Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-04-16T12:55:43Z No. of bitstreams: 1 2012_RaissaGuimaraesLeite.pdf: 4286720 bytes, checksum: 7ff9335660ae49068130a877e30406d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-16T13:23:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RaissaGuimaraesLeite.pdf: 4286720 bytes, checksum: 7ff9335660ae49068130a877e30406d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-16T13:23:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RaissaGuimaraesLeite.pdf: 4286720 bytes, checksum: 7ff9335660ae49068130a877e30406d8 (MD5) / As glândulas dos vegetais são classificadas conforme o tipo de substâncias que secretam. Estas estruturas são encontradas na face adaxial dos pecíolos de Himatanthus obovatus (Mull. Arg.) Woodson e Tabernaemontana solanifolia A. DC. (Apocynaceae), bem como em estípulas de Palicourea rigida Kunth e Tocoyena formosa (Cham. & Schltdl.) K. Schum. (Rubiaceae). Estas quatro espécies nativas são muito comuns no Cerrado e suas glândulas ainda não foram caracterizadas. O objetivo do presente trabalho é caracterizar as glândulas destas plantas, por meio da morfo-anatomia, inclusive microscopia eletrônica de varredura (MEV), observações ecológicas e identificar a natureza química e a ação biológica de suas secreções. Amostras das glândulas foram fixadas, desidratadas e metalizadas para análise sob MEV, onde os cristais foram analisados por espectroscopia de energia dispersiva (energy dispersive spectroscopy, EDS). A análise anatômica foi realizada mediante inclusão em parafina utilizando cortes seriados. Cortes das glândulas frescas foram obtidos em micrótomo e submetidos aos testes histoquímicos. As imagens dos cortes foram obtidas sob fotomicroscópio com sistema de captura. Observações de campo, especialmente em H. obovatus, foram registradas por anotações, fotografias e filmes. As secreções de H. obovatus, P. rigida e T. formosa foram removidas das glândulas e liofilizadas. A matéria seca foi quantificada e foram realizados testes bioquímicos. Realizaram-se bioensaios com a secreção de P. rigida e T. formosa, usando-se os fungos fitopatogênicos Fusarium solani (Mart.) Sacc e duas cepas de Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. As secreções das glândulas reagiram positivamente ao vermelho de rutênio, o que evidencia as mucilagens ácidas. A composição das secreções, assim como a morfologia das glândulas possibilitaram sua identificação como coléteres. Eles são típicas emergências, constituídos por um núcleo parenquimático, revestido por epiderme em paliçada, exceto em P. rigida, onde foi constatado coléter do tipo "simples", não relatado na literatura, que possivelmente representa uma condição derivada em relação às emergências. Coléteres do tipo padrão ("standard") foram constatados, todos sem poros em sua superfície. Em T. formosa, eles possuem pedúnculo. Os coléteres em P. rigida são vascularizados, com um feixe xilemático central e floema. Os coléteres em P. rigida possuem cristais prismáticos e ráfides, constituídos por cálcio, níquel, nióbio e alumínio, conforme análise em EDS. Aparentemente este é um relato inédito da presença destes três últimos elementos na constituição química de cristais em plantas. Os testes histoquímicos revelaram pectinas, substâncias lipídicas e proteínas nas secreções dos coléteres das quatro espécies. Açúcares redutores foram verificados em H. obovatus e T. solanifolia e alcalóides em P. rigida e compostos fenólicos em T. solanifolia. A metodologia de obtenção das secreções foi muito satisfatória, sendo vantajoso seu uso em estudos fitoquímicos. As maiores quantidades de secreção obtidas foram de 500 mg para P. rigida e T. formosa . As quantidades médias de matéria seca das secreções, seus açúcares solúveis totais e proteínas foram, respectivamente, para cada espécie: H. obovatus – 0,68 mg/pecíolo, 69,2 μg/mg e 82,9 μg/mg; P. rigida – 5 mg/gema, 162,2 μg/mg e 76,8 μg/mg; T. formosa – 13,8 mg/gema, 174 μg/mg e 89 μg/mg (quantidades por mg de secreção). Os monossacarídeos detectados foram fucose nas três espécies analisadas e manose, arabinose e xylose em H. obovatus. Os bioensaios mostraram diferenças discretas, mas significativas entre o controle e o tratamento com as secreções. Formigas foram encontradas nos pecíolos de H. obovatus, onde permaneceram paradas e secreção foi constatada em seu aparelho bucal. Defesa do território também foi um comportamento observado. Os resultados indicam que as secreções dos coléteres estudados são de natureza química complexa, onde mucilagens, lipídios, proteínas e açúcares solúveis estão presentes. Os coléteres encontrados em H. obovatus, cujas secreções apresentaram as menores quantidades de açúcares solúveis e as maiores quantidades de fucose, estabelecem relações interespecíficas entre esta planta e várias espécies de formigas, que podem estar utilizando suas secreções como fonte alimentar, ou outra finalidade. O significado ecológico e evolutivo dos resultados é discutido. _______________________________________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The glands of the plants are classified according to the type of substances