O objetivo deste trabalho foi estudar o metabolismo secundário de Piper cernuum (Piperaceae) através do isolamento e caracterização dos principais produtos acumulados e a associação com a atividade enzimática da PAL (fenilalanina-amônia-liase) na planta diferenciada (adulta e plântulas) e nas suspensões celulares. Das folhas foram isolados diversos derivados do ácido cinâmico e a lignana cubebina. Entretanto, na análise do óleo volátil das folhas, através de CG-EM, observou-se somente a presença de mono- e sesquiterpenos, sendo que os mais abundantes foram biciclogermacreno (21,88%) e β cariofileno (20,60%). O óleo apresentou atividade inibitória contra Staphylococcus aureus e Candida albicans. As suspensões celulares foram caracterizadas quanto à produção de biomassa, variação de pH e captação de açúcar. Os principais metabólitos foram isolados e caracterizados como sendo tiramina e dopamina que foram quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência através de seus derivados dansilados. As atividades da PAL nas plântulas cultivadas in vitro foram superiores às das plântulas cultivadas em campo e observou-se uma oscilação rítmica da sua atividade enzimática com picos às 6 e 18 horas. / The aim of this work was to investigate the secondary metabolism of Piper cernuum (Piperaceae) by means of isolation and characterization of major secondary compounds accumulated in association to the enzymatic activity of PAL in the differentiated plant material (adult and seedlings) and cell suspension cultures. The major compounds in leaves were derivatives of cinnamic acid and the lignan cubebin. Nevertheless, the analysis of essential oil from leaves by GC-MS indicated the presence of only mono- and sesquiterpenes, among which bicyclogermacrene (21.88%) and β-cariophyllene (20.60%) were the predominant ones. The oil was active against Staphylococcus aureus and Candida albicans. The cell suspension cultures had their growth cycle characterized by means of evaluation of biomass production, pH variation and sugar uptake. The major secondary compounds in the cells were characterized as tyramine and dopamine which were quantified by HPLC as their dansylated derivatives. The PAL activities in the seedlings cultivated in vitro were higher than those in the seedlings growing in field conditions and a rithymic oscillation of enzyme activity was clearly observed with peaks at 6a.m. and 6p.m.

Este trabalho investiga as interações entre o grupo carbonílico e enxofre, oxigênio ou dupla olefínica, através do estudo dos seguintes compostos: ciclopentanona (I), 3-tiaciclopentanona (II), 3-oxaciclopentanona (III), ciclohexanona (IV), 3-tiaciclohexanona (V), 3-oxaciclohexanona (VI), cicloheptanona (VII), 3-tiacicloheptanona (VIII), 4-tiaciclohexanona (IX), 4-tiacicloheptanona (X), ciclooctanona (XI), 5-tiaciclooctanona (XII) e 3-ciclohexenona (XIII). É fornecida uma revisão bibliográfica, na qual são apresentados os trabalhos sobre frequência de estiramento e basicidade relativa do grupo carbonílico de cetonas por espectroscopia no infravermelho, sendo destacados alguns aspectos mais intimamente ligados a este trabalho. Entre estes aspectos, podem ser enumerados: ressonância de Fermi na ciclopentanona, efeito de campo, efeito do tamanho do anel sobre a frequência e basicidade da carbonila, e impedimento estérico nas ciclanonas. São descritas as sínteses de algumas das cetonas da série estudada, a saber: 3-tiaciclopentanona (II), 3-tiaciclohexanona (V), 3-oxaciclohexanona (VI), 4-tiaciclohexanona (IX) e 4-tiacicloheptanona (X). São fornecidos os dados das medidas de deslocamentos das frequências de estiramento das hidroxilas de fenol e de p-clorofenol, em associação (1:1) com as treze cetonas cíclicas estudadas, à diluição infinita do doador em tetracloreto de carbono (ΔvoOH). São determinadas as constantes de associação (Kass) dos complexos formados entre p-clorofenol e cetonas (1:T), em tetracloreto de carbono, no infravermelho próximo, para as 3- e 4-tiaciclanonas (II), (V), (VIII), (IX) e (X), 3-oxaciclanonas (III) e (VI) e cetonas não substituidas correspondentes (I), (IV) e (VII). São apresentadas as frequências de estiramento do grupo carbonilico (vCO) das treze cetonas cíclicas estudadas, em tetracloreto de carbono. Os resultados de ΔvoOH e Kass para as ciclanonas substituídas em posições 3 e 4 por enxofre ou oxigênio, em comparação