Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La regeneración ósea a es un procedimiento requerido en odontología en técnicas quirúrgicas reconstructivas, implantología y en periodoncia. En los últimos años la Ingeniería Tisular ( IT ) se encuentra centrada en el desarrollo de terapias más eficiente para la regeneración de tejido óseo. La IT es una disciplina que se basa en tres elementos principales; a ) señales bioactivas, ( b ) Andamio ( scaffold ) y ( c) Células madre. Un requerimiento fundamental de la IT es el de disponer de fuentes apropiadas de células madres para el desarrollo de nuevas terapias, así como el de conocer las propiedades de estas células para cada aplicación específica. Las células madre son células no diferenciadas que tienen la capacidad de auto renovarse, diferenciarse a multilinajes de células individuales y regenerar en vivo diferentes tejidos. Últimamente se ha generado el interés de aislar células madre de origen dental, donde se han identificadas MSCs en pulpa dental ( DPSCs) , dientes deciduos exfoliados ( SHED) , folículo dental, papila apical radicular ( SCAP ) y ligamento periodontal ( PDLSCs) . Sin embargo, hasta el momento no se conocen estudios que comparen y demuestren diferencias en la habilidad de estas células de distinto origen, para diferenciarse hacia el linaje óseo; ni tampoco que indiquen qué técnica de aislamiento podría ser más apropiada para este propósito. El objetivo del presente estudio consiste en aislar y comparar la capacidad de diferenciación osteogénica de las DPSCs y PDLSCs, utilizando para ello dos técnicas de aislamiento, explante y digestión enzimática. Materiales y Métodos: Se recolectaron terceros molares impactados de pacientes sanos, previa firma de consentimiento informado y se les extrajo el ligamento periodontal y pulpa dental. Ambos tejidos fueron cultivados y aislados mediante el método de digestión enzimática y explante. Se analizó la viabilidad mediante la técnica exclusión azul de tripán y ensayo MTS. La capacidad de diferenciación osteogénica se evaluó a través de la medición de la actividad de fosfatasa alcalina, depósitos de matriz mineralizada y expresión de genes tempranos. Adicionalmente las células fueron sometidas a un periodo de criopreservación donde posteriormente se evaluó su viabilidad. 1 Resultados Para DPSCs y PDLSCs se obtuvieron valores de viabilidad cercanos al 90%, sin diferencia significativas entre ellas. Al evaluar la viabilidad celular a tiempos determinados, las DPSCs- digestión obtiene los mayores valores en cuanto a la cantidad de células al finalizar el cultivo. Los resultados en relación a la diferenciación osteogénica muestran mayores niveles de actividad de ALP y mayores depósitos de matriz mineralizada para las DPSCs, analizados con rojo alizarín y microscopía SEM. Ambos tejidos son capaces de mantener una viabilidad adecuada luego de un proceso de criopreservación. Conclusiones Células osteoprogenitoras aisladas de pulpa dental, presentan mejores propiedades de diferenciación al linaje óseo, comparado con las células madre obtenidas de ligamento periodontal. Las DPSCS-digestión aparecen como una alternativa promisoria para aplicaciones en ingeniería de tejidos orientada a la regeneración ósea en odontología.

En la presente tesis doctoral se ha establecido y caracterizado un modelo in vitro de lesión excitotóxica por glutamato basado en cultivos organotípicos de médula espinal de rata postnatal de 7-8 días. La optimización del medio de cultivo sin suero permite mantener los explantes más de 15 días in vitro con unas características en cuanto a la citoarquitectura y al número de motoneuronas similares a las obtenidas con medio con suero. Sobre los explantes se han establecido dos modelos de lesión; una mecánica y otra excitotóxica. Para establecer la lesión excitotóxica se han utilizado diferentes concentraciones de glutamato que provocan una respuesta dependiente de dosis. Esta respuesta se ha evaluado cuantificando la cantidad de homodímero-1 de etidio, un marcador fluorescente que es captado por las células dañadas, mediante el análisis de imágenes y cuantificando el número de motoneuronas supervivientes. Asimismo, se ha caracterizado que esta lesión está mediada principalmente por el receptor de glutamato NMDA. Las motoneuronas en desarrollo postnatal sufren un cambio en las subunidades NR2A y NR3B el cual se mimetiza en los explantes organotípicos en nuestras condiciones de cultivo. Una vez estandarizado el modelo de lesión excitotóxica se ha utilizado para evaluar el efecto neuroprotector de diversos fármacos como son la eritropoyetina, el riluzol, el rolipram, el valproato, la región c terminal de la toxina tetánica y la metilprednisolona (ver Trabajo I). Este modelo ha sido de utilidad asimismo para analizar los mecanismos moleculares de algunos de estos fármacos como el FK506 y el ligando PRE084 del receptor sigma 1. El análisis ha permitido establecer que el FK506 preserva el parénquima tisular frente a la lesión, efecto que es favorecido por la modulación de los niveles de la chaperona Hsp70 que el FK506 produce sobre la microglia (ver Trabajo II). Por último, se ha podido observar que el PRE084 ejerce un efecto neuroprotector e inductor de la elongación neurítica en las motoneuronas del explante, y que dichos efectos son mediados por la PKC aunque no por la activación de CREB (ver Trabajo III). / We have established and characterized an in vitro model of excitotoxic injury by glutamate based on organotypic cultures of spinal cord from postnatal rats of 7-8 days. The optimized culture medium without serum allows the culture of the explants over 15 days in vitro. The cultures maintain a cytoarchitecture and a motoneuron number similar to those observed with the serum-containing medium. On the explants we have established a mechanical injury model and an excytotoxic model. On the excytotoxic injury we have used different glutamate concentrations with a doses-dependent response that was evaluated by the image analysis of the EthD (Ethidium homodimer-1) uptake, and the quantification of the number of surviving motoneurons. We observed that this lesion is mainly mediated by the NMDA receptor. The spinal cord explants underwent a NR2A and NR3B subunit change similar to that observed on the rat postnatal development. The established in vitro injury model of excitotoxic lesion has been used to assess the neuroprotector effect of different drugs like erithropoyetin, riluzole, rolipram, valproate, the tetanus toxin c-terminus, and methilprednisolone (see section I). This model has been useful to analyze the molecular mechanisms of FK506 and the ligand of the sigma receptor 1, PRE084. We observed that FK506 protects the tissular parenchyma against the glutamate excitotoxic injury thanks to the modulation of Hsp70 levels induced by FK506 on the microglia (see section II). We observed that PRE084 has a neuroprotector effect and that it is an inductor of the neurite elongation on the explant motoneurons. The aforementioned effects are mediated by the PKC, although not by the activation of CREB (see section III).

El objetivo del presente trabajo es evaluar injertos de hueso de distintos orígenes y formas, y estudiar el efecto de los mismos en la regeneración ósea. Se utilizaron 60 ratas macho, de cepa Fisher 344 (F344/N), originarias del Instituto Nacional de Salud de los EE.UU., y producidas en Bioterio de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNLP, endocriadas, libres de patógenos específicos (SPF), de 16 semanas de edad y de 500 gramos de peso. Los animales fueron divididos en 6 grupos de 10 cada uno y operados bajo anestesia general con ketamina/xilacina 75 mg/kg + 10 mg/kg por vía IM. Se les realizó en el fémur una perforación de 3 mm de ancho por 9 mm de largo por 3 mm de profundidad. Al grupo 1 se le injerto hueso autólogo obtenido con un filtro, al grupo 2 hueso humano en partículas, al grupo 3, hueso humano en forma de gel, al grupo 4 hueso bovino en partículas, al grupo 5 fosfato tricálcico en esferas y el grupo 6 no recibió tratamiento, quedando como control. Los animales permanecieron en la sala donde fueron intervenidos durante las primeras 24 hs a temperatura constante de 28 o C, y luego de ese período pasaron a ser alojados en el pabellón de animales de experimentación del Bioterio de la FCVUNLP. Como complemento en el postoperatorio recibieron Ácido Acetilsalicílico y alimento balanceado. A los 30 los animales días fueron sacrificados y se realizaron los preparados para microscopía. Las muestras fueron digitalizadas y se evaluó la superficie de nuevo hueso, es decir el hueso regenerado, dentro del defecto. La segmentación y el cálculo de superficie se realizó en base al color de la tinción (H.E) y la calibración de la imagen con respecto a una medida patrón, mediante un analizador digital de imágenes. El modelo experimental utilizado ha funcionado correctamente y no han presentado mayores inconvenientes en su ejecución. Los injertos utilizados no generaron respuestas adversas en ninguno de los casos. La mayor cantidad de regeneración fue obtenida con el hueso autólogo, seguida por el fosfato tricálcico, el hueso bovino, el hueso humano en partículas, el hueso humano en gel y por último el defecto control. La mejor calidad ósea, en cuanto a su patrón arquitectónico, se observo con el fosfato tricálcico y el hueso autólogo, seguidas por el hueso bovino y el humano en partículas, luego el humano en gel y por último el defecto control. Estos resultados ratifican al hueso autólogo como el patrón de referencia en el tratamiento de grandes defectos óseos. La obtención con el filtro colector usado aquí aparece como menos traumática, con respecto a otras metodologías. El fosfato tricálcico ha mostrado un excelente comportamiento como material de injerto, no solo por la regeneración obtenida, sino fundamentalmente por la excelente arquitectura lograda. Los huesos humano y bovino en partículas han mostrado un comportamiento muy similar, con una buena cantidad de regeneración ósea, aunque con una menor calidad que los casos anteriores. El hueso humano en forma de gel, no logró la regeneración completa del defecto, observándose una gran cavidad residual. Sin embargo en la zona en la que alcanzo a inducir nuevo hueso, este es de una densidad importante, lo cual lo situaría para uso en defectos pequeños o como adyuvante en la consolidación de fracturas. Dentro de los límites del presente trabajo, se puede concluir que el hueso autólogo debería ser usado siempre que se pueda. En caso necesario de recurrir a un sustituto, se debería considerar al fosfato tricálcico como de primera elección. En una tercera línea podrían usarse los huesos particulados tanto humano como bovino. El hueso humano en forma de gel no debería usarse en el tratamiento de grandes defectos.

La regeneración es un proceso dinámico basado en la incorporación de nuevos individuos a medida que otros desaparecen como resultado de la mortalidad natural. Sus fases comprenden la producción de semillas, la dispersión y la germinación. Nothofagus pumilio (Poepp. et Endl.) Krasser es considerada una especie de tolerancia media, ya que la regeneración presenta una tolerancia a la luz, no puede reproducirse ni sobrevivir por largos períodos bajo una alta cobertura y por sus habilidades de colonización. La disminución de la cobertura forestal, tras el aprovechamiento en bosques productivos sin intervención, produce una modificación significativa de las características micro-climáticas, que repercuten en la producción de semillas, la instalación de la regeneración y el crecimiento en altura. Este trabajo de Tesis evalúa la relación entre diferentes coberturas forestales remanentes luego de la intervención de bosques de N. pumilio y la producción de semilla y dinámica de la regeneración en Tierra del Fuego, Argentina. Los métodos utilizados fueron los de retención dispersa (remanente de 30 m2 .ha-1 de área basal en árboles dominantes uniformemente distribuidos) y retención variable (porciones remanentes de cubierta forestal luego del aprovechamiento rodeada por árboles dominantes uniformemente distribuidos). El objetivo general de esta tesis fue simular la producción de semilla, la incorporación, la supervivencia y el crecimiento en altura en dos métodos de regeneración para determinar su factibilidad. La estabilidad de la estructura forestal post aprovechamiento se encuentra relacionada con los vientos dominantes de la región, donde los volteos se produjeron principalmente en el primer año posterior a la corta en árboles con daños por aprovechamiento y en bordes de agregados que no presentaron protección dada por árboles remanentes en forma dispersa. La producción de las semillas es variable entre las distintas coberturas estudiadas, encontrándose marcadas variaciones anuales. Respecto de las zonas con coberturas inferiores al 30%, la cantidad de semillas encontradas fue muy baja, correspondiendo sobre todo a semillas vanas (más livianas) y no viables. La dispersión de semillas es en forma asimétrica debido a la distribución de los vientos en el período de máxima dispersión, siendo más abundante en el sentido opuesto al viento dominante. La distancia de dispersión calculada en este estudio sugiere un amplio rango de espaciamiento entre árboles para el aporte de semillas, siendo necesario para aportar un número significativo de semillas la ocurrencia de un pico en la producción de semillas. La regeneración post cosecha de N. pumilio reaccionó favorablemente a la apertura del dosel. La incorporación de nuevas plántulas estuvo relacionada con la disponibilidad de semillas, la viabilidad de las mismas, la cobertura forestal y las condiciones climáticas. La densidad de renovales encontrada en todos los tratamientos sobrepasa ampliamente la cantidad mínima para perpetuar el bosque. Las coberturas forestales comprendidas entre los 30 y 70% tienen la ventaja de proveer de árboles semilleros y adecuada protección para las plántulas que se están instalando, mientras que coberturas entre 35 y 45% optimizan el crecimiento en altura de renovales de edades avanzadas. Los distintos gradientes de cobertura observados para los distintos métodos influyen en la respuesta de la regeneración, donde ambos sistemas presentan una dinámica de la regeneración suficiente para regenerar el bosque. Es importante mantener la estructura forestal remanente al aplicar un método de regeneración para la protección de la regeneración y para el aporte de semillas hasta el establecimiento de la regeneración.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Forestal

Se determinó las características de la estructura dasométrica y poblacional en bosques de las especies Polylepis canoi y Polylepis rodolfo-vasquezii en la Región Junín, 2016. El método utilizado fue descriptivo-transeccional, de manera que la recolección de datos fue en un solo momento, analizándolos y describiendo el estado actual de los bosques. Se midieron parámetros dasometricos determinando la clasificación diamétrica, altimétrica, densidad, cobertura y distribución espacial para los arboles de las especies: P. rodolfo-vasquezii y P. canoi. La información empleada fue generada a partir de las salidas de campo entre Julio y Diciembre del 2016 en parcelas de 100m2. Los bosques de la especie P. rodolfo-vasquezii se caracterizaron por presentar mayor cantidad de individuos con DAP menores a 15cm, alturas promedio de 2.5m, densidades entre 11–30 ind/ parcela y cobertura entre 41%-77%. Respecto a la especie Polylepis canoi, los árboles se caracterizan por presentar DAP mayores a 15cm, alturas entre 5–7m, densidades entre 4–8 ind/parcela, coberturas promedio 77%-156%.

Tesis para optar el titulo de Doctor en Farmacología / Se ha propuesto el empleo de factores solubles derivados de plaquetas con el objeto de promover la reparación de tejidos. A pesar que diversos estudios han evaluado la respuesta de células gingivales y periodontales a fracciones derivadas de plaquetas, existe un fuerte debate acerca de los efectos ejercidos por estos factores sobre respuestas celulares relacionadas con la reparación tisular. En la presente tesis hemos evaluado la respuesta de cultivos primarios de fibroblastos gingivales de origen humano (FG) estimulados con Plasma rico (PRP) y pobre en plaquetas (PPP). Se evaluaron diferentes respuestas celulares que incluyen la contracción de geles de colágeno, migración celular, diferenciación miofibroblástica, producción de moléculas de matriz extracelular (MEC) y de enzimas proteolíticas. Para la contracción de geles se utilizaron cultivos tridimensionales de fibroblastos incorporados en colágeno en presencia de inhibidores de mateloproteasas de matriz y de la polimerización de actina. La producción de moléculas de matriz y de proteasas fue evaluada mediante Western-blot. La actividad de la GTPasa RhoA fue evaluada mediante un ensayo de “pull-down”. La distribución de actina y de contactos focales fue analizada mediante inmunofluorescencia. Los niveles de TGF-beta1 fueron cuantificados mediante ELISA. Tanto el PRP como PPP estimularon la contracción de geles de colágeno, proceso que fue revertido por los inhibidores de MMPs y de la polimerización de actina. PRP y PPP estimularon los niveles de MT1-MMP y TIMP-2, la activación de RhoA y la remodelación del citoesqueleto de actina. Ambas formulaciones estimularon la migración celular evaluado mediante tres ensayos funcionales tales como la migración desde explantes de tejido gingival, la migración en nido y en sistemas bi-camerales. PRP y PPP estimularon la diferenciación miofibroblástica, medida a través de la producción de α-SMA, Fibronectina EDA, colágeno tipo I y periostina. A pesar que TGF-beta1 se encontró más concentrado en PRP en comparación con PPP, la via de señalización Smad fue similarmente activada por ambos preparados. El presente estudio muestra que los factores solubles derivados de PRP y PPP pueden ejercer respuestas celulares similares compatibles con la promoción de la reparación tisular gingival. Más aun, estos resultados sugieren que PPP podría tener una acción terapéutica que debería ser estudiada en el futuro. / Platelet derived soluble factors have been proposed as a therapeutic agent to promote tissue repair. Although several studies have assessed the response of gingival and periodontal cells to platelet derived fractions, there still strong debate about the specific role played by these agents on cell responses involved in wound healing. In the present thesis we have evaluated the response of primary cultures of human gingival fibroblasts (GF) stimulated with Platelet rich (PRP) and poor plasma (PPP). Different cells responses including collagen matrix contraction, cell migration, myofibroblastic differentiation, production of matrix molecules and proteolytic enzymes were evaluated. Collagen matrix contraction was assessed using fibroblasts-populated collagen lattices in the presence of matrix metalloproteinases and actin polymerization inhibitors. Production of matrix molecules and proteinases was assessed through Western-blot. RhoA activity was evaluated by means of a pull-down assay. Actin distribution and focal adhesions were assessed through immunofluorescence. TGF-beta1 levels were quantified through ELISA. Both PRP and PPP stimulated gingival fibroblasts-populated collagen gel contraction. Moreover, Ilomastat and cytochalasin D inhibited this response. PRP and PPP stimulated MT1-MMP and TIMP-2 production, RhoA activation and actin cytoskeleton remodeling. Both formulations stimulated cell migration as assessed through gingival tissue explants immersed within collagen gels, nested cell migration assays and Transwell migration experiments. PRP and PPP stimulated myofibroblastic differentiation determined through α-SMA, EDAFN, type I collagen and periostin production. Although TGF-beta1 was more concentrated in PRP when compared to PPP, the Smad pathway was similarly activated by both formulations. The present study shows that soluble factors derived from PRP and PPP may exert a similar cellular response compatible with the promotion of wound remodeling in gingival fibroblasts. Moreover, our results suggest that PPP may be studied as a useful therapeutic agent to modulate gingival tissue healing.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El tejido óseo está constituido por células especializadas, matriz orgánica y fase mineral. Es dinámico ya que está en constante renovación y es uno de los pocos tejidos del organismo capaz de regenerar tras una lesión. Por otro lado, existen patologías óseas como el Radius curvus y la displasia de cadera, entre otras, en cuyos tratamientos se requiere realizar una ostectomía, es decir, retirar un trozo de hueso con el fin de retardar la regeneración ósea. Pero, estos tienen la desventaja de ser muy invasivos, convirtiéndose en procedimientos agresivos, aumentando las posibilidades de infección, inflamación, dolor y lenta recuperación del paciente. Con la finalidad de evitar el uso de este método y mejorar las técnicas quirúrgicas actualmente utilizadas para solucionar estas patologías osteoarticulares, se utilizó la membrana de cáscara de huevo de gallina como material inhibidor de la regeneración ósea. La membrana de cáscara de huevo está constituida por colágeno tipo I, V y principalmente por colágeno tipo X, al cual se le atribuye el rol inhibidor de la mineralización. Los resultados de las evaluaciones de los implantes de membrana de cáscara de huevo tanto en tejido subcutáneo como hueso ulnar, indican que la membrana implantada no es reabsorbida ni presenta respuesta a cuerpo extraño hasta por lo menos la octava semana. La reacción inflamatoria y la fibrosis se van incrementando con el transcurso de las semanas hasta producirse reacción de rechazo ya alcanzada la décimo sexta semana. Se observó escasa o nula neoformación ósea en las muestras implantadas. Se sugiere que la membrana de cáscara de huevo es capaz de inhibir la regeneración ósea / PROYECTO FONDAP 11980002

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniera en Recursos Naturales Renovables / La Ecorregión del Bosque Templado Lluvioso Valdiviano es considerada como una ecorregión relevante a nivel mundial debido a su importancia biológica. Sin embargo, los bosques nativos de esta ecorregión han sido históricamente sometidos a disturbios antropogénicos, los que han provocado su degradación progresiva, afectando su funcionalidad, composición y estructura, llevándolo a ser altamente prioritario de recuperar. Debido a lo anterior, es necesario determinar qué zonas son prioritarias para la recuperación de bosque nativo degradado del Bosque Templado Lluvioso Valdiviano para orientar a los organismos encargados del manejo y protección de los bosques nativos, por lo que en esta memoria se determinaron zonas prioritarias para la recuperación de bosque nativo degradado en la Región de Los Ríos, Chile. En primera instancia, se realizó una exhaustiva revisión de criterios ecológicos comúnmente discutidos en la literatura, los cuales fueron seleccionados de acuerdo a su aplicabilidad al área de estudio y a la disponibilidad de coberturas para su espacialización. Posteriormente, tales criterios se valoraron y jerarquizaron mediante la aplicación de cuestionarios a diferentes expertos en ecología y conservación de bosques nativos de la Región de los Ríos. Luego, esta información fue integrada a un modelo de evaluación multicriterio a partir de Sistemas de Información Geográfica, permitiendo generar un mapa semáforo de sitios prioritarios para la recuperación de bosque nativo adulto en la Región de Los Ríos. De acuerdo a los juicios de expertos, los principales criterios ecológicos fueron: riqueza de especies en categoría de conservación, tamaño de la unidad de análisis y riqueza de especies claves. Con los pesos relativos de cada criterio en la EMC se identificaron 31 sitios prioritarios, abarcando una superficie total de 6.582 hectáreas, presentándose la mayor cantidad de unidades de análisis en la comuna de Panguipulli. Finalmente, los sitios identificados proporcionan una primera aproximación para dirigir y evaluar futuras acciones de recuperación. Sin embargo. para que estas acciones sean realmente efectivas, se recomienda incorporar otras dimensiones, tales como la social, económica e institucional, buscando soluciones locales para cada área prioritaria, considerando una estrategia de financiamiento y la dinámica natural del bosque a recuperar.

En el terreno de la Periodoncia y de la Cirugía Oral y Maxilofacial nos encontramos con diferentes defectos óseos como resultado de procesos infecciosos o traumatismos, los cuales van a producir severos problemas funcionales y/o estéticos, que van a precisar de un tratamiento complejo. Durante los últimos años, las aportaciones a ésta materia se han realizado principalmente a través de la combinación de diversos biomateriales ya conocidos, dejando de lado la búsqueda de nuevos materiales que nos den otras alternativas de tratamiento y sobre todo que se encuentren al alcance de los pacientes. Es por esto que en este estudio estamos tratando de introducir la “membrana amniótica liofilizada” como un nuevo biomaterial de uso odontológico. El presente estudio tuvo como objetivo investigar el efecto de la membrana amniótica liofilizada usada como barrera en el proceso de regeneración ósea guiada en tibia de conejos, para los cual se utilizaron 10 conejos raza Nueva Zelanda de 2 a 2.5 Kg y de 4 a 6 meses de edad en los que se crearon defectos circulares de 4 mm de diámetro en la región mas inferior de las extremidades posteriores del conejo (tibia). Se formaron 2 grupos, un grupo control (no se colocó membrana) y 1 grupo de estudio (se colocó membrana amniótica liofilizada como barrera). Los animales fueron sacrificados a las 6 semanas de la cirugía, realizándose un análisis clínico, radiológico e histológico. A las 6 semanas las muestras del grupo control mostró una pobre formación ósea, con una gran parte de tejido graso ocupando la zona del defecto. El grupo de estudio mostró una regeneración ósea completa del defecto (clínicamente) a las 6 semanas. Radiográficamente se observo un cambio significativo del patrón de trabeculado óseo en las muestras del grupo de estudio comparada con el grupo control. Histológicamente se observó que la mayoría de las muestras del grupo de estudio tuvo una continuidad del 100% del defecto con el hueso normal, esto acompañado de la formación de hueso maduro compacto, mientras que en el grupo control la mayoría de las muestras se halló tan solo la presencia de algunos islotes de hueso inmaduro, con una formación moderada de hueso que a lo mucho llenada 1/3 del defecto creado. Podemos llegar entonces a la conclusión que la regeneración ósea fue significativamente mayor en los defectos cubiertos con membrana amniótica liofilizada comparado con las muestras del grupo control en los cuales no se colocó ningún tipo de barrera. / -- In the field of Periodontics and Maxillofacial Surgery, we find many different bone defects as a result of infectious diseases or trauma, which will cause severe functional problems and / or aesthetic, which will require complex treatment. In recent years, contributions to this issue have done mainly through combinations of various biomaterials, but the investigators haven’t looked for new materials to give us a new alternative of treatment and prices available to patients. That's why in this study we are trying to introduce "freeze-dried amniotic membrane" as a new biomaterial for dental applications. The aim of this study was investigate the effect of freeze-dried amniotic membrane used as a barrier in the process of guided bone regeneration in rabbit tibia, for this study was used 10 New Zealand rabbits of 2 to 2.5 kg aged 4 to 6 months in which circular bone defects of 4 mm diameter were created in the lower region of the rabbit hindlimb (tibia). The rabbits were divided in 2 groups, a control group (no membrane was placed) and a study group (freeze-dried amniotic membrane was placed as a barrier). Animals were sacrificed at 6 weeks after surgery, analyzing clinical, radiological and histological study were done. At 6 weeks the control group showed signs of poor bone formation, with a large proportion of adipose tissue occupying the defect area. The study group showed complete bone regeneration of the defect (clinically) at 6 weeks. X-rays reveals a significant change in the pattern of trabecular bone samples in the study group compared with the control group. It was observed Histologically that most of the samples in the study group had a 100% continuity with normal bone defect, this coupled with the compact mature bone formation, whereas in the control group, most samples were found only the presence of some islands of immature bone, with a moderate bone formation that filled at most 1 / 3 the bone defect created. The conclusion is that bone regeneration was significantly higher in the defects covered with freeze-dried amniotic membrane compared with samples from the control group in which we didn’t put any kind of barrier.