Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:10:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcon_GlauciaEliseteBarbosa_M.pdf: 14060176 bytes, checksum: af649901dd029fcd8904eaa52639abe2 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi é endêmica na América Latina, onde estima-se que 16 a 18 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas. A tripanosomíase americana é caracterizada por uma fase aguda, com elevado número de parasitas no sangue, detectados através de métodos parasitológicos; e uma fase crônica, onde os parasitas são pouco detectados no sangue periférico, o que toma o diagnóstico dificilneste estágio. Testes sorológicos para o diagnóstico da doença de Chagas são sensíveis, mas sua especificidade é insatisfatória. Por outro lado, a detecção direta do parasita no sangue, como o xenodiagnóstico e a hemocultura, são altamente específicos, mas apresentam baixa sensibilidade. Testes moleculares como a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), que amplifica seqüências repetitivas do cinetoplasto do T cruzi (k DNA) e DNA nuclear têm sido propostos como uma boa alternativa para a detecção de fragmentos do T cruzi no sangue humano. O presente estudo tem como principal objetivo testar o diagnóstico pela PCR em pacientes chagásicos crônicos e pacientes com sorologia duvidosa para a doença de Chagas atendidos no GEDoCh (Grupo de Estudos em Doença de Chagas) / HC / UNICAMP. O DNA extraído do sangue periférico dos pacientes foi amplificado pela PCR utilizando-se oligonucleotídeos do k DNA e DNA nuclear. Fragmentos de 330 pares de base e de 149 pares de base, amplificadospela PCR e PCR dupla a partir dessas regiões, foram detectados em pacientes chagásicos crônicos. Os resultados obtidos foram comparados com a sorologia e xenodiagnóstico, realizados a partir de técnicas já padronizadas. Entre os pacientes com sorologia negativa, não houve amplificação de DN positiva para a doença de Chagas, 43 apresentaram PCR dupla positiva. Dos 28 pacientes com sorologia duvidosa, 11 apresentaram PCR dupla positiva, dos quais um apresenta xenodiagnóstico negativo. Nossos resultados sugerem que a PCR dupla por nós padronizada, pode ser complementar a sorologia para o diagnóstico da doença de Chagas e contribui para o esclarecimento de casos com sorologia duvidosa / Abstract: Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is an important endemic illness in Latin America, where an estimated 16 to 18 million persons are chronically infected. The trypanosomiasis involves a characteristic acute phase with high levels of parasites in the bloodstream, allowing a diagnosis by parasitological methods, and a chronic phase in which parasites are not detectable in blood smears, makingthe diagnosis difficult at this stage. Serological tests for T. cruzi detection in blood are sensitive, but their specificity is generally unsatisfactory. On the other hand, direct detection of parasites in blood, either by xenodiagnosis or hemoculture, is highly specific but of low sensitivity. Molecular assays such as the Polymerase Chain Reaction (PCR), which amplify certain repetitive sequences of trypanosome kinetoplast DNA (kDNA), and DNA nuclear have been proposed as good altemative tools for detection of T. cruzi in human blood. The present study aimed to test PCR diagnosis in chagasic chronic patients and doubtful serological patients attended in GEDoCh (Grupo de Estudos em Doença de Chagas)/UNICAMP. The DNA prepared ITompatient's blood was amplified by the PCR using primers of the kinetoplast minicircles and DNA nuclear. A 330 bp and 149 bp Tagmentsoriginating ITomkinetoplast DNA and DNA nuclear was specifically detected in chronic chagasic. The results of these tests were compared with serological diagnosis performed using standard techniques and xenodiagnosis. We found that seven of the serologically negative individuaIs don't give specific amplification product, whereas 43 out of 53 patients previously serodiagnosed as chagasic were positive using the Nested - PCR (DNA nuclear) method. In addition, twelve of twenty-eight patients with doubtful serologic results were confirmed as positive by PCR. That two was negative xenadiagnosis. Our results suggest that the Nested - PCR may be a toei complementary to serology in the diagnosis af Chagas disease, and that it is available for parasite detection in patients with chronic disease and patients with doubtful serologic / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Yoko Bomura Rosato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:16:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Henrique_M.pdf: 2280796 bytes, checksum: 82e25720ea1b009fc1162dcc445725a2 (MD5) Previous issue date: 1988 / Mestrado

Orientador: Clarice Weis Arns / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T20:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dani_MariaAngelaGomesdeCastro_M.pdf: 3584513 bytes, checksum: 44f0c60386e93a6a79298e7ba5df2fba (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Pneumovírus aviário (PVA) causa infecção aguda no trato respiratório em perus (rinotraqueítedos perus) e galinhas (síndrome da cabeça inchada) com início abrupto e disseminação rápida. Neste estudo, foi padronizada a reação de RT-PCR quimioluminescente para detecção de um transcrito do gene F do PVA em dois isolados europeus e dois isolados brasileiros. Foram realizadas PCRs de diluição limitante utilizando-se RT-PCR quimioluminescente e "nested PCR" (nPCR) para a comparação quanto à sensibilidade e especificidade entre as metodologias na detecção de PVA. A sensibilidade e especificidade da RT-PCR quimioluminescente foram semelhantes às da nPCR e 100 vezes mais sensível que uma única PCR. O seqüênciamento dos produtos de 175 pb do gene F revelaram 100% de homologia com seqüências depositadas no banco de dados. Em seguida foi realizada a caracterização dos isolados brasileiros através de RT-PCR, análise com enzimas de restrição e seqüênciamento automático de um fragmento do gene G. Os produtos de 600 pb correspondentes aos primeiros 600 nucleotídeos do gene G dos isolados SHS BR 119 e SHS BR 121 revelaram 99% de similaridade com 3 isolados do subgrupo A e 87% de similaridade com isolados do subgrupo B depositadas no banco de dados / Abstract: Avian Pneumovirus (APV) causes an acute respiratory tract infection both in turkeys (turkey rhinotracheitis) and chicken (swollen head syndrome) with sudden onset and rapid spread through the flocks. In this study, immunochemiluminescent Southern blot RT-PCR assay was employed to detect a F gene transcript of the avian pneumovirus (APV) in two European turkey isolates and two Brazilian chicken isolates. Limiting dilution PCR was performed to compare the sensitivity of immunochemiluminescent Southern blot assay and nested PCR (nPCR) assay. The sensitivity and specificity of immunochemiluminescent Southem blot RT-PCR assay were comparable to that of nPCR, and at least 100 fold more sensitive than a single PCR amplification. Sequence analysis of the 175 bp product ofthe F gene revealed 100% identity with earlier reported PVA sequences. We characterized the Brazilian isolates using restriction analysis and sequencing of a 600 bp fragment of the G gene and conclude that the isolates belong to the APV subgroup A / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Tese (livre docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:30:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aoyama_Hiroshi_LD.pdf: 2543438 bytes, checksum: 566b31a0eee0dc208eb769e82e13509e (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Este trabalho contem alguns estudos fisico-quimicos de DNA polimerases dependentes, de RNA. Poliaminas, em presença de Mg2+, exercem um efeito ativador nas reações catalisadas por transcripta-se reversa de virus de mieloblastose de aves, mas não por DNA polimerase a de Xenopus laevis. Derivados de nucleotídeos e polinucleotídeos foram descritos como substratos e inibidores de transcriptase reversa. dCflTP pode ser incorporado parcialmente no DNA sintetisadqo por transcriptase reversa e por DNA polimerases celulares a e ?. Análogos de poli A e poli C, com substituintes 2'-fluor e 2'-O-metil, podem ser utilizados como matrizes de síntese de DNA catalisada por transcriptase reversa, em presença de Mg2+ ou Mn2+. O papel do Mn2+ na síntese de DNA e discutido neste trabalho. Diferentes compostos foram utilizados como inibidores de sintese de DNA. O antibiótico novobiocina diminui a formação do complexo entre Trp transcriptase reversa e o tRNA iniciador, ligando-se irreversivelmente à enzima. (dCfl)n é um inibidor de transcriptase reversa utilizando-se DNA ativado ou RNA 70 S como matrizes naturais e (dA)n ou (rA)n como matrizes sintéticas. Nas mesmas condições nenhum efeito é verificado nas reações catalisadas por DNA polimerase a . As reações de transcriptase reversa em presença de (dAfl)n.(dT)12 como matriz-iniciador são resistentes à ação de (dCfl)n e de outros polinucleotídeos inibidores como (rU)n e (rI)n. Entretanto, tais reações são inibidas por outros compostos como brometo de etideo, tetrametil brometo de etídeo, berenil e N-etilmaleiimida. DNA polimerase A de gérmen de trigo apresenta características de uma DNA polimerase dependente de RNA. Como a transcriptase reversa, a DNA polimerase A reconhece (rA)n com uma eficiência maior em presença de Mg2+, e é inibida por glicerol e actinomicina D. O reconhecimento de matrizes naturais do tipo RNA somente se verifica utilizando-se desoxinucleosídeos trifosfato de alta atividade específica. O processo do reverso da transcrição pode ser observado também em virus de DNA. DNA polimerases purificadas de folhas infectadas pelo vírus do mosaico da couve-flor reconhecera com eficiência (rA)n, (rC)n, (Cm)n como matrizes sintéticas; são resistentes à ação de afidicolina e são inibidas por brometo de etídeo. / Abstract: This work reports some physico-chemical studies on the RNA-dependent DNA polymerase. In the presence of Mg2+, poliamines have an activating effect on the reactions catalyzed by avian myeloblastosis virus reverse transcriptase, but not on those catllyzed by Xenopus laevis DNA polymerase a. Derivatives of nucleotides and polynucleotides have been described as substrates or inhibitors of reverse transcriptase. dCflTP could be partially incorporated in the DNA synthesized by reverse transcriptase and by cellular DNA polymerases a and ?. Poly A and poly C analogues, with 2'-fluoro and 2'-O-methyl as substituents, could be utilized as templates for the DNA synthesis catalyzed by reverse transcriptase, in the presence of Mg2+ or Mn2+, The role of Mn2+ on the DNA synthesis is discussed in this work. The antibiotic novobiocin reduces the complex formation between reverse transcriptase and the Trp primer tRNA binding irreversibly to the enzyme. It has been observed that (dCfl)n was an inhibitor of reverse transcriptase by using activated DNA or 70 S RNA as natural templates and (dA)n or (rA)n as synthetic templates. At the same conditions no effect was verified on the reactions catalyzed by DNA polymerase a. Reverse transcriptase reactions directed by (dAf1)n.(dT)12 as template-primer are resistant to (dCfl)n and to other inhibitor polynucleotides like (rU)n and (rI)n. However, these reactions were inhibited by other compounds like ethidium bromide, tetramethyl ethidium bromide, berenil and N-ethylmaleimide. Wheat germ DNA polymerase A has shown some RNA-dependent DNA polymerase characteristics. Like reverse transcriptase, DNA polymerase A could recognize (rA)n better in the presence of Mg2+ and was inhibited by glycerol and actinomycin D. RNA natural templates could be copied only when high specific activity deoxy-nucleoside triphosphate was used. The reverse of the transcription can also be observed in DNA virus. Synthetic templates like (rA)n, (rC)n, (Cm)n were efficiently recognized by DNA polymerases purified from cauliflower mosaic virus infected leaves; it has been observed that these enzymes were resistant to aphidicolin and inhibited by ethidium bromide. / Tese (livre docencia) - Univer / Livre-Docente em Ciencias Biologicas

Orientador: Helio Langoni / Resumo: O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies responsáveis por causar doenças nos animais. Apresenta células de tamanho reduzido e em formatos variáveis. Ocasiona mastite em bovinos, podendo também, estar relacionado a outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. Neste estudo, objetivou-se o isolamento de espécies de micoplasmas a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a detecção de Mycoplasma (M.) bovis pelas técnicas moleculares de PCR convencional e PCR em tempo real. Um total de 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica, provenientes de nove propriedades leiteiras da região da bacia leiteira ABCW – Paraná e de uma propriedade situada na região de São Pedro – São Paulo foram avaliadas para a presença do DNA de Mollicutes. Desse total, em 100 amostras de leite que foram positivas à PCR para a classe Mollicutes, realizou-se a PCR para detecção de M. bovis obtendo-se positividade de 13% (13/100). Na análise pela PCR em tempo real obteve-se 11% (11/100) de amostras positivas para M. bovis. No cultivo microbiológico, obteve-se 6% (6/100) de crescimento ao se utilizar o meio Hayflick e, 11% (11/100) de crescimento ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir desses isolados em caldo PPLO, nove deles foram positivos à PCR convencional para M. bovis e dois, negativos. Na análise filogenética dos isolados, a partir dos resultados do sequenciamento, obteve-se 100% de M. bovis para todos os isol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Mycoplasma genus includes more than 200 species responsible for causing diseases in animals. It presents cells of reduced size and in variable shapes. It may cause mastitis in cattle, and may also be related to other manifestations such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The objective of this study was to isolate mycoplasma species from bovine clinical mastitis milk samples, as well as the detection by molecular techniques of conventional PCR and real-time PCR of M. bovis. A total of 1166 milk samples from clinical mastitis cases from nine dairy farms in the ABCW - Paraná dairy region and from a property located in the São Pedro region - São Paulo were evaluated for the presence of Mollicutes DNA. From this total, 100 milk samples that were PCR positive for the Mollicutes class, the PCR was performed to detect the M. bovis, obtaining 13% positivity (13/100). Real-time PCR analysis yielded 11% (11/100) of positive samples for M. bovis. In the microbiological culture, 6% (6/100) of growth was obtained when using the Hayflick medium and 11% (11/100) growth when using SP4 medium (including positive ones in the first one). From these isolates in PPLO broth, nine of them were positive to conventional PCR for M. bovis and two, negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, from the results of the sequencing, 100% of M. bovis was obtained for all the isolates. In view of the results obtained, the importance of further studies for the elucidation of other s... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Otávio Henrique Thiemann / Banca: Márcia Regina Brochetto Braga / Resumo: A família Trypanosomatidae compreende um grande número de protozoários parasitas, incluindo importantes agentes etiológicos de doenças humanas. Entre os causadores de doenças, destacam-se Trypanosoma brucei (responsável pela doença do sono), Trypanosoma cruzi (agente causador da doença de Chagas) e Leishmanias sp (causadoras de leishmanioses). Esses parasitas possuem como mecanismo para formação de seus mRNAs, a reação de trans-splicing, que envolve a excisão de íntrons (regiões intergênicas) e a união dos éxons de dois transcritos independentes, SL RNA (spliced leader) e pré-mRNA aceptor. Em outro trabalho realizado no laboratório, a reação de trans-splicing in vitro foi estabelecida utilizando extratos nucleares (livre de células) de formas epimastigotas de T. cruzi e/ou formas procíclicas de T. brucei e como pré-mRNA aceptor, a sequência parcial de alfa tubulina (contendo a região intrônica, splice site e parte do éxon da alfa tubulina) de T. cruzi marcada radioativamente (dados ainda não publicados). O uso de material radioativo é fator limitante, devido a sua alta periculosidade (extremamente nocivo ao homem e ao meio ambiente) e, também, pelo alto custo relativo aos trâmites burocráticos atuais para sua importação. Portanto, neste trabalho reproduziu-se a reação sem o uso de material radioativo, utilizando-se a transcrição reversa/ reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) e gel de agarose corado por brometo de etídeo para a análise dos produtos formados. A metodologia permitirá a avaliação da interferência de substâncias tripanocidas, buscando potenciais alvos terapêuticos nas ribonucleoproteínas de parasitas, preservando as células do hospedeiro. / Abstract: The Trypanosomatidae family includes a large number of protozoan parasites, with importants etiological agents of human diseases. Among the causes of diseases stand out Trypanosoma brucei (responsible for sleeping sickness), Trypanosoma cruzi (Chagas disease causative agent) and Leishmania sp (causing leishmaniasis). These parasites have a mechanism that form their mRNAs, the trans-splicing reaction, which involves the introns (intergenic regions) excision and two exons union of the independent transcripts, RNA SL (spliced leader) and pre-mRNA acceptor. In another laboratory study, the trans-splicing in vitro reaction was established using nuclear extracts (cell-free) from epimastigotes forms of T. cruzi and / or procyclic forms of T. brucei, and as pre-mRNA aceptor was used the alpha tubulin partial sequence (containing the intronic region, splice site and a radiolabelled part of alpha tubulin exon from T. cruzi (unpublished data). The use of radioactive material is a limiting factor, due to its high hazard (extremely harmful to humans and environment), and also by the high cost relative to the current bureaucratic procedures for importation. Therefore, in this work the reaction was reproduced without the use of radioactive material, using the reverse transcription / polymerase chain reaction (RT-PCR) and agarose gel stained with ethidium bromide for analysis of the formed products. The method allows the evaluation of trypanocidal substances interference searching potential therapeutic targets in the parasite ribonucleoprotein, preserving the host cells. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:53:07Z : No. of bitstreams: 1 jardim_ecg_me_araca.pdf: 223411 bytes, checksum: b3dc50334b0186d7da6f430f36a2eeaa (MD5) / Este estudo avaliou a ocorrência de bactéria entérica na cavidade oral em pacientes com periodontite, pacientes com gengivite, indivíduos periodontalmente saudáveis e pacientes edentados submetidos a tratamento odontológico com reabilitação protética na Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP. Quarenta e um edentados portadores de próteses totais, 89 pacientes com gengivite, 70 pacientes com periodontite e 50 indivíduos periodontalmente saudáveis foram submetidos a exame clínico, e as condições periodontais e bucais foram registradas. Foram coletadas amostras de saliva, mucosa bucal, gengiva e biofilme supra e subgengival e bactérias foram detectados por cultura e PCR. Os microrganismos-alvo foram isolados de 75,61% dos pacientes edentados, 25,84% dos pacientes com gengivite, 30% dos pacientes com periodontite e de 18% dos indivíduos saudáveis. Por PCR, as frequências de detecção foram 87,8%, 38,2%, 64,295 e 18%, respectivamente. Significativa resistência aos antimicrobianos foi observada na maioria dos isolados, e verificou-se uma grande heterogeneidade dos marcadores resistentes à ampicilina e tetraciclina. / This study evaluated the occurrence of enteric bacteria in oral cavity of periodontitis patients, gingivitis patients, periodontally healthy subjects and edentulous patients wearing complete denture undergoing dental treatment in Araçatuba School of Dentistry. Forty one edentulous wearing complete dentures, 89 gengivitis