Introdução: A hipotermia tópica e o pré-condicionamento isquêmico local isoladamente reduzem a lesão renal por isquemia-reperfusão (I/R). Possivelmente, a associação de ambas estratégias tem efeitos protetores sinergísticos. Objetivos: Estudar os efeitos do pré-condicionamento local associado a hipotermia tópica na lesão renal por I/R, principalmente quanto às alterações histológicas, dano por estresse oxidativo, atividade antioxidante tecidual e parâmetros bioquímicos funcionais. Métodos: Quarenta ratos Wistar foram aleatoriamente alocados para cinco protocolos experimentais realizados no rim esquerdo: hipotermia tópica por 40 min sem isquemia (HT), isquemia quente por 40 min (IR), pré-condicionamento isquêmico (15 min de isquemia + 10 min de reperfusão) seguido de isquemia quente por 40 min (PCI+IR), isquemia fria por 40 min (HT+IR) e pré-condicionamento isquêmico seguido de isquemia fria por 40 min (PCI+HT+IR). Nefrectomia direita foi realizada em todos os ratos antes de qualquer procedimento. Oito rins direitos aleatoriamente designados constituíram o grupo controle Após 240 min de reperfusão, o rim esquerdo foi retirado para avaliar as alterações histológicas, a peroxidação lipídica (níveis de F2-isoprostanos [F2IP]) e a atividade enzimática antioxidante (catalase [CAT] e superóxido dismutase [SOD]). A função renal foi avaliada através da creatinina e uréia séricas. Resultados: O grupo PCI+HT+IR não foi diferente dos outros grupos submetidos a isquemia quanto às alterações histológicas, peroxidação lipídica e atividade enzimática antioxidante. A creatinina no grupo PCI+HT+IR foi mais baixa comparado ao grupo PCI+IR, mas semelhante ao grupo HT+IR. Conclusões: A combinação de pré-condicionamento local e hipotermia tópica não resultou em proteção à lesão por I/R. Além disso, o PCI local isolado seguido de isquemia quente prejudicou a função renal mais que a isquemia quente isolada. / Purpose: Topical hypothermia and local ischemic preconditioning have been shown to reduce renal ischemia-reperfusion (I/R) injury individually. We examined whether combination of both strategies lessens renal I/R injury. Methods: Post right nephrectomy, 40 male Wistar rats were randomly assigned to five experimental protocols performed in the left kidney: topical hypothermia without ischemia (TH), warm ischemia (IR), ischemic preconditioning followed by warm ischemia (IPC+IR), cold ischemia (TH+IR), and ischemic preconditioning followed by cold ischemia (IPC+TH+IR). Eight randomly assigned right kidneys constituted the control group. After 240 min of reperfusion, the left kidney was retrieved to evaluate histological changes, lipid peroxidation and antioxidant enzymes activity. Serum was collected to evaluate urea and creatinine. Results: IPC+TH+IR group revealed no difference to any other group subjected to ischemia in relation to histological changes, lipid peroxidation and antioxidant enzymes activity. Creatinine was lower in IPC+TH+IR group compared with IPC+IR, but showed no difference compared to TH+IR group. Conclusions: Combination of local ischemic preconditioning (IPC) and topical hypothermia conferred no protection in renal I/R injury. Moreover, local IPC solely followed by warm ischemia impaired renal function more than warm ischemia alone.

Surgical myocardial revascularization remains the standard of care for patients with multi-vessel coronary artery disease. A growing body of evidence indicates that systemic inflammation and myocardial oxidative stress are associated with the development of postoperative atrial fibrillation (POAF) and low cardiac output syndrome in patients undergoing cardiac surgery. Statins have been shown to exert rapid anti-inflammatory and antioxidant effects by inhibiting myocardial NOX2 oxidases and by increasing the bioavailability of nitric oxide (NO). However, whether these so-called pleiotropic effects of statins result in improved patient outcomes remains to be established. To provide further insights into the mechanisms of action and impact on clinical outcomes of peri-operative statin treatment in patients undergoing cardiac surgery, I studied the molecular mechanisms underlying the myocardial nitroso-redox balance in samples of the right atrial appendages (RAA) obtained before (PRE) and after cardiopulmonary bypass (CPB) and reperfusion (POST) and setup two double-blind randomised placebo-controlled trials: 1) STARR (Statin Treatment on Atrial Refractoriness and Reperfusion injury), which tested the effect of Atorvastatin (80 mg once daily for up to 6 days before surgery and 5 days after) on the atrial effective refractory period (AERP, over 4 post-operative days) and superoxide production in paired PRE- and POST- RAA samples from 60 patients 2) STICS (Statin Treatment In Cardiac Surgery), which assessed the effects of peri-operative treatment with Rosuvastatin (20mg od) on POAF (assessed by continuous holter ECG monitoring for 5 days postoperatively) and myocardial injury (assessed by serial troponin I measurements) in 1922 patients undergoing elective cardiac surgery. I observed that atrial superoxide production increased significantly after reperfusion due to increased mitochondrial and NOX2 oxidase activity and to uncoupling of NOS activity. NOS activity in RAA samples decreased significantly after reperfusion (by 60%), but this reduction was not prevented by BH4 supplementation (10 μM) or NOX2 inhibition. Instead, I identified increased endothelial NOS S-glutathionylation as the main mechanism responsible for NOS uncoupling after reperfusion. In STARR, atorvastatin prevented increase in RAA superoxide production, maintained the functionally coupled status of NOS and NO bioavailability after reperfusion but had no measurable effect on postoperative AERP. In STICS, treatment with rosuvastatin significantly reduced LDL-C concentration by 48 hours after surgery but had no effect on the incidence of POAF (203 (21%) of the Rosuvastatinallocated patients vs. 197 (20%) of the placebo-allocated patients) or on perioperative myocardial damage (P = 0.80). Pre-defined subgroup analyses (age, sex, prior statin use, baseline troponin concentration, duration of randomized treatment before surgery, type of cardiac surgery, and postoperative use of anti-inflammatory drugs) did not identify any category of patient who benefited from perioperative rosuvastatin treatment. Nor were there beneficial effects on any of the other in-hospital clinical outcomes that were assessed. In conclusion, cardiac surgery on CPB is associated with myocardial nitroso redox imbalance that is reversed by perioperative intensive therapy with statins. However, these effects have no beneficial effects on common in-hospital complications after elective cardiac surgery. Although the benefits of long-term statin therapy in patients requiring myocardial revascularization are well established, the work presented in this thesis does not support routine use of perioperative intensive therapy with statins for the prevention of postoperative complications in patients undergoing elective cardiac surgery.

