0,04), -1,0 MPa (± 0,05), -0,9MPa
(±0,06) y -0,83MPa (± 0,05) respectivamente. No se encontraron diferencias significativas
en el peso de baya y hollejo, así como tampoco en los valores de taninos totales, grado medio
de polimerización y porcentaje de galoilación. No obstante, diferencias en la concentración
de las fracciones oligo y poliméricas fueron reportadas entre los distintos tratamientos,
mientras que el porcentaje de (-)-epicatequina-3-O-galato varió puntualmente entre los
tratamientos durante el estudio. En conclusión, la disponibilidad hídrica afecta ciertos
parámetros de la composición de proantocianidinas de piel presentes en uva vinífera. / Proanthocyanidins are polyphenols of high relevance for the wine organoleptics
characteristics, being that they partipate on astringency, bitterness and copigmentation
properties. It has been described that environmental factors and cultural practices affect the
biosynthesis of these compounds in the grape of vines. This way it has been shown that the
water availability affect the proanthocyanidins concentration of berry skin. Nevertheless, the
information about how the water stress affect the proanthocyanidin composition is limited
and there is not data about Carménère strain. This investigation's purpose is to determine the
effect of differents levels of water déficit on the proanthocyanidins's skin composition during
berries ripening. The differents treatments of irrigation regimes applied to the vines where
(T1) 0,8 mm h-1; (T2) 1,6 mm h-1; (T3) 3,2 mm h-1; (T4) 4,8 mm h-1, and the mean xylem
potential where -1,1MPa (±0,04), -1,0 MPa (± 0,05), -0,9MPa (±0,06) y -0,83MPa (± 0,05),
respectively. Non significant differences where found about berry weight and the skin
weight. Neither was there differences on total tannins, mean degree of polymerization and
galloylation percentage. However, differences on the concentration of oligomeric and
polimeric fractions were reported between treatments. The (-)-epicatechin-3-O-gallate
percentage various promptly between treatments during the study. In conclusion, the water
availability affects the composition of the skin of some proanthocyanidins in wine grapes.
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Determinación del efecto del extracto seco estandarizado de Vitis vinifera en la disfunción endotelial inducida por Clonixinato de lisinaTorres Castro, Rodrigo, Vera Uribe, Roberto January 2003 (has links)
Las células endoteliales (CE) son responsables de la síntesis y liberación de sustancias vasoactivas ante un estímulo neuronal, hormonal o físico. Procesos patológicos, factores ambientales o el envejecimiento del individuo, dañan las CE y alteran su función. Se denomina disfunción endotelial (DE) a la capacidad disminuída de las CE de inducir vasorrelajación ante el estímulo agonista colinérgico. Los AINEs son fármacos antiinflamatorios, analgésicos y antipiréticos que bloquean la COX. Experimentos preliminares han mostrado que el clonixinato de lisina (Clx), un AINE antranílico, induce DE aguda en anillos de aorta in vitro, por un mecanismo no dilucidado. El extracto de Vitis vinifera (EVv) es rico en flavonoides, compuestos con acción antioxidante. Se intenta determinar si el EVv es capaz de prevenir in vitro la DE inducida por Clx. Se montaron anillos aórticos de ratas en baños termorregulados para la determinación isométrica de fuerza, asignándose al azar en tres grupos: control, grupo 1 (G1) y grupo 2 (G2). El G1 se incubó con 100 µM Clx y el G2 con 5,35 ng/mL EVv junto con 100 µM Clx. Determinamos y comparamos la DE en los anillos aórticos precontraídos con fenilefrina respecto del control. El G1 mostró una notable DE la que fue significativamente (p< 0,05) prevenida por la incubación con EVv. Los resultados obtenidos muestran que el EVv puede prevenir la DE inducida por Clx in vitro. Si bien, se requieren otros experimentos para explicar el mecanismo por el cual Clx induce DE y de prevención del EVv, este fitofármaco se perfila como una alternativa de protección vascular para los pacientes que utilizan crónicamente el Clx.
