Fatores genéticos e imunológicos influenciam as diferentes respostas observadas entre indivíduos, desde a exposição ao HIV até o desenvolvimento da aids. As quimiocinas e seus receptores atuam na comunicação entre o sistema imune inato e adaptativo após o estabelecimento da infecção. A variabilidade genética dessas moléculas pode ser essencial para a resposta imune, principalmente se essas moléculas agem na fase inicial da infecção, fase esta que definirá o transcurso da doença. Além disso, a investigação da expressão de quimiocinas nos diferentes estágios clínicos da infecção e sua modulação após iniciado o tratamento com ARVs (antirretrovirais) é importante na busca de biomarcadores. Neste estudo, exploramos o papel de quinze polimorfismos candidatos em genes de receptores de quimiocinas e seus ligantes na susceptibilidade e na progressão à aids. Além disso, foram quantificados os níveis plasmáticos de seis quimiocinas em progressores extremos nos diferentes estágios clínicos da infecção e avaliamos o impacto da terapia como moduladora da resposta imune. Os resultados nos mostram que os polimorfismos rs56061981 no CXCL10 (CT/TT, OR: 1,819, IC 95% 1,074-3,081, P=0,026) e rs3091250 no CCR3 (TT, OR: 2,147, IC 95% 1,076-4,287, P=0,030) influenciam na susceptibilidade à infecção pelo HIV. Nas análises de interação gene-gene realizadas por redução multifatorial de dimensionalidade (MDR), observou-se que o rs56061981 no CXCL10 e rs4359426 no CCL22, juntos predizem 57% da susceptibilidade à infecção pelo HIV (P=0,008). Ademais, observou-se que os polimorfismos rs13034664 no CCL20 (CC, OR: 0,214, IC 95% 0,063-0,730, P=0,014) e rs4359426 no CCL22 (CA/AA, OR: 2,685, IC 95% 1,128-6,392, P=0,026) foram associados com a progressão rápida à aids. Com relação aos níveis plasmáticos, o CXCL10 estava significativamente aumentado nos progressores rápidos (Pcorrigido(c)=0,003) e lentos (Pc≤0,0001) pré-aids quando comparado com os controles saudáveis. Neste contexto, sugere-se o CXCL10 como biomarcador em indivíduos crônicos HIV+. Quando avaliadas as subpopulações celulares T auxiliares em HIV+ sob ARV, se observou uma frequência aumentada de linfócitos TCD4+ ativados nos progressores rápidos (1,3% vs. 13,6%, Pc=0,008) e nos progressores lentos (1,3% vs. 5,4%, Pc=0,044) quando comparados com os controles saudáveis. Já a frequência de linfócitos T CD8+ ativados foi mais alta nos progressores rápidos quando comparados com os controles saudáveis (0,32% vs. 8,7%; Pc=0,001). A frequência de células Th2 estava diminuída nos progressores rápidos (Pc=0,027) e, nos progressores lentos, as células Th1 estavam com frequência diminuída, enquanto que a frequência das Th17 estava aumentada quando comparados com os controles saudáveis (Pc=0,007 e Pc=0,042, respectivamente), se observando um desequilíbrio de subconjuntos celulares T CD4+ nos progressores extremos sob ARV. / From HIV exposition to AIDS disease different responses against HIV infection are influenced by immunological and genetic host factors. Chemokines and their receptors link the innate and adaptive system after the establishment of HIV infection. Genetic diversity of these molecules is crucial to the immune response, since they have a pivotal role in the early infection, clinical stage which predicts the disease progression. Furthermore, to investigate the expression of chemokines in different clinical stages of HIV infection and their modulation before and after initiated ART (antiretroviral therapy) is important to identify biomarkers of progression. In this study, we explored the role of 15 candidate polymorphisms in chemokine receptor and chemokine genes on susceptibility to HIV infection and progression to AIDS. Also, plasma levels of six chemokines were quantified in extreme progressors in different clinical stages of infection and the impact of ART, as a modulator of the immune response, was evaluated. The CXCL10 rs56061981 (CT/TT, OR: 1.819, CI 95% 1.074-3.081, P=0.026) and CCR3 rs3091250 (TT, OR: 2.147, CI 95% 1.076-4.287, P=0.030) variants were associated with susceptibility to HIV infection. Also, in the MDR (Multifactor Dimensionality Reduction) analyses, the best model to predict the susceptibility to HIV infection was composed by CXCL10 rs56061981 and CCL22 rs4359426 with 57% of accuracy (P=0.008). In analysis of disease progression, CCL20 rs13034664 (CC, OR: 0.214, CI 95% 0.063-0.730, P=0.014) and CCL22 rs4359426 (CA/AA, OR: 2.685, CI 95% 1.128-6.392, P=0.026) variants were associated with rapid progression to AIDS. Regarding plasma levels, CXCL10 levels were higher in rapid progressors (RPs) (Pcorrected(c)=0.003) and slow progressors (SPs) (Pc≤0.0001) in pre-AIDS when compared to healthy controls and this molecule was suggested as a potential biomarker of disease progression. Furthermore, frequencies of activated CD4+ T-cell were higher in SPs (1.3% vs. 5.4%, Pc=0.044) and RPs (1.3% vs. 13.6%, Pc=0.008) under ART when compared with healthy controls. On the other hand, frequencies of activated CD8+ T cell were elevated in RPs (0.32% vs. 8.7%, Pc=0.001) under ART when compared with controls. Th2 cell frequency was lower in RPs under ART (Pc=0.027) when compared with controls, and Th1 cell frequency was lower (Pc=0.007) and Th17 cells were higher (Pc=0.042) in SPs under ART when compared with healthy controls.

Mycoplasma hyopneumoniae e Mycoplasma flocculare são duas espécies geneticamente muito similares. M. hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína, enquanto M. flocculare é amplamente distribuído em rebanhos suínos, mas nenhuma doença decorrente da sua presença é observada. O repertório de proteínas ortólogas compartilhadas entre estas duas espécies é de 70% e de proteínas de superfície chega em torno de 90%. Diferenças estruturais e funcionais entre as proteínas ortólogas poderiam explicar, pelo menos em parte, o caráter de patogenicidade ou não destas espécies. A fim de identificar domínios diferenciais, foi realizada uma análise comparativa in silico das proteínas de superfície ortólogas de M. hyopneumoniae e M. flocculare. Foram analisados 184 pares de proteínas ortólogas e foram identificados domínios diferenciais em 85% deles. As sequências codificadoras das regiões diferenciais do par de proteínas hipotéticas ortólogas MHP7448_0612, de M. hyopneumoniae, e MF_00357, de M. flocculare, foram clonadas em vetor de expressão pGEX-4T-3 e expressas em Escherichia coli para a produção dos polipeptídeos recombinantes correspondentes (rMHP61267-169 e rMF35767-197, respectivamente). A resposta imune humoral e celular de camundongos foi analisada para avaliação das possíveis propriedades imunológicas diferenciais de domínios correspondentes de M. hyopneumoniae e de M. flocculare. Ambos os polipeptídeos recombinantes induziram altos níveis de IgG a partir do dia 30 pós-imunização em relação ao grupo controle, mas não houve diferença significativa entre os níveis de IgG entre os animais imunizados com os polipeptídeos recombinantes. Na avaliação da resposta celular, rMHP61267-169 induziu níveis significativamente maiores de IFN-γ e IL-10 em esplenócitos de camundongos não imunizados em relação aos níveis induzidos por rMF35767-197 ou aos observados no controle sem estímulo. Os domínios diferenciais induziram respostas imunes celulares diferenciais em camundongos. Esses resultados apontam um possível envolvimento de domínios diferenciais na resposta imune do hospedeiro contra M. hyopneumoniae e no desenvolvimento da doença. / M. hyopneumoniae and M. flocculare are two genetically similar bacterial species. M. hyopneumoniae is the etiological agent of porcine enzootic pneumonia, while M. flocculare is also widespread in swine herds, although no disease has been associated with its presence. The repertoire of orthologous proteins between M. hyopneumoniae and M. flocculare are 70% of total CDS and 90% of surface proteins. Functional and structural differences between orthologous surface proteins could explain the pathogenicity or non-pathogenicity of these species. To identify differential domains between pairs of orthologous, a comparative in silico analysis of orthologous surface proteins between these two species was performed. A total of 184 ortholog pairs were analyzed and differential domains were found in 85% of them. The coding sequences of differential domains from the pair of ortholog hypothetical proteins MHP7448_0612, from M. hyopneumoniae, and MF_00357, from M. flocculare, were cloned into pGEX-4T-3 and expressed in E. coli for the production of the correspondent recombinant polypeptides (rMHP61267-169 and rMF35767-197, respectively). The humoral and cellular immune response from mice were assessed to evaluate the possible differential immunological properties of corresponding domains from M. hyopneumoniae and M. flocculare. Both recombinant polypeptides induced high levels of IgG starting at 30 post-imunization in comparison to the control group, but no significant difference was observed between IgG levels from mice immunized with the recombinant polypeptides. Regarding cellular immune responses, rMHP61267-169 induced high levels of IFN-γ e IL-10 in splenocytes from non-immunized mice, in comparison to the levels observed in animals immunized with rMF35767-197 or in the non-stimulated control group. Differential domains induced differential cellular immune response in mice. This results suggest a possible involvement of differential domains in host immune response against M. hyopneumoniae and in disease development.

