Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Lúcia Helena Rodrigues / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: César Roberto Esper / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Os objetivos deste projeto de pesquisa foram testar se a qualidade espermática, e a integridade da cromatina são diferentes em um grupo de touros Nelore jovens, adultos e senis. Três ejaculados, de 40 touros Nelore foram subdivididos em três faixas etárias: de 1,8 a 2 anos - Grupo Jovens, de 3,5 a 7 anos - Grupo Adultos e de 8 a 14,3 anos - Grupo Senis. As amostras foram avaliadas quanto à motilidade, o vigor, teste de termoresistência lento (TTL), análise computadorizada do movimento espermático (CASA), avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e do acrossoma, potencial mitocondrial, protaminação espermática, danos de DNA causados por radicais livres, suscetibilidade a denaturação da cromatina, pelos testes "Sperm Cromatin Structure Assay" (SCSA) e laranja de acridina (AOT), e danos na cromatina com a técnica TUNEL. Os animais jovens apresentaram valores superiores de motilidade e vigor antes e após o TTL, e maior porcentagem de células com alterações morfológicas, assim como maior porcentagem de espermatozóides com membrana e acrossoma íntegros e com alto potencial mitocondrial, estes parâmetros tiveram os menores índices nos animais senis (P<0,05). Nas avaliações da integridade do DNA, os touros jovens apresentaram maior porcentagem de deficiência de protaminação, enquanto os senis danos por oxidação. No teste SCSA os touros mais jovens e mais idosos apresentaram maiores índices de danos na cromatina, diferindo dos demais (P<0,05). O teste de TUNEL não apresentou resultados satisfatórios. Estes resultados permitem concluir que touros jovens apresentam qualidade espermática superior, seguidos pelo grupo de animais adultos, e finalmente um declínio na qualidade nos diversos parâmetros estudados para o grupo de animais senis. Quanto à integridade... (Complete abstract click electronic access below) / Abstract: The aims of this study were to test if sperm quality and chromatin integrity are different in young, adult and senile Nelore Bull cryopreserved semen samples. Three ejaculates from 40 Nelore bulls were divided by age in three groups: 1,8 to 2 years - Young Bulls, from 3,5 to 7 years - Adult Bulls and from 8 to 14,3 years - Senile Bulls. Samples were evaluated for: motility, vigor, slow termoresistance test (TTL), computadorized sperm movment analyses (CASA), simultaneous evaluation of plasmatic membrane and acrosome integrity, mitochondrial potential, sperm protamination, DNA oxidation damages, Sperm Cromatin Structure Assay (SCSA) and acridine orange test (AOT), and TUNEL. Young animals presented better values for motility and vigor before and after TTR , intact membrane and acrosome and high mitochondrial potential, but higher values for sperm defects, (P<0.05). On DNA integrity evaluations, Young Bulls presented more protamination problems while senile bulls guanine oxidation defects, both groups were more susceptible to DNA denaturation on SCSA (P<0.05). TUNEL results were not satisfatory. The results indicates that Young bulls may have a high quality sperm sample after freezing, followed by the adults and finally there is a decrease in quality on senile bulls group, nevertheless the results would probably not compromised the samples approval for commercial use. Regarding DNA integrity, Young and senile bulls are more susceptible to DNA damage, nevertheless the etiology of the damage seems to be different, by protamine deficiency in Young bulls and by oxidation in senile animals / Doutor

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: Romildo Romualdo Weis / Resumo: Objetivou-se estudar os efeitos do extrato de lipoproteínas de baixa densidade sobre o sêmen ovino durante a refrigeração. Vinte amostras de 5 carneiros foram refrigeradas por 24 e 48 horas na geladeira para refrigeração Minitube, nos meios diluentes Glicina Gema Leite, Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite e submetidas a teste de exaustão (37ºC/240 minutos) sendo avaliados in vitro por meio das análises da cinética espermática computadorizada, da morfologia e da integridade da membrana plasmáticas. Após 24 e 48 horas de refrigeração, os meios Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite apresentaram resultados superiores ao meio Glicina Gema Leite, após o teste de exaustão, para o parâmetro de integridade de membrana plasmática. Para a integridade de acrossomo o meio Glicina Gema purificada Leite foi superior (P<0,05) em relação ao meio Glicina Gema Leite durante o teste de exaustão. Nos demais parâmetros estudados de cinética espermática e morfologia (cauda dobrada), não houveram diferenças significativas (P>0,05) entre os meios. Entre os momentos, houve diferença significativa (P<0,05) em todos os meios durante o teste de exaustão / Abstract: The objective was to study the effects of extract of low density lipoproteins on ovine semen during cooling. Twenty samples of five sheep were chilled for 24 and 48 hours in the refrigerator for cooling Minitube, in extenders Glycine Yolk Milk, Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk and tested to exhaustion (37 ° C/240 min) were evaluated in vitro by means of computerized analysis of sperm kinetics, morphology and plasma membrane integrity. After 24 and 48 hours of refrigeration, the extenders Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk showed better results than extender Glycine Yolk Milk, after the exhaustion test, for the parameter of membrane integrity. For the integrity of the acrosome through Glycine purified Yolk Milk was higher (P <0.05) than Glycine Yolk Milk during the exhaustion test. In other parameters of sperm kinetics and morphology, there were no significant differences (P> 0.05) among extenders. Between times, significant difference (P <0.05) in all extenders during the exhaustion test / Mestre

Orientador : Maria Denise Lopes / Resumo: Com o objetivo de se avaliar dois meios diluidores - Tris/Glicerol e MP50 - para a congelação do sêmen de cães, foram utilizados ejaculados de 10 cães adultos, colhidos por meio de manipulação digital. As características morfofuncionais foram analisadas no sêmen in natura (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). As amostras foram avaliadas para: motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática e análise ultra-estrutural, além da mensuração do pH. Após a diluição com os diferentes meios, o sêmen foi envasado em palhetas francesas de 0,5mL, contendo 40 x 106 espermatozóides móveis/palheta, e mantidas por 60 minutos à 5ºC (T2); logo após, foram transferidos para o vapor de nitrogênio durante 20 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio. O armazenamento das palhetas foi em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 70ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do efeito animal nas variáveis analisadas, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. O teste hiposmótico, a integridade de membrana espermática e o pH, nas amostras refrigeradas (T2), apresentaram diferença estatística significativa (p<0,05) entre os meios, com superioridade do MP50. Nas análises pós-descongelação (T3), não foram observadas diferenças significativas entre as variáveis estudadas para os dois meios. A análise ultra-estrutural, mostrou edema de membrana plasmática e acrossomal, nas diferentes etapas do processo de congelação. Em conclusão, considerando-se as características morfofuncionais do sêmen canino pós-descongelação, os meios diluidores demonstraram igualdade. / Abstract: The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders for freezing dog semen: Tris/Glycerol and MP50. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. Seminal characteristics were evaluated in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3) semen for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultrastructural analysis and seminal pH. The samples were divided into two equal parts and each part was mixed with one extender type. After mixing, samples were packaged in 0,5mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/straw. Semen samples were kept at 50C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 700 C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity and pH (p<0,05) than Tris/Glycerol. For thawed semen (T3), there was no significant difference between extenders. By ultrastructural analysis, it was possible to verify swelling plasma and acrosomal sperm membranes in the different stages of freezing process. In conclusion, the extenders showed the same results as to morphofunctional characteristics the semen canine thawed. / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: O presente estudo objetivou a colheita do sêmen de garanhões nos haras, diluição e transporte destas amostras em dois sistemas de refrigeração (Equitainerâ e Max-Semen Expressâ) para os centros especializados onde foram submetidos ao processo de congelação. No Experimento I foi utilizado 01 ejaculado de 12 garanhões de diferentes raças. Após a colheita os ejaculados foram divididos em duas alíquotas: uma submetida ao processo de congelação convencional, utilizando o meio diluidor Botu-Crioâ e outra diluída com Botu-Semenâ e armazenada em Equitainerâ durante 24h. Após a refrigeração o sêmen foi centrifugado e ressuspendido com Botu-Crioâ e submetidas ao processo de congelação. As amostras descongeladas foram analisadas pelo CASA e a integridade de membrana plasmática pelo uso de sondas fluorescentes. Os resultados do Experimento I mostraram que não houve diferença nos parâmetros avaliados (motilidade total, progressiva e integridade da membrana plasmática) entre a metodologia convencional e a congelação de sêmen após 24h de refrigeração (p>0,05). No