La aplicación de procesos biotecnológicos como la separación de espermatozoides X e Y mediante citometría de flujo, pueden generar la eliminación de determinados componentes del plasma seminal necesarios para conservar su funcionalidad. En este sentido, se ha observado que la adición de plasma seminal al medio espermático, protege a los espermatozoides cuando estos son sometidos a separación espermática mediante citometría de flujo. Sin embargo, diversos estudios demuestran que rel efecto beneficioso que ejerce el plasma seminal sobre los espermatozoides reside en determinadas proteínas. En el caso de la especie porcina, hay estudios previos que determinan que el efecto protector que ejerce el plasma seminal sobre los espermatozoides, se debe a una proteína denominada heterodímero PSP-I/PSP-II. El efecto beneficioso de dicha proteína sobre la funcionalidad espermática en espermatozoides de verraco altamente diluidos parece estar conservada, en su subunidad PSP-II y, concretamente, en la fracción peptídica de ésta. Estudiar, además, su localización a lo largo del tracto genital del verraco así como en las distintas fracciones del eyaculado, puede ser importante para llegar a conocer si la presencia de este heterodímero en el medio de recogida espermático de espermatozoides X e Y, es beneficioso tanto en la funcionalidad como en la capacidad fecundante de estos espermatozoides. / Biotechnological procedures of semen, such as sexing using flow cytometry/cell sorting procedures, causes high dilutions during sperm manipulation, linked with the wash away or high dilution of seminal plasma components. Thus, to develop strategies to extend the viability of treated spermatozoa are necessary. It is well known that add seminal plasma (SP) to the sperm media contributes to preserving the integrity and the fertilizing potential of sperm. Nevertheless, the beneficial effects of seminal plasma seem to be restricted to specific proteins of the SP. In porcine, previous studies have related this protective effect of the seminal plasma on the sperm cells to a protein called PSP-I/PSP-II heterodimer. The beneficial effect of this protein on the functionality of highly diluted boar spermatozoa is largely preserved in its PSP-II subunit and does not appear to require its glycan moiety. Moreover, study its localization along male reproductive tract and in different portions of the ejaculate could be important to know if the presence of PSP-I/PSP-II heterodimer in the collection medium for sex sorted spermatozoa is beneficial on the in vitro function and in vivo fertilizing ability.

En un intento de optimizar el sistema de fecundación in vitro en la especie porcina se estudió la influencia de distintas condiciones de maduración y de cocultivo de los gametos. Se evaluó la reducción del tiempo de coincubación de los gametos a 10 min observándose un claro efecto del ratio espermatozoides:ovocito. El estudio de las necesidades de los espermatozoides en términos de aditivos del medio de fecundación y tiempo de coincubación reveló variaciones entre verracos. La utilización de un tiempo de coincubación tan corto como 2 min fue suficiente para obtener unas tasas de penetración y monospermia similares a las alcanzadas por los sistemas de FIV tradicionales. El sistema de FIV en pajuela con 10 min de coincubación aumentó la penetración monoespérmica y mejoró la calidad de los blastocistos. La adición de 5 nM de 9- cis ácido retinoico al medio de maduración aumentó significativamente la formación de blastocistos. / The present study was conducted in an attempt to optimize porcine in vitro fertilization system. For this purpose, the influence of maturation and gamete coculture conditions were studied. The coincubation time may be reduced to 10 min to increase the efficiency of fertilization depending on the sperm:oocytes ratio. The needs of boar spermatozoa for IVF, in terms of additives to IVF medium and coincubation times vary among boars. The use of coincubation time as brief as 2 min is long enough to obtain good fertilization rates similar to those achieved from current long term exposure times in IVF. A straw IVF system in combination with a 10 min coincubation increased monospermic penetration and the quality of blastocysts compared with the microdrop-IVF system. The addition of 5 nM of 9- cis retinoic acid in the IVM medium increased blastocyst formation rate, suggesting that RA may play an important role during IVM.