A preservação da arquitetura óssea alveolar, durante o processo de reparo do alvéolo dentário após exodontias, é um grande desafio clínico. É esperado que 40 a 60% do volume ósseo alveolar inicial sejam perdidos nos primeiros seis meses. O OsteoScaf é um novo substituto ósseo, desenvolvido pela Universidade de Toronto e representa uma alternativa promissora para a manutenção da integridade óssea alveolar nesse cenário. Esse material é uma matriz tridimensional trifásica reabsorvível e osteocondutiva, composta por ácido polilático-co-glicólico e duas fases de fosfato de cálcio reabsorvível. Com o objetivo de avaliar se o OsteoScaf poderia reduzir a perda óssea durante a fase de reparação/remodelação alveolar após a exodontia, quando comparado com o controle (apenas coágulo sanguíneo), foram implantados cilindros desse material (com duas porosidades diferentes - poros grandes e poros pequenos) em alvéolos de dentes anteriores superiores humanos, imediatamente após a exodontia. Dez pacientes (32 alvéolos) fizeram parte deste estudo, onde 16 alveólos receberam o implante de OsteoScaf e 16 foram usados como controle. Foram feitas tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC) imediatamente após a exodontia e também aos 120 dias pós-operatóro, quando foram realizadas biópsias ósseas analisadas por microtomografia computadorizada (microTC) e microscopia. A análise quantitativa das microTCs mostraram mais trabéculas ósseas e menor espaço entre elas, com OsteoScaf de poros menores. A análise quantitativa das TCFC indicou menor perda óssea no grupo experimental, principalmente o OsteoScafTM de poros maiores. A avaliação qualitativa dos cortes histológicos mostrou neoformação óssea justaposta ao material, demonstrando sua natureza osteocondutiva. Nossas observações mostraram que o OsteoScaf (de poros pequenos ou grandes) reduziu a perda óssea alveolar durante o processo de reparação/remodelação óssea pós-exodôntica, aos 120 dias de pós-operatório, em humanos. Essa pesquisa recebeu apoio financeiro da CAPES (Brasil) e TRT (Canadá). / Preserving alveolar bone architecture during socket healing is a significant clinical challenge. It is expected that 40% to 60% of the initial alveolar bone volume will be lost up to 6 months after tooth extraction. OsteoScaf is a novel bone substitute material developed at the University of Toronto and represents a promising alternative for maintaining alveolar bone integrity in this clinical scenario. It is a resorbable, osteoconductive, 3-phase composite scaffold comprising poly(lactide-co-glycolide) and 2 osteoclast-resorbable calcium phosphate phases. Our hypothesis was that OsteoScaf lithomorphs (10x3mm cylinders), placed in fresh extraction sockets, would reduce post-extraction bone loss compared to sockets with coagulum alone (control). Thus, we placed OsteoScaf (of two different porosities small and large pores) in fresh extraction sockets of maxillary anterior teeth in humans. A total of 10 patients (32 sockets) were included in the study, of which 16 sockets were grafted with OsteoScaf and 16 were used as control. Cone Beam Computer Tomography (CBCT) was performed both immediately following extraction and also at 120 days postoperatively, at which time biopsy samples were also harvested for micro computer tomography (µCT) and histological analyses. Quantitative analysis of the µCT showed more bone trabeculae and smaller trabecular separation in the experimental group than control, specifically with small pore scaffolds. In addition, quantitative analysis of CBCT showed less bone resorption in the OsteoScafTM groups, especially with the large pore scaffolds. Qualitative histological analysis showed new bone tissue in direct apposition to the scaffold demonstrating its osteoconductive nature. Our observations showed that the OsteoScafTM groups (small and large pores) reduced alveolar bone loss after 120 days of socket healing in humans. Grants: CAPES (Brazil) and TRT (Canada).

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Gilson Cesar Nobre Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaSallesBrancode_D.pdf: 18183834 bytes, checksum: 7e68ca8a08aa330701eecf3a55349a69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A fluoxetina é um droga inibidora seletiva da recaptação de serotonina que apresenta propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal (DP). In vitro, avaliou-se a influência da fluoxetina sobre a capacidade das células dendríticas (DCs) em apresentar antígeno aos linfócitos T. As DCs foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6 e diferenciadas utilizando-se GM-CSF (20 ng/mL). As DCs foram tratadas com a fluoxetina (concentrações: 0,01, 0,1 ou 1 ?M) para análise da produção de citocinas e quimiocinas, bem como da expressão de MHC-II e moléculas co-estimuladoras (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) aos linfócitos T, utilizando-se ensaios de ELISA e citometria de fluxo respectivamente. Culturas de DCs e linfócitos T reativos ao Aggregatibacter actinomycetemcomitans (×Aa-T) foram utilizadas para avaliação de proliferação/ativação de linfócitos T. A desipramina, um inibidor seletivo da recaptação de norepinefrina, também foi incluída nos ensaios in vitro para comparação. In vivo, avaliou-se os efeitos da fluoxetina sobre a resposta inflamatória e a destruição tecidual utilizando-se modelo de DP induzida por ligadura. Ratos Wistar machos (SPF) foram submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo): 1) ratos sem ligadura e sem tratamento (grupo controle); 2) ratos com ligadura e tratados com solução salina (grupo ligadura); 3) ratos com ligadura e tratados com a fluoxetina (20 mg/kg/dia, grupo ligadura + fluoxetina). Análises de reabsorção óssea na região de furca (lâminas coradas com H&E) e de colágeno no tecido conjuntivo da mesial dos primeiros molares (coloração de picrosirius) foram realizadas nos ratos submetidos a 15 dias de indução da DP. Tecidos gengivais de ratos submetidos a 3 dias de indução da DP foram submetidos às seguintes análises: expressão de IL-1?, COX-2, MMP-9 e iNOS utilizando-se RT-PCR e atividade da MMP-9 utilizando-se zimografia. Como resultados, a fluoxetina diminuiu a produção de IL-12, IL-1?, TNF-?, RANTES e MIP-1??pelas DCs estimuladas com LPS (P < 0,05, ANOVA, teste t de Student), bem como diminuiu significativamente a expressão de ICOSL. Além disso, reduziu a proliferação de ×Aa-T estimulados com Aa pelas DCs. A serotonina (5- HT) aumentou a proliferação de ×Aa-T, indicando que os efeitos da fluoxetina são independentes da 5-HT. A desipramina apresentou perfil semelhante à fluoxetina nos ensaios in vitro. No estudo in vivo, a fluoxetina reduziu a perda óssea em região de furca quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05 ANOVA, teste t de Student) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P > 0,05). Ainda, a fluoxetina reduziu a expressão de IL-1??e COX-2 e a atividade da MMP-9 quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05). Em conjunto, os dados demonstram que a fluoxetina diminuiu a capacidade de apresentação de antígeno das DCs, bem como a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a perda de colágeno na DP, indicando que ela pode constituir uma abordagem terapêutica promissora como moduladora da resposta do hospedeiro na DP / Abstract: Fluoxetine is a selective serotonin reuptake inhibitor presenting immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to evaluate the fluoxetine effects on immunoinflammatory response associated with periodontal disease (PD). The in vitro study evaluated the effects of fluoxetine on antigen-presentation capacity of dendritic cells (DCs). Bone marrow DCs obtained from C57BL/6 wild type mice were differentiated using GM-CSF (20 ng/mL). DCs were treated with fluoxetine (concentrations of 0.01, 0.1 or 1 ?M) for subsequent cytokine/chemokine assays (ELISA) and analysis of expression of MHC-class II and co-stimulatory molecules (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) to T cell activation using flow cytometry. Fluoxetine was also applied to cultures with both DCs and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)-reactive T cells (×Aa-T), which were used for analysis of T cells proliferation/activation using thymidine and ELISA assays. Desipramine, a selective norepinephrine reuptake inhibitor, was also tested in vitro for comparison to fluoxetine. In vivo, male Wistar rats received ligature placement around mandibular first molars and were randomly assigned into three experimental groups (n=10/group): 1) Control rats (without ligature); 2) rats with ligature + placebo (saline; oral gavage); 3) rats with ligature + fluoxetine (20 mg/kg/day in saline; oral gavage). Histometric and histological analyses were performed for measurement of loss of bone in furcation region (H&E stain) and collagen fibers (picrosirius red stain) in the connective tissue of rats submitted to 15 days of PD induction. Gingival tissues were collected from animals submitted to 3 days of PD induction for analyses of mRNA expression of IL-1?, COX-2, MMP-9 and iNOS using RT-PCR, measurement of total protein concentration and MMP-9 activity using zymogram. Fluoxetine suppressed IL 12, IL-1?, TNF-?, RANTES and MIP-1??production by LPS-stimulated DCs (P < 0.05, ANOVA, Student's t test), as well as significantly reduced the expression of ICOS-L. Fluoxetine suppressed the proliferation of ×Aa-T stimulated with Aa-antigen presentation by DCs from co-cultures. When applied to ×Aa-T/DCs co-cultures, serotonin (5-HT) increased T cell proliferation, indicating that fluoxetine effects are independent of 5-HT. Desipramine effects were similar to those of fluoxetine. In the in vivo study, fluoxetine reduced alveolar bone loss as compared to ligature group (P < 0.05, ANOVA, Student's t test) and maintained collagen fibers levels similarly to control group (P > 0.05). Fluoxetine reduced IL-1??and COX-2 expression, as well as MMP-9 activity, from gingival tissues when compared to ligature group (P < 0.05). Altogether, data showed that fluoxetine can modulate the antigenpresentation capacity of DCs and reduce inflammatory response and loss of bone and collagen associated with PD. In conclusion, fluoxetine can modulate both immune and inflammatory responses on PD, suggesting that it may constitute a new therapeutic approach for modulation of host response in periodontal therapy / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Reginaldo Bruno Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Napimoga_MarceloHenrique_D.pdf: 980827 bytes, checksum: d6e89bf1b359918d8c502f0a7367d2c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Porphyromonas gingivalis (Pg) sintetiza diversas classes de fosfolipídeos. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos biológicos que estes lipídeos exercem sobre a reabsorção óssea. Células precursoras de osteoclastos de camundongos, incluindo RAW264.7 e células da medula óssea, foram estimuladas com um lipídeo recém caracterizado isolado de Pg (F24), LPS de Pg, RANKL e um isômero estrutural isolado de mamíferos (DMPE), seguida de coloração das células por fosfatase ácida (TRAP) para detecção de osteoclastos. A formação de lacunas de reabsorção em discos de dentina foi realizados para identificar a presença de osteoclastos maduros. Proteínas de células precursoras RAW264.7 com afinidade a F24 foram identificadas como sendo nucleolin através de espectometria de massa, e confirmada sua presença através de ensaio em microscopia confocal. Utilizando Western-blot e RNAi, a sinalização intracelular desencadeada pela F24 durante a osteoclastogênese foi analisada. A F24 mas não o LPS ou DMPE induziu números significantemente maiores de células multinucleadas TRAP+ quando comparado ao RANKL, assim como a formação de lacunas de desmineralização em discos de dentina, o qual não foi inibida pelo repressor do RANKL, a OPG. LPS de Pg, mas não a F24, induziu a produção de TNF-a, IL-1ß e IL-6 pelas células RAW264.7. Microscopia confocal mostrou que a F24 está co-localizada com este receptor na superfície de células RAW264.7. A F24 induziu a fosforilação de maior intensidade do p38 e JNK comparado ao RANKL. Este novo fosfolipídeo isolado de P. gingivalis, distinto do LPS, mostrou-se capaz de induzir osteoclastogênese utilizando nucleolin como a molécula receptora através de uma via independente do RANK / Abstract: Porphyromonas gingivalis (Pg) synthesizes several classes of complex phospholipids in addition to LPS. However, little is known about the biological effects of these phospholipids on bone resorption. Mouse osteoclast precursors cells including, RAW264.7 and bone marrow cells, were stimulated with phospholipids isolated from Pg (F24), Pg LPS, RANKL and a mammalian structural isomer (DMPE). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and a dentine-pit formation assay were used for the identification of activated mature osteoclasts. F24¿s counter-ligand expressed on RAW264.7 cells were identified by affinity purification and mass-spectrometry based proteomics, and counter-examined by a confocal microscopy. Using Western-blot, signaling pathways triggered by F24 during osteoclastogenesis were examined with RNAi technology. F24, but not LPS or DMPE, induced significantly higher number of TRAP+ multinuclear cells from osteoclast precursors than RANKL, along with dentine-pit formation, which was not inhibited by RANKL decoy receptor OPG. Pg LPS, but not F24, induced TNF-a, IL-1ß and IL-6 by RAW264.7 cells. Proteomics analyses identified nucleolin as a ligand for F24. Confocal microscopy revealed the co-localization of F24 and its ligand on the surface of RAW264.7 cells. F24 induced stronger phosphorylation of p38 MAP kinase than RANKL. A novel P. gingivalis phospholipid that is distinct from LPS represents a new class of RANK-independent osteoclast differentiation factor / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-&kappa;B, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, ROR&gamma;t, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de ROR&gamma;t, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. / NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-&kappa;B-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more ROR&gamma;t expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

O objetivo do presente estudo foi comparar a eficácia da implantação de biomateriais porosos na neoformação óssea e reparo de defeitos cervicais mandibulares em cães, com ou sem a técnica de regeneração óssea guiada (ROG). Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® em grânulos (BG), osso autógeno (Ab) e coágulo (Cg) foram utilizados nas mesmas situações experimentais. Para o grupo com membrana foi utilizado o BioGide®. Doze cães foram submetidos a extrações dos pré-molares e primeiros molares mandibulares bilateralmente. Quatro meses após cinco defeitos ósseos (6 mm de diâmetro/4 mm de profundidade) foram confeccionados em um lado. Implantes de 3,3 x 10 mm foram instalados na mesial de cada defeito, proporcionando um \"gap\" distal de 2,7 mm. Os defeitos foram aleatoriamente preenchidos com Ab, Cg, BB, BC e BG. Os mesmos procedimentos foram executados no lado oposto após oito semanas. A membrana foi utilizada para recobrir os defeitos em metade dos lados. Os animais foram sacrificados após oito semanas. A estabilidade dos implantes foi aferida pelo Osstell Mentor®, na instalação do implante e no sacrifício. Os espécimes (n=60, sendo 3 de cada grupo) foram escaneados em micro-tomógrafo Skyscan® 1172. Após aquisição das imagens, o volume de interesse de 3,0 x 6,0 x 4,0 mm foi estabelecido e os parâmetros relativos à formação óssea foram avaliados. Todos os biomateriais foram escaneados in vitro para avaliação da porosidade. Utilizando a técnica de cortes por desgaste, lâminas histológicas foram confeccionadas para a avaliação histológica e histométrica de cada espécimen. As análises histométricas revelaram que o BC apresentou formação óssea semelhante ao Ab em 8 semanas sem BGd. O Cg mostrou a maior formação óssea entre os tratamentos testados em 16 semanas com BGd, e foi superior ao BB