As espécies reativas de oxigênio são fundamentais na fisiologia espermática. No entanto, um desequilíbrio entre a produção e a capacidade antioxidante caracteriza o estresse oxidativo (EO). O espermatozoide é extremamente suscetível ao EO pois, dentre outras características, a membrana plasmática é rica em ácidos graxos poli-insaturados responsáveis por promoverem a fluidez necessária em processos fisiológicos como motilidade e fertilização. Por outro lado, essas insaturações são mais facilmente oxidadas e vulneráveis à peroxidação lipídica. Em função desta susceptibilidade, estas células dependem fortemente de compostos presentes no plasma seminal (PS) para a proteção contra esse evento. Dessa forma, a carnosina, dipeptídeo presente no PS pode ser uma das responsáveis pela proteção contra o acúmulo do MDA. No entanto, durante a criopreservação do sêmen equino é necessário retirar o PS. Em estudo recente, verificamos que esta remoção, torna os espermatozoides sensíveis ao subproduto extremamente deletério da peroxidação lipídica, o malondialdeído (MDA). Como a carnosina é removida junto com o plasma seminal durante a criopreservação, foram desenvolvidos 2 experimentos sequenciais visando a melhora da qualidade do sêmen criopreservado com adição de carnosina. Amostras de sêmen de sete garanhões foram tratadas com concentrações crescentes de carnosina adicionadas ao diluidor (1mM, 50mM e 100mM). Após a descongelação, as amostras foram divididas retrospectivamente em grupos de alta congelabilidade (AC: motilidade maior que 30%) e baixa congelabilidade (BC: motilidade menor que 30%). Amostras tratadas com 50mM apresentaram menor porcentagem de células com lesão de membrana plasmática e, quando tratadas com 100mM, células com maior amplitude do deslocamento lateral de cabeça. Amostras controle BC apresentaram menor porcentagem de células com DNA íntegro em relação às amostras AC. No entanto, houve um leve aumento na porcentagem de células com DNA íntegro em amostras BC com 100mM, não diferindo das amostras AC. Por outro lado, amostras BC criopreservadas com 50mM apresentaram maiores porcentagens de células com escore calculado de potencial de membrana mitocondrial e mais suscetíveis ao EO em relação ao controle. Apesar da proteção parcial, a maior suscetibilidade à peroxidação lipídica torna-se um problema, especialmente pelo fato de que espermatozoides equinos são mais suscetíveis ao MDA. Um motivo para este efeito seria a afinidade da carnosina em reagir com açúcares, o que poderia influenciar negativamente a atividade mitocondrial e o status oxidativo, ao diminuir a produção de piruvato pela via glicolítica. Desta forma, no experimento 2, amostras BC foram tratadas com a combinação de carnosina (0 e 50mM) e piruvato (0 e 5mM) em arranjo fatorial 2x2. Verificou-se que o tratamento com piruvato (5mM) proporcionou menos células com baixa atividade mitocondrial. Por outro lado, a carnosina (50mM), promoveu maior motilidade total, progressiva e células rápidas. Houve uma tendência de aumento nas células com velocidade progressiva e atividade mitocondrial na combinação de tratamentos. Não houve diferença entre os grupos na suscetibilidade ao EO que, no entanto, correlacionou-se negativamente com células móveis, rápidas e integridade de membrana plasmática e acrossomal. Estes resultados indicam que subprodutos da peroxidação lipídica, sendo o principal deles o MDA, podem causar danos ao DNA, às mitocôndrias e à cinética espermática. Neste contexto, a carnosina (100mM) parece ter um leve efeito protetor ao DNA contra o acúmulo de MDA. Além disto, 50mM de carnosina parece auxiliar na manutenção da velocidade progressiva e atividade mitocondrial quando associada ao piruvato (5mM). Assim, a carnosina e o piruvato podem ser utilizados na prevenção de crioinjúrias em amostras de baixa congelabilidade. / Reactive oxygen species (ROS) plays a key role in the sperm physiology. However, an imbalance between ROS production and antioxidant capacity characterize the oxidative stress (OE). The spermatozoa are extremely susceptible to EO because, among other characteristics, the plasma membrane is rich in polyunsaturated fatty acids responsible for promoting fluidity necessary in physiological processes such as motility and fertilization. However, these unsaturations are more easily oxidized and vulnerable to lipid peroxidation. Due to this susceptibility, these cells strongly depend on compounds present in the seminal plasma (SP) to protect against this event. Thus, carnosine, a dipeptide present in SP of stallions, may be a key factor on the protection against MDA accumulation. Nevertheless, during the equine sperm cryopreservation process, SP is removed. In a recent study, we observed that seminal plasma removal led to an increased susceptibility of equine spermatozoa to extremely deleterious product of lipid peroxidation, malondialdehyde (MDA). As the carnosine is removed together with the seminal plasma during cryopreservation, two sequential experiments were developed aiming to improve the quality of stallion cryopreserved semen by means of carnosine therapy. Samples from seven stallions were treated with increasing concentrations of carnosine added to the extender (1mM, 50mM and 100mM) and submitted to cryopreservation. After thawing, samples were classified as high freezeability (HF: total motility greater than 30%) and low freezeability (LF: total motility lower than 30%). Samples treated with 50mM presented lower percentage of sperm showing plasma membrane damage and, when treated with 100mM, a greater amplitude of the lateral head displacement was observed. Untreated LF samples showed a lower percentage of cells showing intact DNA in relation to HF samples. By contrast, when LF samples were treated with 100mM, there was an increase in the percentage of cells with intact DNA, which was similar to the HF samples. On the other hand, LF samples cryopreserved with 50mM had a higher percentage of cells showing high calculated mitochondrial membrane potential score and increased susceptibility to OE in relation to the control. Despite the partial protection, the increased susceptibility to lipid peroxidation is a concern since equine spermatozoa is highly vulnerable to the MDA. Those results could be due to the affinity of carnosine to react with sugars, which could negatively influence mitochondrial activity and an oxidative state by decreasing pyruvate production. Hence, in experiment 2, LF samples were treated with a combination of carnosine (0 and 50mM) and pyruvate (0 and 5mM) in a 2x2 factorial arrangement. We observed that samples treated with pyruvate (5mM) had decreased percentage of cells with low mitochondrial activity. On the other hand, carnosine (50mM) increased total motility, progressive motility and fast cells. We also observed a tendency to increased progressive velocity and mitochondrial activity in the combination of treatments. There was no difference on sperm susceptibility to OE between treatments. However, this variable correlated negatively with the percentage of motile and rapid cells as well as those showing intact membrane and acrosome. These results indicate that the byproduct of lipid peroxidation (MDA) may cause damage to DNA, mitochondria and sperm kinetics. In this context, carnosine (100mM) appears to have a mild protective effect on DNA against the accumulation of MDA. Furthermore, 50mM of carnosine seems to improve progressive velocity and mitochondrial activity when associated with pyruvate (5mM). Thus, carnosine and pyruvate can be used on cryoinjuries prevention in low freezeability samples.

O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações morfo-funcionais do sêmen bovino submetido à sexagem através da técnica de citometria de fluxo e comparar com o sêmen convencional e a diferença entre as subespécies. O sêmen foi obtido de seis touros, sendo três taurinos (Holandês preto e branco) e três zebuínos (Gir leiteiro), com quatro ejaculados de cada animal (n = 24). Cinco tratamentos foram realizados: sêmen convencional com diluidor L (Lagoa); sêmen convencional com diluidor S (Sexing) e sêmen sexado (nos tempos de zero, três e seis horas após a ejaculação para avaliar se existem alterações de membranas ao longo do tempo). Foram avaliados pela citometria de fluxo quanto à integridade de membrana plasmática e reação acrossomal (PI/FITC-PSA); peroxidação lipídica (C11-BODIPY581/591) e capacitação espermática através de análises da fosforilação da tirosina e aumento da fluidez e desorganização da membrana plasmática (Merocianina 540 e Yo-Pro1). Os efeitos de tratamentos foram avaliados por análises de variância (ANOVA), empregando-se o programa estatístico Stat-View&reg; (SAS Institute, Inc. 1998, Cary, NC, USA). Foram considerados significativos os valores com P<0,05 e com tendência a significância (P<0,10). O sêmen proveniente da subespécie taurina teve um efeito negativo mais significante do que a zebuína na qualidade do sêmen. O sêmen sexado apresentou maior peroxidação lipídica nos espermatozóides com membrana íntegra e a presença de proteínas fosforiladas na superfície da membrana plasmática, fatores que são indicativos de capacitação espermática. Porém, ao contrário do esperado, este aumento não foi acompanhado pela quantidade de células classificadas como capacitadas pela análise de associação de sondas Yo-Pro-1 e Merocianina 540, pois o sêmen convencional apresentou maior população espermática com membrana plasmática íntegra desorganizada (P<0,05). Não houve piora na qualidade do sêmen sexado devido ao tempo de espera do ejaculado (P<0,05). / The objective of this study was to evaluate the morpho-functions alterations in bovine semen submitted on sorting through flow cytometry technology and compare with conventional semen and the difference between the subspecies. Semen was obtained from six bulls, that three were taurine (Holstein Black and White) and three were zebuine (Dairy Gir) with four ejaculates from each animal (n = 24). Five treatments were performed: conventional semen with L (Lagoa) media; conventional semen with S (Sexing) media and sexed semen (zero, three and six hours after ejaculation to evaluate if there were membrane alterations over the time). The treatments were analyzed with flow cytometry as for plasmatic membrane integrity and acrosome reaction (PI/FITC-PSA); lipid peroxidation (C11-BODIPY581/591) and sperm capacitation through protein tyrosine phosphorylation and the increase in plasma membrane fluidity and disorganization (Merocyanine 540 and Yo-Pro-1). The treatments effects were evaluated by analysis of variance (ANOVA) (Stat-View&reg; SAS Institute, Inc. 1998, Cary, NC, USA). Effects were considered significant if the values were P<0.05 and with significant tendency (P<0.10). Semen from the taurine subspecie had a more significant negative effect than zebuine on semen quality. Sexed semen showed more lipid peroxidation in sperm with membrane integrity and the presence of phosphorylated proteins in plasma membrane surface that seemed to be sperm capacitation. However, in the contrary of expected, this increase did not accompany with quantity of cells classified as capacitated by the association probes Yo-Pro-1 e Merocyanine 540 analyse because the conventional semen showed more sperm population with plasma membrane integrity disorganized (P<0.05). There was not worsening in sexed semen quality over the time ejaculate waiting (P<0.05).

