Determina si la actividad de la enzima alfa amilasa salival presenta variación frente al estrés ocasionado por la realización de una prueba académica por parte de los estudiantes de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. El diseño de la investigación fue analítico, longitudinal y prospectivo. La muestra está compuesta por 30 estudiantes. Se realizan tomas de muestra salival 4 horas antes de la prueba académica y luego a 7 días después de la misma. La actividad de alfa amilasa salival se determinó mediante un ensayo de tipo cinético. Encuentra la existencia de un aumento en la actividad de alfa amilasa antes de la prueba académica y que existe una disminución en la actividad de la enzima después de la prueba, con significancia estadística (p=0) en la prueba T-student para muestras relacionadas. Concluye que existe una variación significativa de la actividad de alfa amilasa salival frente al estrés ocasionado por una prueba académica. / Tesis

Saliva of Ixodid ticks contains a whole array of pharmacologically active molecules with vasodilatory, antihemostatic, and immunomodulatory activities. This thesis focuses on two types of salivary proteins, serpins and cystatins, and their role in immunomodulation. These protease inhibitors are known to affect many biological functions. To better understand their role in tick saliva we examined their effect on dendritic cells and their ability to modulate the immune response after pathogen infection. As model pathogens, Borrelia spirochetes and tick-borne encephalitis virus were used.

In this study we examined the effect of the tick saliva from I. ricinus and the effect of recombinant protein IRS-2 from the saliva of I. ricinus on dendritic cells derived from the mice bone marrow. We studied their effect on the production of cytokines by dendritic cells after the stimulation by B. burgdorferi, their effect on the expression of genes, that participate in phagocytosis, and the impact of the tick saliva on phagocytosis of B. burgdorferi by dendritic cells.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2005 / Inclui bibliografia / A cárie dentária é uma doença infecciosa e de etiologia multifatorial, relacionada à microbiota, à dieta e ao hospedeiro. O número de indivíduos acometidos pela cárie dentária tem reduzido sobremaneira, mas ainda é substancial, mesmo em áreas favorecidas

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Objetivo: verificar a eficacia do laser de baixa potencia na mitigacao da xerostomia e do hipofluxo salivar em pacientes portadores de cancer de cabeca e pescoco submetidos a radio e quimioterapia (RT-QT). Material e Metodo: estudo prospectivo, com 29 pacientes submetidos a radioterapia (RT) em aparelho de megavoltagem (acelerador linear 6 MV, ou telecobaltoterapia u60Co) em campos cervicofaciais e fossa supraclavicular, fracoes de 2 Gy/dia, com dose minima de 66 Gy, associada a quimioterapia (QT) (derivados da platina). Foram divididos em: Grupo LASER, com 17 pacientes que receberam a laserterapia antes da primeira sessao da RT, 3 dias por semana e grupo CONTROLE com 12 pacientes que receberam tratamento clinico conforme protocolo do Setor. Foi utilizado um InGaAlP laser diodo, com a ponta do emissor de 0,04 cm3. Para a aplicacao intra oral do laser, foi utilizado comprimento de onda de 660 nm e 40 mW de potencia, dose media de 10 J/cm², 10 segundos por ponto, sendo 3 em cada mucosa jugal, 3 em cada mucosa labial, 2 em palato duro, 1 em palato mole, 1 no dorso da lingua, 2 em cada bordo de lingua, 1 em cada pilar amidaliano, 2 em soalho bucal. Para a aplicacao extra-oral, o comprimento de onda utilizado foi de 780 nm e 15 mW de potencia, dose media de 3,7 J/cm², 10 segundos por ponto, sendo 6 em cada parotida e 2 em cada submandibular. Foram avaliados os sintomas da xerostomia pelo sistema simplificado de Eisbruch et al e o fluxo salivar nao estimulado antes da primeira sessao de RT (N0), na 15ª(N15) e na ultima sessao de RT (Nf), 30 (N30) e 90 (N90) dias depois do termino do tratamento. Resultados: 89,66% dos pacientes eram do genero masculino, com media de idade de 57,37 anos e a maior parte da raca branca (72,41%). A maioria dos pacientes apresentou tumores em faringe (65,5%) em estadio IV (75,9%) e foram tratados predominantemente com dose total da RT de 70 Gy (82,8%). Na avaliacao dos sintomas da xerostomia, o grupo LASER apresentou menores graus em todos os tempos de avaliacao que, porem, nao foram estatisticamente significantes quando comparados aos controles. Em relacao as medidas do fluxo salivar em mL/min, o grupo que foi tratado com o laser apresentou medias significantemente maiores quando comparado ao grupo CONTROLE na 15ª sessao (p=0,009), ao final (p=0,027) da RT e 30 dias apos o termino do tratamento (p=0,035). Noventa dias depois do termino do tratamento, a media do fluxo salivar do grupo LASER foi quase o dobro do grupo CONTROLE, porem nao apresentou significancia estatistica. Conclusoes: O uso do laser de baixa potencia em glandulas salivares nos pacientes portadores de cancer de cabeca e pescoco submetidos a RT-QT permitiu niveis de fluxo salivar significantemente maiores em comparacao aos pacientes que somente receberam o tratamento clinico rotineiro. Os resultados sugerem tambem que o laser de baixa potencia possa reduzir os sintomas relacionados a xerostomia. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-05T18:28:21Z No. of bitstreams: 1 luciane_a_amado_ioc_bp_0005_2010.pdf: 3292332 bytes, checksum: cfe96b31e4c6b0b9cbe0bc24ceb173c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T18:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luciane_a_amado_ioc_bp_0005_2010.pdf: 3292332 bytes, checksum: cfe96b31e4c6b0b9cbe0bc24ceb173c1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz / No Brasil, surtos de hepatite A em comunidades fechadas, principalmente em creches e escolas, constituem um importante problema para a saúde pública, que requerem investigação epidemiológica e rápida intervenção de controle, devido ao risco de propagação “silenciosa” para as comunidades próximas. Entretanto, a coleta de sangue é invasiva e dolorosa o que dificulta o acesso à população infantil para a realização do diagnóstico, muitas vezes inviabiliza o estudo epidemiológico quando este envolve um número grande de indivíduos. A coleta de amostras de saliva como uma alternativa, oferece potenciais vantagens, pois se trata de uma coleta não-invasiva, indolor e rápida. A fim de avaliar a utilização da saliva como espécime clínico para o diagnóstico e estudos epidemiológicos da hepatite A, estudos foram conduzidos a partir de amostras pareadas de saliva/soro de pacientes envolvidos em um surto de hepatite A. No primeiro estudo, otimizamos métodos para detecção de anticorpos anti-HAV e do HAV-RNA em amostras de saliva. Neste estudo, observamos sensibilidade e especificidade do teste de detecção de anti-HAV IgM na saliva de 96% e 98%, respectivamente. Após estabelecer os protocolos para detecção do HAV RNA, verificamos uma alta freqüência de detecção de HAV RNA em amostras de saliva tanto de pacientes em fase aguda como em pacientes em período de “janela iminológica” (37,2%). O estudo da epidemiologia molecular conduzido durante o surto revelou co-circulação dos dubgenótipos IA e IB do HAV e a ocorrência de casos de co-infecção por subgenótipos diferentes do HAV entre as amostras pareadas de soro e saliva. Este resultado nos levou a investigação de uma possível replicação extrahepática do HAV em glândulas salivares, através de um estudo de infecção experimental em cinomolgos. Neste estudo constatamos a presença do antígeno viral nos hepatócitos e nas glândulas submandibulares dos animais infectados. Através da detecção do replicativo intermediário do HAV, observou-se uma replicação ativa do HAV nas glândulas submandibulares dos animais infectados experimentalmente. Este trabalho demonstrou a aplicabilidade das amostras de saliva para o diagnóstico da hepatite A e sua importância para estudos de epidemiologia molecular. Os dados deste presente estudo esclareceram alguns aspectos da patogênese do HAV como a ocorrência de replicação extrahepática em glândulas salivares, sugerindo a possibilidade de transmissão do HAV através da saliva. / In Brazil, hepatitis A outbreaks in closed communities, especially in nurseries and schools, is a major problem for public health, which require rapid epidemiological investigation and control intervention, due to the risk of spreading "silent" to nearby communities. However, blood collection is invasive and painful which makes access to the child population for the diagnosis often impedes the epidemiological study when it involves a large number of individuals. The collection of saliva samples as an alternative, offer potential advantages because it is a collection of non-invasive, painless and quick. In order to evaluate the use of saliva as a clinical specimen for diagnosis and epidemiology of Hepatitis A studies, studies were conducted from paired samples of saliva / serum of patients involved in an outbreak of hepatitis A. In the first study, we optimized methods for the detection of anti-HAV antibodies and the HAV-RNA in saliva. This study showed a sensitivity and specificity of the detection of IgM anti-HAV antibodies in the saliva of 96% and 98% respectively. After establishing the protocols for the detection of HAV RNA, we found a high frequency of detection of HAV RNA in saliva samples of both acute-phase patients and patients in a period of "window iminológica" (37.2%). The study of molecular epidemiology conducted during the outbreak revealed co-circulation of dubgenótipos IA and IB HAV and the occurrence of co-infection with HAV subgenótipos different between paired serum and saliva. This result led us to investigate a possible extrahepatic replication of HAV in the salivary glands, through a study of experimental infection in cynomolgus. In this study we verified the presence of viral antigen in hepatocytes and in the submandibular glands of infected animals. By detecting the replicative intermediate of HAV was observed HAV replication active in the submandibular glands of animals infected experimentally. This study demonstrated the applicability of saliva samples for the diagnosis of hepatitis A and its importance for molecular epidemiology studies. The data of this study explained some aspects of the pathogenesis of HAV replication as the occurrence of extrahepatic salivary glands, suggesting the possibility of transmission of HAV by saliva.

Made available in DSpace on 2015-10-21T12:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 moyra_portilho_ioc_mest_2013.pdf: 2657721 bytes, checksum: ac38c443da941a1c7b8e800b3c858856 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A detecção e quantificação do DNA do vírus da hepatite B (HBV) são importantes para o diagnóstico da infecção, definição e monitoramento do tratamento antiviral. Entretanto o diagnóstico molecular é difícil em áreas remotas ou com poucos recursos devido ao custo dos métodos comerciais e pouca infra-estrutura para coleta, armazenamento e transporte de amostras de sangue. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método para quantificação do DNA do HBV em amostras de soro e fluido oral, e avaliar um método qualitativo \201Cin house\201D para detecção do DNA do HBV em comparação com métodos comerciais disponíveis no mercado. Amostras pareadas de soro e fluido oral foram obtidas de 116 indivíduos, onde 66 eram reagentes para HBsAg no soro e 50 não apresentavam nenhum marcador sorológico no soro. As amostras de soro foram submetidas a testes imunoenzimáticos para detecção de marcadores sorológicos do HBV (HBsAg, anti-HBc, anti-HBs, anti-HBcIgM, anti-HBe e HBeAg) e ao PCR em tempo real para quantificação do DNA do HBV (COBAS TaqMan HBV, Roche). O DNA do HBV foi extraído utilizando o conjunto de reagentes \201CHigh Pure Viral Nucleic Acid kit\201D (Roche Diagnostics, EUA) em amostras de soro e \201CRTP® DNA/RNA Virus Mini kit\201D (Invitek, Alemanha) para amostras de fluido oral Para a detecção qualitativa do HBV foi realizada uma PCR com iniciadores para o gene do core, e para detecção quantitativa do HBV foi utilizada a metodologia de PCR em tempo real com sondas TaqMan® na plataforma Line-Gene 9600 (Bioer Serves Life, Canada). Para obtenção da curva de quantificação foi construído um plasmídeo recombinante obtido a partir de amostras padrão do painel de quantificação do HBV (Optiquant HBV, Acrometrix, Life Technologis, EUA). As seguintes condições da PCR em tempo real foram avaliadas: concentração de DNA (5 e 7,5\03BCL), temperatura de hibridização (60°C e 62°C), e números de ciclos (40 e 45 ciclos). A sensibilidade analítica da PCR em tempo real foi estimada em 10 cópias de HBV DNA/mL e a faixa de quantificação abrangeu cerca de 8 logs de 10. Para quantificação do DNA do HBV em soro e fluido oral foi necessário o aumento da temperatura de hibridização, e para o fluido oral também foi necessário o aumento da concentração de DNA (7,5 \03BCL) e do número de ciclos (45). Entre as amostras de soro HBsAg reagentes, 64 foram quantificadas pela PCR em tempo real comercial e 28 pelo teste quantitativo \201Cin house\201D com carga viral média igual a 3,993 ± 1,922 e 3,761± 1,829 log cópias de HBV DNA/mL (r=0,7643; p<0,0001), respectivamente, e concordância de 37,87% Por outro lado, 8 amostras de fluido oral amplificaram pelo método quantitativo \201Cin house\201D, com carga viral média igual a 4,459 ± 1,127 log cópias de HBV DNA/mL (r=- 0,2994; p= 0,9453). A PCR qualitativa \201Cin house\201D foi capaz de detectar o DNA do HBV em 50 amostras de soro HBsAg reagentes apresentando 75% de concordância com o teste comercial quantitativo (p=1,000), porém somente uma amostra de fluido oral foi detectada por este método. Concluímos que as metodologias qualitativa e quantitativa para detecção do DNA do HBV analisadas neste estudo apresentaram boa eficiência em amostras de soro, porém não foram eficientes em amostras de fluido oral. Estas metodologias podem ser bastante úteis para detecção molecular do HBV em áreas com recursos limitados / The detection and quantification of the DNA of Hepa titis B virus (HBV) are important to diagnose the infection, determine and monitore the antiviral treatment. However, the molecular diagnosis is difficult in remote areas or presenting low resources, because of the cost of commercial methods and few infrastructu re for collection, storage and transport of blood samples. The objective of this s tudy was to develop a method for quantification of HBV DNA in serum and oral fluid s amples, and to evaluate an in house qualitative method for HBV DNA detection compared t o commercial methods available in the market. Paired serum and oral fluid were obtain ed from 116 individuals, where 66 were HBsAg reactive in their sera and 50 did not pr esent any HBV serological marker in sera. Serum samples were submitted to enzyme immuno assays for detection of HBV serological markers (HBsAg, anti-HBc, anti-HBs, ant i-HBcIgM, HBeAg and anti-HBe) and quantified by commercial real time PCR (COBAS® TaqM an HBV Test, Roche Diagnostics, EUA). HBV DNA was extracted using the commercial kit "High Pure Viral Nucleic Acid Kit" (Roche Diagnostics, USA) in serum samples and "RTP ® DNA / RNA Virus Mini Kit" (Invitek, Germany) for oral fluid s amples. For HBV qualitative detection it was employed a PCR using primers for Core gene, and for quantitative detection of HBV it was employed a real time PCR methodology with Ta qMan ® probes in the Line-Gene 9600 (Bioer Serves Life, Canada) platform. To obtai n the quantification curve, a recombinant plasmid was constructed using standard quantification panel of HBV (Optiquant HBV, Acrometrix, Life Technologis, USA). The following PCR conditions were evaluated in real time PCR: DNA concentration (7.5 and 5 μL), annealing temperature (60° C and 62° C), number of cycles (cycles 40 and 45). The analytical sensitivity of real- time PCR was estimated at 10 HBV DNA copies/mL and the quantitation range comprised about 8 logs of 10. For quantification of HBV DNA in serum and oral fluid, it was necessary to increase the annealing temperature , and for oral fluid, it was also necessary to increase the concentration of DNA (7.5 μL) and the number of cycles (45). Among HBsAg reactive serum samples, 64 were quantif ied by commercial real time PCR and 28 by “in house” quantitative test, with mean v iral load equal to 3,993 ± 1,922 e 3,761± 1,829 log copies of HBV DNA/mL (r=0,7643; p< 0,0001), respectively, and concordance of 66.6%. Moreover, eight oral fluid sa mples were amplified by quantitative "in house" method, with average viral load equal to 4,459 ± 1,127 log copies of HBV DNA/mL (r=-0.2994, p=0,9453). The qualitative "in h ouse" PCR was able to detect HBV DNA in 50 HBsAg reactive serum samples, showing 75% of agreement with the commercial test (p=1.000), but only 1 oral fluid sa mple has been detected by this method. We concluded that the qualitative and quant itative methods for the detection of HBV DNA analyzed in this study presented good effic iency in serum samples, but they were not effective among oral fluid samples. These methodologies can be useful for molecular detection of HBV in areas with limited re sources

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.

Objetivo: O objetivo deste ensaio clínico duplo-cego randomizado e cruzado foi avaliar se a presença de álcool nas formulações de clorexidina e de óleos essenciais é capaz de influenciar significativamente a quantidade bacteriana em saliva, assim como verificar o impacto da presença do álcool sobre a percepção gustativa. Materiais e métodos: 20 indivíduos, 17 mulheres e 3 homens, com idades variando entre 18 a 38 anos, em bom estado de saúde, foram randomizados para bochechar de forma cruzada, as seguintes substâncias: gluconato de clorexidina com álcool, gluconato de clorexidina sem álcool, óleos essenciais com álcool e óleos essenciais sem álcool. Amostras de saliva estimulada foram colhidas antes e depois de cada bochecho e preparadas em meio de cultura viável para um amplo espectro de bactérias. Os resultados obtidos foram expressos em percentual de redução de UFC/ml de saliva. Uma escala visual analógica (EVA) foi usada para avaliar a percepção gustativa após cada bochecho Resultados: Não foram observadas diferenças significativas sobre o percentual de redução de bactérias salivares em relação às soluções de clorexidina (p = 0,55), ou de óleos essenciais (p = 0,85). Já a preferência gustativa em relação aos óleos essenciais foi fortemente afetada pela presença de álcool (p= 0,0001), o que não ocorreu na comparação entre as soluções de clorexidina (p=0,052). Conclusão: a presença do álcool não interfere na eficácia antimicrobiana de colutórios a base de clorexidina ou óleos essenciais. A presença de álcool nos óleos essências é avaliada de forma mais negativa em termos de percepção gustativ. / Objective: The objective of this randomized, double-blind crossover clinical trial was to evaluate the presence of alcohol in chlorhexidine and essential oils formulations is able to significantly influence the bacterial quantity in saliva, as well as to check the impact of the presence of alcohol on taste perception. Methods: 20 subjects, 17 women and three men, aged between 18 and 38 years old, in good health, were randomized to rinse crosswise, the following substances: chlorhexidine gluconate with alcohol, chlorhexidine gluconate without alcohol, essential oils with alcohol and essential oils without alcohol. Stimulated saliva samples were collected before and after each rinse and prepared in the midst of viable culture for a broad spectrum of bacteria. The results were expressed as percent reduction of CFU/ml saliva. A visual analogue scale (VAS) was used to evaluate the taste perception after each rinse Results: No statistically significant differences were observed in bacterial reduction between the Chlorhexidine (p = 0.55), as well as for the essential oils (p = 0.85) formulations. However, the taste preference in relation to essential oils was strongly affected by the presence of alcohol (p = 0.0001), which did not occur in the comparison between the chlorhexidine solutions (p = 0.052). Conclusion: The presence of alcohol does not interfere in the antimicrobial efficacy of chlorhexidine or essential oils. The presence of alcohol in the essences oils is evaluated more negatively in terms of taste perception.