A sobrevivência da maioria das espécies de Felideos selvagens conhecidas, foi colocada em risco por diversos fatores, entre eles a perda difusa de habitat, a caça ilegal e a fragmentação e degradação de suas áreas de ocorrência. Para o sucesso de um plano conservacionista faz-se necessária a utilização de biotecnologias direcionadas à preservação da variabilidade genética das populações de animais selvagens. Na prática, a aplicação de biotécnicas reprodutivas no manejo destas populações enfrenta dificuldades como a distância entre os indivíduos que se deseja acasalar ou a distância destes em relação aos centros de pesquisa onde se encontra a estrutura necessária para manipulação de seus gametas. O resfriamento é uma técnica de conservação de sêmen frequentemente utilizada para contornar estes problemas, porém pode submeter os gametas ao estresse oxidativo. Sabe-se que as espécies reativas ao oxigênio responsáveis por este estresse podem causar danos estruturais significantes às membranas e, principalmente, ao material genético dos espermatozóides. O uso de diluidores e antioxidantes que possam promover uma proteção aos espermatozóides contra os danos do estresse oxidativo pode ser uma alternativa para manter a qualidade do sêmen sob refrigeração. Para avaliar esta hipótese, o sêmen do gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775) foi submetido a testes convencionais e funcionais em diferentes tempos de refrigeração a 4°C (2, 12 e 24 horas), utilizando-se três diluidores (TCM 199, Ham F10 e tris-gema-citrato) e o tratamento com glutationa reduzida (GSH) em diferentes concentrações (0; 0,5; 1,0 e 1,5mM) para obter uma melhora na qualidade do sêmen. Os testes convencionais utilizados foram a motilidade e vigor. Os funcionais compreenderam as avaliações da integridade das membranas plasmática e acrossomal, da atividade mitocondrial, e da fragmentação do material genético. Também foi avaliada a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida através da mensuração da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os resultados obtidos para as provas convencionais e funcionais, com exceção da resistência dos espermatozóides ao estresse oxidativo por meio da dosagem TBARS, indicaram que o diluidor tris-gema-citrato (TGC) foi superior aos diluidores TCM 199 (TCM) e Ham F10 (HAM), sendo que não houve efeito do tratamento com GSH. Para todos os diluidores as variáveis referentes aos testes funcionais apresentaram correlação com as variáveis referentes aos testes convencionais. Apenas para os diluidores HAM e TGC a concentração de TBARS apresentou correlação com a atividade mitocondrial e integridade acrossomal. Nas amostras diluídas no TGC não foram verificados efeitos do tratamento com GSH, ou do tempo de refrigeração no grau de integridade do DNA das células espermáticas. Também nas amostras diluídas em TGC, a integridade do DNA correlacionou-se com a concentração de TBARS e com aatividade mitocondrial, mas não com os testes convencionais e os outros testes funcionais. Conclui-se que o melhor diluidor para manter o sêmen do gato-do-mato-pequeno sob refrigeração a 4ºC, por 24 horas, é o diluidor à base de gema de ovo (TGC), sendo que o tratamento antioxidante com GSH nas concentrações utilizadas não apresentou efeito sobre a qualidade deste sêmen. / The survival of most of the known wild feline species was jeopardized by diffuse habitat lost, illegal hunting and fragmentation and devastation of their occurrence areas. The use of biotechnologies aiming to preserve the genetic variability of wild animal populations is crucial for the success of a conservationist program. The practical application of reproductive biotechnologies on the management of these populations faces difficulties such as the distance between individuals included in a breeding plan or between the animals and the research centers where the necessary structure to manipulate their gametes is located. Semen cooling is a conservation technique frequently used to overcome those problems. However such technology may submit the spermatozoa to the oxidative stress. It is well known that the reactive oxygen species which are responsible for this stress can cause structural damages to the membranes and especially to the genetic material of the spermatozoa. The use of extenders and antioxidants that could protect the spermatozoa against oxidative damages can be an alternative to maintain the quality of semen samples under cooling. In order to test this hypothesis semen samples of tigrina (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775) was submitted to conventional and functional tests at different cooling periods (4°C; 2, 12 and 24 hours), using three extenders (TCM 199, Ham\'s F10 and Tris-egg yolk-citrate) and treatment with reduced glutathione (GSH) in different concentrations (0, 0.5, 1.0 and 1.5mM). Conventional tests used in the present experiment were motility and vigor. Functional tests included the evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, of mitochondrial activity and of DNA fragmentation. The susceptibility of the spermatozoa to the induced lipidic peroxidation followed by the measurement of thiobarbituric acid reactive substances concentration (TBARS) was used as an index of oxidative stress. Results obtained for the conventional and functional tests indicated that the tris-egg yolk citrate (TGC) extender was superior to the TCM 199 (TCM) and the Ham\'s F10 (HAM). No effect of GSH was observed. For all extenders, correlations were found between the functional tests and the conventional tests variables. Only for the HAM and TGC extenders, the concentration of TBARS showed negative correlation with mitochondrial activity and acrosomal integrity. For the samples diluted in TGC, no effects of GSH treatment or cooling time was observed on the spermatic cells DNA integrity. Also in sample diluted in TGC, the DNA integrity was correlated with the concentration of TBARS and the mitochondrial activity, but not with conventional tests the others functional tests. Results of the present experiment suggested that the best extender to maintain the semen of tigrina under 4°C for 24 hours is the one containing egg yolk (TGC), and the antioxidant treatment with GSH showed no effect on semen quality.