com as ciclanonas não substituídas correspondentes, indicam que: 1) 3-tiaciclanonas (II) , (V) e (VIII) apresentam uma diminuição de basicidade; 2) a ordem de diminuição de basicidade em 3-tiaciclanonas é: 3-tiaciclopentanona (II) > 3-tiaciclohexanona (V) = 3-tiacicloheptanona (VIII); 3) 4-tiaciclohexanona (IX) e 4-tiacicloheptanona (X) mostram uma diminuição de basicidade comparável à das 3-tiaciclanonas correspondentes; 4) 3-oxaciclopentanona (III) e 3-oxaciclohexanona (VI) apresentam uma diminuição de basicidade, que é da mesma ordem de grandeza em ambos os compostos; 5) a diminuição de basicidade em 3-oxaciclopentanona (III) é menor e em 3-oxaciclohexanona (VI) é maior do que nas tiaciclanonas correspondentes. As medidas de frequência de estiramento da carbonila (vCO) para as mesmas ciclanonas demonstram que: 1) não há diferenças significativas entre as frequências da carbonila de tiaciclanonas e ciclanonas não substituidas correspondentes; 2) há um aumento na frequência da carbonila, passando-se das ciclanonas não substituidas (I) e (IV) para as 3-oxaciclanonas correspondentes (III) e (VI). É apresentada uma discussão, em que a existência de possíveis interações é examinada pela interpretação dos dados experimentais, à luz dos efeitos indutivos e de campo, alterações no anel provenientes da introdução de um heteroátomo, e níveis de energia, proximidade e posição geométrica dos orbitais interagentes. É sugerida a ocorrência de uma interação no espaço significativa entre o heteroátomo e o grupo carbonílico em 3-tiaciclopentanona (II), 3-oxaciclopentanona (III) e 3-oxaciclohexanona (VI), e a ausência de uma tal interação Significativa em 3-tiaciclohexanona (V) e 3-tiacicloheptanona (VIII). Não se elimina, porém, a possibilidade da existência de uma fraca interação no espaço nos dois útimos compostos. O estudo de basicidade de 5-tiaciclooctanona (XII) e 3-ciclohexenona (XIII) indica: 1) um aumento na basicidade em relação às cetonas nao substituídas correspondentes; 2) um aumento de basicidade anormal com o aumento de concentração das cetonas em tetracloreto de carbono. Os dados de basicidade, em conjunto com os estudos efetuados paralelamente por Wladislaw e col. e com os resultados de outras medidas da literatura, permitem sugerir para a 5-tiaciclooctanona (XII) e 3-ciclohexenona (XIII): 1) a ocorrência de transferência de carga no estado fundamental; 2) a existência, em solução, de um equilíbrio entre duas conformações, uma em que há transferência de carga de enxofre ou dupla olefínica para a carbonila, e outra em que esta transferência é ausente. / This thesis investigates the interactions between the carbonyl group and sulphur, oxygen or ethylene double bond, in the following compounds: 3-thiacyclopentanone (I), 3-oxacyclopentanone (II), 3-thiacyclohexanone (III), 3-oxacyclohexanone (IV), 3-thiacycloheptanone (V), 4-thiacyclohexanone (VI), 4-thiacycloheptanone (VII), 5-thiacyclooctanone (VIII) and 3-cyclohexenone (IX), by comparison with the corresponding unsubstituted compounds. The thesis contains: A literature review on the stretching frequencies and relative basicities of the carbonyl group in ketones, in which some aspects connected with the present work, such as cyclopentanone Fermi ressonance, field effect, ring size influence and steric hindrance are emphasized. The syntheses of 3-thiacyclopentanone (I), 3-thiacyclohexanone (III), 3-oxacyclohexanone (IV), 4-thiacyclohexanone (VI) and 4-thiacycloheptanone (VII). The ΔvoOH data, as measured by i.r. shifts of OH stretching vibration of phenol and p-chlorophenol associated to the ketones studied (1:1), in carbon tetrachloride. The equilibrium constants (Kas.) for the association complexes (1:1) between p-chlorophenol and 3-and 4-thiacyclanones (I), (III), (V), (VI) and (VII) and 3-oxacyclanones (II) and (IV) and the corresponding unsubstituted ketones, in carbon tetrachloride, obtained from near infra-red measurements. The carbonyl stretching frequencies (vCO) for the ketones studied, in carbon tetrachloride. The basicities measurements data indicate that: 3-Thiacyclanones (I), (lII) and (V) are less basic than the corresponding unsubstituted ketones. The basicities decrease order in 3-thiacyclanones is: 3-thiacyclopentanone (I) > 3-thiacyclohexanone (III) = 3-thiacycloheptanone (V). The basicity decrease in the 4-thiacyclohexanone (VI) and 4-thiacycloheptanone (VII) is similar to that obtained for the corresponding 3-thiacyclanones. 3-Oxacyclopentanone (II) and 3-oxacyclohexanone (IV) show similar basicity decrease. The basicities of 3-oxacyclopentanone (II) and 3-oxacyclohexanone (IV) are, respectively lower and higher than those of the corresponding thia analogues. 5-Thiacyclooctanone (VIII) and 3-cyclohexenone (IX) are more basic than the corresponding unsubstituted ketones. An abnorml raise of basicity occurs in 5-thiacyclooctanone (VIII) and 3-cyclohexenone (IX) with the increase of concentration in carbon tetrachloride. The carbonyl stretching frequency measurements (vCO) show that: The vCO values for thiacyclanones do not differ significantly from those for the corresponding unsubstituted ketones. 3-Oxacyclanones exhibit higher vCO values than the corresponding unsubstituted ketones. A discussion is presented, in which: The possibility of through-space and through-bond interactions in the 3- and 4-substituted cyclanones is considered by examination of experimental data in the light of the possible effects described in the literature review, energy levels, proximity and geometry of the interacting orbitals. The possibility of a charge transfer from the sulphur atom or ethylene double bond to the carbonyl group in 5-thiacyclooctanone (VIII) and 3-cyclohexenone (IX) is examined by comparison of the experimental data of the present thesis with those reported in the 1iterature and those obtained by B.Wladislaw et al. The following conclusions are presented: A significant through-space interaction between sulphur or oxygen atoms and carbonyl group takes place in the 3-thiacyclopentanone (I), 3-oxacyclopentanone (II) and 3-oxacyclohexanone (IV). There is no evidence for a sicnificant through-space interaction between sulphur atom and carbonyl group in 3-thiacyclohexanone (III) and 3-thiacycloheptanone (V), though a weak interaction may be present. 5-Thiacyclooctanone (VIII) and 3-cyclohexenone (IX) exist in solution, as an equilibrium mixture of two conformations, one in which charge transfer occurs and another in which it is absent.

A investigação de degradação de compostos-modelo de lignina por meios eletroquímicos integra a linha de pesquisa desenvolvida neste grupo há um certo tempo. Neste trabalho utilizou-se 4 compostos-modelo de lignina cujos anéis aromáticos representam unidade siringila, ou seja, três átomos de oxigênio ligados ao anel. São eles: 2-(4-metoxifenóxi)-1-(3,4,5-trimetoxifenil)-etanona (CM-I), 2-(2-metoxifenóxi)-1-(3,4,5-trimetoxifenil)-etanona (CM-II) e os dois álcoois correspondentes (CM-III) e (CM-IV), respectivamente. Para sintetizar estes 4 compostos, foi necessário realizar uma rota sintética que se iniciou com a metilação do ácido 3,4,5-tri-hidroxibenzóico até chegar ao composto chave 2-bromo-1-(3,4,5-trimetoxifenil)-etanona (4). A etapa de bromação da 3,4,5-trimetoxiacetofenona (3) foi a mais problemática pois em vários métodos distintos de bromação a cetona dibromada era obtida como produto secundário. A reação de bromocetona com o fenol 2- ou 4-metoxilado conduziu às cetonas (CM-I) e (CM-II) desejadas. Ambas foram reduzidas aos álcoois (CM-III) e (CM-IV) com borohidreto de sódio Os experimentos eletroquímicos de voltametria cíclica dos 4 compostos-modelo usando anodo de Pt em acetonitrila contendo perclorato de sódio revelaram que suas oxidações eram irreversíveis. Eletrólises preparativas foram feitas principalmente em metanol contendo metóxido de sódio. Quanto à eletrólises preparativas das duas cetonas CM-I e CM-II, observou-se que na oxidação de CM-I houve formação de mistura complexa de produtos enquanto que na de CM-II, parte do material de partida foi recuperado. Já nas oxidações dos álcoois, os resultados obtidos dependeram principalmente da posição da metoxila no grupo fenóxi ligado à cadeia lateral. Quando esta metoxila se encontrava na posição orto, as misturas de reação continha como componente principal o material de partida. Com a metoxila na posição para, dois compostos principais foram isolados, e os seus dados espectroscópicos são coerentes com os esperados para derivados do 1,4-dioxaspiro-[4,5]deca-6,9-dieno. / The investigation of the electrochemical degradation of lignin model compounds has been part of the research developed in this group for a certain time. In the present work 4 lignin model compounds, in which one of the aromatic rings is representative of syringyl units, were used. They are, 2-(4-methoxyphenoxy)-l(3,4,5-trimethoxyphenyl)-ethanone ( CM-I), 2-(2-methoxyphenoxy )-1-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-ethanone (CM-II) and their corresponding alcohols (CM-III) and (CM-IV), respectively. To synthesize these 4 compounds, a synthetic route was developed, beginning with the methylation of the 3,4,5-trhydroxy-benzoic acid. The key compound of this synthetic route was 2-bromo-1-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-ethanone (4). The bromination of the 3,4,5-trimethoxyacetophenone was the most problematic step, because the dibromated ketone was obtained as a by product in distinct methods. The reaction of the 2-bromo-1-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-ethanone with 2- and 4- methoxylated phenols afforded CM-I and CM-II. Both were reduced to CM-III and CM-IV with sodium borohydride. The cyclic voltammetric experiments of the 4 model compounds using platinum anode in MeCN/ 0,1 M NaClO4 revealed that their oxidations were irreversible. Preparative electrolyses were made mostly in MeOH/MeONa. The electrolyses of the two ketones showed that when CM-I was oxidized a complex mixture of products was obtained, while in the oxidation of CM-II part of the starting material was recovered. In the oxidations of the two alcohols, the results obtained depended mostly on the position of the methoxy group in the phenoy group connected to the carbon-carbon side chain. When the methoxy group was at the ortho position, the reaction mixture contained the starting material as the main product. When this methoxy group was at the para position, two major compounds were isolated, and their spectroscopic data are consistent with those expected for 1,4-dioxaspiro-[4,5]-deca-6,9-diene derivates.

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Resumo: O presente trabalho descreve o estudo químico das folhas e galhos de Prunus myrtifolia (L.) Urban (Rosaceae), exemplar coletado na Fazenda Campininha em São Paulo, SP. A química do gênero Prunus é determinada pela ocorrência de glicosídeos cianogênicos , terpenóides, flavonóides e outras substâncias fenólicas. Os extratos obtidos a partir de folhas e galhos de P. myrtifolia foram fracionados através de técnicas cromatográficas diversas que forneceram 31 substâncias, sendo 3 consideradas inéditas. Suas estruturas foram determinadas através de dados espectrométricos (RMN, EM, UV, entre outros), bem como através da utilização de técnicas hifenadas tais como CLAE-UV e CLAE-EM. O fracionamento cromatográfico guiado por testes químicos demonstrou o potencial de atividade antioxidante de flavonóides e arilpropanóides isolados de folhas e galhos de P. myrtifolia. A mistura de esteróides estigmasterol e sitosterol apresentou atividade antifúngica moderada frente a fungos fitopatógenos do gênero Cladosporium enquanto que os glicosídeos cianogênicos prunasina e durrina, além do ácido prunasínico apresentaram atividade antifúngica contra Cândida krusei e C. Albicans. A atividade citotóxica para Sacharomyces cerevisea apresentada pelos extratos brutos não foi mais observada após os procedimentos de fracionamento cromatográfico. Entretanto, a mistura de triterpenos pentacíclicos triidroxilados obtida a partir do extrato etanólico de galhos, apresentou atividade antitumoral para células de câncer de cólon, de mama e do sistema nervoso central humano. Os resultados obtidos com esse estudo químico corroboram dados da literatura sobre Prunus e Rosaceae e poderão contribuir com estudos de quimiossistemática. / Abstract: This work reports the results from chemical study of leaves and branches of Prunus myrtifolia (L.) Urban. (Rosaceae), collected at Fazenda Campininha, São Paulo. The chemistry of genus Prunus is determined by occurrence of cyanogenic glicosides, terpenoids, flavonoids and other phenolic compounds. Ethanolic extracts obtained from leaves and branches of Prunus myrtifolia were fractionated through chromatographic methods that led to the isolation of 28 compounds wich were previously descibed and 3 additional new compounds. Their structures were determined by spectrscopic data (NMR, MS, UV, etc), and also by the use of hyphenated technics (HPLC_UV and HPLC-MS). The fractionation guided by chemical and biological assays demonstrated the atioxidant activity of 6 flavonoids, arilpropanoid derivatives and other isolates from leaves and branches of P. myrtifolia. The mixture of steroids stigmasterol and sitosterol obtained showed moderate activity against phytopatogenic fungus of genus Cladosporium and the cyanogenic glycosides prunasin and dhurrin, and prunasinic acid showed antifungal activity against human Candida pathogens. The cytotoxic activity against Sacharomyces cereviseae presented for crude ethanol extracts were not observed anymore after the chromatograpic frationation procedures, although the trihydroxylated triterpenoids obtained from branches ethanol extract inhibited growth of colon, breast and CNS human cancer cells. Additionally, the results obtained with this work corroborate chemical data about genus Prunus and Rosaceae and therefore contribute with chemosystematic studies. / Doutor

Resumo: O presente trabalho objetivou o estudo fitoquímico dos frutos de Senna spectabilis e o estudo comparativo do perfil alcaloídico entre S. spectabilis e Cassia leptophylla, outra espécie vegetal relatada como fonte de alcalóides piperidínicos. O estudo fitoquímico dos frutos de S. spectabilis forneceu 4 alcalóides piperidínicos: cassina (1), 3-O-acetil-cassina (20), 3-O-feruloil-cassina (18) e um estereoisômero da cassina (19), cujas configurações, ralativa e absoluta, ainda não foram determinadas. Dentre estes, somente a cassina (1) já era conhecida e foi isolada, em nosso grupo de pesquisa, como o alcalóide majoritário das flores da mesma espécie. Estes alcalóides foram avaliados quanto às atividades seqüestradora de radicais livres (DPPH) e inibidora da enzima acetilcolinesterase. As substâncias 1, 2 e 4 apresentaram forte atividade anticolinesterásica, com concentração inibitória mínima semelhante à galantamina, utilizada como padrão positivo. Quanto à atividade seqüestradora de radicais livres, o único que apresentou leve estabilização do radical foi o derivado feruloil piperidínico (18), quando comparado com a rutina, utilizada como padrão positivo. Entretanto, a maior concentração do alcalóide não atingiu a concentração inibitória de 50% (IC50), observada para a rutina. O estudo do perfil químico entre as espécies S. spectabilis e C. leptophylla foi inicialmente baseado em experimentos comparativos de cromatografia em camada delgada e ressonância magnética nuclear de hidrogênio. Os resultados obtidos demonstraram que somente os extratos das flores e frutos de S. spectabilis apresentavam substâncias alcaloídicas como metabólitos detectáveis. Por outro lado, a análise por espectrometria de massas permitiu evidenciar metabólitos alcaloídicos piperidínicos em ambas as espécies estudadas, levando-nos a concluir sobre a importância desta técnica na bioprospecção de metabólitos minoritários. / Abstract: The present work aimed the phytochemical study of the fruits of Senna spectabilis and a comparative analysis of the alkaloid profile between S. spectabilis and Cassia leptophylla, another species reported as a source of piperidine alkaloids. The phytochemical study of the fruits of S. spectabilis furnished 4 piperidine alkaloids: cassine (1), 3-O-acetyl-cassine (20), 3-O-feruloyl-cassine (18) and a stereoisomer of cassine (19), whose absolute and relative configurations were not stablished yet. Among these, only cassine (1) was already known and it had been previously isolated as the major alkaloid of the flowers in the same species. These alkaloids were evaluated for their potential as free radical scavengers towards DPPH and acetylcholinesterase inhibitors. Substances 1, 2 and 4 showed strong activity in inhibition of acetylcholinesterase, with a minimum inhibitory concentration similar to galantamina, used as a reference compound. In the free radical scavenger assay, compound 18 was the only active, showing a slightly radical stabilization, when compared with the rutina, used as a reference compound. However, the largest concentration of the alkaloid didn't reach the inhibitory concentration for 50% (IC50), obtained by rutina. The chemical profile study between S. spectabilis and C. leptophylla species was initially based on comparative experiments using thin layer chromatography, and proton nuclear magnetic resonance. The results indicated that alkaloidal metabolites were present only in the S.spectabilis extracts. On the other hand, analysis by tandem mass spectrometry revealed the presence of piperidine alkaloids in both species, leading us to conclude the relevance of this technique in bioprospecting of minority metabolites. / Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Norberto Peporine Lopes / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work describes the synthesis of a new series of 2-[3-alkyl(aryl/heteroaryl)-5-trihalomethyl-5-hydroxy-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-il]-5-[3-alkyl(aryl/heteroaryl)-5-trihalomethyl-5-hydroxy-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-il-1-carbonyl]pyridines by the cyclocondensation reaction of 1,1,1-trihalo-4-alkoxy-4-alkyl(aryl/heteroaryl)-3-alken-2- ones [CX3C(O)CH=CR1OR, where R = Me, Et; R1 = H, Me, Ph, 4-MeOPh, 4-NO2Ph, 4,4 -Biphenyl, 1-Naftyl, 2-Furyl, 2-Thienyl and X = F, Cl] with 6-hydraninonicotinic hydrazide hydrate. Yields of 67 to 97% was obtained when the reactions were performed in ethanol as a solvent to 78 oC for 4 hours. In a subsequent step are described the reactions of dehydration intramolecular of 2- (1H-pyrazol-1-yl)-5-(1H pyrazol-1-yl-1-carbonyl)pyridines. These reactions were carried out in pyridine/benzene in the presence of thionyl chloride and led to the isolation of a series of 2- [3-alkyl (aryl/heteroaryl)-5-trihalomethyl-1H- pyrazol-1-yl]-5-3-alkyl (aryl/heteroaryl)-5-trihalomethyl-1H-pyrazol-1-yl-1-carbonyl]pyridine, with yields of 64 to 86%. All compounds were characterized by analytical experiments 1Hs and 13Cs, 2DCOLOQ NMR, mass spectrometry (GC-MSD) and its purities they were determined by CHN elemental analysis. / Esta dissertação apresenta a síntese de uma nova série de 2-[3-alquil (aril/heteroaril)-5-trialometil-5-hidroxi-4,5-diidro-1H-pirazol-1-il]-5-[3- alquil(aril/heteroaril)-5-trialometil-5-hidroxi-4,5-diidro-1H-pirazol-1-il-1- carbonil]piridinas, obtida a partir de reações de ciclocondensação de 1,1,1-trialo-4- alquil(aril/heteroaril)-4-alcoxi-3-alquen-2-onas [CX3C(O)CH=CR1OR, onde R = Me, Et; R1 = H, Me, Ph, 4-MeOPh, 4-NO2Ph, 4,4 -Bifenil, 1-Naftil, Fur-2-il e Tien-2-il e X = F, Cl] com hidrazida 6-hidrazino nicotínica. Rendimentos de 67 a 97% foram obtidos quando as reações foram executadas em etanol como solvente a 78 oC por 4 horas. Numa etapa posterior, são descritas as reações de desidratação intramolecular de 2- (1H-pirazol-1-il)-5-(1H-pirazol-1-il-1-carbonil) piridinas. Estas reações foram realizadas em meio piridina/benzeno, na presença de cloreto de tionila e levaram ao isolamento de uma série de 2-[3-alquil(aril/heteroaril)-5-trifluormetil-1H-pirazol-1-il]-5-[3-alquil (aril/ heteroaril)-5-trifluormetil-1H-pirazol-1-il-1-carbonil]piridina, com rendimentos de 64 a 86%. Os compostos foram caracterizados por experimentos de RMN de 1H, RMN de 13C {1H} e RMN 2D COLOQ, espectroscopia de massas (GC-MSD) e as suas purezas foram determinadas por análise elementar CHN.

Orientador: Angela Regina Araújo / Banca: Marcia Nasser Lopes / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Banca: Norberto Peporine Lopes / Resumo: O presente trabalho tem como objetivo a busca de compostos, que inibem in vitro a enzima acetilcolinesterase (AChE), úteis para o tratamento de doenças neuro-degenerativas crônicas como o mal de Alzheimer. Neste contexto, a espécie Tetrapterys mucronata Cav. (Malpighiaceae) foi selecionada no banco de extratos do NuBBE, devido ao resultado positivo para a inibição in vitro da AChE. Na literatura, esta espécie também é relatada como uma das espécies usadas em menor escala na preparação da bebida Ayahuasca. Dessa forma, foi realizada a análise fitoquímica dos extratos EtOH e aquoso de T. mucronata. Após obtenção do perfil químico dos referidos extratos através da técnica CLAE-DAD, observou-se a presença de taninos, substâncias que interferem nas análises cromatográficas de identificação e isolamento dos demais constituintes do extrato. Para remoção destes interferentes, foram utilizadas as técnicas de extração líquido-líquido e extração em fase sólida (SPE) com poliamida como fase estacionária. A fração obtida livre de taninos (P6) foi analisada pelas técnicas CLAE-DAD-EM e UPLC-TOF-EM, a fim de identificar os constituintes químicos presentes nesta fração previamente descritos na literatura para a família Malpighiaceae. Esta metodologia permitiu a identificação do flavonol catequina. Como não foi possível identificar os demais constituíntes da fração P6, esta foi submetida a purificação em larga escala, utilizando a técnica de MPLC-UV. As frações obtidas por este procedimento foram analisadas por técnicas espectrométricas e como resultado foi possível identificar e caracterizar 17 compostos destes, 5 novos produtos naturais: dois alcaloides, 5'-hidroxi-3'-etilamina-2'-[3-(3-(1H-indol-3-il)1,2-propanodiol]triptamina (6) e 5'-hidroxi-3'-etil-N,N-dimetilamina-2'-[3-(3-(1H-indol-3-il)1,2-propanodiol]triptamina (7) e três derivados de fenantreno 2,6-diidroxi-9,10-diidrofenantreno (13)... / Abstract: The present work aims at seeking compounds that inhibit in vitro the enzyme acetylcholinesterase (AChE), and might be useful for the treatment of chronic neuro-degenerative diseases such as Alzheimer's. In this context the species Tetrapterys mucronata Cav. (Malpighiaceae) was selected from NuBBE's bench of extract to be the focus of this work, due to the positive result for the in vitro inhibition of AChE conducted prior to this study. In the literature this species is also reported as a species used a lesser extent in the preparation of Ayahuasca. Thus, it was performed the phytochemical analysis of EtOH and aqueous extracts of T. mucronata. After analysis by HPLC-DAD of these extracts, was observed the presence of polymeric compunds (tannins). Liquid-Liquid Extraction (LLE) and Solid Phase Extraction (SPE) using polyamide as stationary phase were used to remove these interferents. The tanin free fraction (P6) was analyzed by HPLC-DAD-MS and UPLC-TOF-MS techniques in order to identified chemical constituents present in this fraction which had been previosly described in other species of Malpighiaceae family. This methodology led to the identification of catechin. As almost all the compounds present in the fraction could not be identified by the hyphenated techniques mentioned above, the P6 fraction was subjected to large-scale purification steps using MPLC-UV. The fractions obtained by this procedure were analyzed and as results were thus idintified 17 compounds, 5 of them new natural products: two alkaloids, 3-(3-(2-aminoethyl)-5-hydroxy-1H-indol-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propane-1,2-diol (6) and 3-(3-(2-N,N-dimethyl-aminoethyl)-5-hydroxy-1H-indol-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propane-1,2-diol (7); three phenanthrene derivatives 2,6-dihydroxy-9,10-dihydrofenanthrene (13), 2,6-dihydroxifenantrene (14) and 7-methyl-2,6-dihydroxifenantrene (17). 12 compounds were described for the first time in Malpighiaceae family: three tryptamine alkaloids... / Doutor

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-08-31T15:49:34Z No. of bitstreams: 1 Estudo fitoquímico da raiz de Dictyoloma vandellianum A. Jus.pdf: 13732713 bytes, checksum: 433553ed8ebe16e3ce80d35862057ca6 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Reis (vanessa.jamile@ufba.br) on 2016-09-02T16:23:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Estudo fitoquímico da raiz de Dictyoloma vandellianum A. Jus.pdf: 13732713 bytes, checksum: 433553ed8ebe16e3ce80d35862057ca6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T16:23:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Estudo fitoquímico da raiz de Dictyoloma vandellianum A. Jus.pdf: 13732713 bytes, checksum: 433553ed8ebe16e3ce80d35862057ca6 (MD5) / Nesta dissertação são descritos o isolamento e determinação estrutural de alguns produtos naturais, presentes nos extratos orgânicos da raiz de um espécime de Dictyoloma vandellianum A. Juss, coletado na Chapada Diamantina, Bahia. Do extrato diclorometânico da casca da raiz foram isoladas cinco cromonas. Do extrato hexânico do cerne da raiz foi isolado um esteróide. Dois alcalóides foram isolados do extrato metanólico do cerne da raiz. As substâncias isoladas e caracterizadas foram: 6-(3-metil-2-butenil) allopteroxilina éter metílico; 8-(3-metil-2-butenil) spatheliacromeno éter metílico; 6-(3-metil-2-butenil) allopteroxilina; 8-(3-metil-2-butenil) spatheliacromeno; spatheliabiscromeno; β-sitosterol; N-metil-8-metoxiflindersina e 8- metoxiflindersina. Elas foram determinadas por espectroscopia de infravermelho, técnicas de RMN, associações com propostas de biossíntese e comparação com dados da literatura. A localização do gênero Dictyoloma tem sido duvidosa desde a primeira vez em que foi descrito como integrante da família Rutaceae. O isolamento de cromonas preniladas na espécie D. vandellianum A. Juss, metabólitos que não são encontrados em outros gêneros da família Rutaceae, demonstra a singularidade do gênero dentro desta família. Deste modo, o isolamento de metabólitos característicos de Rutaceae e das cromonas preniladas contribui com a quimiotaxonomia do gênero. / This work presents isolation and structural determination of some natural products in organic root extract of Dictyoloma vandellianum A. Juss found in the Chapada Diamantina, Bahia. Five chromones were isolated from root rind dichloromethane extract and a steroid from root core hexane extract. Two alkaloids also isolated from root core methanolic extract. The following compounds were isolated and characterized: 6-(3-methyl-2-butenyl) allopteroxylin methyl ether; 8-(3-methyl-2-butenyl) spatheliachromen methyl ether; 6-(3-methyl-2-butenyl) allopteroxylin; 8-(3-methyl-2-butenyl) spatheliachromen; spatheliabischromen; β-sitosterol; N- methyl-8-methoxyflindersine and 8-methoxyflindersine. That compounds were determined by Infrared Spectroscopy and Nuclear Magnetic Resonance technique. Associations with biosynthesis approach and comparison with literature data were also done in this thesis. The exact localization of the genus Dictyoloma has been doubtful since its first description as member of Rutaceae family. Prenyl-chromones type isolation from D. vandellianum A. Juss demonstrates the importance of the plant study. The prenyl-chromones type has not been found in other genus of Rutaceae family. So, isolation of Rutaceae typical metabolites and prenyl-chromones contributes with the chemotaxonomy of the genus

Orientador: Angela Regina Araújo / Coorientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Ian Castro Gamboa / Banca: Hosana Maria Debonsi / Resumo: O presente trabalho objetivou a identificação dos metabólitos secundários, em especial a classe das dicetopiperazinas, produzidos pelo fungo endofítico Colletotrichum sp. isolado dos caules de Senna spectabilis. O fungo foi cultivado em diversos meios líquidos (MDB, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) fornecendo os respectivos extratos brutos. Estes extratos foram submetidos à CCDC, CLAE-DAD e RMN 1H para avaliação da produção metabólica e a bioensaios para avaliar a potencialidade antifúngica e anticolinesterásica. Os resultados obtidos indicaram o meio de MDB como o melhor meio para cultivo do endófito em escala ampliada, cujo extrato obtido foi fracionado por cromatografia em coluna. As 12 frações obtidas foram submetidas a CLAE-DAD e RMN 1H, sendo escolhida a Fração 01 para refracionamento. A partir das subfrações foram identificadas 3 dicetopiperazinas (ciclo(Pro-Val), ciclo(Pro-Phe) e ciclo(Pro-Tyr)). A Fração 01 também foi submetida à desreplicação utilizando a técnica de simulação de espectro de RMN de 1H com o auxílio do software MestreNova®, e posteriormente á espectrometria de massas, o que possibilitou a identificação de 5 dicetopiperazinas (ciclo(Pro-Ala), ciclo(Pro-Ile) ou ciclo(Pro-Leu), ciclo(Val- Phe), ciclo(Pro-Pro) e ciclo(Hyp-Ile)) e da uracila / Abstract: This study aimed to identify the secondary metabolites, in particular the class of diketopiperazines produced by the endophytic fungus Colletotrichum sp. isolated from stems of Senna spectabilis. The fungus was cultivated in differents liquidi culture media (PDB, YM, Malt Extract, Nutrient and Czapek) providing the respective crude extracts. These extracts were submitted to CCDC, HPLC-DAD and 1H NMR for metabolic production and evaluation of bioassays to assess the potential antifungal activity and acetylcholinesterase inhibition. The results indicate the PDB as the best medium for the endophyte growth on a large scale, whose extract was fractionated by column chromatography. The 12 fractions were obtained and subjected to HPLC-DAD and 1H NMR. The Fraction 1 was again subjected to fractionation by column chromatography and was identified 3 diketopiperazine (cyclo(Pro-Val), cyclo(Pro-Phe) and cyclo(Pro-Tyr)). The Fraction 01 also underwent dereplication using the simulation technique of 1H NMR spectrum with the aid of software MestreNova®, and later to mass spectrometry, which enabled the identification of 5 diketopiperazines (cyclo(Pro-Ala), cyclo(Ile-Pro) or cyclo(Leu- Pro), cyclo(Val-Phe), cycle(Pro-Pro) and cyclo(Hyp-Ile)) and uracil / Mestre