Orientador: Agnaldo Lopes da Silva Filho / Coorientador: Andréa Teixeira de Carvalho / Resumo: O câncer epitelial de ovário representa um desafio para Oncologia Ginecológica, devido à sua natureza insidiosa e alta mortalidade. Há também uma compreensão limitada da etiologia da doença ao nível molecular, o que continua a dificultar o desenvolvimento de alvos terapêuticos. Estudos recentes de morfologia, imuno-histoquímica e de genética molecular têm levado ao desenvolvimento de um novo paradigma para a patogênese e a origem do câncer epitelial de ovário, baseado em um modelo dualista de carcinogênese que divide o câncer epitelial de ovário (CEO) em duas grandes categorias chamadas de tipos I e II. O objetivo deste estudo foi avaliar o padrão das citocinas e quimiocinas encontradas no tecido ovariano de mulheres saudáveis e mulheres com CEO tipo I e tipo II. Além disso, descrever a associação desses biomarcadores com os dados clínico-patológicos. Foram analisadas amostras de tecido ovariano e ascite obtidas de mulheres com CEO (n=26) e amostras de tecido ovariano e lavado peritoneal de mulheres sem evidências de malignidade (n=16 - grupo de controle). Nas amostras de tecido, a expressão gênica foi avaliada utilizando a metodologia de PCR quantitativo em tempo real (qPCR) para os genes IFNG, IL-10, TGFB1, CCL2, CCL3, CCL5, CXCL8, CXCL9 e CXCL10. A detecção dos níveis de citoquinas/quimioquinas nos fluidos peritoneais foi realizada através do método Cytometric Bead Array (CBA) os marcadores IL-12p70, TNF, IL-10, IL-6, IL-1--8, IL-17A, IFN-IL-4, IL-2, CCL2, CCL5, CXCL-9 e CXCL-10. No grupo das pacientes com CEO, 10 (38,5%) apresentavam estágios I/II e 16 (61,5%) estágios III/IV. Com relação ao tipo de tumor, de acordo com a nova classificação, 8 (30,8%) eram do tipo I e 18 (69,2 %) do tipo II. A citorredução ótima foi obtida em 15 (57,7%) das mulheres com CEO. Mulheres com CEO tipo II apresentaram maiores níveis séricos do marcador CA-125 quando comparado às do tipo I. Não houve óbito no grupo... / Abstract: The epithelial ovarian cancer represents a challenge to Gynecologic Oncology due to its insidious nature and high mortality. There is also a limited understanding of disease etiology at the molecular level, which continues to hamper targeted therapeutic development. Recent morphological, immunohistochemical, and molecular genetic studies have led to the development of a new paradigm for the pathogenesis and origin of epithelial ovarian cancer based on a dualistic model of carcinogenesis that divides epithelial ovarian cancer into 2 broad categories designated types I and II. The aim of this study was to evaluate the cytokines and chemokines pattern in ovarian tissue from healthy women and women with EOC type I and type II. Also, we described the association of these biomarkers with the clinicopathological data. Samples of ovarian tissue and ascite obtained from women with EOC (n=26), samples of ovarian tissue and peritoneal wash from women with no evidence of malignancy were analyzed (n=16 - control group). In the tissue samples, gene expression were evaluated by quantitative real time PCR (qPCR) IFNG, IL-10, TGFB1, CCL2, CCL3, CCL5, CXCL8, CXCL9 and CXCL10. The detection of cytokine/chemokine levels in peritoneal fluids was measured by cytometric bead array immunoassay (CBA), IL-12p70, TNF, IL-10, IL-6, IL-1--8, IL-17A, IFN--4, IL-2, CCL2, CCL5, CXCL-9 and CXCL-10. In the group of women with EOC, 10 (38.5 %) had stage I/II and 16 (61.5 %) were stage III/IV . Concerning tumor type, according to the new classification, 8 (30.8 %) were type I and type II were 18 ( 69.2 % ) . Optimal cytoreduction was achieved in 15 (57.7 %) women with EOC. The CA-125 showed higher serum levels in patients with EOC type II compared to type I. There were no deaths in women with type I tumor while 6 (33.3 %) of patients with type II tumor died . Increased expression of IL-10, CXCL8 and CXCL9 genes in the group of women / Doutor

Resumo: A desnutrição diminui a eficácia da resposta imune aumentando a susceptibilidade aos agentes infecciosos. 0 principal tipo de deficiência nutricional e a desnutrição proteico-calórica (DPC). A restrição alimentar experimental e utilizada como modelo de estudo para a DPC. Neste contexto, os objetivos principais deste trabalho foram caracterizar urn modelo murino de DPC e avaliar seu efeito na susceptibilidade e na imunidade protetora ao Staphylococcus aureus. Foram testados três percentuais de restrição alimentar (10, 20 e 30%) em camundongos BALB/c e a restrição de 20% determinou as seguintes alterações as quais são condizentes com um estado de subnutrição: queda significativa de peso corporal e número de linfócitos, alteração na produção de citocinas e atrofia no timo e epitélio intestinal. A comparação do grau de susceptibilidade e da capacidade de montar uma resposta imune protetora ao S. aureus foi realizada atraves de duas metodologias: determinação do numero de unidades formadoras de colônias (UFC) em alguns órgãos e análise histopatológica do tecido pulmonar. Os resultados foram distintos dependendo da metodologia empregada. Quanto a susceptibilidade ao patógeno, a técnica de UFC indicou susceptibilidade similar nos grupos normal e subnutrido, enquanto que a análise histopatológica indicou maior quantidade de bactérias no pulmão dos animais normais. 0 processo de imunização controlou eficazmente a multiplicação bacteriana no pulmão dos animais normais, mas nao dos animais subnutridos. A análise histopatológica também mostrou perfis inflamatórios distintos nestes 2 grupos: camundongos normais apresentaram inflamação pulmonar só após infecção com S. aureus, como esperado, e a imunização prévia com antígenos de S. aureus preveniu esta inflamação. Por outro lado, camundongos subnutridos ja apresentavam inflamação pulmonar antes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Undernutriton is one of the most relevant causes of secundary immunodeficiency. The main type of nutritional deficiency is called protein energy malnutrition (PEM). Animals submitted to different degrees of food restriction can be used as models of PEM. In this context, this work was done to establish a murine experimental model for PEM and to evaluate the effect of malnutrition on both, susceptibility and ability to mount a protective immunity against Staphylococcus aureus. BALB/c mice were therefore submitted to three distinct percentages of dietary re§triction (10, 20 and 30%). The 20% restricted diet determined the following alterations that characterize a state of malnutrition: a significant decrease in both, body weight and lymphocyte number, alteration in cytokine production and atrophy in thymus and intestinal epithelium. Two methodologies were used to compare susceptibility and ability to mount a protective immunity: determination of the number of colony forming units (CFU) in some organs and histopathological analysis of the lungs. Results varied according to the methodology. CFU indicated a similar susceptibility whereas the histopathological analysis showed a higher amount of bacterias in the lungs of normal mice. Immunization controlled bacterial growth in the lungs of normal mice but not in the ones from undernourished animals. Histopathological analysis also revealed distinct inflammatory scenarios: inflammation appeared in lungs from normal mice only after infection with S. aureus and immunization prevented lung inflammation in the animals. On the other hand, undernourished mice presented lung inflammation even before infection. In addition, the degree of this inflammatory process did not change with infection or previous immunization. Together, this data demonstrates that BALB/c mIce submitted to 20% food restriction developed... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Alexandrina Sartori / Coorientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza Cunha / Banca: Rubens Rodrigues dos Santos Júnior / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Mestre

Orientador: Jane megid / Banca: Hélio Langoni / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Resumo: A raiva é uma doença infecciosa letal que mata mais de 55 mil pessoas por ano em todo o mundo, embora a morte possa ser evitada se um tratamento pósexpositivo baseado no uso de vacina anti-rábica e imunoglobulinas for aplicado a tempo. Após o aparecimento dos sinais clínicos, não existe qualquer terapia eficaz disponível. As citocinas e quimiocinas são cruciais no desenvolvimento da resposta imune do hospedeiro. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica de citocinas e quimiocinas relacionadas à resposta imune e também avaliar a eficácia da terapia com siRNAs em camundongos inoculados com virus de cão ou de morcego. Os resultados demonstraram que o perfil de expressão de citocinas e quimiocinas foi intrínseco 'a variante viral e a produção precoce destas sugere ser mais importante do que seus níveis de expressão para a sobrevivência na raiva. Em relação à avaliação da terapia com siRNAs, embora nenhuma diferença tenha sido observada na taxa de letalidade entre os grupos tratados e não-tratados, a avaliação clínica de animais inoculados com a variante de cão mostrou menor severidade da doença clínica no grupo tratado quando comparado ao seu controle, associado a uma baixa expressão do gene N e de todos os marcadores imunológicos avaliados aos 5 dias. Os resultados deste estudo forneceram alguma evidência da eficácia da terapia com siRNA em infecções causadas pela variante de cão, a despeito da causada pela variante de morcego / Abstract: Rabies is a lethal infectious disease that kills more than 55 thousand persons per year worldwide although death can be avoided if a post-exposure prophylaxis based in anti-rabies vaccine and immune globulins can be applied on time. After the onset of clinical signs, there is no effective therapy available. Cytokines and chemokines are crucial for host immune response development. This study had as purpose to evaluate the gene expression of cytokines and chemokynes related to the immune response and also to evaluate the efficacy of siRNAs therapy in mice inoculated with dog or bat virus. Results demonstrated that the gene expression profile was intrinsic to virus variant and the precocious production seemed to be more important than their expression levels for rabies survival. Therapy with siRNAs therapy showed no difference in the lethality rate between treated groups and controls but clinical evaluation of animals inoculated with dog variant showed less severity of clinical disease in the treated group compared with control, also associated with a low expression of N gene and of all immune markers evaluated at 5 days. Results provided some evidence of the efficacy of siRNAs therapy in infections due to dog variant but not due to bat variant in the present study / Mestre

Orientador: Antonio Celso Pezzato / Coorientador: José Roberto Sartori / Resumo: Foi realizado um experimento para avaliar o efeito dos níveis de zinco na dieta de frangos de corte, sobre o desempenho, a imunidade e saúde. O ensaio foi realizado em aviário experimental, o delineamento foi inteiramente casualisado com cinco níveis de zinco, totalizando 5 tratamentos com sete repetições, os tratamentos consistiram em 50, 75, 100, 125 e 150% da exigência de zinco segundo Rostagno et al. (2011), sendo o tratamento 100% (controle): 81,3; 71,5; 65 ppm de zinco nas fases pré- incial, inicial e crescimento, respectivamente. As aves foram divididas em boxes, sendo cada box uma unidade experimental com 33 aves cada. E aos 35 dias de idade foi realizado um desafio com LPS de E. coli. Foram avaliados os parâmetros de desempenho: conversão alimentar, consumo de ração, peso corporal, ganho de peso e viabilidade; bioquímicos: zinco no sangue, superóxido dismutase e glutationa peroxidase no soro sanguíneo; e imunológico: título de anticorpos para doença de Newcastle de 1 a 35 dias de idade. Após os 35 dias de idade foram avaliados peso relativo de órgãos, o teor de zinco na tíbia inteira, fêmur sem a medula óssea, medula óssea do fêmur e no fígado, atividade da superóxido dismutase e glutationa peroxidase no soro sanguíneo e no fígado e a produção de reativos de oxigênio e nitrogênio por macrófagos peritoniais; em todos os níveis de zinco em aves desafiadas por LPS ou não. Os dados foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) através do procedimento General Lineal Model (GLM), com auxílio do programa estatístico SAS 9.3. O nível ótimo de zinco dietético foi determinado pela análise de regressão no modelo da Nova Compartimental (���� = ��������−�������� (1+ ����−����(����−����) ) ) utilizando-se o programa Excel (xlsx) com exceção dos dados de Peroxido de Hidrogênio e Oxido Nítrico em que o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: An experiment was carried out to evaluate the effect of zinc levels on the broiler diet on performance, immunity and health. The experiment was carried out in experimental fowl, the design was completely randomized with five levels of zinc, totaling 5 treatments with seven replicates, treatments consisted of 50, 75, 100, 125 and 150% of the zinc requirement according to Rostagno et al. (2011), the treatment being 100% (control): 81.3; 71.5; 65 ppm of zinc in the pre-intial, initial and growth phases, respectively. The birds were divided into boxes, each box being an experimental unit with 33 birds each. And at 35 days of age a challenge was performed with E. coli LPS. Performance parameters were evaluated: feed conversion, feed intake, body weight, weight gain and viability; Biochemicals: zinc in the blood, superoxide dismutase and glutathione peroxidase in blood serum; And immunological: titer of antibodies to Newcastle disease from 1 to 35 days of age. After 35 days of age, relative body weight, zinc content in the entire tibia, femur without the bone marrow, bone marrow of the femur and liver, superoxide dismutase activity and glutathione peroxidase in blood serum and liver were evaluated. Production of oxygen and nitrogen reactives by peritoneal macrophages; At all levels of zinc in LPS challenged birds or not. Data were analyzed by analysis of variance (ANOVA) using the General Linear Model (GLM) procedure, using the statistical program SAS 9.3. The optimal level of dietary zinc was determined by the Regression analysis in the New Compartmental (���� = ��������−�������� (1+ ����−����(����−����) ) ) using the program Excel (xlsx) with the exception of Hydrogen Peroxide and Nitric Oxide data in which the optimum level of dietary zinc was determined by the regression analysis, Broken Line, using the Proc Reg procedure of SAS 9.3, with the aid of... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo:Considerando-se a complexidade envolvida na resposta imune frente à infecção por Leishmania spp. nas diferentes espécies e a ausência de alterações clínicas na maioria dos gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivos avaliar a expressão gênica de citocinas envolvidas na resposta imune celular (IFN-, TNF-α, IL-2) e humoral (IL-5) por PCR em tempo real em amostras de baço de 12 gatos naturalmente infectados por Leishmania spp., comparando-as à expressão gênica de quatro gatos saudáveis; e verificar a correlação entre a carga parasitária na medula óssea e a expressão gênica das citocinas no baço dos animais infectados. Nos gatos infectados observou-se aumento de 1,53 vezes na expressão gênica de IFNquando comparada ao grupo de animais hígidos (p=0,0005). Não foi verificada diferença estatisticamente significante na expressão gênica das demais citocinas avaliadas entre gatos infectados e hígidos (TNF-α p=0,4203, IL-2 p=0,1968, IL-5 p=0,6390). Não foi observada correlação entre a carga parasitária na medula óssea e a expressão gênica das citocinas no baço dos gatos infectados por Leishmania spp. (IFN- p = 0,1570; TNF- p = 0,5702; IL-2 p = 0,6081; IL-5 p = 0,2329). Estes resultados sugerem que o IFN- possa exercer papel relevante nos mecanismos de proteção contra a leishmaniose felina / Abstract:Considering the complexity of the immune response against Leishmania spp. infection in different species and the lack of clinical signs in the majority of cats with visceral leishmaniasis, this study aimed to evaluate the gene expression of some cytokines involved in cellular (IFN-, TNF α, IL-2) and humoral (IL-5) immune response by real-time PCR, on spleen samples from 12 cats naturally infected by Leishmania spp., comparing to the immune response of four healthy cats; and to verify the correlation between the parasite load in the bone marrow and the gene expression of cytokines in the spleen of infected animals. An increase of 1.53 times in IFN- gene expression was observed in infected cats when compared to healthy cats (p=0.0005). Statistically significant differences were not observed in gene expression of the cytokines evaluated between infected and healthy cats (TNF-α p=0.4203, IL-2 p=0.1968, IL-5 p=0.6390). Correlation was not observed between the parasite load in the bone marrow and the gene expression of cytokines in the spleen of cats infected by Leishmania spp. (IFN- p = 0.1570; TNF- p = 0.5702; IL-2 p = 0.6081; IL-5 p = 0.2329). These results suggest that IFN- may play an important role in the protective mechanisms against feline leishmaniasis / Orientador:Mary Marcondes / Banca:Juliana Peloi Vides / Banca:Wagner Luis Ferreira / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-06-15T00:21:54Z No. of bitstreams: 1 ViniciusCampeloSoeiro_DISSERT.pdf: 1414998 bytes, checksum: 1ed8e56eafbeeb635d402b28f04dc255 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-06-17T23:56:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ViniciusCampeloSoeiro_DISSERT.pdf: 1414998 bytes, checksum: 1ed8e56eafbeeb635d402b28f04dc255 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T23:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ViniciusCampeloSoeiro_DISSERT.pdf: 1414998 bytes, checksum: 1ed8e56eafbeeb635d402b28f04dc255 (MD5) Previous issue date: 2016-01-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Glucanas s?o polissacar?deos com diversas atividades farmacol?gicas e biol?gicas descritas. Contudo, h? pouco relatos sobre as atividades das dextranas com figura??o do tipo ? (alfa). Nesse contexto, dextranas (?-D-glucanas) extra?das da bact?ria Leuconostoc mesenteroides, com massas moleculares de 10 (D10), 40 (D40) e 147 (D147) kDa e seus derivados fosforilados P10, P40 e P147 foram avaliados quanto ao seu potencial antioxidante, anticoagulante e imunomodulador pela primeira vez, com o intuito de elucidar compostos com atividades potentes e pouco t?xicas. An?lises de espectroscopia de infravermelho, composi??o monossacar?dica e dosagens qu?micas comprovaram que estas dextranas s?o o mesmo polissacar?deo, mas com massas moleculares diferentes, al?m de confirmar o sucesso da fosforila??o. Nenhuma das dextranas tem atividade anticoagulante. No teste do poder redutor verificou-se que D147 e P147 foram duas vezes mais potentes que as outras dextranas. Por outro lado, as seis amostras tiveram atividade semelhante (50%) em sequestrar o radical OH. Frente ao sequestro do ?on super?xido, apenas D10 teve uma atividade pronunciada (50%). D40 foi a ?nica dextrana nativa com a??o imunomodulat?ria, pois estimulou em dobro a prolifera??o de macr?fagos mur?nicos (RAW 264.7) e dobrou a libera??o de NO por essas c?lulas, tanto na aus?ncia como na presen?a de LPS. Al?m disso D40 teve maior atividade sequestradora (50%) de per?xido de hidrog?nio, o que fez com que ela tamb?m fosse a dextrana mais potente em inibir peroxida??o lip?dica (70%). J? P147 apresentou maior atividade quelante de ?ons ferro e cobre (~85%), al?m de aumentar o triplo a libera??o de NO na aus?ncia e na presen?a de LPS. P10 provou ser o composto mais efetivo sobre a prolifera??o de macr?fagos. Os dados indicam que dextranas com massa aproximada de 40 kDa s?o as ideais para serem utilizadas como antioxidantes e imunomoduladores, podendo ter suas atividades potencializadas com o processo de fosforila??o. Contudo, estudos futuros com D40 e outras dextranas de massa semelhante confirmar?o esta hip?tese. / Glucans are polysaccharides with different pharmacological and biological activities described. However, there are some reports about the activities of the glucan type ? (alpha). In this context, a group of ?-D-glucans called dextrans extracted from Leuconostoc mesenteroides bacteria, with molecular weights of 10 (D10), 40 (D40) and 147 (D147) kDa and their phosphorylated derivatives P10, P40 and P147, were evaluated as for their antioxidant, anticoagulant and immunomodulatory potential for the first time, in order to elucidate compounds with potent activities and low toxicity. Infrared spectroscopy analysis, monosaccharide composition and chemical dosages showed that these dextrans are the same polysaccharide, but with different molecular weights, besides confirming the success of phosphorylation. None presented with anticoagulant features. The reducing power test showed that D147 was twice as potent as other dextrans. On the other hand, all six samples showed similar activity (50%) when it came to scavenging the OH radical. To the superoxide ion scavenging, only D10 had a pronounced activity (50%). D40 was the single native dextran that presented with immunomodulatory features since it double stimulated the proliferation of murine macrophages (RAW 264.7) and double the release of nitric oxide by the cells, both in the absence and presence of lipopolysaccharides (LPS). In addition, D40 showed a greater scavenging activity (50%) for the hydrogen peroxide, which caused it to also be the more potent dextran when it came to inhibiting lipid peroxidation (70%). On other hand, P147 showed the highest iron and copper ion chelation activity (~85%). P10 proved be the most effective compound to macrophage proliferation. The results point toward dextrans with a 40 kDa weight as being ideal for antioxidant and immunomodulatory use, could be supplemented with phosphorylated derivatives. However, future studies with the D40 and other similarly dextrans are to confirm this hypothesis.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-10-04T23:03:13Z No. of bitstreams: 1 IasmimSantosMangabeiraESilva_DISSERT.pdf: 2613750 bytes, checksum: 2033efb9279dea1592d2eee5ce08363a (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-10-16T19:14:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IasmimSantosMangabeiraESilva_DISSERT.pdf: 2613750 bytes, checksum: 2033efb9279dea1592d2eee5ce08363a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-16T19:14:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IasmimSantosMangabeiraESilva_DISSERT.pdf: 2613750 bytes, checksum: 2033efb9279dea1592d2eee5ce08363a (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi compreender os mecanismos moleculares associados ? resist?ncia de ovinos ?s infec??es por nematoides gastrintestinais. Foi comparado o transcriptoma da mucosa do abomaso de 17 ovinos mesti?os ? Santa In?s e ? Dorper, previamente classificados como infectados (resistentes e suscept?veis) e n?o infectados, distribu?dos em dois sistemas de alimenta??o (ad libitum e alimenta??o restrita) em resposta a infec??o por Haemonchus sp., utilizando a tecnologia RNA-Seq. A prepara??o das bibliotecas, o sequenciamento do genoma e a an?lise de dados foram realizadas no Laborat?rio de Biotecnologia Animal - ESALQ, Piracicaba, Brasil. A m?dia de sequ?ncias por amostra antes e depois da filtragem foi de 12.522.573 e 9.626.457, respectivamente, e a m?dia da taxa de mapeamento das leituras filtradas contra o genoma de refer?ncia do ovino Oar_v4.0 foi de 79,66%. Foram identificados como diferencilamente expressos (DE) 421 e 1123 genes quando comparado os animais infectados e n?o infectados, dentro do grupo de alimenta??o restrita e ad libitum, respectivamente. Quando avaliados os infectados inseridos na alimenta??o ad libitum versus alimenta??o restrita, 13 genes foram DE. Quando avaliados os animais resistentes e suscept?veis com efeito fixo de alimenta??o, apenas 36 genes foram DE. E por fim, comparando-se os animais infectados versus os controles tendo a alimenta??o como efeito fixo, foram identificados 881 genes DE. A an?lise de enriquecimento funcional mostrou que alguns termos do Gene Ontology foram significativamente enriquecidos (valor p ajustado<0,05). Nossos achados sugerem que al?m dos genes que participam diretamente do sistema imunol?gico, genes que participam de outras vias biol?gicas como o metabolismo do ?cido araquid?nico, via de sinaliza??o e sistema de complemento s?o essenciais na resposta do hospedeiro a Haemonchus contortus. Al?m disso, a alimenta??o n?o apresentou um efeito significativo no perfil de express?o g?nica dos animais infectados e n?o infectados, mostrando que a diferen?a entre a express?o dos genes foi devido ? infec??o por H. contortus. / The aim of this study was to understand molecular mechanisms underlying host resistance. We compared the abomasal mucosal transcriptome of 17 crossbred ? Santa In?s and ? Dorper lambs, previously classified as infected (resistant and susceptible) and uninfected distributed in two feeding system (ad libitum and restrict feed) in response to Haemonchus sp. infection using RNA-Seq technology. The libraries preparation, genome sequencing and sequence analyses were performed at the Laboratory of Animal Biotechnology - ESALQ, Piracicaba, Brazil. The average of reads per sample before and after filtering was 12.522.573 and 9.626.457, respectively, and the average of mapping rate of filtered reads against to Ovis aries Oar_v4.0 reference genome assembly was 79.66%. 421 and 1123 differentially expressed (DE) genes were identified when compared to infected and uninfected animals, within the restricted and ad libitum feed groups, respectively. When evaluated the infected animals inserted in the ad libitum feed versus restricted feeding, 13 genes were DE. When evaluated the resistant and susceptible animals with fixed feeding effect, only 36 genes were DE. Finally, by comparing infected versus control animals with feed as a fixed effect, 881 DE genes were identified. Functional enrichment analysis showed that some Gene Ontology terms were significantly enriched (adjusted p-value <0.05). Our findings suggest that in addition to genes that participate directly in the immune system, genes that participate in other biological pathways such as arachidonic acid metabolism, signaling pathway and complement system, for example, are essential in the host's response to Haemonchus contortus, generating a greater sheep resistance. In addition, feeding did not have a significant effect on the gene expression profile, showing that the difference between gene expressions was due to H. contortus infection.

A bactéria Mycoplasma hyopneumoniae é um patógeno suíno economicamente significante, que se adere às células do epitélio respiratório causando a pneumonia enzoótica suína (PES). A adesão celular e outros processos importantes para infecção dependem de proteínas de membrana, cuja maioria é transportada pela via de exportação Sec-dependente. A sinal-peptidase tipo I (SPase I) é uma protease de membrana que atua na liberação de proteínas translocadas através da via Sec-dependente. Neste contexto, a SPase I possui participação crítica na exportação de proteínas que podem atuar nas relações patógeno-hospedeiro. Este estudo tem como objetivo a caracterização funcional e imunológica da SPase I de M. hyopneumoniae (MhSPase I), a fim de demonstrar sua funcionalidade in vivo e in vitro, sua associação à complexos proteicos de membrana e também seu papel na indução de uma resposta imune. A atividade funcional da MhSPase I recombinante (rMhSPase I) in vivo foi demonstrada através de ensaios de complementação em uma linhagem de Escherichia coli SPase I mutante condicional (E. coli IT89). A rMhSPase foi capaz de complementar parcialmente a atividade da SPase I da linhagem mutante de E. coli, permitindo a sobrevivência bacteriana em condições não permissivas. Entre as proteínas preditas in silico como secretadas por M. hyopneumoniae, dois possíveis substratos da MhSPase I foram selecionados e expressos em E. coli, a fim de realizar ensaios de clivagem de peptídeo-sinal in vitro. A associação da MhSPase I à complexos proteicos de membrana foi analisada através de ensaios de interação entre a proteína recombinante purificada e extratos proteicos de M. hyopneumoniae enriquecidos com proteínas de membrana. As respostas imune inata e adaptativa induzidas pela rMhSPase em camundongos também foram avaliadas, sendo ambas caracterizadas como anti-inflamatórias. Estes resultados sugerem um potencial imunomodulador da MhSPase I, o qual pode ser importante para a proteção de M. hyopneumoniae durante o processo inflamatório induzido pela PES no trato respiratório suíno. / Mycoplasma hyopneumoniae is an economically significant swine pathogen that colonizes the respiratory epithelial cells causing the porcine enzootic pneumonia (PEP). Cell adhesion and other processes important for infection depend on membrane proteins, most of which are transported by the Sec-dependent pathway. Type I signal peptidase (SPase I) is a membrane protease which acts in the release of translocated proteins through Sec-dependent pathway. In this context, SPase I is critical for protein export, which may act on pathogen-host relations. The aim of this study is the functional and immunological characterization of the M. hyopneumoniae SPase I (MhSPase I), in order to demonstrate its in vivo and in vitro functionality, its participation into membrane protein complexes and also its role in immune responses induction. The in vivo functional activity of recombinant MhSPase I (rMhSPase I) was demonstrated through complementation assays with an Escherichia coli conditional SPase I mutant (E. coli IT89). The rMhSPase I was able to partially complement SPase I activity of E. coli IT89 in non-permissive conditions, allowing the bacterial to survive. Among the proteins in silico predict as secreted by M. hyopneumoniae, two possible substrates of MhSPase I were selected and expressed in E. coli, in order to perform the in vitro signal peptide cleavage assays. The association of MhSPase I with membrane protein complexes was analyzed through interaction assays between the rMhSPase I and protein extracts of M. hyopneumoniae enriched with membrane proteins. The innate and adaptive immune responses induced in mice by rMhSPase I were also assessed, being both characterized as anti-inflammatories. These results suggest an immunomodulatory potential of MhSPase I, which may protect M. hyopneumoniae from host inflammatory process induced by PEP.

A atividade física aeróbia reduz a incidência de diversos tipos de câncer e atenua o crescimento tumoral. Entretanto, existe uma lacuna na literatura sobre os mecanismos envolvidos nessa resposta. Dados recentes demonstram a importância da manutenção da função da resposta imune antitumoral para a atenuação da progressão da doença e estratégias capazes de aumentar essa resposta permanecem como um grande desafio. Diante disso, delineamos um estudo experimental para investigar especificamente a possível contribuição da atividade física aeróbia para a resposta imune antitumoral. Na presente dissertação, nós demonstramos que a atividade física aeróbia possui o potencial alterar a resposta de marcadores relacionados a resposta imune antitumoral. Em um primeiro estudo, observamos que a atividade física aeróbia atenuou o crescimento tumoral em três diferentes modelos de câncer em animais, assim como aumentou a sobrevida de animais com melanoma B16F10. Além disso, nós observamos que a atividade física aeróbia também altera a expressão gênica de marcadores de os linfócitos T infiltrantes de tumor (do inglês tumor infiltrating lymphocytes T - TILs-T) e de macrófagos associados ao tumor (do inglês tumor-associated macrophages - TAMs). Em segundo estudo, nosso objetivo foi explorar através de análises in silico respostas imunes tumorais que poderiam estar sendo moduladas pela atividade física aeróbia. Por meio da análise de Gene Set Enrichment Analysis (GSEA), observamos que a atividade física aeróbia prévia gerou uma assinatura imunológica tumoral semelhante à de pacientes com diferentes tipos de câncer e maior sobrevida. Essa assinatura imunológica revelou que pacientes com câncer de mama e melanoma que apresentam alta expressão gênica de BTG2, CD69, CFH, DUSP1 e PTGER4 em seus tumores, apresentam maior sobrevida em comparação aos pacientes com baixa expressão desses genes em seus tumores. A análise de GSEA também demonstrou que a atividade física aeróbia foi capaz de induzir uma assinatura imunológica semelhante à de animais com melanoma B16F10 sensíveis ao tratamento com o imunoterápico anti-CTLA-4 (do inglês anti- cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4) e pacientes pós-tratamento com anti-CTLA-4. Essa assinatura imunológica também revelou que pacientes com melanoma que apresentam alta expressão gênica de PHC3, TET2, MACF1 e PARP8 em seus tumores, apresentam maior sobrevida em comparação aos pacientes com baixa expressão desses genes em seus tumores. Em conclusão, a atividade física aeróbia demonstra-se como uma potente ferramenta no combate a progressão da doença / It is already very well accepted that the aerobic physical activity reduces the incidence of many different types of cancer and mitigates the tumor progression. However, there is an investigation gap on the literature about the mechanisms underlying this response. Recently, a body of literature has arisen which show the importance of maintain antitumoral immune response to mitigated tumor progression, and strategy for enhance this response remains a major challenge. Presently, we demonstrate that the aerobic physical activity has the potential to modulate antitumor immune responses. Firstly, we have observed that the aerobic physical activity mitigated the tumor progression in three different animal models of cancer and increased survival in the animals which had B16F10 melanoma. Moreover, we have observed that the aerobic physical activity also seems modulate the tumor infiltrating T lymphocytes (TILs-T) and the tumor associated macrophages (TAMs) in as specific-tumor way. Based on the computer gene set enrichment analysis (GSEA), we have observed that the previous aerobic physical activity helped to develop an immunological signature of the tumor shared among patients with different cancer etiologies with higher survival over time. This signature introduced us to some genes that are associated with a higher survival over time when increased in tumors of patients with melanoma, breast cancer and lymphoma. The GSEA analysis also shows that the aerobic physical activity is able to introduce an immune signature similar to the one observed in animals with B16F10 melanoma sensitive to the immunotherapic anti- cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4 (anti-CTLA-4) and patients post treatment with anti-CTLA-4. This immune signature also revealed genes with a strong association with high survival over time. This immune signature also revealed genes associated with a higher survival over time when their expression were increased in melanoma patients. In conclusion, aerobic physical activity is a powerful tool to counteract tumor progression due to its capacity to modulate antitumor immune responses

A resposta imune desencadeada em pacientes com leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é predominantemente celular. Assim, o estudo dos mecanismos imunológicos responsáveis pela formação, progressão e cura desta infecção é de grande importância, considerando a deformação que ela pode causar em indivíduos infectados. Este estudo investigou a expressão de mRNA de IFN-?, IL-10, IL-27, TNF-?, TGF-? e IL-6 em 40 biopsias de parafina (FFPE) fixadas em formalina de pacientes com diagnóstico clínico e laboratorial para LTA. Um grupo de 10 biópsias FFPE coletadas de pacientes com diagnóstico clínico de leishmaniose mucosa (LM) foi utilizado para o controle da evolução da infecção. Inicialmente, foi padronizado a extração de RNA, a síntese de cDNA e a escolha do gene endógeno em 9 biopsias frescas e 8 FFPE. Após essas padronizações, as moléculas de RNA de fragmentos de biopsias parafinadas, foram extraídas com kit específico, tratadas com DNase, quantificadas por fluorimetria e sintetizadas para cDNA. A expressão relativa de cada citocina foi determinada (em duplicata) por PCR em tempo real. As reações foram normalizadas frente ao padrão de expressão do gene endógeno GAPDH, que foi previamente padronizado. O padrão de expressão de cada gene alvo foram determinados segundo a fórmula do \"CT comparativo\" (2-??CT), na qual calcula-se quantas vezes mais ocorre a expressão do gene alvo em relação a indivíduos normais. Também incluído nesse estudo 5 amostras de biopsia de pele de indivíduos normais (grupo IV). Os resultados foram expressos em média de quantificação relativa, a análise estatística foi realizada utilizando foi determinada por Teste t não pareado e teste F para comparação de variâncias, onde três grupos de pacientes foram formados. Grupo I, 35 pacientes com LTA, cuja expressão relativa de IFN-? foi inferior a 100. Grupo II, 5 pacientes com LTA cuja expressão relativa de IFN-? foi superior a 100. Grupo III, 10 pacientes com leishmaniose mucosa. Os níveis de expressão para IFN-? foram 33,34; 214,1 e 129,6 vezes maiores para os Grupos I, II e III, respectivamente do que as amostras do controle normal. Para o TNF-? foram 11,22; 2,37 e 4,59 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para IL-10 foram 5,14; 11,54 e 2,51 vezes superiores aos valores normais nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para IL-27 foram 15,81; 85,29 e 17,29 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para o TGF-? foram 5,38; 4,33 e 4,72 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para a IL-6 foram 5,92; 5,69 e 2,09 vezes superiores aos valores normais nos Grupos I, II e III, respectivamente. Estes resultados foram semelhantes a resultados de estudos que analisam a expressão de citocinas já sintetizadas. No geral, os resultados de expressão gênica das citocinas estudadas sugerem que a exacerbação da resposta imune do perfil Th1 (IFN-?) poderia levar ao surgimento de lesões mais graves nos pacientes dos Grupos II e III. Os níveis elevados de mRNA de IL-10, observado nos pacientes do Grupo II podem promover baixa ativação macrofágica, colaborando com a replicação do parasita e assim culminar com a progressão da doença. A expressão de mRNA de IL-27 não interferiu na expressão de mRNA de IFN-? nas células dos pacientes com leishmaiose tegumentar ou leishmaniose mucocutânea. Em conclusão, estes resultados podem sugerir que os pacientes do Grupo II podem desenvolver formas mais graves de LTA quando comparados aos do Grupo I. / The immune response triggered in patients with American cutaneous leishmaniasis (ACL) is predominantly cellular. Thus, the study of the immunological mechanisms responsible for the formation, progression and cure of this infection is of great importance, considering the deformation that it can cause in infected individuals. This study investigated the expression of IFN-?, IL-10, IL-27, TNF-?, TGF-? and IL-6 mRNA in 40 formalin-fixed paraffin-embedded paraffin biopsies (FFPE) from patients with clinical and laboratory diagnosis for LTA. A group of 10 FFPE biopsies collected from patients with clinical diagnosis of mucosal leishmaniasis (MCL) was used to control the evolution of the infection. Initially, RNA extraction, cDNA synthesis and the choice of the endogenous gene were standardized in 9 fresh biopsies and 8 FFPE. After these standardizations, the RNA molecules of fragments of paraffin-shaped biopsies were extracted with a specific kit, treated with DNase, quantified by fluorimetry and synthesized for cDNA. The relative expression of each cytokine was determined (in duplicate) by real-time PCR. Reactions were normalized against the expression pattern of the endogenous GAPDH gene, which was previously standardized. The expression pattern results for each target gene were determined by the \"comparative CT\" (2-??CT) formula, in which it is calculated how many times more the expression of the target gene occurs in relation to normal individuals. Also included in this study 5 skin biopsy samples from normal subjects (group IV). The results were expressed as mean relative quantification, statistical analysis was performed using was determined by unpaired t test and F test for comparison of variances, where three groups of patients were formed. Group I, 35 patients with ACL, whose relative expression of IFN-? was less than 100. Group II, 5 patients with ACL whose relative expression of IFN-? was greater than 100. Group III, 10 patients with mucosal leishmaniasis. The expression levels for IFN-? were 33,34; 214,1 and 129,6 times higher for Groups I, II and III, respectively than the samples from the normal control. For TNF-? were 11,22; 2,37 and 4,59 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For IL-10 were 5,14; 11,54 and 2,51 times higher than the normal values in Groups I, II and III, respectively. For IL-27, 15,81; 85,29 and 17,29 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For TGF-? were 5,38; 4,33 and 4,72 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For IL-6 were 5,92; 5,69 and 2,09 times higher than the normal values in Groups I, II and III, respectively. These results were similar to the results of studies that analyze the expression of cytokines already synthesized. In general, the gene expression results of the cytokines studied suggest that the exacerbation of the Th1 profile (IFN-?) immune response could lead to more serious lesions in patients in Groups II and III. Elevated levels of IL-10 mRNA observed in Group II patients may promote low macrophage activation, assisting in the replication of the parasite and thus culminating in the progression of the disease. Expression of IL-27 mRNA did not interfere in the expression of IFN-? mRNA in the cells of patients with tegumentary leishmaiosis or mucocutaneous leishmaniasis. In conclusion, these results may suggest that patients in Group II may develop more severe forms of ACL when compared to those in Group I.