Sabe-se que a criopreservação do sêmen provoca uma perda significativa na qualidade espermática. Apesar de diversos estudos visando à melhora na qualidade do sêmen pós-descongelamento, é de consenso geral que a gema de ovo apresenta uma significante capacidade em evitar as crio-injúrias. No entanto, a grande variação na sua composição, assim como o risco potencial para a contaminação do diluidor, caso certos contaminantes estejam no produto in natura, são empecilhos para sua utilização para a exportação do sêmen, assim como sua utilização em humanos. Deste modo, estudos visando substituir a gema de ovo por produtos quimicamente definidos e de origem não-animal, são de extrema importância. Neste contexto, a lecitina da soja, por possuir uma fração de lipoproteína de baixa densidade semelhante à encontrada na gema de ovo, pode ser uma alternativa interessante. O presente estudo visa comparar diluidores a base de lecitina de soja e aqueles contendo gema de ovo utilizados rotineiramente para a refrigeração e criopreservação do sêmen canino. Para isto, foi utilizado o sêmen de 12 cães adultos, que foi refrigerado e criopreservado em diluidores a base de gema de ovo (OVO) e a base de lecitina de soja (LEC) em diferentes concentrações (0,01; 0,05 e 0,1%) e apresentações (FP40, 8160 e Solec F). O sêmen foi avaliado após refrigeração (2, 24, 48, 72, 96 e 120 horas; Experimento 1) e após criopreservação (pós refrigeração, pós glicerolização e pós descongelação; Experimento 2) através da análise convencional do sêmen (i.e., motilidade - CASA) e funcionais (i.e., integridade de membrana - eosina/nigrosina; integridade de acrossomo - Fast Green / Rosa Bengala; atividade mitocondrial - 3´3 Diaminobenzidina; fragmentação do DNA - SCSA; susceptibilidade ao estresse oxidativo - substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico). Os resultados do Experimento 1 indicaram que, semelhante ao ovo, todas as lecitinas na concentração 0,01% foram capazes de manter a motilidade em torno de 50% por até 72 horas. Após 96 horas, o diluidor Solec F apresentou melhor resultado em relação ao ovo na atividade mitocondrial, e após 120 horas a concentração 0,01%, apresentou maior motilidade do que o ovo (30,00 ± 10,69; 8,33 ± 1,84, respectivamente). No sêmen criopreservado (Experimento 2), as menores concentrações de lecitina apresentaram resultados semelhantes ao ovo tanto na motilidade quanto na atividade mitocondrial. Os resultados indicam que a lecitina pode ser uma boa alternativa à gema de ovo para a refrigeração e criopreservação do sêmen canino. / Semen cryopreservation, an essential step on biotechnologies applied to reproduction, is known to induce significant loss on sperm quality. Despite several studies aiming to improve post-thaw quality, it is generally agreed that egg yolk is the most effective in protecting sperm against cryo-injuries. However, the considerable variation on egg yolk composition as well as the potential risk of disseminating diseases when used in natura, are obstacles to semen exportation as well as the use in human. Therefore, studies aiming to substitute the egg yolk for chemically defined components or animal free products are extremely important. In this context, soy lecithin, which contains a fraction of low density lipoprotein, appears to be an interesting alternative. Thus, the present study aims to compare semen extenders containing soy lecithin or egg yolk on dog semen cryopreservation and refrigeration. Towards this aim, semen of 12 adult dogs were be refrigerated and cryopreserved in Tris-Fructose-Citric acid extenders with egg yolk (OVO) or soy lecithin (LEC; in different concentrations - 0,01; 0,05; 0,1% and presentations - FP40; 8160; Solec F). Semen was evaluated after chilling (2, 24, 48, 72, 96 and 120 hours; Experiment 1) and after cryopreservation (post refrigeration, post-glycerolization, and post-thaw; Experiment 2) for routine semen analysis (e.g., motility, CASA) and functional tests (e.g., membrane integrity - eosin/nigrosin; acrosome integrity - fast green/Bengal rose; mitochondrial activity - 3´3 diaminobenzidine; DNA fragmentation - SCSA; susceptibility to oxidative stress - thiobarbituric acid reactive substances). Results were statistically analyzed using the SAS System for Windows. Results of experiment 1 indicate that, similar to the egg yolk, all types of lecithin used in the 0.01% concentration, were able to maintain sperm motility around 50% for 72 h. After 96 h, the extender containing the lecithin Solec F showed better results regarding mitochondrial activity when compared to the egg yolk. Furthermore, after 120 h, the same extender with the 0.01% concentration, showed higher motility when compared to the egg yolk (30.00 ± 10.69 and 8.33 ± 1.84%, respectively). On the other hand, for the cryopreserved samples (Experiment 2), lower concentrations of lecithin showed similar results for mitochondrial activity and motility when compared to the egg yolk. Results found in the present study indicate that soy lecithin may be a good alternative to substitute the egg yolk for both refrigeration and cryopreservation of dog semen.

