Resumo: Com a crescente disponibilidade das biotécnicas de reprodução animal, o comércio dos produtos envolvidos com essas práticas também está em expansão, oferecendo a possibilidade de melhoria dos índices zootécnicos às produções de bovinos. Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA ("RTP Bacteria DNA Mini Kit" (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os "primers" B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os "primers" Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o "status" sanitário da reprodução de bovinos no Brasil / Abstract: With the increasing disponibility of animal reproduction biotechniques, trading of products involved with these activities is also in expansion offering improving possibilities in zootecnic indexes of bovine herds. However, considerations should be taken about sanitary risks in practices like artificial insemination if any control is applied to this biological material. Among infectious agents that could be present and transmitted by semen are leptospirosis and brucellosis, diseases that are responsible for numerous reproductive and economic losses in world's cattle culture. The goals of this project were to molecularly detect these pathogens in bovine semen samples from Brazilian artificial insemination centers using a commercial kit for DNA extraction (RTP Bacteria DNA Mini Kit (Invitek®), to improve it for extracting bacterial DNA from semen and to analyze its applicability in laboratory routine. Bacterial DNA was extracted and quantified by agarose gel electrophoresis. We also intended to realize polymerase chain reaction (PCR) using primers B4 and B5 for amplification of Brucella spp. DNA and primers Lep 1 e Lep 2 for Leptospira spp. DNA. The extraction kit was successfully optimized and all of 96 examined samples were negative for any bacterial DNA. Results could be useful to establish alternative measures of sanitary control in semen donors and to allow the supplying of genetic material free of pathogens, increasing sanitary status of bovine reproduction in Brazil / Orientador: Raul José Silva Gírio / Coorientadora: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antonio Dell'Aqua Junior / Banca: Eunice Oba / Banca: Alicio Martins Junior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: O objetivo do estudo foi comparar a efetividade de três diluidores empregados para criopreservação e refrigeração do sêmen bovino em relação aos padrões de motilidade, integridade de membrana plasmática e acrossomal, índice de peroxidação lipídica e fertilidade nos programas de inseminação artificial em tempo-fixo (IATF). No Trabalho científico número 1 foi comparado a viabilidade e fertilidade pós-descongelação proporcionada pelos diluidores Tris-frutose (TRIS, Controle) e Botu-Bov® (BB), ambos contendo 20% de gema de ovo como fonte de lipoproteínas, frente à diluição em Botu- Bov®-Lecitina de Soja (meio BB-L) apresentando 1% de lecitina em substituição ao produto de origem animal. No Trabalho 2 foram avaliados os mesmos diluentes quando utilizados para a refrigeração do sêmen bovino por 48 horas a 5°C. Já no Trabalho número 3 foi avaliada a taxa de concepção na inseminação artificial (C/IA) proporcionada pelo sêmen bovino refrigerado por 24 horas em meio Botu-Bov® em comparação ao sêmen convencionalmente criopreservado no mesmo diluidor. Os meios TRIS e BB a base de gema de ovo foram mais efetivos na manutenção da viabilidade espermática pósdescongelação, conferindo melhores resultados de C/IA (P<0,05) em relação ao meio BBL. No entanto, quando utilizado o sêmen na forma líquida e refrigerado (Trabalho número 2) foi observada uma maior proteção contra o estresse oxidativo proporcionado pelo diluidor a base de lecitina de soja, resultando em maior probabilidade de prenhez quando comparado às amostras refrigeradas em TRIS ou BB, alcançando índice de concepção similar ao obtido com o sêmen congelado. A utilização do sêmen bovino refrigerado por 24 horas levou ao aumento da C/IA de vacas submetidas a IATF quando comparado ao sêmen congelado em meio Botu-Bov®. Conclui-se que embora a lecitina de soja represente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to compare three different extenders used for cryopreservation of bovine semen, based on the results obtained during the cooling storage and post-thaw evaluation for motility patterns, integrity of plasmatic and acrossomal membranes, lipid peroxidation rate, as well as conception rate after fixed-time artificial insemination (FTAI). In Paper.1, the efficiency of Tris-Fructose extender (TRIS, control group), Botu-Bov® extender (BB), both containing 20% of egg yolk, and Botu-Bov®-Lecithin extender (BBL), which has 1% of soy lecithin instead of egg yolk, were compared in cryopreservation of bovine semen. In Paper.2, ejaculates from different bulls were cooled to 5°C for 48 hours using the same extenders of Paper.1. In Paper.3 the fertility trial was conducted either with frozen-thawed semen or cooled semen for 24 hours in the BB extender. The egg yolk extenders, TRIS and BB, demonstrated significant differences on the viability and the fertility of frozen-thawed bovine semen when compared to BB-L (P<0.05). However, the use of lecithin instead of egg yolk on semen extender resulted in a greater protection against oxidative stress; moreover, this extender improved the conception rates, reaching the results obtained in FTAI programs with frozen-thawed semen. The use of cooled bovine semen at 5°C for 24 hours improves the conception rate of Nelore cows submitted to FTAI. Although soy lecithin is an interesting alternative source of phospholipids in the elaboration of chemically defined extenders and decrease the risk of microbiological contamination, the egg yolk semen extenders are more effective in preserving the viability and fertility of frozen-thawed bovine semen. However, there was a higher production of free radicals in cooled semen with the use of egg yolk based extenders, resulting in lower conception rates when compared to frozen-thawed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: Em eqüinos existe um grande interesse em se desenvolver e aprimorar técnicas de inseminação artificial que possibilitam a obtenção de bons índices de fertilidade utilizando um baixo número de espermatozóides. O presente trabalho teve como objetivos avaliar: 1) a viabilidade, in vitro, do sêmen congelado de garanhões após a diluição em fluido folicular pré-ovulatório de éguas; 2) a população espermática no oviduto de éguas, utilizando diferentes técnicas de inseminação; 3) a fertilidade de éguas após a utilização de diferentes técnicas de inseminação artificial, utilizando um baixo número de espermatozóides; 4) a reação inflamatória na cavidade peritoneal após as inseminações intrafoliculares e intraperitoneais; 5) averiguar o efeito da presença de espermatozóides dentro do folículo pré-ovulatório, na capacidade de fertilização do oócito. No experimento 1 foram realizadas análises laboratoriais da viabilidade espermática, de sêmen congelado de garanhões sem diluição (GI), diluído em Kenney (GII) e diluído em fluido folicular (GIII). Observou-se que porcentagem de espermatozóides com membrana plasmática íntegra não diferiu significativamente entre os grupos (p>0,05). Também não foi observado diferença estatística (p>0,05) entre os grupos na porcentagem de espermatozóides vivos com membrana acrossomal íntegra. A motilidade total foi significativamente inferior (p<0,05) no grupo em que o sêmen foi diluído em fluido folicular (GIII) apenas no primeiro momento, logo após a diluição (T0). A motilidade progressiva foi significativamente maior (p<0,05) no grupo diluído com Kenney (GII) do que nos demais grupos em T0 e três horas após (T3). A velocidade espermática ao longo de uma trajetória média (VAP) foi significativamente maior (p<0,05) em GIII do que em GI nos momentos T0, após uma (T1) e duas horas (T2) da diluição. / Abstract: The objective of the present study was to evaluated the viability, in vitro, of stallion frozen semen after dilution in mare's pre-ovulatory follicular fluid; assess sperm population in mares's oviduct using differents artificial insemination techinics; verify the fertility of of differents artificial insemination techinics in mares with low sperm number; assess if mares develop an inflamatory reaction in the peritoneal cavity after intraperitoneal and intrafollicular insemination and to verify if the presence of sperm in pre-ovulatory follicle could interfere on oocyte fertilization capacity. In experiment 1, frozen-thawed semen viability was evaluated without dilution (GI) and