Plantas medicinais apresentam efeitos benéficos contra a patofisiologia de várias doenças induzida pelo estresse oxidativo incluindo isquemia-reperfusão (I/R). Trichilia catigua, popularmente conhecida no Brasil como “catuaba”, é amplamente utilizada como um neuroestimulante e afrodisíaco. Infusões da casca são popularmente utilizadas na medicina popular contra debilidade sexual, cansaço, insônia, estresse e deficiências relacionadas à memória e sistema nervoso central. Porém, o envolvimento da atividade antioxidante de T. catigua em suas propriedades farmacológicas especialmente em relação ao sistema nervoso ainda é escasso na literatura. Sendo assim, a primeira parte deste estudo investigou o pontencial antioxidante de T. catigua usando modelos químicos e biológicos. Como resultado, foi demonstrado que o extrato etanólico e diferentes frações da casca de T. catigua eliminaram o radical 1,1-difenil-2-picrilhidrazila (DPPH), e inibiram a geração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) causadas pelo Fe2+ em homogenatos dos cérebros de rato. O extrato etanólico apresentou a maior atividade antioxidante. Além disso, o extrato etanólico inibiu a produção de espécies reativas de oxigênio/nitrogênio (EROS/ERNS) induzidas pelo Ca2+ e diminuiu o potencial de membrana (ΔΨm) mitocondrial nas maiores concentrações. Com base nos resultados acima, nós hipotetizamos que o extrato etanólico de T. catigua pode, pelo menos, reduzir consideravelmente os danos oxidativos induzidos pela isquemia reperfusão (I/R) em fatias de hipocampo de rato através da atenuação da produção de EROS/ERNS. Baseado nisso, a segunda parte deste estudo investigou o efeito protetor do extrato etanólico de T. catigua contra os danos oxidativos induzidos por I/R em fatias de hipocampo de ratos. Como resultado foi demonstrado que T. catigua previniu os efeitos deletérios causados por I/R nas fatias de hipocampo, através do aumento da viabilidade mitocondrial, o qual foi associado com o decréscimo na liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de incubação; pelo decréscimo da oxidação de DCFH no meio; e aumento do conteúdo de tióis não proteicos (NPSH) em fatias homogeneizadas. No entanto, T. catigua não foi capaz de proteger as fatias da I/R quando adicionadas ao meio após da injúria isquêmica, sendo assim, sugerindo que ela possa ser usada somente como preventiva e não como agente curativo frente ao dano cerebral. Uma vez que alterações de aprendizado e memória são consequências comuns a uma variedade de doenças e agressões tóxicas, a terceira parte deste estudo concentrou-se em determinar se T. catigua ofereceria neuroproteção contra o estresse oxidativo induzido por diferentes pro-oxidantes. Os resultados indicaram que a exposição de fatias de hipocampo de rato por 1h ao peróxido de hidrogênio (H2O2), nitroprussiato de sódio (NPS) e ácido 3-nitropropiônico (3-ANP) diminui a atividade mitocondrial; aumentou a geração de ROS/RNS no meio de incubação e causou a formação de TBARS nas fatias homogeneizadas. A diminuição destes efeitos deletérios foi significativa quando as fatias foram pré-tratadas com o extrato etanólico de T. catigua. Em conclusão, nossos resultados demonstraram que o uso do extrato de T. catigua pode ser benéfico na prevenção de desordens neurológicas associadas ao estresse oxidativo, e que seus efeitos benéficos parecem estar associados, pelo menos em parte, a sua atividade antioxidante, que, por sua vez, podem ser atribuídas ao conteúdo polifenólico da planta. / Medicinal plants have been shown to have beneficial effects against oxidative stress-induced pathophysiology of various diseases including brain ischemia-reperfusion (I/R). Trichilia catigua, popularly known in Brazil as “catuaba”, is widely used as a neurostimulant and aphrodisiac. Infusions of the bark are popularly used in folk medicine against sexual weakness, exhaustion, insomnia, stress, memory and central nervous systems disabilities. However, the involvement of antioxidant ability of T. catigua in its pharmacological properties especially in the management of neurological-related diseases is scanty in the literature. In this context, the first part of this study investigated the potential antioxidant activity of T. catigua using chemical and biological models. As a result, we have demonstrated that ethanolic extract and different fractions from the stem bark of T. catigua scavenged the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical, and inhibited the formation of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) caused by Fe2+ in rat’s brain homogenates. However, ethanolic extract exhibited the highest antioxidant activity. In addition, ethanolic extract inhibited Ca2+-induced reactive oxygen/nitrogen species (ROS/RNS) generation and caused a decrease in the mitochondrial membrane potential (ΔΨm) only at high concentrations. On the basis of the aforementioned results, we hypothesized that ethanolic extract from T. catigua may at least, markedly reduce oxidative damage induced by in vitro I/R in rat hippocampal slices through attenuation of ROS/RNS production. Thus, the second part of this study investigated the protective effects of ethanolic extract of T. catigua against oxidative damage induced by I/R in rat hippocampal slices. T. catigua prevents hippocampal slices from the deleterious effects caused by I/R, by increasing mitochondrial viability, which was associated with decreased lactate dehydrogenase (LDH) leakage in the incubation medium; by decreasing DCFH oxidation in the medium, and increasing non-protein thiols (NPSH) content in slices homogenates. In contrast, T. catigua could not protect slices from I/R when it was added to the medium after ischemic insult, suggesting that it can only be used as preventive and not as curative agent against brain damage. Taking that alteration in learning and memory function are common consequences of a wide variety of toxic insults and disease states, the third part of this study was undertaken to determine whether T. catigua offered neuroprotection against oxidative stress induced by different pro-oxidants. Exposure of rat hippocampal slices for 1 h to hydrogen peroxide (H2O2), sodium nitroprusside (SNP) and 3-nitropropionic acid (3-NPA) decreased mitochondrial activity, increased ROS/RNS in the incubation medium and caused TBARS formation in rat hippocampal slices homogenates. These deleterious effects were significantly attenuated by pre-treatment of slices with ethanolic extract of T. catigua. Overall, our data showed that the use of T. catigua extract may be beneficial in preventing neurological disorders associated with oxidative stress, and that its beneficial effects seems to be related at least, in part, to its antioxidant activity, which can be attributed to its polyphenolic content.

Introdução: A lesão renal por isquemia-reperfusão (IR) pode ser reduzida através de estratégias protetoras, entre elas a hipotermia e o pré-condicionamento isquêmico remoto (PCIR). A combinação destas sustenta um potencial efeito protetor a ser esclarecido. Objetivos: Avaliar os efeitos da associação entre o pré-condicionamento isquêmico remoto e a hipotermia tópica em relação às lesões renais por IR, especialmente quanto ao estresse oxidativo e as alterações histológicas no tecido renal. Métodos: Cirurgias experimentais em trinta e dois ratos Wistar, os quais foram aleatoriamente selecionados para quatro protocolos cirúrgicos: 1 - isquemia do pedículo renal esquerdo por 40 minutos seguido de reperfusão sob eutermia (37 o C); 2 - isquemia do pedículo renal esquerdo por 40 minutos seguido de reperfusão sob hipotermia local (4 o C); 3 - PCIR através de clampeamento da artéria ilíaca esquerda por 15 minutos seguido reperfusão por 10 minutos, prosseguindo para isquemia do pedículo renal esquerdo por 40 minutos seguido de reperfusão sob eutermia; 4 - PCIR através de clampeamento da artéria ilíaca esquerda por 15 minutos seguido reperfusão por 10 minutos, prosseguindo para isquemia do pedículo renal esquerdo por 40 minutos seguido de reperfusão sob hipotermia local. Todos os ratos sofreram nefrectomia direita no início do procedimento, sendo estes rins considerados o grupo controle. Após 240 minutos de reperfusão da IR, os animais foram submetidos a um segundo procedimento cirúrgico para a nefrectomia esquerda. Todos os rins foram submetidos a avaliação tecidual, onde foram analisados o grau de necrose tubular aguda pela avaliação histopatológica, além do estresse oxidativo através da dosagem de isoprostanos e medida da atividade da superóxido dismutase e catalases. Avaliamos, ainda, as diferenças de creatinina plasmáticas antes e depois do experimento Resultados: A combinação de PCIR com hipotermia durante experimento de IR revelou ausência de diferenças comparado aos outros grupos de intervenção na análise do padrão histológico (p=0.722). O estresse oxidativo não apresentou variações significativas entre os grupos, exceto na medida do superóxido dismutase que foi mais elevada nos protocolos de isquemia fria (p<0.05). Animais submetidos a protocolos de IR sob hipotermia demonstraram menores valores de creatinina sérica ao término dos procedimentos (p<0.001). Conclusão: A associação de pré-condicionamento isquêmico remoto com hipotermia local não gera proteção renal na lesão por IR. A hipotermia isolada, entretanto, parece ser efetiva na preservação da função renal durante eventos isquêmicos. Em nosso estudo, o pré-condicionamento isquêmico remoto isolado seguido de IR quente (37ºC) não demonstrou benefícios nos parâmetros avaliados comparado à IR quente sem PCIR ou mesmo grupo controle, sugerindo que este modelo experimental de pré-condicionamento isquêmico remoto possui restrições na análise da janela precoce de proteção. / Introduction: Ischemia-reperfusion injury (IR) can be reduced using protective measures such as hypothermia and remote ischemic preconditioning (RIPC). The combination of these might result in potential protective effects to be clarified. Objectives: To assess the effects of the association between RIPC and topical hypothermia in relation to renal IR injuries, especially regarding oxidative stress and histological changes in renal tissue. Methods: Experimental surgeries in thirty two Wistar rats, which were randomly selected to four surgical protocols: 1 - IR by left renal pedicle ischemia for 40 minutes followed by single reperfusion (37 o C); 2 - IR by left renal pedicle ischemia for 40 minutes followed by reperfusion under local hypothermia (4 o C); 3 - RIPC by clamping the left iliac artery for 15 minutes followed by reperfusion for 10 minutes, proceeding to ischemia of the left renal pedicle for 40 minutes followed by reperfusion (37 o C); 4 - RIPC by clamping the left iliac artery for 15 minutes followed by reperfusion for 10 minutes, proceeding to ischemia of the left renal pedicle for 40 minutes followed by reperfusion under local hypothermia (4 o C). All