Experimento II, foi utilizado 01 ejaculado de 11 garanhões, os quais foram diluídos e armazenados em dois sistemas de transporte (Equitainerâ e Max-Semen Expressâ) durante 24h. As amostras foram congeladas, conforme descrito no Experimento I utilizando-se a associação do glicerol com dimetilacetamida, dimetilformamida e metilformamida. Após a descongelação a análise dos parâmetros espermáticos demonstrou a superioridade do Equitainerâ em relação ao Max-Semen Expressâ (p<0,05). A metilformamida associada ao glicerol apresentou resultados superiores aos demais crioprotetores utilizados . O teste de fertilidade comparou amostras congeladas de dois garanhões (A e B) pelos métodos: convencional e pós-refrigeração em Equitainer por 24h.... (Resumo complet, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to develop a new method to freeze equine semen. Semen was collected at the stallion farm, diluted, divided into two samples and cooled at Equitainer® or Max-Semen Express®, then transported to an equipped laboratory for freezing. On Experiment I used one ejaculate from each of 11 stallions from different breeds. The ejaculates were divided into two parts: one was frozen following a regular protocol and the other was diluted with Botu-Semen® and stored at Equitainer® for 24 hours. Afterwards, cooled semen was centrifuged and ressuspended with Botu-Crio® and then frozen. After thawing motility was evaluated by CASA and by fluorescent probes for plasma membrane integrity evaluation. Based on these results of Experiment I concluded that there was no difference between total motility, progressive motility and plasma membrane integrity when comparing the two methods for freezing semen (p>0,05). At Experiment II one ejaculate from each of 11 stallions was collected, diluted and stored either an Equitainer® or in a Max-Semen Express® for 24 hours. The samples were frozen as described on Experiment I using the association of glycerol with dimethylformamide, dimethylacetamide and methylformamide. After thawing the results suggested that the Equitainer® was better than Max-Semen Express® in maintaining sperm viability (p>0,05). The association of metilformamida and glycerol was superior to the others. Fertility trials compared the two methods: conventional and cooled/frozen semen. Ten mares were inseminated in a total of 40 cycles; the mares were monitorated every day by ovarian ultrasonography. Ovulation was induced using 10mg EPE (equine pituitary extract) intravenously when a follicle of 35mm of diameter was detected. Inseminations were performed twice, before and after ovulation with 350x106 spermatozoa/mL toward the tip of the horn.... (Complete abstract, access undermentioned electronic address) / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Dentre as biotecnologias de reprodução que visam acelerar os ganhos genéticos e econômicos dos rebanhos, a congelação de sêmen desponta como uma das principais. O sêmen congelado bovino é utilizado em larga escala há anos e não houve grandes evoluções nas técnicas de congelação visando minimizar os efeitos deletérios do processo nos espermatozóides, colaborando ativamente para o incremento da fertilidade dos rebanhos. Neste trabalho propôs inovações nas técnicas de congelação utilizando uma nova formulação de meio diluente, a introdução da centrifugação para a remoção do plasma seminal pré-congelação e a determinação do tempo ideal de estabilização do sêmen. Foram realizados três experimentos; o primeiro testou o efeito de três diferentes meios diluentes, com ou sem a remoção do plasma seminal, no ejaculado de 40 touros diferentes. Nos resultados exibidos o diluente M20 foi superior (p<0,01) aos demais diluentes na maioria das variáveis pesquisadas a remoção do plasma seminal melhorou (p<0,01) os índices de congelabilidade do sêmen. Outro experimento foi a verificação dos tempos de 60, 120, 180 e 240 min. de refrigeração do sêmen a 5ºC. O tempo de 180 minutos foi o considerado o melhor para a congelabilidade após a verificação dos resultados. No teste de fertilidade foram inseminados 418 vacas e o grupo que foi inseminado com sêmen congelado com M20 sem plasma seminal obteve uma tendência de superioridade (0,05<p<0,10) aos demais grupos. Com os resultados dos experimentos concluiu-se que as inovações propostas por este estudo incrementam os índices de congelabilidade do sêmen bovino / Abstract: Semen freezing is considered as one of the main reproduction biotechnologies that aim to accelerate genetic and economical gains of herds. Frozen bovine semen has been used in large scale for years and there were not great evolutions in freezing techniques to minimize the deleterious effects of the process in spermatozoa, actively contributing for the increase in herds fertility. Innovations in freezing techniques were proposed in this work by using a new formulation of the extenders, introducing centrifugation for the removal of prefreezing seminal plasma and determining the appropriate time for semen cooled. Three experiments were carried out: 1) the effect of three different extenders was tested, with or without the removal of seminal plasma, in the ejaculate of 40 different bulls; results showed that the extender M20 was superior (p<0,01) in relation to the other extenders in most of variables studied. The removal of the seminal plasma improved (P<0,01) semen freezability indexes. 2) verification of 60, 120, 180 and 240 min. times for semen cooling at 5ºC; after results, the time of 180 minutes was considered the most appropriate for freezability. 3) fertility test: 418 cows were inseminated and the group with frozen semen with M20 without seminal plasma obtained a superiority tendency (0,05<p<0,10) in relation to the other groups. The results of the experiments concluded that the innovations proposed in this work increase freezability indexes of bovine semen / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Carlos Antonio de Miranda Bomfim / Banca: André Luis Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / Abstract: The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system. / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Isabel Candia Nunes da Cunha / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A inseminação artificial (IA) utilizando sêmen congelado é uma ferramenta importante na reprodução de cães, visa o melhoramento genético e melhor aproveitamento do reprodutor. Além disso, a melhor metodologia para avaliar o potencial fecundante de uma amostra de sêmen é o teste in vivo. Por isso, os objetivos deste trabalho foram determinar a taxa de gestação de cadelas, utilizando sêmen congelado em meio diluente TRIS/OEP/Frutose/8%Glicerol, e comparar duas técnicas de IA: intra-uterina, por laparotomia e intravaginal. O sêmen foi colhido de um único macho, por manipulação digital do pênis e analisado, imediatamente, após a colheita e após a descongelação a 70°C, por 8 segundos. A cinética do movimento foi verificada pelo CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), e a integridade das membranas por: sondas fluorescentes (iodeto de propídio e carboxifluoresceína), pelo teste supra vital com a coloração de eosina, e pela associação de sondas (iodeto de propídio, JC-1 e FITC-PSA). A morfologia espermática foi avaliada por meio de esfregaços corados com Karras. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). As fêmeas foram monitoradas desde o início da fase do proestro utilizando a citologia vaginal seriada e a dosagem de progesterona sérica, a cada 48 horas. Para as inseminações, as cadelas foram divididas em dois grupos: Grupo 1 (n=6) inseminadas uma única vez, via intra-uterina, por laparotomia, com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2mL; e Grupo 2 (n=6) inseminadas duas vezes, via intravaginal com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2 mL por inseminação. Os resultados das análises do sêmen pré e pós-descongelação não apresentaram diferenças significativas, com exceção da morfologia espermática e da associação de sondas fluorescentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Artificial insemination (AI) using frozen semen is an important tool on dog's reproduction, aiming to genetic improvement and better use of a stud. Besides, the better way to evaluate the fecundate potential of a semen sample is an in vivo test. That way, the aim of this work was to determine the pregnancy rate in bitches, using TRIS/OEP/Fructose/8%Glycerol as the diluent medium, and to compare two AI techniques: intrauterine and intravaginal. Semen was collected from one male only, by digital manipulation. Semen was analyzed immediately after collection and after thawed at 70°C for 8 seconds. Movement kinetics were analyzed by CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), membrane integrity using fluorescents probes (propidium iodide and carboxyfluorescein), supravital test, eosin staining, integrity of plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes using the association of fluorescent probes (FITC-PSA, propidium iodide and JC-1) and sperm morphology. Semen was frozen using the method described by Chirinéa, 2006. Females were monitored since the beginning of proestrus, using vaginal smear and progesterone measurement, each 48hours. To inseminations, bitches were divided into two groups: Group 1, composed by 6 females, which were inseminated just once via intrauterine, with an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2mL and Group 2 constituted by 6 females, which were inseminated twice, via intravaginal, using an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2 mL/insemination. Results from semen analyses made before and after freezing did not show any difference, except for sperm morphology and association of fluorescents probes. Pregnancy rate was 66,6% (4/6) on Group 1 and 16,6% (1/6) on