Orientador: Silvia Rodrigues Machado / Coorientador: Elza Maria Guimarães Santos / Banca: Tatiana Maria Rodrigues / Banca: Joecildo Francisco Rocha / Banca: Bárbara Sá Haiad / Banca: Anselmo Nogueira / Resumo: Coléteres são estruturas responsáveis pela secreção de substância mucilaginosa ou resinosa, geralmente associados com a proteção ao meristema e aos órgãos em desenvolvimento contra dessecação e danos por patógenos, herbívoros, e ainda, com a formação de nódulos bacterianos foliares. Compostos adicionais como alcaloides, compostos fenólicos e lipídios podem estar presentes na secreção dos coléteres. As variações na composição indicam especificidade na função e nos mecanismos subcelulares de síntese e liberação da secreção dos coléteres de diferentes espécies. Em Rubiaceae os coléteres variam quanto à morfologia podendo ser classificados como: padrão, padrão-reduzido, intermediário, filiforme, escova, dendroide e lacrimiforme. Neste estudo foram comparadas 17 espécies de Rubiaceae ocorrentes em cerrado e floresta estacional semidecídua. Foram avaliadas morfologia, distribuição e histoquímica dos coléteres estipulares usando microscopia óptica e eletrônica de varredura. Para avaliação dos mecanismos subcelulares das células secretoras dos coléteres, foram selecionadas oito espécies com coléteres padrão com variação na natureza da secreção, as quais foram submetidas a análises em microscópio eletrônico de transmissão com uso de técnicas convencionais e citoquímicas - ZIO para marcação do sistema de endomembranas, ósmio-imidazol para lipídios insaturados e Thiéry para polissacarídeos. Além disso, foi realizado acompanhamento in situ do microclima, período de brotamento de novas folhas e proporção de ápices danificados em ambos os ecossistemas ao longo de um ano. Dentre as 17 espécies estudadas, 14 apresentaram coléteres padrão com variação na distribuição e no tamanho. A secreção variou de predominantemente hidrofílica, mista ou predominantemente lipofílica. Esta variação refletiu em diferenças nas populações de organelas entre as espécies, principalmente,... / Abstract: Colleters are responsible for the secretion of mucilaginous or resinous substance, usually associated with the protection of the meristem and developing organs against desiccation and damage by pathogens, herbivores, and also with the formation of bacterial leaf nodes. Additional compounds such as alkaloids, lipids and phenolic compounds may be present in the secretion of colleters. Variations in the composition to indicate the specificity and subcellular mechanisms for synthesis and release of colleters secretion of different species. In Rubiaceae colleters can be classified as: standard, reduced standard, intermediate, brush-like, winged, filiform, dendroid and lacrimiforme. This study compared 17 species of Rubiaceae occurring in savanna and semi-deciduous forest. Were evaluated morphology, distribution and histochemistry of stipular colleters using optical and scanning electron microscopy. To evaluate the subcellular mechanisms of the secretory cells of colleters eight species were selected with standard colleters with variation in the nature of secretion, which were subjected to analysis in a transmission electron microscope using conventional and cytochemical techniques - ZIO for marking endomembrane systems, osmium-imidazole for unsaturated lipids and polysaccharides to Thiéry. Moreover, in situ monitoring was performed microclimate, budding period and proportion of new leaves damaged apices on both ecosystems throughout a year. Among the 17 species studied, 14 showed colleters standard with variation in the distribution and size. The secretion varied from predominantly hydrophilic, mixed to predominantly lipophilic. This secretion variation reflected in differences in the populations of organelles between species, mainly on the number and appearance of plastids, endoplasmic reticulum and dictyosomes including vesicles associated with these. Secretion accumulation sites were evident in the outer periclinal wall of epithelial ... / Doutor

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biologias, Programa de Pós Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-20T15:20:30Z No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / A secreção cutânea de anuros é reconhecida como uma rica fonte de compostos biologicamente ativos, incluindo aminas biogênicas, alcaloides, bufadienolídeos, peptídeos e proteínas. Os peptídeos antimicrobianos constituem um sistema de defesa imediato, atuando sobre um grande espectro de mircroorganismos. A busca por novas alternativas terapêuticas no tratamento de infecções e câncer tem impulsionado nos estudos voltados à prospecção de novos peptídeos antimicrobianos. No presente trabalho, as secreções cutâneas de Leptodactylus labyrinthicus e Phyllomedusa azurea foram utilizadas para avaliar seus efeitos antiproliferativos e citotóxicos sobre células tumorais. Também foram submetidas a fracionamento cromatográfico a fim de se isolar peptídeos com atividade inibitória sobre a proliferação do fungo patogênico Candida albicans. As frações bioativas foram analisadas por MALDI-TOF MS e submetidas à recromatografia por RP-HPLC. De acordo com a estratégia experimental empregada foi possível a obtenção de duas frações homogêneas a partir da secreção de P. azurea, denominadas PaF31-7(F12) e PaF36-10(F13) que foram empregadas na determinação dos MICs para C. albicans. Tais frações mostraram-se capazes de inibir parcialmente o crescimento da levedura C. albicans na maior concentração empregada (128 µM). Também foram avaliados os efeitos citotóxicos e antiproliferativos das secreções brutas de P. azurea e L. labyrinthicus sobre as linhagens celulares HeLa, B16F10 e NIH3T3. Observou-se que a secreção bruta de L. labyrinthicus apresenta atividade antiproliferativa acentuada sobre células tumorais empregadas, especialmente células Hela, com um IC50 de 4,216 µg/mL sem apresentar citotoxicidade relevante contra células normais da linhagem NIH3T3. Ensaios adicionais de citometria de fluxo