rats underwent right nephrectomy at the beginning of the procedure, and these kidneys considered the control group. After 240 minutes of reperfusion, the animals were submitted to a second surgical procedure for left nephrectomy. All kidneys underwent tissue evaluation, describing the degree of acute tubular necrosis with histopathological analysis. Oxidative stress assessment occurred through isoprostane dosing and measurement of superoxide dismutase and catalase activity. Differences in plasmatic blood creatinine were evaluated before and after the experiment Results: RIPC combined with cold ischemia during IR experiment revealed no differences compared to any of the other interventional groups regarding the analysis of histological changes (p=0.722). Oxidative stress shows no significant variations among groups, except in superoxide dismutase measurements which were higher in cold protocols compared to warm protocols (p<0.05). Serum creatinine at end of procedure showed lower levels in the animals submitted to hypothermic IR protocols (p<0.001). Conclusion: Combining remote ischemic preconditioning and local hypothermia provides no renal protection in IR injury. Hypothermia, however, seems to be effective in preserving renal function during ischemic events. Furthermore, in our study remote preconditioning solely followed by warm IR did not show benefits in any of the evaluated parameters compared to warm IR alone or control groups, suggesting that this experimental model of preconditioning has limitations in the early window of protection analysis (< 24 hours).

A lesão de isquemia e reperfusão pulmonar (LIRI) é a principal causa de disfunção precoce do enxerto após o transplante pulmonar. Diferentes substâncias têm sido utilizadas na tentativa de proteger o pulmão na fase inicial pós-transplante e melhorar o desempenho do enxerto com pouco resultado tanto a curto quanto em longo prazo. O peptídeo liberador gastrina (GRP) está envolvido na indução de respostas imunes inatas adaptativas por induzir a quimiotaxia de mastócitos, migração de macrófagos e proliferação de células T e fibroblastos. Este agente foi capaz de proteger o dano tecidual em outros modelos experimentais de inflamação, incluindo sepsis pós-isquemia e perfuração de ceco, artrite e colite induzidos por drogas. O efeito protetor foi atribuído ao bloqueio na liberação de citocinas pró-inflamatórias, como da interleucina -1 beta (IL-1G) e TNF- alfa (TNF-H), e inibição de migração de mononucleares. Nesta tese o efeito protetor do antagonista do receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPR), o RC-3095 (RC) endovenosamente administrado antes e depois da reperfusão foi estudado em modelo animal de LIRI. Vinte ratos Wistar foram randomizados em quatro grupos: (SHAM), Isquemia-reperfusão (IR), administração de RC Pré-IR (RC-Pré) e RC Pós-IR (RC-Pós). Após a reperfusão, os animais foram observados por 120 minutos. Foi realizada a análise histológica, com verificação de escala de lesão pulmonar, e imunohistoquímica para Caspase clivada - 9 e oxido nítrico sintetase endotelial (eNOS). Expressão de IL-1G e TNF-H foram quantificadas por Enzime-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Uma redução significativa na pressão arterial média foi observada nos grupos IR e RC - Pré quando comparado com seus valores antes da reperfusão (p < 0.001). No final do experimento o grupo RC-Pós apresentou uma redução significativa na pressão arterial de oxigênio em relação ao início (p=0.005). Observou-se maior expressão de Caspase - 9 clivada no grupo RC-Pós (p>0.013), quando comparado aos demais grupos. Não houve diferença significativa na captação da eNOS entre os grupos (p=0.206). Os grupos RC - Pré e Pós mostraram discreta redução, não atingindo significância estatística, da IL-1G (p=0.159) e TNF- H (p= 0.260), quando comparado com o grupo IR. Não houve diferença estatística entre as médias dos escores histológicos entre os diferentes grupos. e SHAM. Notavelmente, quando administrado após reperfusão parece potencializar dano celular estimulando a apoptose. Concluindo, a utilização do antagonista do peptídeo liberador de gastrina, RC-3095, não produziu efeito protetor significativo na resposta inflamatória em pulmões de ratos. Estudos adicionais devem ser implementados para confirmar estes achados. / Lung ischemia reperfusion injury (LIRI) is the main cause of early graft dysfunction and death after lung transplantation. Several methods and substances have been used as an attempt to protect the lung during the early phase after transplantation and improve graft performance at short and long term with limited results. The selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095 (RC) was shown to protect from damage in various models of inflammation, including sepsis due to cecal ischemia and perforation, drug-induced arthritis and colitis, probably due to the inhibition in the release of proinflammatory cytokines, such as interleukin-1-beta and TNFalpha, as well as interference with mononuclear migration. In this thesis, the protective effect of the selective gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) antagonist RC-3095, administrated intravenous before and after reperfusion was studied in an animal model of LIRI. A total of 20 Wistar rats were randomized in four groups: (SHAM), Ischemia-reperfusion (IR), RC Pre-IR (RCPre) and the RC Post-IR (RC-Post) .The IR groups were submitted to a model of ischemia/reperfusion