Novas terapias têm sido estudadas, a fim de diminuir a repercussão celular durante isquemia e proteger as células miocárdicas das conseqüências prejudiciais do fenômeno de reperfusão, ou lesão de reperfusão, desencadeada principalmente pela ativação da glicoproteína trocadora de sódio/Hidrogênio (NHE). Essa proteína, cuja principal função seria manter a integridade do pH das células miocárdicas durante a isquemia, pode alterar-se de forma paradoxal e precipitar necrose celular na reperfusão, por determinar um acúmulo de cálcio intracelular. Dos agentes com capacidade de inibir a NHE, a amilorida, foi a primeira droga que mostrou essa propriedade. Outros inibidores da NHE mais potentes, como cariporide, eniporide e zoniporide, foram também avaliadas através de ensaios clínicos. Nesta revisão, analisaremos os mecanismos a nível celular envolvidos no processo de isquemia, as intervenções que preservam ou melhoram a viabilidade miocárdica durante a isquemia e reperfusão, limitando a extensão do infarto do miocárdio, e os resultados dos principais estudos clínicos envolvendo os inibidores da NHE e sua aplicabilidade potencial.

Novas terapias têm sido estudadas, a fim de diminuir a repercussão celular durante isquemia e proteger as células miocárdicas das conseqüências prejudiciais do fenômeno de reperfusão, ou lesão de reperfusão, desencadeada principalmente pela ativação da glicoproteína trocadora de sódio/Hidrogênio (NHE). Essa proteína, cuja principal função seria manter a integridade do pH das células miocárdicas durante a isquemia, pode alterar-se de forma paradoxal e precipitar necrose celular na reperfusão, por determinar um acúmulo de cálcio intracelular. Dos agentes com capacidade de inibir a NHE, a amilorida, foi a primeira droga que mostrou essa propriedade. Outros inibidores da NHE mais potentes, como cariporide, eniporide e zoniporide, foram também avaliadas através de ensaios clínicos. Nesta revisão, analisaremos os mecanismos a nível celular envolvidos no processo de isquemia, as intervenções que preservam ou melhoram a viabilidade miocárdica durante a isquemia e reperfusão, limitando a extensão do infarto do miocárdio, e os resultados dos principais estudos clínicos envolvendo os inibidores da NHE e sua aplicabilidade potencial.

Novas terapias têm sido estudadas, a fim de diminuir a repercussão celular durante isquemia e proteger as células miocárdicas das conseqüências prejudiciais do fenômeno de reperfusão, ou lesão de reperfusão, desencadeada principalmente pela ativação da glicoproteína trocadora de sódio/Hidrogênio (NHE). Essa proteína, cuja principal função seria manter a integridade do pH das células miocárdicas durante a isquemia, pode alterar-se de forma paradoxal e precipitar necrose celular na reperfusão, por determinar um acúmulo de cálcio intracelular. Dos agentes com capacidade de inibir a NHE, a amilorida, foi a primeira droga que mostrou essa propriedade. Outros inibidores da NHE mais potentes, como cariporide, eniporide e zoniporide, foram também avaliadas através de ensaios clínicos. Nesta revisão, analisaremos os mecanismos a nível celular envolvidos no processo de isquemia, as intervenções que preservam ou melhoram a viabilidade miocárdica durante a isquemia e reperfusão, limitando a extensão do infarto do miocárdio, e os resultados dos principais estudos clínicos envolvendo os inibidores da NHE e sua aplicabilidade potencial.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:49:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 juliana_borges_ioc_dout_2014.pd: 2349301 bytes, checksum: b550a4f2f1d76e63939f364df742e2b7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Sabe-se que o exercício físico agudo reduz a lesão tecidual e a morte celular decorrentes de eventos de isquemia e reperfusão (IR) e infarto agudo do miocárdio. Porém, os mecanismos envolvidos nessa resposta cardioprotetora não são claros. Evidências recentes indicam que os receptores opióides podem estar envolvidos nesse processo. No entanto, além de não se saber especificamente o subtipo de receptor opióide envolvido, são escassos estudos que se debruçaram sobre a relação entre a cardioproteção induzida pelo exercício e opióides. Dessa forma o objetivo da tese foi investigar a participação dos receptores opióides e seus subtipos