revelaram que a secreção bruta de L. labyrinthicus não interfere de forma significativa nas etapas do ciclo celular, no entanto, observa-se um aumento importante na fragmentação do DNA de células HeLa quando expostas à secreção, sugerindo que a morte celular ocorra por meio de apoptose. Mais estudos precisam ser realizados a fim de se determinar o mecanismo pelo qual a secreção bruta de L. labyrinthicus promove a morte das células tumorais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The anurans skin secretion is recognized as a rich source of active biological compounds, including alkaloids, peptides and proteins. The antimicrobial peptides constitute an immediate defense system, acting on a wide spectrum of microorganisms. The quest for new therapeutics alternatives for infections treatments and cancer have been driven studies focused on prospecting for new antimicrobial peptides. In this present work, the skin secretions by Leptodactylus labyrinthicus and Phillomedusa azurea were utilized for evaluating their antiproliferative and cytotoxic effects on tumor cells. Were also subjected the skin secretion to fractionation in order to isolate peptides with inhibitory activity on the proliferation of the pathogenic fungus Candida albicans. The bioactive fractions were analyzed by MALDI-TOF MS, and subjected to rechromatography by RP-HPLC. According to the experimental strategy used was possible to achieve two homogeneous fractions secretion from P. azurea, called PaF31 7 (F12) and PaF36 10 (F13). These fractions were capable of partially inhibiting the growth of the yeast C. albicans in greater concentration employed (128 μM). We also evaluated the cytotoxic and antiproliferative crude secretions of P. azurea and L. labyrinthicus on cell lines HeLa, NIH3T3 and B16F10 effects. It was found that the crude secretion of L. labyrinthicus shows marked antiproliferative activity on tumor cells employed, especially Hela cells with an IC50 of 4.216 μ g / ml without showing significant cytotoxicity against normal NIH3T3 cells lineage. Additional tests of flow cytometry showed that the crude secretion of L. labyrinthicus not significantly interfere with the stages of the cell cycle, however, there was a significant increase in DNA fragmentation in HeLa cells exposed to secretion, suggesting that cell death occurs by apoptosis. More studies need to be conducted to determine the mechanism by which the crude secretion of L. labyrinthicus promotes tumor cell death.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-05T17:40:23Z No. of bitstreams: 1 2009_CarlaTatianadeMirandaHonorato.pdf: 1189980 bytes, checksum: 080332f15aa1d206d495e2b3ce7e77a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2010-03-08T13:53:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_CarlaTatianadeMirandaHonorato.pdf: 1189980 bytes, checksum: 080332f15aa1d206d495e2b3ce7e77a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-08T13:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_CarlaTatianadeMirandaHonorato.pdf: 1189980 bytes, checksum: 080332f15aa1d206d495e2b3ce7e77a4 (MD5) Previous issue date: 2009 / As secreções cutâneas dos anfíbios são reconhecidas como uma rica fonte de peptídeos biologicamente ativos há bastante tempo. Devido as suas propriedades antimicrobianas e ao seu mecanismo de ação que independe da interação com um receptor específico, cada vez mais, os peptídeos isolados dessas secreções vêm sendo considerados como uma opção alternativa aos antibióticos disponíveis comercialmente. Muitas linhagens bacterianas têm apresentado resistência a tais drogas e o fato dos peptídeos antimicrobianos de anuros estarem disponíveis em quantidades satisfatórias na natureza tem facilitado a pesquisa nessa área. O presente estudo teve como objetivo geral proceder à análise peptidômica da secreção cutânea do anuro Eupemphix nattereri com ênfase na prospecção de peptídeos antimicrobianos para aplicações terapêuticas. Como resultados do presente estudo, foram isolados e caracterizados três peptídeos antimicrobianos, denominados nattererinas. As nattererinas identificadas foram sintetizadas quimicamente e apresentaram atividade citolítica contra bactérias Gram positivas e Gram-negativas e baixa atividade hemolítica. Dentre suas propriedades estruturais, podemos ressaltar tratar-se de peptídeos catiônicos (com 30 resíduos de aminoácidos) que adquirem conformação em α-hélice na presença de TFE 50% (v/v). A pesquisa nessa área é de extrema importância, visto que a caracterização dos componentes presentes na secreção cutânea de anuros pode ajudar em identificações taxonômicas, bem como, fomentar a indústria farmacêutica com modelos para o desenho de novas drogas terapêuticas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Amphibian skin secretions have been knowledge as a rich source of antimicrobial peptides for a long time. The outcome of antibiotic resistant bacterial species is an increasing problem, which encourages the search of new compounds in nature, for example, over anurans’ skin secretion. Due to its antimicrobial properties and mechanism of action, which is independent of specific receptors, these peptides have been considered as an alternative to the available antibiotics. The present study describes peptidômica analysis of the cutaneous secretion from the frog Eupemphix nattereri, focusing on antimicrobial peptides. As results of the present work, three antimicrobial peptides, named nattererins, were isolated and characterized. The identified nattererins were synthesized and tested against Gram-positive and Gram-negatives bacteria showing antimicrobial activity and low hemolytic activity. Nattererins are cationic peptides (30 amino acid residues long) and adopt an α-helical conformation in the presence of TFE 50% (v/v). Regarding the obtained results, naturally occurring bioactive peptides from amphibian skin can be a source of pharmaceutically interesting compounds, which endorses a higher investment in this kind of study. In addition, these peptides also can help in the taxonomy of anurans species.

Orientador: Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_ClaudioTeodorode_D.pdf: 4471060 bytes, checksum: dd3735f8ba5c9ced50fdeab6a4bf2faa (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Diabetes melhtus tipo 2 é uma doença de etiologia multifatorial que resulta da confluência de pelo maios dois fenômenos distintos, resistência à ação e falência na produção de insulina. Evidências recentes tem sugerido que mecanismos comuns podem participar dos eventos que precipitam o desenvolvimento tanto da resistência à insulina quanto da falência da célula beta pancreática. A caracterização destes eventos pode abrir perspectivas para abordagens terapêuticas unificadas visando corrigir simultaneamente os dois mais importantes distúrbios que participam da gênese desta doença. A proteína co-ativador la do receptor ativado por prolíferador de peroxissoma, ou PGC-la, cumpre alguns requisitos que permitem sua inclusão numa lista de possíveis participantes nos mecanismos acima expostos. Para avaliar o papel desta proteína na produção e na ação periférica da insulina, utilizou-se um oligonucleotídeo antisense capaz de reduzir significativamente a expressão da PGC-la. Através deste método observou-se que a PGC- la responde a estímulos simpáticos que promovem a inibição da secreção de insulina. Tais estímulos induzem o aumento da expressão desta proteína que por sua vez leva a um aumento da expressão da proteína desacopladora-2 (UCP-2) em ilhotas pancreáticas. O desacoplamento da respiração mitocondrial deve favorecer a redução da produção de ATP decorrente do metabolismo da glicose e desta forma reduzir a secreção de insulina. Por outro lado, em um modelo animal de obesidade e diabetes induzido por dieta hiperüpídica observou-se um aumento da expressão da PGC-la em fígado e tecido adiposo. A inibição da expressão da PGC-la nestes animais promoveu restauração da homeostase da glicose, aumento da secreção de insulina, melhora na sinalização de insulina em tecidos periféricos e surpreendentemente, regressão da esteatose hepática induzida por dieta. Portanto, a proteína PGC-la surge como promissor alvo para abordagem terapêutica em diabetes mellitus e doenças afins / Abstract: Type 2 diabetes mellitus is a multifactorial disease that results from the confluence of at least two distinct events, insulin resistance and failure of the pancreatic beta cell. Recent evidences suggest that common mechanisms may participate in the events that precipitate the development of both insulin resistance and beta cell disarrangement. The characterization of such events may offer new perspectives for a unified therapeutic approach for diabetes. The protein PGC-la fulfills some of the requirements to be included in a list of potential candidates for playing a role in the genesis of both the main mechanisms involved in the development of diabetes. To evaluate the role of this protein in the production and action of insulin we employed an antisense oligonucleotide to PGC-la, which is capable of significantly reducing the expression of this protein. Through this approach it was observed that PGC-la responds to sympathetic stimuli mat inhibit insulin secretion. Such stimuli induce the expression of PGC-la and subsequently of the uncoupling protein-2 (UCP-2). Once induced UCP-2 favors a reduction of ATP production from glucose metabolism and therefore reduces insulin secretion. In addition, the expression of PGC-la was increased in liver and adipose tissue of an animal model of diet-induced obesity and diabetes. The inhibition of PGC-la promoted an increase of insulin secretion, an increase of peripheral insulin action, an improvement of insulin signal transduction and, surprisingly the reversal of diet-induced hepatic steatosis. Thus, PGC-la appears as an attractive potential target for therapeutics in diabetes and related diseases / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Helena Coutinho Franco de Oliveira, Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonfleur_MariaLucia_D.pdf: 1633140 bytes, checksum: 765548b2268a05188490bc90cf1939b8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Neste trabalho, investigamos se a hipercolesterolemia primária per se, independente de dieta rica em gordura, afeta a homeostase glicêmica e a secreção de insulina estimulada por vários secretagogos em animais knockout para o receptor de LDL (LDLR-/-). Além disso, investigamos os possíveis mecanismos envolvidos na liberação deste hormônio neste modelo animal. Podemos resumir nossos achados da seguinte maneira: camundongos LDLR-/- apresentam hiperglicemia pós-prandial, hipoinsulinemia, intolerância à glicose e sensibilidade periférica à insulina normal. Nós demonstramos que, as alterações na homeostase glicêmica ocorrem em parte, por uma diminuição da sensibilidade das ilhotas à glicose. A secreção de insulina é normal na presença de baixa concentração de glicose, entretanto na presença de 11,1 mmol/l, as ilhotas de animais LDLR-/- liberam menos insulina que as ilhotas controles. A secreção de insulina estimulada por outros secretagogos metabolizáveis (leucina e KIC) também está reduzida nas ilhotas dos animais knockout. O conteúdo total de insulina e DNA são similares entre os grupos, sugerindo que as alterações na secreção de insulina não ocorrem devido a diferenças no tamanho e/ou número de células b. Observamos uma redução na primeira e segunda fase de secreção de insulina estimulada por 11,1 mmol/l de glicose. A oxidação da glicose está reduzida, enquanto a metabolização da leucina está aumentada. Quando adicionamos agentes despolarizantes (KCl, Arginina e Tolbutamida), observamos uma redução da secreção de insulina tanto em concentrações basais quanto estimulatórias de glicose. Na presença de 11,1 mmol/l de glicose e carbacol (agonista colinérgico) ou PMA (ativador da proteína-quinase C), a secreção de insulina foi semelhante entre os grupos LDLR- /- e controles. Entretanto, quando estimulamos a secreção com forskolin ou IBMX, que aumentam os níveis de AMPc, observamos redução na liberação de insulina pelas ilhotas dos animais LDLR-/- em comparação com os controles. A expressão protéica da fosfolipase C (PLCb2) está aumentada enquanto que a expressão da proteína-quinase A (PKA) está reduzida nas ilhotas dos animais LDLR-/-. Assim, observamos que camundongos LDLR-/- apresentam alterações na homeostase glicêmica independente de dieta rica em gordura, provocada por redução na secreção de insulina devido, em parte à redução do metabolismo da glicose, bem como, redução na expressão da PKA / Abstract: In this work, we investigated whether primary hyperlipidemia per se, independently of a high-fat diet, affects glycemia and insulin secretion stimulated by several secretagogues in hypercholesterolemic low-density lipoprotein receptor knockout mice (LDLR-/-). In addition, we investigated the possible mechanisms involved in the release of this hormone. We found that, besides higher total cholesterol and triglyceride plasma concentrations, glucose plasma levels were increased and insulin decreased in LDLR-/- compared to the wild type (WT) mice. LDLR-/- mice presented impaired glucose tolerance, but normal whole body insulin sensitivity. In addition, we also demonstrate that the main cause of the impaired glucose homeostasis is a reduced pancreatic islet insulin secretion ability following fuel secretagogue stimuli. LDLR-/- mice have impaired insulin secretion in response to glucose without alterations in the pancreatic total insulin and DNA contents. These findings support the idea that the decreased response to glucose cannot be explained by differences islet size or number of beta cells, but it is probably caused by a defect in the secretory process. Glucose oxidation was 30% lower and L-leucine oxidation 60% higher in LDLR-/- islets than in WT islets. At basal (2.8 mmol/l) and stimulatory (11.1 mmol/l) glucose concentrations, the insulin secretion rates induced by depolarizing agents such as KCl, L-arginine and tolbutamide were significantly reduced in LDLR-/- when compared with WT islets. Insulin secretion induced by the PKA activators, forskolin and IBMX, in the presence of 11.1 mmol/l glucose, was lower in LDLR-/- islets, and it was normalized in the presence of the PKC pathway activators, carbachol and PMA. Western blotting analysis showed that phospholipase C-b2 expression was increased and PKA-a decreased in LDLR-/- compared with WT islets. In conclusion, we demonstrate that genetic hypercholesterolemia, due to complete deficiency of LDLR, impairs the beta cell insulin secretion, leading to hyperglycemia without affecting body insulin sensitivity. The lower insulin secretion in LDLR-/- mice islets may be explained by reduced glucose metabolism and expression of PKA / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-15T20:20:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Andrezza Miná Barbosa.pdf: 3904234 bytes, checksum: 41d632827153f290e67ab2e51e20b09f (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T18:15:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Andrezza Miná Barbosa.pdf: 3904234 bytes, checksum: 41d632827153f290e67ab2e51e20b09f (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T18:22:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Andrezza Miná Barbosa.pdf: 3904234 bytes, checksum: 41d632827153f290e67ab2e51e20b09f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-16T18:22:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Andrezza Miná Barbosa.pdf: 3904234 bytes, checksum: 41d632827153f290e67ab2e51e20b09f (MD5) Previous issue date: 2012-06-28 / Não Informada / Picrolemma sprucei (Simaroubaceae) known as caferana, is widely distributed in the Amazonian Region. The tea of the leaves and the roots is used to treatgastritis, fever, as anti-helminthic and as anti-malarial. Considering the ethnobotanical information and the small numbers of works with proven activities, this work proposes a pharmacological study with a standardized extract obtained from the plant leaves on behavior and vital functions in rodents, and also to analyze the molecular mechanisms responsible for the observed effects. The plant leaves were collected in Manaus/AM, dried in the shade and ground. The aqueous extract (AE) was obtained from the leaves infusion (2.5%), yielding 15%, and the butanolic fraction (BuF) was obtained from the AE partition with butanol. The BuF purification in HPLC yielded 4 fractions with RTs: F1=5,4 to12 min, F2 =12,1 to 19 min, F3=19,1 to 27,7 min; F4= 27,8 to 38 min. The oral administration of AE or BuF (1,0 g/kg) was lethal within 24 h. The treatment with AE (0,1 to 1,0 g/kg, p.o.) caused hypothermia and reduced the cold stress-induced gastric ulcers in mice. The AE, BuF and F4 inhibited the gastric acid secretion in rats with pylorus ligation. However, the AE (1 to 300 µg/mL) did not inhibit the H+-K+-ATPase pump in vitro. In anesthetized rats, the BuF (3 mg/kg, e.v.) produced a double depression on the arterial blood pressure (BP) and on the heart rate (HR): the doseof 3.0 mg/kg reduced the BP by 22 mm Hg and the HR by 20 bpm with the maximal effect after 1,5 min and reversion in 5 minutes; this effect was followed by late long lasting hypotension (90 mm Hg), concomitant to a HR decrease. Vagotomy or atropine (0.1 mg/kg e.v.) blocked the later effects on BP and on HR. The fractions F1 (0.2 to 5.4 mg/kg, e.v.) and F3 (0.3 to 2.4 mg/kg, e.v.) caused hypotension (5 to 40 mm Hg) related to the doses. The BuF (10 to 100 µg/mL) inhibited the spontaneous beats of the isolated rat right atrium without altering the BuF inotropic effect in the isolated left atrium. In aorta rings with intact endothelium, the tonus induced by noradrenalin was relaxed with BuF incubation. This effect was not abolished by the endothelium mechanicaldestruction, indicating a NO sintase independent mechanism of action. The AE and the BuF oral administration were lethal at the highest dose; the F4 fraction was identified as the lethal fraction of BuF. The toxic effect of AE and BuF was delayed on time and probably unrelated to the original plant extract, but to compounds produced during their liver metabolism. / Picrolemma sprucei (Simaroubaceae) conhecida como caferana, é amplamente distribuída na Região Amazônica. Ochá das folhas e das raízes é utilizado no tratamento de gastrite, como febrífugo, anti-helmíntico e antimalárico. Considerando as informações etnobotânicas existentes, e o pequeno número de atividades comprovadas, este trabalho propõe a realização de estudos farmacológicos com um extrato padronizado de folhas de caferana no comportamento e funções vitais de roedores, como também analisar os mecanismos moleculares responsáveis pelos efeitos observados.Folhas foram coletadas em Manaus/AM, secas à sombra e trituradas. Infusão a 2,5% originou o extrato aquoso (EA) que rendeu 15% e a fração butanólica (FBut) foi gerada pela partição do EA com n-butanol. A purificação da FBut em CLAE originou 4 frações com TRs: F1=5,4a12 min, F2 =12,1a 19 min, F3=19,1a 27,7 min; F4= 27,8a 38 min. A administração oral do EA e da FBut (1,0 g/kg) foi letal. Com o EA (0,1 a 1,0 g/kg, v.o.) os animais apresentaram hipotermia, eas lesões da mucosa gástrica desencadeadas por estresse a frio em camundongosforam reduzidas. O EA, a FBut e a fração F4 inibiram a secreção ácida gástrica em ratas com ligadura pilórica. No entanto, o EA (1 a 300 µg/mL) não inibiu a atividade da H+-K+-ATPase. Em ratas anestesiadas aFBut (3 mg/kg, e.v.) produziu efeito duplo na pressão arterial (PA) e na frequência cardíaca (FC):a injeção de3,0 mg/kg reduziu a PA de 22 mmHg e a FCde 20 bpm com pico máximo após 1,5 min e reversão em 5 min;este efeito foi seguido de hipotensão maior (90 mmHg), mais tardia (4,5 min) e duradoura, concomitante à diminuição da FC. A vagotomia, ou a administração de atropina, bloquearam os efeitos tardios na PAe na FC. As frações F1 (0,2 a 5,4 mg/kg, e.v.) e F3 (0,3 a 2,4 mg/kg, e.v.) da FBut produziram hipotensão (5 a 40 mm Hg) proporcional às doses. A FBut (10 a 100 µg/mL) diminuiu a frequência de batimentos espontâneos do átrio direito isolado de rato, sem alteração do inotropismo do átrio esquerdo. O tônus induzido pela noradrenalina em anéis de aorta de rato com endotélio foi relaxado com a adição de FBut. Este efeito não foi abolido pela destruição mecânica do endotélio, indicando um mecanismo de ação independente da síntese de NO. O EA e a FBut por via oral foram letais na maior dose, a F4 foi a fração identificada com o poder letal. O efeito tóxico foi tardio e provavelmente relacionado a atividade decompostos originados do metabolismo hepático.

A rota de biossíntese de colesterol tem sido estudada pelo seu envolvimento com a secreção de hormônios. A secreção de insulina depende do colesterol e de intermediários da sua biossíntese como o geranilgeranil pirofosfato. Para compreender a contribuição destes elementos na secreção de insulina foram utilizados inibidores de diferentes pontos da rota de biossíntese do colesterol. Estudou-se a contribuição do geranilgeranil pirofosfato e do colesterol na secreção de insulina estimulada pela glicose e analisados parâmetros físicos de membrana dos quais decorrem aspectos funcionais da célula beta. Sinvastatina inibiu a secreção de insulina sem afetar o conteúdo celular de colesterol, mas inibindo a geranilgeranilação de proteínas. A diminuição do conteúdo de colesterol aumenta a fluidez de membrana desorganizando lipid rafts. A suplementação com colesterol recupera a função secretória. Por tanto, a inibição da síntese de colesterol diminui a secreção de insulina através da redução da isoprenilação de proteínas e da alteração estrutural de membranas celulares. / Cholesterol biosynthesis pathway has been studied for its involvement with the hormone secretion process. Insulin secretion depends on cholesterol and its biosynthesis intermediates such as geranylgeranyl pyrophosphate. For understand their contribution on the glucose stimulated insulin secretion, cholesterol biosynthesis pathway key steps inhibitors were used. The geranylgeranyl pyrophosphate and cholesterol contribution to the insulin secretion was studied so as physical parameters of the membrane, from where derive key functions of it. Simvastatin inhibited insulin secretion without affecting total cellular cholesterol, but inhibiting protein geranylgeranylation. The cholesterol reduction increased the membrane fluidity with consequent disorganization of membrane lipid rafts, in which secretion machinery is organized. Cholesterol supplementation recovers cellular secretory function. We conclude that cholesterol biosynthesis inhibition reduces insulin secretion through protein isoprenylation impairment and structural disarrangement of the cellular membranes.

Orientador: Everardo Magalhães Carneiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:27:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borck_PatriciaCristine_M.pdf: 1384245 bytes, checksum: 89fa526347ae455e0cfcf6e3bd414018 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os processos fisiológicos como ciclo sono-vigília e o metabolismo estão sujeitos a oscilações circadianas e são regulados por um conjunto de genes conhecidos como genes do relógio, ou clock genes. Mutação nesses genes em camundongos reduz a secreção de insulina e a proliferação das células ? pancreáticas promovendo intolerância a glicose e hiperglicemia. Distúrbios nutricionais em fases iniciais da vida estão associados com o aparecimento do Diabetes Mellitus tipo 2 na vida adulta. Camundongos submetidos a restrição proteica intrauterina apresentam expressão alterada dos clock genes e maior suscetibilidade ao ganho de peso e intolerância a glicose. Neste trabalho tivemos como objetivo determinar a expressão diária dos clock genes em tecidos periféricos, hipotálamo e ilhotas pancreáticas de camundongos submetidos a restrição proteica. Avaliamos também o perfil oscilatório da secreção de insulina estimulada por glicose e pelo agonista colinérgico carbacol nesse modelo animal. Camundongos submetidos a restrição proteica (R) apresentaram características típicas de desnutrição como menor peso corpóreo, hipoinsulinemia, hipoproteinemia e maior tolerância a glicose e a insulina. Camundongos R apresentaram maior consumo alimentar, acompanhado de alterações no perfil oscilatório de genes hipotalâmicos Pomc (Pro-opiomelanocortina) e Npy (Neuropeptídeo Y). Nesse tecido, somente o gene do relógio Rev-erb? teve sua expressão influenciada pela restrição proteica. Camundongos R apresentaram, no fígado e músculo perda do perfil oscilatório para os genes Bmal1 e Clock. Ainda, no fígado e ilhotas pancreáticas a expressão de Rev-erb? foi alterada, com redução no conteúdo de mRNA. Em relação ao gene Per1, camundongos R exibiram adiantamento na expressão desse gene no tecido adiposo. No músculo e ilhotas houve perda da oscilação diária para esse gene. Camundongos R exibiram, no músculo e tecido adiposo, adiantamento na expressão do gene Per2. Ilhotas isoladas de camundongos controle (C) apresentaram padrão oscilatório de secreção de insulina sendo os maiores níveis atingido nos ZT 2 e 14 e redução no ZT 8. Contudo, camundongos R apresentaram redução na secreção de insulina estimulada por glicose, e perda do seu perfil oscilatório. O grupo R não apresentou alteração na liberação de insulina na presença do agonista e antagonista de Rev-erb?. Além disso, a expressão dos genes Sintaxina, Sinaptotagmina, e Insulina, estão reduzidos em camundongos R. O grupo R também apresentou perda oscilatória da secreção de insulina na presença de glicose associada ao Carbacol e redução na expressão do Receptor Muscarínico de Acetilcolina. Com os presentes resultados podemos concluir que camundongos submetidos a restrição proteica apresentaram características típicas de desnutrição com alteração na homeostase glicêmica e secreção de insulina. Ademais, camundongos R exibiram perda do perfil de secreção desse hormônio ao longo de 24 horas, o qual está relacionado com as alterações na expressão de Rev-erb?. Além disso, houve alteração no perfil de expressão dos genes clock, em especial Rev-erb?, Per1 e Per2 nos tecidos periféricos, fato que pode estar relacionado com as alterações na tolerância a glicose e insulina em camundongos R / Abstract: The physiological processes such as sleep-wake cycle and metabolism are subject to circadian fluctuations and are regulated by a group of genes known as clock genes or genes clock. Mutations in these genes in mice reduces insulin secretion and ?-pancreatic cell proliferation promoting impaired glucose tolerance and hyperglycemia. Nutritional disorders in the early stages of life are associated with the onset of type 2 diabetes in adulthood. Mice subjected to intrauterine protein restriction have altered expression of clock genes and increased susceptibility to weight gain and glucose intolerance. In this study we aimed to determine the daily expression of clock genes in peripheral tissues, hypothalamus and pancreatic islets of mice subjected to protein restriction. We also evaluated the oscillatory profile of the glucose stimulated insulin secretion and the cholinergic agonist carbachol in this animal model. Mice subjected to protein restriction (R) showed typical features of malnutrition as lower body weight , hypoinsulinemia , hypoproteinemia and increased glucose tolerance and insulin. R mice had higher food consumption, accompanied by changes in the oscillatory profile to Pomc and Npy gene in the hypothalamus. In this tissue, only the expression Rev- erb? gene was influenced by protein restriction. Mice R showed in the liver and muscle loss of the oscillatory profile to Clock and Bmal1 gene. Still, in liver and pancreatic islets the expression of Rev- erb? was changed, with reduction in mRNA content. Regarding the Per1 gene, R mice exhibited advance in the expression of this gene in adipose tissue. In muscle and islets there was loss of daily fluctuation for this gene. R mice exhibited, muscle and adipose tissue, in advance of Per2 gene expression. Islets isolated from control mice (C) showed oscillatory pattern of insulin secretion with the highest levels attained in the ZT 2 e 14 and reduction in the ZT 8. However, R mice had reduced glucose stimulated insulin secretion and loss of its oscillatory profile. R group showed no change in insulin release in the presence of Rev- erb? agonist and antagonist. Furthermore, the expression of Syntaxin, Synaptotagmin, and Insulin genes are reduced in R mice. R group also exhibited oscillatory loss of insulin secretion in the presence of glucose linked Carbachol and the reduction in the expression of Muscarinic Acetylcholine Receptor. With these results we can conclude that mice subjected to protein restriction showed typical features of malnutrition with alterations in glucose homeostasis and insulin secretion. Moreover, R mice exhibited loss of secretion of this hormone profile over 24 hours, which is associated with changes in the expression of Rev- erb?. In addition, there were changes in expression profile of clock genes, especially Rev-erb?, Per1 and Per2 in peripheral tissues, which may be related to changes in glucose tolerance and insulin in R mice / Mestrado / Fisiologia / Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Everardo Magalhães Carneiro, Rosane Aparecida Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T08:39:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vettorazzi_JeanFranciesco_M.pdf: 1578894 bytes, checksum: 8f7aa3029a184083fe57d566c9524755 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: No acoplamento estímulo/secreção das células ?, os canais de K+ sensíveis ao ATP (KATP) e os canais de Ca2+ sensíveis à voltagem (Cav) contribuem para a geração e sustentação do potencial de ação. Alterações na sua expressão/atividade resultam em prejuízos na secreção de insulina. A restrição protéica e dieta hiperlipídica alteram o fluxo iônico e secreção de insulina nas células ?, e o aminoácido taurina (Tau) regula o fluxo iônico. O objetivo desse estudo foi caracterizar a expressão e o funcionamento dos KATP e Cav, assim como proteínas de extrusão dos grânulos de insulina em ilhotas pancreáticas de camundongos desnutridos alimentados com dieta hiperlipídica e suplementados com Tau. Camundongos machos C57Bl/6J receberam dieta controle (C) ou dieta lipoproteica (R) por 6 semanas. Em sequência metade desses grupos foi alimentados por 8 semanas com dieta hiperlipídica sem (CH e RH) ou com suplementação de 5% de Tau (CHT e RHT). Foi verificado que camundongos R tiveram menor crescimento e desenvolvimento dos órgãos. Camundongos RH e CH apresentaram aumento de peso corporal e estoques de gordura, hipercolesterolemia, intolerância à glicose e resistência à insulina. A suplementação com Tau preveniu o acúmulo de gordura e prejuízos na homeostase da glicose apenas no grupo CHT. Ilhotas isoladas de camundongos R secretaram menos insulina em resposta a 2,8 mM ou 11,1mM de glicose em associação com 30 mM de K+ ou 100 ?M de tolbutamida (Tolb). O influxo de Ca2+ em resposta à Tolb não diferiu entre ilhotas R e C. Ainda, ilhotas R tiveram redução do conteúdo total de insulina, da expressão protéica da SNAP-25, e aumento da subunidade Kir6.2 dos KATP e da sua atividade em resposta à glicose. Ilhotas CH secretaram mais insulina frente a 11,1 mM de glicose e agentes despolarizantes, associada à maior inibição dos KATP e ativação dos Cav em resposta à glicose. O grupo RH apresentou menor secreção de insulina frente a 2,8 mM de glicose e 30 mM de K+, e secreção similar ao grupo C frente a 11,1 mM de glicose e agentes despolarizantes, com aumento na expressão da SNAP-25 e inibição dos KATP em resposta à glicose. No grupo CHT houve normalização da liberação de insulina e aumento na expressão das subunidades ?1.2 e ?2 do Cav, SNAP-25 e sintaxina. Nas ilhotas RHT houve aumento na secreção de insulina frente à glicose e agentes despolarizantes, maior expressão da sintaxina e da subunidade Kir6.2 do KATP, bem como de sua inibição em resposta à glicose. Prejuízos na secreção de insulina no grupo R estão associados à menor expressão de proteínas envolvidas no processo exocitótico e aumento da expressão e atividade dos KATP. O grupo RH, com resistência à insulina similar ao grupo CH, não apresenta a mesma adaptação funcional das células ?, sem hipersecreção nesse grupo. A melhora na capacidade secretória do grupo RHT pode decorrer da ação da Tau sobre os KATP contribuindo para o adequado acoplamento estímulo/secreção e a extrusão dos grânulos de insulina via sintaxina / Abstract: In ? cells stimulus/secretion coupling, ATP-sensitive K+ channels (KATP) and voltage-sensitive Ca2+ channel (Cav) contribute to generating and sustaining the potential action. Changes in the expression or activity of these channels lead to insulin secretion impairment. Protein restriction as well as high-fat diet alters ?-cells ionic handling modifying insulin secretory profile. Taurine (Tau) regulates ion flux and improves ?-cell function. The aim of this study was to characterize the expression and function of KATP and Cav channels, as well as exocitotic proteins in isolated islets from malnourished mice submitted to high-fat diet and supplemented with Tau. Male C57Bl/6J mice received control (14% protein-C) or low-protein diet (6% protein-R) for 6 weeks. After, half of these groups were submitted to high-fat diet for 8 weeks without (CH and RH) or combined with 5% of Tau (CHT and RHT). Protein restricted mice showed lower growth and organs development. Both, CH and RH mice presented higher body weight, fat stores, hypercholesterolemia, glucose intolerance and insulin resistance. Tau supplementation prevented fat accumulation and glucose intolerance only in CHT group. Isolated islets from malnourished mice secreted less insulin in response to 2.8 mM glucose in combination with 30 mM K + or 100 ?M tolbutamide (Tolb). However, Ca2+ influx in these conditions did not differ. R group also released less insulin in response to 11.1 mM glucose in combination or not with depolarizing agents. In addition, R islets showed lower insulin and SNAP-25 protein content, whereas an increased protein expression of the Kir6.2 subunit of the KATP channel, as well as its activation during glucose stimulus. However, CH islets presented increased hormone release in the presence of 11.1 mM glucose in combination or not with depolaring agents, effect associated with enhanced KATP inhibition and Cav activation in response to glucose. RH group showed a lower insulin secretion in response to 2.8 mM glucose plus K+, and a similar secretion to C group upon 11.1 mM glucose together or not with depolarizing agents. Also, RH islets showed increased SNAP-25 protein levels. In CHT islets, Tau supplementation normalized insulin release and increased protein amount of ?1.2 and ?2 subunits of the Cav without modify its activity, and enhanced islet SNAP-25 and syntaxin protein levels. But, in RHT islets, enhanced insulin secretion in response to glucose and depolarizing agents, and increased syntaxin and Kir6.2 protein expression. In addition, RHT islets showed improved KATP inhibition and Cav activation in the presence of the sugar. In conclusion, insulin secretory dysfunction in R islets was associated with the lower expression of the exocytotic proteins and altered protein expression and activity of the KATP . Whereas, despite RH mice showed insulin resistance in a similar extent of that observed in CH mice, they did not present ?-cells functional adaptations to this condition, since RH islets did not hypersecret insulin. In addition, RHT islets presented a better secretory capacity probably due to the higher content of KATP and it inhibition induced by Tau which contributes to enhance the insulin exocytosis via syntaxin protein / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Rolf Rode / Banca: Marcia André / Banca: Plínio Moroni / Banca : Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Sigmar de Mello Rode / Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a microbiota bacteriana e fúngica das cavidades anoftálmicas, próteses oculares e olhos contralaterais de 43 usuários de prótese ocular em resina acrílica, unilateral, e relacionar a quantidade de secreção conjuntival presente nessas cavidades com a microbiota conjuntival, frequência de limpeza, tempo de uso e tempo decorrido desde o último polimento da prótese. Todos os pacientes apresentavam secreção conjuntival e microbiota Gram positiva nas cavidades anoftálmicas, Os microrganismos mais frequentemente isolados das 43 cavidades anoftálmicas, por ordem decrescente de freqüência, foram: Staphyfococcus coagulase negativos, Staphylococcus aureus, Candída albicans, Proteus mirabilis, Citrobacter koseriana, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter sakazakii e Enterobacter aerogenes. Microbiota Gram negativa foi isolada de oito cavidades e fúngica, de três. O estudo estatístico dos dados evidenciou relação não significativa entre a quantidade de secreção conjuntival e a presença de microbiota Gram negativa• nas cavidades; e entre a quantidade de secreção conjuntival e a frequência de limpeza da prótese ocular. Correlação, estatisticamente significativa, foi constatada entre a quantidade de secreção conjuntiva! e o tempo de uso e o tempo decorrido desde o último polimento da prótese / Abstract: The purpose of this work was to evaluate the bacterial and fungic microbiota of the anophthalmic sockets, ocular prosthesis and fellow eyes of forty three acrylic resin prosthesís carrying patients, and thereby relate the amount of conjunctival discharge to the presence of organisms, frequency of prosthesis cleaning, time of use and elapsed time since the last prosthesis polishing. All patients showed conjunctival discharge and Gram positive organisms in the anophthalmic sockets. The predominant organisms in the anophthalmic sockets were Staphylococcus coagulase negative, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Proteus mirabilis, Citrobacter koseriana, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter sakazakii e Enterobacter aerogenes. Gram negative bacteria were found in eight anophthalmic sockets and fungi in three. No relation was found between the amount of the conjunctival discharge and the presence of Gram negative bacteria in the anophthalmic socket, nor with the frequency of prosthesis cleaning. However, there was a significant relation between the amount of conjunctival discharge and time of prosthesis use, as well as time elapsed since the last prosthesis polishing / Doutor