by clamping of the left pulmonary hilum for 45 minutes followed by reperfusion for 120 minutes. We recorded the hemodynamic parameters, blood gas analysis and histology. We analyzed Cleaved Caspase- 9 and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) by immunohistochemistry. Expression of IL-1G and TNF-H was evaluated by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). We observed that the final mean arterial pressure significantly decreased in IR and RC Pre-IR compared to their values before reperfusion (p < 0.001).The RC-Post group showed significant decrease of partial pressure of arterial oxygen at the end of the observation compared to baseline (p=0.005). Caspase-9 activity was significantly higher in the RC-Post- IR as compared to the other groups (p < 0.013). No significant differences were observed of eNOS activity among the groups. The groups RC Pre-IR e RC Post-IR did not show a significant decrease of IL-1G (p=0.159) and TNF-H (p= 0.260), as compared to IR. The histological score showed no significant differences among the groups. Notably, its use after reperfusion seems to potentiate cell damage, stimulating apoptosis In conclusion, RC3095, a selective GRPR antagonist failed to demonstrate a significant protective effect in our LIRI model in male Wistar rats. Further studies to address this question are warranted.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:14Z : No. of bitstreams: 1 000825977.pdf: 523697 bytes, checksum: d2f8ec7342d5b6db7422e962ecea6b53 (MD5) / Justificativas e objetivos: os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) têm mostrado sua eficácia na abordagem multimodal da dor, reduzindo o consumo de opioides na dor aguda pós-operatória. Embora os AINEs possam afetar a função renal, existem poucos dados da utilização de AINEs coxibes disponíveis nesse contexto. Os biomarcadores precoces de lesão renal aguda, como o NGAL (neutrophil gelatinase-associated lipocalin), podem ser importantes aliados na determinação de lesão real associada ao uso de AINEs coxibes no período perioperatório. Materiais e métodos: após aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa Experimental, 40 ratos Wistar foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos. Sob anestesia geral, e dependendo do grupo a qual os animais foram incluídos, eles foram submetidos a isquemia e reperfusão renal. Dois grupos receberam parecoxibe para avaliar a influência deste medicamento na função renal. Dosagem de NGAL e histologia renal bilateral foram realizadas para a avaliação da existência e grau da lesão renal. Resultados: o grupo isquemia (que não recebeu injeção de parecoxibe) apresentou os maiores níveis de NGAL e maior frequência de lesão renal. O grupo que sofreu isquemia e recebeu parecoxibe apresentou níveis de NGAL e frequência de lesão renal similares aos outros grupos que não sofreram tal injúria. Conclusão: neste modelo experimental, parecoxibe exibiu propriedades em promover proteção renal / Background and aims: nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) have been proved to be effective, in a multidimensional approach, at reducing the opioid consumption during the postoperative acute pain. Although the NSAIDs may affect the renal function, there are few published data related to the use of coxibs and the kidney function. The early biomarkers of acute renal injury (EBARI) may be important tool to determining the actual risk associated with the use of coxibs NSAIDs in the perioperative period. Methods: after approval by Experimental Ethics Committee, 40 male Wistar rats were randomly assigned into four groups. Under general anesthesia, and depending on the assigned group, rats underwent renal ischemia and reperfusion. Parecoxib was injected in two of the groups to evaluate the coxib intluence on the renal function. Parametric data, serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL), an EBARI, and right and left renal histology were used to evaluate there renal function. Results: the animals of ischemia group which did not receive parecoxib showed the highest NGAL serum level, as well as the most severe tubular injury. The animals on ischemia group which received parecoxib showed NGAL plasmatic levels and tubular injury similar to the groups not subjected to renal ischemia. Conclusion: on this experimental model, parecoxib showed protective renal properties

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Honey is a complex product produced by honeybees from nectar, being widely used for its sweetening properties, as well as for its benefits to human health. Honey presents anti-inflammatory, hypoglycemic and antioxidant properties. Hypoxia followed by reperfusion is a condition triggered in several pathologies and can culminate with oxidative tissue damage. The fruit-fly, Drosophila melanogaster, has hypoxia tolerant characteristics and homology with vertebrate from pathways involved in the cascade of cellular responses for hypoxia/reperfusion. Considering these aspects, the main objective of this work was to evaluate the possible protective effect of honey produced in the Brazilian Pampa Biome on changes induced by hypoxia/reperfusion in Drosophila melanogaster, with emphasis on oxidative stress. Wild flies were treated with a diet containing 10% honey for 3 days and subsequently submitted to hypoxia conditions (3hs). After reperfusion of oxygen, parameters of survival, behavior, oxidative stress as well as mRNA expression of genes related with metabolic, inflammation and death pathways were evaluated. The results demonstrated that the honey tested is composed of compounds with antioxidant activity that were recognized both in vitro and in vivo. Hypoxia/reperfusion induced an increase in the regulation of mRNA expression of Sima (HIF-1), NFκB, Nrf2, HOX, AKT-1, INR, dILP2, dILP5 and HSP27. Indeed, flies submitted to hypoxia/reperfusion has a expression decreased of EWG and Opa-1. Honey was able to reestablish the expression of Opa-1, a gene related to mitochondrial fusion. Honey treatment also reduced the changes induced by hypoxia/reperfusion in parameters of survival, locomotor deficits, wing position, reactive oxygen species (ROS) production, GST, caspases and mitochondrial complex I activities. The results obtained here show, for the first time, the beneficial effects of honey against changes induced by hypoxia/reperfusion in Drosophila melanogaster. This study evidenced that that the honey from the Brazilian Pampa Biome has a high quality and a significant antioxidant activity in vivo, which can be related with its beneficial effects against hypoxia/reperfusion. In addition, we consider the honey as well as Drosophila melanogaster promising targets for studying pathologies associated with oxidative stress and hypoxia/reperfusion. / O mel é um produto complexo produzido por abelhas melíferas a partir do néctar e bastante utilizado pelas suas propriedades edulcorantes, bem como pelos seus benefícios para a saúde humana. O mel apresenta atividades anti-inflamatória, hipoglicêmica e antioxidante. A hipóxia seguida de reperfusão é uma condição desencadeada em diversas patologias e pode culminar com danos teciduais de cunho oxidativo. A mosca-da-fruta, Drosophila melanogaster, possui características tolerantes a hipóxia e homologia com animais vertebrados de vias envolvidas na cascata de respostas celulares à hipoxia/reperfusão. Considerando tais aspectos, o objetivo principal desse trabalho foi avaliar os efeitos do mel produzido no Bioma Pampa Brasileiro sobre as alterações teciduais/moleculares induzidas por hipóxia/reperfusão em Drosophila melanogaster, com ênfase em estresse oxidativo. Moscas selvagens foram tratadas com 10% de mel por 3 dias e posteriormente submetidas à hipóxia (3hs). Após reperfusão de oxigênio, foram avaliados parâmetros de sobrevivência e comportamento; parâmetros de estresse oxidativo, bem como, a expressão de mRNA de genes envolvidos em vias metabólicas, inflamatórias e morte celular. Os resultados demonstraram que o mel testado é constituído de compostos com atividade antioxidante, que foi reconhecida tanto in vitro como in vivo. A hipóxia/reperfusão induziu um aumento na expressão do mRNA de Sima (HIF-1), LDH, NFκB, Nrf2, HOX, AKT-1, INR, dILP2, dILP5 e HSP27. As moscas submetidas a hipoxia/reperfusão também apresentaram expressão diminuída do mRNA do EWG e Opa-1. O mel foi efetivo em restabelecer a expressão alterada de Opa-1, gene relacionado com fusão mitocondrial. Além disso, o tratamento com mel reduziu as alterações induzidas por hipóxia/reperfusão sobre os parâmetros de sobrevivência, déficits locomotores, alteração da posição das asas, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), atividades da GST, caspases e complexo I da cadeia respiratória mitocondrial. Os resultados obtidos aqui mostram, pela primeira vez, os efeitos benéficos de mel contra alterações induzidas por hipóxia/reperfusão em Drosophila melanogaster. Este estudo evidenciou que o mel do Bioma Pampa Brasileiro tem além de um alto nível de qualidade, uma atividade antioxidante significativa in vivo, a qual pode estar relacionada com seus efeitos benéficos contra hipoxia/reperfusão. Com base nos resultados, considera-se ainda tanto o mel como a Drosophila melanogaster alvos promissores para estudos voltados para doenças associadas com condições de estresse e hipoxia/reperfusão.

Submitted by ANDRÉ ROBERTO BUSSMANN null (andreanestesio@gmail.com) on 2016-11-09T16:36:24Z No. of bitstreams: 1 André Roberto Bussmann (Doutorado).docx: 19743495 bytes, checksum: 17713c95006fea5bf6c04f10d98083ad (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO null (luizaromanetto@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-11-16T11:50:55Z (GMT) / Submitted by ANDRÉ ROBERTO BUSSMANN null (andreanestesio@gmail.com) on 2016-11-17T01:45:36Z No. of bitstreams: 1 André Roberto Bussmann (pós-defesa).pdf: 1662321 bytes, checksum: b4c6a12ba9dfef03970797e8d2b34392 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-11-21T12:43:06Z (GMT) / Submitted by ANDRÉ ROBERTO BUSSMANN null (andreanestesio@gmail.com) on 2016-11-25T12:06:55Z No. of bitstreams: 1 André Roberto Bussmann (pós-defesa doutorado).pdf: 1153035 bytes, checksum: 0046b6c3ecbb8bed5745a60162c2737f (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-25T17:06:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bussmann_ar_dr_bot.pdf: 1153035 bytes, checksum: 0046b6c3ecbb8bed5745a60162c2737f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-25T17:06:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bussmann_ar_dr_bot.pdf: 1153035 bytes, checksum: 0046b6c3ecbb8bed5745a60162c2737f (MD5) Previous issue date: 2016-10-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Justificativa: Durante lesão de isquemia e reperfusão renal ocorre a inativação de óxido nítrico (NO), essa inativação diminui o relaxamento arterial endotélio-dependente e independente. O aumento nos níveis de NO poderia melhorar a disfunção endotelial e o relaxamento arterial diminuindo a lesão renal. O NO, sintetizado a partir da L-arginina pela enzima óxido nítrico sintase (NOS), parece exercer um efeito protetor sobre os rins durante a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da L-arginina nos níveis dos biomarcadores de lesão (NGALp, NGALu, KIM-1 e IL-18) na função e na histopatologia renal em ratos submetidos a lesão de I/R. Métodos: 32 ratos Wistar foram randomizados em 4 grupos: Sham (S): Laparotomia e nefrectomia direita. Controle (C): Laparotomia e nefrectomia direita, I/R em rim esquerdo. Controle L-arginina (CLA): Laparotomia e nefrectomia direita, L-arginina na dose de 800mg.kg-1.dose-1, 24 e 1 hora antes. L-arginina (LA): Laparotomia e nefrectomia direita, I/R em rim esquerdo, L-arginina na dose de 800mg.kg-1.dose-1, 24 e 1 hora antes. Foram analisados os níveis de NGALp, NGALu, KIM-1 e IL-18, creatinina e histopatologia renal. Nível de significância: p<0,05. Resultados: Creatinina aumenta em todos os grupos com LA≈C>S≈CLA. A NGALp, aumenta em todos os grupos com evolução semelhante. A NGALu foi maior no grupo C e CLA em relação ao grupo LA e apresentou valores intermediários no grupo S. Os níveis de KIM-1 aumentam nos grupos S, CLA e LA, porém na análise de contrastes não há diferença na evolução dos grupos. A IL-18 apresentou valores maiores no grupo LA comparado aos demais grupos (C, S e CLA). Os grupos C e LA apresentaram grau de lesão no lado esquerdo maior que os grupos S e CLA. Não existe diferença histopatológica entre C e LA e nem entre S e CLA. Conclusão: A L-arginina não exerce efeito protetor ou danoso aos rins submetidos a lesão de I/R na avaliação da função, da histopatologia renal e dos níveis de NGALp, KIM-1 / Background: Nitric oxide (NO) inactivation occurs during renal ischaemia/reperfusion injury. This inactivation decreases endothelium-dependent and -independent arterial relaxation. Higher NO levels can improve endothelial dysfunction and arterial relaxation, thereby reducing the level of kidney injury. NO, synthesized from L-arginine by the enzyme nitric oxide synthase (NOS), seems to exerts a protective effect on the kidneys during tissue ischemia-reperfusion injury. The objective of this study was to evaluate the effect of L-arginine on the levels of injury biomarkers (pNGAL, uNGAL, KIM-1 e IL-18) for kidney function and histology in rats subjected ischaemiareperfusion injury. Methods: Thirty-two Wistar rats were randomised into the following 4 groups: Sham (S), laparotomy and right nephrectomy; Control (C), laparotomy and right nephrectomy and left kidney I/R; L-arginine control (LAC), laparotomy and right nephrectomy and L-arginine at a dose of 800 mg.kg-1 .dose-1 , 24 hours and 1 hour before surgery; and L-arginine (LA), laparotomy and right nephrectomy, left kidney I/R, and L-arginine at a dose of 800 mg.kg -1 .dose-1 , 24 hours and 1 hour before surgery. The pNGAL, uNGAL, KIM-1 e IL-18 and creatinine levels and kidney histopathology were analysed. The significance level was p < 0.05. Results: Creatinine was increased in all groups, with LA≈C>S≈LAC. pNGAL was increased in all groups and showed a similar trend. uNGAL levels were higher in groups C and LAC than LA and had intermediate values in group S. The KIM-1 levels were increased in the S, LAC and LA groups, but the contrast analysis revealed no differences between the groups in terms of their trends. IL-18 levels were higher in LA than in the other groups (C, S and LAC). The C and LA groups, compared with the S and LAC groups, had higher damage on the left side. There was no histopathological difference between C and LA or between S and LAC. Conclusion: L-arginine does not exert a damaging or protective effect on kidneys undergoing I/R injury based on the evaluation of kidney functions, histopathology and pNGAL and KIM-1 levels. / FAPESP: 2012/13603-2

Orientador: Angelina Zanesco / Banca: Fúlvia de Barros Manchado Gobatto / Banca: Camila de Barros / Banca: Fernanda Bruschi Marinho Priviero / Banca: Ivani Aparecida de Souza / Resumo: O objetivo deste trabalho foi o de avaliar o efeito do treinamento físico na reatividade vascular de artérias mesentérica e pulmonar de ratos submetidos à isquemia/reperfusão (IR) pulmonar. Ratos wistar foram utilizados nesse estudo, e divididos em cinco grupos: controle sedentário (C/SD); controle treinado (C/TR); falso operado sedentário (SHAM/SD); isquemia/reperfusão sedentário (IR/SD) e isquemia/reperfusão treinado (IR/TR). O treinamento físico consistiu em corrida em esteira, sessões de 60 min/dia, 5 vezes por semana durante 8 semanas (velocidade 1,2 km/h e 0% de inclinação). O processo de IR pulmonar foi realizado através de oclusão total da artéria pulmonar, veia pulmonar e brônquio esquerdo por 90 minutos e reperfusão de 120 minutos. Em seguida, as artérias mesentérica e pulmonar foram isoladas e curvas concentração-resposta à acetilcolina (ACh), histamina (HIST), nitroprussiato de sódio (SNP) foram obtidas na presença e na ausência de endotélio. Curvas concentração-resposta à fenilefrina (PHE) e ao análogo do tromboxano A2 (U46619) também foram obtidas na presença de endotélio. Análise do extravasamento de proteínas plasmáticas, atividade da mieloperoxidase pulmonar (MPO), nitrato e nitrito (NOx-), atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), interleucina-6 (IL-6) plasmáticas e expressão de proteína arterial da eNOS, nNOS, Cu/Zn SOD-1, p47phox e TNF- α foram avaliados. Verificou-se aumento nos valores de NOx-, SOD, IL-6 plasmático, atividade da MPO e extravasamento de proteínas nos grupos IR/SD e IR/TR quando comparados aos demais grupos. O treinamento físico não alterou nenhum destes parâmetros. Em artéria mesentérica, houve diminuição na potência à ACh e a PHE no grupo IR/SD quando comparado aos grupos C/TR e IR/TR, sem alterações nos valores de resposta máxima. Não foram verificadas alterações na resposta ao U46619... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this work was to evaluate the effect of physical training in the responsiveness of rat mesenteric and pulmonary rings submitted to lung ischemia/reperfusion (IR). Rats were divided into five groups named: control sedentary (C/SD); control trained (C/TR); sham operated sedentary (SHAM/SD); ischemia/reperfusion sedentary (IR/SD) and ischemia/reperfusion trained (IR/TR). Run training was performed for 5 days/week, each session of 60 minutes, during 8 weeks (speed of 1.2 km/h and 0% grade). Left pulmonary IR was performed by occluding the pulmonary artery, bronchus and pulmonary vein for 90 minutes and reperfusion for 120 minutes. Concentration-response curves to acetylcholine (ACh), histamine (HIST), sodium nitroprusside (SNP) with intact and denuded endothelium were obtained. Contractile response curves were performed for phenylephrine (PHE) and tromboxane A2 analogue (U46619). The pulmonary plasma protein extravasation, lung myeloperoxidase activity (MPO), plasma levels of nitrite/nitrate (NOx-), superoxide dismutase activity (SOD), interleukin-6 (IL-6) and the protein expression for eNOS, nNOS, Cu/Zn SOD-1, p47phox and TNF-α were evaluated. The levels of NOx-, SOD, IL-6, MPO activity and pulmonary plasma protein extravasation were markedly increased in IR/SD and IR/TR compared to others groups which were not modified by exercise training. In mesenteric rings a decreased of potency to ACh and PHE in IR/SD compared to C/TR and IR/TR without changes in the maximal response were observed. No changes to U46619 were seen in all groups. The nNOS, Cu/Zn SOD-1 and p47phox protein expression were not modified. In pulmonary rings the potency to PHE was decreased in IR/SD and IR/TR without changes in the maximal response. No changes to U46619 were seen in all groups. Neither pulmonary IR nor exercise training changed the protein expression for eNOS, nNOS, Cu/Zn SOD-1 and p47phox... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Guilherme Antonio Moreira de Barros / Banca: Eliana Marisa Ganen / Banca: Eunice Sizue Hirata / Resumo: Justificativas e objetivos: os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) têm mostrado sua eficácia na abordagem multimodal da dor, reduzindo o consumo de opioides na dor aguda pós-operatória. Embora os AINEs possam afetar a função renal, existem poucos dados da utilização de AINEs coxibes disponíveis nesse contexto. Os biomarcadores precoces de lesão renal aguda, como o NGAL (neutrophil gelatinase-associated lipocalin), podem ser importantes aliados na determinação de lesão real associada ao uso de AINEs coxibes no período perioperatório. Materiais e métodos: após aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa Experimental, 40 ratos Wistar foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos. Sob anestesia geral, e dependendo do grupo a qual os animais foram incluídos, eles foram submetidos a isquemia e reperfusão renal. Dois grupos receberam parecoxibe para avaliar a influência deste medicamento na função renal. Dosagem de NGAL e histologia renal bilateral foram realizadas para a avaliação da existência e grau da lesão renal. Resultados: o grupo isquemia (que não recebeu injeção de parecoxibe) apresentou os maiores níveis de NGAL e maior frequência de lesão renal. O grupo que sofreu isquemia e recebeu parecoxibe apresentou níveis de NGAL e frequência de lesão renal similares aos outros grupos que não sofreram tal injúria. Conclusão: neste modelo experimental, parecoxibe exibiu propriedades em promover proteção renal / Abstract: Background and aims: nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) have been proved to be effective, in a multidimensional approach, at reducing the opioid consumption during the postoperative acute pain. Although the NSAIDs may affect the renal function, there are few published data related to the use of coxibs and the kidney function. The early biomarkers of acute renal injury (EBARI) may be important tool to determining the actual risk associated with the use of coxibs NSAIDs in the perioperative period. Methods: after approval by Experimental Ethics Committee, 40 male Wistar rats were randomly assigned into four groups. Under general anesthesia, and depending on the assigned group, rats underwent renal ischemia and reperfusion. Parecoxib was injected in two of the groups to evaluate the coxib intluence on the renal function. Parametric data, serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL), an EBARI, and right and left renal histology were used to evaluate there renal function. Results: the animals of ischemia group which did not receive parecoxib showed the highest NGAL serum level, as well as the most severe tubular injury. The animals on ischemia group which received parecoxib showed NGAL plasmatic levels and tubular injury similar to the groups not subjected to renal ischemia. Conclusion: on this experimental model, parecoxib showed protective renal properties / Mestre