Mycoplasma hyopneumoniae e Mycoplasma flocculare são duas espécies geneticamente muito similares. M. hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína, enquanto M. flocculare é amplamente distribuído em rebanhos suínos, mas nenhuma doença decorrente da sua presença é observada. O repertório de proteínas ortólogas compartilhadas entre estas duas espécies é de 70% e de proteínas de superfície chega em torno de 90%. Diferenças estruturais e funcionais entre as proteínas ortólogas poderiam explicar, pelo menos em parte, o caráter de patogenicidade ou não destas espécies. A fim de identificar domínios diferenciais, foi realizada uma análise comparativa in silico das proteínas de superfície ortólogas de M. hyopneumoniae e M. flocculare. Foram analisados 184 pares de proteínas ortólogas e foram identificados domínios diferenciais em 85% deles. As sequências codificadoras das regiões diferenciais do par de proteínas hipotéticas ortólogas MHP7448_0612, de M. hyopneumoniae, e MF_00357, de M. flocculare, foram clonadas em vetor de expressão pGEX-4T-3 e expressas em Escherichia coli para a produção dos polipeptídeos recombinantes correspondentes (rMHP61267-169 e rMF35767-197, respectivamente). A resposta imune humoral e celular de camundongos foi analisada para avaliação das possíveis propriedades imunológicas diferenciais de domínios correspondentes de M. hyopneumoniae e de M. flocculare. Ambos os polipeptídeos recombinantes induziram altos níveis de IgG a partir do dia 30 pós-imunização em relação ao grupo controle, mas não houve diferença significativa entre os níveis de IgG entre os animais imunizados com os polipeptídeos recombinantes. Na avaliação da resposta celular, rMHP61267-169 induziu níveis significativamente maiores de IFN-γ e IL-10 em esplenócitos de camundongos não imunizados em relação aos níveis induzidos por rMF35767-197 ou aos observados no controle sem estímulo. Os domínios diferenciais induziram respostas imunes celulares diferenciais em camundongos. Esses resultados apontam um possível envolvimento de domínios diferenciais na resposta imune do hospedeiro contra M. hyopneumoniae e no desenvolvimento da doença. / M. hyopneumoniae and M. flocculare are two genetically similar bacterial species. M. hyopneumoniae is the etiological agent of porcine enzootic pneumonia, while M. flocculare is also widespread in swine herds, although no disease has been associated with its presence. The repertoire of orthologous proteins between M. hyopneumoniae and M. flocculare are 70% of total CDS and 90% of surface proteins. Functional and structural differences between orthologous surface proteins could explain the pathogenicity or non-pathogenicity of these species. To identify differential domains between pairs of orthologous, a comparative in silico analysis of orthologous surface proteins between these two species was performed. A total of 184 ortholog pairs were analyzed and differential domains were found in 85% of them. The coding sequences of differential domains from the pair of ortholog hypothetical proteins MHP7448_0612, from M. hyopneumoniae, and MF_00357, from M. flocculare, were cloned into pGEX-4T-3 and expressed in E. coli for the production of the correspondent recombinant polypeptides (rMHP61267-169 and rMF35767-197, respectively). The humoral and cellular immune response from mice were assessed to evaluate the possible differential immunological properties of corresponding domains from M. hyopneumoniae and M. flocculare. Both recombinant polypeptides induced high levels of IgG starting at 30 post-imunization in comparison to the control group, but no significant difference was observed between IgG levels from mice immunized with the recombinant polypeptides. Regarding cellular immune responses, rMHP61267-169 induced high levels of IFN-γ e IL-10 in splenocytes from non-immunized mice, in comparison to the levels observed in animals immunized with rMF35767-197 or in the non-stimulated control group. Differential domains induced differential cellular immune response in mice. This results suggest a possible involvement of differential domains in host immune response against M. hyopneumoniae and in disease development.

O antígeno B (AgB) é uma proteína polimérica de aproximadamente 160 kDa secretada durante a fase larval dos parasitos do gênero Echinococcus. Sua função provavelmente está relacionada com a evasão da resposta imune do hospedeiro, e tem sido relatado que seus genes apresentam alta diversidade de seqüências, mesmo dentro de um único metacestóide de E. granulosus. Em E. multilocularis o AgB é codificado por uma família multigênica composta por pelo menos cinco genes. Neste trabalho nós avaliamos o efeito do sistema imune dependente de célula T sobre a diversificação somática dos genes do antígeno B em metacestóides de E. multilocularis obtidos de camundongos secundariamente infectados com microcistos: uma linhagem proficiente e outra não proficiente quanto à resposta imune celular (BALB/c e nude, respectivamente). Os animais foram sacrificados após um ou dois meses de infecção para coleta da massa parasitária e extração do RNA. Após a síntese do cDNA foram feitas PCRs específicas para quatro genes (EmAgB1, EmAgB2, EmAgB3 e EmAgB4) e o produto desta reação foi clonado. Os clones resultantes foram analisados quanto à presença de polimorfismo através de PCR-SSCP e os alelos descobertos foram seqüenciados. A diversidade alélica foi calculada através do Índice de Diversidade de Shannon e desvios da neutralidade foram testados através do Teste D de Tajima e através do Teste Exato de Fisher, que detecta excesso de mutações não-sinônimas em relação às mutações sinônimas. Um teste adicional, que calcula a probabilidade (através da distribuição binomial) de ocorrência das mutações não-sinônimas, foi realizado. Comparando a diversidade encontrada nos genes do AgB não encontramos evidências de que a pressão imposta pelo sistema imune esteja relacionada com a diversidade de seqüências encontrada em nosso estudo. O gene EmAgB2 apresentou Índices de diversidade mais elevados (principalmente quando coletado do camundongo BALB/c após um mês de infecção) e também apresentou maior quantidade de indels. Apenas um dos alelos encontrados em nossa amostragem foi compartilhado por parasitos coletados de diferentes camundongos, sugerindo que os alelos possam ter surgido após a infecção dos camundongos. O Teste D de Tajima resultou em valores negativos em todas as análises. Entretanto, nem o Teste Exato de Fisher nem a análise da probabilidade binomial encontraram excesso de mutações não sinônimas para qualquer dos genes analisados. Portanto, nossos dados indicam que os genes do AgB durante a fase de metacestóide evoluem segundo o modelo neutro e o valor D de Tajima negativo pode ser explicado devido a rápida proliferação celular do metacestóide após a infecção secundária. / The Antigen B (AgB) is a polymeric protein secreted during the larval stage of the Echinococcus flatworms. The AgB is involved with the evasion of host immune response and its genes show high variability, even inside a single E. granulosus metacestode. To date, five AgB genes have been reported in the E. multilocularis genome. In this work we analyzed the AgB diversification in E. multilocularis recovered from secondarily infected mice. Two different mouse strains were infected with microcysts of E. multilocularis: BALB/c and nude, which are T-Cell immune response proficient and non-proficient, respectively. The mice were necropsed one or two months post infection and the parasite mass was collected for RNA extraction. Following the cDNA synthesis, each AgB gene (EmAgB1, EmAgB2, EmAgB3 and EmAgB4) was amplified in a specific PCR and the products of these reactions were cloned. The polymorphism present in each AgB gene was assessed by PCR-SSCP and the variant alleles were sequenced. The allele diversity for each gene was calculated by the Shannon Diversity Index and neutrality departures were tested by Tajima’s D Test, and Fisher’s Exact Test, which evaluates the excess of non-synonymous over synonymous substitutions. An additional test, which estimates the binomial probability of occurrence of nonsynonymous mutations, was also performed. We did not find association between the AgB diversity and the immune response of the host. The EmAgB2 gene showed the largest diversity index among the four genes (especially when collected from BALB/c at first month post infection) and it also presented a large quantity of alleles containing indels. The parasites collected from different mice do not share AgB alleles (with a single exception), and suggest that the new alleles could have arisen after the mice infection. The Tajima’s D Test resulted in negative values in all analyses. However, both Fisher’s Exact Test and the binomial probability analysis did not detect excess of non-synonymous mutation in our samples. Therefore, our data suggest that AgB genes evolve by the neutral model during the metacestode stage, and the negative Tajima’s D value could be explained by the fast cellular proliferation of the metacestode after secondary infection.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-09T13:42:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DissertacaoThays Almeida.pdf: 1479816 bytes, checksum: 7f1cecad4d86341af2b9e3222a0f79be (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T13:42:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DissertacaoThays Almeida.pdf: 1479816 bytes, checksum: 7f1cecad4d86341af2b9e3222a0f79be (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES e CNPq / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias e, no Brasil, a Leishmania (V.) braziliensis é a espécie de maior incidência para Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Em todas as suas formas clínicas, a resposta imune é dependente de células T, por isso, torna-se importante compreender os mecanismos imunológicos responsáveis pela formação, progressão e cura da doença. O presente estudo teve como objetivo identificar, através da técnica PCR quantitativa em tempo real (qPCR), o perfil de expressão de mRNA para IFN-γ, TNF-α, TGF-β, IL-10 e IL-4 e da enzima iNOS em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de pacientes com LTA após estimulação com os antígenos solúvel e insolúvel de L.(V.) braziliensis. Associou-se o perfil de expressão desses mediadores ao tamanho, tempo e número de lesões, além da resposta a intradermorreação de Montenegro (IDRM). Células de 27 pacientes e 6 controles foram incubadas por 24 horas na presença do mitógeno fitohemaglutinina (PHA) ou dos antígenos solúvel (AgSol) e insolúvel (AgIns) de L. (V.) braziliensis. A expressão de mRNA para as citocinas e para a iNOS foi avaliada por qPCR e as análises dos resultados foram feitas através do método Ct comparativo e pelos testes não-paramétricos Wilcoxon e Mann-Whitney. Em relação ao AgSol, foi verificada diferença significava da expressão de IFN-γ e TNF-α em pacientes quando comparados aos controles. Quanto ao AgIns, houve expressão significativa das citocinas IFN-γ, TNF-α e IL-4 em pacientes quando comparados aos controles. As citocinas IL-10 e TGF- β foram expressas frente a todos os estímulos utilizados, não apresentando diferença significativa entre e intra-grupos. Não houve expressão de iNOS com nenhum dos estímulos utilizados. Comparando os antígenos de L.(V.) braziliensis utilizados, foi observado maior expressão de IFN-γ e TNF-α frente ao antígeno insolúvel do parasita. A partir desses dados, podemos sugerir que ambas frações antigênicas do parasita são capazes de induzir uma resposta imune específica em pacientes com LTA ativa. Além disso, os dados obtidos nesse estudo sugerem a existência de um perfil de resposta imune Th1 para o antígeno solúvel e um perfil de resposta imune Th1 e Th2 considerando o antígeno insolúvel do parasita. A expressão gênica significativa para as citocinas TNF-α e IFN-γ, sugere que os pacientes tenham montado uma eficiente resposta imune contra o parasita e a presença da citocina IL-10 que eles estariam promovendo um mecanismo imunorregulatório sobre a forte resposta imune inflamatória exercida pelas citocinas Th1. Dentre os antígenos utilizados, pode-se sugerir que, devido a sua composição, o antígeno insolúvel seja mais imunogênico que o antígeno solúvel e que, por isso, essa molécula antigênica seja uma possível candidata a vacina e alvos para a imunoterapia. A ausência de expressão da iNOS pode ter sido devido a presença de TGF-β, que estaria regulando negativamente a produção de NO e consequentemente de iNOS. Além disso, pode estar havendo um mecanismo auto-regulatório para evitar produção em excesso de NO. A existência do perfil Th1 e Th2 pode ser explicado pelo estágio de desenvolvimento da doença. Assim, pelo fato de a LTA apresentar uma resposta Th1 multifacetada torna-se necessário estudos complementares para verificar o papel de outros tipos celulares e citocinas na progressão e cura da doença.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T14:58:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Thays Almeida.pdf: 1586385 bytes, checksum: 532dc98dd16a7bf1c4fdc0f60eb9fb91 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T14:58:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Thays Almeida.pdf: 1586385 bytes, checksum: 532dc98dd16a7bf1c4fdc0f60eb9fb91 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-08-28 / CAPES; CNPq / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias e, no Brasil, a Leishmania (V.) braziliensis é a espécie de maior incidência para Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Em todas as suas formas clínicas, a resposta imune é dependente de células T, por isso, torna-se importante compreender os mecanismos imunológicos responsáveis pela formação, progressão e cura da doença. O presente estudo teve como objetivo identificar, através da técnica PCR quantitativa em tempo real (qPCR), o perfil de expressão de mRNA para IFN- , TNF- , TGF- , IL-10 e IL-4 e da enzima iNOS em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de pacientes com LTA após estimulação com os antígenos solúvel e insolúvel de L.(V.) braziliensis. Associou-se o perfil de expressão desses mediadores ao tamanho, tempo e número de lesões, além da resposta a intradermorreação de Montenegro (IDRM). Células de 27 pacientes e 6 controles foram incubadas por 24 horas na presença do mitógeno fitohemaglutinina (PHA) ou dos antígenos solúvel (AgSol) e insolúvel (AgIns) de L. (V.) braziliensis. A expressão de mRNA para as citocinas e para a iNOS foi avaliada por qPCR e as análises dos resultados foram feitas através do método Ct comparativo e pelos testes não-paramétricos Wilcoxon e Mann-Whitney. Em relação ao AgSol, foi verificada diferença significava da expressão de IFN- e TNF- em pacientes quando comparados aos controles. Quanto ao AgIns, houve expressão significativa das citocinas IFN- , TNF- e IL-4 em pacientes quando comparados aos controles. As citocinas IL-10 e TGF- foram expressas frente a todos os estímulos utilizados, não apresentando diferença significativa entre e intragrupos. Não houve expressão de iNOS com nenhum dos estímulos utilizados. Comparando os antígenos de L.(V.) braziliensis utilizados, foi observado maior expressão de IFN- e TNF- frente ao antígeno insolúvel do parasita. A partir desses dados, podemos sugerir que ambas frações antigênicas do parasita são capazes de induzir uma resposta imune específica em pacientes com LTA ativa. Além disso, os dados obtidos nesse estudo sugerem a existência de um perfil de resposta imune Th1 para o antígeno solúvel e um perfil de resposta imune Th1 e Th2 considerando o antígeno insolúvel do parasita. A expressão gênica significativa para as citocinas TNF- e IFN- , sugere que os pacientes tenham montado uma eficiente resposta imune contra o parasita e a presença da citocina IL-10 que eles estariam promovendo um mecanismo imunorregulatório sobre a forte resposta imune inflamatória exercida pelas citocinas Th1. Dentre os antígenos utilizados, pode-se sugerir que, devido a sua composição, o antígeno insolúvel seja mais imunogênico que o antígeno solúvel e que, por isso, essa molécula antigênica seja uma possível candidata a vacina e alvos para a imunoterapia. A ausência de expressão da iNOS pode ter sido devido a presença de TGF- , que estaria regulando negativamente a produção de NO e consequentemente de iNOS. Além disso, pode estar havendo um mecanismo auto-regulatório para evitar produção em excesso de NO. A existência do perfil Th1 e Th2 pode ser explicado pelo estágio de desenvolvimento da doença. Assim, pelo fato de a LTA apresentar uma resposta Th1 multifacetada torna-se necessário estudos complementares para verificar o papel de outros tipos celulares e citocinas na progressão e cura da doença.

Orientador: Francisco Javier Hernandez Blazquez / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_MariaAparecidaMartins_D.pdf: 18291580 bytes, checksum: f4a36f7ff664adade121ccc4f8d16767 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Dois produtos comerciais distintos foram utilizados para avaliar os efeitos dos probióticos quanto à imunoestimulação, proteção contra as diarréias e às possíveis alterações na mucosa intestinal de leitões. Um deles veicula cepas de Lactobacillus acidophilus inativadas; o outro é composto por cultivos mistos de L. acidophilus, Enterococcus faecium e Bifidobacterium bifidum, viáveis. Os animais foram separados em 3 grupos: 1 - grupo de controle; 2 - grupo tratado com probiótico inativado, Grofactor; e 3 - grupo tratado com probiótico composto por células viáveis, Biobac. Os grupos foram tratados durante 30 dias, com 2 doses semanais, exceto o grupo de controle, que recebeu leite materno, ração e água. Ao final do período, foi coletado sangue de todos os animais avaliados para verificação dos níveis de IgA no soro pelo método de ELISA. De cada grupo foram sacrificados 3 animais e procedeu-se à coleta de fragmentos do intestino delgado e linfonodos mesentéricos para estudo morfológico das vilosidades intestinais e identificação das células IgApositivas. Os animais que receberam o probiótico com células viáveis (Biobac) apresentaram o teor de IgA no soro mais elevado que o grupo suplementado com bactérias inativadas (Grofactor) e o grupo controle. A altura das vilosidades intestinais também foi maior no grupo que recebeu bactérias viáveis durante o período de aleitamento. Esses dados sugerem que a adição de probióticos ativos na dieta dos leitões recém-nascidos e/ou após o desmame melhora o desempenho e a saúde dos animais. / Abstract: The immunostimulant and antidiarrheic role of two probiotic products were evaluated. Their effect in the intestinal mucosa of piglets was also investigated. One of the products contains inactivated strains of Lactobacillus acidophilus while the other one is composed by live mixed cultures of L. acidophilus, Enterococcus faecium, and Bifidobacterium bifidum bacteria. Three groups of animals were created: 1 - control group; 2 - animais that received the inactivated probiotic product; 3 - animals that received the probiotic product with live cells. The products were given twice weekly for 30 days with the exception of the control group. At the end of the experimental period, blood samples were taken and the 19A serum levels were measured by ELISA method. Three animals from each group were sacrificed and fragments of the small intestine and mesenteric Iymphonodes were microscopically examined to investigate the size of intestinal glands and villosities and the presence of IgA - positive cells. The animais that received live cells showed higher 19A serum levels, longer intestinal villosities and more IgA - positive cells in the Iymphonodes and intestinal mucosa than the other animals. Their body weight was also higher. These data suggest that live probiotics, when given to newbom pos - weaning piglets, are more efficient than inactivated probiotics in inducing intestinal changes that help to improve the health and performance of swine. / Doutorado / Nutrição Basica e Experimental / Doutor em Alimentos e Nutrição

Orientador: Paulo Cesar Giraldo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T05:18:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feitoza_SandraBaptistadoNascimento_M.pdf: 568737 bytes, checksum: eb7d47efd6ad295a16c4f248ce39c18d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Com a finalidade de investigar e comparar as células de defesa presentes na mucosa vaginal de mulheres com (vaginose bacteriana e candidíase vaginal) e sem vulvovaginites, foram avaliados esfregaços de 128 mulheres atendidas no Ambulatório de Infecções Genitais (AIG) do Departamento de Tocoginecologia (DTG) do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM), Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) e Centro de saúde comunitário (CECOM), no período de junho à dezembro de 2001. Os esfregaços foram preparados com raspado de parede vaginal lateral à direita colhidos com cotonete estéril. A lâmina era rapidamente colocada em frasco de vidro contendo álcool 95% para fixação e posterior coloração com hematoxilina-eosina. Estudou-se sistematicamente a presença de células do tipo neutrófilos, linfócitos, macrófagos, eosinófilos, e plasmócitos em 32 mulheres com diagnóstico de candidíase vaginal, 32 com vaginose bacteriana e 64 sem infecção. Foram analisados dez campos microscópicos por lâmina em ocular de 10X e objetiva de 40X. Além do esfregaço citado, foram realizados exame bacterioscópico a fresco e corado pelo gram, pH vaginal e o teste das aminas. O diagnóstico final foi resultante da associação destes procedimentos. A análise estatística foi feita utilizando-se o teste Exato de Fisher e testes não paramétricos de Kruskal-Wallis, Mann-Whitney e teste de Dunn para comparações múltiplas. No grupo de mulheres com candidíase vaginal houve uma predominância de células do tipo neutrófilos (mediana: 67,5) e linfócitos (mediana: 2,5), sendo esse achado significante em relação ao grupo de mulheres com vaginose bacteriana (mediana 3,0 e 0 respectivamente - p<0,01) e, com o grupo controle apenas houve significância para os neutrófilos (mediana 20,5 - p<0,01). Houve também diferenças significativas entre os controles e o grupo de mulheres com vaginose bacteriana no caso dos neutrófilos (p<0,01). Os outros tipos celulares não foram significantes em todos os grupos analisados. Os resultados mostraram ser possível, de maneira fácil e simples, a identificação e quantificação das células de defesa pesquisadas. As células do tipo neutrófilo foram as mais encontradas em todos os grupos, seguidas dos linfócitos e já em menor proporção, observou-se a presença dos eosinófilos e macrófagos. Os plasmócitos foram encontrados em apenas uma paciente com candidíase vaginal. Nas pacientes com vaginose bacteriana notou-se uma diminuição acentuada das células de defesa. Morfologicamente essas células são iguais às células sanguíneas e parecem manter a mesma proporcionalidade / Abstract: The aim of this study was to investigate and compare defense cells in the vaginal mucosa of women with (bacterial vaginosis and vaginal candidiasis) and without vulvovaginitis. One hundred and twenty-eight (128) women were examined at the Genital Infections Outpatient Clinic (GIOC) in the Tocogynecology Department at the Center for the Integral Care of Women¿s Health (CAISM) in the State University of Campinas (UNICAMP) and the Community Health Center (CECOM) from June to December, 2001. Smears were prepared with scrapes taken from the right lateral vaginal wall and collected with a sterile cotton-tipped applicator. The glass slide was rapidly placed in a glass flask containing 95% alcohol for fixation and subsequent hematoxylin-eosine staining. The presence of cells such as neutrophils, lymphocytes, macrophages, eosinophils and plasma cells were systematically studied in 32 women diagnosed with vaginal candidiasis, 32 diagnosed with bacterial vaginosis and 64 without infection. Ten fields per slide were scanned using a 10x ocular lens and a 40x objective lens. The diagnosis was made considering the fresh and gram-stained bacterioscopic exams, vaginal pH and the whiff test (for amine). Statistical analysis was done applying the Fisher exact test, the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney nonparametric tests and the Dunn test for multiple comparisons. In the group of women with vaginal candidiasis, the predominant types of cells were neutrophils (median: 67.5) and lymphocytes (median:2.5), this finding being significant compared to the group of women with bacterial vaginosis (median:3.0 and 0-p<0.01), respectively. Compared to the control group, only neutrophils were significant (median:20.5-p<0.01). There were also significant differences between the controls and the group of women with bacterial vaginosis regarding neutrophils (p<0.01). The other cell types were not significant in all the groups analyzed. Results showed that it was possible to identify and quantify the defense cells investigated in an easy and simple manner. Neutrophils were the most frequently found cells in all groups, followed by lymphocytes and a lower proportion of eosinophils and macrophages. Plasma cells were found in only one patient from the vaginal candidiasis group. In the bacterial vaginosis group, a pronounced overall reduction in these cells was observed. Morphologically, these cells are equivalent to blood cells and seem to maintain the same proportions / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientadora : Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T14:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Britto_MariaHelenaSeabraSoaresde_M.pdf: 6213780 bytes, checksum: 91f381a054a67b9a52f1bb1c78d01132 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: No presente trabalho procuramos estudar a variação dos isotipos de imuneglobulinas, IgM, IgG1, IgG2a e IgG2b, a especificidade de anticorpos produzidos contra a cepa Y do T. cruzi, bem como a atividade funcional destes anticorpos durante a infecção experimental de camundongos CBA/J, sensível, C57BL/I0 e F1 (CBA/J x C57BL/10), resistentes. O conjunto de resultados obtidos nos permitiram concluir que: 1) A alteração isotípica ocorre após a primeira semana de infecção, 7º dia; 2) Cada linhagem de camundongos apresenta um perÍodo de síntese máxima com uma variação isotípica característica: a linhagem CBA/J no 282 dia, com a predominância de IgG1, IgG2a e IgG2b, apresentando alteração em relação ao normal de 2,0 a 3,0 vezes; a linhagem C57BL/10, no. 35º dia, com alteração da relação normal de 4,0 a 5,0 vezes com a participação de IgM, IgG2a e IgG2b; e, o F1 no 21° dia, com IgM e IgG2a aumentadas de 2,0 a 3,0 vezes em relação aos controles normais; 3) A análise da especificidade dos anticorpos por imunefluorescência não mostrou variação significativa na cinética de aparecimento e nem nos títulos de anticorpos anti-T. cruzi nos plasmas das três linhagens de camundongos até'o 14º dia após infecção. A partir do 21º dia surgiram variações nos títulos entre as linhagens, que se estabeleceram a partir do 28º dia, com titulos inferiores na linhagem suscetível; 4) A análise da especificidade, por imuneprecipitação não mostrou variação no padrão de peptídeos reconhecidos pelos plasmas das três linhagens de camundongos. O reconhecimento destes peptídeos iniciou-se no 142 dia e estabilizou-se a partir do 28º dia após a infecção. 5) Testes de imunoproteção Passiva demonstraram a presença de anticorpos protetores nos plasmas das linhagens de camundongos resistentes, C57BL/l0 e F1 obtidos a partir do 28º dia após a infecção; embora as atividades destes anticorpos sejam distintas, Já que os plasmas de C57BL/l0 n~o, foram capazes de controlar a parasitemia. 6) Nossos resultados, sugerem que a resistência à infecção pode ser correlacionada com a produção de anticorpos específicos contra um pequeno número de determinantes e, que as linhagens resistentes, C57BL/l0 e F1, produzem estes anticorpos precocemente e em níveis superiores aos da linhagem suscetível CBA/J / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-12T14:42:08Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Silvane Maria Braga Santos.pdf: 3289698 bytes, checksum: 7e660470acd85c6b8fccb37fbc473eea (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-08-22T13:19:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Silvane Maria Braga Santos.pdf: 3289698 bytes, checksum: 7e660470acd85c6b8fccb37fbc473eea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T13:19:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Silvane Maria Braga Santos.pdf: 3289698 bytes, checksum: 7e660470acd85c6b8fccb37fbc473eea (MD5) / FAPESB; CNPq / O vírus linfotrópico de células T humanas tipo 1 (HTLV-I) é um retrovírus que infecta preferencialmente células T, causando grandes alterações na resposta imune. A maioria dos indivíduos infectados é assintomática (portadores do HTLV-I) e somente uma minoria desenvolve doenças como a leucemia/linfoma de células T do adulto (LLcTA) ou a mielopatia associada ao HTLV-I / paraparesia espástica tropical (HAM/TSP). A resposta imune nos indivíduos infectados pelo HTLV-I é caracterizada por uma ativação intensa e persistente das células T com proliferação e produção espontânea de citocinas pro-inflamatórias como IFN- e TNF-. Este estudo avalia a resposta imune de indivíduos infectados pelo vírus e a capacidade de citocinas, antagonistas de citocinas e infecções causadas por helmintos de modular esta resposta. A resposta imune foi determinada pelo perfil de citocinas presentes no sobrenadante de cultura de células mononucleares não estimuladas, descrição das populações de células envolvidas na resposta imune e na avaliação da freqüência e tipo de células que apresentam marcadores de ativação celular e secretam citocinas. Pacientes com HAM/TSP apresentaram uma ativação celular intensa caracterizada por uma maior proliferação e produção espontânea de IFN- e TNF-, maior freqüencia de linfócitos T CD4+ e CD8+ produzindo IFN- e TNF- e um aumento de células T CD8+/CD28- quando comparados com indivíduos assintomáticos. Observou-se, entre os portadores assintomáticos, uma grande variabilidade na produção de IFN-, com alguns indivíduos apresentando concentrações similares às observadas nos pacientes com HAM/TSP. A adição de citocinas supressoras da resposta imune (IL-10 e TGF-) e antagonistas de citocinas (anti-IL-2, anti-IL-12 e anti-IL-15) às culturas de células dos indivíduos infectados pelo HTLV-I mostrou que a IL-10 e a adição simultânea de anti-IL-2 e anti-IL-15 reduzem significantemente a síntese espontânea de IFN- em indivíduos assintomáticos quando comparados com HAM/TSP. Adicionalmente, xv foi identificado um sub-grupo de indivíduos assintomáticos, freqüentemente alto produtores de IFN-, que não apresentam atividade imunoregulatória após adição de citocinas e antagonistas de citocinas, comportando-se imunologicamente como os pacientes com HAM/TSP. A co-infecção de indivíduos assintomáticos infectados pelo HTLV-I com helmintos (Strongyloides stercoralis e Schistosoma mansoni) resultou na diminuição da síntese de IFN-, menor freqüência de células T CD4+ e CD8+ produzindo IFN- e uma maior freqüência de células produzindo IL-5 e IL-10. Quando comparados com portadores assintomáticos, sem co-infecção por helmintos, indivíduos co-infectados apresentaram uma carga proviral menor. Adicionalmente, observou-se uma maior prevalência de infecções por helmintos entre os portadores assintomáticos do que nos pacientes com HAM/TSP. Estes resultados sugerem que a co-infecção por helmintos reduz a ativação das células tipo 1 e influencia a expressão clínica da infecção pelo HTLV-I.