e BG em 8 semanas sem BGd (p<0,05). O BB exibiu pior formação óssea entre os tratamentos (8 e 16 semanas, com ou sem membrana). O BC obteve o melhor desempenho dentre os biomateriais. Todos os biomateriais foram parcialmente reabsorvidos de 8 a 16 semanas, no entanto, o BB foi encontrado em maior quantidade em comparação com os demais biomateriais (p<0,05). Em relação à análise da crista alveolar, o BB apresentou a menor reabsorção entre os tratamentos, com e sem BGd a 8 e 16 semanas (p<0,05). A aplicação da BGd proporcionou maior ISQ em 16 semanas, independentemente do material testado (p<0,05). A análise micro-tomográfica mostrou que quando a BGd não foi utilizada, o BG proporcionou a maior quantidade de osso no interior do defeito, seguido pelo BC (p<0,05). Quando o defeito foi coberto com BGd, o Ab rendeu superior formação óssea (p>0,05). A análise de superfície óssea mostrou valores aumentados em sítios tratados com BG, seguido por BC em 8 semanas sem BGd, e Ab em 8 semanas com BGd (p<0,05). O BC apresentou superfície/volume ósseo superior a 8 (com e sem BGd) e 16 semanas com BGd (p<0,05). O BB apresentou os menores valores em 16 semanas (sem BGd). O Cg em 16 semanas (com BGd) foi o pior entre os tratamentos aplicados (p<0,05). Em relação à espessura trabecular, Ab e BB apresentaram respectivamente valores maior e menor (p<0,05), independente do tempo experimental avaliado ou uso de membrana. A análise da porosidade dos biomateriais revelou que o BG apresentou maiores números, volume e superfície de poros fechados. O BB apresentou maiores valores de volume de poros abertos, porosidade aberta e porosidade total em comparação com os outros materiais. Conclui-se que a implantação de bloco de alta porosidade (BB) falhou em proporcionar maior reparo ósseo no interior do defeito e foi o tratamento que mais reduziu a reabsorção da crista óssea alveolar distal. Biomateriais com menor porosidade (BC e BG) apresentaram superior ou semelhante formação óssea e estabilidade dos implantes em comparação ao osso autógeno. A utilização da técnica de ROG melhorou o padrão de formação óssea em todos os tratamentos e períodos testados e reduziu a presença de tecido mole no interior do defeito. Uma relação inversa entre a porosidade dos biomateriais e a formação óssea in vivo foi observada no modelo experimental adotado. / The aim of this study was to compare the effectiveness of porous biomaterials in bone formation and repair of cervical mandibular defects in dogs, with or without Guided Bone Regeneration (GBR) technique. Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® in granules (BG), autogenous bone (Ab) and coagulum (Cg) were used under the same experimental conditions. For the membrane group, BioGide® was used. Twelve dogs underwent bilateral extractions of mandibular premolars and first molars. After four months five bone defects (6 mm long / 4 mm deep) were prepared at one side. Implants of 3.3 x 10 mm were installed on each of mesial defect, providing a distal gap of 2.7 mm. The defects were randomly filled with Ab, Cg, BB, BC and BG. The same procedures were performed in the opposite side after eight weeks. A membrane was used to cover the defects in half of the sides. Animals were sacrificed after eight weeks. Implant stability was measured by Osstell Mentor®, at implant installation and sacrifice. The specimens (n=60, 3 in each group) were scanned in Skyscan® 1172 micro-CT scanner. A volume of interest of 3.0 x 6.0 x 4.0 mm was established and the parameters related to bone formation were evaluated. All used biomaterials were also scanned for in vitro porosity evaluation. Using Exakt® system, ground section of each specimen were prepared for histological and histometric assessment. Histometric analysis revealed that BC presented similar bone formation to Ab in 8 weeks without BGd. Cg showed greater bone formation between treatments at 16 weeks with BGd, and was superior to BG and BB at 8 weeks without BGd (p<0.05). BB exhibited worse bone formation within treatments (8 and 16 weeks, with or without membrane). BC had the best performance among biomaterials. All biomaterials were partially resorbed from 8 to 16 weeks. However, BB was found in greater amounts in comparison with other biomaterials (p<0.05). Regarding the alveolar crest analysis, BB had the lowest resorption between treatments with and without BGd at 8 and 16 weeks (p<0,05). The BGd use promoted higher final ISQ values at 16 weeks, regardless the tested treatment (p<0.05). Micro-CT analysis showed that when BGd was not used, BG yielded the highest amount of bone within the defect, followed by BC (p<0.05). When the defect was covered with BGd, Ab yielded higher bone formation (p>0.05). Bone surface area analysis showed that increased values in sites treated with BG, followed by BC without BGd at 8 weeks, and Ab at 8 weeks with BGd (p<0.05). The BC presented greater Bone Surface Area/Bone volume at 8 (with and without BGd) and 16 weeks with BGd (p<0.05). BB had the lowest values at 16 weeks (without BGd). Cg presented the worst performance among treatments at 16 weeks (with BGd) (p<0.05). Regarding the Trabecular Thickness, Ab and BB showed the highest and lowest values, respectively (p<0.05), regardless of the time point or membrane use. In biomaterials porosity analysis, BG showed higher numbers, volume, and surface area of closed pores. BB had the highest volume of open pores, open porosity and total porosity compared with the other treatments. It can be concluded the use of a high porosity block (BB) failed to provide greater bone formation within the defect area and it was the treatment that better reduced distal alveolar crest resorption. Biomaterials with lower porosity (BC and BG) showed higher or similar bone formation and implant stability if compared to autogenous bone. The appliance of BGd improved bone formation in all treatments and tested periods and reduced soft tissue presence within the defect. An inverse relationship between biomaterials\' in vitro porosity and in vivo bone formation was observed in the experimental model used.