patients, 70 periodontitis patients and 50 periodontally realthy subjects were submitted to clinical examination, and periodontal and oral conditions were registred. Saliva, oral mucosa, subgingival and supra gingival biofilm samples were colleted and enteric bacteria were detected by culture and PCR. Targeted microorganisms were isolated from 75,61% of edentulous patients, 25,84% of gingivitis patients, 30% of periodontitis patients and from 18% of healthy individuos. By PCR, the detection frequencies were 87,8%, 38,2%, 64,29% and 18%, respectively. Significant resistance to antimicrobial agents was observed in most of isolates, and it was veriied a great heterogeneity of resistance markers to ampicillin and tetracycline.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T21:03:22Z : No. of bitstreams: 1 costa_i_dr_araca.pdf: 404352 bytes, checksum: f6cd3645b1babe03a670530063260f21 (MD5) / A osteomielite crônica de maxila e mandíbula é rara em países industrializados e sua ocorrência, nos países em desenvolvimento, está associada a trauma e procedimentos cirúrgicos, sendo que sua etiologia não foi estudada profundamente. O objetivo desse estudo foi avaliar a microbiota associada com a osteomielite de mandíbula e maxila em pacientes brasileiros. Após exames clínicos e radiográficos, amostras de seqüestros ósseos, secreção purulenta e biopsias de tecido granulomatoso de vinte e dois pacientes com osteomielite crônica da mandíbula e maxila foram cultivadas e submetidas à detecção de um conjunto de patógenos através do método do PCR. O isolamento bacteriano foi realizado em ágar “fastidious anaerobe” suplementado com hemina, menadiona e sangue de cavalo, para os microrganismos anaeróbios, e em ágar de tripticaseína de soja suplementado com extrato de levedura e sangue de cavalo, para os aeróbios e anaeróbios facultativos. Cada paciente apresentava uma única lesão. As placas foram incubadas em anaerobiose e aerobiose, a 37oC, por 14 e 3 dias, respectivamente. Bactérias foram cultivadas de 10 amostras de pacientes e os gêneros Actinomyces, Fusobacterium, Parvimonas e Staphylococcus foram os mais freqüentes. Através do PCR, DNA bacteriano foi detectado em amostras de 20 pacientes. Os resultados sugerem que as osteomielites crônicas dos maxilares geralmente são infecções anaeróbias mistas, reforçando o conceito de que estão relacionadas principalmente aos microrganismos do ecossistema bucal e que as infecções periapicais e periodontais podem atuar como fatores predisponentes. / Chronic osteomyelitis of the maxilla and mandible is rare in industrialized countries and its occurrence in developing countries is associated with trauma and surgery, and its microbial etiology has not been studied thoroughly. The aim of this investigation was to evaluate the microbiota associated with osteomyelitis of the mandible and maxilla from some Brazilian patients. After clinical and radiographic evaluation, samples of bone sequestra, purulent secretion, and biopsies of granulomatous tissues from twenty-two patients with chronic osteomyelitis of the mandible and maxilla were cultivated and submitted for pathogen detection by using a PCR method. Each patient harbored a single lesion. Bacterial isolation was performed on fastidious anaerobe agar supplemented with hemin, menadione and horse blood for anaerobes; and on tryptic soy agar supplemented with yeast extract and horse blood for facultative bacteria and aerobes. Plates were incubated in anaerobiosis and aerobiosis, at 37oC during 14 and 3 days, respectively. Bacteria were cultivated from ten patient samples; and genera Actinomyces, Fusobacterium, Parvimonas, and Staphylococcus were the most frequent. By PCR, bacterial DNA was detected from thirteen patient samples. The results suggest that cases of chronic osteomyelitis of the jaws are usually mixed anaerobic infections, reinforcing the concept that osteomyelitis of the jaws are mainly related to microorganisms from the oral environment, and periapical and periodontal infections may act as predisposing factors.

Orientador: Semíramis Guimarães Ferraz Viana / Coorientador: Teresa Cristina Goulart de Oliveira-Sequeira / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Rodrigo Martins Soares / Banca: Pedro Luís Silva Pinto / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: Muitas espécies de protozoários podem causar gastroenterite aguda ou crônica em seres humanos e são altamente prevalentes nas populações residentes nos países em desenvolvimento, onde a transmissão é favorecida devido a condições precárias de higiene e escassa disponibilidade de água potável. No entanto, a infecção assintomática e o poliparasitismo também são comumente observados nessas populações. Neste trabalho, investigou-se a prevalência de protozoários intestinais em duas colônias de pescadores, Porto Said (PS) e Santa Maria da Serra (SM), situadas ao longo do rio Tietê, no Estado de São Paulo. As colônias não dispõem de serviços públicos básicos como: vias públicas, fornecimento de água e luz e saneamento básico. Todos os colonos (n = 88 em PS, e n = 38 em SM) coletaram três amostras de fezes, e todos eram assintomáticos no momento da coleta. Para obter informações sobre as possíveis vias de transmissão, amostras fecais de 49 cães (38 de PS e 11 de SM) e 28 amostras de água do rio foram coletadas (16 de PS e 12 de SM). As amostras fecais humanas e caninas foram analisadas por microscopia e PCR para detectar e caracterizar os protozoários Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis e Cryptosporidium spp. Diante dos resultados obtidos, Blastocystis spp. foi o parasita mais prevalente nas amostras humanas (45,4% em PS e 71% em SM), seguido por D. fragilis (13,6% em PS e 18,4% em SM) e G. duodenalis (18,2% em PS e 7,9% em SM), já Cryptosporidium spp. não foi detectado na população humana. Além disso, G. duodenalis foi detectado em quatro cães (10,5%) em PS e dois cães (18,2%) em SM, enquanto que um único cão foi detectado com Cryptosporidium canis. Nas 28 amostras de água previamente processadas pelos métodos de filtração e separação imunomagnética e examinadas por microscopia de fluorescência, oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia não foram... / Abstract: Several species of protozoa cause acute or chronic gastroenteritis in humans, worldwide. The burden of disease is particularly high among children living in developing areas of the world, where transmission is favored by lower hygienic standards and scarce availability of safe water. However, asymptomatic infection and polyparasitism are also commonly observed in poor settings. Here, we investigated the prevalence of intestinal protozoa in two small fishermen villages, Porto Said (PS) and Santa Maria da Serra (SM), situated along the river Tietê in the State of São Paulo, Brazil. The villages lack basic public infrastructures and services, such as roads, public water supply, electricity and public health services. Multiple fecal samples were collected from 88 individuals in PS and from 38 individuals in SM, who were asymptomatic at the time of sampling and had no recent history of diarrheal disease. To gain insights into potential transmission routes, 49 dog fecal samples (38 from PS and 11 from SM) and 28 river water samples were also collected. All samples were tested by microscopy and PCR was used to genotype isolates of Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis and Cryptosporidium spp. By molecular methods, the most common human parasite was Blastocystis spp. (prevalence, 45% in PS and 71% in SM), followed by D. fragilis (13.6% in PS, and 18.4% in SM) and G. duodenalis (18.2% in PS and 7.9% in SM); Cryptosporidium spp. were not detected. Further, G. duodenalis was found in 4 dogs (10.5%) in PS and 2 dogs (18.2%) in SM, whereas a single dog was found infected with Cryptosporidium canis. River water samples processed by filtration and immunomagnetic separation and examined by fluorescent microscopy, were negative for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts. Sequencing of the barcoding region of the small subunit ribosomal gene revealed large genetic variation among Blastocystis isolates, with subtypes (STs) that ... / Doutor

