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Aplicação da espectrometria de massas na derreplicação de extratos brutos produzidos por actinobactérias isoladas da rizosfera do milho (Zea mays L.) / Mass spectrometry applied to the dereplication of crude extracts from rhizosphere actinomycetesAna Flávia Canovas Martinez 15 April 2009 (has links)
O objetivo deste trabalho é isolar e identificar os compostos que apresentem atividade fitotóxica presente nos extratos produzidos por actinobactérias isoladas da rizosfera do milho. Para isso foram realizados estudos de derreplicação, baseados nas informações estruturais obtidas por diversas técnicas analíticas. Em especial foi aplicada a espectrometria de massas acoplada a técnicas de purificação, como HPLC e UPLC, com a finalidade de acelerar as análises dos estudos de caracterização estrutural. Com os resultados obtidos foi possível concluir que os extratos oriundos de processos fermentativos apresentam potencial aplicação herbicida, uma vez que mais de 60% das amostras ensaiadas apresentaram atividade fitotóxica. Além disso, foi possível identificar nestes extratos vários compostos com atividades biológicas e estruturas diversas, já descritos na literatura. No extrato da actinobactéria 36 (50 PL) foram encontradas as leucinostatinas que apresentam diversas atividades biológicas como antiviral e antitumoral, além da atividade fitotóxica. Já no extrato da actinobactéria 17 (39 PL) foram encontradas as julicromas, descritas como pigmentos intensos e em geral amarelos, com atividade antibiótica, porém não apresentaram atividade fitotóxica. O composto ativo presente neste extrato pertence à classe das luminacinas, que inibem a formação de tubos capilares, interrompendo o ciclo celular, podendo ser utilizada no tratamento de angiogêneses. A luminacina C, composta por dois epímeros (C1 e C2), apresentou excelente atividade fitotóxica que foi verificada nos bioensaios de fitotoxicidade realizados com Lemna minnor. / Microorganisms, in particular actinomycetes are known to produce a vast number of bioactive secondary metabolites of interesting pharmaceuticals and agrochemical industry. Bioherbicides, especially the micoherbicides, which are highly effective on weed control and are environmentally friendly as well, are very attractive for research and application. This means that direct metabolite profiling techniques such as direct injection mass spectrometry or LC-MS/MS can easily be used for chemotyping/metabolomics of strains from culture collections. In this report we discuss metabolomics as part of intelligent screening for the discovery of phytotoxic compounds when used in combination with modern methods for dereplication. As result, two microorganisms were studied and 23 metabolite peaks were identified. The metabolite profiling was then conducted using the m/z value, and MS/MS fragmentation pattern analyses. Among the peaks, one unknown compound peak was identified and it was analogous to the Luminacins series. In order to render this approach in a more rapid and efficient way, the dereplication of crude microbial extracts with LC-hyphenated techniques (LC/UV-DAD and LC/MS) represented a strategic element to avoid finding known constituents and to target the isolation of new bioactive compounds. The development of simple and rapid phytotoxic bioassays which employed Lemna minor was also crucial to find the active principles efficiently.
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Caracterização e controle de qualidade de própolis proveniente de diversas regiões do Brasil / Identification and quality control of propolis from several regions of BrazilAdriana Hitomi Matsuda 23 March 2006 (has links)
A própolis é uma resina de coloração e consistência variada coletada por abelhas da espécie Apis Mellifera de diversas partes da planta como brotos, botões florais e exsudados resinosos, sendo transportados para a colméia com a finalidade de defesa e vem se destacando por suas atividades terapêuticas, como atividade antimicrobiana, antiinflamatória, cicatrizante, anticaríogênica e anticancerígena. Estudos realizados com a própolis brasileira mostraram a presença de muitos compostos fenólicos, sendo o mais recente, a identificação de derivados prenilados do ácido cumárico. Dentre estes, o mais estudado é o ácido 3,5-diprenil-4hidroxicinâmico (Artepillin-C), separada da própolis produzida em áreas cuja flora é rica em espécies de Baccharis. A sua quantificação tem se tornado um fator importante como indicador da qualidade da própolis brasileira. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento e a validação do método de determinação de Artepillin-C, assim como a caracterização e quantificação dos principais parâmetros relacionados ao controle de qualidade da própolis preconizada pela legislação brasileira vigente, foram realizadas análise de: umidade, cinzas, teor de cera, teor de massa mecânica, teor de sólidos solúveis em etanol, índice de oxidação, f1avonóides totais e fenólicos totais. O trabalho foi complementado com análise polínica e determinação da atividade antioxidante Amostras de própolis foram obtidas de apicultores e entrepostos totalizando 33 amostras procedentes das regiões Nordeste, Centro-Oeste, Sudeste e Sul do Brasil, no período de 2003 a 2005. As amostras de própolis analisadas apresentaram resultados, na quase totalidade, de acordo com os limites estabelecidos pelo Ministério da Agricultura. A maioria das amostras apresentou alta atividade antioxidante inibindo a oxidação