na cardioproteção induzida pelo exercício físico aeróbio após lesão de IR em ratos. Além disso, buscou-se estabelecer de que forma outros possíveis mecanismos estariam relacionados com a cardioproteção. Para tal, ratos wistar foram submetidos a dois protocolos de isquemia reperfusão: in vivo e ex vivo (Langendorff). Em ambos os protocolos, animais realizaram 4 sessões de exercício físico (60 min/sessão a 70% do VO2máx). Foram medidos os parâmetros hemodinâmicos, área de infarto, densidade capilar estrutural, a expressão proteica de cada subtipo de receptor opióide, e a expressão gênica da capacidade antioxidativa e da proteína de choque térmico 72 (HSP 72). Foi verificado tanto no protocolo ex vivo quanto no in vivo, que o grupo que se exercitou apresentou menor área de infarto e melhor função hemodinâmica comparado ao grupo controle Após o tratamento com naloxona, um antagonista não \2013 seletivo para receptores opióides, o efeito cardioprotetor do exercício foi parcialmente bloqueado. Além disso, no protocolo in vivo, foi demonstrado que o exercício não alterou a densidade capilar estrutural do ventrículo esquerdo e a expressão gênica de enzimas antioxidantes, medida através de RT-PCR quantitativo. Os níveis de RNAm de HSP 72 estavam reduzidos no grupo exercitado. Foi verificado também que o bloqueio farmacológico dos receptores opióides delta, mas não do kappa e do mu, aboliu o efeito cardioprotetor do exercício físico. No entanto, a expressão proteica dos receptores opióides delta e kappa do grupo exercitado estavam reduzidas em relação ao grupo controle. Em conclusão, nossos resultados sugerem que mesmo poucas sessões de exercício físico podem proporcionar cardioproteção contra lesões por IR, que não está relacionada a angiogênese, aumento na expressão gênica miocárdica de HSP 72 e enzimas antioxidantes, mas sim ao sistema de opióides, e mais especificamente aos receptores delta / t is known that acute exercise reduces tissue dama ge and cell death resulting from events of ischemia and reperfusion (IR) and acute myocardial infarction. H owever, the mechanisms involved in this cardioprote ctive effect are unclear. Recent evidences indicate that opioid receptors may be involved in this response. Nevertheless, besides not knowing specifically what subtype of opioid receptor are associated to cardioprotection, there are few studies which have examined the relationship between exercise-induced cardioprotection and opioids. So, the objective of the thesis was to investigate the involvement of op ioid receptors and its subtypes in exercise-induced card ioprotection after IR injury in rats. Furthermore, w e aimed to establish how other possible mechanisms would be re lated to cardioprotection. To do so, wistar rats were submitted to two different protocols of IR: in vivo and ex vivo (Langendorff). In both, animals performed 4 sessions of aerobic exercise (60 min/session at 70% of VO 2max ). Hemodynamics, infarct size, structural capillary density, protein expression of each opioid receptor subtype and gene expression of antioxidant capacit y and heat shock protein 72 (HSP 72) were measured. It was obs erved in both in vivo and ex vivo protocols that the exercised group presented significant smaller infarc t size and greater hemodynamic function compared to control group. After the treatment with naloxone, a non-sel ective opioid receptor antagonist, the cardioprotect ive effect of exercise was partially annulled. Furthermore, in vivo protocol showed that exercise did not alter left ve ntricle structural capillary density and gene expression of antioxidant enzymes, measured through quantitative RT-PCR. The HSP 72 mRNA levels were reduced in exercised gr oup. It was also shown that pharmacological blockad e of delta opioid receptors, but not kappa and mu, aboli shed the exercise-induced cardioprotection. However , protein expression of delta and kappa opioid receptors in e xercised group was significant reduced compared to control group. In conclusion, our results suggest that even short-term aerobic exercise promotes cardioprotect ion against IR injury, which is not associated to angiogenesis, increased myocardial gene expression of HSP 72 and antioxidant enzymes, but to opioid system, and more sp ecifically to delta opioid receptors.