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Obtenção de proantocianidinas do barbatimão e avaliação da toxicidade sobre células de tumor mamário humano MDA-MB-435 e MCF-7SANTOS, Lívia Mara 18 February 2009 (has links)
O objetivo deste trabalho foi isolar proantocianidinas de folhas de barbatimão e avaliar a
atividade citotóxica para células de tumor mamário humano, MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435
(ER-). As proantocianidinas foram isoladas da fração aquosa de folhas de barbatimão,
utilizando-se cromatografia em coluna de Sephadex LH-20 e metanol (10-100% ) e acetona
(70%) como eluentes. A presença de proantocianidinas, nas frações obtidas, foi monitorada
por cromatografia de camada delgada e esta revelou que a fração eluída com metanol 100%
(usada nos experimentos) apresentou o maior teor de proantocianidinas. A despolimerização
ácida permitiu quantificar as procianidinas na amostra e a análise por HPLC revelou a
presença de ácido gálico, procianidina dimérica B1 e (-)-epicatequina-3-O-galato. A fração
apresentou atividade antioxidante, sendo que a capacidade antioxidante total foi de 470,28 ±
14,36 mg ácido ascórbico/g de fração. A atividade seqüestrante de radicais livres DPPH 50%
foi de 12 μg/mL e a atividade inibidora máxima da oxidação de proteínas foi obtida com 50
μg/mL de fração. A fração apresentou atividade citotóxica para células de tumor mamário
MCF-7 e MDA-MB-435. O tratamento das células com a fração aumentou a atividade
redutora de MTT, o que indica aumento da viabilidade celular. Entretanto, a análise
morfológica revelou intensa vacuolização citoplasmática dependente da concentração da
fração. Os vacúolos acumularam MTT, indicando tratarem-se de vacúolos autofágicos. Outras
alterações morfológicas observadas com o tratamento foram a perda da morfologia celular
típica, condensação da cromatina (principalmente formação de núcleo picnótico), alterações
na membrana plasmática e após 48 h de tratamento houve marcante diminuição do tamanho
das células. Não foi observado o padrão de DNA escada característico de apoptose nos
diversos tratamentos. Os resultados parecem indicar que a fração isolada pode induzir
autofagia nos dois tipos celulares estudados. A autofagia pode potencializar os efeitos
antitumorais de quimioterápicos, o que pode ser útil na terapia contra o câncer e as folhas de
barbatimão parecem ser uma valiosa fonte de substâncias bioativas. / The aim of the present study was to isolate proanthocyanidins from barbatimão leaves and
evaluate its cytotoxic activity to MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-) cells. The
proanthocyanidins were isolated from the aqueous fraction of barbatimão leaves using
Sephadex LH-20 column chromatography and methanol (10-100%) and acetone (70%) as
eluents. The proanthocyanidins presence in the obtained fractions was monitored by thin layer
chromatography and it revealed that the methanol 100% eluted fraction (used in the
experiments) exhibited the highest content of proanthocyanidins. The acid depolimerization
allowed quantifying the procyanidins in the sample and the HPLC analysis revealed the
presence of gallic acid, procyanidin dimmer B1 and (-)-epicatechin-3-O-gallate. The fraction
exhibited antioxidant activity, being the total antioxidant capacity 470.28 ± 14.36 mg ascorbic
acid/g of fraction. The 50%DPPH free radical scavenging activity was obtained with 12 μg/ml
and the maximum protein oxidation inhibitory activity was achieved with 50 μg/ml fraction.
The fraction was cytotoxic to breast cancer MCF-7 and MDA-MB-435 cells. Cell fraction
treatment enhanced the reducing MTT activity that indicates increased cell viability.
However, the morphological analysis showed intense cytoplasmic vacuolization in a dosedependent
manner. The vacuoles accumulated MTT, which seems to be consistent with
autophagic vacuoles. Other morphological changes observed after cell treatment include cell
lost of typical morphology, chromatin condensation (mainly pyknosis), membrane blebbing
and after 48 h-treatment there was prominently cell shrinkage. No DNA-laddering formation,
typical of apoptosis, was obtained after cell treatment. The results seem to indicate that the
isolated fraction could induce autophagy in both studied breast cancer cell lines. Autophagy
could enhance the effects of antitumor chemotherapy that can be useful in anti-cancer therapy and barbatimão leaf seems to be a valuable source of bioactive substances.
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