da reação acoplada de β-caroteno a ácido linoléico em torno de 86,0%. O método de análise de Artepillin C atendeu a todos os parâmetros preconizados para a validação do método cromatográfico (linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação) podendo ser recomendado para análise de rotina em laboratórios de controle de qualidade. A análise estatística mostrou uma forte correlação entre os seguintes parâmetros: cinzas e massa mecânica; compostos fenólicos e solúveis em etanol assim como os compostos fenólicos e atividade antioxidante. Também foi constatada uma variação nos valores dos outros parâmetros analisados em função da procedência das amostras de própolis. / Propolis is a resin of varied color and consistency collected by honeybee, Apis Mellifera, from several parts of the plant such as sprouts, f10wer buds and resinous exsudatos, being transported to the hive with the intent of defending and it has become really popular for its therapeutic properties, such as antimicrobial, anti inflammatory, healing anti-carcinogenic and anti-cancerigenous properties. Studies performed with the Brazilian propolis showed the presence of several phenolic compounds, as the most recent brings the identification of prenyl derivative of coumaric acid. Among them, the most studied one is 3,5-diprenyl-4-hydroxycinnamic acid (Artepillin-C), isolated from the propolis produced in areas which flora is rich in Baccharis species. Its quantification has become an important factor as indicator of Brazilian propolis quality. The aim of this study was to develop and validate a method to determine Artepillin-C, as well the identification and quantification of main parameters related to quality control of propolis forecasted in the current Brazilian regulation (moisture, ashes wax content, mechanic matter, content of solid soluble in ethanol, oxidation rate, total f1avonoid and total phenolic).The polinic studies and antioxidant activity determination were also performed to complement this work. Propolis samples were obtained from beekeepers and warehouses summing up 33 samples from the Northeast, Southeast, Mid-West and South of Brazil from 2003 to 2005. The propolis samples studied presented results which were almost all in accordance to the set limits by the Brazilian Agriculture Department. Most samples presented high antioxidant activity preventing oxidation from the coupled reaction of βcarotene to linoleic acid around 86,0%. The analysis method for Artepillin C addressed all the forecasted parameters for the validation o f the chromatographic method (linearity, precision, accuracy, detection limit and quantification limit) as it can be recommended for the routine analysis in labs to control quality. The statistics showed a strong relationship between the following parameters: ashes and mechanic matter; phenolic compounds and soluble in ethanol as well as phenolic compounds and antioxidant activity. It was also observed a variation in the figures for other studied parameters due to the origin of propolis samples.
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A distribuição de lignóides e policetídeos nos frutos de Virola elongata (Benth.) Warb. (Myristicaceae) / Distribution of lignoids and poliketides in fruits of Virola elongata (Benth.) Warb. (Myristicaceae)Massuo Jorge Kato 30 January 1989 (has links)
Este trabalho descreve os isolamentos e as determinações estruturais dos metabólitos secundários das diferentes partes dos frutos (pericarpos, arilos, tegumentos e amêndoas) de Virola elongata. 0 material foi coletado em Humaitá (AM) e no Km 96 da Rodovia Santarém-Cuiabá (PA). Os constituíntes químicos foram isolados por cromatografias de adsorção e tiveram suas estruturas identificadas ou determinadas por técnicas espectrométricas usuais (IV, UV, RMN e EM). As configurações absolutas dos metabólitos foram deduzidas a partir de medidas espectropolarimétricas, ou auxiliadas pela obtenção de derivados mais informativos. As substâncias foram agrupadas nas seguintes subclasses: lignanas furofurânicas [(+)-sesamina (LF-1), (+)-epifargesina (LF-2), (+)-eudesmina (LF-3), (+)-fargesina (LF-4), (+)-filigenina (LF-5) e (+)-epieudesmina (LF-6)]; lignanas tetraidrofurânicas [(+)-magnostelina-A (LT-1), (+)-magnostelina-C (LT-2), (±)-4\'-metil-5\'-metoxi-lariciresinol (LT-3), (±)-4,4\'-dimetil-5\'- metoxi-lariciresinol (LT-4) e (±)-4-4\'-dimetil-5\'-hidroxi-5-metoxi-lariciresinol (LT-5)]; Lignana diarilbutanólica [(-)-4,4\'-dimetil-5-metoxi-secolariciresinol (LD-1)]; e lignanas dibenzilbutirolactâmicas [(-)-hinokinina (DB-1), (-)-kusunokinina (DB-2), (-)-dimetilmatairesinol (DB-3), (-)-metiltujaplicatina (DB-4), (-)-dimetil-5-hidroximatairesinol (DB-5) e (-)-dimetil-5-metoxi-matairesinol (DB-6)]; neolignanas diarilbutânicas [ND-1, ND-2 e ND-3], neolignana ariltetralínica: galbulina (NA-1) e neolignanas ariltetralônicas [(-) e (+)-oxoisogalcatina (NA-2), (+)-hidroxi-isogalcatina (NA-3), diidroxi-oxoisogalcatinas epiméricas inéditas (NA-4 e NA-5), NA-6, NA-7, (+)-otobanona (NA-8), hidroxi-otobanonas epiméricas (NA-9 e NA-10)]; neolignanas secoariltetralínicas (ND-5 e seu acetato ND-6]; uma neolignana dimérica [NA-11] e ainda diversos policetídeos acilresorcinólicos e acifloroglucinôlicos [AR-1 a AR-8]. 0 padrão 3,4-dioxigenado nos anéis aromáticos é predominante na maioria dos lignóides isolados. 0 padrão 3,4,5-trioxigenado observado nos anéis aromáticos de lignanas dibenzilbutirolactônicas (DB-4 e DB-5), diarilbutanólica (LD-1) e tetraidrofurânicas (LT-3, LT-4 e LT-5) e, o padrão 2,4,5-trioxigenado observado para neolionanas ariltetralônicas (NA-6, NA-7), conferem para algumas o caráter inédito. A maior variação no padrão de substituição de esqueletos foi observada para neolignanas ariltetralônicas, o que motivou a elaboração de experimentos especíificos em RMN- 1H (ENO e uso de reagente de deslocamento) associados a análise dos dados de RMN- 13C para proposições de constituições e de configurações relativas. Foi constatada a presença das neolionanas NA-2, NA-9 e NA-10 nos extratos dos tegumentos e de seus enantiômeros nos extratos das amêndoas de V. elongata (PA). Algumas classes de substâncias isoladas foram correlacionadas biossinteticamente a partir de suas configurações absolutas. A quantificação aproximada das substâncias identificadas foi efetuada, através das quantidades isoladas e análises de espectros de RMN-1H de frações impuras. Nos pericarpos e arilos foi constatada a presença exclusiva e alternada de lignanas furofurâanicas e lignanas dibenzilbutirolactônicas entre os frutos de diferentes localidades. Essas lignanas, também presentes nos tegumentos, ocorrem em maior teor com maior diversidade de substituição nos anéis aromáticos, mas são completamente ausentes nos extratos das amêndoas, onde o perfil é baseado na presença de neolignanas ariltetralônicas e policetídeos. Os policetídeos com anéis aromáticos di- e triidroxilados foram isolados, principalmente, dos tegumentos e amêndoas. A análise do extrato de uma das amêndoas foi baseada na análise conjunta do espectro de RMN-1H, dos cromatogramas em camada delgada e dos dados obtidos por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. A metodologia foi tentativamente aplicada á análise das diversas partes dos frutos de V. sebifera coletada em Roraima. Os dados obtidos sobre as estruturas e distribuição dos metabólitos são confrontados com os descritos na literatura para espécies taxonomicamente afins. / This work describes isolations and structural determinations of secondary metabolites in parts of fruits (pericarps, arils, teguments and kernels) from Virola elongata. Material was collected in Humaita (AM) and Km 96 of Santarém-Cuiabá Road (PA). The chemical constituents were isolated by chromatographic processes and their structures identified or elucidated by usual spectrometric techniques (IR, UV, NMR, and MS). Absolute configuration were deduced through spectropolarimetric measures, or based on data from derivatives. The compounds were classified in the following classes: furofuran lignans [(+)-sesamin (LF-1), (+)-epifargesin (LF-2), (+)-eudesmin (LF-3), (+)- fargesin (LF-4), (+)-phylligenin (LF-5) and (+)-epieudesmin (LF-6)]; tetrahydrofuran lignans [(+)-magnostelin-A (LT-1), (+)-magnostelin-C (LT-2), (±)-5\'-methox y -4\'-methyl-lariciresinol (LT-3), (±)-5\'-methoxy-4,4\'-dimethyl-lariciresinol (LT-4) and (±)-5\'-hydroxy-5-methoxy-4,4\'-dimethvl-lariciresinol (LT-5)]; diarylbutanol lignan [(-)-4,4\'-dimethvl-5-methoxy-secolariciresinol (LD-1)]; and dibenzylbutyrolactone lignans [(-)-hinokinin (DB-1), (-)-kusunokinin (DB-2), (-)-dimethylmatairesinol (DB-3), (-)-methylthujaplicatin (DB-4)]; diarylbutane neolignans (ND-1, ND-2 and ND-3); aryltetralin neolignans [galbulin (NA-1) and aryltetralone neolignans [(-)- and (+)-oxoisogalcatin (NA-2), (+)-hydroxyisogalcatin (NA-3), unpublished epimeric dihydroxy-isogalcatins (NA-4 and NA-5), (+)-otobanone (NA-8), epimeric hydroxy-otobanones (NA-9 and NA-10)]; secoaryltetralin neolignans [ND-5 and its acetate (NA-6).1; dimeric neolignan (NA-11) and several acylresorcinol and acylphloroglucinol polyketides (AR-1 to AR-8). The 3,4-dioxygenated pattern was observed in aromatic rings of the majority isolated lignans. The 3,4,5-trioxygenated pattern observed in dibenz y lbutyrolactone lignans (DB-4 e DB-5), diarylbutanol (LD-1), and tetrahydrofuran lignans (LT-3, LT-4, LT-5), and the 2,4,5-pattern observed in aryltetralone neolignans, confer to some of them the unusual character. The main variation in the substitution pattern was observed in aryltetralone neolignans, which needed more detailed study involving 1H-NMR experiments (NOE and LIS reagent) and refined analysis of 13C-NMR data. It was observed the presence of NA-2, NA-9 and NA-10 neolignans in teguments and its enantiomers in kernels of fruits from Virola elongata (PA). The biosynthetic relationships among several classes of lignoids are discussed under their absolute configurations. The near concentration of identified compounds was obtained from isolated quantities and analysis of 1H-NMR spectra of mixtures. In pericarps and arils was determined the exclusive and alternated presence of furofuran and dibenzylbutyrolactone lignans between fruits from different localities. These last two subclasses, also present in teguments, occur in higher concentrations and substitution diversifications in aromatic rings, but are completely absent in kernels whose profile is based on the presence of aryltetralone lignans. The poliketide with di- and trihydroxylated aromatic rings were isolated mainly from teguments and kernels. The analysis from kernels extract was performed by combined analysis involving 1H-NMR spectra, thin layer chromatography, and gas chromatography coupled to mass spectrometry. This methodology was tested to analyse the parts of fruits from Virola sebifera collected in Roraima. The obtained informations about structures of metabolites and their distributions in fruits was compared with those data described for taxonomically closed species.
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Cromenos de origem policetídica em Peperomia villipetiola / Chromenes of polyketide origin in Peperomia villipetiolaKarina Josefina Malquichagua Salazar 15 August 2003 (has links)
Estudo fitoquímico dos extratos de folhas e galhos de Peperomia villipefiola (\"hierba de la plata\"), coletada no Peru, resultou no isolamento e caracterização da miristicina (3-metoxi-4,5-metilenedioxi-alil-benzene) e sete novos cromenos. Os cromenos tiveram suas estruturas elucidadas através de análises espectroscópicas como sendo: 5-hidroxi-7-metil-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxilato de metila (PVL1), 7-metil-5-metoxi-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-8-carboxilato de metila (PVL2), 7-hydroxy-5-metil-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxilato de metila (PVL3), 5-metil-7-metoxi-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxilato de metila (PVL4), ácido 7-hidroxi-5-metanol-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxílico (PVL5), ácido 5-metanol-7-metoxi-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxílico (PVL6) e 5-acetoximetanol-7-hidroxi-2,2-dimetil-2H-1-cromeno-6-carboxilato de metila (PVL7). Uma proposta biossintética foi sugerida, no qual o anel aromático seria formado pela via policetídica enquanto que a porção isoprênica poderia ser oriunda tanto da via do mevalonato quanto da via do fosfato de metileritriol. / The leaves and stems extracts from the Peperomia villipetiola (\"herb of the silver\"), collected in Peru, yielded myristicine (3-methoxy-4,5-methy/enedioxy-allylbenzene) and seven new chromenes. The chromenes, all new compounds, had their structures elucidated by means of spectroscopic analysis as: methyl 5-hydroxy-7-methyl-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylate (PVL1), methyl 5-methoxy-7-methyl-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-8-carboxylate (PVL2), methyl 7-hydroxy-5-methyl-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylate (PVL3), methyl 7-methoxy-5-methyl-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylate (PVL4), 5-methanol7-hydroxy-2 ,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylic acid (PVL5), 5-methanol-7-methoxy-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylic acid (PVL6), and methyl 5-acetoxymethanol-7-hydroxy-2,2-dimethyl-2H-1-chromene-6-carboxylate (PVL7). A biosynthetic scheme was suggested in which the aromatic ring should be formed by polyketide pathway while the isoprenyl moiety either from mevalonic acid or methylerythriol phosphate pathway.
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Investigação de metabólitos secundários bioativos de micro-organismos do ambiente marinho / Investigation of bioactive secondary metabolites from marine-derived microorganismsKaren de Jesus 11 October 2012 (has links)
Neste trabalho foram reativadas 51 linhagens fúngicas isoladas a partir da ascídia Didemnum ligulum. Após a reativação, as linhagens foram cultivadas em meio de cultura líquido (250 mL), a partir dos quais foram obtidos os respectivos extratos brutos. Os extratos foram avaliados em bioensaio de atividade citotóxica, em três linhagens de células tumorais. Observou-se que 14 extratos apresentaram atividade citotóxica. Os extratos foram avaliados por HPLC-UV-MS para determinação do perfil químico. Após esta análise, a linhagem DLM2-12, identificada como Penicillium citrinum, foi selecionada para crescimento em meio de cultura líquido em quantidade suficiente para se realizar o isolamento dos metabólitos secundários do extrato de seu meio de cultura. O extrato de 250 mL do meio de cultura de P. citrinum foi submetido a diferentes métodos de separação cromatográfica. Estas separações permitiram o isolamento e identificação da citrinina (47) como sendo majoritária. Para isolamento de outros compostos presentes no extrato, a linhagem foi cultivada em maior escala (8 L) e obtido o extrato de seu meio de cultura. O novo extrato foi submetido a separações cromatográficas em gel de Sephadex LH-20, sílica gel e sílica gel derivatizada com grupo cianopropila, bem como purificações por HPLC. Estas separações permitiram o isolamento e identificação de três quinolonas, as quinolactacinas C (50) e B (53) e a quinolactacina E (51), inédita na literatura, um ácido tetrâmico, o penicilenol A (54) e duas antraquinonas, a citreoroseína (57) e a emodina (61). As antraquinonas citreoroseína (57) e emodina (61) foram submetidas aos bioensaios de atividade antiviral, antimicrobiana, Leishmanicida e citotóxica. A citreoroseína (57) apresentou atividade contra as linhagens virais BVDV, HSV1 e aMPV e apresentou atividade citotóxica ativa frente à linhagem celular HCT-116 sendo inativa frente às linhagens celulares HL-60, SF295, OVCAR-8, K562, HCT-8, MDA-MB435 e MVF-7. A emodina (61) apresentou atividade contra as linhagens virais BVDV, HSV1, aMPV e hepatite C, atividade antimicrobiana, atividade Leishmanicida, atividade citotóxica frente às linhagens celulares HL-60, HCT-116, SF295, OVCAR-8, K562 e HCT-8 sendo inativa frente às linhagens celulares MDA-MB435 e MVF-7. / The present investigation describes the isolation of secondary metabolites from the culture medium of a marine-derived strain of the fungus Penicillium citrinum. Initially, 51 fungal strains isolated from the ascidian Didemnum ligulum and preserved in stereilized sea water were re-activated in Petri dishes. After reactivation, the strains were grown in 250 mL of liquid culture medium. All media were extracted with EtOAc and, after evaporation, aliquots of the extracts were evaluated in a cytotoxicity assay on three tumor cell lines. It was observed that 14 extracts showed cytotoxic activity. These 14 extracts were analyzed by HPLC-UV-MS in order to investigate their corresponding chemical profile. As a result, the DLM2-12 strain, identified as Penicillium citrinum, was selected for semi-preparative growth in liquid culture medium in sufficient quantity to accomplish the isolation of secondary metabolites. A first growth in 250 mL of culture medium yielded an extract which was subjected to various chromatographic separations, to give citrinin (42) as the major compound. An additional growth of P. citrinum DLM2-12 in a larger volume (8 L) yielded an extract which was subjected to chromatographic separations on Sephadex LH-20, cyanopropyl-bonded silica gel, and by reversed-phase HPLC. These separations gave, after the identification of pure compounds: a) three quinolones, quinolactacins C (51) and B (54) and a new quinolactacin (52), unreported in the literature; b) the tetramic acid penicilenol A (55), and; c) two anthraquinones, citreorosein (57) and emodin (61). The anthraquinones 57 and 61 were evaluated in antiviral, antimicrobial, antileishmanial and cytotoxic assays. Citreorosein (57) displayed activity against the viral strains BVDV, HSV1 and aMPV and showed cytotoxicity against the HCT-116 cell line, being inactive against HL-60, SF295, OVCAR-8, K562, HCT-8, MDA-MB435 and MVF-7 cell lines. Emodin (61) displayed activity against the viral strains BVDV, HSV1, AMPV and hepatitis C, as well as antimicrobial, leishmanicidal, as well as cytotoxic activity against HL-60, HCT-116, SF295, OVCAR-8, K562 and HCT-8 cancer cell lines, being inactive against MDA-MB435 and MVF-7 cell lines.
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Influência das condições de cultivo de duas linhagens Streptomyces no perfil químico e atividade citotóxica / The Influence of different culture mediums conditions in chemical profile and cytotoxic activity of two Streptomyces strainsNoemi Jacques Vieira 10 June 2011 (has links)
Micro-organismos são profícuos produtores de produtos naturais bioativos. Diversos fármacos inovativos e de extrema importância clínica são de origem microbiana, como antibióticos, antitumorais, imunossupressores e agentes hipolipêmicos. A maioria dos fármacos de origem microbiana é produzida por actinobactérias. A estreita associação de micro-organismos com plantas, insetos, crustáceos e organismos marinhos, pode induzir a produção de substâncias bioativas, que eventualmente conferem vantagens adaptativas e ecológicas ao macro-organismo hospedeiro. Ambientes marinhos e áreas de transição como os manguezais são ainda pouco explorados para estudos químicos e farmacológicos dos micro-organismos presentes nos solos e em simbiose com outros hospedeiros. Neste sentido, o presente trabalho visou o estudo químico monitorado por ensaios de citotoxicidade em células cancerígenas de dois micro-organismos, Streptomyces sp. Act1 e Streptomyces sp. Act2, isolados da casca do caranguejo do maguezal, Ucides cordatus, coletado em Cananéia, SP. Estes micro-organismos apresentaram atividade antagônica frente ao fungo patogênico Aspergillus niger, confirmando o potencial para produção de substâncias bioativas. Os micro-organismos foram cultivados em diferentes meios de cultura para avaliar o potencial de crescimento, perfil químico dos extratos obtidos e atividade citotóxica dos extratos e subfrações. Os meios de cultura escolhidos foram meio líquido ISP-2 e meio sólido (arroz), e ainda, nestas mesmas condições foi avaliado o efeito do uso de água do mar de forma comparativa. Os micro-organismos desenvolveram-se adequadamente nos diferentes meios de cultivo. Os fracionamentos dos extratos obtidos nos experimentos evidenciaram características polares das subfrações obtidas, e neste sentido foram necessárias adaptações das técnicas de separação, incluindo fases estácionárias como sephadex LH-20 e fase reversa. Os ensaios de citotoxicidade frente às linhagens de células tumorais com os extratos obtidos mostraram o grande potencial das linhagens em estudo, em especial a linhagem Streptomyces sp. Act-2 cultivada na presença de água do mar. / Abstract Microorganisms are prolific producers of bioactive natural products. Most of innovative pharmaceuticals that have useful clinical importance have been isolated from from microorganisms, such as antibiotics, anticancer drugs, immunosuppressive drugs and lipid-lowering agents. Most of the drugs of microbial origin are produced by actinomycetes. The close association of micro-organisms with plants, insects, crustaceans or marine organisms may induce the production of bioactive substances. These natural products may confer adaptive advantages to the environment and to the host organism. Marine and transitional areas such as mangroves are still under explored for chemical and pharmacological studies of both soil microorganisms and symbiotic microorganisms. In this sense, this work aimed a chemical study of two actinobacteria strains, Streptomyces sp. Act1 and Streptomyces sp. Act2, guided by cancer cells cytotoxicity assays. Both microorganisms were isolated from the shell of the mangrove crab Ucides cordatus, collected in Cananéia, SP. These microorganisms showed antagonistic activity against the pathogenic fungus Aspergillus niger, confirming the potential for production of bioactive substances. Microorganisms were cultured in different culture media to assess the potential for growth, chemical profile of extracts and cytotoxic activity of extracts and subfractions. The culture media were chosen using liquid (ISP-2) and solid medium (rice). The effect of addition of saline water in the culture media has also been evaluated. The microorganisms developed adequately in different culture media. The fractions of extracts obtained from the experiments showed characteristics of polar subfractions obtained, requiring the use of sephadex LH-20 and reverse phase as chromatographic stationary phases. Cytotoxic assays of the extracts against cancer cell lines showed the great potential of the strains under study, mainly Streptomyces sp. Act2. grown in the presence of seawater.
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Atividades biológicas de extratos de algas marinhas brasileiras / Biological activities of extracts from brazilian marine algaePatrícia Miranda da Silva 07 April 2010 (has links)
As algas são fontes importantes de matérias-primas e compostos biologicamente ativos utilizados na indústria farmacêutica, cosmética e alimentícia. As macroalgas vermelhas marinhas Gracilaria birdiae e Gracilaria domingensis são abundantemente encontradas no litoral nordeste brasileiro e apresentam alto potencial biológico para o fornecimento de compostos utilizados na indústria. Após o desenvolvimento e padronização da obtenção dos extratos e frações foram avaliadas as suas atividades antioxidante in vitro e in vivo, utilizando-se diferentes técnicas. In vitro, foram avaliadas a atividade sequestrante de radicais DPPH, a atividade sobre o sistema Luminol-HRP- H2O2, o poder redutor e atividade quelante de íons ferro. As frações mais apolares apresentaram-se mais ativas. Os efeitos sobre as funções de macrófagos humanos através de ensaios sobre a atividade de “burst ” repiratório, observando-se um incremento da atividade dos macrófagos na presença da fração metanólica. A atividade antimicrobiana dos extratos foi avaliada através da metodologia de determinação da concentração inibitória mínima sobre 4 espécies de bactérias gram-negativas sendo estas Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Klebsiella pneumonae ATCC 10231, Salmonella typhi ATCC 19430 e 4 microrganismos gram-positivos sendo Staphylococcus aureus ATCC 29213, Streptococcus pneumoniae ATCC 49 619 , Bacillus subtilis ATCC 6633 e Enterococcus faecalis ATCC 29212. Nenhuma das frações nem o extrato aquoso bruto apresentaram capacidade de inibição do crescimento bacteriano nas concentrações testadas (1000, 500, 250, 125, 62,5 e 31,25 µg/mL). O ensaio antifúngico contou com 2 espécies: Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 29212. Apenas o extrato protéico apresentou atividade de inibição de crescimento das leveduras testadas. / Algae are important sources of raw material and biological active compounds used in pharmaceutical, cosmetic and food industries. Marine Brazilian red macroalge, Gracilaria birdiae e Gracilaria domingensis, are found in the Brazilian northeast coast and have high potential for industries. The aim of this work was to evaluate the antioxidant activity of the extracts by different techniques such as DPPH scavenging activity, ROS generation by the Luminol- HRP-H2O2 system, reducing power determination and metal quelating activity. The most apolar fraction showed highest antioxidant activity. The effects of methanolic fractions on mice macrophages oxidative burst were evaluated by luminol-enhanced chemiluminescence assay and an increment of the respiratory burst was observed. Algae fractions and extracts were tested for antimicrobial assays led by determining the Minimum Inhibitory Concentration - MIC. Gram-negative bacteria tested were Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Klebsiella pneumonae ATCC 10231 and Salmonella typhi ATCC 19430 and four Gram-positive bacteria Staphylococcus aureus ATCC 29213, Streptococcus pneumoniae ATCC 49 619 , Bacillus subtilis ATCC 6633 and Enterococcus faecalis ATCC 29212. None of the extracts and fractions showed activity against these microorganisms in the concentration of 1000 µg/mL. Two fungi species were tested: Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 29212. Only the protein extract was effective against the tested fungi species
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Bioprospecção de fungos endofíticos isolados de guaranazeiros da Amazônia / Bioprospecting of endophytic fungi isolated from the Amazonian guaranaLuciana Mecatti Elias 29 October 2015 (has links)
Fungos do gênero Colletotrichum são considerados um dos principais fitopatógenos do mundo, comprometendo diversas culturas e causando danos econômicos e sociais para diversos países, inclusive o Brasil. Apesar de medidas de controle já serem empregadas, estas nem sempre são eficazes, motivo pelo qual se faz necessária a busca por novas opções de controle que possam atuar no manejo integrado. Dentre estas, encontram-se os metabólitos secundários produzidos por fungos endofíticos, os quais estão envolvidos na produção de compostos de interesse biotecnológico, com aplicações em diversas áreas, inclusive a agronômica. Neste contexto, o presente trabalho de doutorado teve por objetivo explorar o potencial biológico e químico de metabólitos secundários produzidos por fungos endofíticos isolados de guaranazeiros da Amazônia, avaliando sua atividade antifúngica \"in vitro\" a Colletotrichum gloeosporioides, isolado da cultura do guaranazeiro, a C. acutatum e C. gloeosporioides, isolados da cultura do pimentão. Para tanto, 16 linhagens de fungos endofíticos foram avaliadas em ensaio biológico por cultivo pareado e pelo método de difusão em disco contra Colletotrichum spp. Observou-se que quatro linhagens se mostraram mais promissoras, as quais foram selecionadas para o estudo de bioprospecção. A partir do extrato bruto do endófito Aspergillus flavus (272) foi isolado o composto ativo asperfuran, que apresentou atividade inibitória aos três fitopatógenos, com CI50 < 100 μg disco-1, semelhante ao fungicida comercial difenoconazol. A partir do extrato bruto de Xylaria sp. (214) foi isolado o composto ativo citocalasina D, que apresentou atividade inibitória a C. gloeosporioides isolado do guaranazeiro, com CI50 > 500 μg disco-1. A partir do extrato bruto de Xylaria sp. (249) foi isolado o composto ativo ácido pilifórmico, que apresentou atividade inibitória a C. gloeosporioides isolado do guaranazeiro, com CI50 de 500 μg disco-1 e à C. acutatum isolado o pimentão, com CI50 de 300 μg disco-1. E, a partir do extrato bruto de Talaromyces aculeatus (507) foram isolados três compostos, da classe dos ésteres ftalicos, sendo um ativo. A fração antecessora destes três compostos apresentou atividade inibitória a C. gloeosporioides isolado do guaranazeiro, com CI50 > 500 μg disco-1. A partir do extrato bruto de T. aculeatus também foi isolado um composto ativo parcialmente identificado e um composto ativo semi-purificado. A fração antecessora destes dois compostos apresentou atividade inibitória aos dois C. gloeosporioides, com CI50 > 300 μg disco-1 e a C. acutatum, com CI50 em torno de 150 μg disco-1. A atividade antifúngica destes compostos a fungos do gênero Colletotrichum está sendo relatada pela primeira vez neste estudo. / Colletotrichum fungi are considered one of the main pathogens in the world, affecting different cultures and causing social and economic damage to several countries, including Brazil. Despite control measures already being employed, these are not always effective, which is why the search for new control options that can act in the integrated management is necessary. Among these, the secondary metabolites produced by endophytes are involved in the production of compounds of biotechnological interest, with applications in several areas, including the agronomic. In this context, this study aimed to explore the biological and chemical potential of secondary metabolites produced by endophytic fungi isolated from the Amazonian guarana, evaluating their antifungal activity \"in vitro\" to Colletotrichum gloeosporioides, isolated from the culture of guarana and C. acutatum and C. gloeosporioides, isolated from the red pepper crop. For this purpose, 16 strains of endophytic fungi were evaluated in biological assay of dual culture and disk diffusion method against Colletotrichum spp. Four strains of these strains presented promising results which were selected for bioprospecting. From the crude extract of the endophyte Aspergillus flavus (272) was isolated the active compound asperfuran, which showed inhibitory activity to three pathogens, with IC50 <100 μg disk-1, similar to the commercial fungicide difenoconazole. From the crude extract of Xylaria sp. (214) was isolated the active compound cytochalasin D, which showed inhibitory activity against C. gloeosporioides isolated from guarana (IC50> 500 μg disk-1). From the crude extract of Xylaria sp. (249) was isolated the active compound piliformic acid, which showed inhibitory activity against C. gloeosporioides isolated from guarana (IC50 of 500 μg disk-1) and C. acutatum isolated from red pepper (IC50 of 300 μg disk-1). And from the crude extract of Talaromyces aculeatus (507) were isolated three compounds, of phthalate esters class, one of them with activity. The predecessor fraction of these three compounds showed inhibitory activity against C. gloeosporioides isolated from guarana (IC50> 500 μg disk-1). From the crude extract of T. aculeatus it was also isolated a partially identified active compound and a semi-purified active compound. The predecessor fraction of these two compounds showed inhibitory activity to both C. gloeosporioides (IC50> 300 μg disk-1) and to C. acutatum (IC50 around 150 μg disk-1). The antifungal activity of the compounds isolated in this study is being reported for the first time against fungus of the genus Colletotrichum.
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Estudo da atividade inibitória de extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico sobre a enzima arginase de Leishmania (Leishmania) amazonensis / Study of the inhibitory activity of plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid on Leishmania arginase enzyme (Leishmania) amazonensisJoão Francisco Lucon Junior 05 August 2016 (has links)
Causada por protozoários do gênero Leishmania, a leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta milhões de pessoas em todos os continentes. São grandes os desafios no tratamento da leishmaniose porque os fármacos atualmente disponíveis apresentam alta toxicidade, efeitos colaterais, alto custo e resistência parasitária. Sendo assim, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da doença de maneira mais eficiente. A investigação de novas alternativas terapêuticas, novos alvos bioquímicos, em particular a arginase em de Leishmania (L) amazonensis, é considerada um alvo interessante na busca de novos compostos leishmanicidas. A via bioquímica em que está envolvida a arginase é fundamental para a manutenção do ciclo de vida do parasito, sendo responsável pela hidrólise de L-arginina em L-ornitina em mamíferos. Muitos compostos oriundos de produtos naturais tem sido relatados como inibidores da arginase de L. (L.) amazonensis e a presença de grupos hidroxila em suas estruturas mostraram ser importantes na atividade inibidora da enzima. O objetivo desse trabaho estudar a interação bioquímica entre a enzima arginase de L. (L.) amazonensis, extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico. O extrato acetônico de folhas de Qualea grandiflora apresentou maior capacidade inibitória da arginase (IC50 = 1,7 ± 01 µg/mL) dentre os extratos analisados. Dentre os flavonoides, o composto mais potente foi a taxifolina (IC50 = 1,7 ± 0,2 µM). O verbascosídeo foi o derivado do ácido cafeico com maior potencial de inibição da arginase (IC50 = 0,5 ± 0,2 µM). As estruturas desses compostos podem servir como referência no desenvolvimento de novas drogas para o controle da leishmaniose, que tenham como alvo a arginase. / Caused by protozoa of the genus Leishmania, leishmaniosis is an infectious disease that affects millions of people on all continents. The currently available drugs are highly toxic, expensive, have side effects and parasitic resistance and for these reasons there is a need of developing new drugs to more effective treatment of the disease. The research of new therapeutic alternatives, new biochemical targets, in particular the arginase of Leishmania (Leishmania) amazonensis is considered an interesting target in the search for new compounds leishmanicidal. The biochemistry of arginase pathway is essential for the survival of the parasite, is also responsible for hydrolysis of L- arginine to L- ornithine in mammals. Many compounds from natural products has been reported as inhibitors of arginase L. (L.) amazonensis, and the presence of hydroxyl groups in their structures shown to be important for inhibitory activity of the enzyme. This work studies the biochemical interaction between the arginase enzyme, plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid. The acetone extract of Qualea grandiflora leaves showed higher inhibitory capacity of arginase (IC50 = 1.7 ± 01 µg/mL) from the analyzed extracts. Among the flavonoids, the most potent compound was taxifolin (IC50 = 1.7 ± 0.2 µM). The verbascosideo was the derivative of caffeic acid with greater potential for arginase inhibition (IC50 = 0.5 ± 0.2 µM) The structures of these compounds can serve as a reference in developing new drugs for the control of leishmaniosis, which target arginase.
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Atividades antifúngica e antiocratoxigênica dos óleos essenciais de Rosmarinus officinallis L. e Piper aduncum L. sobre Aspergillus carbonariusMendes, Ana Cristina Capelupi 31 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-31 / A contaminação de produtos alimentícios e medicinais pode ocorrer desde o cultivo até a estocagem, principalmente quando não existe controle das condições que favorecem o crescimento fúngico. O fungo Aspergillus carbonarius causa a deterioração dos produtos, além de produzir ocratoxina A, potencialmente carcinogênica e nefrotóxica. O aumento de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos além da diversidade de ações biológicas relacionadas às espécies vegetais Rosmarinus officinallis L. e Piper aduncum L. estimula as pesquisas científicas por novos antimicrobianos. Considerando o aumento da exposição aos agentes fúngicos, devido ao crescimento do consumo de produtos in natura, e a alta incidência de ocratoxina A, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação antifúngica e antiocratoxigênica dos óleos essenciais de R. officinallis L. e P.aduncum L. sobre o fungo Aspergillus carbonarius CDCA 0126. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e o perfil químico determinado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. O efeito inibitório dos óleos essenciais sobre os isolados fúngicos foi determinado pela associação dos métodos da difusão em disco e diluição em ágar e quantificação de ocratoxina por cromatografia líquida de alta eficiência. Foram identificados como compostos majoritários verbenona (24,61%), geraniol (17,55%) e 1,8 cineol (11,26%) e no óleo de P.aduncum L., piperitona (28,17%) e limoneno (10,42%). Os ensaios in vitro demonstraram a efetividade dos óleos na inibição do crescimento fúngico. O óleo essencial de R.officinallis L. reduziu em 94,36% a produção da ocratoxina A, sendo que o óleo de P.aduncum L. inibiu totalmente a produção. Os resultados deste trabalho indicam que os óleos essenciais avaliados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. carbonarius e na produção de ocratoxina A. / The contamination of food and medicinal products plants, can occur from cultivation to storage, especially when there is no control of the conditions that favor fungal growth. The fungus Aspergillus carbonarius causes deterioration of products, in addition to producing ochratoxin A, a potentially carcinogenic and nephrotoxic. The increase of synthetic antifungal resistant strains beyond the diversity of biological actions related to Rosmarinus officinalis L. plant species and Piper aduncum L. encourages scientific research for new antimicrobials. Considering the increased exposure to fungal agents, due to elevation consumption of fresh products and the high incidence of ochratoxin A, this study aimed to evaluate the antifungal action and antiochratoxigenic property of essential oils R.officinallis L. and P. aduncum L. on the fungus Aspergillus carbonarius CDCA 0126. The essential oils were obtained by hydrodistillation and the chemical profile determined by gas chromatography-mass spectrometry. The inhibitory effect of essential oils on the fungal isolate was determined by the association of disk diffusion and agar dilution methods and the quantification of ochratoxin A released by high-performance liquid chromatography. They were identified as major compounds verbenone (24.61%), geraniol (17.55%) and 1,8 cineole (11.26%) in R.officinallis L. essential oil and piperitone (28.17%) and (10.42%) P.aduncum L.. In vitro assays demonstrated the effectiveness of oil in the inhibition of fungal growth. The essential oil R.officinallis L. reduced the 94.36% the production of ochratoxin A, whereas the oil P.aduncum L. completely inhibited production. These results indicate that the evaluated essential oils represent a promising alternative for the control of A. carbonarius growth and production of ochratoxin A.
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