Orientador: Bertha Furlan Polegato / Resumo: Introdução: o estresse oxidativo é um dos principais mecanismos de lesão durante e após a isquemia miocárdica. O açaí é um fruto que possui uma elevada capacidade antioxidante. O objetivo do estudo foi avaliar a influência do açaí no modelo de isquemia global-reperfusão em ratos. Material e métodos: foram utilizados 19 ratos Wistar machos, alocados em 2 grupos: Controle (receberam dieta padrão) e Açaí (receberam dieta padrão suplementada de açaí a 5%). Após seis semanas, os animais foram submetidos ao protocolo de isquemia global-reperfusão e estudo do coração isolado. Durante o protocolo, foi avaliada a função ventricular no período pós-isquemia e reperfusão. Os corações foram utilizados para análise da porcentagem de área isquêmica, avaliação do estresse oxidativo e metabolismo energético miocárdico. Resultados: Não houve alteração estatisticamente significante entre os grupos com relação ao peso inicial, peso final, consumo diário de ração, área de infarto do miocárdio e na expressão das proteínas NF-κB fosforilado e total, FOXO1 acetilada e total, SIRT1 e Nrf-2. A suplementação de açaí promoveu menor concentração miocárdica de hidroperóxido de lipídio e observamos maior atividade das enzimas catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase. Observamos maior atividade da β-hidroxiacil-coenzimaA desidrogenase, piruvato desidrogenase e citrato sintase no miocárdio dos animais que receberam açaí e menor atividade das enzimas lactato desidrogenase e fosfofrutoquinase. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by PATRÍCIA HELENA CORRÊA ALEGRE null (patialegre10@gmail.com) on 2017-04-20T21:41:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Versao Final - 19 abril 2017 - Patricia HC Alegre.pdf: 1226711 bytes, checksum: 8b01cde65d7b80b1fa3ef91c0ee048a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T18:24:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alegre_phc_me_bot.pdf: 1226711 bytes, checksum: 8b01cde65d7b80b1fa3ef91c0ee048a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T18:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alegre_phc_me_bot.pdf: 1226711 bytes, checksum: 8b01cde65d7b80b1fa3ef91c0ee048a0 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: o estresse oxidativo é um dos principais mecanismos de lesão durante e após a isquemia miocárdica. O açaí é um fruto que possui uma elevada capacidade antioxidante. O objetivo do estudo foi avaliar a influência do açaí no modelo de isquemia global-reperfusão em ratos. Material e métodos: foram utilizados 19 ratos Wistar machos, alocados em 2 grupos: Controle (receberam dieta padrão) e Açaí (receberam dieta padrão suplementada de açaí a 5%). Após seis semanas, os animais foram submetidos ao protocolo de isquemia global-reperfusão e estudo do coração isolado. Durante o protocolo, foi avaliada a função ventricular no período pós-isquemia e reperfusão. Os corações foram utilizados para análise da porcentagem de área isquêmica, avaliação do estresse oxidativo e metabolismo energético miocárdico. Resultados: Não houve alteração estatisticamente significante entre os grupos com relação ao peso inicial, peso final, consumo diário de ração, área de infarto do miocárdio e na expressão das proteínas NF-κB fosforilado e total, FOXO1 acetilada e total, SIRT1 e Nrf-2. A suplementação de açaí promoveu menor concentração miocárdica de hidroperóxido de lipídio e observamos maior atividade das enzimas catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase. Observamos maior atividade da β-hidroxiacil-coenzimaA desidrogenase, piruvato desidrogenase e citrato sintase no miocárdio dos animais que receberam açaí e menor atividade das enzimas lactato desidrogenase e fosfofrutoquinase. Com relação à cadeia respiratória mitocondrial observamos maior atividade do complexo I, complexo II e ATP sintase no grupo suplementado com açaí. A função sistólica foi semelhante entre os grupos e os animais que receberam açaí apresentaram pior função diastólica quando comparados aos animais que não receberam. Não observamos diferença entre os grupos controle e açaí em relação à área seccional do miócito. Conclusão: apesar de melhorar o metabolismo energético e atenuar o estresse oxidativo, a suplementação de açaí não diminuiu a área de infarto, bem como não melhorou a função ventricular esquerda no modelo de isquemia global/reperfusão. / Introduction: Oxidative stress is one of the main mechanisms of injury during and after myocardial ischemia. Açaí is a fruit that has a high antioxidant capacity. The aim of the study was to evaluate the influence of açaí in the global ischemia-reperfusion model in rats. Material and methods: We used 19 male Wistar rats, allocated in 2 groups: Control (received standard diet) and Açaí (received a standard diet supplemented with 5% açaí). After six weeks, the animals were submitted to the global ischemia-reperfusion protocol and isolated heart study. During the protocol, the ventricular function in the post-ischemic and reperfusion period was evaluated. The hearts were used to analyze the percentage of ischemic area, evaluation of oxidative stress and myocardial energetic metabolism. Results: There was no statistically significant difference between the groups in initial body weight, final body weight, daily feed intake, myocardial infarction area and expression of phosphorylated and total NF-κB protein, acetylated and total FOXO1, SIRT1 and Nrf-2. Açaí supplementation promoted a lower myocardial concentration of lipid hydroperoxide and we observed higher activity of the enzymes catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase. We also observed increased activity of β-hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, pyruvate dehydrogenase, and citrate synthase in the myocardium of animals that received acai, as well lower activity of the enzymes lactate dehydrogenase and phosphofructokinase. Regarding the mitochondrial respiratory chain, we observed higher activity of complex I, complex II and ATP synthase in the group supplemented with açaí. The systolic function was similar between the groups and the animals that received açaí presented worse diastolic function when compared to the animals that did not receive. We did not observe difference between the control and açaí groups in relation to the sectional area of the myocyte. Conclusion: despite improving energy metabolism and attenuating oxidative stress, açaí supplementation did not decrease the infarcted area, nor did it improve left ventricular function in the global ischemia / reperfusion model.

Orientador: Orlando Petrucci Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T16:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_FanySilva_M.pdf: 1729080 bytes, checksum: a3d4e3c77bc179cf859c845d5e3bac06 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O infarto agudo do miocárdio (IAM) ainda permanece como umas das principais causas de morbimortalidade em indivíduos adultos, ocasionando lesões miocárdicas pela isquemia seguida da reperfusão. No presente trabalho estudamos a cardioproteção por meio de três diferentes estratégias: a utilização de um fármaco denominado - Piracar (Piracetam, L-carnitiva, glutamato e aspartato), a utilização de uma solução contendo eritropoietina, glicose, insulina e potássio (EG); e por meio da modulação humoral/neurológica denominada isquemia de pré-condicionamento remoto (IPCR). Para esta análise utilizou-se de modelo agudo de isquemia e reperfusão miocárdica em suínos onde foram avaliadas variáveis hemodinâmicas, quantificação da área de infarto, quantidade de troponina I liberada (TnI-C) e de adenosina trifosfato no músculo cardíaco (ATP). Também foram estudadas proteínas relacionadas a isquemia e reperfusão miocárdicas de duas vias conhecidas como a Survivor Activating Factor Enhancement (SAFE) e a Reperfusion Injury Salvage Kinase Pathway (RISK) utilizando Western Blotting. Foi observado maior ativação das proteínas ERK (p?0,05) e STAT (p?0,05) no grupo EG e IPCR comparados ao controle, quando comparados entre si o grupo que se apresentou melhor foi o EG, também com a quantidade de ATP significativamente maior. No grupo Piracar e IPCR a AKT (p?0,05) apresentou-se ativada comparada aos demais grupos. Não encontramos diferença nas análises hemodinâmicas e na porcentagem de área de infarto. Entretanto, a TnI-C apresentou-se elevada na fase de reperfusão nos grupo IPCR e EG; e reduzida no grupo Piracar. Dos tratamentos estudados, o grupo EG foi o que mais se destacou pelo aumento significativo das proteínas ERK e STAT, e aparente melhora na reserva metabólica pela quantidade elevada de ATP disponível, enquanto os demais grupos e nas demais formas de análises foram semelhantes ou com resultados inferiores / Abstract: Acute myocardial infarction (AMI) still the major cause of morbidity and mortality in adults, causing myocardial ischemia followed by lesions of reperfusion. In the present study, we studied cardioprotection by 3 different strategies: the use of a so-called drug - Piracar ( Piracetam, L- carnitiva, glutamate and aspartate) using a solution containing erythropoietin, glucose, insulin and potassium (EG); by humoral and/modulation neurological called remote ischemic preconditioning (IPCR) . For this analysis we used the model of acute myocardial ischemia and reperfusion in pigs where hemodynamic variables were evaluated, quantification of infarct area, amount of troponin I released (cTnI) and adenosine triphosphate in the heart muscle (ATP). Were also studied proteins related to myocardial ischemia and reperfusion two-way known as the Survivor Activating Factor Enhancement (SAFE) Reperfusion Injury and Salvage Kinase Pathway (RISK) using Western blotting. We found greater activation of ERK proteins (p= 0,05) and STAT (p= 0,05) in the EG group and IPCR compared to the control, when comparing between the group that performed best was the EG, also with the amount significantly higher ATP. In group Piracar AKT (p= 0,05) was significantly activated compared to the other groups. No differences in hemodynamic analysis and the percentage of infarcted area. However, cTnI showed up high in the reperfusion phase in IPCR and EG group; and reduced in Piracar group. Of the treatments, the EG group was the one that stood out the significant increase in ERK and STAT proteins, and apparent improvement in metabolic reserve by the high amount of ATP available, while the other groups and other forms of analysis were similar or results below / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestra em Ciências

Plant-derived products have been widely studied for prevention and treatment of several diseases. Substances present in them showing antioxidant activities are of great interest because they are able to minimize cardiac injury associated to reperfusion of ischemic tissues. The cardiac reperfusion injury is a physiopathological phenomenon that can occur in coronary syndromes, during cardiovascular surgery and during angioplasty generating heart tissue lesions. In this context, it becomes important to evaluate the biological effects promoted by plant extracts looking for understand their potential for antioxidant protection in order to prevent cardiac tissue damage. Ethyl acetate fraction (FAE) was obtained from the crude extract of Canavalia rosea leaf. FAE was subjected to a phytochemical screening and some antioxidants molecules were identified. Quantitative evaluation of the antioxidant activity and the ability of FAE to scavenge DPPH radicals was performed. It was found that FAE caused a significant reduction in the amount of this radical (p < 0.001), inhibiting its production in 46.7 ± 3.5% with a EC50 of 20.9 ± 0.3 μg/mL. The index of antioxidant activity (IAA) associated to this fraction was 1.42, considered high (Soler-Rivas et al., 2000; Argolo et al., 2004). The in vitro lipid peroxidation was induced by ferrous sulfate. Different concentrations of FAE reduced the lipid peroxidation induced by this substance. We also have evaluate the electrical and contractile effects of FAE (300 μg/mL) in isolated hearts of rats mounted in Langendorff aortic perfusion system. FAE changed significantly, the electrocardiographic profile, increasing the duration of the following intervals: PRi (from 78.48 to 104.7, n = 5, p<0.05), QTi, (from 30.41 to 41.03, n = 5, p<0.05) as well as the QRS complex (from 17.36 to 25.19, n = 5, p<0.05). Furthermore, it reduced the heart rate (from 128.5 to 87.8, n =5, p<0.05). Studing its contractile effects, we have observed that this fraction promoted reduction of the left intraventricular pressure (PVE) (from 1.68 to 1.17, n = 5, p<0.05) as the contraction speed. Cardioprotective effect of FAE was evaluated by testing its skill to reduce the myocardial injury promoted by reperfusion of the heart tissue. To do that, we have employed enzymatic methods in order to evaluate the oxidative stress and also its action on the tissue contractile activity. Our results showed that the FAE reduced dP/dt maximum measured during systole and diastole. Conversely, it increased the diastolic time and also the PVE. During reperfusion after ischemia FAE significantly improved the heart rate decreasings the Index of Severity of Arrhythmia (ISA). The evaluation of antioxidant effects was performed by TBARS measurements as well as studying the superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), and reductase (GR) activities. It was observed that lipid peroxidation was significantly lowered in hearts previously perfused with FAE, and subjected to protocols of ischemia-reperfusion, when compared with the animal group only infused with the vehicle (control animals). The activities of SOD, GPx and GR was significantly higher in hearts previously perfused with FAE, but CAT activity was lower. Looking at CK we observe that this index was lower in previously perfused by the FAE. With this set of results we can conclude that the FAE improves post-ischemic cardiac function. This may be due to the ability of flavonoids scavengers radicals and/or ability on the FAE induces increased activity of antioxidant enzymes in hearts subjected the injuries resulting from the cardiac reperfusion. / Os produtos derivados de plantas têm sido vastamente estudados para prevenção, cura e tratamento de doenças. Sustâncias neles presentes e que apresentam atividade antioxidante são de grande interesse para a minimização da injúria cardíaca que pode ser provocada pela reperfusão deste tecido. A injúria de reperfusão cardíaca é um fenômeno fisiopatológico ocorrendo nas síndromes coronarianas, nas cirurgias cardiovasculares e nas angioplastias, podendo gerar lesões no tecido cardíaco. Neste contexto, é importante avaliar os efeitos biológicos de derivados de plantas, avaliando o seu potencial antioxidante útil na proteção do tecido cardíaco e na prevenção dos danos causados por diversas doenças cardíacas. Uma fração de acetato de etila (FAE) foi obtida do extrato bruto das folhas de Canavalia rosea. A FAE foi submetida à prospecção fitoquímica tendo sido nela identificados compostos antioxidantes. A avaliação quantitativa da atividade antioxidante desta fração foi realizada estudando sua capacidade de sequestrar o radical livre DPPH . Foi observado que ela promoveu uma redução significativa deste radical (p<0,001), apresentando uma inibição na produção deste radical de 46,7 ± 3,5 % com uma CE50 de 20,9 ± 0,3 μg/mL. O Índice de Atividade Antioxidante (IAA) apresentado pela fração foi de 1,42, considerado forte, dentro da escala proposta por Soler-Rivas et al., (2000) e Argolo et al., (2004). A lipoperoxidação in vitro foi induzida pelo sulfato ferroso. Nas diferentes concentrações testadas, a FAE reduziu significativamente a lipoperoxidação induzida por esta substância. Foram também avaliados os efeitos contráteis e elétricos da FAE (300 μg/mL) em coração isolado de ratos montado em sistema de perfusão aórtica do tipo Langendorff. A FAE alterou de forma significativa o perfil eletrocardiográfico, aumentando a duração do intervalo PR (PRi) (de 78,48 para 104,7, n = 5 , p<0,05), do intervalo QT (QTi) (de 30,41 para 41,03, n = 5, p<0,05) e do complexo QRS (de 17,36 para 25,19, n = 5, p<0,05) e reduzindo a frequência cardíaca (de 128,5 para 87,82, n =5, p<0,05). Na avaliação dos efeitos contráteis, a fração diminuiu a pressão intraventricular esquerda (PVE) (de 1,682 para 1,173, n = 5, p<0,05), bem como a velocidade máxima de contração. O efeito cardioprotetor da FAE foi testado avaliando seu potencial para limitar a injúria tissular provocada pela reperfusão. Para isto, foram empregados métodos enzimáticos a fim de avaliar o estresse oxidativo e também sua ação sobre a atividade contrátil do tecido. Os resultados mostraram que a FAE reduziu significativamente a dP/dt máxima tanto na contração quanto no relaxamento. Ainda mais, ela aumentou o tempo de diástole e a PVE. Na reperfusão pós-isquemia, houve melhora significativa da frequência cardíaca e diminuição do Índice de Severidade da Arritmia (ISA). A avaliação dos efeitos antioxidantes foi feita através da medida da TBARS e da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e redutase (GR). Foi observado que a peroxidação lipídica foi significativamente menor nos corações perfundidos previamente com a FAE e depois submetidos à isquemia e à reperfusão do que quando comparados com o grupo perfundido somente com o veículo (animais controle). As atividades da SOD, GPx e GR foram significativamente maiores nos corações perfundidos previamente com a FAE, porém a atividade da CAT foi menor neste grupo. Ao analisarmos a concentração do marcador CK observamos que a mesma apresentou-se menor no grupo perfundido previamente com FAE. Com este conjunto de resultados concluímos que a FAE melhora a função cardíaca pós-isquêmica. Isto pode ter decorrido da habilidade que os flavonoides têm de sequestrar radicais livres e/ou da habilidade da FAE em induzir o aumento da atividade de enzimas antioxidantes nos corações submetidos à injúria decorrente da reperfusão do tecido cardíaco.

O presente estudo objetivou avaliar a distribuição miocârdica de 99mTc-sestamibi utilizando os modelos de fracionanlento celular em coração de rato isolado e perfundido, e de angioplastia coronariana em humanos. Com o objetivo de abordar a aparente discrepância existente en tre dados obtidos em células em cultura e preparações de corações íntegros, foram utilizados corações de rato perfundidos através da preparação de Langendorff e perfundidos com hexakis (2-nlctoxi isobutil isonitrila) tccnécio(I) (99mTcMIBI). Os corações foram fracionados através de técnica pàdronizada de centrify gação e as frações contendo 99mTc-MIBI foram correlacionadas ao marcador mitocondrial malato desidrogenase (MDH) e a substratos mitocondriais. A fração "citosólica" continha 88% (84-96) do total de 99mTc-MIBI, mas também continha 91%(89-94) de toda a atividade de MDH determinada através desta nletodologia. A análise cromatográfica da atividade na fração citosólica demonstrou que> 95% deste agente estava presente como complexo catiônico original livre; sua localização, portanto, não estava relacionada à ligação a moléculas com baixo pêso molecular. A adição do desacoplador mitocondrial CCCP (5 JlM) aos sedimentos "mitocondrial" e de "fragmentos celulares" liberou até 84% do conteúdo de 99mTc-MIBI e a adição do substrato mitocondrial succinato (10 JlM) na presen ça de rotenona (1 JlM) aumentou em 139% o conteúdo de 99mTc-MIBI em relação ao controle. Estes dados indicam que aproximadamente 90% da atividade "in vivo" de 99mTc-MIBI está associada à mitocôndria de forma dependente de energia como um complexo catiônico livre que migra durante o fracionamento e centrifugação. Para avaliar o benefício precoce da angioplastia coronanana transluminal percutânea (ACTP) bem sucedida, foi utilizada a tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT) da perfusão miocárdica com 99mTc-MIBI em nove pacientes consecutivos. O SPECT de estresse miocárdico foi obtido através do estímulo com marca-passo artificial imediatamente antes da ACTP e 16 a 20 horas após, sendo que as imagens perfusionais foram obtidas 2 a 3 horas após o estímulo com marca-passo e injeção de 99mTc-MIBI. Re-estenose foi demonstrada angiograficamente em 3 pacientes, os quais não apresentaram m~ lhora da perfusão após ACTP. Quatro pacientes assintomáticos até 7 meses após ACTP apresentaram melhora média de 15% da perfusão segmentar após o procedimento. Dois pacientes apresentaram dor torácica após ACTP, sendo que um d~ tes demonstrou patência do vaso tratato e melhora> 15% da perfusão deste território. O segundo paciente não apresentou melhora da perfusão (não foi obtida cor. relação angiográfica). Estas observações preliminares sugerem que o 99mTc-sestamibi é importante complemento à angiografia na estimativa da extensão de miOcárdio "sob risco" antes e após a ACTP. / The present study evaluated the myocardial distribution of 99mTc-sestamibi using models of coronary angioplasty in humans and of celular fractionation in isolated perfused rat hearts. To address the apparent discrepancy between cultured cells and whole heart preparations, Langendorff-perfused rat healts loaded with hexakis (2-methoxyisobutyl isonitrile) technetium (I) (99mTc...MIBI) were fractionated by a standard differential centrifugation lnethod and fractional contents of 99mTcMIBI were correlated with the mitochondrial marker, malate dehydrogenase (MDH), and mitochondrial substrates. The "cytosolic" fraction nominally contained 88% (84-96) of total 99mTc-MIBI,but also contained 91%(89-94) of total MDH activity by this method. Chromatographic analysis of activity in the "cytosº lic" fraction demonstrated that > 95%of the agent was present as the original free cationic complex; binding to a small molecular weight cytosolic protein was not involved in localization. Addition of the mitochondrial uncoupler CCCP (5 JlM) to both "mitochondrial" and "cell fragment" peUets released up to 84% of 99mTc-MIBI content and addition of the mitochondrial substrate succinate (lQJM) in the presence of rotenone (lIJM) enhanced 99mTc-MIBI content by up to 139% over the controI. These correlative data from rat hearts indicate that approximately 90% of 99mTc-MIBI activity in vivo is associated with mitochondria in an energy-dependent manner as a free cationic complex, but migrates during fractionation/ centrifugation. To assess the early benefits of successful percutaneous translunlinal coronary angioplasty (PTCA), 99mTc-MIBI Single Photon Emission Comrn ted Tomography (SPECT) was used in nine consecutive patients. SPECT stress studies were done by artificial cardiac pacing just prior to PTCA and 16-20 hours later, with perfusion imagens obtained 2-3 hours after pacing stress and 99mTcMIBI injection. Angiographic restenosis was delnonstrated in three patients at a later date, and alI of these showed no significant improvement on the perfusion study after PTCA. AlI four patients asymptomatic at 7 months following PTCA had an avarege 15% ·improvement in segmentaI perfusion .afier the procedure. In two patiens symptomatic afier PTCA, one showed angiographic patency and had > 15%improvement in perfusion, while the second showed no scintigraphic lmprovement (no angiographic data obtained). These preliminary observations suggest that 99mTc-sestamibi is an iUlportant adjunct to angiography in estimating the amount of myocardium "at risk" before and after PTCA.

A isquemia seguida de reperfusão está associada com a ativação de uma cascata de eventos danosos intimamente relacionados ao estresse oxidativo. Durante a isquemia, ocorre o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), que durante a reperfusão, é favorecida pelo restabelecimento da tensão de oxigênio. Uma vez que a utilização de antioxidantes exógenos parece exercer efeitos benéficos apenas nas fases iniciais das doenças cardiovasculares, o sulforafano (SFN) é uma nova estratégia terapêutica que atua estimulando a produção da maquinaria antioxidante endógena. Este composto é um isotiocianato natural encontrado em vegetais crucíferos, como o broto de brócolis, que demonstra ter um efeito cardioprotetor associado a sua ação estimulatória sobre a reserva antioxidante endógena. Poucos estudos até o momento evidenciaram o potencial cardioprotetor do SFN na isquemia e reperfusão miocárdica. O objetivo deste estudo, portanto, foi testar a hipótese de que o pré-tratamento com SFN poderia modular a função ventricular pós-isquêmica, atenuando o estresse oxidativo de corações isolados de ratos submetidos à isquemia e reperfusão. Ratos Wistar machos pesando entre 250 – 300g foram tratados por três dias com SFN (10mg/kg/dia i.p.) ou veículo. Vinte e quatro horas após a última injeção, os ratos foram mortos e seus corações foram retirados rapidamente e submetidos à isquemia global em aparelho do tipo Langendorff. Os corações foram perfundidos com solução Krebs-Henseleit por um período pré-isquêmico de 20 minutos (estabilização), seguido por isquemia global normotérmica de 20 minutos e 20 minutos de reperfusão. Foram avaliados os seguintes parâmetros: frequência cardíaca (FC), pressão sistólica do ventrículo esquerdo (PSVE), pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE), índice de contratilidade (+dP/dt), índice de relaxamento (-dP/dt) e pressão de perfusão coronariana (PP). Ao final do protocolo, os corações foram pesados e congelados a -80ºC para posteriores análises bioquímicas e moleculares. Foram analisadas a expressão da SOD, CAT, GPx e heme oxigenase-1 (HO-1) e atividade da SOD, CAT, GPx, TrxR, Grx e GST, bem como a produção de EROs totais e lipoperoxidação evidenciada pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico em homogeneizados dos corações pós isquêmicos. Os resultados deste trabalho mostram que o SFN foi capaz de estimular a 6 maquinaria antioxidante intracelular através do aumento significativo de 66% da expressão de ambas as enzimas SOD e HO-1. Ainda, foi capaz de diminuir a produção de EROs totais em 7%. Entretanto, não foi capaz de estimular a expressão de enzimas como a CAT e a GPx. As atividades destas enzimas, bem como das enzimas TrxR, Grx e GST também não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Não foram encontradas diferenças entre os grupos também na lipoperoxidação. Quanto à mecânica cardíaca, o SFN não foi capaz de modular a função ventricular pós isquêmica no regime de tratamento utilizado. Como conclusão, o pré tratamento com SFN na dose de 10 mg/kg/dia foi capaz de estimular a expressão de antioxidantes endógenos importantes, tais como a HO-1 e a SOD. Entretanto, o aumento na expressão não repercutiu em suas atividades enzimáticas e, dessa forma, não se observou modificação na função ventricular pós-isquêmica dos corações submetidos à isquemia-reperfusão. / Ischemia followed by reperfusion activates a cascade of injurious events closely related to oxidative stress. During ischemia, generation of reactive oxygen species increases and even more in reperfusion with the reestablishment of oxygen tension. Once exogenous antioxidants seem to exert beneficial effects only in initial phases of cardiovascular diseases, sulforaphane (SFN) is a new therapeutic strategy which acts stimulating endogenous antioxidant machinery. This compound is a natural occurring isothiocyanate, found in cruciferous vegetables as broccoli sprouts, which demonstrates a cardioprotective capacity associated with its capacity of stimulating the antioxidant endogenous reserve. There are few studies until the moment evidenciating the cardioprotective role of SFN on ischemia-reperfusion. The aim of this study was to test the hypothesis that pre-treatment with SFN could modulate the post-ischemic ventricular function, attenuating oxidative stress in isolated hearts submitted to ischemia-reperfusion. Male Wistar rats weighing between 250 – 300g were treated for three days with SFN (10mg/kg/day i.p.) or vehicle. Twenty four hours after the last injection, rats were decapitated and their hearts were rapidly excised and submitted to global ischemia in a Langendorff’s apparatus. Hearts were perfused with a Krebs-Henseleit solution for a pre-ischemic period of 20 minutes (stabilization), followed by normotermic global ischemia of 20 minutes and 20 minutes of reperfusion. The following parameters were evaluated: heart rate (HR), left ventricular systolic pressure (LVSP), left ventricular end diastolic pressure (LVEDP), contractility index (+dP/dt), relaxation index (-dP/dt) and coronary perfusion pressure (PP). At the end of protocol, hearts were weighed and frozen at -80ºC for posterior biochemical and molecular analysis. The expression of SOD, CAT, GPx and heme oxygenase-1 (HO-1) and activity of SOD, CAT, GPx, TrxR, Grx and GST, as well as total reactive oxygen species production and lipid peroxidation evidenciated by thiobarbituric reactive substances analysis were performed in homogenates of post-ischemic hearts. The results of the present study show that SFN was capable to stimulate the antioxidant intracellular machinery due to a significant increase of 66% in the expression of both SOD and HO-1 enzymes. Moreover, it was capable to reduce ROS production by about 7%. Although, it was not capable to induce CAT and GPx expression. The activities of these enzymes, as well as TrxR, Grx and GST did not present significant differences between groups. 8 No differences between groups were found in lipid peroxidation. Regarding to mechanical function, SFN was not capable to modulate post-ischemic ventricular function with the treatment regimen used. In summary, pre-treatment with 10 mg/kg/day SFN was capable to stimulate the expression of important endogenous antioxidants, such as HO-1 and SOD. However, the increase on the expression did not reflect in its enzymatic activities and, thereby, no modification on post-ischemic ventricular function of the hearts submitted to ischemia-reperfusion was observed.