after dilution with Kenney or Mare's pre-ovulatory follicular fluid. The percentage of sperm with plasmatic membrane integrity was not different between the groups (p>0,05). No statistical difference (p>0,05) was observed between the groups in percentage of live sperm with intact acrosome. Total motility (MT) was significantly lower (p<0,05) in follicular fluid group (GIII) just in the first moment (T0). Progressive motility was significantly higher (p<0,05) in group diluted with Kenney (GII) than the other groups in T0 and 3 hours after (T3). Average path velocity (VAP) was significantly higher (p<0,05) in GIII than GI in moments T0, T1 and T2. Straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL) and Beat cross frequence (BCF) were significantly lower (p<0,05) in GI in moments T0, T1 and T2, when compared with GIII. No statistical difference (p>0,05) were observed in amplitud of lateral head (ALH), straightness (STR) and percentage of sperm with linear (LIN) and rapid (RAP) movement between GI and GIII in any moment. In T3 no statistical difference was observed (p>0,05) between all groups in any motility parameters analyzed. / Doutor

Resumo: O presente estudo objetivou identificar o perfil eletroforético seminal, as características do espermograma e fertilidade in vitro, do sêmen de touros proveniente dos períodos pré e pós-indução do processo degenerativo testicular por insulação. Para isso, foram selecionados quatro animais da raça Nelore, com idade entre trinta e trinta e seis meses. Amostras de sêmen foram colhidas três dias antes (P0) da indução do processo degenerativo e, sete (P7), quatorze (P14) e vinte e um (P21) após a retirada do insulto testicular com cinco dias de duração. Para a análise dos dados foram considerados três experimentos: 1) efeito dos períodos experimentais (P0, P7, P14 e P21) sobre o espermograma e perfil eletroforético do plasma seminal e membrana plasmática dos espermatozóides; 2) efeito dos períodos experimentais e seleção espermática por gradiente de Percoll sobre as características seminais e 3) fertilidade in vitro e associação com características seminais oriundas do período pré e pósinsulto testicular. No experimento 1, os espermogramas foram avaliados por métodos convencionais, coloração de Fuelgen para estimativa do percentual de fragmentação nuclear (FN) e, perfil eletroforético do plasma seminal e espermatozóides por SDSPAGE a 12,5%... / Abstract: The study was conducted to evaluate the seminal gel electrophoresis profile, spermogramme characteristics and in vitro fertility rate, of semen obtained before and after induction of the testicular degenerative process by scrotal insulation. Four Nelore bulls, between thirty and thirty-six months of age, were subjected to a five days scrotal insult. Semen samples were collected three days (P0) before scrotal insulation and seven (P7), fourteen (P14) and twenty-one (P21) days after the removal of the testicular insult. Three experiments were considered for data analysis: 1) effect of the experimental periods (P0, P7, P14 and P21) on the spermogramme and seminal plasma and plasmatic membrane of spermatozoa gel electrophoresis profile; 2) effect of the experimental periods and sperm selection by Percoll gradient on the seminal characteristics; and 3) in vitro fertility rate and association with seminal characteristics from periods before and after testicular insult. In the experiment 1, the spermogrammes were evaluated by conventional methods beside in the Fuelgen stain for nuclear fragmentation (NF) and proteins profile by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE, 12,5%)... / Orientador: Antonio Emídio Dias Feliciano da Silva / Coorientador: Margot Alves Nunes Dode / Doutor

Resumo: Está sendo amplamente difundida no Brasil e no mundo a sexagem de sêmen bovino através de citometria de fluxo. Considerando que não só o processo de criopreservação como também o processo de separação causam danos às células, esses danos têm sido amplamente estudados buscando-se alcançar maior proteção para o sêmen sexado durante a congelação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia de congelação de sêmen sexado bovino com a utilização de dois diferentes diluentes. Para isso, 2 ejaculados de 10 touros em idade reprodutiva foram coletados em vagina artificial, avaliados e preparados para a separação por citometria de fluxo. Após a passagem pelo citômetro, as amostras foram divididas em 3 grupos (diferentes metodologias). Todos os grupos foram divididos em 2 subgrupos (diferentes diluentes: TRIS meio extensor padronizado pelo laboratório em questão e o diluente Botu- Bov®, meio extensor comercializado no Brasil Biotech Botucatu). Para o grupo 1 (GI) a medotologia utilizada foi a mesma padronizada pelo protocolo Sexing Technologies do Brasil; para o grupo 2 (GII), foi utilizado glicerol para o inicio da refrigeração; e para o grupo 3 (GIII) a glicerilização foi realizada a 18ºC e não a 5ºC como no controle (GI). A avaliação do sêmen foi realizada através de análise computadorizada (CASA) e por sondas fluorescentes para função mitocondrial e integridade da membrana plasmática e acrossomal. Para análise estatística utilizou-se o método Tukey com nível de significância p<0,05...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The sexed semen using flow citometry has been widely spread in Brazil and all over the world. The damage caused by the process of cryopreservation and separation is well known. Therefore, the sexed semen needs a higher protection during freezing process. The aim of the present study was to develop a bovine sexed semen freezing methodology with two different extenders. Thus 2 ejaculates of 10 bulls in reproductive age were collected with artificial vagina, analyzed and than prepared for the separation with flow citometry. After this procedure the samples were divided in 2 groups (different methodologies) and both groups were divided in 2 subgroups (different extenders: TRIS and Botu- Bov®). For group 1 (GI) the methodology applied was the same standardized by the protocol of Sexing Technologies of Brazil; for group 2 (GII) it was used glycerol for the beginning of the freezing and for group 3 (GIII) addition of glycerol was made at 18°C. The semen evaluation was made through CASA and fluorescent probes for the plasmatic and acrossomic membrane integrity and mitochondrial function. The statistic analysis was achieved using the Tukey method with significant level p < 0,05. There was no significant statistic difference for the analyzed parameters in regard to the methodology used; only the percentual of intact plasmatic membrane from GII with TRIS presented a smaller value compared to the other groups, also using TRIS. A significant difference between the extenders occurred in the main parameters evaluated, and Botu-bov® presented better results. The Botu-Bov® extender presented higher motility and higher number of cells after percoll...(Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Coorientador: José Antonio Dell'Aqua Junior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Frederico Ozanam Papa / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: A correta orientação do Médico Veterinário, aos proprietários de cães, usados com finalidades reprodutivas, submetidas à quimioterapia com cisplatina, é importante na medida que este agente citostático age nas células em constante divisão, podendo ser citotóxico para as células germinativas testiculares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade espermática através do espermograma, ultra-som e avaliação de ultraestruturas do testículo de cães que receberam cisplatina em diferentes momentos de análise espermática. A dose utilizada foi de 70 mg/m², dose terapêutica, em intervalos de 21 dias, totalizando 4 infusões. Os cães foram divididos em dois grupos de 4 animais cada, sendo que um dos grupos recebeu a quimioterapia e o protocolo de diurese para proteção renal, já o grupo controle não recebeu a cisplatina, estando sujeito apenas aos fatores ambientais e ao tratamento suporte. Os resultados obtidos demonstraram que a cisplatina influenciou na qualidade espermática de cães, pois elevou as patologias maiores e totais acima do aceitável para cães aptos a reprodução, além de alterações de volume testicular observados pelo exame ultra-sonográfico ao longo dos tratamentos e constatação da degeneração testicular em variados graus observados pela análise ultraestrutural. Portanto, infere-se que este citostático possa acarretar alterações morfofuncionais nos túbulos seminíferos / Abstract: The Veterinary Doctor's correct orientation, to the proprietors of dogs, used with reproductive purposes, submitted to the chemotherapy with cisplatin, it is important in the measure that this citostatic agent acts in the cells in constant division, could be toxicity for the testicle germ cells . The objective of that work was to evaluate the spermatic quality through the spermogram, ultra-sound and evaluation of ultrastructures of the testicle of dogs that received cisplatin in different moments of spermatic analysis. The used dose was of 70 mg/m², therapeutic dose, in intervals of 21 days, totaling 4 infusions. The dogs were divided in two groups of 4 animals each, and one of the groups received the chemotherapy and the diuresis protocol for renal protection, the group control didn't already receive the cisplatin, being just subject to the environmental factors and the treatment supports. The obtained results demonstrated that the cisplatin influenced in the spermatic quality of dogs, because it elevated the larger and total pathologies above the acceptable for capable dogs the reproduction, besides alterations of volume testicular observed by the ultra-sound exam along the treatments and verification of the degeneration testicular in varied degrees observed by the analysis ultrastructural. Therefore, it is inferred that this citostatic agent can cart alterations morphofunctional in the seminiferous tubules / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Banca: César Roberto Esper / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram de facilitar os procedimentos de formação de gradientes de- densidade de Percoll e OptiPrep para separação de espermatozóides X; avaliar a eficiência da sexagem de espermatozóides X, a viabilidade espermática e integridade do acrossoma e do DNA após a centrifugação nestes gradientes e avaliar taxa de clivagem e blastocisto durante a produção in vitro de embriões. Para isso, doses de sêmen de touros foram descongeladas e cerca de 40 milhões de espermatozóides foram colocados sobre cada gradiente de densidade compostos por Percoll ou OptiPrep com três camadas que variaram entre 1.11 Og/mL a 1.123g/mL em tubos de poliestireno de 15mL. Centrifugou-se o gradiente a 500xg por 15 min a 22°C. Os sobrenadantes foram aspirados e recuperados para verificação da viabilidade espermática e integridade do acrossoma, fragmentação do DNA, produção in vitro de embriões, avaliação da eficiência da sexagem pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e sexagem dos embriões pela PCR. A porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto diminuiu (P<0,05) após a centrifugação nos gradientes de densidade, mas não influenciou, de modo geral, a produção in vitro de embriões (taxa de clivagem e blastocistos) utilizando estes espermatozóides centrifugados. Não foi detectada fragmentação do DNA dos espermatozóides nas amostras centrifugadas. Os resultados demonstraram que o Percoll enriqueceu as amostras com espermatozóides X (62% de fêmeas, P<0,05). No OptiPrep e grupo Controle a porcentagem de fêmeas foi de 47,1 e 48,7%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA dos espermatozóides, com uma subestimação apenas no Percoll. Foi possível realizar a sexagem, por uma metodologia mais simples, facilitando o procedimento de centrifugação em gradiente de densidade e sem provocar danos aos espermatozóides. / Abstract: The objectives of this work were to facilitate the procedures of formation of density gradients of Percoll and OptíPrep for separation of X-bearing bovine spermatozoa; to evaluate the efficiency of sexing and viability of acrosome integrity and DNA after centrifugation in these gradients and to assess the cleavage and blastocyst rate during in vitro production of embryos. For this, frozen-thawed spermatozoa (20 to 40 millions) were deposited on each density gradient composed of Percoll or OptiPrep with three layers that varied between 1.110g/mL to 1.123g/mL, in 15mL polystyrene tubes. The tubes were centrifuged at 500xg for 15 min at 22oC. Supernatants were carefully aspirated and sediments recovered for verification of sperm quality, DNA fragmentation, in vitro fertilization of embryos, evaluation of the efficiency of sexing by real time polymerase chain reaction (qPCR) and sexing of embryos by PCR. Percentage of live spermatozoa with intact acrosome