which secrete. These structures are found in the adaxial side of petioles from Himatanthus obovatus (Mull. Arg.) Woodson and Tabernaemontana solanifolia A. DC. (Apocynaceae), as well as in stipules of Palicourea rigida Kunth and Tocoyena formosa (Cham. & Schltdl.) K. Schum. (Rubiaceae). These four native species are very common in the Cerrado and their glands have not yet been characterized. The objective of this study is to characterize the glands of these plants, by means of the morphology and anatomy, including scanning electron microscopy (SEM), ecological observations and identify the chemical nature and the biological action of their secretions. Samples of the glands were fixed, dehydrated and metallized for analysis under SEM, where the crystals were analyzed by energy dispersive spectroscopy (energy dispersive spectroscopy, EDS). The anatomical analysis was performed on paraffin inclusion using serial sections. Sections of fresh glands were obtained in a and subjected to histochemical tests. The images of the cuts were obtained under fotomicroscopio with capture system. Observations from field, especially in H. obovatus were recorded by annotations, photos and movies. The secretions of H. obovatus, P. rigida and T. formosa were removed from glands and lyophilized. The dry matter was quantified and were carried out biochemical tests. Bioassays were performed with the secretion of P. rigida and T. formosa, using the phytopathogenic effects on succeeding fungi Fusarium solani (Mart.) Sacc. and two strains of Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. The secretions from glands reacted positively to the red of ruthenium, which highlights the mucilage acidic. The composition of secretions, as well as the morphology of glands allowed its identification as colleters. They are typical emergencies, consisting of a core parenchymatous, coated by epidermis in palisade, except in P. rigida, where it was found coleter of type "simple", not reported in the literature, which possibly represents a derived condition in relation to emergencies. Colleters standard type (“standard") were found, all without pores on its surface. In T. formosa, they have flower stalk. Colleters in P. rigida are vascularized, with a central vascular and phloem. Colleters in P. rigida have prismatic crystals and rafides, consisting of calcium, nickel, niobium and aluminum, as analysis in EDS. Apparently this is a unpublished report of the presence of these last three elements in the constitution chemistry of crystals in plants. The histochemical tests revealed pectins, lipid and protein in the secretions of colleters of the four species. Reducing sugars were recorded in H. obovatus and T. solanifolia, alkaloids in P. rigida and phenolic compounds in T. solanifolia. The methodology for obtaining secretions was very satisfactory, being advantageous its use in studies phytochemicals. The largest quantities of secretion were obtained from 500 mg to P. rigida and T. formosa. The average amounts of dry matter of secretions, its soluble sugars and total proteins were, respectively, for each species: H. obovatus - 0.68 mg/petiole, 69.2 μg/mg and 82.9 μg/mg; P. rigida - 5 mg/gema, 162.2 μg/mg and 76.8 μg/mg; T. formosa - 13.8 mg/gema, 174,2 μg/mg, and 89 μg/mg (quantities per mg of secretion). Monosaccharides detected were fucose in the three species analyzed and mannose, arabinose and xylose in H. obovatus. The bioassays showed differences discreet but significant between the control and the treatment with the secretions. Ants were found in petioles of H. obovatus, where they remained standing and secretion was observed in its mouthparts. Defense of the territory was also an observed behavior. The results indicate that the secretions of colleters studied are of chemical nature complex, where mucilage, lipids, proteins and soluble sugars are present. Colleters found in H. obovatus, whose secretions showed the smallest quantities of soluble sugars and the largest quantities of fucose, establish interspecific relations between this plant and several species of ants, which may be using their secretions as a food source, or other purpose. The ecological and evolutionary significance of the results are discussed.

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T09:57:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_AnaCristinadosSantos_M.pdf: 2984469 bytes, checksum: 05ad25856a10ccc3e82024835a6de424 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a maturação do sistema secretor de insulina em ratos, através de um estudo, temporal da resposta secretória frente a diferentes estímulos. Para isso, fragmentos de pâncreas - (0,5 à 1 mm3) de fetos e neonatos e ilhotas adultas, foram incubados por 1 hora à ¿37 GRAUS C¿ em atmosfera de 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿. As incubações foram realizadas em. solução de Krebs-Ringer contendo diferentes concentrações de glicose,potássio, teofilina e carbamilcolina. Após o período de incubação, a insulina secretada no meio, bem como, a extraída dos fragmentos de pâncreas ou de ilhotas isoladas, foram medidas por radioimunoensaio, sendo a secreção expressa como percentagem do conteúdo total de insulina ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The aim of this work was to study, in rats, the maturation process of the secretory response of insulin following several stimuli. For that, pieces of pancreas (0,5-1 mm3) from rat fetuses and newborns or isolated adults islets, were incubated for 1 .hour at ¿37 GRAUS C¿ in 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿ atmosphere with differents concentrations of glucose, potassium;. theophylline and carbamylcholine. Following the incubation,. the insulin secreted into the medium and extracted from the tissues, were measured hy radioimmunoassay,and were expressed as percentage of total insulin content ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_VanessaCristina_M.pdf: 2202517 bytes, checksum: 96df5e7928eb9ee77b90e029f2b8e569 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Em animais, a desnutrição intra-uterina exerce efeitos marcantes sobre o desenvolvimento fetal e pós-natal. Além disso, baixo peso ao nascer está associado à secreção alterada de insulina, resistência à insulina e área diminuída da ilhota pancreática. Neste trabalho, verificamos a expressão do fator de transcrição PD X-I, a área da ilhota e a secreção de insulina em ilhotas de ratos neonatos e recém-desmamados (28 dias de vida), mantidos durante o período fetal e da lactação com uma dieta normoprotéica (17% de proteína) ou hipoprotéica (6% de proteína). Esses parâmetros também foram avaliados em ratos com 28 dias, recuperados da desnutrição intra-uterina. Após o desmame, a secreção de insulina em ilhotas isoladas em resposta 2,8 e 16,7 mmol/L de glicose foi reduzida em ratos desnutridos. Ao nascer e após 28 dias, a área da ilhota e a expressão protéica do PDX-1 também foram diminuídas, enquanto os níveis de mRNA em ilhotas de ratos desnutridos recém desmamados foram semelhantes aos níveis encontrados em ratos controles. A expressão protéica do PDX-1 e a área da ilhota, bem como a secreção de insulina, foram restauradas em ratos recuperados, enquanto o mRNA do PDX-l foi maior do que em ratos controles. Esses resultados sugerem associação entre expressão protéica do PDX-l diminuída, redução no tamanho da ilhota e secreção diminuída de insulina em ratos desnutridos. A reintrodução de dieta normal, logo após o nascimento, restaurou todos os parâmetros avaliados / Abstract: Intra-uterine and early postnatal malnutrition has profound consequences on fetal and postnatal development, both in humans and animals. In addition, low birth weight has been reported to be associated with impaired insulin secretion, insulin resistance and diminished area of pancreatic islets. To assess the expression of the transcription factor pancreatic and duodenal homeobox gene 1 (PDX-l) in pancreatic B-cells, and to examine the islet area and glucose-induced insulin secretion by islets from rats maintained on a low protein diet. PDX-l expression and islet area were assessed in rats maintained on a low (6%) or normal (17%) protein diet during fetal life. PDX-I protein and rnRNA levels, as well as insulin secretion and islet area were also measured after 28 days of life in normal, 10w protein, and recovered rats which received a normal protein diet after birth. Insulin secretion by isolated islets in response to 2.8 and 16.7 mmol glucose/L was reduced in 28-day-old low protein rats (P < 0.0001). At birth and after 28 days of life, the islet area and PDX-l protein expression were also reduced (P < 0.01). In contrast, PDX-l rnRNA levels in islets from 28-day-old low protein rats was similar to normal rats. PDX-l protein expression in B cells, the area of islets and insulin secretion were restored in recovered rats, whereas PDX-l rnRNA was higher than normal rats (P < 0.05). These results suggest a link between diminished PDX-l protein expression, a reduction in islet area and impaired insulin secretion in low protein rats. The reintroduction of a normal diet early in life restored islet area and cell physiology / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pelegrinelli_FabianaFernandesFontana_D.pdf: 16389885 bytes, checksum: 5d058208b3c5558d1744a26a73e4362e (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A insulina é um importante regulador de crescimento, iniciando suas ações através da ligação ao seu receptor que se autofosforila e, posteriormente, direciona sua capacidade tirosina quinase em direção a outras moléculas intermediárias, incluindo o substrato-1 do receptor de insulina (IRS-I), IRS-2 e Shc. Proteínas IRS podem se ligar a proteínas sinalizadoras que contêm um domínio SH2, tais como a subunidade de 85 kDa da fosfatidilinositol 3-quinase (pI 3K) e Grb2. A serina-treonina quinase Akt é ativada à jusante da PI 3K. Tem-se mostrado que a proteína Shc liga-se diretamente a Grb2 e leva à ativação da MAPK. No presente trabalho, investigamos as vias de sinalização da insulina na pele intacta de ratos, por meio de imunoprecipitação e "immunoblotting" com anticorpos específicos, e também através de imuno-histoquímica com anti-receptor de insulina. Nossos resultados mostraram claramente a presença do receptor de insulina (IR) em fragmentos de pele nas células da epidérme e folículos pilosos e menos intensamente nos fibroblastos da derme. Também observamos que o estímulo agudo com insulina pode induzir fosforilação em tirosina do IR e que as proteínas IRSs e Shc servem como moléculas sinalizadoras para a insulina na pele de ratos e que a insulina é capaz de induiir a associação de IRS-I/PI3K e Shc/Grb2 neste tecido, bem como a fosforilação de MAPK e Akt, demonstrando que proteínas envolvidas nas etapas iniciais da ação insulínica estão expressas na pele de ratos e são rapidamente ativadas após estímulo insulínico. O processo de cicatrização está comprometido no diabetes mellitus. Entretanto, a patogênese deste processo não está esclarecida e pode envolver anormalidades na sinalização insulínica. O outro objetivo deste estudo foi investigar a regulação destas proteínas na pele em cicatrização de ratos normais e diabéticos. Nossos resultados mostraram que a fosforilação induzida pela insulina e a expressão tecidual do IR, IRS-I, IRS-2, Shc, MAPK e Akt estão aumentadas em tecido cicatricial de pele em comparação com a pele intacta e diminuída em tecido cicatricial de ratos diabéticos, quando comparado com tecido cicatricial de ratos normais. A sinalização insulínica está aumentada na pele em reparo e é possível que a sinalização insulínica anormal, como demonstrado na pele dos ratos diabéticos, pode afetar a função celular na pele / Abstract: Insulin is an important regulator of growth and initiates its action by binding to its receptor that undergoes tyrosyl autophosphorylation and further enhances its tyrosine kinase activity towards other intermediate molecules, including insulin receptor substrate-1 (IRS-l), IRS-2 and Shc. IRSs proteins can dock various SH2-containing signaling proteins, such as the 85 kDa subunit of phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-kinase) and Grb2. The serine-threonine kinase Akt is activated downstream to PI 3-kinase. Shc protein has been shown to directly induce the association with Grb2 and downstream the activation of the mitogen-activated protein kinase (MAPK). In the present study we investigated insulin signal transduction pathways in skin of intact rats by immunoprecipitation and immunoblotting with specific antibodies, and also by immunohistochemistry with anti-insulin receptor antibody. Our results showed that skin fragments clearly demonstrated the presence of insulin receptor (IR) in cell bodies of the epidermis and hair follicles and some faint staining was also detected in fibroblasts of the dermis. It was also observed that acute stimulation with insulin can induce tyrosyl phosphorylation of IR and that the IRSs and Shc proteins serve as signaling molecules for insulin in skin of rats and that insulin is able to induce association of IRS-1/PI 3-kinase and Shc/Grb2 in this tissue, as well as phosphorylation of MAPK and Akt, demonstrating that proteins involved in early steps of insulin action are expressed in skin of intact rats and are quickly activated afier insulin stimulation. Wound healing is impaired in diabetes mellitus. However the pathogenesis ofthis process is not known and may involve abnormalities in insulin signaling. The other purpose of this study was to investigate the regulation of these proteins in wound healing skin of normal and diabetic rats. Our results showed that insulin induced tyrosyl phosphorylation and tissue expression ofIR, IRS-l, IRS-2, SHC, MAPK and Akt, are increased in the wound healing tissue compared to intact skin and decreased in wounded skin of diabetic rats when compared to wounded skin of normal rats. Insulin signal transduction is increased in repair tissue in skin and it is possible that abnormal insulin signaling, as demonstrated in skin of diabetic rats, could affect skin function / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A rota de biossíntese de colesterol tem sido estudada pelo seu envolvimento com a secreção de hormônios. A secreção de insulina depende do colesterol e de intermediários da sua biossíntese como o geranilgeranil pirofosfato. Para compreender a contribuição destes elementos na secreção de insulina foram utilizados inibidores de diferentes pontos da rota de biossíntese do colesterol. Estudou-se a contribuição do geranilgeranil pirofosfato e do colesterol na secreção de insulina estimulada pela glicose e analisados parâmetros físicos de membrana dos quais decorrem aspectos funcionais da célula beta. Sinvastatina inibiu a secreção de insulina sem afetar o conteúdo celular de colesterol, mas inibindo a geranilgeranilação de proteínas. A diminuição do conteúdo de colesterol aumenta a fluidez de membrana desorganizando lipid rafts. A suplementação com colesterol recupera a função secretória. Por tanto, a inibição da síntese de colesterol diminui a secreção de insulina através da redução da isoprenilação de proteínas e da alteração estrutural de membranas celulares. / Cholesterol biosynthesis pathway has been studied for its involvement with the hormone secretion process. Insulin secretion depends on cholesterol and its biosynthesis intermediates such as geranylgeranyl pyrophosphate. For understand their contribution on the glucose stimulated insulin secretion, cholesterol biosynthesis pathway key steps inhibitors were used. The geranylgeranyl pyrophosphate and cholesterol contribution to the insulin secretion was studied so as physical parameters of the membrane, from where derive key functions of it. Simvastatin inhibited insulin secretion without affecting total cellular cholesterol, but inhibiting protein geranylgeranylation. The cholesterol reduction increased the membrane fluidity with consequent disorganization of membrane lipid rafts, in which secretion machinery is organized. Cholesterol supplementation recovers cellular secretory function. We conclude that cholesterol biosynthesis inhibition reduces insulin secretion through protein isoprenylation impairment and structural disarrangement of the cellular membranes.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-26T16:08:11Z No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-26T21:42:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T21:42:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / A pele dos anfíbios é um tecido especializado na produção de diversas moléculas como peptídeos antimicrobianos, imunomoduladores, aminas biogênicas e hormônios. Esses compostos bioativos podem ser considerados de interesse biotecnológico e alternativas terapêuticas. O objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar peptídeos e proteínas presentes na secreção cutânea do anfíbio Dendropsophus columbianus (Boettger, 1892), relacionados aos mecanismos de defesa contra patógenos. A primeira abordagem consistiu no fracionamento clássico da secreção cutânea por RP-HPLC. Todas as frações cromatográficas obtidas foram avaliadas quanto à capacidade de inibir a proliferação bacteriana e analisadas por MALDI-TOF/TOF. Um único e novo (sem similaridade de sequência com peptídeos anotados) peptídeo antimicrobiano neutro foi assim isolado e denominado Dendropsofina 1 (Dc 1). Posteriormente, foram desenhados dois análogos catiônicos (Dc 1.1 e Dc 1.2) que mantiveram a estrutura anfipática de Dc 1. Dc 1 e seus dois análogos exibiram atividades antibacterianas moderadas e sem efeitos hemolíticos e citotóxicos em células de mamífero. O Análogo Dc 1.2 exibiu uma maior atividade antibacteriana, o que pode estar relacionado ao seu maior teor de α-hélice e estabilidade térmica em condição experimental hidrofóbica, comparando com Dc 1 e Dc 1.1. O peptídeo nativo Dc1 poderia ser usado como um modelo alternativo para desenvolver novos AMPs. Numa segunda abordagem, mais moderna e de alta acurácia, foi realizado o primeiro estudo proteômico e peptidômico abrangente da secreção cutânea utilizando nanoLC-MS/MS do tipo Orbitrap Elite™. Os dados foram processados através dos softwares PEAKS e Blast2GO. Foram identificadas 1248 proteínas presentes na secreção cutânea de D. columbianus, 127 proteínas foram categorizadas como associadas ao sistema de defesa e 19 relacionadas à resposta contra microrganismos. Mediante zimografia foram detectadas e posteriormente identificadas três hidrolases ativas na secreção total, as quais podem estar relacionadas com o processamento de peptídeos de defesa. Os resultados do peptidoma permitiram determinar um novo grupo de peptídeos endógenos a D. columbianus, com alta similaridade de sequência com Dc 1, que foram nomeados como dendropsofinas. As dendropsofinas Dc2, Dc7, DC13, Dc 17, Dc 18 e Dc 19 não apresentaram atividade contra bactérias nem fungos. No entanto, Dc 2 e Dc 18 foram capazes de ativar neutrófilos humanos. Essa atividade poderia estar associada a uma modulação do sistema imune em D. columbianus. Esta via de defesa altamente conservada em vertebrados, abre perspectivas quanto ao uso dessas novas moléculas na terapia de doenças infecciosas. / Amphibian skin is a tissue specialized in the production of various molecules such as antimicrobial peptides, immunomodulators, biogenic amines and hormones. These bioactives compounds could be considered of biotechnological interest and new therapeutic alternatives. The aim of the present study was to identify and characterize peptides and proteins present in the cutaneous secretion of the amphibian Dendropsophus columbianus (Boettger, 1892), related to pathogen defense mechanisms. The first approach consisted of the classical fractionation of cutaneous secretion by RP-HPLC. All chromatographic fractions obtained were evaluated for their ability to inhibit bacterial proliferation and analyzed by MALDI-TOF / TOF. A single new antimicrobial neutral peptide was thus isolated and named Dendropsophin 1 (Dc 1), with no sequence similarity with annotated peptides. Subsequently, two cationic analogues (Dc 1.1 and Dc 1.2) keeping the amphipathic structure of Dc 1 were designed. Dc 1 and its two analogues exhibited moderate antibacterial activities and no hemolytic and cytotoxic effects in mammalian cells. Dc 1.2 exhibited slightly improved antibacterial properties that could be related to the higher content of α-helix and thermal stability compared to Dc 1 and Dc 1.1 in hydrophobic experimental condition. The native peptide Dc 1 could be used as an alternative model to develop new AMPs. In a second modern high-throughput approach, the first comprehensive proteomic and peptidomic study of cutaneous secretion was performed by nanoLC-MS/MS using Orbitrap Elite™ mass spectrometer. Data were processed using PEAKS and Blast2GO programs. 1248 proteins present in the cutaneous secretion of D. columbianus were identified, 127 proteins were categorized associated with the defense system and 19 related to the response against microorganisms. Three hydrolases from the total secretion were detected by zymography and subsequently identified, which could be related to the processing of peptides of defense. The peptidome results allowed determining a new group of peptides endogenous to D. columbianus, with high sequence similarity with Dc 1, which were named as Dendropsophins. The dendropsophins Dc 2, Dc 7, Dc 13, Dc 17, Dc 18 and Dc 19 showed no activity against bacteria or fungi. However, Dc 2 and Dc 18 are able to activate human neutrophils. This activity could be associated to a modulation of the immune system in D. columbianus. This pathway of defense, highly conserved in vertebrates, opens further perspectives regarding the use of these new molecules in the therapy of infectious diseases.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-20T11:21:28Z No. of bitstreams: 1 2016_FernandaAltinoSilvestre.pdf: 2180008 bytes, checksum: e91d14fde1dd7fbf1c10377f8fd0ed58 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-27T16:01:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_FernandaAltinoSilvestre.pdf: 2180008 bytes, checksum: e91d14fde1dd7fbf1c10377f8fd0ed58 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T16:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_FernandaAltinoSilvestre.pdf: 2180008 bytes, checksum: e91d14fde1dd7fbf1c10377f8fd0ed58 (MD5) / INTRODUÇÃO. A cultura de secreção vaginal e os diferentes métodos moleculares de identificação de micro-organismos são considerados de referência no diagnóstico das infecções. Contudo, muitas infecções do trato genital inferior são detectadas pela citologia cervical, por ser um método diagnóstico rotineiramente empregado na prevenção do câncer de colo de útero. OBJETIVOS. Avaliar a frequência de microbiota bacteriana anormal em secreção cervical através da citologia e cultura, verificar a concordância entre estes métodos diagnósticos e a associação da microbiota bacteriana anormal com inflamação e aspectos clínicos. MÉTODO. Foram analisadas 55 pacientes atendidas no ambulatório de ginecologia do Hospital Universitário de Brasília (HUB) nos anos de 2015 e 2016, as quais foram submetidas a exame clínico e coleta de secreção cervical para citologia cervical e cultura. A identificação das bactérias foi realizada por método automatizado (Vitek 2 - Biomeriéux). RESULTADOS. Crescimento de bactérias patogênicas foi detectado em 45,45% das amostras cervicais submetidas à cultura/VITEK. Das oito espécies isoladas, as mais frequentes foram Streptococcus agalactiae e Enterococcus faecalis (20% e 12,72% do total das amostras, respectivamente). Na citologia cervical, microbiota bacteriana anormal (caracterizada pela presença de cocos e/ou outros bacilos) foi observada em 52,72 % das amostras e inflamação em 78,18% das amostras. A concordância entre microbiota bacteriana anormal (presença de cocos e/ou outros bacilos) na citologia e crescimento de bactérias patogênicas na cultura/VITEK foi de 60% (Kappa= 0,2). A inflamação foi significativamente mais frequente nas amostras com microbiota bacteriana anormal em comparação com amostras com microbiota bacteriana normal na citologia cervical (Teste de Fisher, p=0,03). Apesar dos achados inflamatórios na citologia terem sido mais frequentes nas amostras de pacientes com crescimento de bactérias patogênicas em relação às amostras sem crescimento de bactérias na cultura cervical, a diferença não foi significativa. Com relação aos aspectos demográficos, antecedentes pessoais, atividades sexuais e hábitos de vida, apenas a média da idade das pacientes foi significativa entre os grupos com e sem crescimento de bactérias patogênicas na cultura de secreção cervical. CONCLUSÃO. A microbiota bacteriana anormal foi um achado frequente na citologia cervical e a taxa de concordância entre a presença desta microbiota anormal na citologia cervical e crescimento de bactérias patogênicas na cultura foi pobre. Os achados de inflamação na citologia cervical foram frequentes nas amostras com microbiota bacteriana anormal e sua presença nas amostras com microbiota normal sugere causas de origem não-infecciosa, embora a causa de origem infecciosa não possa ser excluída. Em contrapartida, a presença de microbiota bacteriana anormal em amostras sem inflamação na citologia cervical sugere que estas bactérias não são, necessariamente, patogênicas. A frequência baixa de sinais e sintomas e o número limitado de amostras do presente estudo não permitiram uma análise confiável sobre a associação entre crescimento de bactérias patogênicas na cultura de secreção cervical e suas possíveis repercussões clínicas. PALAVRAS-CHAVE: citologia cervical, cultura de secreção cervical, método automatizado de identificação de bactérias. / INTRODUCTION. The culture of vaginal secretions and different methods for molecular identification of microorganisms are considered as reference in the diagnosis of infections. However, many infections of the lower genital tract are detected by cervical cytology, which the routinely diagnostic method is used to prevention of cervical cancer. OBJECTIVE. Evaluate the abnormal bacterial microbiota frequency in cervical secretion by cytology and culture; evaluate the agreement between these diagnostic methods and the association between abnormal bacterial microbiota with inflammation and clinical aspects. METHOD. This study was done in 55 patients treated at Gynecology Service in the University Hospital of Brasilia (HUB) in the years 2015 and 2016. They were subjected to clinical examination and collection of cervical secretion for cytology and culture. The identification of bacteria was performed by automated method (Vitek 2 - Biomeriéux). RESULTS. The pathogenic bacteria grew up in 45.45% of cervical samples submitted to culture / VITEK. Between eight isolated species, the most common were Streptococcus agalactiae and Enterococcus faecalis (20% and 12.72% of the total samples, respectively). In cervical cytology, abnormal bacterial microbiota was observed in 52.72% of the samples and inflammation in 78.18% of the samples. The agreement between abnormal bacterial microbiota in cytology and growth of pathogenic bacteria in culture / VITEK was 60% (kappa = 0.2). The inflammation was significantly more frequent in samples with abnormal bacterial microbiota compared with normal samples bacterial microbiota in cervical cytology (Fisher's exact test, p = 0.03). Although the inflammation findings in cytology ere more frequent in samples from patients with growth of pathogenic bacteria compared to samples with no growth of bacteria in the cervical secretion culture, the difference was not significant. Regarding demographics aspects, medical history, sexual activity and lifestyle habits, only the age (mean) of patients it was significant between the groups with and without growth of pathogenic bacteria in the cervical secretion culture. CONCLUSION. Abnormal bacterial microbiota was a frequent finding in cervical cytology and the agreement rate between the presence of abnormal bacterial microbiota in cervical cytology and growth of pathogenic bacteria in cervical secretion culture was poor. The findings of inflammation in cervical cytology was common in the samples with abnormal bacterial microbiota and their presence in samples with normal microbiota suggests causes of non- infectious origin but causes of infectious origin cannot be excluded. In contrast, the presence of abnormal bacterial flora without inflammation in the cervical cytology samples suggests that these bacteria are not necessarily pathogenic. The low frequency of signs and symptoms and the limited number of samples of this study did not allow a reliable analysis of the association between growth of pathogenic bacteria in the cervical secretion culture and its possible clinical consequences.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:25:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-06-14. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:29:53Z : No. of bitstreams: 1 000127134.pdf: 1653433 bytes, checksum: a86ba2adfc63a2d23fea7089b1555de7 (MD5) / Este trabalho objetivou avaliar a microbiota bacteriana e fúngica das cavidades anoftálmicas, próteses oculares e olhos contralaterais de 43 usuários de prótese ocular em resina acrílica, unilateral, e relacionar a quantidade de secreção conjuntival presente nessas cavidades com a microbiota conjuntival, frequência de limpeza, tempo de uso e tempo decorrido desde o último polimento da prótese. Todos os pacientes apresentavam secreção conjuntival e microbiota Gram positiva nas cavidades anoftálmicas, Os microrganismos mais frequentemente isolados das 43 cavidades anoftálmicas, por ordem decrescente de freqüência, foram: Staphyfococcus coagulase negativos, Staphylococcus aureus, Candída albicans, Proteus mirabilis, Citrobacter koseriana, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter sakazakii e Enterobacter aerogenes. Microbiota Gram negativa foi isolada de oito cavidades e fúngica, de três. O estudo estatístico dos dados evidenciou relação não significativa entre a quantidade de secreção conjuntival e a presença de microbiota Gram negativa• nas cavidades; e entre a quantidade de secreção conjuntival e a frequência de limpeza da prótese ocular. Correlação, estatisticamente significativa, foi constatada entre a quantidade de secreção conjuntiva! e o tempo de uso e o tempo decorrido desde o último polimento da prótese / The purpose of this work was to evaluate the bacterial and fungic microbiota of the anophthalmic sockets, ocular prosthesis and fellow eyes of forty three acrylic resin prosthesís carrying patients, and thereby relate the amount of conjunctival discharge to the presence of organisms, frequency of prosthesis cleaning, time of use and elapsed time since the last prosthesis polishing. All patients showed conjunctival discharge and Gram positive organisms in the anophthalmic sockets. The predominant organisms in the anophthalmic sockets were Staphylococcus coagulase negative, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Proteus mirabilis, Citrobacter koseriana, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter sakazakii e Enterobacter aerogenes. Gram negative bacteria were found in eight anophthalmic sockets and fungi in three. No relation was found between the amount of the conjunctival discharge and the presence of Gram negative bacteria in the anophthalmic socket, nor with the frequency of prosthesis cleaning. However, there was a significant relation between the amount of conjunctival discharge and time of prosthesis use, as well as time elapsed since the last prosthesis polishing

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:43Z : No. of bitstreams: 1 000864883_20170507.pdf: 290689 bytes, checksum: bbce5defbf52d3c3b3de8fb3b6270305 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-05-12T12:18:30Z: 000864883_20170507.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-05-12T12:19:16Z : No. of bitstreams: 1 000864883.pdf: 3444400 bytes, checksum: 78dfae7d5f7785d89d25c31281b36042 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coléteres são estruturas responsáveis pela secreção de substância mucilaginosa ou resinosa, geralmente associados com a proteção ao meristema e aos órgãos em desenvolvimento contra dessecação e danos por patógenos, herbívoros, e ainda, com a formação de nódulos bacterianos foliares. Compostos adicionais como alcaloides, compostos fenólicos e lipídios podem estar presentes na secreção dos coléteres. As variações na composição indicam especificidade na função e nos mecanismos subcelulares de síntese e liberação da secreção dos coléteres de diferentes espécies. Em Rubiaceae os coléteres variam quanto à morfologia podendo ser classificados como: padrão, padrão-reduzido, intermediário, filiforme, escova, dendroide e lacrimiforme. Neste estudo foram comparadas 17 espécies de Rubiaceae ocorrentes em cerrado e floresta estacional semidecídua. Foram avaliadas morfologia, distribuição e histoquímica dos coléteres estipulares usando microscopia óptica e eletrônica de varredura. Para avaliação dos mecanismos subcelulares das células secretoras dos coléteres, foram selecionadas oito espécies com coléteres padrão com variação na natureza da secreção, as quais foram submetidas a análises em microscópio eletrônico de transmissão com uso de técnicas convencionais e citoquímicas - ZIO para marcação do sistema de endomembranas, ósmio-imidazol para lipídios insaturados e Thiéry para polissacarídeos. Além disso, foi realizado acompanhamento in situ do microclima, período de brotamento de novas folhas e proporção de ápices danificados em ambos os ecossistemas ao longo de um ano. Dentre as 17 espécies estudadas, 14 apresentaram coléteres padrão com variação na distribuição e no tamanho. A secreção variou de predominantemente hidrofílica, mista ou predominantemente lipofílica. Esta variação refletiu em diferenças nas populações de organelas entre as espécies, principalmente,... / Colleters are responsible for the secretion of mucilaginous or resinous substance, usually associated with the protection of the meristem and developing organs against desiccation and damage by pathogens, herbivores, and also with the formation of bacterial leaf nodes. Additional compounds such as alkaloids, lipids and phenolic compounds may be present in the secretion of colleters. Variations in the composition to indicate the specificity and subcellular mechanisms for synthesis and release of colleters secretion of different species. In Rubiaceae colleters can be classified as: standard, reduced standard, intermediate, brush-like, winged, filiform, dendroid and lacrimiforme. This study compared 17 species of Rubiaceae occurring in savanna and semi-deciduous forest. Were evaluated morphology, distribution and histochemistry of stipular colleters using optical and scanning electron microscopy. To evaluate the subcellular mechanisms of the secretory cells of colleters eight species were selected with standard colleters with variation in the nature of secretion, which were subjected to analysis in a transmission electron microscope using conventional and cytochemical techniques - ZIO for marking endomembrane systems, osmium-imidazole for unsaturated lipids and polysaccharides to Thiéry. Moreover, in situ monitoring was performed microclimate, budding period and proportion of new leaves damaged apices on both ecosystems throughout a year. Among the 17 species studied, 14 showed colleters standard with variation in the distribution and size. The secretion varied from predominantly hydrophilic, mixed to predominantly lipophilic. This secretion variation reflected in differences in the populations of organelles between species, mainly on the number and appearance of plastids, endoplasmic reticulum and dictyosomes including vesicles associated with these. Secretion accumulation sites were evident in the outer periclinal wall of epithelial ... / FAPESP: 11/02488-5