Modificações epigenéticas tais como metilação do DNA, constituem um mecanismo especial de regulação da expressão gênica envolvido em muitas situações patológicas. Padrões alterados de metilação do DNA são comuns em cânceres e infecções virais. A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção fúngica sistêmica, causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. O Brasil é detentor do maior número de casos na América do Sul. A doença apresenta envolvimento pulmonar primário com disseminação para mucosa oral, pele, sistema retículo-endotelial e glândulas suprarrenais. As lesões orais são caracterizadas por hiperplasia eritematosa finamente granular, salpicadas com hemorragias pontuais chamadas de estomatite moriforme. A finalidade deste estudo foi identificar perfis diferenciais de metilação do DNA em pacientes com e sem lesão oral na PCM. A identificação destes perfis foi baseada na estratégia de MS-AP-PCR (Amplificação arbitrária sensível a metilação). O DNA, extraído do sangue total de pacientes com e sem lesão oral, foi digerido com as enzimas de restrição Hpa II e Msp I. Os produtos da digestão foram amplificados pela técnica de PCR, utilizando iniciadores arbitrários. Foi obtido um perfil diferencial de metilação após a amplificação do DNA de pacientes sem lesão de boca, comparado ao perfil de pacientes com lesão de boca. A banda diferencialmente expressa foi purificada, clonada e os plasmídeos obtidos P5, P6 e P7 foram analisados pelo software PhredPhrap e na ferramenta BLASTN para a obtenção de dados de mapeamento e identidade com as sequências presentes no genoma humano. O fragmento clonado no plasmídeo P5 apresentou similaridade com uma sequência de DNA presente no cromossomo 20, próxima ao gene YTHDF1. Os fragmentos clonados nos plasmídeos P6 e P7 apresentaram similaridade com sequências de DNA presentes no cromossomo 15, sendo que o fragmento P6 apresentou similaridade com uma sequência intrônica do gene RNA binding protein with multiple splicing 2” (RBPMS2) e o fragmento P7 com uma sequência intrônica do gene “diphthamine biosynthesis 6” (DPH6)”. A expressão do gene YTHDF1 em leucócitos foi testada por PCR em tempo real e não houve diferença significativa nos dois grupos de pacientes. Ainda não há descrição na literatura da correlação do gene YTHDF1 com a PCM tornando este estudo inédito e mostrando a importância da análise epigenética para conhecimento dos mecanismos celulares nas condições normais e também patológicas. / Epigenetic changes such as DNA methylation is a specific mechanism for the regulation of gene expression involved in many pathological situations. Altered patterns of DNA methylation are common in cancers and viral infections. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic fungal infection caused by a thermo-dimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis. Brazil is having the largest number of cases in South America. The disease presents primary pulmonary involvement that spreads to oral mucus, skin, reticuloendothelial system, and adrenals. Oral lesions are characterized by erythematous fine granular hyperplasia, and speckled with occasional bleeding called moriform stomatitis. The purpose of this study was to identify profiles of different DNA methylation in patients with and without oral lesions in PCM. The identification of these profiles was based on the strategy of MS-AP-PCR (Methylation-Sensitive arbitrarily Primed PCR). The DNA extracted from whole blood of patients with and without oral lesions was digested with restriction enzymes: Hpa II and Msp I. The digestion products were amplified by PCR (polymerase chain reaction) using arbitrary primers. We obtained a differing profile after amplifying the DNA from patients without mouth lesions compared to the profile of patients with mouth lesions from agarose gel electrophoresis. The differently expressed band was purified and cloned, and the obtained plasmids, P5, P6 and P7, were analyzed by the softwares PhredPhrap and BLASTN tool to obtain mapping data and identify the sequences present in the human genome. The cloned fragment in the plasmid P5 showed similarity with a DNA sequence present in chromosome 20, next to the gene YTHDF1. The fragments cloned in plasmids P6 and P7 showed similarity with the DNA sequences present on chromosome 15, the P6 fragment showed similarity with an intronic sequence from the gene, “RNA binding protein with multiple splicing 2 "(RBPMS2), and the P7 fragment showed similarity with the intronic sequence of the gene "diphthamine biosynthesis 6" (DPH6) ".biosynthesis 6" (DPH6)". The YTHDF1 gene expression in leukocytes was tested by real-time PCR and no significant difference were found in both groups of patients. There is no description in the literature relating the YTHDF1 gene with PCM which has shown the importance of study epigenetic for understanding the cellular mechanisms under normal and pathological conditions.