Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: Rubens Paes de Arruda / Coorientador: Ricarda Maria dos Santos / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Ed Hoffmann Madureira / Banca: Eneiva Carla Carvalho Celeghini / Resumo: Tem sido frequentemente demonstrado que variadas taxas de concepção podem ser obtidas de acordo com o sêmen utilizado, evidenciando uma importante variabilidade individual do reprodutor com relação à fertilidade. Além disso, as grandes dimensões dos rebanhos, associado ao intenso e crescente uso dos protocolos de IATF no Brasil, tem estimulado, cada vez mais, a prática do descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen em um mesmo descongelador. Entretanto, sob essas condições, o banho-maria do descongelador poderia atuar como ambiente de incubação para o sêmen, o que poderia influenciar a viabilidade do espermatozoide. Assim, o presente estudo teve por objetivos: 1) determinar o efeito da sequência de inseminação, após descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen, na taxa de concepção e na qualidade seminal; 2) investigar a fertilidade in vivo, bem como diversas características espermáticas in vitro, do sêmen de diferentes reprodutores utilizados no mesmo programa de IATF; 3) identificar, dentre as diversas análises laboratoriais realizadas, o grupo de características espermáticas consideradas importantes na predição da taxa de concepção. Para tal, o presente experimento foi realizado em duas etapas. A primeira etapa consistiu em um estudo a campo delineado para determinar a taxa de concepção após IATF de fêmeas pós-parto da raça Nelore (n=947), utilizando sêmen de três partidas de cada um dos três touros da raça Angus (n=9). A segunda etapa consistiu em um estudo laboratorial delineado para investigar diversas características espermáticas das doses de sêmen utilizadas no respectivo programa de IATF, utilizando as mesmas condições de descongelamento do estudo a campo. As seguintes análises laboratoriais foram realizadas: análise computadorizada do movimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It has been reported that different conception rates can be obtained according to the semen used, indicating a significant variability regarding sire fertility. Furthermore, the large size of reproductive herds associated with the intense use of Timed-AI protocols in Brazil, has stimulated the routine practice of simultaneous thawing of multiple semen straws in the same thawing-bath. However, under these conditions, the thawing-bath could act as an incubator environment for the semen, which could influence the sperm viability. Thus, this study aimed to: 1) determine the effect of sequence of insemination after simultaneous thawing of multiple semen straws on conception rate and semen quality; 2) investigate the in vivo fertility, as well as several in vitro sperm characteristics, from different sires used in the same Timed-AI program; 3) identify, among the several in vitro sperm variables evaluated in laboratory, the group of sperm characteristics considered important in the prediction of conception rate. Hence, this study was conducted in two experiments. The first experiment was a field study designed to determine conception rate after Timed-AI of suckled multiparous Nelore cows (n = 944) using three semen batches from three Angus bulls (n = 9). The second experiment was a laboratory study designed to investigate several sperm characteristics of semen used in the Timed-AI program, using the same thawing conditions applied in the field experiment. The following laboratory analyses were performed: computer assisted semen analysis, hypo-osmotic swelling test, sperm resistance after 2 hours of thermal incubation, sperm morphology, integrity of plasma and acrosomal membranes, plasma membrane stability, lipid peroxidation, sperm morphology and chromatin condensation. According to the present experiment, it was concluded that... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O objetivo do trabalho foi comparar a biodisponibilidade e os efeitos antioxidantes de fontes de selênio na forma orgânica e inorgânica em dietas para cães. Foram utilizados 24 cães machos da raça Beagle distribuídos em três tratamentos: controle (TC-0,11 ppm de Se), inorgânico (TI-0,30 ppm de Se na forma de selenito de sódio) e orgânico (TO-0,30 ppm de Se na forma de seleno levedura). O experimento seguiu um delineamento em blocos casualizados com medidas repetidas no tempo, os animais foram blocados por idade. Os animais foram mantidos por 10 dias em gaiolas metabólicas e submetidos à coleta total de fezes e urina, e mais 70 dias em baias para demais análises. Nas amostras de ração, fezes, urina e pêlos foram feitas análises de selênio. No sangue total foi determinada a atividade da GSH-Px e no 11º dia do experimento foi realizada a curva pós-prandial de absorção de selênio, até doze horas após a ingestão das dietas. O status oxidativo e a capacidade antioxidante foram avaliados no soro sanguíneo através da metodologia de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) e a capacidade antioxidante total (TAC), respectivamente. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey (P≤0,05). Para as varáveis ingestão de Se, excreção de Se nas fezes e retenção de Se o os animais do TC apresentaram menores valores quando comparados aos animais do TI e TO (P≤0,05). Não houve diferença para a excreção urinária e biodisponibilidade. Houve efeito de período para a concentração de selênio no plasma sanguíneo ocorrendo aumento para todos os animais. As concentrações de Se no pêlo dos animais dos grupos TI e TO foram maiores que as do TC ao final do experimento (P≤0,05). A área abaixo da curva do Se plasmático dos animais TO foi maior do que as dos demais, mostrando uma maior absorção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to compare the bioavailability of organic and inorganic selenium sources and their antioxidants functions in diets to dogs. Twentyfour male dogs were used and distributed in three treatments: control (TC-0,11 ppm of Se), inorganic (TI-0,30 ppm of sodium selenito) and organic (TO-0,30 ppm of Sel- Plex®). The experimental design was in a randomized blocks, the blocking factor was age. The experimental period was 80 days, the selenium balance trial was conducted at the first 10 days then the animals were transferred to kennels and the experiment lasted more 70 days. Feces, hair, urine, blood plasma and food were analyzed for selenium concentrations. The GSH-Px was determined in whole blood and at the 11th day a curve of selenium plasmatic absorption was conducted, the samples of blood plasma were obtained each 2 hours after feeding per 12 hours. The methodologies to access oxidative stress and antioxidant capacity were TBARS and total antioxidant capacity, respectively. The results were performed by analysis of variance and the means were compared by Tukey test (P≤0.05). For Se intake, fecal excretion of Se and Se retention, dogs from TC group showed lower values then TI and TO animals. There were no difference for urinary excretion of Se and Se bioavailability. For Se concentration in blood plasma the animals showed a higher value within 80 days even for animals from TC group. The concentration of selenium in hair increased within 80 days for animals from the TI and TO group. TO group had the major area under the curve differing statistically from the others groups showing a better absorption. The supplemented groups had the better values for GSH-Px activity. However, there were no significant differences among treatments for TBARS. For TAC there were no differences among the treatments, but during the experimental time the TAC values increased... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: José Roberto Sartori / Coorientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Coorientador: Ricardo Souza Vasconcellos / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Fernando Rutz / Mestre

A morfologia espermática está entre as maiores causas de descarte de reprodutores nas centrais de difusão genética e, quando identificada precocemente, significa uma redução nos custos com reprodutores ociosos. O estudo objetivou avaliar a possibilidade de utilização de características testiculares (consistência à palpação manual, consistência à tonometria – tônus, ecogenicidade da imagem ultrassonográfica - em pixels, e heterogeneidade da ecogenicidade – em pixels) na identificação de reprodutores suínos com baixa qualidade de morfologia espermática. Foram avaliados 402 machos com idade média de 18,5 ± 8,8 meses, de cinco centrais de difusão genética. A avaliação espermática foi utilizada como critério de aptidão, sendo considerados aptos os reprodutores com menos de 20% de defeitos espermáticos, não ultrapassando o limite de 5% para defeitos de cabeça, acrossoma, colo e peça intermediária e 10% para defeitos de cauda (dobrada ou enrolada) e gota citoplasmática proximal. A porcentagem de animais aptos segundo a morfologia espermática foi de 71,9%. O tônus teve correlação positiva (P≤ 0,05) moderada com a consistência à palpação manual (r= 0,64). A heterogeneidade testicular foi fracamente correlacionada com a ecogenicidade (r= 0,39; P≤ 0,05) e com o percentual de anormalidades espermáticas (r= 0,11). Foram comparados os valores das características testiculares entre machos considerados aptos e inaptos, sendo a média de tônus inferior nos machos aptos (P= 0,04). A possível associação das características testiculares com o percentual de defeitos espermáticos foi analisada por regressão logística, incluindo as características (consistência à palpação manual, tônus, ecogenicidade e heterogeneidade do parênquima testicular) como variáveis contínuas ou classificatórias. A partir dos valores obtidos, foram criadas 4 classes de consistência à palpação e de tônus e 5 classes de ecogenicidade e heterogeneidade do parênquima testicular. Foi obtido um ponto de corte de 5,03mm, baseado no tônus testicular, para discriminar animais aptos e inaptos e maiores valores de tônus (variável contínua) diminuíram a chance dos machos serem aptos, no entanto, com baixo poder discriminatório (AUC= 0,66). A probabilidade de ocorrência de aptidão tendeu a ser menor na classe de tônus 4 (P= 0,07). Menores valores de tônus estão associados à maior porcentagem de normalidades espermáticas em suínos, auxiliando na identificação de animais com alta qualidade espermática. / Sperm morphology is an important cause of male culling in boar studs and if early detected may lead to a reduction on costs of exceeded males. The study aimed to evaluate the possibility for using testicular traits (testicular consistency by manual palpation and consistency by tonometry – tone, echogenicity by ultrasonography - pixels and heterogeneity of the echogenicity – pixels) on the identification of boars with high sperm morphology quality. Sperm evaluation was used as criteria for breeding soundness, being considered as satisfactory boars with less than 20% of total sperm abnormalities, with an upper limit of 5% head, acrosome, neck and mid piece defects and 10% of tail (coiled and bent) e proximal cytoplasmic droplet. The percentage of satisfactory boars was 71.9%. Tone was positively correlated (P≤ 0.05) with consistency by manual palpation (r= 0.64). Testicular heterogeneity was weakly correlated (P≤ 0.05) with echogenicity (r= 0.39) and with percentage of sperm abnormalities (r= 0.11). It was compared the values of testicular traits between satisfactory and unsatisfactory boars, and a lower mean of tone was found on satisfactory boars (P= 0.04). The possible association of testicular traits with the percentage of sperm defects was analyzed by logistic regression, including the traits (consistency by manual palpation, tone, echogenicity and heterogeneity) as continuous and categorical variables. Considering the values obtained, 4 classes were created for consistency by manual palpation and tone and 5 classes were created for echogenicity and heterogeneity of the testicular parenchyma. It was obtained a cut-off value of 5.03mm, based on testicular tone, to discriminate satisfactory and unsatisfactory boars and higher values of tone (as continuous variable) decreased the chance of boars to be satisfactory, however with low discriminatory power (AUC= 0.66). The probability of occurrence of satisfactory boars tended to be lower on class 4 of tone (P= 0.07). Lower values of tone are associated with higher percentage of sperm normality, contributing to the identification of boars with high sperm quality.

Em todas as espécies de mamíferos estudadas, o gene PLCζ é responsável pelo aumento de cálcio no momento da fecundação do oócito. Recentemente, o gene WBP2NL, também esta sendo estudado por sua possível capacidade de iniciar a ativação de oócitos. O gene TNF-α é uma citocina pró-inflamatória que pode ser encontrada no plasma seminal, mas seu efeito na viabilidade espermática ainda não está claro. O objetivo desse trabalho foi investigar a expressão dos genes PLCζ, WPB2NL e TNF-α no espermatozoide e suas relações com a qualidade e fertilidade em equinos. Foram utilizados ejaculados de 40 garanhões da raça Crioula, de criatórios localizados próximos a Porto Alegre. A concentração espermática foi avaliada em câmara de Neubauer. As demais análises microscópicas foram realizadas através do Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision. A análise da integridade física da membrana foi realizada utilizando-se sondas fluorescentes A integridade funcional da membrana plasmática foi avaliada por meio do teste hiposmótico. Para análise estatística foi utilizada correlação de Pearson, com nível de significância de P<0,05. Foi encontrada correlação positiva do gene PCLζ com integridade funcional da membrana plasmática (0,449), integridade física da membrana plasmática (0,438), taxa de prenhez (0,454), motilidade total (0,486), motilidade progressiva (0,413); correlação negativa com motilidade lenta (-0,427) e espermatozoides imóveis (-0,405). Não foram encontradas correlações dos genes WBP2NL e TNF-α. Concluí-se que a expressão do gene PCLζ no Espermatozoide equino pode ser utilizada com um marcador para a qualidade seminal e fertilidade do garanhão. / In all species of mammals studied, the PLCζ gene is a factor of calcium increase at the time of oocyte fertilization. Recently, the WBP2NL gene is also being studied for its potential ability to initiate oocyte activation during fertilization. The TNF-α is a pro-inflammatory cytokine found in seminal plasma but it effect on motility and viability sperm still unclear. The aim of this study was to verify the expression of PLCζ, WPB2NL and TNF-α genes in spermatozoa and their relationship with quality and fertility in horses. We used the ejaculates of 40 Crioulo stallions, were used from horse farms located near Porto Alegre. After semen collection, the ejaculate was diluted in a commercially available extender. Microscopic analysis of total and progressive motility was performed using a computer assisted sperm analysis system AndroVision. Membrane physical integrity was assessed by fluorescent probes and membrane functionality was analyzed by the hypo-osmotic test (HOST) Statistical analysis was performed using the Pearson correlation, with a significance level of P<0.05. A moderate positive correlation of the PCLζ gene was found with functional plasma membrane function (0.449), physical organization of the plasma membrane (0.438), conception rate (0.454), total motility (0.486), progressive motility (0.413) and negative correlation with slow motility (-0.427) and spermatozoa properties (-0.405). No correlation on WBP2NL and TNF-α genes were found, showing that those genes expression should not be used as a marker of seminal quality and fertility in stallions. It can be concluded that expression of the PCLζ gene on equine spermatozoa can be used as a marker for seminal quality and fertility in the stallion.

A produção de peixes em cativeiro somente é possível com reprodução artificial, e sabe-se que a manipulação em peixes é um estímulo estressor. Devido ao crescente interesse no bem-estar animal, anestésicos estão sendo utilizados para a manipulação em peixes. O eugenol é um anestésico natural que possui ampla disponibilidade no mercado, apresenta baixo custo e é considerado seguro para o manipulador e para o meio ambiente. O objetivo desse estudo foi verificar se o uso de diferentes concentrações de eugenol (0, 30, 40, 50 e 60 mg/L), no manejo reprodutivo de Rhamdia quelen, causa alterações nos perfis do cortisol plasmático dos reprodutores e se influencia na qualidade do sêmen fresco e descongelado. Foram utilizados 75 machos de R. quelen sexualmente maturos, com peso de 500 g, selecionados aleatoriamente e distribuídos nos cinco tratamentos conforme as doses de eugenol utilizadas. Foram avaliadas as seguintes variáveis: taxa e tempo de motilidade, concentração espermática, taxa de fertilização, funcionalidade mitocondrial, integridade de membrana e de DNA, morfologia espermática e concentração de cortisol plasmático. Os animais anestesiados com as concentrações de 40 e 50 mg/L de eugenol apresentaram menores níveis de cortisol plasmático comparados ao controle, ou seja, se estressaram menos. A utilização de 30, 40 e 50 mg/L de eugenol manteve a qualidade seminal do sêmen fresco, já no sêmen descongelado, a qualidade foi mantida com o uso de 30 e 40 mg/L de eugenol. Esses resultados evidenciam que é possível conciliar a redução do estresse com a produção, pois cortisol plasmático foi reduzido e os parâmetros seminais se mantiveram após os tratamentos. / The production of fish in captivity is only possible with artificial reproduction, and it is known that the handling is a stressful stimulation to the fish. Currently, the interest in animal welfare has been increased. Therefore anesthetic have been used to make the handling of the fish. Eugenol is a natural anesthetic that has a broad market availability, is inexpensive and is considered safe for the handler and the environment. The aim of this study was to determine whether the use of different concentrations of eugenol (0, 30, 40, 50 and 60 mg/L) in the reproductive management of Rhamdia quelen cause changes in the profiles of plasmatic cortisol and quality of fresh and thawed semen. Seventy five males of R. quelen sexually mature and weighing 500 g, were randomly selected and distributed in five treatments according to the dose of eugenol used. The following variables were evaluated: motility and time of motility, sperm concentration, fertilization rate, mitochondrial function, membrane and DNA integrity, sperm morphology and concentration of plasmatic cortisol. The animals anesthetized with concentrations of 40 and 50 mg/L of eugenol showed lower plasmatic cortisol levels compared to the control, therefore they were less stressed. The use of 30, 40 and 50 mg / L of eugenol maintaining sperm quality of fresh semen, whereas the quality of thawed is maintained with the use of 30 and 40 mg / L of eugenol. These results show that it is possible conciliate animal welfare with the production, since the seminal parameters were not altered.

Nesse estudo comparou-se o efeito tamponante do HEPES e Bicarbonato de Sódio em manter o pH e a viabilidade do sêmen resfriado de pôneis da raça Brasileira. As alterações no pH ocasionadas por diferentes diluições com diluente a base de leite desnatado em pó sem tampão a 5 e a 15°C também foram medidas. No experimento 1 avaliou-se o efeito da diluição e da temperatura de resfriamento sobre a motilidade, integridade de membrana, pH e atividade mitocondrial do sêmen pré e pós resfriamento. O sêmen de nove pôneis da raça Brasileira (dois ejaculados/pônei) foi diluído em diluente a base de leite desnatado (em pó) sem tampão e refrigerado a 5 ou 15°C por 48h em três diferentes diluições (1+1, 1+2, 1+3). As três diluições não alteraram os parâmetros avaliados após a diluição a fresco. A diluição 1+1 resultou em valores maiores de pH (7,63 e 7,57, respectivamente) e menor percentual de motilidade progressiva (MP) a 5 e a 15°C. O maior percentual de células íntegras (1+1=44,16; 1+2=48,16; 1+3=50,05) foi detectado a 15°C (P < 0,01), independente da diluição. A MP foi maior nas 48h de resfriamento (39,72%; P < 0,05) quando o sêmen foi diluído a 1+3 e refrigerado a 15°C. A atividade mitocondrial (P > 0,05) em função do tempo e temperatura foi similar entre as diluições. No experimento 2 avaliou-se o efeito tampão do bicarbonato de sódio e do HEPES em diluentes sobre a viabilidade de espermatozoides resfriados a 5°C durante 48h. Os diluentes testados compunham-se de leite desnatado em pó com bicarbonato de sódio (A), HEPES (B) ou diluente sem tampão (C). O sêmen de sete pôneis da raça Brasileira (três ejaculados/pônei) foi utilizado e a motilidade progressiva foi similar entre os diluentes (P > 0,05) após a diluição. Nas 24 e 48h, a MP foi, respectivamente, para A (44,76%; 25,23%), B (51,42%; 38,09%) e C (54,05%; 41,66%). A integridade da membrana plasmática foi similar após a exposição aos três diluentes. A fresco, a atividade mitocondrial foi maior (P < 0,05) no sêmen exposto ao diluente A (A=1,05nm, B=0,81nm, C=0,79nm) e após 24h A e B foram similares (0,83nm; 0,73nm), enquanto que no diluente C observou-se menor atividade (0,64nm). Nas 48h não houve diferença (A=0,72; B=0,69; C=0,63; P > 0,05). O pH do diluente e sua osmolaridade, assim como o pH do sêmen diluído foi maior no diluente A (8; 382; 7,9), intermediário (7,5; 362; 7,32) no B e menor no C (7,16; 350; 7,07). A peroxidação lipídica e a indução da peroxidação foram similares em todos os grupos. Sugere-se que, quando da utilização do sêmen a fresco, qualquer das diluições aqui testadas pode ser utilizada com segurança. O resfriamento do sêmen por 48h modifica e eleva o pH do sêmen. Os melhores resultados foram observados com o resfriamento do sêmen a 15°C por 48h e com a diluição 1+3 em um diluente a base de leite em pó desnatado sem tampão. O bicarbonato de sódio (A) reduz a MP e aumenta o pH do sêmen. O diluente sem tampão foi considerado o mais apropriado para uso imediato na IA. Tanto o diluente com HEPES, quanto o diluente sem tampão foram adequados para o resfriamento do sêmen equino a 5°C durante 48h. / This study compared the buffering effect of HEPES and sodium bicarbonate on pH and viability of Brazilian pony semen cooled at 5°C. pH changes caused by different dilutions using skim milk powder semen extender without buffer were also measured. In experiment 1, the effect of dilution and cooling temperature on semen motility, membrane integrity, mitochondrial activity and pH pre and post cooling was investigated. Ejaculates of nine Brazilian ponies (two ejaculates per pony) were diluted, of a non buffered powder milk extender and cooled at 5°C or 15°C during 48h in three different dilutions (1+1, 1+2 and 1+3). Dilutions did not change the parameters evaluated before cooling. Samples diluted 1+1 resulted in higher pH values (7.63 and 7.57, respectively) and lowest percentage of progressive motility (PM) at 5 and 15°C. All samples cooled at 15°C showed a lower incidence of abnormal spermatozoa (1+1 = 55.84%; 1+2 = 51.84%; 1+3 = 49.95%) (P < 0.01) independent of dilution. Progressive motility was higher when semen was cooled during 48h in 1+3 dilution at 15°C (39.72%; P < 0.05). Mitochondrial activity despite of time and temperature was similar (P > 0.05) among dilutions. In experiment 2, the buffer effect of sodium bicarbonate and HEPES on extenders were evaluated considering the maintenance of sperm viability after cooling at 5°C during 24 and 48h. A non-buffered milk powder extender (C = control) and the same extender buffered with Sodium Bicarbonate (A) and HEPES (B) was used. Semen from 7 Brazilian ponies (three ejaculates / pony) was used. Immediately after dilution sperm motility was evaluated and progressive motility was similar with all extenders (P > 0.05). At 24 and 48h after cooling at 5oC sperm motility was evaluated, respectively, on groups A (44.76%; 25.23%), B (51.42%; 38.09%) and C (54.05%; 41.66%). Plasma membrane integrity was similar after exposure to the three extenders. Before cooling, mitochondrial activity was higher (P <0.05) in extender A (A = 1.05nm, B = 0.81nm, C = 0.79nm). Mitochondrial activity after cooling for 24h was 0.83nm (A), 0.73nm (B) and 0.64nm (C). After 48h it decreased to 0.72nm (A), 0.69nm (B) and 0.63nm (C) (P > 0.05), respectively. The extenders pH, osmolarity and pH of diluted semen was higher in A (8; 382; 7.9), intermediate in B (7.5; 362; 7.32) and lower in C (7.16; 350; 7.07). Lipid peroxidation and its induction were similar in all groups. It was concluded that all dilution grades in fresh semen were adequate and that pH was affected and increased when semen was extended and cooled for 48h. The best results were observed when semen was diluted at 1+3 and cooled at 15°C for 48h in a non buffered powder milk extender. Sodium bicarbonate (A) reduces progressive motility and increases semen pH. The non buffered (C) semen extender was considered more appropriated for semen dilution for immediate use in artificial insemination. The non buffered and HEPES buffered semen extenders were considered appropriated for cooling equine semen at 5°C during 48h.

O objetivo deste estudo foi testar um sistema de Polietileno para o transporte de sêmen equino refrigerado por um período de até oito horas. Foram utilizados um total de 87 ejaculados de cinco diferentes garanhões, com idade média de 10 anos, sendo três da raça Puro Sangue de Corrida e dois da raça Pônei Miniatura Brasileiro. Os garanhões foram coletados duas vezes por semana utilizando vagina artificial. Após cada coleta, o sêmen foi avaliado a fresco e diluído na proporção 1+1 (diluente + sêmen) com leite desnatado UHT e dividido em quatro alíquotas de igual volume. No grupo controle (GC) o sêmen foi analisado logo após a diluição (zero hora – 0h). Nos demais grupos o sêmen foi mantido por oito horas (8h) em três diferentes sistemas de transporte: Equitainer® (GE), Botuflex®(GB) e Sistema de Polietileno - Refrigerado (SP) ou Não-Refrigerado (SPN). Foram avaliadas a motilidade total, vigor, a integridade de membrana plasmática (CFDA/PI), funcionalidade de membrana plasmática (HOST) e morfologia espermática. No SP não ocorreu diferença estatística em todos os parâmetros avaliados, quando comparado com o GE e o GB (médias da motilidade total = 45,00%, 49,29% e 46,40%; médias do vigor = 2,04, 2,18 e 2,01; médias do CFDA/PI = 71,12%, 73,29%, 71,32; médias do HOST = 39,70%, 41,21% e 39,76%; e médias da morfologia = 80,50%, 82,29% e 81,28%, valores respectivos de cada parâmetro para SP, GE e GB), enquanto o SPN apresentou valores médios inferiores ao GE para todos os parâmetros avaliados (médias da motilidade total = 50,65% e 62,60%; médias do vigor espermático = 1,78 e 2,43; médias do CFDA/PI = 72,56% e 78,30%; médias do HOST = 43,56% e 48,87%; médias da morfologia = 77,17% e 84,82%, respectivamente para SPN e GE). Com base nos dados podemos concluir que o SP foi igual ou não diferiu dos demais sistemas estudados, já o SPN se apresentou inferior aos demais sistemas estudados neste experimento. Portanto, o uso do SP é indicado para o transporte de sêmen refrigerado por oito horas, quando comparado aos demais sistemas estudados neste trabalho. / The aim of this study was to test a polyethylene system to ship equine cooled semen. A total of 87 ejaculates from five different stallions with known fertility, mean age 10 years, were used, being three Thoroughbred and two Miniature Pony horse. The stallions were collected twice a week using an artificial vagina. After each collection the semen was diluted 1+1 (diluent+semen) with UHT skim milk and divided into four aliquots of equal volume, yielding a total of four groups. In the control group (CG) the semen was analyzed immediately after dilution (zero hour - 0h). In the other groups semen was stored for eight hours (8h) in three different transport systems: Equitainer® (EG), Botuflex® (BG) and Polyethylene System - Cooled (PS) or Non-Cooled (NPS). The total motility, vigor, plasma membrane integrity (CFDA/PI), plasma membrane functionality (HOST) and sperm morphology were evaluated. In PS did not occur a statistical difference in all parameters compared with EG and BG (averages of total motility = 45.00%, 49.29% and 46.40%, the average effect = 2.04, 2 18 and 2.01; averages CFDA / PI = 71.12%, 73.29%, 71.32; averages HOST = 39.70%, 41.21% and 39.76%, and the average of morphology = 80.50%, 82.29% and 81.28%, respective values of each parameter to PS, EG and BG), while the NPS showed lower mean values than the EG to all parameters (total motility averages = 50,65% and 62,60%, sperm vigor averages = 1,78 and 2,43; CFDA / PI averages = 72,56% and 78,30%; HOST averages = 43,56% and 48,87 %, morphology averages = 77.17% and 84.82%, respectively for NPS and EG). Based on the results we can conclude that the PS was equal or did not differ from the other systems studied, the NPS already performed lower than the other systems studied in this experiment. Therefore, the use of the SP is indicated for the transport of cooled semen for eight hours as compared to other systems studied in this work.

Introdução: Em torno de 15% dos casais apresentam o diagnóstico de infertilidade, sendo que 50% se devem a fatores masculinos. Diversos testes de função espermática são propostos para a avaliação da fertilidade, mas o espermograma é o principal exame para o diagnóstico de infertilidade masculina. O valor prognóstico das características seminais como concentração, morfologia e motilidade como marcadores de infertilidade masculina é confundido. A avaliação desses e a classificação quanto à normalidade dos mesmos permanece sendo tema de discussão frequente. Objetivos: Comparar as diferentes classificações de parâmetros seminais (OMS 1999, OMS 2010 e TMSC) e avaliar as características de pacientes em terapia de reprodução humana assistida que se relacionam com esses parâmetros. Métodos: Foi realizado estudo longitudinal, retrospectivo, baseado em revisão de banco de dados para avaliar as características e parâmetros seminais e comparar as mesmas conforme as classificações da OMS de 1999, OMS de 2010 e TMSC de 477 homens submetidos a investigação de infertilidade ou tratamentos de reprodução assistida na clínica Generar – Reprodução Humana, entre 2011 e 2015. Resultados: 401 pacientes tiveram alguma alteração pela OMS 1999, 223 pela OMS 2010 e 200 pela TMSC. O critério que mais alterou a condição de uma amostra seminal de anormal em 1999 para normal em 2010 foi a morfologia. Conclusão: Os parâmetros se tornaram menos rígidos de 1999 para 2010 alterando significativamente a proporção de indivíduos que deixaram de ser classificados como inférteis. A classificação baseada no TMSC pode ser útil na indicação de alguns tratamentos, mas não pode definir um indivíduo como fértil ou infértil em função de não levar em consideração a morfologia espermática. / Background: Approximately 15% of couples presenting the diagnosis of infertility, and 50% of cases are due to male factors. Several sperm function testing is proposed for the evaluation of male fertility, but sperm is the first test for the diagnosis of male infertility causes. The prognostic value of the seminal characteristics as concentration, morphology and motility as male infertility markers is often confused. Evaluation of semen parameters and classification for normality remains frequent topic of discussion. Objectives: Compare the different classifications of seminal parameters (OMS 1999, WHO 2010 and TMSC) and evaluate the characteristics of patients treated in assisted reproduction therapy relating to these parameters. Methods: Retrospective study based on chart review evaluated 477 semen samples from men undergoing investigation or infertility treatments in assisted reproduction between 2011 and 2015. Results: 401 patients were considered abnormal by the WHO 1999, 223 by WHO 2010 and 200 for TMSC. The criteria that most changed the classification was sperm morphology. Conclusion: The parameters have become less rigid 1999 to 2010 significantly changing the proportion of individuals who are no longer classified as infertile. The classification based on TMSC can’t define an individual as fertile or infertile regardless due to not take into account the sperm morphology, but may be helpful when it comes to the indication of the intrauterine insemination.

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos. / The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it's necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It's unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it's viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-12T22:47:23Z No. of bitstreams: 1 2012_GabrieladeOliveiraFernandes.pdf: 299565 bytes, checksum: 80e9633654f78664cae4a8301e14ca67 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-09-13T17:57:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GabrieladeOliveiraFernandes.pdf: 299565 bytes, checksum: 80e9633654f78664cae4a8301e14ca67 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-13T17:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GabrieladeOliveiraFernandes.pdf: 299565 bytes, checksum: 80e9633654f78664cae4a8301e14ca67 (MD5) / Diversas bactérias são identificadas nas amostras de sêmen ovino e algumas podem apresentar efeitos negativos na sua qualidade. Assim, os objetivos deste trabalho foram: identificar e quantificar a microbiota do sêmen fresco ovino, avaliar o uso prévio do higienizante Kilol-L® e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma; avaliar o efeito do uso dos antibióticos ceftiofur e gentamicina, em diferentes concentrações, no meio diluidor TRIS-gema-glicerol, nos parâmetros de avaliação do sêmen e da contaminação bacteriana; avaliar o efeito da adição de diferentes antibióticos e combinações no meio de criopreservação do sêmen, avaliando a qualidade e viabilidade do mesmo antes e depois da criopreservação. No capítulo 2 foram avaliados 24 ovinos machos da raça Santa Inês, aptos à reprodução, sendo eles agrupados em dois grupos de sistemas de criação, um a pasto (n=12) e outro em confinamento (n=12). Os resultados microbiológicos indicaram que do total de 120 ejaculados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos mais isolados foram Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. Dos antibióticos testados, a gentamicina foi 100% eficaz para Bacillus spp. e E. coli. O Ceftiofur foi eficaz para todas as bactérias isoladas, exceto com a amostra de Rodococcus equi. O uso do antisséptico Kilol-L® na concentração 1:250 reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/ml) do ejaculado sem prejudicar a qualidade seminal. No capítulo 3, foram selecionados dois grupos: ceftiofur e gentamicina. Os tratamentos do grupo ceftiofur foram: sem antibióticos, 10μg/ml, 25μg/ml, 50μg/ml e 100μg/ml, e os tratamentos do grupo gentamicina foram: sem antibiótico, 50μg/ml, 100μg/ml, 250μg/ml e 500μg/ml. Não houve diferença entre os tratamentos nos dois grupos quanto à motilidade espermática, isolamento bacteriano e UFC/ml. A utilização dos antibióticos ceftiofur e gentamicina, em diferentes concentrações no meio de criopreservação, não diferiram do meio sem antibiótico nos parâmetros seminais e bacteriológicos. No capítulo 4, foi analisado o efeito da adição de diferentes antibióticos na criopreservação de sêmen ovino, avaliando-se a qualidade e viabilidade antes e depois da criopreservação. Os ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: sem antibiótico, associação de penicilina-estreptomicina (100.000UI-100mg/ml), ceftiofur (10μg/ml), gentamicina (50μg/ml) e a associação de gentamicina-tilosinalincomicina- espectinomicina (250-50-150-300μg/ml). Os tratamentos utilizados não apresentaram diferença (p>0,05) quando comparados com a quantidade total de bactérias presentes, cepas bacterianas isoladas e motilidade das células espermáticas. Os principais gêneros bacterianos isolados foram Bacillus spp., Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. Tais resultados indicam que a adição de antibióticos não é necessária, no meio diluidor, quando medidas higiênicas e de assepsia são previamente utilizadas ao processo de criopreservação do sêmen ovino. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Several bacteria are identified in semen samples and some present a negative effect on their quality. The objectives of this study were to identify and quantify the fresh semen sheep microbiota, evaluating the previous use of sanitizing Kilol-L® and test the bacterial strains against antibiogram; evaluate the effect of antibiotic therapy with ceftiofur and gentamicin, in different concentrations in the diluter medium with tris-gem-glycerol, in parameter of semen evaluation and bacterial contamination; evaluate the effect of addition different antibiotics and combinations in the semen cryopreservation medium, assessing the quality and viability of the sample before and after cryopreservation. In chapter 2 were evaluated 24 Santa Inês male sheep, able to reproduce, and they were grouped into two breeding systems, one on pasture (n = 12) and another confined (n = 12). The microbiological results indicated that the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacterial genus were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. Both antibiotics tested, gentamicin was 100% effective for Bacillus spp. and E. coli. The Ceftiofur was effective for all isolates, except with the sample Rodococcus equi. The use of antiseptic Kilol-L® at a concentration of 1:250 reduced the number of colony forming units (CFU/ml) of the ejaculate without affecting the semen quality. In chapter 3, we selected two groups: ceftiofur and gentamicin. The ceftiofur treatments groups were: without antibiotics, 10μg/ml, 25μg/ml, 50μg/ml and 100μg/ml, and gentamicin treatments group were: without antibiotic, 50μg/ml, 100μg/ml, 250μg/ml and 500μg / ml. There was no difference between treatments in the two groups in terms of sperm motility, bacterial isolation and CFU/ml. The use of the ceftiofur antibiotic and gentamicin at different concentrations in the cryopreservation medium not differ from the antibiotic-free medium in semen and bacteriological parameters. In chapter 4, we analyzed the effect of different antibiotic addition in the cryopreservation of ram semen, evaluating the quality and viability before and after cryopreservation. The ejaculates were submitted to the following treatments: no antibiotic, combination of penicillin-streptomycin (100.000UI-100mg/ml), ceftiofur (10μg/ml), gentamicin (50μg/ml) and combination of gentamicin, tylosin, lincomycin-spectinomycin (250 -50-150-300μg/ml). The treatments showed no difference (p> 0.05) when compared with the total amount of bacteria, bacterial strains isolated and sperm cells motility. The major bacterial strains isolated were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. These results indicate that the addition of antibiotics is not necessary in the diluter medium, when hygienic and aseptic measures are previously used in the sheep semen cryopreservation process.