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-27T17:42:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoReprodutivaTouros.pdf: 1428552 bytes, checksum: 04ea13bd81fbf16dc5a2dbc2e2d49262 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-31T13:17:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoReprodutivaTouros.pdf: 1428552 bytes, checksum: 04ea13bd81fbf16dc5a2dbc2e2d49262 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-31T13:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoReprodutivaTouros.pdf: 1428552 bytes, checksum: 04ea13bd81fbf16dc5a2dbc2e2d49262 (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os subprodutos farelo de coco (FC) e a torta de amêndoa de dendê (TAD) disponíveis na agroindústria da Amazônia Oriental podem ser utilizados como alimentos alternativos na substituição de concentrados convencionais, porém com poucas informações a respeito da sua composição bromatológica, e sua relação com as características produtivas e reprodutivas dos animais. Assim, este trabalho visou avaliar o consumo alimentar, desempenho ponderal, perímetro escrotal, qualidade seminal e níveis de testosterona de búfalos suplementados com rações experimentais à base de TAD ou FC. O trabalho foi desenvolvido na Unidade de Pesquisa Animal “Senador Álvaro Adolpho”, da Embrapa Amazônia Oriental, em Belém-PA. Foram utilizados como doadores de sêmen 15 machos bubalinos (Bubalus bubalis) adultos, divididos em três grupos experimentais: Controle, Base-FC (farelo de coco) e Base-TAD (torta de amêndoa de dendê). Os concentrados experimentais foram fornecidos individualmente na proporção de 1% do peso vivo (PV) de cada animal, diariamente. As colheitas seminais (n=173) foram realizadas semanalmente, e iniciaram 112 dias após o início da suplementação. Foram avaliadas as características físicas (aspecto, cor, volume, concentração, pH, motilidade e vigor espermáticos) e morfológicas (defeitos espermáticos e integridade de membrana plasmática) do sêmen. Os resultados foram submetidos à análise de variâncias, pelo comando PROG GLM do SAS, com comparações de médias feitas por Teste t (P<0,05). O consumo médio de matéria seca dos concentrados experimentais foi de 4,778 ± 1,233 kg, no Grupo Controle, 3,112 ± 0,693 kg, no Base-FC, e 4,558 ± 1,077 kg no Base-TAD (P>0,05). Os pesos médios dos animais foram 591, 4 ± 103,3 kg, 566,4 ± 94,1 kg e 578,3 ± 107,5 kg (P>0,05), e as medidas de perímetro escrotal de 34,6 ± 2,0 cm, 33,0 ± 1,9 cm e 32,7 ± 1,9 cm, spectivamente, nos grupos Controle, Base-FC e Base-TAD. Não houve diferença na concentração espermática (x106 sptz/mL) entre Controle (1326,3 ± 893,8), Base-FC (1.698,1 ± 1023,0) e Base-TAD (1.003,2 ± 569,0). A integridade da membrana plasmática (%) foi de 68,0 ± 19,5, 72,0 ± 22,6 e 82,1 ± 12,2, respectivamente para Controle, Base-FC e Base-TAD, juntamente com a motilidade espermática progressiva (%), foram maiores (P<0,05) no grupo Base-TAD (71,7 ± 15,1%), quando comparadas ao Controle (59,3 ± 20,5%) e Base-FC (56,7 ± 24,8%). Foram observadas correlações entre as variáveis de resposta. O consumo dos concentrados experimentais e ingredientes contidos neles, como PB, lipídeos, macro, micronutrientes e metais foram maiores no Grupo Base-TAD, com exceção de K, maior no Grupo Controle, e de Ti, maior no Grupo Base-FC. Em relação os parâmetros seminais não houve diferença significativa (P>0,05) no volume espermático, movimento de massa, vigor espermático, pH e patologias espermáticas, contudo, maiores concentrações espermáticas foram observadas no Grupo Base-FC e, maior motilidade espermática e integridade de membrana plasmática no Grupo Base-TAD. Deste modo, podemos concluir que as rações à base de subprodutos, como farelo de coco e torta de amêndoa de dendê podem ser utilizadas para touros reprodutores bubalinos, contudo, a melhor qualidade seminal foi observada nas rações à base de torta de amêndoa de dendê. / The byproducts coconut meal (FC) and palm kernel cake (TAD) available in agribusiness in Eastern Amazonia can be used as alternative foods in the substitution of conventional concentrates. However, little information about their chemical composition and their relationship with productive and reproductive performance of the animals is available. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of the feeds prepared with coconut meal and palm kernel cake over the semen quality of buffaloes. Also, the individual daily feed intake in the experimental diets and your relationship with the testosterone levels, scrotal circumference and semen quality were analyzed. The experiment was developed in the Animal Research Unit "Senador Álvaro Adolpho", in Embrapa Eastern Amazon, Belém-PA. Fifteen buffaloes (Bubalus bubalis) bulls with age of 3.2 ± 1.8 years and weights of 578.6 ± 101.9 kg were used as semen donors. The animals were separated in three groups: the Control group, the FC-Base group (coconut meal-based) and the TADBase group (palm kernel cake-based). The supplementary feeding was available individually every day, according 1.0% of body weight (BW). Semen collections (n=173) were realized weekly, and they started 112 days after initiation of supplementary feeding, after two spermatogenic cycles. Seminal physical characteristics (aspect, color, volume, concentration, pH, sperm motility and vigor) and morphology (defects and integrity of sperm plasma membrane) were analyzed. The EPA method (1974, 1994, 2009) was used to determine the macronutrients, micronutrients and toxic metals in diets. Data were submitted to ANOVA and the means compared by Test t (P<0.05). The average feed intake was 4.778 ± 1.233 kg in the Control, 3.112 ± 0.693 kg in the FC-Base, and 4.558 ± 1,077 kg in the TADBase. The means of weight were 591.4 ± 103.3 kg, 566.4 ± 94.1 kg and 578.3 ± 107.5 kg and the scrotal circumference of 34.6 ± 2.0 cm, 33.0 ± 1.9 cm e 32.7 ± 1.9 cm for Control, FC-Base and TAD-Base, respectively. The spermatic concentration (x106 sptz/mL) was 1326.3 ± 893.8, 1698.1 ± 1023.0 e 1003.2 ± 569.0 for Control, FC-Base and TAD-Base, respectively. In the same order, the integrity of sperm plasma membrane (%) observed was 68.0 ± 19.5, 72.0 ± 22.6 and 82.1 ± 12.2. The progressive sperm motility (0-100%) presented significant difference (P<0.05) in the TAD-Base group (71.7 ± 15.1%), compared to Control (59.3 ± 20.5%) and FC-Base (56.7 ± 24.8%). Correlations were observed between the variables of response. The feed intake and your components, such as crude protein, lipids, macronutrients, micronutrients and toxic metals were higher in the TAD-Base group, exception to K and Ti, higher in the Control and the FC-Base group, respectively. No significant differences (P>0.05) were observed in semen aspect, volume, mass activity, spermatic vigor, pH and sperm pathologies. However, higher sperm concentrations were observed in FC-Base and increased motility and integrity of sperm plasma membrane in the TAD-Base. Thus, it can be concluded that diets based on byproducts of the agribusiness, such as coconut meal and palm kernel cake, can be used for buffalo bulls, however, the better semen quality was observed in diets based on palm kernel cake.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-06-09T18:25:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoExperimentalInsulacao.pdf: 9088940 bytes, checksum: 30234582358c7c0120ad59fdbff40f7a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-01T16:21:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoExperimentalInsulacao.pdf: 9088940 bytes, checksum: 30234582358c7c0120ad59fdbff40f7a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-01T16:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoExperimentalInsulacao.pdf: 9088940 bytes, checksum: 30234582358c7c0120ad59fdbff40f7a (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo avaliar as alterações morfo-funcionais dos testículos de bubalinos provocadas pela insulação escrotal. O experimento foi conduzido na CEBRAN - UFPA e na EMBRAPA e dividido em cinco fases: período pré-insulação (PI), insulação (I) pós-insulação até trinta dias (P30), até sessenta (P60) e até noventa (P90). Utilizaram-se seis búfalos com idade média de 50±2 meses. Antes da insulação foram realizadas colheitas de sêmen para avaliação das características físicas e morfológicas dos ejaculados. Em seis animais foram utilizadas bolsas, fixadas ao redor do funículo por sete dias, sendo verificada a temperatura retal, temperatura do funículo e a temperatura entre a pele do escroto e o saco plástico, em diferentes horários. Obtiveram-se de 1 a 2 colheitas de sêmen, através da vagina artificial, com temperatura entre 44ºC a 46ºC, e avaliados vários aspectos como: turbilhonamento (TURB), motilidade (MOT), concentração (CONC), vivos e mortos, pH e patologias seminais, além do exame histopatológico dos testículos. As lâminas para analises das patologias foram coradas pelo método de Cerovsky. A insulação não afetou significativamente a volume do ejaculado. O TURB diminuiu significativamente no período de insulação, P30 e P60, não obtendo diferença significativa no P90 quando comparada com o PI. A MOT diminuiu significativamente no P30, P60 e P90 quando comparada com o período de pré insulação e insulação. O vigor espermático apresentou diminuição no P30 em relação ao PI, I, P60 e P90. A concentração não apresentou diferença significativa entre os períodos avaliados. A viabilidade apresentou uma queda no P30 quando comparado ao PI, I, P60 e P90. Ocorreu diferença significativa no pH nos períodos P60 e P90 em relação a PI, I, P30. Houve diferença estatística, quanto aos defeitos maiores do sêmen, antes e depois da insulação, sendo I e P30 os períodos mais criticos quando comparado com P60 e P90. Quanto aos defeitos menores, houve diferença significativa entre P30 e PI, P60 e P90. Os defeitos totais evidenciaram diferença estatística no P30 em relação ao PI, I, P60 e P90. Foram avaliados as modificações histológicas-testicular provocados pela insulação, nos dias 20, 40 e 60 pós-insulação, ocasionado um quadro degenerativo acentuado, havendo uma regeneração do processo espermatogênico na maioria dos animais estudados. Estes dados demonstraram que o estresse térmico causou efeitos deletéricos na espermatogenese e no processo de maturação dos espermatozoides. / This study aimed to evaluate the morphological and functional buffaloes testis`s alterations caused by insulation The experiment was conducted at the UFPA and EMBRAPA and divided into five phases: pre-insulating (PI), insulation (I) after insulation up to thirty days (P30), within sixty (P60) and up to ninety (P90). It was used six buffaloes with mean age of 50 ± 2 months. Before the insulation, the samples were collected to evaluate semen physical characteristics and morphology of ejaculated. In six animals were used bags to fix around the cord and scrotum. For seven days were checked the rectal`s temperature, the cord`s temperature and the temperature between the skin of the scrotum and the plastic bag, at different times. There were obtained 1 to 2 samples of semen by artificial vagina, with temperatures between 44 to 46 C, and evaluated aspect, turbulence (TURB), motility (MOT), concentration (CONC), living and dead, seminal pH and diseases, besides the testis`s histopathology. The laminas were colored with Cerovsky to evaluate spermatozoids morphology characteristics. Insulation did not significantly affect the volume of ejaculate. TURB was significantly reduced in the insulating, P30 and P60, did not get any significant difference in P90 days compared with the PI. The MOT decreased significantly during P30, P60 and P90 compared with pre insulation and insulating. The sperm vigor presented a decrease in P30 compared with PI, I, P60 and P90. The concentration was not significantly different among the periods. The viability showed a decrease in P30 when compared to PI, I , P60 and P90. Significant difference in pH during periods P60 and P90 compared to PI, I, P30. There was statistical difference, as the major defects of semen, before and after insulation, I and P30 were compared with P60 and P90. The minor defects had a significant difference between P30 and PI, P60 and P90. The total defects showed statistical difference in P30 compared with PI, I, P60 and P90. The buffaloes were submitted to the unilateral orchiectomy throughout the 20, 40 and 60 days after insulation with the purpose of confronting the microscopic findings with the physical and morphologic exam of the semen, causing an accentuated degenerative picture on the spermatogenic epithelium which regenerated in spite of the establishment of a degenerative process in the gonads. These data demonstrate that heat stress caused deleterious effects on spermatogenesis and the maturation of sperm.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-07-02T18:55:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UsoAntioxidantesElevacao.pdf: 870493 bytes, checksum: 179b5ed13ad7947cf5ca9239f84efe27 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-14T13:21:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UsoAntioxidantesElevacao.pdf: 870493 bytes, checksum: 179b5ed13ad7947cf5ca9239f84efe27 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-14T13:21:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UsoAntioxidantesElevacao.pdf: 870493 bytes, checksum: 179b5ed13ad7947cf5ca9239f84efe27 (MD5) Previous issue date: 2010 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O sêmen bubalino sofre com o processo de congelação que leva ao estresse oxidativo. O objetivo do trabalho foi desenvolver mecanismo de C de sêmen, com adição de substâncias antioxidantes, que permita reduzir a mortalidade espermática e as injúrias celulares, a fim de aumentar a potencial fertilidade do sêmen bubalino pós-descongelação. Foram utilizados 5 touros bubalinos da raça Murrah (4-8 anos). As coletas de sêmen foram realizadas pelo método de “vagina artificial. Os ejaculados foram aliquotados para congelação, configurando quatro tratamentos distintos: Grupo Controle - congelação com diluidor TESTRIS; Grupo Vitamina C - TES-TRIS associado à vitamina C (2,5 mM); Grupo Pentoxifilina - TES-TRIS com pentoxifilina (3,5 mM); e Grupo Vitamina C + Pentoxifilina - TES-TRIS com vitamina C (2,5 mM) e pentoxifilina (3,5 mM). Foram analisadas no sêmen in natura (Fase Pré-Congelação) o volume, pH, cor, aspecto, turbilhonamento, concentração do ejaculado, motilidade progressiva, vigor, integridade de membrana plasmática e morfologia espermática. Após os processos de congelação-descongelação (Fase Pós-Descongelação) e após o teste de termo-resistência (Fase Pós-TTR), as análises de motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e morfologia espermática foram realizadas. Os resultados foram analisados por ANOVA, Teste de Tukey e as correlações foram calculadas pelo teste de Pearson, com uso dos programas BioEstat 5.0 e SPSS 12. O nível de significância adotado foi de 5%. Houve diferença estatística significativa entre tratamentos para motilidade progressiva na Fase Pós- TTR (Controle: 15,1 ± 15,3%; Vitamina C: 25,6 ± 16,3%; Pentoxifilina: 23,3 ± 14,6 e Vitamina C + Pentoxifilina: 28,6 ± 16,2%; P<0,05). Para as demais características espermáticas, não houve diferença estatística significativa entre tratamentos (P>0,05). Dessa forma, , o uso do antioxidante vitamina C, isolado ou associado à pentoxifilina, no sêmen bubalino, pode aumentar sua potencial fertilidade e maximizar a disseminação de material genético superior. / The buffalo semen suffers with the freezing process, which leads to oxidative stress. The aim of the research was to develop mechanism of semen cryopreservation, based on the addition of antioxidants substances, in order to decrease sperm mortality and cellular damages, to shift buffalo semen quality after thawing and to disseminate superior genetic material. Five Murrah buffalo bulls were used (4-8 years) and semen collections were performed with artificial vagina method. Before freezing, ejaculates were divided into four treatments: Control Group – frozen semen with TES-TRIS; Ascorbic Acid Group – TES-TRIS added with ascorbic acid (2.5 mM); Pentoxifylline Group - TES-TRIS with pentoxifylline (3.5 mM); and Ascorbic Acid + Pentoxifylline Group - TES-TRIS with ascorbic acid (2.5 mM) and pentoxifylline (3.5 mM). Raw semen (Pre-Freezing Phase) was analyzed to volume, pH, color, aspect, mass activity, spermatic concentration, spermatic motility, vigor, plasma membrane integrity and spermatic morphology. After thawing (Post-Thawing Phase) and after the thermoresistance test (Post- TTR Phase), analyses of spermatic motility, vigor, plasma membrane integrity and spermatic morphology were realized. Results were analyzed by ANOVA, Tukey Test and correlations were calculated by Pearson Test, using for that BioEstat 5.0 and SPSS 12 statistical softwares. The level of significance adopted was 5%. Significant statistical difference were observed in relation to progressive spermatic motility in Post-TTR Phase (Control: 15.1 ± 15.3%; Ascorbic Acid: 25.6 ± 16.3%; Pentoxifylline: 23.3 ± 14.6 and Ascorbic Acid + Pentoxifylline: 28.6 ± 16.2%; P<0.05). The other spermatic characteristics showed no significant statistical difference between treatments (P>0.05). Thus, the use of ascorbic acid, isolate or associated to pentoxifylline, in the buffalo semen may increase the potential fertility and the dissemination of superior genetic material.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:01:09Z : No. of bitstreams: 1 000740796.pdf: 3299028 bytes, checksum: 68adc36acee433e912a20b2f1b608a02 (MD5) / A sibutramina é um inibidor seletivo da recaptação neuronal de noradrenalina e serotonina amplamente utilizada para o tratamento da obesidade. Investigações anteriores demonstraram o impacto da sibutramina nas reservas espermáticas e na contratilidade de órgãos relacionados a ejaculação. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os parâmetros espermáticos e a contratilidade da próstata ventral e do ducto epididimário distal isolado de ratos expostos in vivo e in vitro a sibutramina. No experimento 1, ratos machos Wistar (12-16 semanas /350-450 g) foram divididos em dois grupos: tratado oralmente com sibutramina (10 mg/kg/dia) e grupo controle, que recebeu apenas o veículo (dimetilsulfóxido e solução salina). Após 30 dias de tratamento, os animais foram pesados e eutanasiados por decapitação. Os testículos direitos, epidídimos, ductos deferentes, próstatas ventrais e glândulas seminais (sem a glândula coaguladora) foram removidos e os seus pesos foram determinados. Os testículos e epidídimos direitos foram utilizados para a determinação do número de espermatozoides e os esquerdos para análise histopatológica. Além disso, os espermatozoides da cauda do epididimo direito foram usados para inseminação artificial in utero e para análise da motilidade e morfologia espermática. Os níveis séricos de testosterona, hormônio folículo estimulante (FSH) e hormônio luteinizante (LH) também foram mensurados. No experimento 2, um outro lote de ratos, seguindo o mesmo desenho experimental, foi utilizado para a realização dos ensaios in vitro de reatividade farmacológica do ducto epididimário distal isolado. No experimento 3 ratos machos adultos foram utilizados para os ensaios in vitro de reatividade farmacológica do ducto epididimário distal isolado, com e sem a presença de sibutramina, e para ensaios in vivo da reatividade farmacológica da próstata ventral, com e... / Sibutrmine is a neuronal noradrenaline and serotonin reuptake inhibitor laegely used for the treatment of obesity. Previous investigations have shown the impact of sibutraimine on ejaculation contractility related organs and sperm reserves. Therefore, the aim of the present work was to evaluate sperm parameters and the contractility of isolated distal cauda epididymidis duct and ventral prostate of rats exposed in vivo and in vitro to sibutramine. In experiment 1, Wistar male rats (12-16 weeks/350-450 g) were divided into two groups: treated orally with sibutramine (10 mg/kg/day) and control, which received only the vehicle (dimethyl sulfoxide and saline). After 30 days of treatment the animals were weighed and euthanized by decapitation. The right testis, ....

A necessidade de criopreservação seminal vem aumentando cada vez mais, concomitantemente à evolução das biotecnologias aplicadas à reprodução animal. Sabe-se que a principal causa da diminuição do desempenho reprodutivo de um touro, criado em clima tropical, é o estresse térmico. Raças de origem européia (Bos taurus taurus) são consideravelmente mais sensíveis à essas condições climáticas quando comparadas aos animais de origem indiana (Bos taurus indicus). Esses animais não adaptados podem apresentar decréscimo na qualidade espermática, como alterações estruturais, funcionais e maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, após a descongelação do sêmen. Para avaliar essa hipótese, foram utilizadas amostras criopreservadas de 40 touros, sendo 20 da raça Nelore (Bos taurus indicus) e 20 da raça Simental (Bos taurus taurus), criados em clima tropical, dessas, 10 amostras seminais de cada raça foram coletadas durante inverno e 10 durante o verão. Após a descongelação das amostras, foram realizados os testes espermáticos convencionais como motilidade progressiva, vigor e índice de motilidade espermática, e os testes funcionais tais como integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade acrossomal (POPE), integridade de DNA (Ensaio Cometa) e atividade citoquímica mitocondrial (3\'3 diaminobenzidina DAB). Também foi avaliada a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida, através da mensuração da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os dados foram analisados levando em conta as classes: raça (Nelore e Simental) ou estação do ano (verão e inverno), através do programa SPSS 13.0 para Windows. A variável DAB I foi maior (p=0,04) nas amostras dos touros Nelore em comparação com Simentais (17,85 &plusmn; 2,38 vs 11,4 &plusmn; 1,84). Observou-se o efeito das estações do ano sobre as variáveis motilidade progressiva (26,50% inverno e 13,30% verão; p=0,02), DAB I (22,32% inverno e 13,30% verão; p=0,04) e DAB III (13,88% inverno e 22,10% verão; p=0,01), somente no sêmen dos touros Nelore, e o efeito das raças (p=0,03) sobre as variáveis DAB I (22,34% Nelore e 11,60% Simental) e DAB III (13,88% Nelore e 21,19% Simental), apenas durante o inverno, quanto ao nível de TBARS, não foi verificado diferença entre nenhum grupo. Houve correlação entre alguns testes funcionais e convencionais, porém a variável integridade de DNA não correlacionou com nenhum teste convencional. Esses resultados podem indicar que a peroxidação lipídica sofrida, espontaneamente, pelos touros Europeus, devido ao estresse térmico, selecionou espermatozóides mais resistentes à criopreservação. / Seminal cryopreservation technique has been increasing concomitant reproductive biotechnologies. It is known that heat stress is the main cause that affects bulls reproductive performance under tropical environment. European breeds (Bos taurus taurus) are much more sensible to these conditions than Indian breeds (Bos taurus indicus). These non-adapted animals present a fast decrease in sperm quality as structural and functional parameters and higher oxidative stress susceptibility. In order to test this hypothesis, cryoprotected semen samples of twenty Nelore (Bos taurus indicus) and twenty Simmental (Bos taurus taurus) bulls, raised under tropical conditions, were analyzed; ten samples of each breed were collected during summer and ten during winter. After thawing, semen samples were submitted to following conventional tests: progressive motility, vigor and sperm motility index (IME), and following functional tests: plasmatic membrane integrity (eosin-nigrosin), acrosomal membrane integrity (POPE), DNA fragmentation (Comet Assay) and mitochondrial activity (3\'3 diaminobenzidine - DAB). The spermatozoa susceptibility to the induced lipid peroxidation followed by measurement of thiobarbituric acid reactive substances concentration (TBARS), was used as an oxidative stress index. Statistical analysis were performed for breed (Nelore and Simmental) and season (summer and winter), using SPSS 13.0 for Windows. Comparing Nelore and Simmental, DAB I was higher (p=0,04) in the first group (17,85 &plusmn; 2,38 and 11,4 &plusmn; 1,84, respectively). Season effect was observed only in Nelore samples on: progressive motility (26,50% winter and 13,30% summer; p=0,02), DAB I (22,32% winter and 13,30% sumer; p=0,04) and DAB III (13,88% winter and 22,10% summer; p=0,01); and breed effect (p=0,03) was observed only during winter on: DAB I (22,34% Nelore and 11,60% Simmental) and DAB III (13,88% Nelore and 21,19% Simmental). TBARS index, did not differ in breed or season. Correlations were observed between some of functional and conventional tests, however, the DNA integrity did not correlate with any conventional test. These results may indicate that probably, the spontaneous peroxidation that European bulls suffer due to the heat stress may have selected sperm more resistant to the cryopreservation.

A criopreservação dos espermatozóides eqüinos gera alterações nas membranas semelhantes às que ocorrem durante o processo de capacitação (criocapacitação). Sabe-se que o plasma seminal possui fatores decapacitantes. Além disso, é citado na literatura a possibilidade melhorar a preservação dos espermatozóides com membrana plasmática íntegra e motilidade, após refrigeração ou criopreservação, quando adicionado plasma seminal de animais que apresentam boa resposta à congelação ao sêmen de animais que apresentam espermatozóides com baixa capacidade de congelação. Assim, o presente experimento verificou se a criopreservação gera modificações semelhantes à capacitação e se a adição ao sêmen pós-descongelação de plasma seminal autólogo ou adquirido de um animal com boa resposta à congelação (homólogo) diminuía estes efeitos. Para isso, foram realizadas 5 colheitas de sêmen de 4 garanhões. O sêmen in natura foi avaliado e então, processado e submetido à congelação. Após a descongelação o sêmen foi novamente avaliado e então dividido em três tratamentos: adicionado de diluidor de criopreservação sem crioprotetor (DIL), deste com 20 % (v/v) de plasma seminal homólogo (PH) ou com 20 % (v/v) de plasma seminal autólogo (PA). Em seguida, o sêmen foi incubado em banho-Maria (37°C) e submetido as avaliações nos três diferentes períodos de amostragem (0, 60 e 120 minutos de incubação). As avaliações do sêmen consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA) e nas análises por citometria de fluxo da reação acrossomal, do potencial de membrana mitocondrial, da estabilidade da membrana plasmática, da peroxidação lipídica e na detecção da fosforilação do aminoácido tirosina presente na superfície da célula espermática. As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5 % de significância. A criopreservação não aumentou a população de células viáveis com membrana acrossômica reagida, nem a população de células viáveis com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitadas). Entretanto, a criopreservação levou a uma redução na quantidade de células com potencial de membrana mitocondrial e aumentou a peroxidação das membranas, além de induzir o aumento na fosforilação de proteínas presentes na superfície da célula. A criopreservação ocasionou uma redução de todas as variáveis analisadas pelo CASA, incluindo a população identificada como hiperativada. A adição do plasma seminal, indiferentemente da origem, melhorou a integridade da membrana plasmática, reduziu a população com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitados), além de reduzir a quantidade de proteínas fosforiladas na superfície do espermatozóide. Porém esta melhora só foi encontrada nas análises iniciais (tempo 0), com o tempo o plasma seminal mostrou não ser um meio adequado para se manter o sêmen armazenado levando a um prejuízo na maioria das variáveis estudadas. Baseado nos resultados, pode-se sugerir a adição de plasma seminal com o intuito de reduzir os efeitos da criocapacitação. Contudo, ao adicionar o plasma seminal ao sêmen, este deve ser depositado no trato reprodutivo da fêmea o mais breve possível. / Cryopreservation of equine spermatozoa leads to capacitation-like changes (cryocapacitation). Seminal plasma contains decapacitating factors. Moreover, it has been known that addition of seminal plasma from stallions with good post-thaw semen quality to semen of stallions with low post-thaw semen quality preserve progressive motility and membrane integrity better. Therefore, this study was intended to find out whether the cryopreservation process induces capacitation-like changes and if addition of autologous seminal plasma or seminal plasma from stallion with good post-thaw semen quality (homologous) reduces cryocapacitation effects. For this, five ejaculates were obtained from each of four mature stallions. Samples of in natura semen were analyzed, and submited to cryopreservation. Post-thawed semen was analyzed again so divided in three treatments: only cryopreservation media without cryoprotectants, cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma homologous, and cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma autologous. All samples were maintained in water bath (37°C) for 120 minutes, while semen analyzes were assessed at time 0, 60 and 120 min. The assessment of each sample was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA) and flow cytometry analyzes of acrosome reaction, mitochondrial potential, increased membrane fluidity, lipid peroxidation and degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface. The variables were submitted to analysis of variance and LSD test at 5% level of significance. Cryopreservation did not increase viable cells with acrosome reaction, neither viable cells with increased membrane fluidity (capacitated). However, cryopreservation led an decrease of cell with mitochondrial potential and an increased in lipid peroxidation, besides increase tyrosine phosphorylation of the equine sperm surface proteins. The cryopreservation caused a reduction of all variables assessed by CASA, including hyperactivated cells. Seminal plasma addition, regardless of origin, improved integrity of plasma membrane, reduced number of viable cells with increased membrane fluidity, besides decrease phosphorylation of sperm surface proteins. Nevertheless, the improved created only was found in the initial analysis (time 0), seminal plasma shown a harmful effect in maintenance of sperm during incubation. Incubation of sperm in seminal plasma damaged majority of variables assessed. Based on results, seminal plasma could be added to post-thawed semen to decrease the cryocapacitation effects. However, post-thawed semen has to be deposited as soon as possible in female reproductive tract when the seminal plasma is added.

Uma abordagem mais moderna sobre o binômio estresse térmico-degeneração foi realizada, visando monitorar a integridade de acrossomo, mitocôndrias e cromatina. Raros são os trabalhos sobre os efeitos da somatotropina bovina exógena (bST) sobre a qualidade seminal de touros que tenham passado por períodos de estresse térmico e conseqüente degeneração testicular. Foram objetivos do trabalho: 1) Comparar as características seminais e espermáticas de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST); 2) Avaliar a integridade da membrana plasmática e acrossomal, função mitocondrial e defeitos cromossômicos de espermatozóides de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST). Para tanto, o experimento foi dividido em 4 fases: Fase Pré-Insulação: período do dia 1 ao dia 35 (dia 1 = dia do início do experimento), Fase Pré-Tratamento: período do dia 36 ao dia 63 (colocação da bolsa insuladora no dia 36 por 96 horas), Fase Tratamento: período do dia 64 ao dia 119 (aplicações de bST), Fase Pós-tratamento: período do dia 120 ao dia 154. O sêmen de dezesseis touros Simental (Bos taurus taurus) foi coletado semanalmente ao longo de 22 semanas (154 dias). Os touros foram divididos em quatro grupos: o Grupo CONT foi o controle, não foi submetido a qualquer tratamento; o Grupo INSUL sofreu insulação testicular; o Grupo bST recebeu aplicações de somatotropina bovina (Lactotropin® 1 mg/kg PV) a cada quatorze dias a partir do dia 64; o Grupo IbST sofreu insulação e recebeu aplicações de somatotropina. Os animais foram avaliados quanto às características físicas e seminais. O estresse térmico testicular influenciou negativamente o perímetro escrotal, a motilidade espermática, o vigor, o movimento de massa, mas aumentou o total de defeitos espermáticos. A somatotropina bovina influenciou a quantidade de cabeças piriformes nos ejaculados. Os defeitos de cromatina foram influenciados pelo estresse térmico testicular. A população de espermatozóides com membrana plasmática íntegra, acrossomo intacto e potencial mitocondrial foi reduzida em função do estresse térmico testicular / Modern approach concerning binomial thermal stress-testicular degeneration was done in order to study chromatin, acrosomal and mitochondrial integrity. Furthermore, there are few relates about effects of exogenous bovine somatotropine (bST) on seminal quality of bulls which were submitted to thermal stress and consequent testicular degeneration. The objectives of this study were: 1) Comparing seminal and spermatic features of bulls which were submitted to testicular thermal stress (treated or not with bST); 2) Evaluating of the plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial function, and chromosomal defects from the spermatozoa of these bulls. The experiment was divided in 4 phases. Pre-insulation phase: from day 1 to 35 (day 1 = first day of experiment), Pre-treatment phase: from day 36 to 63, Treatment phase: from day 64 to 119 (treatment with bST) and Post-treatment phase: from day 120 to 154. Semen of sixteen Simmental bulls (Bos taurus taurus) was collected once a week, during 22 weeks (154 days). Bulls were split in four groups: Group CONT was the control, and it was not treated or insulated; Group INSUL was insulated; Group bST was treated with bovine somatotropine (Lactotropin® 1.2 mg/kg BW) each 14 days since day 64. Group IbST was insulated and treated with bST. Physical and seminal features of bulls were evaluated. Thermal stress decreased scrotal circumference, sperm motility, vigour and gross motility, and increased total sperm defects. The bST increased pyriform heads in ejaculated. Testicular thermal stress increased chromatin defects. Sperm population with intact plasmatic membranes, intact acrosome and mitochondrial function were reduced by testicular thermal stress

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.