Se realizaron seis experimentos con la finalidad de estudiar diversos factores que afectan la respuesta superovulatoria en bovinos. Se hicieron estudios ecográficos para determinar estructuras foliculares y luteales y muestreos sanguíneos para cuantificar los niveles plasmáticos de progesterona. Se utilizaron vaquillonas y vacas con ciclos estrales regulares de raza Aberdeen Angus con el objetivo de estudiar el efecto de aplicar FSH-P en dosis reducida, combinada con eCG (subcutánea) sobre la respuesta superovulatoria. / Six experiments were carried out aimed at studying different factors affectins superovulatory response in bovine cattle. Ecographic studies were taken to quantify progesterone plasmatic levels. In order to consederer the effects on superovulatory response of a unique dose of FSH-P or a reduced dose of FSHP (subcutaneous). Abeerden Angus hiefers and cows, both of regular estrous cycles were used.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias / La hembra canina presenta características reproductivas particulares comparado con las otras especies de mamíferos domésticos, donde destaca el arresto meiótico prolongado del ovocito reanudando la meiosis posterior a la ovulación. El desarrollo del ovocito es regulado por señales entre el ovocito y las células foliculares que le rodean mediante conexones constituidos por conexinas, de ellas la Conexina 43 es la proteína con mayor expresión en el ovario. El objetivo de este trabajo fue estudiar la expresión génica de Cx43 y de su proteína en células foliculares de perra durante el desarrollo folicular y a lo largo del ciclo estral. Usando un lupa estereoscópica se aislaron células de folículos preantrales y antrales de ovarios de perra en anestro, proestro, estro y diestro. Se utilizó q-PCR para la evaluación de los niveles de mARN y Western Blot e lnmunohistoquímica para la cuantificación y localización de la proteína respectivamente. Los valores de expresión génica y densidad óptica de las bandas de Western Blot se analizaron con ANOVA; además, se hicieron correlaciones de Pearson. La Cx43 se encontró en todos los folículos desde folículo primordial hasta preovulatorio, la expresión del gen de Cx43 y su proteína codificante varió a lo largo del ciclo estral, presentando los mayores niveles de mARN en anestro (P<0,05) y los mayores niveles de Cx43 en diestro (P<0,05), adicionalmente la expresión de mRNA y de Cx43 no disminuyeron en folículos preovulatorios, sugiriendo que la comunicación entre el ovocito y las células foliculares se mantienen, lo que podría explicar el arresto meiótico prolongado de la perra. La correlación entre mARN y proteína fue negativa en la mayoría de etapas del ciclo, lo que se podría asociar a los mecanismos de control traduccional a las que son sometidas las conexinas. / The female canine has particular reproductive characteristics compared to the other species of domestic mammals, where it stands out the prolonged meiotic arrest of the oocyte that resumes meiosis after ovulation. Oocyte development is regulated by signals between the oocyte and follicular cells that sorround it by connexons constituted of connexins, of these, Connexin 43 is the protein with the highest expression in the ovary. The objective of this work was to study the gene expression of Cx43 and its protein in dog follicular cells during follicular development and throughout the estrous cycle. Using a stereoscopic magnifying glass, cells were isolated from preantral and antral follicles of the ovaries of bitches in anestrus, proestrus, estrus and diestrus. q-PCR was used for the evaluation of mRNA levels and Western Blot and lmmunohistochemistry for the quantification and localization of the protein respectively. The values of gene expression and optical density of the Western Blot bands were analyzed with ANOVA; in addition , Pearson correlations were made. The Cx43 was found in all the follicles from primordial to preovulatory, the expression of the Cx43 gene and its coding protein varied throughout the estrous cycle, presenting the highest levels of mRNA in anoestrus (P <0.05) and the highest levels of Cx43 in diestrus (P <0.05), additionally the expression of mRNA and Cx43 did not decrease in preovulatory follicles, suggesting that communication between the oocyte and follicular cells is maintained, which could explain the prolonged meiotic arrest of the dog. The correlation between mRNA and protein was negative in most stages of the cycle, which could be associated with the mechanisms of translational control to which connexins are subjected. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1171670

El objetivo de la presente tesis fue estudiar qué factores pueden explicar la variabilidad existente en la congelabilidad espermática entre eyaculados, la integridad del ADN en los espermatozoides descongelados, la posibilidad de adaptar el protocolo de criopreservación a las necesidades cada verraco y, el posible papel del plasma seminal en la congelabilidad espermática. Los resultados revelaron que el verraco es el factor más importante capaz de explicar la diferente susceptibilidad entre eyaculados para soportar el proceso de criopreservación y que la variabilidad dentro de un mismo verraco es baja. El grado de fragmentación del ADN de los espermatozoides porcinos descongelados es relativamente bajo, y ligeros ajustes en la concentración de glicerol y la velocidad de descongelación, permiten mejorar la supervivencia espermática, especialmente de aquellos eyaculados considerados como "malos congeladores. Finalmente, la suplementación del medio de congelación con plasma seminal de individuos con buena congelabilidad tiene un efecto beneficioso sobre la congelabilidad espermática. / The aim of this thesis was to study which factors could explain part of the ejaculate variation in sperm freezability, the incidence of DNA fragmentation in frozen-thawed boar spermatozoa, whether different boars require modifications in the freezing and thawing protocol to enhance sperm cryosurvival and, the possible role of seminal plasma in boar sperm freezability. The results revealed that boar is the most important factor explaining the different susceptibility among ejaculates to sustain cryopreservation and that the intra-boar variability is relatively low. The overall DNA damage in frozen-thawed boar sperm is low and slight adjustment of the glycerol concentration and warming rate provides a better sperm cryosurvival, particularly in those ejaculates which are considered as "bad" freezers. Finally, supplementation of freezing media with seminal plasma from males with "good" freezability, has a beneficial effect on post-thaw sperm cryosurvival

En ganado porcino, los resultados de fertilidad (fertilidad y tamaño de camada) obtenidos con semen congelado no son equiparables a los obtenidos con semen refrigerado (a 15-17ºC). Durante los procesos de congelación y de descongelación, los espermatozoides sufren modificaciones que en último término van a provocar una alteración de su funcionalidad. El proceso de crioconservación espermática produce una desestabilización de la membrana en la que se ha observado una pérdida de colesterol. En especies sensibles al choque térmico (incluida la especie porcina), se ha observado una mejora en la calidad del semen post-descongelación, cuando los espermatozoides son incubados con ciclodextrinas saturadas de colesterol (CLC) antes del proceso de crioconservación. El objetivo de esta tesis ha sido determinar cómo afecta este tratamiento pre-congelación con CLC a la funcionalidad in vitro y fertilidad in vivo e in vitro de los espermatozoides congelados-descongelados de la especie porcina. La funcionalidad espermática in vitro se evaluó mediante los siguientes parámetros: resistencia osmótica, movilidad e integridad de la membrana plasmática, estado y dinámica de capacitación, capacidad de adherencia a células epiteliales del oviducto y dinámica de la integridad de la cromatina. Para ello se utilizó un sistema computerizado de movilidad, y se pusieron a punto diferentes técnicas de citometría de flujo y manejo in vitro de cultivos celulares. La fertilidad in vitro se evaluó mediante un test de penetración de ovocitos inmaduros (recuperados de ovarios de cerdas en matadero) y la fertilidad in vivo se evaluó en cerdas que recibieron un tratamiento de sincronización de celo (con PMSG) e inducción de la ovulación (con hCG) tras el destete (se realizó una única inseminación cervical a las 37 ó 30 h de la inyección con hCG). El tratamiento de los espermatozoides de verraco con 1 mg CLC/120 x 106 de espermatozoides, amplió los límites de resistencia osmótica (tanto hipo- 50, 75 y 15 / Tomás Almenar, C. (2012). EFFECT OF THE PRE-FREEZING TREATMENT OF BOAR SPERM WITH CHOLESTEROL-LOADED CYCLODEXTRINS ON THE FUNCTIONALITY AND THE FERTILIZING ABILITY OF THE SPERM AFTER CRYOPRESERVATION [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/18142 / Palancia

Cuando Darwin postuló la teoría de Selección Sexual pudo explicar elaboradas características presentes normalmente en los machos que no podía predecir con la teoría de Selección Natural. Bajo esta teoría predijo que en general las hembras tenderán a ser el sexo selectivo y recurso escaso por el cual compiten los machos. Los arácnidos ofrecen un interesante modelo sexual entre los artrópodos para analizar procesos de selección sexual post-cópula como elección femenina y competencia espermática. Las arañas migalomorfas poseen caracteres plesiomórficos, por lo que el estudio en este grupo constituye un punto inicial para formular hipótesis evolutivas de comportamiento. Como objetivo general de la presente tesis se propone interpretaciones evolutivas para los patrones observados en el comportamiento sexual y estructuras reproductivas, comparando los datos obtenidos en las tarántulas Grammostola vachoni Schiapelli & Gerschman, 1961, Plesiopelma longisternale (Schiapelli & Gerschman, 1942) y la neméside Acanthogonatus centralis Goloboff, 1995 con los registrados en otras especies para contribuir al conocimiento de la biología reproductiva de los arácnidos. A partir de los resultados obtenidos, se amplía el conocimiento sobre los ciclos de vida y patrones de cortejo y cópula de las tres especies modelo. Con respecto a los estudios de comunicación química se halló que entre machos y hembras de A. centralis y P. longisternale no intervienen señales químicas aéreas pero si señales quimio-táctiles en la tela de las hembras que disparan el cortejo de los machos. Además los machos de A. centralis han desarrollado la capacidad de diferenciar entre las hembras y que éstas pueden advertir sobre su estatus reproductivo y receptividad. En relación al estudio de la trasferencia de esperma en A. centralis, no se encontró relación entre la duración de la cópula con la cantidad de esperma almacenado por la hembra así como tampoco con el remanente en los bulbos de los machos. No obstante, existiría un mayor control interno del almacenado de esperma por parte de la hembra, así como también una amplia comunicación de la pareja previa a la cópula y posterior a ella. Por medio de este trabajo se pudo confirmar la existencia de dimorfismo sexual en el tamaño corporal de las tres especies, además las hembras de A. centralis poseen mayor porcentaje de grasas e índice corporal que los machos, aunque se encontraron iguales porcentajes de musculatura en patas. Pero las hembras de A. centralis y G. vachoni, no mostraron superior inmunidad que los machos frente a un agente extraño. Por último con respecto a las variaciones entre las poblaciones de las arañas estudiadas, en las tarántulas P. longisternale y G. vachoni no se observaron diferencias en su repertorio de cortejo. En cambio A. centralis mostró un inicio de aislamiento reproductivo, que estaría en diferentes fases según la población. Los estudios realizados en estas arañas muestran que, pese a las dificultades que el grupo posee, interesantes patrones y mecanismos están presentes y son posibles de estudiar, brindando características de un grupo basal que ayudaría a entender la evolución de un clado más grande. / When Darwin proposed the theory of Sexual Selection has been able to explain the elaborated traits present in males who cannot be explained with the Natural Selection theory. Under this theory, he predicted that in general females will tend to be the selective sex and a limited resource for which males compete. Arachnids are an interesting sexual model among arthropods to analyze post-copula process of sexual selection such as female choice and sperm competition. Mygalomorph spiders have plesiomorphic traits, so, the study of this group of spiders constitutes the starting point to formulate evolutionary hypothesis of behavior. As a general objective of the present thesis, evolutionary interpretations for the observed patterns in sexual behavior and reproductive structures were proposed, comparing the data obtained in the tarantulas Grammostola vachoni Schiapelli & Gerschman, 1961, Plesiopelma longisternale (Schiapelli & Gerschman, 1942) and the nemesid Acanthogonatus centralis Goloboff, 1995 with the registered in other species to contribute to the knowledge of the reproductive biology of arachnids. Based on the results obtained, the knowledge of the life cycles and courtship and copula patterns of the three model species were broadened. Regarding to chemical communication studies, the results showed that there were no aerial chemical signals between males and females, but there were chemotactic signals that triggered the courtship in males. In addition, males of A. centralis have developed the ability to differentiate between females and this ability could use to inform them about the reproductive status and receptivity of the females. In relation to the sperm transfer study in A. centralis, no relationship was found between copula duration and the amount of sperm stored, or with the remained in the male’s bulbs. However, there would be a higher internal control of the sperm storage by the female, as well as broad communication of the couple before and after the copula. Through this thesis it was possible to confirm the existence of sexual dimorphism in the body size of the three species. In addition, females of A. centralis have a higher percentage of fats and body index than males, although similar percentages of musculature in legs were found. Females of A. centralis and G. vachoni did not show higher immunity than males against a foreign agent. Finally, regarding the variations between populations of the spiders studied, in the tarantulas P. longisternale and G. vachoni no differences were observed in their courtship repertoire. Contrarily, A. centralis showed a beginning of reproductive isolation, which would be in different phases according to the population. The studies carried out in these spiders showed that, despite the difficulties that this particular group of spiders has, interesting patterns and mechanisms are present and are possible to study, providing characteristics of a basal group that would be help to understand the evolution of a large clade.

La vaca lletera d’alta producció actual pateix un estrés metabòlic ques’uneix a altres tipus d’estrés com el del part i de la gestació. Malgratles millores en nutrició i genètica, la eficàcia reproductiva d’aquestsanimals ha anat disminuint any rere any. Per aquest motiu, l’objectiud’aquesta tesi es establir un protocol diagnòstic i terapèutic durant els dies 15-21 postpart que identifiqui els animals amb endometritis i millori la recuperació postpart de vaques lleteres d’alta producció. Alhora, es planteja un protocol desincronització basat en progesterona intravaginal aplicat juntament ambgonadotropina coriònica equina. Aquest protocol pretén millorar laeficàcia reproductiva de la vaca lletera d’alta producció, amb elevat nombre d’anestre postpart. / La vaca lechera de alta producción actual sufre un estrésmetabólico quese une a otrostipos de estrés, como pueden ser el parto o la gestación. Apesar de las mejoras en nutrición y genética de los últimosaños, laeficacia reproductiva de estos animales ha disminuidoconsiderablemente. Por este motivo el objetivo de esta tesis es establecer un protocolodiagnóstico y terapéuticodurante los días 15-21 postparto que identifique los animales con endometritis y mejore la recuperaciónpostparto de las vacaslecheras de alta producción. A suvez se plantea un protocolo de sincronizaciónbasado en progesteronaintravaginalimplementado con gonadotropina coriónica equina (eCG). Esteprotocolopretendemejorareficaciareproductiva de la vaca lechera dealta producción, especialmente de las vacasanéstricas. / Nowadays, high producing dairy cow suffers a metabolic stress that may be associated to other stress such as parturition or gestation.Despite the nutritional and genetic improvements in last decades,reproductive performance has dramatically decreased. For that reason, the aims of this thesis are to implement a diagnostic and therapeutic protocol during Days 15-21 postpartum that detect cows suffering from endometritis and to improve postpartum involution and subsequent reproductive performance in high producing dairy cows. Moreover, a progesterone based synchronization protocol plus equine chorionic gonadotrophin (eCG) is tested. The objective of this protocol is to improve the reproductive performance of high producing dairy cows, especially anestric cows.

El objetivo del presente estudio ha sido evaluar la relación entre los parámetros de la calidad seminal y la capacidad de penetración in vitro de ovocitos homólogos (PIVh) con los resultados in vivo de fertilidad y prolificidad.Se han analizado 60 eyaculados realizando sobre cada uno las medicionesclásicas del espermiograma (motilidad, calidad de movimiento, volumen, concentración espermática, estado del acrosoma, morfoanomalías y tinción vital), pruebas bioquímicas (contenido de ATP, calcio, sodio, potasio, magnesio y zinc), ensayos de la funcionalidad del espermatozoide ( test de endósmosis, test del diacetato de carboxifluoresceína, test ORT) y la valoración mediante un test de penetración in vitro homóloga. Los resultados de la valoración in vitro del semen fueron contrastados con los resultados obtenidos en un ensayo in vivo con inseminaciones homospérmicas.En nuestras condiciones experimentales el estudio de los parámetros demotilidad, morfología, acrosomas y de los test de funcionalidad de la membrana puedeser una herramienta útil, en un primer término, para desechar eyaculados de baja calidad, aunque estas técnicas no alcanzan la sensibilidad suficiente para dar un resultado satisfactorio en la predicción de la fertilidad. Sin embargo, los resultados obtenidos muestran que el test de penetración in vitro es la única técnica de las estudiadas capaz de discriminar adecuadamente los eyaculados que darán lugar a los distintos grupos de fertilidad. / The purpose of the present study was to evaluate the relationship between theparameters of seminal quality and homologous oocytes in vitro penetration capacityversus the reproductive parameters, fertility and litter size which were bothdetermined in a field trial.Sixty boar ejaculates have been analysed, performing on each of them:conventional semen analysis (motility, volume, sperm concentration, normal acrosome, morphology and structural integrity), biochemical parameters (ATP, calcium, sodium, potassium, magnesium and zinc), functional sperm assays (Hypoosmotic swelling test (HOST), Carboxiflorescin Diacetate Test (DCF), Osmotic Resistance Test (ORT)) and the homologous in vitro penetration test. The results observed upon a in vitro semen valoration were checked with those obtained upon a in vivo trial with homospermic insemination.In our experimental conditions the study of motility, morphology, normalacrosomes and functional test may be a good tool, in a first analysis, to get rid of poor seminal quality ejaculates. Still, this analysis is not accurate enough to bring outsatisfactory results to predict the in vivo fertilization capacity. In the light of theseresults only the homologous in vitro penetration test has been found able todiscriminate the different groups of fertility and litter size. None the less an extensive study is required.

En la siguiente tesis se obtuvieron los siguientes resultados. La adición de plasma seminal a los espermatozoides altamente diluidos ejerce un efecto beneficioso variable dependiendo de la fuente de plasma seminal. El heterodímero PSP-I/PSP-II ejerce un efecto beneficioso sobre los espermatozoides altamente diluidos mediante su adhesión al acrosoma. La incubación produce la migración del heterodímero a la región post-acrosomal, siendo eliminado de la superficie espermática. La adición del heterodímero a los medios de cocultivo entre gametos disminuye significativamente la capacidad fecundante de los espermatozoides. La preincubación de los espermatozoides de verraco tanto frescos como congelados preserva la viabilidad y motilidad espermáticas no afecta a la capacidad fecundante de los espermatozoides frescos de verraco y disminuye la capacidad fecundante de los espermatozoides congelados, la cual puede ser restaurada parcialmente mediante un lavado a través de un gradiente de Percoll. / The addition of 10% of seminal plasma from certain boars maintains or enhances the viability of largely extended boar spermatozoa in vitro. The protective effect of the PSP-I/PSP-II heterodimer on highly-extended boar spermatozoa could be related to the adhesion of the heterodimer to the acrosome. Exposures of the gametes to the heterodimer during in vitro gamete co-incubation significantly decrease the sperm penetration rates and number of spermatozoa per oocytes in denuded oocytes. The effect could be mediated by exposed ZP receptors. Exposure of fresh or frozen-thawed boar spermatozoa to PSP-I/PSP-II preserves sperm viability and motility. Although there is no obvious influence of the heterodimer on the capability of fresh diluted boar spermatozoa to penetrate homologous oocytes, PSP-I/II exerts a deleterious effect when frozen-thawed spermatozoa are used to penetrate IVM-oocytes. A subsequent washing through a Percoll gradient estored sperm function in some of the cells.

El objetivo de este trabajo ha sido evaluar la capacitación y reacción acrosómica de espermatozoides de verraco eyaculados lavados a través de un gradiente de percoll y no lavados e incubados en medio de fecundación M199 suplementado con progesterona o con complejos cumulus-ovocito así como la penetración espermática de estos con ovocitos homólogos madurados in vitro. La determinación de la capacitación se realizó mediante el uso de lectinas (PNA, SJA y ECA) y citometría de flujo. Los resultados mostraron que la progesterona posee efecto protector sobre la vitalidad espermática y los mayores porcentajes de reacción acrosómica ocurren ente los 45-90 minutos de incubación, En cuanto a la penetración espermática no hubo diferencias entre espermatozoides lavados y no lavados. / The purpose of the present study was to evaluate the sperm capacitation and acrosome reaction of spermatozoa washed in Percoll and unwashed undergo in an in vitro incubation system with progesterone or cumulus-oocyte and the penetration rate in homologous oocytes matured in vitro. The evaluation was done with lectin (PNA, SJA and ECA) and flow cytometry. The results shown that progesterone had a protective effect on sperm vitality and the highest percentages of acrosome reaction were obtained between 45-90 minutes of incubation. The penetration rate was similar between washed and unwashed spermatozoa.

Orientador: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Resumo: Objetivou-se avaliar e descrever as características ultrassonográficas (modo B, Doppler e elastrográfica) de tecidos materno-fetais (pulmão, fígado, rins, placentônio e cérvix) em ovelhas gestantes de parto natural ou prematuro induzido; verificar diferenças de achados entre os tipos de parto e, correlacionar com os valores obtidos dos sinais específicos do parto e impedância do muco vaginal, visando predizer a proximidade do processo de parturição. Trinta ovelhas Santa Inês adultas foram selecionadas e divididas em dois grupos: Parto Normal-GPN (n=15); e Parto Prematuro Induzido-GPPI (n=15). Os animais foram avaliados a cada 12 horas até o momento da parturição (última semana gestacional), as ovelhas pertencentes ao GPN a partir do 143º dia de gestação e as do GPPI, a partir do 135º dia de gestação (dia correspondente à indução do parto com betametasona e antiprogestágeno aglepristona). Foram avaliadas as estruturas pulmonares, renais e hepática dos conceptos, placêntonio e cérvix, obtendo-se as caraterísticas ultrassonográficas convencional e Doppler (placentônio e artéria uterina), elastografia quantativa (velocidade de cisalhamento – m/s), além dos batimentos cardíacos fetais, impedância do muco vaginal e, presença de sinais específicos e comportamentais do parto (edema vulvar, isolamento, ingurgitamento de úbere e temperatura vulvar). O nível de significância utilizado foi de 5% (p < 0,05) para todos os testes estatísticos realizados. A temperatura vulvar média foi maior... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate and describe the ultrasonographic characteristics (B mode, Doppler and elastographic) of maternal-fetal tissues (lung, liver, kidneys, placentonium and cervix) in pregnant ewes with normal and induced preterm parturition; to verify differences of findings between the types of lambing and to correlate with the values obtained from specific signs of lambing and impedance of vaginal mucus, aiming to predict the proximity of the parturition process. Thirty adult Santa Inês sheep were selected and divided into two groups: Parturition at term-GPN (n=15); and Induced pre-term parturition-GPPI (n=15). The animals were evaluated every 12 hours until the moment of parturition (last gestational week), the ewes belonging to the GPN from the 143rd day of gestation and those of the GPPI from the 135th day of gestation (day corresponding to the induction of lambing with betamethasone and antiprogestin aglepristone). Pulmonary, renal and hepatic structures of the concepts,, placentonium and cervix were evaluated, obtaining the conventional ultrasound and Doppler ultrasound characteristics (placentonium and uterine artery), quantitative elastography (shear velocity - m / s), in addition to fetal heart rate, impedance of vaginal mucus and presence of specific and behavioral signs of lambing (vulvar edema, isolation, udder engorgement and vulvar temperature). The significance level used was 5% (p <0.05) for all statistical tests performed. Mean vulvar tempe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor