Esta dissertação é constituída de dois artigos e teve como objetivo avaliar se o uso adicional de solução fluoretada para bochecho (SF) ao uso de dentifrício fluoretado (DF) é equivalente ao aumento da freqüência de aplicação do DF em relação (1) às mudanças clínicas na superfície do esmalte, na sua desmineralização e no seu conteúdo de flúor; (2) à concentração de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após os tratamentos. No primeiro artigo, quinze voluntários participaram de um estudo in situ, onde utilizaram dispositivos mandibulares contendo blocos de esmalte dental bovino. Durante os 3 períodos experimentais, de 14 dias cada, os espécimes foram expostos a um alto desafio cariogênico pelo gotejamento de solução de sacarose 20%, 8 vezes ao dia. O estudo teve um delineamento cruzado e os voluntários foram submetidos aos seguintes tratamentos: (T I) escovação com DF (1100 ppm F na forma de NaF) 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O + SF (225 ppm F na forma de NaF) 1x/dia; (T III) DF 3x/dia + H2O. Ao final deste período, os blocos foram removidos e avaliados em relação às mudanças nas características clínicas de superfície e submetidos às análises de microdureza superficial e transversal e do conteúdo de flúor no esmalte. De acordo com os resultados, o uso do DF 3x/dia foi o único tratamento que diferiu do uso do DF 2x/dia em relação às mudanças na superfície do esmalte e na sua desmineralização (p<0,05). Em relação ao conteúdo de flúor no esmalte, as diferenças entre os tratamentos não foram estatisticamente significativas (p>0,05). No segundo artigo, através de um estudo in vivo foram avaliadas as concentrações de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após o uso dos tratamentos. Quarenta voluntários foram submetidos a diferentes freqüências de uso de DF ou dentifrício placebo (DP) por 1 semana, seguido de enxágüe com água ou água e SF, de acordo com o delineamento cruzado, em 4 grupos de tratamento: (T I) DP 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O; (T III) DF 2x/dia + H2O + SF 1x/dia; (T IV) DF 3x/dia + H2O. Após cada período experimental, as amostras de saliva e biofilme dental foram coletadas para análise dos níveis de flúor. As concentrações de flúor nas amostras de saliva e biofilme dental não diferiram significativamente entre os tratamentos, assim como não diferiram do período livre de flúor (p>0,05). Podemos concluir em relação ao primeiro artigo que o aumento da freqüência de uso do DF pode substituir o uso adicional de SF aos procedimentos convencionais de escovação com DF. Em relação ao segundo artigo, os resultados sugerem que o uso do DF 2x/dia seguido por SF ou escovação extra com DF não aumenta a retenção de flúor na saliva e no biofilme dental após 8 horas. / This master thesis presents two articles aiming to assess whether the additional daily use of fluoride mouthrinse (FR) (225 ppm F as NaF) to the use of fluoride dentifrice (FD) (1100 ppm F as NaF) is equivalent to increase the FD application frequency (1) on enamel surface changes, demineralization and fluoride content; and (2) on the fluoride levels in saliva and dental biofilm samples 8 hours after treatments. In the first article, the subjects (15) used a mandibular appliance containing blocks of bovine enamel with microhardness determinated previously. During the three experimental phases, 14 days each, the specimens were exposed to a high cariogenic challenge from dripping 20% sucrose solution 8 times/day. The volunteers were submitted, under a crossover design, to 3 treatment groups: (T I) 2x/day FD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T III) 3x/day FD + H2O. At the end of each experimental phase, the enamel blocks were assessed with respect to surface clinical changes, surface and cross-sectional microhardness and total fluoride content. The 3x/day FD usage was the only treatment tested that differed from the conventional twice daily toothbrushing procedures on reducing enamel surface changes and demineralization (p<0.05). Regarding to the enamel fluoride content, the differences among treatments were not statistically significant (p>0.05). In the second article, the fluoride concentrations in saliva and dental biofilm 8 hours were analyzed after the use of treatments. The subjects (40) were submitted to different frequencies of use of FD or placebo dentrifice (PD) for 1 week to 4 treatment group: (T I) 2x/day PD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O; (T III) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T IV) 3x/day FD + H2O. After each experimental period, samples of saliva and dental biofilm were collected for fluoride levels analysis. Fluoride concentrations in saliva and dental biofilm did not differ statistically among treatments, as well as they did not differ from the F-free period (p>0.05).

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-01-28T12:51:50Z No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-02-07T09:50:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-07T09:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / A doença de Chagas, doença tropical negligenciada, tem como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi e como um dos principais vetores o triatomíneo hematófago Triatoma infestans. Em sua saliva é possível encontrar moléculas biologicamente ativas que viabilizam o repasto sanguíneo. Nesse trabalho, caracterizamos o peptidoma salivar do T. infestans, conjunto de peptídeos secretados na saliva com massa molecular menor que 10 kDa. A saliva secretada por T. infestans adultos foi coletada na ausência de inibidores de proteases. Após a quantificação, a integridade proteica das moléculas foi conferida por eletroforese unidimensional. Em seguida, por peptide mass fingerprinting, peptídeos com massa molecular de até 7.000 Da foram detectados na saliva. A saliva foi fracionada por centrifugação em microconcentradores com membrana de exclusão molecular de 10 kDa na presença de inibidores de proteases, gerando duas frações: 1) retida, contendo os polipeptídeos de massa molecular superior a 10 kDa; e 2) filtrada, contendo os peptídeos. A primeira foi analisada por gel eletroforético bidimensional e a segunda por nanoLC-MS/MS usando LTQ XL-Orbitrap (ThermoFisher Scientific), sem digestão tríptica in vitro. A análise por nanoLC-MS/MS foi repetida após digestão tríptica em solução e dessalinização em micro-coluna de C18. Ferramentas de bioinformática foram usadas para análise das sequências. No total, foram identificadas 234 proteínas. 164 foram encontradas na fração retida, sendo 130 com função já conhecida na alimentação sanguínea. Na fração filtrada, das 70 sequências identificadas, oito têm uma massa molecular predita < 10 kDa e as outras 62 são fragmentos da proteólise de proteínas maiores. Por análises de bioinformática, observamos que 171 das proteínas apresentam peptídeo sinal de via clássica de secreção, e as demais, com exceção de três, são preditas como secretadas por vias não clássicas. Para concluir, a primeira análise peptidômica da saliva de triatomíneo mostrou que a saliva de T. infestans é rica em peptídeos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chagas disease, a Neglected Tropical Disease, is caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi, which is transmitted by insect vectors. Triatoma infestans is one of the main vectors of the disease. As other disease vectors, it is a hematophagous insect. Feeding behavior implies the production of biologically active molecules in saliva capable of inhibiting hemostasis, inflammatory and immune responses. At the present study, we conducted a broad analysis of the proteome and peptidome, the latter comprises the set of peptides with a molecular weight under 10 kDa, of the saliva of T. infestans. Saliva was collected from insect adults in the absence of protease inhibitors. After protein quantification, the integrity of the proteins were analyzed by polyacrylamide-SDS gel electrophoresis. After that, by peptide mass fingerprinting, we detected peptides with molecular weight up to 7.000 Da. The saliva was then fractionated in the presence of a cocktail of protease inhibitors using a 10 kDa cut-off membrane. Two fractions were obtained: the retained (>10 kDa) and the filtrate (<10 kDa) fractions. The first was submitted to 2-DE electrophoresis, and the latter to nanoLC-MS/MS with reverse-phase high- performance liquid chromatography coupled with a high throughput LTQ XL- Orbitrap mass spectrometer (ThermoFisher Scientific), in the absence of tryptic digestion in vitro. The nanoLC-MS/MS analysis was repeated after in-solution tryptic digestion and desalinization in C18 microcolumn. A total of 234 proteins were identified. 164 proteins were found in the retained fraction, among which 130 have known functions. In the filtrate fraction, among 70 sequences identified, eight have predicted molecular weight lower than 10 kDa, and the other 62 were proteolytic fragments of higher molecular weight proteins. Bioinformatic analysis revealed that 171 proteins present signal peptides, three were not predicted to be secreted, and the other are secreted through non-classical pathways. In conclusion, the first peptidomic analysis of a triatomine bug saliva showed that T. infestans saliva is plenty of peptides.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Over the past few years, the involvement between oral pathogens and vascular disease has been investigated, with growing attention to the pathogenesis and progression of atherosclerosis. Oral bacteria have been detected in atherosclerotic plaques at a variable frequency; however, the connection between oral health and vascular and oral bacterial profiles of these patients is not clearly established. The aim of this study was to evaluate the presence of oral bacteria DNA in the mouth and atherosclerotic plaques, in addition to assess the patientâs caries and periodontal disease history. Thirty samples of supragingival and subgingival plaque, saliva and atherosclerotic plaques of 13 patients with carotid stenosis or aortic aneurysm were evaluated, through Real Time Polymerase Chain Reaction, for the presence/absence of Streptococcus mutans, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola. For edentulous patients, the variables of supragingival and subgingival plaques were not considered. All patients were submitted to oral exams using the DMTF (decayed, missing and filled teeth) and PSR (Periodontal Screening and Recording) indexes for dental and periodontal evaluation, respectively, and histopathological analysis of the atherosclerotic plaques was performed. Most of the patients were edentulous (76.9%). Streptococcus mutans, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola were detected in 100.0%, 92.0%, 15.3% and 30.7% of the oral samples, respectively. Streptococcus mutans was the most prevalent targeted bacteria in atherosclerotic plaques (p<0,05), detected in 100% of the samples, followed by Prevotella intermedia (7.1%), and the vascular samples were negative for Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola. There was a statistically significant difference (p<0,05) between the presence of Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola in the oral cavity and vascular samples. In conclusion, Streptococcus mutans was found at a high frequency in oral and vascular samples, even in edentulous patients, and its presence in atherosclerotic plaques suggests the possible involvement of this bacteria with the disease progression. / Nos Ãltimos anos, a relaÃÃo entre patÃgenos orais e doenÃa vascular tem sido investigada, com crescente atenÃÃo para a etiopatogÃnese e progressÃo da aterosclerose. BactÃrias orais tÃm sido detectadas em placas aterosclerÃticas, com variÃvel frequÃncia, porÃm, a relaÃÃo entre saÃde bucal e perfis bacterianos vasculares e orais dos pacientes nÃo està claramente estabelecida. Foi objetivo deste estudo avaliar a presenÃa de DNA de bactÃrias orais na boca e placas aterosclerÃticas, alÃm de avaliar histÃrico de cÃrie e doenÃa periodontal dos pacientes. Trinta amostras de placa dental supragengival, subgengival, saliva, e placas aterosclerÃticas de 13 pacientes com estenose de carÃtida ou aneurisma de aorta foram avaliadas, atravÃs de ReaÃÃo em Cadeia da Polimerase em Tempo Real, para presenÃa/ausÃncia de Streptococcus mutans, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis e Treponema denticola. Para pacientes desdentados totais, nÃo foram consideradas as variÃveis de placa supragengival e subgengival. Todos os pacientes foram submetidos a exames de CPO-D (dentes permanentes cariados, perdidos e obturados) e PSR (registro periodontal simplificado) para avaliaÃÃo dentÃria e periodontal, respectivamente, bem como anÃlise histopatolÃgica das placas aterosclerÃticas. A maioria dos pacientes eram edÃntulos (76,9%). Streptococcus mutans, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis e Treponema denticola foram detectados em 100,0%, 92,0%, 15,3% e 30,7% das amostras orais, respectivamente. O micro-organismo mais prevalente em placas aterosclerÃticas foi o Streptococcus mutans (p<0,05), presente em 100,0% das amostras, seguido de Prevotella intermedia (7,1%), e as amostras vasculares foram negativas para Porphyromonas gingivalis e Treponema denticola. Observou-se diferenÃa estatisticamente significante (p<0,05) com relaÃÃo à presenÃa de Porphyromonas gingivalis e Treponema denticola em cavidade oral e amostra vascular. Em conclusÃo, Streptococcus mutans foi encontrado em alta frequÃncia em amostras orais e vasculares, mesmo de pacientes desdentados, e sua presenÃa em placas aterosclerÃticas sugere o possÃvel envolvimento desse patÃgeno na progressÃo da doenÃa.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / X-linked hypophosphatemic rickets (XLHR) is the most common cause of heritable rickets, with an incidence of 1:20,000 live births, representing more than 80% of familial hypophosphatemic rickets. Saliva is the most easily available and accessible body fluid, which makes it one of the most sought after tools in diagnostic pathology. In this context, this thesis, constituted by 4 articles aimed to: (1) describe the main systemic manifestations, oral findings and dental management in 3 generations of an affected family; (2) analyze the mineralization pattern of enamel and dentin in patients affected by XLHR using micro-CT, and to associate enamel and dentin mineralization in primary and permanent teeth with tooth position, gender and presence/absence of this disease; (3) evaluate the peptide profile in the saliva of patients with X-linked hypophosphatemic rickets using high performance liquid chromatography; and (4) characterize salivary proteins in this condition using unidimensional electrophoresis. On study 1, oral exams, laboratorial and histologic evaluations, cone-beam computed tomographies, panoramic and periapical radiographs were performed to properly institute the most adequate treatment strategy. On study 2, teeth were collected from 5 individuals from the same family. Gender, age, tooth position (anterior/posterior) and tooth type (deciduous/permanent) were recorded for each patient. Following collection, teeth were placed in 0.1% thymol solution until Micro-CT scan. Projection images were reconstructed and analyzed. On study 3, unstimulated whole and stimulated parotid saliva were obtained from 8 individuals with (AFF) and 8 healthy individuals, both genders, without (CON) x-linked hypophosphatemic rickets aged from 8 to 66 years. Supernatants were analyzed by high performance liquid chromatography, and the salivary flow rate (ml/min) was calculated. Each major peak in the HPLC chromatogram of each sample was characterized. On study 4, unstimulated whole and stimulated parotid saliva were also obtained, being total protein concentration determined by the Bicinchoninic Acid Protein (BCA) method. Proteins were characterized according to their molecular weights within the unidimensional electrophoresis. The study 1 showed the importance of the knowledge of clinical signs and symptoms of XLHR for the correct diagnosis of this disease, and for the establishment of preventive and comprehensive dental care. On article 2, teeth of all affected patients presented dentin with a different mineralization pattern compared to the teeth of the healthy individual with dentin defects observed next to the pulp chambers. On the third article, whole and parotid salivary flows were significantly different (p = 0.001), being flow of whole saliva higher (0.518  0.282 mL/min) than parotid saliva (0.124  0.086 mL/min). Whole salivary flow rate was higher in the AFF group (0.698  0.229) than in the CON group (0.339  0.210 mL/min) (p = 0.006). Twenty-eight peaks were found in whole and 21 peaks in parotid saliva. Whole saliva of the CON group presented lower number of peaks than AFF group. In parotid saliva, peaks 17 and 28 (retention times: 24 and 39 min) were found exclusively in the AFF group, and peak 13 (retention time: 19 min) exclusively in the CON. Article 4 showed difference concerning to total protein concentration between whole and parotid saliva (p < 0.001), being higher concentration found in whole saliva (102.603  42.336 Âg/mL) than in parotid saliva (0.699  0.438 Âg/mL). Bands with 102 kDa, 48 kDa and 24 kDa presented higher intensity in whole saliva of CON group (p = 0.015, p = 0.043 and p = 0.022). In conclusion, XLHR patients presented specific characteristics in dentin mineralization and salivary proteins and peptides, which can lead to differentiate these patients from healthy individuals, improving the diagnostic field. / Raquitismo hipofosfatÃmico ligado ao cromossomo X (XLHR) à a maior causa de raquitismo hereditÃrio, com uma incidÃncia de 1:20.000 nascidos vivos, representando mais de 80% das formas de raquitismo hipofosfatÃmico familiar. A saliva à o fluido humano mais disponÃvel e de fÃcil acesso, o que faz dela uma das ferramentas mais pesquisadas no diagnÃstico de patologias. Nesse contexto, essa tese, constituÃda de 4 artigos objetivou: (1) descrever as principais manifestaÃÃes sistÃmicas, achados orais e tratamentos dentÃrios em 3 geraÃÃes de uma famÃlia afetada; (2) analisar o padrÃo de mineralizaÃÃo do esmalte e da dentina nos pacientes afetados por XLHR, utilizando microtomografia computadorizada (Micro CT), e associar a mineralizaÃÃo do esmalte e da dentina em dentes decÃduos e permanentes, segundo gÃnero e presenÃa/ausÃncia da doenÃa; (3) avaliar o perfil de peptÃdeos na saliva de pacientes com XLHR, utilizando cromatografia lÃquida de alta performance (HPLC); e (4) caracterizar proteÃnas salivares nessa condiÃÃo, utilizando eletroforese unidimensional. No estudo 1, exames orais, laboratoriais e avaliaÃÃes histolÃgicas, tomografias computadorizadas cone-beam e radiografias periapicais foram realizadas para a apropriada instituiÃÃo da estratÃgia de tratamento mais adequada. No estudo 2, dentes foram coletados de 5 indivÃduos de uma mesma famÃlia. GÃnero, idade, posiÃÃo dentÃria (anterior/posterior) e tipo dentÃrio (decÃduo/permanente) foram registrados para cada paciente. ApÃs a coleta, os dentes foram colocados em soluÃÃo de timol a 0,1% atà a anÃlise atravÃs do Micro CT. As imagens projetadas foram reconstruÃdas e analisadas. No estudo 3, saliva total nÃo estimulada e saliva de parÃtida estimulada foram obtidas de 8 indivÃduos afetados com (AFF) e 8 indivÃduos sem (CON) XLHR, de ambos os gÃneros e idades entre 8 e 66 anos. Sobrenadantes foram analisados por meio de HPLC e o fluxo salivar (mL/min) foi calculado. Os picos que se apresentaram maiores nos cromatogramas do HPLC foram caracterizados. No estudo 4, saliva total nÃo estimulada e saliva de parÃtida estimulada tambÃm foram obtidas, sendo a concentraÃÃo de proteÃnas totais determinada pelo MÃtodo do Ãcido BicinconÃnico (BCA). ProteÃnas foram caracterizadas de acordo com o peso molecular atravÃs de eletroforese unidimensional. O estudo 1 mostrou a importÃncia do conhecimento dos sinais e sintomas clÃnicos do XLHR para o correto diagnÃstico dessa doenÃa, e para o estabelecimento de atendimento odontolÃgico preventivo e abrangente. No artigo 2, os dentes de todos os pacientes afetados apresentaram dentina com padrÃo de mineralizaÃÃo diferente comparado aos dentes de indivÃduos saudÃveis, sendo os defeitos na dentina observados prÃximo Ãs cÃmaras pulpares. No artigo 3, os fluxos salivares da saliva total e de parÃtida foram significativamente diferentes (p=0,001), sendo o fluxo de saliva total maior (0,518  0,282 mL/min) do que o de saliva de parÃtida (0,124  0,086 mL/min). O fluxo salivar da saliva total foi maior no grupo AFF (0,698  0,229) que no grupo CON (0,339  0,210 mL/min) (p = 0,006). Vinte e oito picos foram encontrados em saliva total e 21 em saliva de parÃtida. A saliva total do grupo CON apresentou menor nÃmero de picos que a do grupo AFF. Na saliva de parÃtida, os picos 17 e 28 (tempos de retenÃÃo: 24 e 39 min) foram encontrados exclusivamente no grupo AFF e o pico 13 (tempo de retenÃÃo: 19 min) no CON. Artigo 4 demonstrou diferenÃa relacionada à concentraÃÃo de proteÃnas totais entre saliva total e de parÃtida (p < 0,001), sendo a maior concentraÃÃo encontrada na saliva total (102,603  42,336 Âg/mL) que na saliva de parÃtida (0,699  0,438 Âg/mL). Bandas com 102 kDa, 48 kDa e 24 kDa apresentaram maior intensidade na saliva total do grupo CON (p = 0,015, p = 0,043 e p = 0,022). Em conclusÃo, pacientes com XLHR apresentaram caracterÃsticas especÃficas relacionadas à mineralizaÃÃo dentinÃria e proteÃnas e peptÃdeos salivares que podem levar à diferenciaÃÃo desses pacientes de indivÃduos saudÃveis, avanÃando no campo diagnÃstico.

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

Esta dissertação é constituída de dois artigos e teve como objetivo avaliar se o uso adicional de solução fluoretada para bochecho (SF) ao uso de dentifrício fluoretado (DF) é equivalente ao aumento da freqüência de aplicação do DF em relação (1) às mudanças clínicas na superfície do esmalte, na sua desmineralização e no seu conteúdo de flúor; (2) à concentração de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após os tratamentos. No primeiro artigo, quinze voluntários participaram de um estudo in situ, onde utilizaram dispositivos mandibulares contendo blocos de esmalte dental bovino. Durante os 3 períodos experimentais, de 14 dias cada, os espécimes foram expostos a um alto desafio cariogênico pelo gotejamento de solução de sacarose 20%, 8 vezes ao dia. O estudo teve um delineamento cruzado e os voluntários foram submetidos aos seguintes tratamentos: (T I) escovação com DF (1100 ppm F na forma de NaF) 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O + SF (225 ppm F na forma de NaF) 1x/dia; (T III) DF 3x/dia + H2O. Ao final deste período, os blocos foram removidos e avaliados em relação às mudanças nas características clínicas de superfície e submetidos às análises de microdureza superficial e transversal e do conteúdo de flúor no esmalte. De acordo com os resultados, o uso do DF 3x/dia foi o único tratamento que diferiu do uso do DF 2x/dia em relação às mudanças na superfície do esmalte e na sua desmineralização (p<0,05). Em relação ao conteúdo de flúor no esmalte, as diferenças entre os tratamentos não foram estatisticamente significativas (p>0,05). No segundo artigo, através de um estudo in vivo foram avaliadas as concentrações de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após o uso dos tratamentos. Quarenta voluntários foram submetidos a diferentes freqüências de uso de DF ou dentifrício placebo (DP) por 1 semana, seguido de enxágüe com água ou água e SF, de acordo com o delineamento cruzado, em 4 grupos de tratamento: (T I) DP 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O; (T III) DF 2x/dia + H2O + SF 1x/dia; (T IV) DF 3x/dia + H2O. Após cada período experimental, as amostras de saliva e biofilme dental foram coletadas para análise dos níveis de flúor. As concentrações de flúor nas amostras de saliva e biofilme dental não diferiram significativamente entre os tratamentos, assim como não diferiram do período livre de flúor (p>0,05). Podemos concluir em relação ao primeiro artigo que o aumento da freqüência de uso do DF pode substituir o uso adicional de SF aos procedimentos convencionais de escovação com DF. Em relação ao segundo artigo, os resultados sugerem que o uso do DF 2x/dia seguido por SF ou escovação extra com DF não aumenta a retenção de flúor na saliva e no biofilme dental após 8 horas. / This master thesis presents two articles aiming to assess whether the additional daily use of fluoride mouthrinse (FR) (225 ppm F as NaF) to the use of fluoride dentifrice (FD) (1100 ppm F as NaF) is equivalent to increase the FD application frequency (1) on enamel surface changes, demineralization and fluoride content; and (2) on the fluoride levels in saliva and dental biofilm samples 8 hours after treatments. In the first article, the subjects (15) used a mandibular appliance containing blocks of bovine enamel with microhardness determinated previously. During the three experimental phases, 14 days each, the specimens were exposed to a high cariogenic challenge from dripping 20% sucrose solution 8 times/day. The volunteers were submitted, under a crossover design, to 3 treatment groups: (T I) 2x/day FD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T III) 3x/day FD + H2O. At the end of each experimental phase, the enamel blocks were assessed with respect to surface clinical changes, surface and cross-sectional microhardness and total fluoride content. The 3x/day FD usage was the only treatment tested that differed from the conventional twice daily toothbrushing procedures on reducing enamel surface changes and demineralization (p<0.05). Regarding to the enamel fluoride content, the differences among treatments were not statistically significant (p>0.05). In the second article, the fluoride concentrations in saliva and dental biofilm 8 hours were analyzed after the use of treatments. The subjects (40) were submitted to different frequencies of use of FD or placebo dentrifice (PD) for 1 week to 4 treatment group: (T I) 2x/day PD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O; (T III) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T IV) 3x/day FD + H2O. After each experimental period, samples of saliva and dental biofilm were collected for fluoride levels analysis. Fluoride concentrations in saliva and dental biofilm did not differ statistically among treatments, as well as they did not differ from the F-free period (p>0.05).

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury, Renata Cunha Matheus Rodrigues Garcia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_JulianaSilva_D.pdf: 1782557 bytes, checksum: 062461fb23404728637a2298815f99c6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do método de polimerização e a presença da saliva humana na aderência de Candida spp. às superfícies de resinas acrílicas. Duzentas e cinqüenta e seis amostras retangulares (2,5 x 1,2 x 0,2 cm), confeccionadas com resinas polimerizadas por banho de água ou microondas foram avaliadas para rugosidade e energia livre de superfície e em seguida utilizadas para o ensaio de aderência de Candida spp. Para este propósito, as amostras foram aleatoriamente divididas em 8 grupos por resina, sendo quatro expostos durante 30 min a saliva humana. Em seguida, as amostras foram posicionadas verticalmente em tubos de plásticos estéreis contendo meio de cultura Sabouraud e uma entre quatro suspensões de Candida: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida dubliniensis e Cândida glabrata (1 a 5 x 106 células / mL). A contagem das células aderidas foi realizada em microscópio óptico com 400 x de aumento. Os dados de rugosidade superficial e energia de superfície foram submetidos a ANOVA um fator e teste t. Não houve diferença estatística significante para rugosidade (p > 0,05), enquanto maiores valores de energia livre de superfície foram encontrados para a resina polimerizada por banho de água (p < 0,05). Para aderência de Cândida spp., os testes Wilcoxon-Mann-Whitney, Kruskal Wallis e Qui-quadrado demonstraram não haver influência dos valores de rugosidade e energia livre de superfície na aderência de Candida, enquanto houve uma diminuição geral na contagem de microrganismos em grupos expostos à saliva (p < 0,05). Concluiu-se que a saliva foi capaz de reduzir a aderência total de Candida, enquanto não houve correlação destes valores com rugosidade e energia de superfície / Abstract: The aim of this work was to evaluate the influence of polymerization methods and presence of human clarified saliva on Candida spp. adherence to acrylic resins surfaces. Two hundred and fifty six rectangular acrylic resins samples (2.5 x 1.2 x 0.2 cm) polymerized by water bath or microwave were evaluated for surface roughness and surface free energy and used in an adherence assay for Candida spp. For this purpose, acrylic samples were randomly divided into 8 groups for each resin, where 4 were exposed to saliva. For the adherence assay, the samples were placed vertically on test tubes containing yeast Sabouraud broth medium and one of the four Candida suspensions: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida dubliniensis and Candida glabrata (1 to 5 x 106 cells / mL). Adhered yeasts were counted using an optic microscope at 400 x. Data from surface roughness and surface free energy were submitted to one-way ANOVA ant t test and Candida spp. adherence values were evaluated by the Wilcoxon-Mann-Whitney, Kruskal Wallis and Chi-square tests. No statistical significance was found for roughness (p > 0.05), while higher surface free energy values were found for water bath resin (p < 0.05). Roughness and surface free energy did not influence Candida adherence, while saliva generally decreased yeast counts (p < 0.05). It was concluded that polymerization methods did not interfere with adherence assay while saliva was capable of reducing Candida spp. adherence, while roughness and free energy did not influence the adherence rates / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores: Carmino Antonio de Souza, Edwaldo Eduardo Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T07:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coracin_FabioLuiz_M.pdf: 1427829 bytes, checksum: a9936324f1a62db0882494a057af58af (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: As disfunções das glândulas salivares maiores (GSM) são conseqüências comuns do transplante de células progenitoras hematopoéticas (TCPH) e a secreção salivar pode apresentar redução durante o regime de condicionamento. Pode haver gradual recuperação do fluxo salivar alguns dias após o TCPH. As glândulas salivares maiores apresentam dificuldade no diagnóstico. A medicina nuclear é um método bem documentado, não invasivo, prático e dinâmico para avaliar a função das glândulas salivares individualmente. O pertecnetato-99mTc tem a capacidade de se acumular nas glândulas salivares e o gálio-67 é utilizado para localização de tumores ou processo inflamatório. Vinte pacientes submetidos ao TCPH alogênico foram arrolados neste estudo prospectivo entre Março de 2002 e Novembro de 2003. Foram avaliados antes e depois do TCPH, nos dias +30, +60 e +100. A captação e a eliminação do pertecnetato-99mTc não mostrou diferenças depois do TCPH comparado com o pré. As imagens com gálio-67 (67Ga) mostraram um aumento do infiltrado inflamatório no período pós TCPH. O fluxo salivar não estimulado não apresentou diferença estatística após o TCPH. Os resultados deste estudo sugerem um envolvimento das glândulas salivares maiores após o TCPH, principalmente nas glândulas submandibulares. Apesar do fluxo salivar não estimulado não ter apresentado diferença estatística durante o estudo, o infiltrado inflamatório pode ser persistente e pode ser responsável pela queixa de xerostomia / Abstract: Salivary gland dysfunction is a common sequel of the hematopoetic progenitor cell transplantation (HPCT) and salivary secretion substantially reduce during conditioning regimen. A gradual flow rate reconstitution could be detected few days after the HPCT. Major salivary glands play a difficult role to diagnosis. Nuclear medicine is a well-documented method and allows an objective, non-invasive and dynamically study of major salivary glands to access individual salivary glands function. Technetium-99mpertechnetate is able to uptake and wash out of salivary glands and 67Ga is used to trace tumors or inflammatory reaction. Twenty HPCT patients were enrolled in this prospective study between March 2002 and November 2003 and were evaluated prior HCPT and following at D+30, D+60 e D+100. Intake and clearance of 99mTc-pertechenate did not show any differences following BMT compared to prior. 67Ga scan showed an increase of inflammatory infiltration following HPCT. No statistically difference was seen in unstimulated salivary flow rate following HPCT. Results suggest an involvement of major salivary glands following HPCT, mainly in submandibular glands. Despite of salivary flow rate did not show any difference the inflammatory infiltrate may be persistent and may be responsible to complaint of dry mouth in these patients / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica