Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lazarini_Mariana_D.pdf: 4089908 bytes, checksum: bf5ee8f74ac7dfe4c18c3e84bdeeecff (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Importante passo para a compreensão dos processos fisiopatológicos das neoplasias é a identificação de genes diferencialmente expressos e das funções biológicas de cada proteína codificada por estes genes. Rho GTPase activating protein 21 (ARHGAP21) é uma proteína pertencente à família RhoGAP, que interage com ARF-GTPases e com alfa-catenina, modulando a dinâmica da actina associada às membranas do Golgi e à integridade das junções aderentes. O objetivo geral do presente estudo foi investigar as funções da proteína ARHGAP21 em células endoteliais e de adenocarcinoma de próstata com relação à viabilidade celular, ciclo celular, migração, adesão e expressão gênica. Neste trabalho foi demonstrado que ARHGAP21 possui atividade RhoGAP para RhoA e RhoC. Em células HUVECs (Human Umbilical Vein Endothelial Cells), foi observada uma localização nuclear e citoplasmática de ARHGAP21 e sua depleção induziu alterações no ciclo celular. Além disso, ensaios de microarranjos de DNA em HUVECs demonstraram modulação de genes como PAI-1, BNIP3, staniocalcina 1 e podocalyxin. Em linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata (LNCaP e PC-3), também foi observada uma localização nuclear e citoplasmática de ARHGAP21. A diminuição da expressão desta proteína em células PC-3 resultou em redução da viabilidade e da migração celular em fibronectina. Com relação à viabilidade celular, a inibição de ARHGAP21 tem efeito adicional ao agente quimioterápico cisplatina. Em células LNCaP, por sua vez, foi observada uma menor adesão em matrigel e fibronectina das células submetidas à inibição da expressão de ARHGAP21, em comparação às células controle. Experimentos de microarranjos de DNA e RT-PCR quantitativo em tempo real em células de adenocarcinoma de próstata submetidas à inibição de ARHGAP21 demonstraram expressão alterada dos genes TGF-beta induced e dos genes BNIP3, staniocalcina 1 e podocalyxin, que também foram modulados nas células HUVECs com inibição da expressão de ARHGAP21. Em conclusão, o presente estudo identificou ARHGAP21 como uma proteína com importantes funções em células endoteliais e de adenocarcinoma de próstata, através da regulação da viabilidade, adesão e migração celular. Os achados aqui descritos sugerem que ARHGAP21 pode ser uma molécula alvo para a terapia de neoplasias, provavelmente através da sua função como reguladora da atividade de RhoA e RhoC / Abstract: One step in the path towards building a comprehensive molecular portrait of human cancer is the definition of differentially expressed genes and the function of their coding proteins. Rho GTPase activating protein 21 (ARHGAP21) is a RhoGAP protein, which interacts with ARF-GTPases and alpha-catenin, controlling actin dynamics on Golgi membranes and the integrity of adherens junctions, respectively. The aim of the present study was to investigate ARHGAP21 functions on endothelial and prostate cancer cells regarding to cell viability, cell cycle, migration, adhesion and gene expression. This study demonstrated that ARHGAP21 has RhoGAP activity for RhoA and RhoC. ARHGAP21 localized in the nucleus and cytoplasm of HUVECs (Human Umbilical Vein Endothelial Cells) and its depletion alteres the cell cycle phases. Furthermore, microarrays assays in HUVECs ARHGAP21 knockdown demonstrated modulation of genes such as PAI-1, BNIP3, stanniocalcin 1 and podocalyxin. In the prostate adenocarcinoma cell lines (LNCaP and PC-3), ARHGAP21 is also located in the nucleus and cytoplasm. Depletion of this protein in PC-3 cells resulted in decrease of cell viability and migration in fibronectin. Regarding to cell viability, inhibition of ARHGAP21 has an additional effect on cisplatin chemotherapeutic agent. In LNCaP cells, a lower adhesion was observed in matrigel and fibronectin of cells subjected to inhibition of ARHGAP21 expression compared to control cells. DNA microarray and quantitative RT-PCR experiments on prostate adenocarcinoma cells ARHGAP21 knockdown showed modulation of TGF-beta induced gene expression. The expression of BNIP3, stanniocalcin 1 and podocalyxin was also altered in HUVECs cells ARHGAP21 knockdown. In conclusion, this study identified ARHGAP21 as a protein with important functions in endothelial cells and prostate adenocarcinoma, by regulating cell viability, adhesion and migration. The findings described here suggest that ARHGAP21 may be a molecule target for cancer therapy, probably due to its GAP activity for RhoA and RhoC / Doutorado / Doutor em Fisiopatologia Medica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10897.pdf: 5013652 bytes, checksum: 12b24138365d9f69ab0e55e4ae76f80e (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Orientador: Valeria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_LeslieCristina_M.pdf: 6161359 bytes, checksum: e53c13123d8d830910aa70a9f89b179c (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A distroglicana (DG) é uma importante proteína estrutural a qual está envolvida no desenvolvimento celular epitelial, formação de membrana basal e manutenção da integridade de diferentes tecidos. Estudos indicaram que a alteração na expressão da DG é um evento freqüente nas malignecências humanas e sugerem que esta molécula tem um papel importante no desenvolvimento de tumor. No câncer de próstata, verificou-se expressiva redução das distroglicanas, especialmente da _-DG, acarretando em progressão tumoral e ocorrência de metástases. Desta maneira, alterações na expressão das distroglicanas podem ser relevantes na patogênese das doenças prostáticas. Além disto, estas moléculas fazem parte de um complexo glicoproteíco e estão relacionadas a uma série de proteínas tais como, agrinas, lamininas e a distrofina. Devido à deficiência de distrofina, este complexo está desestruturado na distrofia muscular de Duchenne e, no camundongo mdx. Este trabalho teve como objetivos caracterizar a estrutura epitelial e estromal do lobo ventral da próstata do camundongo mdx, identificar a ocorrência de receptores para distroglicanas _ e _, IGF-1, laminina _-3, estabelecer correlações entre os processos de proliferação e morte celular e analisar a viabilidade do camundongo mdx como modelo experimental no estudo de patologias prostáticas. Um total de 30 animais (15 C57BL10 e 15 mdx) foi dividido em 2 grupos experimentais: controle e mdx. Amostras do lobo ventral da próstata foram coletadas para análises macroscópicas, imunohistoquímicas, microscopias de luz e eletrônica de transmissão e análises morfométricas. Dosagens sorológicas de estradiol e testosterona foram realizadas. Os resultados mostraram que os níveis séricos de testosterona foram significativamente diminuídos nos camundongos mdx em relação aos controles. Em contraste, os níveis séricos de estradiol do grupo mdx mostraram-se significativamente aumentados em relação ao controle. Acentuada atrofia celular, ocorrência de neoplasia intraepitelial prostática, hipertrofia estromal, presença de células inflamatórias e hipertrofia estromal foram evidenciadas nos animais mdx. A intensidade da reação de imunolocalização da distroglicana foi de fraca expressão em relação ao controle, assim como a da laminina. Já a imunolocalização do IGF foi intensa em relação ao controle. Conclui-se que os animais mdx apresentaram alterações significativas na integridade estrutural e molecular prostática, com sinais de aumento do processo proliferativo, comprometendo a homeostase glandular e o processo reprodutivo destes animais. / Abstract: The prostate is a fundamental accessory sex gland for the male reproductive process and the stroma-epithelium interaction has an important role in prostate structural maintenance and function. The basal membrane is an interaction link, offering mechanical and physiological support. Nowadays, different studies suggest that dystroglycan (DG), which is an adhesion protein, plays a role in different types of cancer development and progression, including that of the prostate. Thus, the aims of this work were to characterize structural, ultrastructural and proliferative features of the prostatic stroma and epithelium of mdx mice; to verify the immunolocalization of the _ and ß dystroglycan, IGF-I and laminin _3 receptors; and to relate those structural and molecular events to prostate pathogenesis as well as to verify the viability of this experimental model in prostate disease studies. Thirty male mice (mdx and C57BL10/Uni) were divided into two groups: control and mdx. Samples from the ventral prostate were collected for immunological, Western Blotting, transmission electron and light microscopies and morphometrical analyses. Estradiol and testosterone measurements were verified. The results showed diminished testosterone and increased estradiol levels in the mdx group. Atrophied cells, stromal hypertrophy and prostatic intraepithelial were verified in the mdx mice. Weak _ and ß dystroglycan and laminin _3 immunolocalization was verified in the mdx group. However, intense IGF-I receptor localization was identified in the mdx animals. Thus, it was concluded that mdx animals presented changes in the molecular and structural integrity and proliferation signals, leading to glandular pathogenesis, compromising prostate homeostasis and the reproductive process. Apart from this, the destructuring of the dystroglycandystrophin complex can be considered a trigger factor for prostate pathogenesis. It can also point towards that the steroid-hormone and IGF relationship can be an alternative towards new therapies to treat prostatic diseases. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:08:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SilviaBorgesPimentelde_D.pdf: 1168180 bytes, checksum: da1367852d18352f97fbfe0c374bf4c0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Interações entre o epitélio e o mesênquima/estroma são importantes em diversos estágios da morfogênese, na diferenciação celular e na função geral de diversas glândulas. Na próstata, a função secretora do epitélio nos animais adultos é regulada por andrógenos que tem participação direta na manutenção do estado ativo da glândula. Sabe-se que o endotélio é um dos primeiros elementos prostáticos a responder à eliminação do estímulo androgênico e a responder à sua reposição. Entretanto, a célula endotelial não apresenta receptor para andrógenos, o que leva a crer que a modulação do seu comportamento ocorra indiretamente pela ação de fatores locais produzidos por diferentes tipos celulares. Este trabalho teve como objetivo isolar, caracterizar e cultivar células endoteliais prostáticas, assim como avaliar a possível regulação do seu comportamento por células musculares lisas que correspondem ao principal tipo celular do estroma prostático. Culturas primárias de células endoteliais da próstata de ratos foram obtidas e caracterizadas a partir de sua morfologia e expressão do fator von Willebrand e dos receptores Flk-1 (VEGFR-1) e Flt-1 (VEGFR-2) marcadores específicos de células endoteliais, e de sua habilidade em formar estruturas parecidas com capilares quando cultivadas sobre Matrigel. Não foi observado efeito sobre a proliferação celular quando estas células foram cultivadas na presença de meio condicionado por células musculares lisas, sobre diferentes substratos (plástico, colágeno, matrigel). Entretanto, o meio condicionado pelas células musculares lisas reforçou o efeito de indução da diferenciação em estruturas similares a capilares. Foi também detectado que o meio condicionado inibe a secreção de angiopoietina-1 pelas células endoteliais quando cultivadas sobre colágeno e estimula a secreção de angiopoietina-2 quando as células foram cultivadas sobre Matrigel. Os dados obtidos demonstram que o protocolo utilizado resultou em uma população homogênea de células endoteliais prostáticas e que, as células musculares lisas, produzem fatores solúveis capazes de regular diferencialmente o comportamento das células endoteliais, de acordo com o substrato / Abstract: Interactions between the epithelium and mesenchyme/stroma are important in different stages of morphogenesis, differentiation and function of most glands. In the prostate, the secretory function of the epithelium in adult animals is regulated by androgens, which have direct roles in maintaining prostate activity. It is well known that the endothelium is the first prostatic compartment to respond to androgen deprivation and to its reposition after castration. However, the endothelial cell does not express the androgen receptor and this led us to believe that the altered behavior in response to androgen is modulated by soluble factors produced by other cell types that can sense androgen levels. The objective of this work was to isolated, characterize and culture prostatic endothelial cells, as well as to evaluate its possible regulation by smooth muscle cells, which are the predominant cell type in the prostate stroma. Primary cultures of rat ventral prostate endothelial cells were isolated, maintained in culture and characterized by their morphology, expression of von Willebrand factor, Flk-1 (VEGFR-1) and Flt-1 (VEGFR-2) receptors, and ability to form capillary-like structures on Matrigel. When these cells were cultured in the presence of smooth muscle cell conditioned medium, on different substrata (plastic, collagen, matrigel) there was no variation in cell proliferation. However, the smooth muscle cell conditioned medium reinforced the formation of capillary-like structures in Matrigel. It was also observed that the smooth muscle cell conditioned medium inhibited the secretion of angiopoietin-1 when the cells were cultured on collagen and stimulated the secretion of angiopoietin-2 when the cultured on Matrigel. Altogether, our data indicate that the protocol employed here resulted in a highly homogenous population of prostate-derived endothelial cells and that smooth muscle cells produce soluble factors capable of differentially regulating the behaviour of endothelial cell, as a function of the substratum / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastiao Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_SilvanaGiselePegorinde_D.pdf: 8120725 bytes, checksum: 6e1192220bc56007d359fcae3023e8d1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Há um grande interesse em melhor compreender a biologia da próstata devido à sua alta propensão em desenvolver lesões proliferativas, estando entre as mais comuns neoplasias que acometem o homem na atualidade. Entre os fatores de risco que contribuem para o aumento destas doenças destaca-se o envelhecimento, período em que ocorrem acentuados desequilíbrios hormonais. Vários grupos de pesquisa vêm tentando desenvolver, caracterizar e validar modelos roedores para análise do câncer de próstata sob diferentes aspectos e, modelos autóctones, têm desempenhado papel relevante nesse campo. Neste trabalho foi realizada a avaliação do comportamento biológico da próstata ventral do roedor gerbilo (Meriones unguiculatus) em fases distintas de seu desenvolvimento pós-natal. Em uma primeira etapa caracterizou-se através de análises morfológicas (estruturais e ultra-estruturais) e quantitativas os componentes celulares dos compartimentos epitelial e estromal, bem como o papel funcional de suas populações celulares na glândula. Para tanto foram utilizados gerbilos jovens, adultos e velhos. Considerando a próstata de animais jovens, constatou-se que nestes a glândula encontra-se estrutural e funcionalmente imatura. Já em animais adultos e velhos a atividade sintética está bem estabelecida e permanece estável nestas duas idades. Entretanto, a morfologia prostática em animais velhos apresentou-se diferenciada. Em uma mesma glândula puderam ser constatadas regiões funcionais com epitélio secretor semelhante aos adultos e, em outras, áreas completamente alteradas, dispondo de lesões histopatológicas. O comportamento prostático nas três fases do desenvolvimento analisadas foi diretamente influenciado pelos níveis de testosterona no soro, comprovando a importância desse andrógeno para homeostase e funcionalidade glandular. E, em animais velhos, o declínio de testosterona esteve associado a alterações proliferativas na glândula. Devido a essas constatações em uma segunda etapa, avaliou-se, exclusivamente, a próstata de animais velhos com o intuito de se caracterizar os principais tipos de lesões que podem acometê-la. As alterações mais freqüentes foram de origem epitelial, como as neoplasias intra-epiteliais (PIN), carcinomas microinvasivos e adenocarcinomas. O potencial invasivo das células anômalas pôde ser comprovado ultra-estruturalmente através da ruptura da membrana basal em alguns ácinos. No estroma, hiperplasia celular, quando constatada, esteve sempre associada a sítios de epitélio anômalo. Adicionalmente, uma maior deposição de fibrilas de colágeno (gerando fibrose estromal) foi encontrada em todos gerbilos velhos analisados. Parâmetros nucleares e nucleolares somente não foram efetivos para diagnosticar o potencial de severidade das alterações. Os índices de proliferação e morte celular, porém indicaram maior turnover celular à medida que alterações histopatológicas tornaram-se invasivas. A partir destes dados constatou-se que o gerbilo é um bom modelo para análise do comportamento prostático em diferentes fases do desenvolvimento pós-natal. Adicionalmente, o animal velho tem alta propensão em desenvolver alterações prostáticas espontâneas e estas podem auxiliar na melhor compreensão da evolução biológica do câncer prostático humano propriamente / Abstract: There is a great interest in understanding the prostate biology due to its high propensity in developing proliferative lesions. At the present time, this kind of illnes is one of the most common neoplasias which may damage men. Among the risk factors that contribute to the prostate cancer increase stands out aging, period when an accentuated hormonal unbalances happens. Several research groups are trying to develop, characterize and validate rodent models for analysis of the prostate cancer and, autochthonous models have been playing a relevant role in these aspects. In the present work, the biological behavior evaluation of the ventral prostate of gerbil rodent (Meriones unguiculatus) was accomplished in three different phases of postnatal development. Initially, the cellular components of epithelial and stromal compartments, as well as, the functional activity of those cellular populations in the gland were characterized through morphologic (structural and ultrastructural) and quantitative analyses. For this, young, adult and old gerbils were employed. Considering the prostate of young animals, it was verified that the prostate gland is structural and functionally immature. In adult and old animals the synthetic activity is well established and remained stable. However, in old animals, the prostatic morphology presented alterations. In a same gland it could be observed functional areas with a secretor epithelium similar to adults and regions completely modified, exhibiting histopathologic lesions. The prostatic behavior in the three phases of development was influenced directly by the serum testosterone levels, proving the importance of this androgen for glandular homeostasis and its functionality. In the old animals the testosterone decline was associated to the proliferative alterations presented in the gland. Because of these results, in a second stage of experiments, it was evaluated only the prostate of old animals with the purpose of characterizing the main types of lesions which may be develop in these gerbils. The most frequent changes noted were those originated in the epithelium, as the prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), microinvasive carcinomas and adenocarcinomas. Ultrastructurally, the invasive potential of anomalous cells could be confirmed by the basement membrane disrupted noted in some acini. In the stroma, the cellular hiperplasia, when verified, it was always associated to the anomalous epithelium sites. Additionally, a larger deposition of collagen fibrils, which generates stromal fibrosis, it was found in all old gerbils analyzed. Nuclear and nucleolar parameters were not effective in diagnosing the severity potential of those alterations. The cellular proliferation and death indexes, however, indicated a larger cellular turnover according as the histhopatologic lesions become invasives. Concluding, these analyses allow confirming that the rodent gerbil is a good model for prostate behavior analysis in different phases of postnatal development. The old animal revealed a high propensity in developing spontaneous prostatic alterations and these changes may help to comprehend the natural course of the neoplasia's multistep and its biological behavior, contributing to a better understanding of the human prostate cancer / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastiao Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T09:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Custodio_AnaMariaGalvan_D.pdf: 7098250 bytes, checksum: 7533cbcab259eabbec9b1cc232deab36 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Diferente da abordagem clássica, a próstata não é um órgão exclusivo do organismo masculino, podendo ser encontrada nas fêmeas de vários mamíferos, incluindo humanos e roedores. A compreensão do desenvolvimento pós-natal e possíveis processos histopatológicos da glândula anexa da mulher são dificultados pela sua localização anatômica parauretral, restringindo seu estudo até então ao material de necropsia. Porém, sua similaridade com a próstata do gerbilo da Mongólia (Meriones unguiculatus) possibilitou a utilização desse animal como um adequado modelo experimental para se averiguar as características morfo-funcionais da glândula. A análise dos componentes epiteliais e estromais da próstata nas idades jovem, adulta e senil do desenvolvimento pós-natal, as alterações histopatológicas decorrentes do envelhecimento e a sua resposta morfológica mediante a suplementação hormonal pela deidroepiandrosterona (DHEA) foi o objetivo deste trabalho. Os resultados foram obtidos a partir das avaliações estruturais, ultra-estruturais, morfométrico-estereológica e sorológicas (dos animais isentos de tratamento) do órgão. A glândula feminina jovem mostrou uma precocidade funcional em comparação à do macho de mesma idade provavelmente associada à ação do estrógeno circulante. Enquanto que a senescência foi marcada pela diminuição dos níveis séricos de esteróides e intensificação das lesões benignas, pré-malignas e malignas já desenvolvidas na idade adulta, porém com menor incidência. A suplementação hormonal promoveu uma instabilidade na homeostase glandular a partir da idade jovem induzindo o desenvolvimento de alterações histopatológicas benignas e pré-malignas, além de conferir uma supraestimulação das células secretoras. A existência de fenótipos celulares modificados foi identificada no epitélio secretor da glândula sendo aparentemente mais intensificado durante a idade senil e posterior à administração hormonal. Assim sendo, a real condição da histopatologia prostática é alarmante, porém pouca atenção ainda é dada a essa glândula do sistema genital feminino, principalmente mediante a senescência e as terapias de suplementação hormonal. Talvez seja necessária uma adaptação da rotina clínica ginecológica mediante a existência deste órgão com o intuito de se monitorar a glândula e prevenir possíveis desconfortos e comprometimentos à saúde da mulher / Abstract: In contrast to the classic boarding, the prostate is not an exclusive gland of the male organism and it can be found in mammal females, including humans and rodents. The precise comprehension of the post-natal development and possible histopathological processes related to this gland are difficult because of its anatomical paraurethral localization and it restricting the study in necropsy material. However, the similarity between the Mongolian gerbil prostate (Meriones unguiculatus) and women one makes it a good animal model to study the morphofunciotional feature of this gland. The analyse of the epithelial and stromal components in the prostate of young, adul and old ages, the histopathological disorders decurrent of aging and their morphological answer related to the hormonal supplementation by deidroepiandrosterona (DHEA) were the objective of this work. The results were based on structural, ultrastructural, morphometric-steriological studies and hormonal analyzes (except the treated animals). The young female prostate showed an early gland functionaly compared to the male in the same age and it was probably associated to the serum stradiol levels. The aging was marked by the reduction of the serum steroids and intensification of the benign, pre-malignant and malignant histopathological alterations. Altought these same changes had already developed in the adult age, they had lesser incidence. Hormonal supplement promoted instability of the gland homeostasis in the young age inducing the development of benign and malign histophatological alterations beyond the high biossinthetic stimulation on the secretory cells. Some modificated cellular phenotypes were identifyed in the gland secretory epithelium and it could be amplifyed during the senesce period and after the hormonal administration. In this way, the real condition of the prostatic histopathology is alarming and few atention is given to this gland wich is too inherent to the female genital system, especially regarding the senescence and therapies of hormonal supplementation. Maybe it is necessary an adaption in the female clinic routin since this female ogan exists and thus the gland could be monitored and some discomforts and damages of the women health could be prevented. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T10:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AlexandreBruni_D.pdf: 5087353 bytes, checksum: c88d322680c216b0a0f0c99aef894042 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Importante glândula acessória do trato reprodutor de mamíferos, a próstata é um órgão alvo de várias doenças benignas e malignas, que ocorrem principalmente com o envelhecimento. Tanto o desenvolvimento prostático pós-natal como a regressão da glândula após a ablação hormonal são caracterizados por intensa modificação no comportamento das células e remodelação da matriz extracelular (MEC). As metaloproteinases de matriz (MMP) constituem uma família de enzimas que degradam principalmente componentes de MEC. Portanto, pareceu-nos plausível que as MMPs tenham papel crucial na remodelação tecidual que ocorre em decorrência dos eventos morfogenéticos da próstata ventral (PV) e na progressiva regressão prostática pós-castração. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel da MMP-2 no desenvolvimento prostático pós-natal em roedores e das MMP-2, -7 e - 9 na regressão da PV de ratos pós-castração. Para isso, foram empregadas técnicas moleculares, bioquímicas e análises morfológicas. A aplicação do siRNA específico para MMP-2 comprometeu o crescimento, a ramificação, a formação de lúmen e a proliferação de células epiteliais da PV de ratos in vitro, além de provocar um acúmulo de fibras colagênicas no compartimento estromal. A PV do camundongo MMP-2-/- adultos apresentou peso relativo reduzido e um menor volume epitelial, que resultaram de menor proliferação epitelial, menor ramificação ductal e maior estabilização da matriz colagênica durante a primeira semana de desenvolvimento pós-natal. Na regressão da próstata ventral de ratos após a castração encontraram-se múltiplas ondas de morte celular e uma relação direta entre a expressão e atividade das MMP-2, -7 e -9 e o pico de apoptose que ocorre 11 dias após a castração. Conclui-se através dos resultados apresentados neste trabalho, que tanto o desenvolvimento prostático pós-natal, como a regressão prostática pós-castração são dependentes da expressão e atividade das MMPs. / Abstract: The prostate is an important gland of the reproductive tract of mammals, which is a target of several benign and malign diseases affecting the elder. Both postnatal prostate development and prostate regression after androgenic ablation are characterized by intense modification in cell behavior and remodeling of extracellular matrix (ECM). MMPs constitute a family of endopeptidases which are able to cleave preferentially ECM components. Thus, it seems reasonable that these enzymes play a crucial role in tissue remodeling that happens during the ventral prostate (VP) morphogenesis and in the prostate regression after castration. In this study, we aimed to define the involvment of MMP-2 in the postnatal prostate development of rodent and the involvement of MMP-2, -7 and -9 rat ventral prostate regression after castration. For this aim, we have used molecular, biochemical and morphological approaches. siRNA specific for MMP-2 compromised the rat VP growth, branching, lumen formation and epithelial cell proliferation, besides leading an accumulation of collagen fibers in the stroma. MMP-2-/- VP showed a reduced relative weight and epithelial volume, besides displaying a decreased epithelial proliferation and branching and a stabilization of collagen matrix at the end of the first postnatal week. In the prostate regression after castration, we found multiple waves of cell death and a direct association between activity and expression of MMP-2, -7 and -9 and an apoptotic peak that occurs at the 11th Day after castration. In conclusion, the results presented here showed that both postnatal prostate development and prostate regression after castration are dependent on the expression and activity of MMPs. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biancardi_ManoelFrancisco_M.pdf: 6869231 bytes, checksum: 32275d5e0c79d81cecdc898bc5e42bb9 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A próstata é uma glândula encontrada não somente em machos de mamíferos, podendo estar presente em fêmeas de alguns roedores e também em mulheres. Os andrógenos são essenciais durante o desenvolvimento e também para a manutenção da homeostasia prostática ao longo da vida. No entanto, sensíveis interferências, principalmente em momentos críticos do desenvolvimento, podem predispor este órgão a desenvolver lesões durante a vida adulta e senil. Pesquisas tem demonstrado que o programa de expressão gênica controlado pelo receptor de andrógeno durante a organogênese prostática é muito semelhante ao que é ativado durante a instalação do câncer de próstata. Aliado a isso, um grande número de estudos tem demonstrado que a predisposição às desordens prostáticas tem sua origem nos momentos iniciais da vida. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a exposição androgênica intra-uterina e pós-natal pode interferir na morfofisiologia da próstata de roedores, podendo levar ao surgimento de desordens prostáticas durante a vida adulta. Para isto, este trabalho foi dividido em duas etapas. Primeiro, grupos de ratos Wistar jovens e adultos não tratados e de ratas adultas tratadas com testosterona (1 mg/Kg/48 horas) durante 7, 14 e 21 dias foram analisadas. As próstatas destes animais foram submetidas a análises morfométrico-estereológicas, imunohistoquímicas e ultra-estruturais. Em uma segunda etapa, grupos de gerbilos machos e fêmeas expostos à testosterona durante a vida embrionária (100 ?g ou 1 mg) e pós-natal (100 ?g) foram avaliados na vida adulta. As glândulas prostáticas destes animais foram submetidas a análises morfométrico-estereológicas, imunohistoquímicas, além da reconstrução tridimensional. Os resultados mostraram que as próstatas das ratas sujeitas a terapias androgênicas durante a vida adulta apresentaram um intenso desenvolvimento, tornando-se mais ativas nos processos de síntese e secreção. Além de sofrer um intenso desenvolvimento, a glândula prostática destes animais tornou-se, morfologicamente e fisiologicamente, muito semelhante à próstata ventral dos ratos. Entretanto, apesar das próstatas das ratas tratadas sofrerem um expressivo desenvolvimento induzido pela ação androgênica, não foram observadas a presença de lesões nestas glândulas. Já os machos e as fêmeas de gerbilos que sofreram exposição androgênica anormal durante o período embrionário, apresentaram uma alta incidência de lesões prostáticas na vida adulta, podendo-se evidenciar a presença frequente de focos inflamatórios e de neoplasias intra-epiteliais. Os resultados mostraram que o excesso de andrógeno interfere significantemente na homeostasia prostática, levando a um intenso desenvolvimento glandular ou mesmo predispondo esta glândula a desenvolver lesões durante a vida adulta. Estes aspectos são de grande interesse, pois é cada vez maior o número de relatos na literatura mostrando que a desbalanço hormonal durante os momentos iniciais do desenvolvimento prostático podem predispor este órgão a manifestar doenças durante a vida adulta e senil. / Abstract The prostate is a gland found not exclusively in male mammals, may also be present in female of some rodents and also in women. The androgens are essential for the development and maintenance of prostatic homeostasis throughout life. However, sensible interferences, especially during critical stages of development, can predispose this organ to develop lesions in adult and senile life. Researches have shown that the gene expression program controlled by androgen receptor during prostatic organogenesis is very similar to that activated during the installation of prostate cancer. Moreover, a large number of studies have demonstrated that the predisposition to prostate disorders has its origin in the early stages of life. Thus, the objective of this study was to evaluate whether intrauterine and postnatal androgen exposure alters the morphophysiology of rodents prostate leading to the development of prostatic disorders in adulthood. For this, the work was divided into two stages. At first, groups of untreated young and adult male Wistar rats and adult female rats treated with testosterone (1mg/Kg/48 hours) for 7, 14 and 21 were analyzed. The prostates of these animals were subjected to morphometric-stereological, immunohistochemical and ultrastructural analyses. In a second step, groups of male and female gerbils exposed to testosterone (100 ?g or 1 mg) during embryonic and postnatal (100 ?g) life were analyzed at adulthood. The prostatic glands of these animals were subjected to morphometric-stereological, immunohistochemical and also to three-dimensional reconstruction analyses. The results showed that prostates of female rats subjected to androgen therapy during adulthood had an intense development, presenting a more active synthesis and secretion status. In addition to this intense development, the prostate gland of these animals became morphologically and physiologically very similar to the ventral prostate of adult male rats. However, despite the prostates of treated rats suffered a significant development caused by the androgenic action, it was not observed the presence of lesions in these glands. In other hand, males and females gerbils submitted to abnormal androgen exposure during the embryonic period exhibited a high incidence of prostatic lesions in adulthood, being frequent the presence of inflammatory foci and intraepithelial neoplasia. The results showed that androgen excess interfere significantly in the prostate homeostasis, leading to an intense glandular development or even predisposes this gland to develop lesions during adulthood. These aspects are of great interest because a growing number of reports in the literature has shown that the hormonal imbalance during the early stages of prostate development may predispose this organ to manifest disease during adulthood and senescence. / Mestrado / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Anibal Eugenio Vercesi, Roger Frigerio Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T16:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_KiviaAparecidaPontesde_M.pdf: 1348299 bytes, checksum: 60cf5041b7c98ff265e1fd5399cfef64 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As estatinas são inibidores da 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA (HMG-CoA) redutase usados no tratamento de hipercolesterolemia. Estudos in vitro e in vivo têm demonstrado que as estatinas podem ter efeitos anti-cancerígenos. No presente estudo analisamos os mecanismos de toxicidade de sinvastatina e de lovastatina nas linhagens de câncer de próstata LNCaP e PC-3. Curvas dose-resposta do efeito das estatinas (0,1-100 µM) sobre as células LNCaP e PC-3 mostraram efeitos similares e maior sensibilidade das células PC-3 do que das células LNCaP. Tratamentos de células PC-3 com sinvastatina 10 µM durante 48 h induziu morte principalmente por apoptose, a qual foi associada ao aumento de 3 vezes da [Ca2+]cit. Tanto a apoptose quanto o aumento da [Ca2+]cit foram prevenidos por mevalonato 100 µM presente no meio de cultura. Isso indica que a inibição da HMG-CoA redutase leva à apoptose mediada por Ca2+. Pifitrina-a, inibidor da proteína supressora tumoral p53, não preveniu apoptose em células PC-3 (p53 negativas) nem em células LNCaP (p53 positivas). Isso mostrou que a apoptose de células de câncer de próstata induzida por estatinas é independente de p53. Sinvastatina 60 µM induziu morte de células PC-3 principalmente por necrose, a qual foi associada ao aumento de 3 vezes da [Ca2+]cit e à diminuição da respiração e do potencial de membrana mitocondrial. Tanto a necrose quanto a disfunção mitocondrial foram parcialmente prevenidas pelos compostos ciclosporina A (inibidor da transição de permeabilidade mitocondrial [TPM] e da fosfatase calcineurina), FK506 (inibidor de calcineurina) e boncrecato (inibidor da TPM). O aumento da [Ca2+]cit não foi prevenido por ciclosporina A, FK506 ou boncrecato, porém a complexação de Ca2+ citossólico com BAPTA protegeu as células PC-3 da necrose, sugerindo que o aumento da [Ca2+]cit seja um dos primeiros passos no processo de necrose celular, seguido pela ativação da via de calcineurina. Conclui-se que a apoptose induzida por sinvastatina em células PC-3 seja dependente da via do mevalonato enquanto que a necrose seja dependente da via da calcineurina associada à disfunção mitocondrial / Abstract: Statins are 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA (HMG-CoA) reductase inhibitors used in the treatment of hypercholesterolemia. Both in vitro and in vivo studies have demonstrated that statins may have anti-cancer effects. In the present study we analyzed the mechanisms of simvastatin and lovastatina toxicity to the human prostate cancer cell lines LNCaP and PC-3. Dose-response curves of statins (0.1-100 µM) effects upon LNCaP and PC-3 cells showed similar effects and higher sensitivity of PC-3 than LNCaP cells. Treatments of PC-3 cells with 10 µM simvastatin during 48 h induced death mainly by apoptosis, which was associated with a 3-fold increase in [Ca2+]cyt. Both apoptosis and [Ca2+]cyt increase were prevented by 100 µM mevalonate present in the culture medium. This indicates that the inhibition of HMG-CoA reductase is followed by Ca2+ mediated apoptosis. Pifithrin-a, an inhibitor of tumor suppressor p53 protein, did not prevented apoptosis either in PC-3 (p53 negative) or LNCaP (p53 positive) cells. This showed that apoptosis of prostate cancer cells induced by statins is p53 independent. At 60 µM, simvastatin induced death in PC-3 cells mainly by necrosis, which was associated with a 3-fold increase in PC-3 [Ca2+]cyt, and decrease in both respiration and mitochondrial membrane potential. Both necrosis and mitochondrial dysfunction were partially prevented by the compounds cyclosporine A (mitochondrial permeability transition [MPT] and calcineurin inhibitor), FK506 (calcineurin inhibitor), and bongkrekic acid (MPT inhibitor). Increase in [Ca2+]cyt was not prevented by cyclosporine A, FK506 or bongkrekic acid, but chelation of [Ca2+]cyt with BAPTA protected PC-3 cells from necrosis, suggesting rise in [Ca2+]cyt is one of the first steps in the process of cell necrosis and is followed by activation of the calcineurin pathway. We may conclude that simvastatin-induced apoptosis in PC-3 cells is dependent on the mevalonate pathway whereas necrosis is dependent on the calcineurin pathway associated with mitochondrial dysfunction / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Diversas são as formas de tratamento do câncer de próstata, com resultados oncológicos e complicações variadas . A crioablação foi proposta nos anos 60 e com a evolução dos métodos de imagem a técnica ressurgiu; 44 pacientes, divididos em 3 grupos (portadores de tumor de alto risco, tumores de baixo risco e falha de tratamento após radioterapia) foram submetidos a crioterapia por via percutânea transperineal. Sobrevida livre de doença foi de 87% no grupo baixo risco, 34% no grupo alto risco e 58% no grupo de resgate após falha de radioterapia. A complicação mais freqüente foi disfunção erétil (94,5%); obstrução infravesical ocorreu em 9 pacientes (20,4%); 6 pacientes (13,6%) apresentaram algum grau de incontinência urinária. Não houve nenhum caso de fístula uretroretal ou mortalidade relacionada ao procedimento / There are several treatments for prostate cancer with an assorted oncologic results and complications. Cryoablation was proposed in the 60 and the improvement of radiological techniques allowed the perineal percutaneous treatment; 44 patients divided into three groups (high risk tumors, low risk tumors and patients with recurrent prostate cancer following radiotherapy) were submitted to perineal percutaneous prostate cryoablation. Biochemical-free survival was 87% in low risk group, 34% in the high-risk group and 58% in salvage cryoablation. Erectile dysfunction was the most frequent complication (94,5%); Infravesical obstruction occurred in 20,4% of the patients and six (13,6%) developed urinary incontinence. There were no urethrorectal fistulae or mortality related to the procedure