Na gravidez, a deficiência de cálcio tem sido associada a complicações como pré-eclâmpsia, hiperparatireoidismo, osteoporose e desnutrição, o que aumenta a frequência de crianças pré-termo, de baixo peso e pequenas para a idade gestacional (PIG). Este estudo teve como objetivo avaliar o estado nutricional de cálcio em gestantes no terceiro trimestre gestacional, utilizando como parâmetros a ingestão dietética, o cálcio urinário e o telepeptídio carboxiterminal do colágeno (CTx) no plasma. Cinquenta e duas gestantes foram selecionadas no Serviço de Obstetrícia do HU-USP. As participantes responderam um registro alimentar (3 dias) e um recordatório de 24h. Para a análise dos alimentos consumidos foi utilizado o software Nutriquanti (GALANTE & COLLI, 2007). Verificou-se a distribuição normal da ingestão de cálcio e ajustaram-se os dados pela energia de acordo com o método do nutriente residual, posteriormente corrigidos pela variabilidade intrapessoal e interpessoal. Só uma gestante teve ingestão maior do que a AI (1.000 mg/d), sendo, portanto, a única que teve ingestão de Ca adequada, segundo a referência AI. Por outro lado, considerando o CTx (não aumentado em relação ao Intervalo de Referência), e considerando que 60% das gestantes apresentam hipercalciuria, supõe-se que o equilíbrio de Ca se deu pela absorção intestinal e a reabsorção renal e não pela reabsorção óssea, indicando ingestão de Ca adequada (612 ±187 mgCa/d). / During pregnancy, calcium deficiency has been associated with complications such as pre-eclampsia, hyperparathyroidism, osteoporosis and malnutrition, which increase the frequency of preterm babies, low-weighed and small for their gestational age (SGA). This study aimed to evaluate calcium nutritional status of pregnant women in the last third of pregnancy, using diet intake, urinary calcium and plasma colagen carboxy-terminus telepeptide (CTx) as parameters. Fifty-two pregnant women were selected in the Obstetrics Service of the University Hospital (HU-USP). The subjects completed a food-consumption record (3 days) e a 24-h record. For the consumed-food analysis, Nutriquanti software (GALANTE & COLLI, 2007) was used. A normal distribution of calcium intake was observed when the data were adjusted for energy according to the residual-nutrient method and corrected to consider intrapersonal and interpersonal variability afterwards. Only one pregnant woman showed a higher intake than the AI (1.000 mg/day), and therefore only this one is considered to present an adequate Ca intake when the reference is the AI. On the other hand, considering that CTx was not increased in relation to the Reference Interval and that 60% of the pregnant women presented hypercalciuria, we can say that Ca balance was due to intestinal absorption and renal resorption rather than bone resorption, thus indicating an adequate Ca intake (612 ±187 mgCa/day).

Orientador: Márcio Zaffalon Casati / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T15:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vale_HugoFelipedo_D.pdf: 1222140 bytes, checksum: faabfb358aea20e9dcec56786e895bc9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos, imunoenzimáticos e microbiológicos de implantes dentais de estágio único instalados em pacientes com histórico de periodontite agressiva, periodontite crônica e saúde, considerando a hipótese de nulidade de que não existe diferença entre os grupos. Foram selecionados pacientes que apresentaram histórico de periodontite agressiva generalizada (PAG) e periodontite crônica generalizada (PCG) com indicação de reabilitação protética implanto suportada. Os pacientes com necessidade de reabilitação unitária foram divididos em 3 grupos: Grupo PAG (n=13): pacientes apresentando histórico de periodontite agressiva generalizada; Grupo PCG (n=18): pacientes com histórico de PCG ; e Grupo Controle (n=14): pacientes sem histórico de periodontite. Todos os implantes foram instalados em estágio único e, após 3 meses, receberam reabilitação com próteses metalocerâmicas unitárias aparafusadas. Profundidade de sondagem, nível clínico de inserção relativo e posição da margem gengival relativo foram avaliados nos implantes no momento da instalação da prótese e 1, 3 e 6 meses após o carregamento. Avaliação radiográfica foi feita no momento 7 dias após a cirurgia, na instalação da prótese e 6 meses após o carregamento protético. Avaliação microbiológica foi realizada imediatamente após a instalação da prótese, 1, 3 e 6 meses após, por meio de PCR real time, determinando a quantidade dos microrganismos A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis e, T. forsythia Avaliação imunológica foi realizada utilizando o sistema LUMINEX/MAGPIX® com amostras de fluido periimplantar coletado aos 15 dias após a cirurgia, imediatamente após a instalação da prótese e 6 meses após o carregamento protético, avaliando as concentrações de IL1?, IL4, IL6, IL8, IL10, TNF?, INF? e GM-CSF, além de marcadores de osteogênese e osteoclasia (OPG e RANKL). Não foram observadas diferenças entre os perfis de pacientes quanto aos parâmetros clínicos e radiográficos ao redor dos implantes em nenhum dos períodos de avaliação. No primeiro mês após a instalação das próteses verificou-se maior concentração de Aa (p<0,05) no grupo PAG. Seis meses após a instalação das próteses o grupo Controle apresentou menores concentrações de Pg (p<0,05). A avaliação dos marcadores de osteogênese/osteoclasia indicou alta concentração de OPG no grupo controle no momento da instalação da prótese. Ainda neste grupo, alta concentração de IL4 foi observada 6 meses após o carregamento dos implantes. Dentro das limitações deste estudo, pode ser concluído que 6 meses após a instalação das próteses, não há diferenças clínicas nem adicional reabsorção óssea em implantes dentários instalados em pacientes com histórico de doença periodontal / Abstract: The aim of this study was to evaluate clinical, microbiological, and immunological patterns of dental implants placed in healthy, partially edentulous, patients (HH), and those with a history of aggressive (HGAgP) or chronic periodontitis (HGCP), considering the null hypothesis that there are no difference between groups. This prospective, parallel, controlled trial enrolled 45 patients (HGAgP, n = 13; HGCP, n = 18; HH, n = 14) followed up from implant insertion until six months after implant loading. Plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD), relative clinical attachment level (rCAL), gingival margin position (rGMP), implant stability (IS), and radiographic marginal bone resorption (RMBR) around implants were evaluated. Porphyromonas gingivalis (Pg), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), and Tannerella forsythia (Tf) levels were evaluated by real-time PCR. Also, IL-1?, TNF?, IL-6, IL-8, IFN?, GM-CSF, IL-4, IL-10, RANKL, and OPG levels were evaluated with the LUMINEX/MAGPIX® platform. No inter-group differences were observed around dental implants when the clinical parameters (PI, BOP, PD, rCAL, rGMP, IS, and RMBR) (p > 0.05) were considered at any evaluation period. At the first month after implant loading, those in the HGAgP group presented a higher level of Aa (p < 0.05). Six months after implant loading, those in the HH group presented a lower level of Pg (p < 0.05). The immunologic evaluation showed higher values of OPG in those in the HH group at implant loading, and a higher IL-4 level in those in the HH group six months after implant loading. It can be concluded that, after six months of implant loading, despite some micro- and immunological differences, there are no clinical differences or additional RMBR around implants placed in patients with a history of periodontal disease / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Gilson Cesar Nobre Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T03:41:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_MyrellaLessio_D.pdf: 7863585 bytes, checksum: 6484dfc8b0f427513cefc0ed74f00801 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Periodontite é a doença multifatorial que envolvem interações entre algumas espécies bacterianas, como Porphyromonas gingivalis W83 e células do hospedeiro. Levando a uma resposta imuno-inflamatória que causa a destruição do tecido ósseo e gengival Neste contexto, fármacos com a habilidade de modular este processo imuno-inflamatório podem auxiliar no tratamento da doença periodontal (DP). A doxiciclina em dose subantimicrobiana (DDS), apresenta propriedades anti-inflamatórias pela sua atuação em algumas vias da inflamação. No entanto, ainda é discutido o efeito desta terapia dobre a susceptibilidade bacteriana por longo tempo. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos da DDS como um modulador da resposta imuno-inflamatória do hospedeiro na DP induzidas em ratos e avaliar a susceptibilidade da P. gingivalis cultivadas com DDS por longo tempo. A DP foi induzida em ratos Wistar machos (SPF) submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores foram randomizados e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo/experimento): 1) grupo controle: ratos sem ligadura e sem tratamento; 2) grupo ligadura: ratos com ligadura e tratados com solução NaCl 0,9 %) e 3) grupo ligadura + DDS: ratos com ligadura e tratados com a DDS (5 mg/kg/dia). No tecido gengival, extraídos de animais tratados por 3 dias, foram avaliadas as expressões gênicas de TNF-'alfa' IL-1' beta', IL-17 e PAR2 através de RTPCR. As mandíbulas dos ratos tratados por 15 dias foram usadas para mensuração da reabsorção óssea alveolar (coradas com Hematoxilina e Eosina) e da quantidade de fibras colágenas (coradas com Picrosirius- Vermelho). Para a análise microbiológica, a P. gingivalis (ATCC BAA-308) foi cultivada por 3 meses (45 gerações) em meio de cultura contendo 0,4 ug/mL de DDS e avaliada por meio de concentração inibitória mínima (CIM) para Amoxiciclina, Doxiciclina e Metronidazol. A DDS inibiu significativamente os níveis de RNAm do tecido gengival para os IL-1' beta', IL-17, TNF-'alfa' e PAR2 (P<0,05, ANOVA, teste Tukey). Além disso, a DDS reduziu a perda óssea quando comparada ao grupo ligadura (P<0,05 ANOVA, teste Tukey) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P>0,05). Na análise da susceptibilidade de P. gingivalis a DDS não apresentou resistência multi-antibiótica para esta cepa, entretanto, houve uma alteração nos valores de CIM para todos antibióticos testados com a P. gingivalis crescida ao longo do tempo. Em conjunto, os dados demonstram que a DDS diminuiu a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a degradação de colágeno no modelo utilizado de DP, indicando sua atividade como moduladora da resposta do hospedeiro na DP. A alteração microbiana com o uso contínuo e de longo período de DDS modificou a sensibilidade da P. gingivalis, entretanto não desenvolveu resistência antibiótica a doxiciclina / Abstract: Periodontitis is a multifactorial disease involving interactions between some bacterial species, as Porphyromonas gingivalis W83, and host cells. Leading to an immune-inflammatory response that causes the destruction of bone and gingival. In this context, drugs with the ability to modulate immuno-inflammatory process that may aid in the treatment of periodontal disease (PD). Doxycycline dose subantimicrobiana (DDS) has anti-inflammatory properties because of its role in some pathways of inflammation. However, it is still discussed the effect of this therapy fold the bacterial susceptibility for a long time. The objective of this study was to analyze the effects of DDS as a modulator of the immune-inflammatory response in the host DP induced in rats and to evaluate the susceptibility of P. gingivalis grown with DDS for a long time. The DP was induced in male Wistar rats (SPF) submitted of ligature around the first molars and divided into three experimental groups (n = 10 animals/group/experiment): 1) control group: rats without ligature and without treatment; 2) ligature group: rats with ligature and treated with 0.9% NaCl solution and 3) ligature + SDD group: rats with ligature and treated with SDD (5 mg/kg/day). In gingival tissue, extracted from animals treated for 3 days, we assessed the gene expression of TNF-'alpha', IL-1'beta', IL-17 and PAR2 by RT-PCR. The jaws of rats treated for 15 days were used for measurement of alveolar bone resorption (stained with Hematoxylin and Eosin) and collagen fibers (stained with Picrosirius-Red). For microbiological analysis, P. gingivalis was grown for 3 months (45 generations) in culture medium containing 0.4 ug/mL of SDD and evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC). SDD significantly inhibited mRNA levels of the gingival tissue for IL-1'beta', IL-17, TNF-'alpha' and PAR2 (p<0.05, ANOVA, Tukey test). In addition, SDD has reduced bone loss when compared to the ligature group (p<0.05 ANOVA, Tukey test) and also maintained the percentage of collagen fibers at levels similar to the control group (p> 0.05). In the analysis of susceptibility to P. gingivalis SDD showed no multi-antibiotic resistance for this strain, however, there was a change in the MIC values for all antibiotics tested with P. gingivalis growth to long-time. Together, these data demonstrate that SDD reduced the inflammatory response, bone resorption and collagen degradation in PD, indicating its activity as a modulator of the host response in PD. Furthermore, SDD affected the sensitivity of P. gingivalis, however not developing antibiotic resistance with 3 months therapy / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Rafael Leonardo Xediek Consani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:41:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_TalesCandidoGarciada_M.pdf: 2333954 bytes, checksum: ce4e52cbe9b7265639ebc9bf9cbdb40b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O processo de reabsorção do osso mandibular e do peri-implantar promove desadaptação das bases protéticas, causando aumento das tensões geradas pelas próteses e componentes, exacerbando a reabsorção óssea. Com o intuito de readaptar bases protéticas ao rebordo subjacente, o uso de reembasadores tem sido indicado. O objetivo neste trabalho foi analisar pelo método de Elementos Finitos as tensões no osso peri-implantar, rebordo posterior e componente protéticos em overdenture com reabsorção óssea simulada (na instalação da prótese, 3, 5 e 10 anos de uso) e reembasamento com materiais permanentes macio ou rígido. Foi utilizado software específico para modelagem (SolidWorks 2010) para a geração tridimensional dos componentes protéticos e base da mandíbula. Foram gerados quatro modelos mandibulares, que simulavam as perdas ósseas do rebordo posterior e peri-implantar, de acordo com os tempos avaliados neste estudo e com ou sem o uso de reembasadores macios ou rígidos. Os modelos por Elementos Finitos foram obtidos com a exportação dos modelos sólidos para software específico de simulação mecânica (ANSYS Workbench 11), com carga de 100 N na região do primeiro molar direito. O modelo que simula o momento da instalação da prótese gerou os menores resultados de tensão para todos os componentes e situações analisadas. A distribuição de tensões nos modelos com 3, 5 e 10 anos de reabsorção foi semelhante quando se avaliou a localização das tensões; entretanto, maior acúmulo foi verificado nos componentes protéticos e tecido ósseo, sempre ao lado de aplicação da carga. Quanto mais tempo de reabsorção, maiores eram os valores de tensão gerados, com influência dos materiais reembasadores que diminuíram os valores tensionais. Materiais reembasadores rígidos promoveram melhor distribuição e menores valores de tensão que reembasadores macios, sendo mais eficientes que os modelos sem material reembasador. Conclui-se que: a) o aumento da reabsorção dos rebordos posterior ou peri-implantar promoveu aumento de tensões tanto nos componentes protéticos como no tecido ósseo; b) o uso de reembasadores macio ou rígido atenuou as tensões geradas, qualquer que fosse à resiliência do material; c) o reembasador rígido foi mais eficiente na diminuição das tensões quando comparado ao reembasador macio / Abstract: The process of ridge posterior and peri-implant bone resorption promotes misfit between overdenture base and mandibular ridge, which culminates in increased stresses generated by prostheses and their components, exacerbating bone resorption. Relines have being used in order to readapt the prosthetic bases. This three-dimensional finite elements method study aimed to evaluate the effect stress of a overdenture in models that simulated bone resorption (in installing prosthesis, 3, 5 and 10 years of use) and reline materials (soft or hard) on stress distribution in posterior ridge, surrounding bone and implant prosthetic components. Through the computer aided design software (SolidWorks 2010), three-dimensional prosthetic components were built and jaw models from images of the mandible computerized tomography. Four models were generated simulating mandibular bone loss according to times and use of hard or soft relines. These geometric models were obtained through export to the specific mechanical simulation software (ANSYS Workbench 11), and subjected to a load of 100 N in the first right molar region. The lowest observed values were in the period of installation prosthesis for all components and situations. The stress distributions in models with 3, 5 and 10 years of resorption were similar considering the location of tensions; however, the stress concentration increased values in the prosthetic components and bone, always on the side of load application. The longer resorption, the higher stress values were generated, with the Influence of reline materials. Hard reline materials promoted better distribution and lower stress values than soft reline, demonstrating models with more effectiveness than in with no reline. It can be concluded that: a) the power increase of posterior ridge or peri-implant bone resorption promotes increased tensions in the prosthetic components in the bone tissue, b) the use of soft or hard relines, minimized the generated tensions, regardless the stuff resilience, c) the hard reline was more efficient in reducing tensions when compared to soft reline / Mestrado / Materiais Dentarios / Mestre em Materiais Dentários

Orientador: Pedro Paulo Chaves de Souza / Resumo: A periodontite é resultado do desequilíbrio entre o biofilme bacteriano e a resposta imune do hospedeiro. Componentes bacterianos, como o lipopolissacarídeo (LPS) e as lipoproteínas, são reconhecidos pelo sistema imune e desencadeiam a produção de citocinas que auxiliam no combate à infecção, mas também induzem a destruição tecidual. A participação do LPS na destruição óssea já é bem estabelecida, porém o papel das lipoproteínas na periodontite permanece carente de investigação. Na periodontite, citocinas pró-inflamatórias participam do processo de destruição do tecido ósseo. Neste processo, são secretadas também citocinas osteoprotetoras. Dentre elas, a interleucina 4 (IL-4) é reconhecida pela propriedade de inibir a produção citocinas pró inflamatórias como IL-1, IL-6 e TNF-α. O papel protetor de IL-4 na osteoclastogênese e na doença periodontal induzida por lipoproteína ainda não foi investigado. Nosso estudo foi divido em dois capítulos. No capítulo 1, hipotetizamos que a lipoproteína sintética Pam2CSK4 (PAM2) poderia induzir a reabsorção óssea periodontal. Para isso, foram utilizados camundongos C57bl/6, que receberam injeções a cada 2 dias, por 24 dias, do veículo, LPS de Escherichia. coli ou PAM2, entre o primeiro e segundo molar superior. Após o período experimental, os animais foram eutanasiados e destinados à análise por microCT, análise histológica e imunohistoquímica para marcação dos osteoclastos. A PAM2 apresentou a capacidade de induzir a perda óssea alveolar, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The pathogenesis of periodontitis is a result of imbalance between the bacterial biofilm and the host immune response. Bacterial components such as lipopolysaccharide (LPS) and lipoproteins, activate the immune system leading to periodontal distruction. The participation of LPS in periodontal bone destruction is well established, but there is a lack of information about the role of lipoproteins in periodontitis. In the pathogenesis of periodontitis, these molecular patterns are recognized by host immune system and trigger the production of cytokines that participate of antimicrobial response, but also induce tissue destruction. On the other hand, antinflamatory cytokines produced by Th2 cells, such as IL-4, have an osteoprotective phenotype. The role of IL-4 in lipoprotein-induced periodontitis was not yet investigated. Thus, this thesis was divided in two chapters. In chapter 1, we investigated the role of lipoproteins in the pathogenesis of periodontitis in mice. In this study, we hypothesized that the synthetic lipoprotein Pam2CSK4 (PAM2) can induce periodontal bone resorption. C57bl / 6 mice received bilateral injections every other day for 24 days of: vehicle, Escherichia coli LPS or PAM2, between the first and second upper molars. Twenty-four hours after the last injection, the mice were euthanized and the jaw bones were scanned for micro computed tomography, decalcified and processed for histological analysis and stained for tartrate-resistant acid phosphatase, phenoty... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor