Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer de esôfago é uma malignidade altamente freqüente e letal. Uma característica específica das áreas de alta incidência de câncer de esôfago é a grande proporção de duplas mutações no gene TP53, sendo, ao menos uma delas, uma transição G para A em sítios CpG. Essas transições resultam de malpareamentos GT causados pela desaminação espontânea da 5-metilcitosina em ilhotas CpG. A enzima de reparo de DNA Timina-DNA Glicosilase (TDG) é responsável pelo primeiro passo na remoção da timina de malpareamentos GT em CpG. A alta proporção de mutações em sítios CpG em câncer de esôfago das áreas de alta incidência sugere que a via de reparo de DNA iniciada pela TDG pode estar prejudicada. A presença de duplas mutações, sendo ao menos uma delas em CpG, levantou a hipótese de que a primeira mutação no TP53 reduz a atividade da via de reparo iniciada pela TDG, que acarretaria a segunda mutação em sítios CpG. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi analisar o efeito da p53 sobre a expressão e atividade da TDG. Os resultados obtidos mostram que a expressão de TDG é regulada transcricionalmente pela p53 numa gama de linhagens celulares e é induzida pelo dano ao DNA, de forma p53-dependente. Além disto, os resultados apontam um possível papel da proteína p53 ativa na migração nuclear e atividade da TDG. Estes resultados ainda nos levam à conclusão de que o silenciamento de TDG aumenta a sensibilidade à morte celular induzida por MMS quando a p53 é encontrada na forma selvagem, mas não quando esta proteína é mutada, e de que o status mutacional de TP53 parece afetar a expressão de TDG em CEE primários. Juntos esses resultados sugerem que a p53 regula o reparo de DNA mediado pela TDG e que a inativação de p53 em células tumorais pode contribuir para a aquisição de um mutator phenotype. / Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is a highly frequent and fatal malignancy in the world. A peculiar characteristic of the high incidence areas of esophageal cancer is the large proportion of double mutations in TP53 gene, being, at least one of them, a G to A transition at CpG sites. These transitions result from GT mismatches caused by the spontaneous deamination of 5-methylcytosine at CpG sites. The DNA repair enzyme Thymine-DNA Glycosylase (TDG) is responsible for the first step in the removal of the thymidine from the GT mismatches at CpG sites. The high proportion of mutations at CpG sites in esophageal tumors in the high incidence areas suggests that the DNA repair pathway initiated by TDG might be impaired. The large number of double mutations, with one being at a CpG site, raised the possibility that the first mutation in TP53 reduces the activity of the TDG base excision repair pathway, increasing the chance of a second mutation event at a CpG site. In this way, the aim of this work was to analyze the effect of p53 on the expression and activity of TDG. The results achieved show that TDG expression is regulated by p53 in a variety of cells lines at the trancriptional level and induced by DNAdamage in a p53-dependent manner. Furthermore, these results point out a possible role of active p53 in the nuclear migration and activity of TDG. The results further support the notion that TDG silencing increases the sensitivity to cell death induced by Methylmethane sulphonate when p53 is found in a wild-type, but not in a mutant form, and that TP53 mutation seems to affect TDG expression in primary ESCC. Together, these results suggest that p53 regulates TDG-mediated repair and that p53 inactivation in cancer cells may contribute to a mutator phenotype through loss of TDG function.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-15T21:32:04Z No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-19T22:23:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T22:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) Previous issue date: 2018-01-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) resulta de processos de descontroles de eventos celulares provocados por mutações decorrentes de agentes genotóxicos, o que pode levar, dentre outros fatores, à perda de controle do processo de proliferação celular, sendo este considerado um dos precursores do câncer oral. A busca por biomarcadores para o CCEO constitui alvo de várias pesquisas, dentre as quais destacam-se proteínas de reparo do DNA como a XRCC1 e APE1 e proteínas do ciclo celular como p53 e Ki67. Assim, o objetivo desta pesquisa foi analisar a expressão imunoistoquímica das proteínas de reparo APE1, XRCC1 e das proteínas envolvidas no ciclo celular p53 e ki67, associando-as entre si e com parâmetros prognósticos clínicos e histopatológicos, em carcinoma de células escamosas de língua oral (CCELO), visando contribuir para o melhor entendimento da participação dessas proteínas no desenvolvimento desta neoplasia. A expressão imunoistoquímica de APE1 e XRCC1 foi avaliada de forma semiquantitativa e a de p53 e ki67 de forma quantitativa, em 58 casos de Carcinoma de células escamosas de língua oral (CCELO). Os dados clínicos foram coletados nos prontuários médico de cada paciente e a gradação histopatológica de Brandwein-Gensler efetuada para cada caso. Para a análise estatística foram realizados os testes de Qui-quadrado e Exato de Fisher e adotou-se significância de p<0,05. A maioria dos casos apresentou alta imunoexpressão para APE1 (n = 36; 62,1%), assim como para XRCC1 (n = 38; 65,5%). Já para as proteínas Ki67 e p53, houve uma distribuição igual quando os casos foram categorizados em baixa e alta expressão (n = 29, 50%). A imunoexpressão de XRCC1 foi significativamente maior nos casos de lesão em estágio inicial I e II (n = 23; 62,2%) em relação aos estágios avançados III e IV (n=16, 80%, p = 0,05). A imunoexpressão de p53 foi significativamente maior nos casos de lesão em estágio avançado (n = 19; 65,5%) e baixa em estágios iniciais (n=17, 60,7%; p = 0,047). Nenhuma das proteínas estudadas mostrou associação entre si, nem com os demais parâmetros clínicos e a gradação histopatológica. Apesar da associação significativa da maior imunoexpressão de XRCC1 com melhor estadiamento clínico e da p53 com o pior estadiamento clínico, estas não foram embasadas quando analisado o desfecho dos pacientes. Os resultados desta pesquisa indicam que XRCC1 e APE1 participam do processo de carcinogênese do CCELO, porém, a expressão imunoistoquímica destas e de p53 e Ki67 não mostraram associação com parâmetros prognósticos. / Oral squamous cells carcinoma (OSCC) results from processes of decontrol of cellular events caused by mutations due genotoxic agents, which may lead, among other factors, to loss of control of the cellular proliferation process, being considered as one of the precursors of oral cancer. Searching biomarkers for OSCC is the target of several studies, among the markers it is highlighted the DNA repair proteins, such as XRCC1 and APE1, and cell cycle proteins, such as p53 and Ki67. Thus, the aim of this study was to analyze the immunohistochemical expression of APE1, XRCC1 and the proteins involved in the cell cycle, p53 and ki67, associating them with clinical and histopathological prognostic parameters in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC), in order to contribute to the better understanding of the participation of these proteins in the development of this neoplasia. The immunohistochemical expression of APE1 and XRCC1 was evaluated semiquantitatively and the expression of p53 and ki67 quantitatively, in 58 cases of OTSCC. Clinical data were collected from the medical records of each patient and the histopathological grading of Brandwein-Gensler was carried out for each case. For the statistical analysis, Chi-square and Fisher's exact test were performed, and significance was set at p <0.05. The majority of cases showed high immunoexpression of APE1 (n = 36; 62.1%), as well as of XRCC1 (n = 38; 65.5%). In relation to the Ki67 and p53 proteins, there was an equal distribution when the cases were categorized into low and high expression (n = 29, 50%). XRCC1 immunoexpression was significantly higher in cases of early stage lesions I and II (n = 23; 62.2%) compared to advanced stages III and IV (n = 16, 80%, p = 0.05). The Immunoexpression of p53 was significantly higher in cases of advanced lesion (n = 19; 65.5%) and low in early stages (n = 17, 60.7%, p = 0.047). None of the studied proteins showed association with each other, nor with the other clinical parameters and histopathological grading. Despite the significant association of the highest XRCC1 immunoexpression with better clinical staging and of p53 with the worst clinical staging, these results were not supported when the patients' outcome were analyzed. The results of this study indicate that XRCC1 and APE1 participate in the process of carcinogenesis of OTSCC, but the immunohistochemical expression of these proteins and also p53 and Ki67 did not show any association with prognostic parameters.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AcariziaES_DISSERT_com restrincao.pdf: 1340411 bytes, checksum: 77725d07cd1be6709e0cbb731be2b1e1 (MD5) Previous issue date: 2010-10-06 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Reactive oxygen species (ROS) are produced by aerobic metabolism and react with biomolecules, such as lipids, proteins and DNA. In high concentration, they lead to oxidative stress. Among ROS, singlet oxygen (1O2) is one of the main ROS involved in oxidative stress and is one of the most reactive forms of molecular oxygen. The exposure of some dyes, such as methylene blue (MB) to light (MB+VL), is able to generate 1O2 and it is the principle involved in photodynamic therapy (PDT). 1O2 e other ROS have caused toxic and carcinogenic effects and have been associated with ageing, neurodegenerative diseases and cancer. Oxidative DNA damage is mainly repaired by base excision repair (BER) pathway. However, recent studies have observed the involvement of nucleotide excision repair (NER) factors in the repair of this type of injury. One of these factors is the Xeroderma Pigmentosum Complementation Group A (XPA) protein, which acts with other proteins in DNA damage recognition and in the recruitment of other repair factors. Moreover, oxidative agents such as 1O2 can induce gene expression. In this context, this study aimed at evaluating the response of XPA-deficient cells after treatment with photosensitized MB. For this purpose, we analyzed the cell viability and occurrence of oxidative DNA damage in cells lines proficient and deficient in XPA after treatment with MB+VL, and evaluated the expression of this enzyme in proficient and complemented cells. Our results indicate an increased resistance to treatment of complemented cells and a higher level of oxidative damage in the deficient cell lines. Furthermore, the treatment was able to modulate the XPA expression up to 24 hours later. These results indicate a direct evidence for the involvement of NER enzymes in the repair of oxidative damage. Besides, a better understanding of the effects of PDT on the induction of gene expression could be provided / Esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) s?o produzidas durante o metabolismo aer?bico e s?o capazes de reagir com diversas biomol?culas, como lip?dios, prote?nas e DNA. Dentre as ERO, o oxig?nio singlete (1O2) e conhecido como um dos principais agentes envolvidos no estresse oxidativo. A exposi??o de alguns pigmentos, como o azul de metileno (MB) a luz e capaz de gerar 1O2, sendo essa a base da terapia fotodin?mica (TFD). Quando em excesso, o 1O2 e outras ERRO mostram efeitos t?xicos e carcinog?nicos e est?o relacionados ao envelhecimento e a etiologia de varias doen?as, incluindo artrite, doen?as degenerativas e c?ncer. A principal via de reparo de danos oxidativos ao DNA e a via por excis?o de base (BER). No entanto, estudos recentes tem observado a atua??o de fatores da via de reparo por excisao de nucleotideo (NER) na corre??o desse tipo de les?o. Um dos fatores da via NER e a prote?na Xeroderma Pigmentoso do Grupo de complementa??o A (XPA), que atua em conjunto com outras prote?nas na etapa de localiza??o dos s?tios de danos e de recrutamento de outros fatores de reparo. Ainda, agentes oxidativos como o 1O2 sao capazes de induzir a express?o g?nica. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a resposta de c?lulas deficientes em XPA ao tratamento com MB fotossensibilizado. Para isso, foram analisadas a viabilidade celular e a ocorr?ncia de danos oxidativos em linhagens proficientes e deficientes em XPA, assim como a express?o dessa enzima em c?lulas proficientes e complementadas. Nossos resultados indicam um aumento da resist?ncia ao tratamento em c?lulas complementadas com XPA e um maior n?vel de danos oxidativos em linhagens deficientes nessa enzima. Alem disso, o tratamento foi respons?vel pela modula??o da express?o dessa enzima ate 24h depois. Esses resultados indicam uma evidencia direta da participa??o de enzimas do NER no reparo de danos oxidativos e contribui para um melhor entendimento sobre os efeitos da TFD na indu??o da express?o g?nica

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-11T17:13:29Z No. of bitstreams: 1 ThalitaSantanaConceicao_DISSERT.pdf: 2109547 bytes, checksum: 6d0e119c0da68d509313a90708cf7879 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-15T21:04:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ThalitaSantanaConceicao_DISSERT.pdf: 2109547 bytes, checksum: 6d0e119c0da68d509313a90708cf7879 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T21:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThalitaSantanaConceicao_DISSERT.pdf: 2109547 bytes, checksum: 6d0e119c0da68d509313a90708cf7879 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Os sistemas de reparo do DNA desempenham um papel cr?tico na prote??o do genoma humano contra danos causados por agentes cancer?genos presentes no ambiente. Muta??es em genes de reparo de DNA podem ser respons?veis pelo desenvolvimento de tumores e de resist?ncia das c?lulas malignas a agentes quimioterap?uticos. A principal via de reparo de danos oxidativos do DNA ? a via de reparo por excis?o de bases. O objetivo deste estudo foi investigar a imunoexpress?o da APE-1 e XRCC-1, que s?o prote?nas envolvidas no reparo do DNA por excis?o de bases, e sua associa??o com par?metros cl?nicos e histopatol?gicos em carcinoma epidermoide de l?ngua oral (CELO), a fim de investigar um poss?vel valor progn?stico para essas prote?nas. A express?o de APE-1 e XRCC-1 foi avaliada por meio de imuno-histoqu?mica em 50 casos de CELO. Os dados cl?nicos foram coletados no prontu?rio m?dico de cada paciente e a grada??o histopatol?gica foi efetuada para cada caso. A an?lise estat?stica com os testes de Qui-quadrado e Exato de Fisher foi realizada para determinar a associa??o entre as express?es das prote?nas e caracter?sticas cl?nico-patol?gicas; adotou-se um valor de signific?ncia de p<0,05. APE-1 foi altamente expressa no n?cleo e no citoplasma em 56% dos casos. XRCC-1 mostrou alta express?o apenas no n?cleo em 60% dos casos. A alta express?o de XRCC-1 foi significativamente associada aos est?dios cl?nicos I e II (p = 0,02). Ambas as prote?nas n?o foram associadas a outros par?metros cl?nicos ou grada??o histopatol?gica. Por fim, nossos resultados demonstraram que as prote?nas de reparo do DNA por excis?o de bases APE-1 e XRCC-1 est?o positivamente expressas em CELO, no entanto, n?o est?o relacionadas com par?metros cl?nicos e histol?gicos, exceto a associa??o de XRCC-1 com melhor estadiamento cl?nico. Os resultados deste experimento indicam que a express?o imuno-histoqu?mica dessas prote?nas n?o possui valor progn?stico para esta neoplasia. / DNA repair systems play a critical role in protecting the human genome from damage caused by carcinogens present in the environment. Mutations in DNA repair genes may be responsible for tumor development and resistance of malignant cells to chemotherapeutic agents. The major pathway for oxidative DNA damage repair is the base excision repair pathway. The objective of this study was to investigate the immunoexpression of APE-1 and XRCC-1, which are proteins involved in DNA base excision repair and its association with clinical and histopathological parameters in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC), in order to investigate a possible prognostic value for those proteins. The expression of APE-1 and XRCC-1 was evaluated semi-quantitatively by immunohistochemistry in 50 OTSCC cases. Clinical data was collected from patients? medical charts and histopathological grading was performed for each case. Statistical analysis (Chi-square and Fisher?s exact tests; significance of 5%) was performed to determine the association between protein expressions and clinico-pathological characteristics. APE-1 was highly expressed in nucleus and cytoplasm in 56% of cases. XRCC-1 showed overexpression only in nucleus in 60% of cases. High expression of XRCC-1 was significantly associated to clinical stages I and II (P=0.02). Both proteins were not associated to other clinical parameters or histopathological grading. Our findings demonstrate that DNA base excision repair proteins APE-1 and XRCC-1 are upregulated in OTSCC, however, they are not related to clinical and histologic parameters, except for XRCC-1 association to better clinical staging. Our results indicate that the immunohistochemical expression of these proteins has no association with prognostic parameters in this tumor.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-21T17:14:40Z No. of bitstreams: 1 AmandaLarissaMarquesDeMedeiros_TESE.pdf: 2401701 bytes, checksum: 6c9f1744f688fa158feed1ba0fad56b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-22T11:33:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AmandaLarissaMarquesDeMedeiros_TESE.pdf: 2401701 bytes, checksum: 6c9f1744f688fa158feed1ba0fad56b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T11:33:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AmandaLarissaMarquesDeMedeiros_TESE.pdf: 2401701 bytes, checksum: 6c9f1744f688fa158feed1ba0fad56b1 (MD5) Previous issue date: 2015-10-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A cana-de-a??car ? uma importante cultura para nosso pa?s, que contribui com quase metade de toda a produtividade mundial. Muitos desafios s?o enfrentados pelas plantas, que muitas vezes n?o atingem todo o seu potencial gen?tico devido a presen?a de estresses bi?ticos e abi?ticos. Como consequ?ncia, esses estresses podem gerar esp?cies reativas de oxig?nio, que podem danificar o material gen?tico. Outra consequ?ncia do estresse ? a flora??o precoce, que diminui tamb?m a produtividade da cana-de-a??car. Neste contexto, este trabalho apresenta como objetivos caracterizar os genes scMUTM1 e scMUTM2, duas DNA glicosilases pertencentes ? via de reparo por excis?o de base (BER), al?m de identificar transcritos potencialmente relacionados com estresse e reparo de DNA, em duas variedades com fen?tipo contrastante para flora??o. A caracteriza??o das glicosilases incluiu a constru??o de cassetes de express?o de prote?nas, para posterior purifica??o e uso em ensaios enzim?ticos; constru??o de ?rvore filogen?tica e an?lise de promotor deste gene. Com a reconstru??o filogen?tica de MUTM foi poss?vel observar que h? o agrupamento desta sequ?ncia em um ramo com monocotiled?neas e outro com dicotiled?neas. Isto sugere que a duplica??o desta sequ?ncia pode ter ocorrido depois da diverg?ncia desses dois grupos. Com a an?lise do promotor deste gene, ? sugerido que, provavelmente, o gene ScMUTM1 pode estar sofrendo subfuncionaliza??o, uma vez que a regi?o promotora do gene ScMUTM2 apresenta uma maior quantidade de sequ?ncias regulat?rias relacionadas ao estresse. Por meio das an?lises de express?o g?nica utilizando microarranjos, se observou a superexpress?o de genes relacionados ao estresse de forma marcante em uma das condi??es de an?lise relacionadas com flora??o precoce. / Sugarcane is an important culture for Brazil that holds almost half of all worldwide productivity. Plants face many challenges, because of biotic and abiotic stresses presents in the production field, which could prevent plants from reaching their genetic potential. As consequence, those stresses can generate Reactive Oxygen Species ? ROS ? that can cause damages on DNA. Another consequence of stress is the early-flowering process, which contributes for a reduction on yield. In this context, the aim of this work is to characterize ScMUTM1 and ScMUTM2, two DNA glycosylases belonging to base excision repair pathway; and identify genes potentially related to stress and DNA repair in two sugarcane cultivars with contrasting flowering phenotypes. The characterization of the DNA glycosylases included the construction of vector to over express the recombinant proteins ScMUTM1 and ScMUTM2; they will be used in a near future to purification of these proteins and use in enzymatic assays. It was also made a phylogenetic reconstruction of this gene in plants and analysis of its promoter. With the phylogenetic analysis, it is possible to observe the presence of these genes grouped inside a branch with monocots and another one with dicots. This suggests that the duplication of this gene probably occurred after the separation of these two groups. The analysis of the promotor of MUTM shows of the presence of stress-related regulatory motifs at ScMUTM2 promoter, when compared with ScMUTM1. This may suggests that ScMUTM1 might be suffering sub functionalization process. After the analysis of microarrays data, it is observed an up-regulation from some stress-related genes in one of the conditions analyzed, related to early flowering process.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-21T17:20:00Z No. of bitstreams: 1 MelkaCoelhoSa_TESE.pdf: 3257998 bytes, checksum: 6feeeb452aad7be3dee1941b26d85af8 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-22T11:49:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MelkaCoelhoSa_TESE.pdf: 3257998 bytes, checksum: 6feeeb452aad7be3dee1941b26d85af8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T11:49:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MelkaCoelhoSa_TESE.pdf: 3257998 bytes, checksum: 6feeeb452aad7be3dee1941b26d85af8 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Os genes de reparo do DNA s?o essenciais para manuten??o da integridade do genoma, evitando graves doen?as como o c?ncer. O papel de v?rias prote?nas codificadas por esses genes vem sendo associado tanto ao risco do desenvolvimento, como na evolu??o de variados c?nceres humanos, dentre eles, o carcinoma epidermoide oral. O objetivo deste trabalho foi analisar a imunoexpress?o das prote?nas de reparo do DNA, XRCC1, THIIF e XPF em carcinoma epidermoide de l?ngua oral e investigar associa??o com par?metros cl?nicos, histopatol?gicos e de desfecho. Tamanho do tumor, comprometimento linfonodal, est?gio do tumor, profundidade de invas?o >4mm e o sistema de grada??o de Almangush, mostraram-se como fatores progn?sticos. Evidenciou-se de uma maneira geral, alta express?o imuno-histoqu?mica das prote?nas de reparo nas c?lulas parenquimatosas; no entanto, apenas verificou-se associa??o significativa da elevada express?o de XRCC1 com melhor estadiamento cl?nico. Os resultados deste experimento sugerem que as prote?nas XRCC1, TFIIH e XPF participam do processo de tumorig?nese, entretanto a imunoexpress?o das mesmas n?o pode ser utilizada como indicador progn?stico para o carcinoma epidermoide de l?ngua oral. / DNA repair systems, genes and proteins are essential for genome integrity maintenance, avoiding serious diseases such as cancer. Deregulation in the expression of those proteins has been associated with both the risk of development and evolution of various human cancers, including oral squamous cell carcinoma. The purpose of this study was to analyze the immunoreactivity of the DNA repair proteins XRCC1, THIIF and XPF in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC) and to investigate its association with clinical and histopathological parameters, outcome and 5-year survival rate. Seventy-four cases of OTSCC were analyzed semi-quantitatively through immunohistochemistry. We observed that DNA repair proteins were highly expressed in parenchymal cells; however, we only observed a significant association between XRCC1 high expression and better clinical staging (p=0,02). Cox regression showed that tumor size (p<0,01), lymph node involvement (p=0,04), tumor stage (p=0,02) and depth of invasion> 4mm (p=0,05) were prognostic factors. The results of this experiment suggest that XRCC1, TFIIH and XPF participate in the tumorigenic process, however, their immunoexpression may not be used as an independent prognostic indicator for OTSCC.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaCSO.pdf: 673645 bytes, checksum: 65edb3dd5d260d66ee98b34da41f4185 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Gluconacetobacter diazotrophicus ? uma alfa-proteobact?ria Gram-negativa, tolerante a meios ?cidos, fixadora de nitrog?nio atmosf?rico e foi a primeira bact?ria diazotr?fica endof?tica isolada da cana-de-a??car. Por sua vez, Gluconobacter oxydans, tamb?m alfa-proteobact?ria Gram-negativa, possui a capacidade de oxidar incompletamente alco?is e carboidratos. Ambas de interesse biotecnol?gico e industrial, essas bact?rias tiveram seus genomas seq?enciados completamente em 2007. Desta forma, foi de interesse desse trabalho analisar e comparar os genes de reparo do DNA devido sua import?ncia na manuten??o da integridade gen?mica. Sendo assim, as vias de reparo presentes nos dois organismos foram identificadas, utilizando como base uma terceira alfa-proteobact?ria, a Caulobacter crescentus, cujos genes de reparo foram descritos por um trabalho anterior e tamb?m os genes bem estabelecidos para o reparo do DNA em Escherichia coli. Para esse estudo, um banco de dados contendo ort?logos para os genes de reparo de DNA encontrados nos organismos foi criado e an?lises comparativas por similaridade usando o pacote Blast e o software Clustal foram feitas. Este estudo demonstrou que as principais vias de reparo ao DNA reparos por excis?o, reparo direto, reparo recombinacional e reparo pelo sistema SOS est?o presentes nos organismos analisados, demonstrando, na maioria das vezes, boa similaridade com E. coli. Interessantemente, foram encontradas duplica??es g?nicas nos quais uma das c?pias estava presente no cromossomo e a outra, no plasm?deo, como no caso de UvrD, DnaE e Ssb, possivelmente caracterizando eventos de transfer?ncia lateral. Por fim, uma grande novidade foi a identifica??o de ort?logos para RecB em G. diazotrophicus e G. oxydans e de ort?logos duplicados de RecD em G. diazotrophicus. At? o momento, n?o havia sido relatada a presen?a de membros da via de inicia??o RecBCD do reparo recombinacional em alfaproteobact?rias

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A infecção pulmonar é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em pacientes com Fibrose Cística (FC). O prognóstico destes pacientes é influenciado pelo número de exacerbações anuais e a carga microbiana nas secreções respiratórias. Pseudomonas aeruginosa é o principal patógeno, tanto em importância quanto em prevalência. Recentemente, foi demonstrada a ocorrência de cepas de P. aeruginosa altamente transmissíveis em centros de atendimento a pacientes com FC. A persistência de P. aeruginosa no pulmão de pacientes com FC está associada, em parte, à presença de cepas com hipermutabilidade (HPM), um fenômeno decorrente, principalmente, de defeitos em genes envolvidos no sistema de reparo do DNA. Tivemos como objetivo investigar a ocorrência de cepas HPM em P. aeruginosa, associadas às infecções pulmonares crônicas em pacientes com FC, bem como, avaliar a associação entre HPM, resistência a antimicrobianos e expressão de fatores de virulência. Das 179 amostras bacterianas estudadas, isoladas de 17 (85%) dos 20 pacientes incluídos no estudo, 43 (24%) apresentaram HPM seguindo os critérios estabelecidos por Maciá e colaboradores. Essas subpopulações apresentaram maiores taxas de resistência a antimicrobianos. As amostras estudadas apresentaram grande variabilidade genética (49 perfis definidos com a utilização da técnica de RADP), embora tenha sido observada, também, a incidência de clones compartilhados por diferentes pacientes. Não encontramos similaridade entre os clones estudados e as cepas epidêmicas circulantes em outros países. Das amostras classificadas como HPM pelos critérios de Macia e colaboradores, apenas 3 delas apresentaram frequência de mutação que permitisse sua classificação como HPM. Com o sequenciamento do DNA encontramos mutações que levaram a mudança de aminoácidos nas proteínas codificadas pelos genes mutS, mutD e urvD. Não observamos mutações nos genes mutM, mutT e mutY que pudessem alterar os aminoácidos sintetizados. Como são escassos estudos sobre a influência da HPM em alterações fenotípicas outras que a resistência a antimicrobianos, comparamos a expressão de atributos de virulência nas populações selvagens e subpopulações. Não observamos alterações nos estados nutricionais, mobilidade e capacidade de formação de biofilme dos microrganismos estudados. Ao contrário, as subpopulaçãoes apresentaram uma menor atividade de LasA e um aumento na produção de piocianina, o que reforça nossa hipótese de que células mutantes teriam uma vantagem no ambiente pulmonar de pacientes com FC. Devido à diferença nos testes propostos para caracterização de HPM, sugerimos que o teste de difusão em agar modificado seja adotado como uma metodologia de triagem a ser utilizada em laboratório de microbiologia clinica. / Pulmonary infection is a major cause of morbidity and mortality in patients with Cystic Fibrosis (CF). The prognosis of these patients is influenced by the number of annual exacerbations of the infectious processes and the microbial load in their respiratory secretions. Pseudomonas aeruginosa is the main CF pathogen, both in importance and predominance. Recently, highly transmissible P. aeruginosa strains were reported among CF patients from different CF Health Care centers. The persistence of P. aeruginosa in the lung of CF patients is associated, at leat in part, with the presence of strains with hipermutability (HPM), a phenomenon caused mainly by defects in genes involved in the DNA repair system. In this report, 43 (24%) out of 179 P. aeruginosa isolates recovered from 17 (85%) out of 20 CF patients included in the study were characterized as HPM, according to the criteria established by Maciá and collegues. The HPM subpopulations exhibited higher rates of antimicrobial resistance. By using the RAPD technique, bacteria included in our study were shown to exhibit high genetic variability and could be grouped in 49 different clones. However, a few clones were shared by different patients. No similarity was detected among these clones and epidemic strains from others countries. Of the 43 isolates classified as HPM by Maciás criteria, only 3 exhibited mutation frequencies allowing their inclusion in the HPM group. By sequencing the DNA from these bacteria we found mutations in the genes mutS, mutD and urvD that resulted in changes in the aminoacids sequences. We did not observe mutations in the genes mutM, mutt and mutY that could have altered the aminoacid sequence from synthesized protein. Since there are only a few report in the literature on the influence of HPM on bacterial phenotypic alterations other than antimicrobial resistance, we also compared 81 bacterial isolates from the wild populations and HPM subpopulations in their virulence properties No difference among the microorganisms were detected considering their nutricional variations, mobility and ability of biofilm formation. In contrast, HPM subpopulations exhibited decreased LasA activity and increased production of pyocianyn. These results reinforced our hypothesis that bacterial mutants may have some advantage in the pulmonary environment of CF patients. Due to the difference in the results of the two sorts of test used to identify HPM, we propose the test of diffusion in modified agar as a trial test to be included in laboratories of clinical microbiology.

Células de todos os organismos vivos restauram lesões em DNA preservando a integridade da informação genética, através de mecanismos de reparo. A não eliminação, ou o acúmulo destas lesões ou a deficiência em uma via de reparo, leva ao acúmulo de mutações em células, podendo contribuir para o câncer. Lesões no DNA podem estar associadas com Diabetes Mellitus (DM) e pouco se sabe a respeito de possíveis distúrbios no sistema de reparo, associado a esta síndrome. A metformina (MET), um sensibilizador de insulina, pode estar associado a incidência reduzida e melhora no prognóstico de certos tipos de cânceres em DM. Neste estudo, estamos sugerindo em eucariotos e procariotos, deficientes em enzimas de reparo de DNA, que a MET, age via enzimas de reparo, para proteger a célula contra os danos em DNA. Isto porque células XPD, deficientes na enzima de reparo XPD, pré-tratadas com MET (1mM) e irradiadas com UVC, tiveram sobrevivência menores, avaliadas através da viabilidade celular pela exclusão do Azul de Trypan, em comparação com controle, MRC5. O mesmo ocorrendo com as cepas bacterianas AB1885, BH20 e AB2463 deficientes nas enzimas de reparo, UvrB e Fpg e do sistema SOS, respectivamente, quando foram pré-tratadas com MET (20mg = 168mM) e irradiadas com UVC comparadas com suas sobrevivências sem UVC. Cepas AB1885 e BH20 transformadas em proficientes de todos os sistemas de reparo e submetidas ao mesmo tratamento com MET, mas com a dose de UVC igual à administrada para a cepa selvagem (AB1157), observou-se um aumento de sobrevivência. E ao se utilizar a cepa GY4765 (SOS+), proficiente da atividade autocatalítica do sistema SOS, nas mesmas condições de tratamento, houve também aumento da sobrevivência em relação ao controle, sendo também o sistema testado através do SOS Cromoteste onde a MET expressou este sistema. Através do ensaio da eletroforese alcalina em gel de agarose, onde se avaliou a atividade de reparo da cepa bacteriana AB1157, após o prétratamento com MET e irradiação com UVC, confirmou-se a ação da MET em ativar sistemas de reparo do DNA. Demonstrou-se, também, a existência de uma ação conjunta da MET com a insulina, quando em células provenientes de pacientes portadores de câncer de mama MCF7, transfectada com o gene BRCA1(HRR), o tratamento com MET (168mM) não expressou este gene, mas o fez, em ação conjunta com a insulina (10nM) quando avaliadas no ensaio de luciferase. Quando células MRC5 foram submetidas ao pré-tratamento com MET(168mM) e insulina(10nM) e após irradiada com UVC, tiveram sua sobrevivência maiores do aquelas irradiadas sem insulina. Já nas células XPD, esta ação conjunta MET e insulina, não protegeu a célula contra a ação do UVC. Conclui-se que a MET em procariotos, ativa reparo de DNA, necessita das enzimas de reparo UvrB (NER) e fpg (BER) e do sistema SOS para proteger a célula contra os efeitos deletérios do UVC. Em eucariotos, a MET, necessita da enzima de reparo de DNA, XPD (NER) para promover a mesma proteção contra a ação do UVC, que é exacerbada, quando associada à insulina. Possivelmente, a MET, também expressa o gene BRCA1 (HRR) quando associada à insulina. / Cells prevent the formation of injuries in DNA preserving integrity of the genetic information, through repair mechanisms. The accumulation of these injuries or the deficiency in one repair mechanism can produce mutations in cells, leading to neoplasic transformation. Injuries in the DNA can be associated with Diabetes Mellitus (DM) and little is known regarding possible disturbance in the repair system, associated with this syndrome. The use of metformin (MET), a insulin sensitizer, can be associated with reduced incidence and improvement in the prognostic of certain types of cancer in DM. In this study, we are suggesting in prokaryotes and eukaryotes deficient in repair enzymes that MET acts through these enzymes, to protect against the damages in DNA. Cells XPD, deficient in the enzyme of repair XPD, pre-treated with MET (1mM) and radiated with UVC, showed lower survival, evaluated through Trypan Blue test of cell viability in comparison with MRC5 control cells. The same occurring with bacterial strains AB1885, BH20 and AB2463 deficient in repair enzymes UvrB and Fpg and the SOS system, respectively, when pre-treated with MET (20mg/ml=168mM) and radiated with UVC compared with its survival without UVC. Strains AB1885 and BH20 transformed into proficient of all the repair systems through, and submitted to the same treatment with MET and equal dose of UVC the used in the wild strain (AB1157), we observed an increase of its survival. Studying the strains GY4765 (SOS+) proficient on the autocatalytic activity of the SOS system, using the same conditions of treatment, also had increase of its survival in relation to the control, being also this system tested through Chromotest SOS where the MET expressed the SOS genes. Through alkaline electroforese in agarose gel to evaluate the repair activity on the bacterial strain AB1157 (proficient of all repair systems) the pre-treatment with MET and irradiation with UVC, confirmed the action of MET in activating repair systems. It was demonstrated, also, the existence of a synergic action of MET and insulin, when cells from patients with of breast cancer of (MCF7), transfected with BRCA1 gene (HRR). The treatment with MET (20mg/ml) did not increase the expression of this gene, but when combined with insulin (10nM) we observed an increase in the expression of this gene, evaluated in the Luciferase assay. When MRC5cells has been submitted to the pre-treatment with MET and insulin and exposed with UVC, had its higher survival of those radiated without insulin. XPD cells, treated with MET and insulin, did not show any protection agains UVC exposure. In conclusion MET treatment in prokaryotes active DNA repair, but needs UvrB enzymes (NER), fpg (BER) and SOS system to protect the cell against the deleterious effect of the UVC. In eukaryotes, MET needs XPD repair enzyme, (NER) to promote the same protection against the action of the UVC that is bigger when associated with insulin. Possibly, MET also increases the expression of BRCA1gene (HRR) when associated with insulin.

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