O objetivo do presente estudo é descrever as características físicas, químicas, morfológicas e funcionais do sêmen do tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) em cativeiro. Estes resultados representam um dos primeiros requisitos para o conhecimento das características seminais da espécie, visando, em médio prazo, a aplicação de técnicas de reprodução assistida e a formação de bancos de germoplasma. Treze animais foram submetidos à colheita de sêmen em zoológicos no estado de São Paulo Brasil. O método para colheita de sêmen foi a eletroejaculação, semelhante ao realizado em várias espécies silvestres e domésticas, resultando em onze amostras colhidas de nove indivíduos (69,23%). Os testes convencionais indicaram um volume médio de 1,30 ± 0,58 ml, a motilidade média de 33,18 ± 20,14%, o vigor médio de 2,30 ± 0,65, a concentração média de 129,41 ±114,3 x 106 / cm3, o pH médio de 7,44 ± 0,60. A avaliação morfológica apresentou média de defeitos totais de 64,53 ± 19,97%, defeitos maiores 53,77 ± 33,22% e defeitos menores 10,75 ± 6,23%. Nos testes funcionais, a avaliação da integridade da membrana acrossomal mostrou uma média de 16,3 ± 9,3% de danificadas. A avaliação da integridade da membrana plasmática mostrou uma média de 18,9 ± 12,2% de danificadas. A avaliação da atividade mitocondrial revelou as seguintes médias: Classe I = 66,4 ± 19,0%; Classe II = 18,7 ± 9,1%; Classe III = 8,0 ± 6,3%; Classe IV = 3,9 ± 3,1% e Classe V = 3,0 ± 2,9%. A avaliação da fragmentação de cromatina resultou em uma média de 13,21 ± 9,13%. Conclusão: foi demonstrada a aplicabilidade da eletroejaculação na colheita de sêmen de tamanduás-bandeira. Os testes possibilitaram uma análise detalhada das características seminais da espécie, aspectos estes ainda inéditos na literatura mundial. Houve grande variação nos resultados obtidos, refletindo diferenças das condições de manejo e de idade entre os indivíduos e, possivelmente um baixo número amostral estudado. Novos estudos devem ser realizados em animais de vida livre. / The purpose of the present study was to describe the physical, chemical, morphological, and functional features of semen collected from Giant Anteaters (Myrmecophaga tridactyla) raised in captivitya first step toward the feasibility of assisted reproduction techniques and germplasm banks for this species in the mid-term future. Electroejaculation, a method currently applied to a number of wild and domestic species, was performed in 13 animals housed in zoos located in the state of São Paulo, Brazil, yielding 11 samples from 9 animals (69.23%). The following mean values were obtained: volume, 1.30 ± 0.58 mL; motility, 33.18 ± 20.14%; vigor, 2.30 ± 0.65; concentration, 129.41 ± 114.3 x 106 cm-3; pH, 7.44 ± 0.60. Major and minor defects accounted for 53.77 ± 33.22% and 10.75 ± 6.23% of the total, respectively (mean total defect rate, 64.53 ± 19.97%). Damage was found in 16.3 ± 9.3% of acrosomal membranes and 18.9 ± 12.2% of plasma membranes. Mitochondrial activity, categorized as Classes I through V, was 66.4 ± 19.0%, 18.7 ± 9.1%, 8.0 ± 6.3%, 3.9 ± 3.1%, and 3.0 ± 2.9%, respectively. Chromatin fragmentation rate was 13.21 ± 9.13%. Conclusion: The study demonstrated the feasibility of applying electroejaculation to Giant Anteaters for semen collection, allowing for a detailed description of semen features previously unreported for this species. The large variation found in the results reflects differences in management conditions, age range, and possibly the small number of sampled animals, thus warranting further studies with free-ranging specimens.

Diversos fatores respondem por variações na viabilidade do sêmen eqüino e na sua qualidade espermática; em humanos, reportam-se correlações entre fatores endócrinos e parâmetros seminais, mas em eqüinos poucos estudos contribuem para esta correlação. Para se investigar eventuais correlações entre hormônios sexuais e tireoideanos com as características seminais físicas e morfológicas, além de longevidade seminal, foram mensuradas as concentrações plasmáticas de estradiol, testosterona, T3 e T4 de garanhões e analisadas tais características espermáticas no momento da colheita seminal e após 24h, 48h e 72h de armazenamento a 5oC. 05 garanhões férteis em idade reprodutiva foram submetidos à colheita de sêmen (2 vezes/semana) e sangue (1 vez/semana, a cada 6 horas) durante 6 semanas. Estradiol, testosterona, T3 e T4 foram analisados por RIE. Após a colheita, o sêmen foi analisado e resfriado a 5oC, com análises subseqüentes após 24h, 48h e 72h de armazenamento. O sêmen foi avaliado quanto às características seminais físicas e morfológicas, além de integridade de membrana. Significativas (p<0.05) diferenças foram observadas entre os animais quanto às concentrações hormonais; o estradiol mostrou as maiores variações entre indivíduos, embora todos os resultados tenham se mostrado compatíveis aos valores de referência da literatura. Logo após a colheita, não se observou diferenças significativas (p<0.05) para vigor e motilidade total/progressiva, em exceção ao garanhão 4, que apresentou significativa menor motilidade progressiva inicial. Após 24h, 48h e 72h de resfriamento, diferenças significativas (p<0.05) foram observadas entre os garanhões; os menores índices de vigor/motilidade progressiva foram observados nos garanhões 1 e 4. Diferenças significativas (p<0.05) também foram observadas entre os animais para as características espermáticas morfológicas e integridade de membrana. Análises de covariância e correlações não demonstraram correspondência entre concentrações hormonais, longevidade espermática e características seminais físicas/morfológicas, tendo \"tempo de resfriamento\" e \"indivíduos\" como fatores. Correlação positiva foi observada entre motilidade progressiva/vigor e espermatozóides vivos com acrossomo intacto (r=0.70 e r=0.71 respectivamente); em analogia, correlação negativa foi encontrada entre motilidade progressiva/vigor e espermatozóides com acrossomo intacto (r=-0.70 e r=-0.72 respectivamente), indicando que, vivos ou mortos, apresentar acrossomo intacto é fator crítico para a viabilidade espermática mesmo após diferentes tempos de armazenamento em resfriamento. Os resultados mostram que a longevidade do sêmen eqüino provavelmente não é diretamente afetada por razões hormonais primárias; o mesmo pode ser considerado para morfologia espermática. Por outro lado, a longevidade do sêmen eqüino parece ser diretamente influenciada pela integridade de membrana espermática e eventualmente fatores bioquímicos, metabólicos e enzimáticos. / Several factors respond for variations of equine semen viability and sperm quality; in humans, scientific reports try to correlate endocrine issues and sperm parameters. In horses, few studies contribute to this correlation. In order to investigate eventual correlations between sexual and thyroid hormones with physical and morphologic characteristics and also longevity of equine semen,were measured plasma concentrations of estradiol, testosterone, T3 and T4 of stallions and analyzed physical and morphologic characteristics and membrane integrity of spermatozoa at the moment of collection and after 24, 48 and 72 hours of storage at 5oC. Five fertile stallions in reproductive age had semen (twice a week) and blood (once a week, every 6 hours) collected during 6 weeks. Estradiol, testosterone, T3 and T4 were analyzed by RIA. After collection, semen was analyzed and cooled at 5oC, with further analyses after 24, 48 and 72 hours of storage. Semen analysis consisted in physical, morphologic and embrane integrity characteristics. Significant (p<0.05) differences were observed among stallions when compared for plasma hormonal concentrations; estradiol showed the greater variations between individuals, despite all results were compatible to reference values in literature. Just after collection, no significant differences (p<0.05) were observed for vigor and total/progressive motility, in exception to stallion 4, that presented a significant lower initial progressive motility. After 24, 48 and 72 hours of storage, significant differences (p<0.05) were observed among stallions; lowest values of vigor/progressive motility were observed for stallions 1 and 4. Significant differences (p<0.05) were also observed among stallions for morphologic characteristics of sperm and membrane integrity. Analyses of covariance and correlations showed no correspondence among hormonal plasma concentrations, sperm longevity and physical/morphologic characteristics, having time of storage and individuals as factors. Meanwhile, a positive correlation was observed among progressive motility/vigor and live sperm with intact acrosome (r=0.70 and r=0.71 respectively); in analogy, a negative correlation was found among progressive motility/vigor and dead sperm with intact acrosome (r=-0.70 and r=-0.72 respectively), indicating that neither being live or dead, but having acrosome membrane intact is a critical factor for spermatozoa\'s viability even after different times of storage at cooling temperatures. Results show that longevity of equine semen is probably not directly affected by primary hormonal reasons; the same can be considered for sperm morphology. Otherwise, longevity of equine semen seems to be directly influenced by sperm membrane integrity and eventually by biochemical, metabolic and enzymatic factors.

A caprinocultura no Brasil vem crescendo consideravelmente nos últimos anos. No entanto, este crescimento é limitado pela qualidade espermática pós-descongelamento, o que inviabilizaria a utilização de biotecnologias aplicadas à reprodução (e.g., inseminação artificial e transferência de embriões). Um dos motivos para a queda na qualidade espermática pós-descongelação é o ataque das espécies reativas de oxigênio (ROS), que podem levar a danos em membrana, acrossomo, mitocôndria e DNA. Uma alternativa para a melhora na qualidade espermática de amostras criopreservadas de caprinos seria o tratamento do meio diluidor com a antioxidantes. No entanto, é fundamental identificar a espécie reativa de oxigênio mais deletéria ao sêmen de caprinos para determinar o antioxidante ideal. O objetivo do presente estudo foi identificar a ROS mais deletéria ao sêmen de caprinos e, com isso, tratar o diluidor com antioxidantes específicos para a destruição da mesma. No experimento 1, amostras espermáticas de 12 bodes foram submetidas á incubação com 3 sistemas de produção de ROS e um subproduto da peroxidação de lipídeos, conhecida por também levar a danos oxidativos. As amostras espermáticas foram submetidas a incubação com xantina (20mM) e xantina oxidase (ânion superóxido), sulfato de ferro (4mM) e ascorbato (20mM- Radical hidroxila), peróxido de hidrogênio (H2O2; 20 mM) e malondialdeído (20 mM). Após a incubação as amostras espermáticas foram avaliadas quanto a morfologia, motilidade, membrana (eosina/nigrosina), acrossomo (Rosa Bengala/ Fast Green), mitocôndria (3,3 diaminobenzidina) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS, avalia a susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo). Os resultados do experimento 1 indicaram que a ROS mais deletéria ao espermatozóide caprino é o H2O2, que levou a danos de membrana plasmática e mitocôndria. Assim, no Experimento 2, o diluidor para a criopreservação do sêmen caprino foi suplementado com catalase e Glutationa Peroxidase (GPx), antioxidantes enzimáticos responsáveis pela destruição do H2O2. A análise estatística dos dois experimentos foi realizada através do SAS system for Windows. Os resultados do experimento 2 não revelaram efeitos benéficos para nenhuma das variáveis e com a utilização de ambos os antioxidantes. De fato, a catalase apreesntou efeitos deletérios à membrana plasmática das amostras criopreservadas com 240 UI/mL de catalase quando comparadas ao controle (13,42&plusmn;2,96% e 25,08&plusmn;4,80% de espermatozóides com membrana íntegra, respectivamente). De fato, estudos anteriores indicam que as concentrações de catalase em sêmen de caprinos são extremamente baixas, o que indicaria que o tratamento com as dosagens utilizadas de catalase pode ter sido excessivo. Além disto, diferentes antioxidantes aparentemente atuam em diferentes regiões do espermatozóide, sendo que, apenas a combinação de diferentes antioxidante poderia ser eficiente. Por outro lado, os resultados do Experimento 1 foram obtidos em amostras frescas, sendo que provavelmente, em amostras criopreservadas, a espécie reativa mais deletéria poderia ser outra. / The goat production in Brazil has grown considerably in recent years. However, this growth is limited by the post-thaw sperm quality, which would impais the use of biotechnologies applied to reproduction (e.g., artificial insemination and embryo transfer). One reason for the decline in sperm quality after thawing is the attack of reactive oxygen species (ROS), which can lead to damage of membrane, acrosome, mitochondria and DNA. An alternative to improve the quality of cryoprerved goat sperm samples would be the treatment of the extender with antioxidants. However, it is crucial to identify the reactive oxygen species more deleterious to semen of goats to determine the ideal antioxidant. The aim of this study was to identify the ROS more deleterious to semen of goats and thereby to treat the extender with specific antioxidants for the destruction of this ROS. In experiment 1, sperm samples from 12 goats were incubated with 3 systems of production of ROS and a by-product of lipid peroxidation, known to also lead to oxidative damage. The sperm samples were subjected to incubation with xanthine (20 mM) and xanthine oxidase (superoxide anion), iron sulfate (4 mM) and ascorbate (20mM-hydroxyl radical), hydrogen peroxide (H2O2, 20 mM) and malondialdehyde (20 mM). After incubation the samples were evaluated for sperm morphology, motility, membrane (eosin / nigrosin), acrosome (Rose Bengal / Fast Green), mitochondria (3.3 diaminobenzidine) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS, assesses the susceptibility of sperm to oxidative stress). The results of experiment 1 indicated that ROS most deleterious to the goat sperm is the H2O2, especially due to damages to the plasma membrane and mitochondria. Thus, in Experiment 2, the extender for cryopreservation of goat semen was supplemented with catalase and glutathione peroxidase (GPx), enzymatic antioxidants responsible for the destruction of H2O2. Statistical analyses were performed using the SAS system for Windows. The results of experiment 2 revealed no beneficial effects of the use of neither catalase oor GPx. In fact, catalase showed deleterious effects on the plasma membrane of cryopreserved samples; Samples treated with 240 IU / mL of catalase showed a lower percentage of sperm with intact membrane when compared with controls (13.42 &plusmn; 2.96 &plusmn; 4.80% and 25.08%, respectively ). In fact, previous studies indicate that concentrations of catalase in semen of goats are very low, which indicates that catalase treatment with the dosages used in the present study may have been excessive. Apparently different antioxidants work in different regions of the sperm, and only the combination of different antioxidant could be effective. Moreover, the results of Experiment 1 were obtained in fresh samples, and probably, in cryopreserved samples, other ROS could be the most deleterious.

A identificação do momento mais apropriado para realizar a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) utilizando sêmen sexado pode aumentar a prenhez por inseminação (P/IA) e aumentar a utilização do sêmen sexado em fazendas de corte. Este trabalho teve por objetivo avaliar o melhor intervalo entre a inseminação e a ovulação na P/IA de vacas Nelore lactantes submetidas ao protocolo de IATF utilizando sêmen sexado. Um total de 339 vacas Nelore apresentando 30 a 60 dias pós-parto da fazenda experimental da APTA, em Colina-SP foram utilizadas. No início do tratamento as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1g de progesterona (Sincrogest®,Ourofino Saúde Animal) e a aplicação i.m de 2mg de BE (Sincrodiol®, Ourofino). Após oito dias, o dispositivo foi removido e aplicados via i.m 0,25 mg de cloprostenol sódico (Sincrocio® , Ourofino) e 300UI de eCG (Folligon® , Intervet-Schering Plough). As vacas foram homogeneamente distribuídas para receberem IATF com sêmen sexado de um único touro da raça Angus (2.1milhões de espermatozóides por dose) às 36, 48 e 60 horas após a retirada dos dispositivos. O intervalo entre as inseminações e ovulações foi determinado e as análises realizadas comparando a taxa de prenhez entre os intervalos. Exames ultrassonográficos (7.5MHz, CTS-3300V, SIUI, China) foram realizados duas vezes ao dia, a partir da retirada do implante até 96 horas após e aos 30 pós IA para realização do diagnóstico de gestação. A P/IA foi definida como o número de fêmeas prenhes divididas pelo número de fêmeas inseminadas em cada intervalo. Os dados encontrados foram analisados usando o programa estatístico SAS. A taxa de ovulação após o protocolo foi de 92.0 % (312/339), o diâmetro do folículo ovulatório de 14,7 ± 2,3 mm e o intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação de 71.8 ± 7.7 horas [48 horas (6.73%; 21/312), 60 horas (0.64%; 2/312), 72 horas (80.77%; 252/312), 84 horas (11.22%; 35/312), e 96 horas (0.64%; 2/312)]. A P/IA aumentou conforme se atrasou o momento da inseminação: 36 horas (5,8%; 5/86)c, 48 horas (20.8%; 27/130)b e 60 horas (30.9%; 38/123)a. A P/IA foi maior quando as inseminações foram realizadas próximas ao momento da ovulação (0 a 12 horas antes da ovulação = 37,9 %; 35/95) do que as realizadas entre 12,1 a 24 horas (19,4%; 21/108; P = 0,05) ou com mais de 24 horas (5,8%; 5/87; P = 0,0001) antes da ovulação sincronizada. Vacas recentemente ovuladas tiveram P/IA semelhante às realizadas próximo ao momento da ovulação (36,4%; 8/22; P = 0,95). Concluiu-se que a P/IA utilizando sêmen sexado é aumentada quando as inseminações são realizadas próximas a ovulação sincronizada. No experimento 2, de ressincronização, foram avaliadas, as taxas de serviço, concepção e prenhez em vacas previamente sincronizadas e inseminadas em tempo fixo. Foram formados dois grupos: observação de estro e IATF, utilizando na IA sêmen sexado e convencional. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF foram, respectivamente: taxa de serviço [(63,5% (61/96); 100% (88/88)], taxa de concepção [(41% (25/61); 11,4% (10/88)], taxa de prenhez [(26% (25/96); 11,4% (10/88)]. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF de acordo com o tipo de sêmen utilizado foram, respectivamente: sêmen convencional taxa de concepção [(43,3% (13/30); 14,9% (7/47))]; taxa de prenhez [(27,49% (13/61); 14,9% (7/47))]; sêmen sexado taxa de concepção [(38,7% (12/31); 7,3% (3/41))]; taxa de prenhez [(24,57% (12/61); 7,3% (3/41))]. / The identification of most appropriate moment to perform the timed artificial insemination (TAI) using sex-sorted semen following synchronization protocol can be important to improve the fertility of sex-sorted semen and increase the use sexed semen technology in commercial beef farms. The aim of this study was evaluated the better interval to perform the TAI relative to synchronized ovulation in suckled cows. A total of 339 suckled multiparous Nelore cows from an experimental farm (APTA), in Colina-SP, were evaluated in this study. The protocol started between 30 and 60 days post-partum. Cows received one synchronization protocol using an intravaginal device containing 1.0g of progesterone (Sincrogest®, Ouro Fino) plus an i.m. injection of 2.0mg of EB (Sincrodiol®, Ouro Fino). Eight days later, the device was removed and 0.25mg i.m. injection of cloprostenol sodium (Sincrocio®, Ouro Fino) and 300IU of eCG (Folligon®, Intervet-Shering Plough) were administered. Cows were homogenously assigned to receive TAI using sex-sorted semen from a single sire (2.1 millions of sperm cell per straw) at 36, 48 or 60 hours after device removal. The TAI to ovulation interval of synchronized cows was determined and the analysis was performed to compare the pregnancy for TAI performed at various intervals before ovulation using 12 hours time intervals. Ovarian ultrasonographic examinations (CTS-3300V, SIUI, China) were performed twice daily from day of the device removal to 96 hours afterwards, to evaluate ovarian follicular dynamics and interval from device removal to ovulation. All females were examined for pregnancy 30 days after AI. The data were analyzed using the SAS program.Incidence of ovulation after the estrous synchronization protocol was 92.0 % (312/339). Diameter of ovulatory follicle was 14.7 ± 2.3 mm and the interval between the P4 device removal and synchronized ovulation occurrence was 71.8 ± 7.7 hours. The distribution of the synchronized ovulation relative to the device removal was: 48 hours (6.73%; 21/312), 60 hours (0.64%; 2/312), 72 hours (80.77%; 252/312), 84 hours (11.22%; 35/312), and 96 hours (0.64%; 2/312). The pregnancy per artificial insemination (P/AI) was increased (P <0.001) when the TAI was delayed 36 hours (5.8%; 5/86)c, 48 hours (20.8%; 27/130)b and 60 hours (30.9%; 38/123)a. Higher P/AI was achieved on TAI performed closer to ovulation (0 to 12 hours before ovulation = 37.9 %; 35/95) than TAI performed on 12.1 to 24 hours (19.4%; 21/108; P = 0.05) or > 24 hours (5.8%; 5/87; P = 0.0001) before the synchronized ovulation. Recently ovulated cows had P/AI similar to those performed around the time of ovulation (36,4%; 8/22). In conclusion, P/AI is increased when the TAI using sex-sorted is performed closer to synchronized ovulation in suckled Nelore cows. In experiment 2, resynchronization, were assessed the service rates, conception and pregnancy in cows previously synchronized and timed AI. Two groups were formed: estrous detection and TAI, using in AI, sexed and unsexed semen. The results for groups of estrus detection and TAI were, respectively, service rate [(63.5% (61/96) 100% (88/88)], conception rate [(41% (25/61), 11.4% (10/88))], pregnancy rate [(26% (25/96), 11.4% (10/88))]. The results for groups of estrus detection and TAI according the type of semen used were: conventional semen conception rate [(43.3% (13/30), 14.9% (7 / 47))] ; pregnancy rate [(27.49% (13/61), 14.9% (7 / 47))]; sexed semen conception rate [(38.7% (12/31) 7.3% (3 / 41))]; pregnancy rate [(24.57% (12/ 61), 7.3% (3 / 41))].

O selênio exerce função marcante na qualidade do sêmen, atuando no desenvolvimento da peça intermediária, no desenvolvimento das células de Sertoli, e, como componente das selenoproteínas, principalmente a glutationa peroxidase. O selênio é utilizado comumente nas dietas animais como selenito de sódio (inorgânica) e as fontes orgânicas têm revelado diferenciada biodiponibilidade, sendo importantes para aumentar o aproveitamento pelos animais e reduzir o impacto ambiental. Assim, o experimento averiguou os efeitos do selênio orgânico nas características seminais no sêmen in natura e refrigerado a 18&ordm;C por três dias. Foram utilizados 12 cachaços divididos em três tratamentos: CONTROLE dieta formulada utilizando fonte inorgânica (0,30 ppm de selenito de sódio, n=4), INORGÂNICO dieta formulada utilizando fonte inorgânica (0,50 ppm de selenito de sódio, n=4) e ORGÂNICO - dieta formulada utilizando fonte orgânica (0,50 ppm de selênio- Sel-PlexTM, Alltech, Inc., n=4). As análises do sêmen consistiram da avaliação computadorizada da motilidade (CASA), e análises por citometria de fluxo da integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, peroxidação lipídica, atividade da fosfolipídio hidroperóxido glutationa peroxidase. Associado a estas análises avaliou-se a concentração de selênio no plasma sangüíneo e seminal. Os dados foram submetidos à análise de variância, empregando-se o programa SAS (1999). As hipóteses testadas foram consideradas significativas quando p&lt;0,05. Na análise do sêmen in natura constatou-se que a concentração espermática, o número total de células e o número de doses foram influenciados positivamente pelo tratamento orgânico, assim como os percentuais de células normais. Os percentuais de defeitos de cabeça, peça intermediária e gota proximal foram menores nos animais suplementados com selênio levedura, contudo os defeitos de cauda do espermatozóide foram mais elevados. O defeito de colo do espermatozóide também foi reduzido pela suplementação de selênio. Porém, as integridades de membranas acrossomal e plasmática, potencial mitocondrial e peroxidação das membranas espermáticas, bem como as características de motilidade não melhoraram com a utilização de selênio levedura. A concentração de selênio no plasma sangüíneo e seminal foram maiores no grupo orgânico em comparação aos demais, assim como a atividade da enzima PHGPx. Em relação ao sêmen refrigerado averiguou-se que as integridades de membranas acrossomal e plasmática, potencial de membrana mitocondrial e peroxidação de membrana não foram influenciadas pela suplementação com selênio orgânico. Em contrapartida, as características de motilidade apresentaram diferenças significativas favoráveis ao tratamento orgânico, bem como o percentual de células normais e os defeitos de cabeça e gota proximal. O grupo orgânico apresentou maior percentual de defeitos de cauda comparativamente aos demais e a suplementação de selênio, independente da fonte reduziu os percentuais de defeitos de peça intermediária. A atividade da enzima PHGPx também foi influenciada positivamente pelo tratamento orgânico. Baseado nos resultados, efeitos positivos da suplementação de selênio orgânico (0,50 ppm) na dieta foram observados em algumas características espermáticas no sêmen in natura e refrigerado de cachaços. / The selenium plays a remarkable role on semen quality by acting in the development of middle piece, in the development of Sertoli cells and also as a component of selenoproteins, primarily of glutathione peroxidase. The selenium is usually utilized on animal diets as sodium selenite (inorganic). Organic sources have revealed a differentiated bioavailability, becoming important allies to enhance its use by the animals and reducing environmental impact. Therefore, this experiment evaluated the effects of organic selenium on seminal characteristics on raw and stored semen at 18&ordm;C for three days. Twelve boars were divided into three experimental groups: CONTROL inorganic sourced diet (0.30 ppm sodium selenite, n=4), INORGANIC inorganic sourced diet (0.50 ppm sodium selenite, n=4) and ORGANIC organic sourced diet (0.50 ppm selenium- Sel-PlexTM, Alltech, Inc., n=4). Semen analysis consisted of computerized assessment of motility (CASA) and flow cytometric analysis of plasmatic and acrosomal membranes integrity, mitochondrial membrane potential, lipidic peroxidation and phospholipid hidroperoxide glutatione peroxidase activity. Moreover, the blood and seminal plasma concentrations of selenium were evaluated. Data was submitted analysis of variance (SAS, 1999). Hypothesis tested were considered significant when p<0.05. In natura semen analysis showed that spermatic concentration, total cell number, number of doses and percentage of normal cells were positively influenced by organic treatment. Percentages of head and middle piece defects and proximal cytoplasmic droplets were decreased on animals supplemented with yeast selenium; however percentages of tail defects were increased in these animals. Neck defects were reduced by selenium supplementation. Acrosomal and plasmatic membrane integrity, mitochondrial membrane potential and spermatic membrane peroxidation, as well as motility characteristics were not enhanced with the use of yeast selenium. Selenium concentration on blood and seminal plasma were higher on organic group, similarly to PHGPx activity. Stored semen analysis showed that acrosomal and plasmatic membranes integrity, mitochondrial membrane potential and membrane peroxidation were not influenced by organic selenium supplementation. Nonetheless, motility characteristics were maintained normal with significant differences on behalf of organic treatment, likewise the percentage of normal cells, head defects and proximal droplets. The organic group presented higher percentage of tail defects when compared to the others and supplementation with selenium, independently from the source, reduced the percentages of middle piece defects. PHGPx activity was also positively influenced by organic treatment. Based on results, positives effects of dietary organic selenium supplementation (0.5 ppm) were observed on some spermatic characteristics of raw and stored boar semen.

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de três diluidores diferentes na criopreservação do sêmen bovino sobre a motilidade, hiperativação espermática, reação acrossomal, capacitação e peroxidação lipídica das membranas espermáticas. Foram realizadas seis colheitas de sêmen em intervalos quinzenais de dez touros zebuínos da raça Nelore. O sêmen in natura foi avaliado, dividido em três tratamentos: uma fração foi diluída em meio a base de gema de ovo (Botu-Bov® - diluidor 1), a segunda fração diluída em meio a base de lecitina de soja (Botu-Bov® - diluidor 2) e a terceira fração em meio AndroMed® (diluidor 3) também a base de lecitina de soja. Logo após as amostras foram submetidas à congelação. As avaliações do sêmen após descongelação consistiram na análise computadorizada das características de motilidade e nas análises pela citometria de fluxo quanto à reação acrossomal (PI/FITC-PSA/H33342); peroxidação lipídica (PI/C11-BODIPY581/591/H33342) e capacitação espermática através da estabilidade da membrana plasmática (Merocianina 540/Yo-Pro1/H33342). As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5% de significância. O diluidor a base de gema de ovo preservou melhor a motilidade espermática, a população de células com integridade de membrana plasmática e acrossomo não reagido no sêmen bovino pós-descongelação que os diluidores a base de lecitina de soja. Os espermatozóides criopreservados com o diluidor a base de gema de ovo apresentou menor sub população de células hiperativas e com membrana plasmática desestabilizada quando comparados com os diluidores a base de lecitina de soja e o diluidor a base de gema de ovo possibilitou uma diminuição da peroxidação lipídica das membranas espermáticas / The objective of this experiment was evaluate the effects of three diferent extenders in bovine semen cryopreservation about motility, sperm hiperactivation, acrosome reaction, capacitation, and sperm membrane lipid peroxidation. It was made six collection of semen samples each 15 days of 10 Nelore bulls. Semen samples in natura was verify and divided in three treatments: The first one was extended in egg yolk base (Botu-Bov® Extender 1), second one was extended in soy lecithin base (Botu-Bov® Extender 2) and the third was extended in AndroMed® soy lecithin base too. After that, semen samples were submitted to freeze process. Semen evaluations after thawing were made with computer assisted sperm analysis (CASA) and flow citometry for acrosome reaction (PI/FITC-PSA/H33342), lipid peroxidation (PI/C11-BODIPY581/591/H33342) and sperm capacitation by plasma membrane stability (Merocianina 540/Yo-Pro1/H33342). Data obtained from experimental proceeding were submitted to variance analysis and LSD test to compare means with 5% of significance. Egg yolk base extender preserved better sperm motility, cell population with plasma membrane integrity and non-reacted acrosome in bovine semen after thawing than soy lecithin extenders. Cryopreserved sperm with egg yolk base extender displayed less subpopulation of hiperactivated cells, less destabilized plasma membrane and permitted a decrease of lipid peroxidation of membranes when it was compared with soy lecithin extender

O plasma seminal é o constituintes não celular do sêmen suíno e contém uma série de componentes orgânicos e inorgânico que desempenham ações variadas tanto no trato reprodutivo masculino como no feminino. No entanto, este fluido de constituição complexa, exerce ações ambiguas sobre os espermatozoides suínos, pois pode atuar ao mesmo tempo de forma benéfica ou deletéria sobre a viabilidade destas células. Nesse sentido, alguns estudos sugerem que este não é o melhor meio para a conservação de espermatozoides. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do plasma seminal sobre a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial do espermatozoide suíno armazenado sob refrigeração a 17&deg;C por 72 horas. Para tanto, foram obtidos 4 ejaculados de 6 cachaços. Em seguida o sêmen in natura foi avaliado quanto às características da motilidade pelo sistema computadorizado de análise do sêmen, morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e concentração espermática. Após essa primeira avaliação, os ejaculados foram acondicionados em tubos cônicos de 50 mL para serem divididos em três tratamentos, a saber: não centrifugado (NC), centrifugado e com o plasma seminal retirado pós-centrifugação (CS) e centrifugado resuspendido (CR). A força de centrifugação utilizada foi de 500xg por 10 minutos. Todos os tratamentos foram submetidos à diluição em meio BTS para que se obtenha uma concentração de 30 x 106 espermatozoides por mililitro (mL). Em seguida, as amostras permaneceram por 90 minutos em temperatura ambiente e protegidas da luz antes de serem armazenadas. As doses com os diferentes tratamentos foram acondicionadas à temperatura de 17&deg;C e foram avaliadas nos intervalos 0 (90 min pós-diluição), 24, 48 e 72 horas para os seguintes parâmetros: características da motilidade (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal, estabilidade da membrana plasmática e peroxidação das membranas espermáticas (citometria de fluxo). Os tratamentos foram submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). Quando o principal efeito foi significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey-kramer ao nível de 5% de significância. Os resultados do presente estudo mostram que a ausência do plasma seminal foi deletéria para algumas características de motilidade, o mesmo ocorreu para a integridade das membranas plasmática e acrossomal uma vez que houve diminuição na percentagem de celulás espermáticas com membrana plasmatica integra e acrossomo integro no tratamento sem plasma seminal. A peroxidação lipídica das membranas e a manutenção da estabilidade da membrana plasmática não foram influenciadas pelo tratamento. Assim, conclui-se que a presença do plasma seminal em doses inseminantes refrigeradas por 72 h é importante para a manutenção das características de motilidade e para a integridade das membranas plasmáticas e acrossomal / The present study aimed to evaluate the effects of seminal plasma, from the rich fraction of the ejaculate, on kinetics, plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and capacitation of extended liquid boar semen stored under refrigeration at 17&deg; C for 72 hours. For this purpose, four ejaculates from each of six boars were used. Shortly after collection and raw semen evaluation, ejaculates were extended in BTS medium and then assigned to one of three treatments, as follows: non-washed seminal plasma (NWSP), washed-seminal plasma (WSP) centrifuged with own seminal plasma suspended (CWSSP). All treatments were evaluated for sperm motility parameters by the sperm class analyzer (SCA). Plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and sperm capacitation were evaluated by flow cytometry at 0, 24, 48 and 72 hours post dilution. The mean percentage of sperm motility (total and progressive) were lower (p&lt;0.05) in the WSP treatment. There was an increase (p&lt;0.05) in the percentage of sperm with damaged acrosome and damage plasma membrane in the WSP treatment. Membrane lipid peroxidation did not differ (p&gt;0.05) irrespective of treatment nor did sperm capacitation, which was similar (p&gt;0.05) among treatments. Our results show that seminal plasma from the sperm rich fraction is important to maintain adequate structural and functional characteristics of extended liquid boar and should be present in seminal doses throughout the period of store

Made available in DSpace on 2016-08-17T17:11:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ARIEL DE ALMEIDA COELHO.pdf: 1092576 bytes, checksum: 5f74aa9cceb65b68fc6d8633937e2c89 (MD5) Previous issue date: 2014-03-20 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / This study aimed to verify the effect of bovine somatotrophin (bST) on sexual development, semen and endocrine traits in peripubertal buffalo. A total of 20 male Murrah buffaloes (Bubalus bubalis) (14 months of age) were randomly distributed into two treatments (bST vs control). The body weight, body condition score, testicular measurements, semen traits and IGF-I levels were evaluated once a month for a year. The ejaculate was collected by electroejaculation and physical and morphological analyzes were proceeded. Data analysis was performed using the Statistical Analysis System for Windows, SAS®. There was no difference (P>0.05) between bST and Control treatments on body weight or body condition score. Testicular measurements also showed no differences (P>0.05) between treatments, but increases significantly in a similar trend. There was no positive effect of bST treatment on age at first appearance of spermatozoa in the ejaculate (P> 0.05), but the bST group showed a significant tendency to increase the number of animals exhibiting puberty at each breeding soundness evaluation (P = 0.054). Sperm motility, vigor and percentage of abnormalities showed no difference (P>0.05). There was no difference (P>0.05) between bST and Control treatments on IGF-I serum concentrations. In conclusion, the use of bST did not result in positive effects on sexual development, semen traits and endocrine profile of male buffaloes in peripubertal period. / Objetivou-se com este estudo verificar o efeito da somatotropina bovina (bST) sobre o desenvolvimento sexual, características seminais e hormonais em bubalinos no período peripuberal. Um total de 20 búfalos machos, não castrados, da raça Murrah (Bubalus bubalis) (12 meses de idade) foram distribuídos em dois tratamentos (bST vs controle) em um delineamento de blocos ao acaso com dez repetições. O peso corporal, escore de condição corporal, biometria testicular, características seminais e os níveis de IGF-I foram avaliados uma vez por mês durante oito meses. O ejaculado foi coletado por eletroejaculação e submetido a análise física e morfológica. A análise dos dados foi realizada utilizando o Statistical Analysis System for Windows, SAS®. Não houve diferença (P> 0,05) entre os tratamentos bST e Controle no peso e no escore de condição corporal. As mensurações testiculares também não apresentaram diferenças (P> 0,05) entre os tratamentos, mas aumentaram com a idade significativamente em uma tendência similar. Não houve efeito positivo do tratamento com bST sobre a idade ao aparecimento dos primeiros espermatozóides no ejaculado (P>0,05). O bST apresentou uma tendência significativa em antecipar a puberdade (P = 0,054). A motilidade, vigor e percentual de anormalidades espermáticas não apresentou diferença (P> 0,05) entre tratamentos. Não houve diferença (P> 0,05) entre os tratamentos bST e Controle nas concentrações séricas de IGF-I. Em conclusão, o uso de bST não resulta em efeitos positivos sobre o desenvolvimento ponderal e sexual em bubalinos machos no período peripuberal.