Submitted by Stephany Silva (stephany.silva@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-15T13:08:03Z No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) / Approved for entry into archive by Adagilson Silva (adagilson@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-15T13:34:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:34:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A pesquisa de lesão estrutural do cérebro em pacientes com crise epiléptica e epilepsia é fundamental no diagnóstico e tratamento da síndrome epiléptica. O objetivo do estudo foi determinar freqüência e associação entre características clínicas e presença de lesões estruturais do encéfalo detectadas no exame de ressonância magnética, com o status e as formas clínicas da epilepsia. Avaliou-se o perfil clínico dos pacientes e das lesões estruturais do encéfalo na imagem por ressonância magnética em 140 pacientes com epilepsia ou crise epiléptica, encaminhados para exame de ressonância magnética e catalogados por demanda espontânea, desde outubro de 2003 até janeiro de 2005. O estudo foi do tipo caso-controle com casos prevalentes. A idade variou de um a 59 anos (mediana de 15,0 anos), sendo 51,6 por cento do gênero masculino. A crise epiléptica foi focal em 55 por cento, a freqüência mensal de até 10 crises foi registrada em 77,6 por cento e o exame neurológico foi normal em 64,2 por cento dos pacientes. Epilepsia farmacoresistente foi identificada em 76,3 por cento e crise epiléptica única em 15,7 por cento. A imagem por ressonância magnética foi anormal em 72,8 por cento dos pacientes. O lobo temporal foi local para 50,5 por cento das alterações. As mais encontradas foram: anormalidades no hipocampo (41,1 por cento); malformações do desenvolvimento cortical (19.6 por cento); isquemia (5,8 por cento); tumor (6,8 por cento); cavernoma(2,9 por cento); facomatose (4,9 por cento); cicatriz (4,9 por cento); inflamatório (4,9 por cento); outras (8,8 por cento). A alteração estrutural na imagem de ressonância magnética foi mais presente entre os pacientes com epilepsia focal e farmacorresistente, sendo o lobo temporal a região com mais alterações. Os pacientes com tumor cerebral apresentaram mais CE focal e a atrofia do córtex cerebral foi alteração freqüente na IRM de pacientes com epilepsia farmacorresistente. Os pacientes com idade maior de 15 anos, número mensal maior de crises e epilepsia sintomática apresentaram maior risco para CE focal e aqueles com crise epiléptica única apresentaram mais CE generalizada. O risco para epilepsia farmacorresistente foi maior entre os pacientes com anormalidades no exame de ressonância magnética, antecedente pessoal e exame neurológico anormais (AU)

Pacientes com câncer de mama localmente avançado são submetidas à quimioterapia neoadjuvante na tentativa de reduzir a dimensão do tumor e aumentar a possibilidade da realização de uma cirurgia conservadora. Nosso grupo identificou previamente através da tecnologia de cDNA microarray, trios de genes, incluindo BZRP, CLPTM1, MTSS1, NOTCH1, NUP210, PRSS11, RPL37A, SMYD2 e XLHSRF-1, cuja expressão era capaz de predizer a resposta à quimioterapia neoadjuvante com doxorrubicina e ciclofosfamida em pacientes com câncer de mama. No presente estudo, avaliamos se a expressão destes genes é reprodutível na identificação de pacientes responsivas e não-responsivas através de RT-PCR em tempo real, que representa uma técnica mais acessível. Avaliamos inicialmente amostras de 28 pacientes anteriormente estudadas (grupo de validação técnica = 23 responsivas e cinco não-responsivas) e a seguir um grupo de 14 novas pacientes (grupo de validação biológica = 11 responsivas e três não-responsivas). Dentre os trios de genes inicialmente identificados, a expressão de RPL37A + XLHSRF-1 + NOTCH1 e RPL37A + XLHSRF-1 + NUP210 classificou corretamente 86% (24/28) das amostras do grupo de validação técnica e 71% (10/14) das amostras do grupo de validação biológica, através de análise de classificação discriminante. Desse modo, esses trios não demonstraram a mesma precisão em comparação com resultados de cDNA microarray. Uma nova análise combinatória foi realizada na procura do melhor modelo preditivo utilizando valores de expressão obtidos por RT-PCR em tempo real. Identificamos então um novo trio, composto pelos genes RPL37A, SMYD2 e MTSS1, cuja expressão classificou corretamente 93% das amostras do grupo de validação técnica (22/23 responsivas e 4/5 não-responsivas) e 79% do grupo de validação biológica (8/11 responsivas e 3/3 não-responsivas). Portanto, o teste apresentou 88% de sensibilidade e especificidade em detectar pacientes responsivas para o total de amostras analisadas. Ao verificarmos o poder de classificação do mesmo grupo de genes, utilizando os valores de expressão pela análise de cDNA microarray, observamos um resultado semelhante (91% de sensibilidade e especificidade em reconhecer as amostras responsivas). Dessa forma, demonstramos que o perfil de expressão gênica obtido com cDNA microarray é reprodutível através do uso de RT-PCR em tempo real. Um estudo integrando um maior número de pacientes e uma plataforma de cDNA microarray mais abrangente pode auxiliar na identificação de um modelo preditivo baseado em grupos de genes mais acurado para antever a resposta ao tratamento com quimioterapia baseada em doxorrubicina. / Patients with locally advanced breast cancer are submitted to primary chemotherapy as an attempt to reduce tumor dimension and increase breast conserving surgery rates. Our group has previously identified through cDNA microarray technology gene trios, including BZRP, CLPTM1, MTSS1, NOTCH1, NUP210, PRSS11, RPL37A, SMYD2 and XLHSRF-1, whose expression was capable of predicting response to neoadjuvant chemotherapy with doxorubicin and cyclophosphamide in breast cancer patients. In the current study, it was evaluated whether expression of these genes is reproducible in the identification of responsive and non-responsive patients by real time RT-PCR, which represents a more accessible technique. We initially evaluated samples from 28 patients earlier studied (technical validation group = 23 responsive and 5 non-responsive) and subsequent to a new 14 patients set (biological validation group = 11 responsive and three non-responsive). Among the initially identified gene trios, RPL37A + XLHSRF-1 + NOTCH1 and RPL37A + XLHSRF-1 + NUP210 expression correctly classify 86% (24/28) samples from the technical validation group and 71% (10/14) samples from the biological validation group, through discriminant classification analysis. Therefore, these trios didnt demonstrate the same precision as compared with cDNA microarray results. A new combinatorial analysis was also performed in search of the best predictive model using real time RT-PCR expression values. A new trio was identified, represented by RPL37A, SMYD2 and MTSS1 genes, whose expression correctly classified 93% samples from technical validation group (22/23 responsive and 4/5 non-responsive) and 79% samples from biological validation group (8/11 responsive samples and 3/3 non-responsive samples). Therefore, the test presented 88% sensibility and specificity in identifying responsive patients for all samples analyzed. By means of verifying the classification strength of the same gene group, using cDNA microarray expression values, we observed a similar result (91% sensibility and specificity in recognizing responsive samples). Thus, we demonstrated that gene expression profile obtained by cDNA microarray is reproducible through real time RT-PCR. A study integrating a larger number of patients and a more comprehensive cDNA microarray platform may help the identification of a more accurate predictive model based on gene groups to foresee response to doxorubicin-based chemotherapy treatment.

Introdução: O Clostridium difficile é um bacilo Gram-positivo, anaeróbio estrito, formador de esporos, que produz toxinas que podem causar diarreia, colite pseudomembranosa, dilatação do cólon, sepse e até morte. Nos últimos anos o quadro clínico e epidemiológico das infecções por Clostridium difficile tem se modificado e as limitações das opções terapêuticas tornaram-se mais evidentes. Objetivo Primário: Comparar as metodologias de disco-difusão e ágar-diluição na detecção de sensibilidade/resistência de isolados de Clostridium difficile. Objetivos Secundários: Avaliar prospectivamente o perfil de sensibilidade/resistência de isolados clínicos hospitalares de Clostridium difficile provenientes de seis hospitais terciários da cidade de São Paulo e fornecer evidências para fundamentar o diagnóstico e o tratamento empírico das diarreias causadas por Clostridium difficile. Métodos: utilizamos os métodos de disco-difusão e ágar-diluição, de acordo com os critérios estabelecidos pelo CLSI e EUCAST. Resultados: Os coeficientes de correlação observados entre os diâmetros dos halos de inibição e Concentração Inibitória Mínima foram abaixo do esperado tornando inviável o método de disco-difusão para determinação de sensibilidade aos antimicrobianos nitazoxanida, teicoplanina e tigeciclina. Todas as 50 cepas deste estudo foram sensíveis ao metronidazol (MIC50 foi de 1 ?g/mL a MIC90 foi de 2 ug/mL). Para o método de disco-difusão, sugerimos que halos de inibição >= 33mm possam ser interpretados como sensíveis. Devido à moderada correlação, significância estatística e distribuição de halos de inibição das amostras próximos aos valores encontrados utilizando a cepa ATTC, sugere-se a utilização do método de disco-difusão para vancomicina, onde halos com diâmetro >= 22mm possam ser considerados como sensíveis pelo método. Para o moxifloxacino houve uma boa correlação entre as duas metodologias: discodifusão e de ágar-diluição (O coeficiente de Pearson foi de -0,84, e o valor de p foi menor que 0,00001), sugerindo que halos de inibição >= 18mm possam ser interpretados como sensíveis pela metodologia de disco-difusão. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro (MIC50 foi 0,06 ?g/mL e a MIC90 de 0,12 ug/mL). Por se mostrar uma droga com potente atividade in vitro (MIC50 e a MIC90 foi de 0,12 ug/mL), a tigeciclina poderia ser mais uma opção terapêutica em infecções por Clostridium difficile, dependendo de mais estudos para avaliar sua real eficácia clínica e segurança. Conclusão: Os resultados verificados neste estudo indicam a necessidade de mais estudos in vitro e clínicos para definir os limites de sensibilidade/resistência para a teicoplanina e a nitazoxanida, pois faltam critérios de interpretação tanto para disco-difusão quanto para ágar-diluição. Os resultados deste trabalho in vitro confirmaram a utilidade do metronidazol como uma droga eficaz no tratamento de infecção por Clostridium difficile. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro por método dilucional. Sugerimos a utilização do método de disco-difusão para: metronidazol, vancomicina e moxifloxacino. Os resultados desse trabalho sugerem que halos de inibição para metronidazol ( >= 33mm), moxifloxacino ( >= 18mm) e vancomicina ( >= 22mm) poderiam ser considerados como sensíveis pelo método de disco-difusão. O método de ágardiluição é um método de boa acurácia, porém trabalhoso para ser executado na rotina laboratorial / Introduction: Clostridium difficile is a Gram-positive bacillus, strictly anaerobic, spore-forming, which produces toxins that can cause diarrhea, colitis pseudomembranous, colon expansion, sepsis and even death. In recent years the clinical and epidemiological picture of infection by Clostridium difficile has been modified and limitations of therapeutic options have become more evident. Primary Objective: Comparing the methods of disk diffusion and agar dilution in the detection sensitivity/resistance isolates of Clostridium difficile. Secondary Objectives: Prospectively evaluate the profile of sensitivity/resistance of hospital clinical isolates of Clostridium difficile from six tertiary hospitals in São Paulo city and provide evidence to support the diagnosis and empirical treatment of diarrhea caused by Clostridium difficile. Methods: We use the disk diffusion method and agar dilution method, according to the established criteria by CLSI and EUCAST. Results: The observed correlation coefficients between the inhibitions diameter zone of the and Minimum Inhibitory Concentration were under expectations impeding the disk diffusion method for determining sensitivity to nitazoxanide antimicrobial, teicoplanin and tigecycline. All 50 strains of this study were sensitive to metronidazole (MIC50 was 1 Ug/ml to MIC90 was 2 ug/ml). For the method disk diffusion, we suggest that inhibition zones >= 33mm can be interpreted as sensitive. Due to the moderate correlation, statistical significance and distribution of zones of inhibition on samples of the next found values using the strain ATTC, we suggest using the disk diffusion method for vancomycin where halos diameter >= 22mm can be considered as sensitive by the method. There was a good correlation to moxifloxacin between the two methodologies: disk diffusion and agar dilution (Pearson\'s coefficient was -0.84 , and the \"p\" value was less than 0.00001), suggesting that inhibition zones >= 18mm can be interpreted as sensitive by disk diffusion method. Nitazoxanide was the drug that showed a better performance in vitro activity (MIC50 was 0.06 ?g/ml and MIC90 0.12 ug/ml). For a drug that shows potent activity in vitro (MIC50 and MIC90 was 0.12 ug/ml), the tigecycline could be a therapeutic option in infection by Clostridium difficile, depending on further studies to evaluate their real clinical efficacy and security. Conclusion: Obtained results in this study indicate the need for further studies in vitro and clinicians to define the limits of sensitivity/resistance to teicoplanin and nitazoxanide, so there is no interpretation criteria for both disk diffusion and for agar dilution. Results of this work in vitro study confirmed the utility of metronidazole as an effective drug in the treatment of infection by Clostridium difficile. Nitazoxanide was the drug that showed better performance in vitro by dilutional method. We suggest the use of disk diffusion method: metronidazole, vancomycin and moxifloxacin. This work suggest that inhibition zones for metronidazole ( >= 33mm), moxifloxacin ( >= 18mm) and vancomycin ( >= 22mm) could be considered as sensitive by disk diffusion method. The agar dilution method is a method to be accurate, but laborious to run in the laboratory routine

A leucemia mielóide crônica (LMC) é caracterizada pela translocação (9;22) que dá origem ao gene quimérico BCR-ABL. Este gene codifica uma proteína com atividade tirosina quinase, p210, constitutivamente ativa. O três mecanismos envolvidos na patogênese da LMC são o aumento da proliferação celular, alteração da adesão celular ao estroma e matriz medular e inibição da apoptose. A introdução do mesilato de imatinibe (MI), um inibidor de tirosina quinase, revolucionou o tratamento da LMC levando pacientes em fase crônica a remissões duráveis, porém uma parcela destes não responde ou perde a resposta ao longo do tratamento. Os mecanismos de resistência ao MI podem ser classificados como independentes de BCR-ABL (a1- glicoproteína ácida e genes de resistência a múltiplas drogas) ou dependentes de BCR-ABL (superexpressão de BCR-ABL e mutações do domínio quinase do gene ABL). Objetivo: avaliar a presença de mutações no domínio quinase do gene ABL e a expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas MDR1 e BCRP em amostras pré-tratamento com MI, acompanhar estes pacientes mensalmente através da quantificação de transcritos BCR-ABL e quando ocorrer resistência reavaliar a presença de mutações do domínio quinase do ABL e a expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas. Material e Métodos: Foram avaliados 61 pacientes com LMC em fase crônica. A pesquisa de mutações do domínio quinase foi realizada pela técnica de seqüenciamento direto e a expressão relativa dos genes de resistência a múltiplas drogas foi avaliada por PCR em tempo real. A quantificação absoluta do número de transcritos BCR-ABL foi realizada pela técnica de PCR em tempo real utilizando-se o sistema Taqman de sondas de hibridização. Resultados: Nas amostras pré-tratamento dos 61 pacientes estudados não foram detectadas mutações. Quando relacionamos o aumento da expressão dos genes MDR1 e BCRP à resposta citogenética completa aos 12 meses de tratamento não houve diferença estatística significativa (p>0,05). Quanto ao número de transcritos BCR-ABL, observamos que os pacientes que apresentaram menos de 1% pela escala internacional aos 3 meses de tratamento atingiram a RMM em período menor (7 meses) do que os que apresentaram mais de 1% (12 meses) com diferença estatística significativa (p = 0,03). Conclusões: As mutações do domínio quinase do gene BCR-ABL nas amostras pré-tratamento não foram detectadas ou pela sensibilidade da técnica de seqüenciamento direto (10%) ou porque tais mutações são mais freqüentes nas fases acelerada e blástica. A expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas (MDR1) e BCRP) em pacientes com LMC-FC ao diagnóstico não apresentou correlação com o aparecimento de resistência secundária ao MI. Além disso a quantificação mensal dos transcritos BCR-ABL aos 3 meses pode ser considerada um marcador com valor prognóstico. / Chronic myeloid leukemia is characterized by t(9;22) translocation. The chimeric gene BCR-ABL encodes a p210BCRABL protein with constitutive tyrosine kinase activity which is directly related to CML pathogenesis. The imatinib mesylate, a tyrosine kinase inhibitor, is the first-choice treatment for patients in chronic phase but some patients show primary resistance or relapse after initial response. The mechanisms of resistance to the imatinib mesylate treatment are BCR-ABL dependent (amplification of BCR-ABL and mutation of kinase domain of BCR-ABL) or independent of BCR-ABL (1-acid glycoprotein and expression of multidrug resistance genes). Objective: The objective of this work was to evaluate the mechanisms of resistance (kinase domain mutation and MDR1 and BCRP genes expression) to imatinib mesylate in pretreatment samples, quantify of BCR-ABL transcript on a monthly follow up plan, and to re-evaluate the mechanisms of resistance in the absence or loss of treatment response. Patients and Methods: We have evaluated 61 pretreatment samples derived from chronic phase CML patients. The number of BCR-ABL transcripts was quantified by RTQ-PCR with taqman probes and MDR1 and BCRP expression were evaluated by RTQ-PCR with Syber Green. Mutations within the BCR-ABL kinase domain were screened by direct sequencing and we also have screened the T315I mutation in pretreatment samples by allele-specific PCR. Results:We detected no mutations in the 61 pretreatment samples. The correlation analysis between the expression of MDR1/BCRP genes and the cytogenetic response at 12 months of treatment revealed no significant statistical difference (p = > 0.05). The results of BCR-ABL quantification in the follow up of our cohort indicated that patients who had transcripts <1% by the international scale at 3 months of therapy are more likely to achieve rapid MMR (median of 7 months) than those who had >1% (median of 12 months) (p = 0,03). Conclusions: As expected, the kinase domain mutations of BCR-ABL in pretreatment samples of CML chronic phase patients are not detectable by direct sequencing because of the sensitivity of the assay (10%) and also because these mutations are more common in accelerated phase and blast crisis. About the expression of multidrug resistance genes MDR1 and BCRP, they showed no correlation with secondary resistance to imatinib mesylate. And finally the number of BCR-ABL transcripts at 3 months of treatment can be considered a marker with prognostic value.

Introdução: O Clostridium difficile é um bacilo Gram-positivo, anaeróbio estrito, formador de esporos, que produz toxinas que podem causar diarreia, colite pseudomembranosa, dilatação do cólon, sepse e até morte. Nos últimos anos o quadro clínico e epidemiológico das infecções por Clostridium difficile tem se modificado e as limitações das opções terapêuticas tornaram-se mais evidentes. Objetivo Primário: Comparar as metodologias de disco-difusão e ágar-diluição na detecção de sensibilidade/resistência de isolados de Clostridium difficile. Objetivos Secundários: Avaliar prospectivamente o perfil de sensibilidade/resistência de isolados clínicos hospitalares de Clostridium difficile provenientes de seis hospitais terciários da cidade de São Paulo e fornecer evidências para fundamentar o diagnóstico e o tratamento empírico das diarreias causadas por Clostridium difficile. Métodos: utilizamos os métodos de disco-difusão e ágar-diluição, de acordo com os critérios estabelecidos pelo CLSI e EUCAST. Resultados: Os coeficientes de correlação observados entre os diâmetros dos halos de inibição e Concentração Inibitória Mínima foram abaixo do esperado tornando inviável o método de disco-difusão para determinação de sensibilidade aos antimicrobianos nitazoxanida, teicoplanina e tigeciclina. Todas as 50 cepas deste estudo foram sensíveis ao metronidazol (MIC50 foi de 1 ?g/mL a MIC90 foi de 2 ug/mL). Para o método de disco-difusão, sugerimos que halos de inibição >= 33mm possam ser interpretados como sensíveis. Devido à moderada correlação, significância estatística e distribuição de halos de inibição das amostras próximos aos valores encontrados utilizando a cepa ATTC, sugere-se a utilização do método de disco-difusão para vancomicina, onde halos com diâmetro >= 22mm possam ser considerados como sensíveis pelo método. Para o moxifloxacino houve uma boa correlação entre as duas metodologias: discodifusão e de ágar-diluição (O coeficiente de Pearson foi de -0,84, e o valor de p foi menor que 0,00001), sugerindo que halos de inibição >= 18mm possam ser interpretados como sensíveis pela metodologia de disco-difusão. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro (MIC50 foi 0,06 ?g/mL e a MIC90 de 0,12 ug/mL). Por se mostrar uma droga com potente atividade in vitro (MIC50 e a MIC90 foi de 0,12 ug/mL), a tigeciclina poderia ser mais uma opção terapêutica em infecções por Clostridium difficile, dependendo de mais estudos para avaliar sua real eficácia clínica e segurança. Conclusão: Os resultados verificados neste estudo indicam a necessidade de mais estudos in vitro e clínicos para definir os limites de sensibilidade/resistência para a teicoplanina e a nitazoxanida, pois faltam critérios de interpretação tanto para disco-difusão quanto para ágar-diluição. Os resultados deste trabalho in vitro confirmaram a utilidade do metronidazol como uma droga eficaz no tratamento de infecção por Clostridium difficile. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro por método dilucional. Sugerimos a utilização do método de disco-difusão para: metronidazol, vancomicina e moxifloxacino. Os resultados desse trabalho sugerem que halos de inibição para metronidazol ( >= 33mm), moxifloxacino ( >= 18mm) e vancomicina ( >= 22mm) poderiam ser considerados como sensíveis pelo método de disco-difusão. O método de ágardiluição é um método de boa acurácia, porém trabalhoso para ser executado na rotina laboratorial / Introduction: Clostridium difficile is a Gram-positive bacillus, strictly anaerobic, spore-forming, which produces toxins that can cause diarrhea, colitis pseudomembranous, colon expansion, sepsis and even death. In recent years the clinical and epidemiological picture of infection by Clostridium difficile has been modified and limitations of therapeutic options have become more evident. Primary Objective: Comparing the methods of disk diffusion and agar dilution in the detection sensitivity/resistance isolates of Clostridium difficile. Secondary Objectives: Prospectively evaluate the profile of sensitivity/resistance of hospital clinical isolates of Clostridium difficile from six tertiary hospitals in São Paulo city and provide evidence to support the diagnosis and empirical treatment of diarrhea caused by Clostridium difficile. Methods: We use the disk diffusion method and agar dilution method, according to the established criteria by CLSI and EUCAST. Results: The observed correlation coefficients between the inhibitions diameter zone of the and Minimum Inhibitory Concentration were under expectations impeding the disk diffusion method for determining sensitivity to nitazoxanide antimicrobial, teicoplanin and tigecycline. All 50 strains of this study were sensitive to metronidazole (MIC50 was 1 Ug/ml to MIC90 was 2 ug/ml). For the method disk diffusion, we suggest that inhibition zones >= 33mm can be interpreted as sensitive. Due to the moderate correlation, statistical significance and distribution of zones of inhibition on samples of the next found values using the strain ATTC, we suggest using the disk diffusion method for vancomycin where halos diameter >= 22mm can be considered as sensitive by the method. There was a good correlation to moxifloxacin between the two methodologies: disk diffusion and agar dilution (Pearson\'s coefficient was -0.84 , and the \"p\" value was less than 0.00001), suggesting that inhibition zones >= 18mm can be interpreted as sensitive by disk diffusion method. Nitazoxanide was the drug that showed a better performance in vitro activity (MIC50 was 0.06 ?g/ml and MIC90 0.12 ug/ml). For a drug that shows potent activity in vitro (MIC50 and MIC90 was 0.12 ug/ml), the tigecycline could be a therapeutic option in infection by Clostridium difficile, depending on further studies to evaluate their real clinical efficacy and security. Conclusion: Obtained results in this study indicate the need for further studies in vitro and clinicians to define the limits of sensitivity/resistance to teicoplanin and nitazoxanide, so there is no interpretation criteria for both disk diffusion and for agar dilution. Results of this work in vitro study confirmed the utility of metronidazole as an effective drug in the treatment of infection by Clostridium difficile. Nitazoxanide was the drug that showed better performance in vitro by dilutional method. We suggest the use of disk diffusion method: metronidazole, vancomycin and moxifloxacin. This work suggest that inhibition zones for metronidazole ( >= 33mm), moxifloxacin ( >= 18mm) and vancomycin ( >= 22mm) could be considered as sensitive by disk diffusion method. The agar dilution method is a method to be accurate, but laborious to run in the laboratory routine

A leucemia mielóide crônica (LMC) é caracterizada pela translocação (9;22) que dá origem ao gene quimérico BCR-ABL. Este gene codifica uma proteína com atividade tirosina quinase, p210, constitutivamente ativa. O três mecanismos envolvidos na patogênese da LMC são o aumento da proliferação celular, alteração da adesão celular ao estroma e matriz medular e inibição da apoptose. A introdução do mesilato de imatinibe (MI), um inibidor de tirosina quinase, revolucionou o tratamento da LMC levando pacientes em fase crônica a remissões duráveis, porém uma parcela destes não responde ou perde a resposta ao longo do tratamento. Os mecanismos de resistência ao MI podem ser classificados como independentes de BCR-ABL (a1- glicoproteína ácida e genes de resistência a múltiplas drogas) ou dependentes de BCR-ABL (superexpressão de BCR-ABL e mutações do domínio quinase do gene ABL). Objetivo: avaliar a presença de mutações no domínio quinase do gene ABL e a expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas MDR1 e BCRP em amostras pré-tratamento com MI, acompanhar estes pacientes mensalmente através da quantificação de transcritos BCR-ABL e quando ocorrer resistência reavaliar a presença de mutações do domínio quinase do ABL e a expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas. Material e Métodos: Foram avaliados 61 pacientes com LMC em fase crônica. A pesquisa de mutações do domínio quinase foi realizada pela técnica de seqüenciamento direto e a expressão relativa dos genes de resistência a múltiplas drogas foi avaliada por PCR em tempo real. A quantificação absoluta do número de transcritos BCR-ABL foi realizada pela técnica de PCR em tempo real utilizando-se o sistema Taqman de sondas de hibridização. Resultados: Nas amostras pré-tratamento dos 61 pacientes estudados não foram detectadas mutações. Quando relacionamos o aumento da expressão dos genes MDR1 e BCRP à resposta citogenética completa aos 12 meses de tratamento não houve diferença estatística significativa (p>0,05). Quanto ao número de transcritos BCR-ABL, observamos que os pacientes que apresentaram menos de 1% pela escala internacional aos 3 meses de tratamento atingiram a RMM em período menor (7 meses) do que os que apresentaram mais de 1% (12 meses) com diferença estatística significativa (p = 0,03). Conclusões: As mutações do domínio quinase do gene BCR-ABL nas amostras pré-tratamento não foram detectadas ou pela sensibilidade da técnica de seqüenciamento direto (10%) ou porque tais mutações são mais freqüentes nas fases acelerada e blástica. A expressão dos genes de resistência a múltiplas drogas (MDR1) e BCRP) em pacientes com LMC-FC ao diagnóstico não apresentou correlação com o aparecimento de resistência secundária ao MI. Além disso a quantificação mensal dos transcritos BCR-ABL aos 3 meses pode ser considerada um marcador com valor prognóstico. / Chronic myeloid leukemia is characterized by t(9;22) translocation. The chimeric gene BCR-ABL encodes a p210BCRABL protein with constitutive tyrosine kinase activity which is directly related to CML pathogenesis. The imatinib mesylate, a tyrosine kinase inhibitor, is the first-choice treatment for patients in chronic phase but some patients show primary resistance or relapse after initial response. The mechanisms of resistance to the imatinib mesylate treatment are BCR-ABL dependent (amplification of BCR-ABL and mutation of kinase domain of BCR-ABL) or independent of BCR-ABL (1-acid glycoprotein and expression of multidrug resistance genes). Objective: The objective of this work was to evaluate the mechanisms of resistance (kinase domain mutation and MDR1 and BCRP genes expression) to imatinib mesylate in pretreatment samples, quantify of BCR-ABL transcript on a monthly follow up plan, and to re-evaluate the mechanisms of resistance in the absence or loss of treatment response. Patients and Methods: We have evaluated 61 pretreatment samples derived from chronic phase CML patients. The number of BCR-ABL transcripts was quantified by RTQ-PCR with taqman probes and MDR1 and BCRP expression were evaluated by RTQ-PCR with Syber Green. Mutations within the BCR-ABL kinase domain were screened by direct sequencing and we also have screened the T315I mutation in pretreatment samples by allele-specific PCR. Results:We detected no mutations in the 61 pretreatment samples. The correlation analysis between the expression of MDR1/BCRP genes and the cytogenetic response at 12 months of treatment revealed no significant statistical difference (p = > 0.05). The results of BCR-ABL quantification in the follow up of our cohort indicated that patients who had transcripts <1% by the international scale at 3 months of therapy are more likely to achieve rapid MMR (median of 7 months) than those who had >1% (median of 12 months) (p = 0,03). Conclusions: As expected, the kinase domain mutations of BCR-ABL in pretreatment samples of CML chronic phase patients are not detectable by direct sequencing because of the sensitivity of the assay (10%) and also because these mutations are more common in accelerated phase and blast crisis. About the expression of multidrug resistance genes MDR1 and BCRP, they showed no correlation with secondary resistance to imatinib mesylate. And finally the number of BCR-ABL transcripts at 3 months of treatment can be considered a marker with prognostic value.