Group 2. In conclusion, the success of artificial insemination depends not only on semen quality after thawed, but also on the AI technique used. In our work, intrauterine technique by laparotomy was better than intravaginal. / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: A nutrição é um dos principais fatores que afetam diretamente o metabolismo produtivo e reprodutivo dos animais. Dentre os fatores nutricionais a proteína é um dos elementos mais importantes. Este estudo objetivou a análise de possíveis alterações no sistema reprodutivo de carneiros mediadas pela diferença de proteínas fornecidas na dieta total. Foram instituídas quatro dietas com distintos níveis protéicos: A- (controle) 13,4% PB; 210 g/dia PM; B- 11,4% PB e 187 g/dia PM; C- 17,5% PB e 231 g /dia PM; D-22,4% PB e 215,0 g/dia PM. As coletas de dados foram realizadas em D0; D20; D40; D80; D120. Durante o experimento os animais foram pesados e avaliados quanto a condição corporal; foi feita coleta de sêmen e avaliação em sistema computadorizado (CASA), ultrassonografia e citologia testicular; e dosagem de testosterona, T3 e T4. Os dados obtidos neste estudo, mostraram que a dieta A, não provocou alterações no sistema reprodutivo, portanto foi considerada a mais indicada a carneiros em atividade reprodutiva. / Abstract: Nutrition is one of the main factors that directly affect the productive and reproductive metabolism of animals. Among nutritional factors, protein is one of the most important elements. The objective of this study was to analyze the possible alterations in the reproductive system of rams mediated by the difference of proteins provided in the total diet. Four diets were established, with distinct protein levels: A- (control) 13,4% CP (Crude Protein); 210 g/day MP (Metabolized Protein); B- 11,4% CP and 187 g/day MP; C- 17,5% CP and 231 g /day MP; D-22,4% CP and 215,0 g/day MP. Data collections were performed in D0; D20; D40; D80; D120. During the experiment, animals were weighted and evaluated concerning body condition; semen collection and evaluation were carried out in computer system (CASA); ultrasound examination and testicular cytology; and hormonal count of testosterone, T3 e T4. The results obtained in this study showed that diet is A did not cause changes in the reproductive system of rams. Therefore, it was considered the most appropriate for rams in reproductive activity. / Mestre

Resumo: Efeitos deletérios dos radicais livres causam a lipoperoxidação da membrana plasmática dos gametas feminino e masculino e dos embriões cultivados in vitro, sendo responsável por perda da produção in vitro de embriões e redução da fertilidade in vivo. O estudo foi realizado com objetivo de investigar o efeito protetor do diluidor de sêmen contendo antioxidante submetido à criopreservação e avaliado por testes complementares (teste de termo resistência, hiposmótico e fluorescência), pela inseminação artificial e fertilização in vitro. Ejaculados de cinco touros foram agrupados nos seguintes tratamentos: 1 - Diluidor Tris - gema (controle - Dil C); 2 - Diluidor Tris -gema + Trolox 200mM (antioxidante-Dil T). Amostras com os diluidores com concentração final de 25 x 106 espermatozóides/ palheta foram envasadas em palhetas de 0,25 mL. Em uma fazenda localizada no Mato Grosso do Sul - MS, foram inseminadas 300 novilhas Nelore, e para cada touro realizou-se 60 inseminações artificiais (palhetas descongeladas em 35°C por 20 seg). Oócitos com citoplasma homogêneo e cumulus compacto de ovário de vacas de abatedouro foram selecionados e maturados em grupos de 25 por gota em 100μl de meio TCM 199 com SFB, FSH, hCG e estradiol, piruvato de sódio e amicacina, por 24 horas, sob óleo mineral, e foram cultivados com 5% CO2 e 95% umidade em ar, a 38,5ºC. Depois da maturação, os oócitos foram colocados em gotas com TALP contendo BSA, PHE e 10μg/ml de heparina com 1x 106 espermatozóides móveis por ml. Quatro palhetas (duas - DC e duas - DT) do mesmo touro e ejaculado foram descongeladas e cada palheta foi processada por um método de separação espermática para recuperação do sobrenadante: método de lavagem (duas centrifugações de 36xg por 5 min em 2ml de TL-sêmen) e gradiente de Percoll (45 e 90%, submetido a centrifugação a 500xg por 30 min)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Deleterious effects of free radicals cause lipoperoxidation of the plasmatic membrane of female and male gametes and in vitro cultured embryos, being responsible for losses in in vitro production of embryos and reduction in in vivo fertility. The objective of this study was to investigate the protective effects of semen extender containing antioxidant submitted to cryopreservation and evaluated by artificial insemination, in vitro fertilization and complementary tests (hyposmotic, fluorescence, and thermal resistance tests). Ejaculates from 5 bulls were treated with Tris egg yolk extender (control-CE) alone or supplemented with 200ml Trolox in the extender (antioxidant-AE). The samples with the extenders with a final concentration of 25 x 106 spermatozoa/ml were placed into 0.25 ml straws. Three hundred Nelore heifers from a cattle farm in Mato Grosso do Sul - MS, were separated into 5 groups of 60 animals. For artificial insemination, the straws were thawed at 35°C for 20 sec and the females in each group were inseminated with semen of the same bull, using 30 female for each semen extender treatment. For in vitro fertilization, oocytes with homogeneous cytoplasm and compact cumulus, collected from ovaries of slaughtered cows were selected and maturated in groups of 25 in droplets of 100μl TCM 199 medium with FCS, FSH, hCG and estradiol, sodium pyruvate and amicacin, for 24 hours, under mineral oil, in atmosphere of 5% CO2 and 95% humidity in air, at 38.5ºC. After maturation, the oocytes were placed in droplets with TALP containing BSA, PHE and 10μg/ml of heparin with 1x 106 motile spermatozoa/ml...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Paulo Henrique Franceschini / Coorientador: Antônio Cláudio Tedesco / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: César Roberto Esper / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: José Domingos Guimarães / Doutor

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O processo de criopreservação afeta a capacidade funcional dos espermatozóides, diminuindo a fertilidade. Tendo conhecimento desses danos a diluição do sêmen é necessária antes de submetê-lo ao choque térmico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o sêmen bovino congelado com dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma delas submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e a outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). Após a diluição o sêmen foi congelado e armazenado em nitrogênio líquido de acordo com os padrões pré-estabelecidos da central de inseminação artificial. No experimento I, cinco palhetas do diluidor A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade (análise subjetiva e computadorizada), vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termo-resistência lento (TTL), avaliação da integridade de membranas por meio da associação das sondas Iodeto de Propídio (PI), Isotiocionato de Fluoresceína - Pisum sativum (FITC-PSA) e Carbocianina Catiônica Lipofílica (JC-1) e avaliação funcional da membrana plasmática através do teste hiposmótico (HIPO). A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina (LA). No experimento II, o sêmen congelado com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro (FIV), sendo observada as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. A análise estatística foi efetuada através dos testes de Análise de Variância (ANOVA), teste de Tukey e teste de Wilcoxon. Em relação aos resultados obtidos com os experimentos I e II não foi observado diferença estatística entre os diluidores testados, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays the embryo transfer is a biotechnology widely used, however not much is know about the best place to put embryos into the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum (CL). In addition, not much is known about the morphological characteristics thorough the uterine horn and if it could improve or damage the uterine environment. The aims of this study were: to investigate the effect of the site of embryo placement (cranial, medial or caudal) into the uterine horn adjacent to the CL on pregnancy rates; to analyze the morphology from these tree portions of the both uterine horns adjacent and opposite to CL using histology and scanning electron microscopy; and establish the relation between pregnancy rates and morphofunctions characteristics to indicate the best place to transfer embryos. In this study 600 in vivo produced embryos (fresh and frozen-thawed) and 315 in vitro produced embryos were transferred to Holstein and crossbred recipients, in order. Nine crossbred heifers were slaughtered approximately seven days after estrus and the uterus were studied to analyze its morphology at the same time that the embryos have been transferred. The results showed that the site of embryo placement did not influence (P>0.05) the pregnancy rates in recipients receiving fresh embryos during summertime. During the winter, the pregnancy rates were greater (P<0.05) for fresh embryos transferred into the caudal portion of the uterus horn than cranial portion. For animals that received in vitro produced embryo, the site of embryo placement did not interfere (P>0.05) in the pregnancy rates. Morphophological characteristics observed by histology and scanning electron microscopy was similar in all parts of the uterine horn ipsilateral to the CL studied. However, the average number of blood vessels counted was lower in the contralateral uterine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre