Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / As infecções causadas por P. aeruginosa são freqüentemente de difícil tratamento devido à virulência e a resistência a vários antimicrobianos apresentados por este patógeno. Os carbapenens são geralmente o tratamento de escolha para infecções causadas por P. aeruginosa multirresistentes, porém, a resistência a estes compostos tem aumentado rapidamente, principalmente, devido ao surgimento de amostras produtoras de metalo-ß-lactamases. Os objetivos deste estudo foram: i) avaliar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos das amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens isoladas de hospitais brasileiros; ii) avaliar a freqüência da produção de MPL entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens; iii) avaliar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos das amostras de P. aeruginosa produtoras de MβL pela técnica de microdiluição em caldo; iv) detectara presença dos genes biasSPM-1, blaIMP-1, blaVIM-1, e blaVIM-2 entre as amostras de P. aeruginosa produtoras de MßL; v) avaliar a presença de variantes alélicos do gene blasIPM-1, entre as amostras de P. aeruginosa produtoras da MPL do tipo SPM-1, e vi) avaliar a similaridade genética entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens produtoras de MßL. Foram avaliadas 206 amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens isoladas entre 2001 e 2003, de 25 centros médicos. As 206 amostras foram testadas pelo método de disco-difusão. Os testes de sensibilidade foram realizados de acordo com a padronização do "National Committee for Clinical Laboratory Standards" (NCCLS). Os isolados resistentes aos carbapenens foram triados para a produção de metalo-ß-lactamases pelo teste de aproximação de discos utilizando dois inibidores enzimáticos (EDTA e ácido 2mercaptopropiônico). A produção de MßL foi confirmada pela metodologia do Etest® (fita Etest©MBL). Em seguida foi realizada a técnica de PCR para a pesquisa dos genes blaIMP-1, blaVIM-1, bIaVIM-2 e blaSPM-1. A avaliação da similaridade genética entre as amostras produtoras de MßL foi realizada pela técnica da ribotipagem automatizada e PFGE. Para fins comparativos, também foram selecionadas para análise da similaridade genéticaamostras não produtoras de MßL isoladas em centros médicos, que apresentavam amostras de P. aeruginosa produtoras de MPL. Altas taxas de resistência a maioria dos antimicrobianos foram observadas entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenes…(au). / Infections caused by Pseudomonas aeruginosa are often difficult to treat because of its virulence and antimicrobial resistance. Carbapenems are usually active against multiresistant P. aeruginosa, but resistant to these compounds has been increasing rapidly. High-level resistance to carbapenems is still uncommon in P. aeruginosa and is usually indicative of metallo-β-lactamases (MβL). The purpose of the study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profiles of carbapenems resistant P. aeruginosa isolated from Brazilian Hospitals, were to detect the presence of gene blaSPM-1, blaIMP-1, blaVIM-1 e blaVIM-2 and to evaluate the genetic similarity of P. aeruginosa resistant to carbapenems. Were evaluated 206 P. aeruginosa resistant to carbapenems collected during 2001 – 2003 from 25 medical centers. Antimicrobial susceptibilities testing to selected agents were determined by disk diffusion to 206 strains. The suscepptibility testing were to using the reference “National Committee for Clinical Laboratory Standards” (NCCLS). Carbapenems resistant isolates were screened for MβL production by disk approximation test using 2 enzyme inhibitors (EDTA and 2-mercaptopropionic acid). The procedure was confirmed by Etest (Etest MBL strip) and also by PCR assays using the following primers blaIMP-1, blaVIM-1, blaVIM-2 e blaSPM-1. The genetic similarity was performed in MβL producers strains and one negative-MβL strains for medical centers by automated ribotyping and PFGE. High resistance rates to majority of the antimicrobial agents were demonstrated. The polymyxins were the most active antimicrobial agents evaluated with 100,0% of susceptibility rate to all strains. The MβL production was detected in 98 (47,6%) of 206 strains. The blaSPM-1 gene was detected in 82 strains (83,7%) and blaIPM-1 gene in 3 strains (16,3%). Thirteen isolates did not show PCR amplification for none of the primers used. The analysis of genetic similarity showed a clonal diversity among the 98 carbapenems-resistant strains (46 ribogroups). CONCLUSION: This study indicates high prevalence of MβL producing in carbapenems-resistant P. aeruginosa and clonal dissemination these microrganism to a wide geographic area of Brazil. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Los ramnolípidos son una clase de biosurfactantes que presentan una gran variedad de aplicaciones, y entre las más importantes se encuentra el proceso de biorremediación mediante biodegradación y desintoxicación de efluentes industriales y en la eliminación de contaminantes de los suelos. El presente estudio se enfoca en la optimización de algunas fuentes inorgánicas para la producción de ramnolípidos por Pseudomonas aeruginosa 6K-11. En primer lugar se determinó la fuente óptima de nitrógeno, fósforo, calcio y hierro; siendo los compuestos de nitrato de sodio (NaNO3), Fosfato monopotásico (KH2PO4), Cloruro de calcio (CaCl2) y Sulfato de hierro (FeSO4), para cada fuente respectivamente. Posteriormente, el proceso para la producción de ramnolípidos fue optimizado usando el diseño experimental Box- Behnken. Los factores a tomar en cuenta fueron la proporción C/N, la proporción C/P, concentración de la fuente de calcio y la concentración de la fuente de hierro. La máxima producción de ramnolípidos fue 35,124 g/L después de 168 horas de fermentación con la proporción C/N de NaNO3 de 21,172, la proporción C/P de KH2PO4 de 16,279, 0,046 g/L de CaCl2 y 0,003 g/L de FeSO4. Los resultados de la presente investigación sugieren que la limitación nitrógeno y fósforo generan un mejor rendimiento de ramnolípidos, así como la aplicación de diseños experimentales es muy eficaz para determinar las condiciones óptimas de bioprocesos. / Tesis

OLIVEIRA, S.T. Uso do peptídeo sintético Lys-a1 no favorecimento da atividade antimicrobiana de ciprofloxacina contra Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. 2014. 89 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:21:48Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:48:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) Previous issue date: 2014 / Most microorganism lies embedded in communities called "biofilms". Among these stand out Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen of plants, animals and humans, frequently associated with nosocomial infections difficult to be eradicated due to the presence of biofilm. The fluoroquinolone antibiotics such as ciprofloxacin (CIP) against this bacterium are used, however, the mechanism of resistance has been developed for this microorganism. Thus, new forms of microbial control have been the subject of numerous studies in order to replace or enhance conventional methods. For this purpose, antimicrobial peptides (AMPs) obtained from various living beings represent an alternative to the development of new drugs. Synthetic forms analogous to Hylin a1 AMP (Hy-a1), isolated from species Hypsiboas albopunctatus, has shown excellent antimicrobial efficacy, among which stand out the peptide Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Thus, the aim of this work was to verify the influence of the peptide Lys-a1 in antimicrobial activity of CIP against pathogenic microorganism Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the curve death were determined to CIP and Lys-a1 separately. The influence of Lys-a1 in the antimicrobial activity of the CIP has been verified by the checkerboard method to quantify the biomass and the number of viable cells in biofilms by crystal violet staining and counting of colony forming units (CFU), respectively. The MIC and MBC values of Lys-a1 was 125 μg.mL-1 and the CIP was 0.24 and 0.48 μg.mL-1, respectively. The data showed that both the CIP as Lys-a1 are potent antibiotics against P. aeruginosa is able to inhibit both the planktonic growth and biofilm development. The interaction of substances interpreted by the fractional inhibitory concentration index (FICI) and showed an additive effect, establishing a decrease of 16 times the MIC and MBC of the CIP, when combined with the Lys-a1. This effect was also observed in the kinetics of death and antibiofilm activity. In conclusion, the additive effect of the Lys-a1 and CIP in antimicrobial activity suggests that the peptide has potential as a therapeutic agent and an adjuvant for the treatment of infectious diseases caused by P. aeruginosa can enable the use of lower concentrations of the antibiotic. / A maioria dos micro-organismos encontra-se integrados em comunidades denominadas “biofilme”. Dentre estes se destaca a Pseudomonas aeruginosa, um patógeno oportunista de vegetais, animais e humanos, frequentemente associado à infecções nosocomiais difíceis de serem erradicadas devido à presença de biofilme. Os antibióticos fluoroquinolonas, tais como a ciprofloxacina (CIP), são utilizados contra esta bactéria, entretanto, mecanismos de resistência vem sendo desenvolvidos por este micro-organismo. Assim, novas formas de controle microbiano têm sido alvo de inúmeras pesquisas a fim de substituir ou potencializar os métodos convencionais. Para esse fim, peptídeos antimicrobianos (AMPs) obtidos de diversos seres vivos representam uma alternativa para o desenvolvimento de novas drogas. Formas sintéticas análogas ao AMP Hilina a1 (Hy-a1), isolado da espécie Hypsiboas albopunctatus, tem demonstrado excelente eficácia antimicrobiana, dentre os quais se destacam o peptídeo Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a influência do peptídeo Lys-a1 na atividade antimicrobiana de CIP contra o micro-organismo patogênico Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. A concentração inibitória mínima (CIM), a concentração bactericida mínima (CBM) e a curva de morte foram determinadas para a CIP e a Lys-a1, separadamente. A influência da Lys-a1 na atividade antimicrobiana da CIP foi verificada pela metodologia checkerboard com quantificação da biomassa e do número de células viáveis do biofilme através da coloração pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colônia (UFC), respectivamente. Os valores de CIM e CBM da Lys-a1 foi de 125 μg.mL-1, e para a CIP foi de 0,24 e 0,48 μg.mL-1, respectivamente. Os dados mostraram que tanto a CIP quanto a Lys-a1 são potentes antimicrobianos contra P. aeruginosa, sendo capazes de inibir tanto o crescimento planctônico como o desenvolvimento do biofilme. A interação das substâncias foi interpretada pelo índice de concentração inibitória fracional (ICIF) e mostrou um efeito aditivo, estabelecendo uma diminuição de 16 vezes da CIM e da CBM da CIP, quando combinada com a Lys-a1. Esta influência foi observada também na cinética de morte e na atividade antibiofilme. Em conclusão, o efeito aditivo entre a Lys-a1 e a CIP na atividade antimicrobiana sugere que o peptídeo tem potencial como um agente terapêutico e adjuvante para o tratamento de doenças infecciosas causadas por P. aeruginosa, podendo habilitar o uso de concentrações menores do antibiótico.

A presença de bactérias patogênicas com capacidade de formar biofilme nos dispositivos de uso médico constitui um dos principais problemas na saúde pública. O biofilme confere proteção contra os mecanismos de defesa do hospedeiro e ação dos antimicrobianos, aumentando a virulência e resistência dos micro-organismos. A erradicação deste tipo de biofilmes é uma das principais estratégias no tratamento de doenças infecciosas associadas a bactérias patogênicas. A erradicação pode ser feita com o uso de biomoléculas produto do metabolismo secundário de diferentes micro-organismos. O objetivo deste estudo foi procurar novas moléculas com o potencial de erradicar biofilmes patogênicos associados a implantes médicos a partir de bactérias associadas ao género Drosera usando como bactérias alvo os patógenos Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus epidermidis. Para isto, foram crescidos 193 isolados bacterianos associados à planta Drosera que cresce na região litoral de Nova Tramandaí (RS) no sul do Brasil. Do total de isolados bacterianos foram usados os 36 que apresentaram atividade proteolítica para a produção de sobrenadantes bioativos. Os sobrenadantes bioativos foram usados para testes de erradicação de biofilme usando placas de 96 poços e a técnica de Cristal Violeta nas duas bactérias alvo. Nove isolados bacterianos associados à Drosera apresentaram atividade de erradicação de biofilme por acima de 40%, três deles para P. aeruginosa e seis para S. epidermidis. Destes isolados foi escolhido o isolado com melhor atividade de erradicação para P. aeruginosa e foram realizados testes para determinação da concentração mínima de erradicação de biofilme, antiformação de biofilme, viabilidade celular e microscopia eletrônica de varredura junto com a identificação da bactéria por médio de genes 16S, bem como o fracionamento bioguiado do sobrenadante. Adicionalmente, o sobrenadante bioativo foi testado in vitro em um modelo de dispositivo médico (cateter). A bactéria Gram-positiva que apresentou maior atividade de erradicação em seu sobrenadante possui 99% de similaridade com o Bacillus pumilus. Esta atividade de erradicação de biofilme de P. aeruginosa, pode ser atribuída à presença de uma molécula o composto de aproximadamente 34 kDa. Esta biomolécula o composto pode constituir uma alternativa complementária ao uso dos antibióticos convencionais. A perspectiva de purificar e caracterizar esta biomolécula ou composto para P. aeruginosa permitirá estudar seu mecanismo de ação e o uso no tratamento deste biofilme patogénico na clínica. / The presence of pathogenic bacteria with the ability to form biofilm on medical devices is one of the major problems in public health. The biofilm protects against the host defense mechanisms and the action of antibiotics, increasing the virulence and resistance of microorganisms. The elimination of this type of biofilms is a main strategy in the treatment of infectious diseases associated with pathogenic bacteria. This elimination can be done by using biomolecules from the secondary metabolism product of different micro-organisms. The objective of this study was to look for new molecules with the potential to eradicate pathogenic biofilms associated with medical implants from bacteria associated with gender Drosera using bacteria as targets Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus epidermidis pathogens. For this, were grown 193 bacterial isolates associated with Drosera plant that grows in the coastal region of New Tramandaí (RS) in southern Brazil. Of total bacterial isolates were used which had 36 proteolytic activity for the production of bioactive supernatants. The bioactive supernatants were used for biofilm eradication tests using 96- well plates and Crystal Violet technique in both target bacteria. Then the supernatant with the best eradication activity to P. aeruginosa was chosen to determine the minimum concentration to eradicate biofilm, biofilm inhibition, cell viability and scanning electron microscopy together with the identification of the bacteria by means of 16S and bioguided the fractionation of the supernatant. Additionally, the bioactive supernatant was tested in an in vitro model using the clinical device. Nine bacterial isolates associated with Drosera showed biofilm eradication activity by over 40%, three for P. aeruginosa and six for S. epidermidis. The Gram-positive bacterium with 99% similarity to the Bacillus pumilus showed the best biofilm eradication activity to P. aeruginosa capacity allocated to the presence of a molecule composed of approximately 34 kDa. These biomolecules can be an alternative to complement the use of conventional antibiotics or the direct use of antibiotic activity is presented as the case of bioactive found for P. aeruginosa supernatant. The prospect of purify and characterize this biomolecule or compound to P. aeruginosa will allow us to study this mechanism of action and the use in the treatment of this pathogenic biofilm in the clinic.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / laboratório e dessa forma caracterizar a evolução filogenética do clone de P. aeruginosa produtor da MβL SPM-1; comparar o poder discriminatório e a reprodutibilidade desta técnica com as técnicas de PFGE e ribotipagem automatizada para tipagem molecular de P. aeruginosa e avaliar a capacidade do MLST de discriminar amostras que foram classificadas sob ribogrupos distintos, mas com padrões de PFGE idênticos. Métodos: Um total de 50 amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 foram coletadas de nove centros brasileiros. Três amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 e duas amostras de P. aeruginosa n„o produtoras de MβL foram incluídas no estudo. A técnica de MLST foi padronizada conforme descrito por Curran et al. As seq¸Íncias obtidas foram comparadas com as existentes no banco de dados mundial de MLST para P. aeruginosa (www.pubmlst.org/paeruginosa) para que dessa forma fosse determinado o perfil alélico e, subsequentemente, o tipo de sequência (ST). Para a análise filogenética foi utilizado o método de Jukes-Cantor e Neighbor-Joining. Um total de cinco STs foram identificadas entre as 55 amostras de P. aeruginosa estudadas. Todos os isolados de P. aeruginosa produtores de SPM-1 apresentaram perfil alélico idêntico e, dessa forma, receberam a mesma ST (ST277), com exceção de uma amostra proveniente de Belo Horizonte, a qual recebeu a ST235. As três amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 foram classificadas sob a mesma ST (ST593), enquanto que as amostras não produtoras de MβL apresentaram perfis alélico ainda não existentes no banco de dados, e assim, duas novas STs foram criadas para estas amostras (ST594 e ST595). O clone endêmico brasileiro de P. aeruginosa produtor de SPM-1 (ST277) mostrou perfil alélico idêntico ao de uma cepa isolada na Áustria (ID 275), em setembro de 2006. Variação em um ˙nico lócus da ST277 foi encontrada em uma amostra proveniente da Áustria (ID279), isolada em janeiro 2007. Similaridade entre cinco dos sete alelos foi encontrada entre as amostras deste estudo pertencentes a ST277 e uma amostra isolada no Canadá· (ID 148), em 1990. Conclusão: Nossos dados sugerem que as amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 descendem de um ancestral comum e que podem possuir relação ancestral com os isolados da Áustria e mais remotamente com a amostra do Canadá. / FAPESP: 2005/57496-1 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 melise_silveira_ioc_mest_2014.pdf: 2936486 bytes, checksum: f73183e180b237b1d6dc63c0c0afa155 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O surgimento de bactérias Gram-negativas resistentes à drogas tem sido progressivo e alarmante. Entre os patógenos de particular importância está Pseudomonas aeruginosa multirresistentes à drogas (MDR). Um clone epidêmico de P. aeruginosa MDR produtor da metalo-\03B2-lactamase SPM-1, chamado clone SP (ST277), tem sido encontrado em diferentes estados brasileiros. O gene blaSPM-1 foi descrito em uma estrutura genética chamada ISCR4, responsável pela sua mobilização e expressão. Além do gene blaSPM-1, tem sido descrito, neste clone, a presença de um integron de classe I carreando genes de resistência (In163) e um elemento genético ISCR14 carreando uma metilase de RNAr 16S (rmtD), que confere resistência a altas concentrações de aminoglicosídeos. Este tipo de associação resulta em um perfil de resistência extremamente preocupante. Assim, este estudo teve como objetivo investigar a contexto genético dos genes blaSPM-1 e rmtD, além de caracterizar mutações em genes cromossomais associados a multirresistência a antimicrobianos em amostras de P. aeruginosa pertencentes ao clone ST277, através de Sourthen blot e sequenciamento de nova geração. A partir de 50 amostras de P. aeruginosa MDR isoladas entre 2007 e 2010, foram selecionadas 13 amostras pertencentes ao ST277 (através de MLST) que apresentaram positividade para blaSPM-1 e/ou rmtD e In163 (através de PCR), sendo 12 do clone SP (A) e uma de um clone diferente, M, através de PFGE. Através de restrição do DNA com as enzimas de restrição SpeI e XbaI, e posterior hibridação com sondas dos genes alvos (blaSPM-1, rmtD e In163) foi possível observar que os genes alvos encontravam-se em fragmentos distintos e que a amostra do clone M apresentou um perfil de hibridação diferentes das demais amostras demonstrando a ocorrência de vários rearranjos na mesma, indicando uma maior distância evolutiva A partir destes resultados, selecionamos 6 amostras para sequenciamento total do genoma utilizando a plataforma de sequenciamento MiSeq da Illumina. Através de sucessivas análises - que incluíram os contigs gerados na montagem de novo, montagens por referência e alinhamentos par a par- chegamos a uma região de 239.648pb onde estavam contidos o In163 e o ISCR14 carreando rmtD, inseridos em uma ilha genômica incorporada ao cromossomo bacteriano. O gene blaSPM-1 inserido no ISCR4 foi encontrado em uma região de 13.959pb, que incluía genes relacionados a plasmídios e transposons, contudo ainda não sabemos se esse elemento está incorporado ao cromossomo, ou livre em forma de plasmídio. Através da análise das mutações em genes cromossômicos associados a resistência à antimicrobianos, encontramos mutações nos genes oprD, ampD, mexZ, mexS, mexT, gyrA e parC que foram comuns às 6 amostras sequenciadas do ST277. Isso explicaria o fenótipo MDR nas amostras negativas para rmtD e/ou blaSPM-1. Além disso, como estas amostras foram isoladas em estados e anos distintos, acreditamos que essas mutações sejam características do ST277, o que pode ser um dos fatores associados a distribuição epidêmica deste clone no Brasil / The development of antimicrobial resistance among Gram - negative pathogens has been progressive and relentless. A pathogen of particular concern is multidrug - resistant (MDR) Pseudomonas aeruginosa . An epidemic clone of MDR P. aeruginosa producing the metall o - β - lactamase SPM - 1, named SP clone (ST277), has been found in different Brazilian states. The bla SPM - 1 gene has been described in a genetic structure called ISCR4, responsible for its mobilization and expression. Besides the bla SPM - 1 gene, it has been des cribed in this clone, a classe I integron (In163) carrying resistance genes and the genetic element ISCR14 carrying a 16S rRNA metilase ( rmtD ), that confers resistance to high concentrations of aminoglycosides. This kind of association results in an extrem ely worrisome profile of resistance. Thus, this work aimed to investigate the genetic background of bla SPM - 1 and rmtD genes and to characterize mutations in chromosomal genes associated with multidrug resistance in P. aeruginosa isolates belonging to ST277 clone, using Sourthen blot and next - generation sequencing. From 50 MDR P. aeruginosa isolates recovered from 2007 to 2010,there were selected 13 bla SPM - 1 and /or rmtD - positive isolates (by PCR) belonging to ST277 (by MLST), 12 f rom SP (A) clone and one from a different PFGE clone (M). By DNA digestion with Spe I and Xba I restriction enzymes, and subsequent hybridization with probes for target genes ( bla SPM - 1 , rmtD and In163 ), it was observed that the target genes were in separate fragments, and that the M clone isolate showed a different profile compared with the other isolates, indicating various rearrangements, suggesting a greater evolutionary distance. With these results, 6 isolates were selected for whole genome sequencing by Illumina MiSeq platform. Through successive analyzes – which included de novo assembly contigs, map to reference assemblies and pairwise alignments - we came up to a 239648pb region containing the In163 and ISCR14 inserted into a genomic island incorporated into bacterial chromosome. The bla SPM - 1 gene was inserted into ISCR4, found in a 13950pb region, which included genes related to plasmids and transposons, however we do not know whether this element s chromosomal or plasmidial . Through analysis of chromoso mal genes mutations associated with multidrug resistance, we found mutations in oprD, ampD, mexZ, mexS, mexT, gyrA e parC genes, which were common to the 6 ST277 isolates sequenced. This would explain the MDR phenotype in bla SPM - 1 and/or rmtD negative isol ates. Furthermore, since these microorganisms were isolated in different years and states, we believe these mutations are ST277 characteristic, which may be one of the factors associated with the epidemic characteristics of this clone

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Priscilla Sousa (priscillasousa@bce.unb.br) on 2017-11-07T11:20:59Z No. of bitstreams: 1 2017_ElaineMariaGuaráLôbo.pdf: 3413466 bytes, checksum: 9abee0f883e0274e43b7f665a94c66b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2018-05-08T18:54:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ElaineMariaGuaráLôbo.pdf: 3413466 bytes, checksum: 9abee0f883e0274e43b7f665a94c66b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-08T18:54:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ElaineMariaGuaráLôbo.pdf: 3413466 bytes, checksum: 9abee0f883e0274e43b7f665a94c66b0 (MD5) Previous issue date: 2018-05-09 / As doenças periodontais (DPs) apresentam-se como as doenças infecciosas mais comuns da cavidade oral, associadas ao biofilme dento-bacteriano, podendo resultar na destruição dos tecidos de suporte dos dentes e perda dentária. A clorexidina, por sua vez, é o principal agente utilizado para o controle deste biofilme, por ser um antisséptico catiônico de amplo espectro. Entretanto, apresenta efeitos adversos como ardência bucal, manchamento de dentes, aumento do cálculo e perda do paladar em pacientes que fazem seu uso por períodos prolongados. Neste sentido, os peptídeos antimicrobianos (PAMs) têm sido propostos como uma abordagem alternativa ao tratamento de infecções e controle do biofilme dental, com o intuito de evitar a resistência microbiana e consequentemente, os efeitos colaterais do uso da clorexidina. Desta forma, o presente estudo teve por finalidade avaliar in vitro a capacidade antimicrobiana, citotóxica e imunomodulatória do peptídeo synoeca-MP e da clorexidina isolados e em sinergismo contra a bactéria Pseudomonas aeruginosa, além de avaliar a inibição da formação de biofilme e bactérias planctônicas de P. aeruginosa, em diferentes concentrações do peptídeo synoeca-MP e da clorexidina. De acordo com os resultados, infere-se uma comprovada ação antimicrobiana, imunomodulatória e antibiofilme do peptídeo synoeca-MP, assim como também quando combinado com o digluconato de clorexidina. Dessa forma, depreende-se que a atuação sinérgica entre clorexidina e synoeca-MP foi benéfica nos ensaios antimicrobianos in vitro envolvendo a bactéria oportunista P. aeruginosa. Neste contexto, espera-se que os agentes, em conjunto, possam ser capazes de controlar a infecção e sua disseminação, além de potencializar a resposta imune de macrófagos contra o microrganismo estudado. Em adição, a redução da concentração de clorexidina pela adição da synoeca-MP pode minimizar efeitos indesejáveis de ambos em ambiente clínico. / The periodontal diseases (PDs) are the most common oral cavity’s infectious diseases. When associated with the dento-bacterial biofilm, may result in tooth support tissues’ destruction and even, tooth loss. The chlorhexidine, in turn, is the main agent used to control this biofilm, as it is a wide-spectrum cationic antiseptic. However, it has adverse effects such as oral burning, teeth staining, increased calculus and loss of taste in patients who use it for prolonged periods. In this sense, the antimicrobial peptides (AMPs) have been proposed as an alternative approach to the infections’ treatment and control of dental biofilm, in order to avoid microbial resistance and consequently, the side effects of the use of chlorhexidine. Thus, the aim of the present study was to evaluate in vitro the antimicrobial and immunomodulatory capacity and cytotoxicity of synoeca-MP peptide and chlorhexidine isolated and both in synergism against Pseudomonas aeruginosa bacterium, besides evaluating the inhibition of the biofilm formation and planktonic bacteria of P. aeruginosa, in different concentrations of the synoeca-MP peptide and chlorhexidine. According to the results, a proven antimicrobial, immunomodulatory and anti-biofilm action of the synoeca-MP peptide is inferred, as well as, when combined with chlorhexidine digluconate. Therefore, it is concluded that the synergistic action between synoeca-MP and chlorhexidine was beneficial in the in vitro antimicrobial assays involving the opportunistic P. aeruginosa bacterium. In this context, it is expected that the agents, together, could be able to control the infection and its dissemination, besides potentiating the immune response of macrophages against the studied microorganism. In addition, reducing the concentration of chlorhexidine by the addition of synoeca-MP peptide may minimize the undesirable effects of both in a clinical setting.

abstract: The viscous lung mucus of cystic fibrosis (CF) patients is characterized by oxygen gradients, which creates a unique niche for bacterial growth. Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus, two predominant microorganisms chronically infecting the airways of CF patients, typically localize in hypoxic regions of the mucus. While interspecies interactions between P. aeruginosa and S. aureus have been reported, little is known about the role of low oxygen in regulating these interactions. Studying interspecies interactions in CF lung disease is important as evidence suggests that microbial community composition governs disease progression. In this study, P. aeruginosa lab strain PAO1 and two primary clinical isolates from hypoxic tissues were cultured alone, or in combination, with methicillin resistant S. aureus (MRSA) strain N315 under hypoxic or normoxic conditions. Herein, it is shown for the first time that low oxygen conditions relevant to the CF lung affect the competitive behavior between P. aeruginosa and S. aureus. Specifically, S. aureus was able to better survive competition in hypoxic versus normoxic conditions. Competition data from different oxygen concentrations were consistent using PAO1 and clinical isolates even though differences in the level of competition were observed. PAO1 strains carrying mutations in virulence factors known to contribute to S. aureus competition (pyocyanin/phzS, elastase/lasA and lasI quorum sensing/lasI) were used to determine which genes play a role in the differential growth inhibition. The lasA and lasI mutants competed less effectively with S. aureus regardless of the oxygen level present in the culture compared to the isogenic wild type strain. These results are consistent with previous findings that elastase and lasI quorum sensing play a role in competitive behavior of P. aeruginosa and S. aureus. Interestingly, the phzS mutant competed less effectively in hypoxic conditions suggesting that pyocyanin may be important in microaerophilic conditions. This study demonstrates that oxygen plays a role in competition between P. aeruginosa and S. aureus and contributes to understanding CF environmental factors that may regulate microbial community dynamics important for disease progression with potential for development of therapeutic avenues. / Dissertation/Thesis / Masters Thesis Biology 2014

Resumo: A fibrose cística (FC) tem incidência de 1:9.520 nascidos vivos no Estado do Paraná. A principal causa de morbidade e mortalidade da doença é a infecção crônica por Pseudomonas aeruginosa (PA), o que torna a detecção e o tratamento precoces da colonização cruciais para prevenir a instalação da bactéria. Os objetivos do presente trabalho foram documentar a evolução da colonização por PA em crianças com FC na primeira infância, e determinar o método laboratorial mais eficaz, cultura de orofaringe ou detecção de anticorpos anti-LPS de PA, na detecção precoce da presença da bactéria. Trata-se de um estudo observacional de coorte prospectivo longitudinal. Quarenta e quatro crianças diagnosticadas com FC foram acompanhadas por três anos. Foram coletados swabs de faringe posterior para cultura e amostras de sangue para quantificação de anticorpos IgG contra uma preparação padronizada de antígeno de lipopolissacáride purificado de PA, a intervalos de aproximadamente 6 meses. Foi encontrada nas culturas uma frequência total de colonização por PA em 75% dos pacientes, dos quais aproximadamente 15% eram crônicos durante todo o tempo de acompanhamento. O método laboratorial mais eficaz para o diagnóstico precoce da infecção pulmonar por PA nos pacientes estudados foi a cultura de orofaringe. A utilização do LPS purificado de PA como antígeno demonstrou soroconversão significativa anterior à cultura somente na faixa etária entre 2 e 4 anos de idade, indicando que o método sorológico utilizado não foi capaz de detectar a infecção por PA antes da cultura em todos os pacientes estudados. Entretanto, o uso concomitante de métodos tradicionais bacteriológicos (cultura) e sorológicos pode contribuir para o diagnóstico precoce da presença de PA em crianças pequenas incapazes de obter amostras respiratórias ideais para o isolamento de PA. A baixa incidência de exacerbações respiratórias, o estado nutricional adequado da maioria dos pacientes, e a baixa prevalência de colonização crônica por PA podem ser explicados, pelo menos em parte, pela eficácia do monitoramento ambulatorial oferecido aos pacientes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T19:14:46Z : No. of bitstreams: 1 pirollo_mps_me_rcla.pdf: 1848706 bytes, checksum: 98d8ca1a8ad1551fbb2bb0fdf4a32eb8 (MD5) / Agência Nacional do Petróleo, Gás Natural e Biocombustíveis (ANP) / A cepa bacteriana Pseudomonas aeruginosa LBI, isolada de solo contaminado com hidrocarbonetos, foi inoculada visando promover a degradação dos hidrocarbonetos através da capacidade de produção de biossurfactantes. Como matéria prima alternativa de baixo custo para produção biossurfactantes utilizou-se a borra oleosa proveniente do fundo de tanques de estocagem da REPLAN-PETROBRAS. Os ensaios foram realizados em triplicatas a 30C, 200 rpm, durante 168 horas e o acompanhamento foi realizado por amostra a cada 24 horas para quantificar o biossurfactantes e o crescimento celular. A tensão superficial, PH e os estudos de estabilidade e emulsificação foram realizados com o sobrenadante do cultivo de 168 horas. A cepa bacteriana mostrou-se capaz de se desenvolver e produzir biossurfactantes em querosene, óleo diesel, petróleo e borra oleosa. Apenas benzeno e tolueno não apresentam resultados positivos. / Pseudomonas aeruginosa LBI isolated from hydrocarbon contaminated soil and potential producer of biosurfactant was used for hydrocarbon biodegradation. The petroleum waste from REPLAN-PETROBRAS, alternative source of low cost to biosurfactante synthesis was utilized on medium culture. These studies were done at 30C with shaking at 200 rpm, during 168 hours, in triplicate. The samples were withdrawn daily for growth studies and biosurfactante production. The surface tension, PH and stability studies were done with the cell-free broth after 168 hours of incubation. The strain was able to produce biosurfactantes and to grow on the analyzed carbon sources, except benzene and toluene. When cultivated on diesel oil 30%, the strain produced higher quantities of biosurfactante. The biosurfactante was able to emulsifier all analyzed hidrocarbons. Stability studies of the product on the culture broth indicate that the biosurfactante is stable in extreme conditions. Therefore the strain Pseudomonas aeruginosas LBI and the biosurfactante produced have potential applications in bioremediation of site hydrocarbon contaminated, and possible application in enhanced oil recuperation.