decreased (P<0.05) after centrifugation in density gradients, however, it not influence, in general, the production of embryos in vitro (cleavage and blastocyst rates) using these centrifuged sperm. No sperm DNA fragmentation was detected in centrifuged samples. The results of embryo sexing by PCR showed deviation to female in the Percoll group (62%, P<0.05). In the OptiPrep and Control group the percentage of females was 47.1 and 48.7%, respectively. These results were confirmed by qPCR of DNA of spermatozoa, with an underestimation only in the Percoll group. It was possible the sexing, by a simple approach, facilitating the process of the centrifugation in density gradient and without damage to sperm. / Doutor

Orientador: Raul José Silva Gírio / Banca: Vicente Borelli / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Banca: Luís Antônio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Resumo: O trabalho presente objetivou pesquisar a presença de Leptospira interrogans sorovar Canicola em 32 cães, dos quais 20 infectados e 12 controle, em 4 grupos de estudo com 5 infectados e 3 de controle. No G1 os animais foram eutanasiados 7 dias após a inoculação, no G2, 15 dias, no G3, 30 dias e no G4 45 dias. Colheu-se sêmen, urina e sangue nos dias 0, 3, 5, 7, 10 e após, a cada 5 dias, com realização de exames andrológicos do sêmen e bioquímicos da urina e do sangue, e reação em cadeia da polimerase (PCR) dessas amostras. Avaliou-se o estado clínico, e o soro sangüíneo foi submetido à soro-aglutinação microscópica (SAM). Os títulos sorológicos dos infectados chegaram a 2.560. Na PCR, detectou-se DNA de leptospiras primeiro no sêmen e depois na urina, e não se detectou nos testículos, epidídimos, próstata, rins e fígado. Na Levaditi, foi encontrada leptospira em um fígado, e no histopatológico, 5 animais com prostatite, evidenciada também pelo aumento do número de espermatozóides com a patologia cabeça isolada. O exame andrológico mostrou declínio na motilidade, no vigor, na concentração espermática e defeitos maiores acima de 10%. No hemograma, observou-se alterações a partir do dia 3 pós-infecção, e ao exame bioquímico a partir do dia 30, indicando possíveis alterações hepáticas e renais. Conclui-se que cães infectados com Leptospira interrogans sorovar Canicola apresentam queda na qualidade espermática, sendo importantes fontes de infecção para o homem e animais, podendo inclusive transmitir a leptospirose por meio de sêmen nos primeiros dias pós-infecção, antes da transmissão urinária, sendo detectada pela PCR anteriormente a SAM. / Abstract: The present study aimed to investigate the presence of Leptospira interrogans serovar Canicola. in 32 dogs, of which 20 are infected and 12 control, 4 study groups with 5 infected and 3 of control. In G1 animals were euthanasing 7 days after inoculation, the G2, 15 days, the G3, 30 days in the G4 and 45 days. It is collected semen, urine and blood on days 0, 3, 5, 7, 10 and after, every 5 days, with laboratory tests of semen andrological and biochemical of urine and blood, and polymerase chain reaction (PCR ) Of these samples. Evaluated the clinical status, and serum was submitted to serum-microscopic agglutination (SAM). The serological evidence of infection arrived in 2560. In PCR, DNA was found in semen of leptospires first and then in the urine, and is not detected in testis, epididymis, prostate, kidney and liver. In Levaditi, was found leptospira in a liver, and the histopathology, 5 animals with prostatitis, evidenced also by increasing the number of sperm with the pathology head alone. The examination showed andrologic decline in motility, in effect, defects in sperm concentration and higher above 10%. In the blood, it was observed changes from day 3 post-infection, and the biochemical examination on the day 30, indicating possible kidney and liver abnormalities. It follows that dogs infected with Leptospira interrogans serovar Canicola present decrease in sperm quality, and important sources of infection for humans and animals, which may include forward to leptospirosis through semen during the first day post-infection, before urinary transmission, and PCR detected earlier by the SAM. / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Alício Martins Junior / Resumo: A despeito das inúmeras variáveis que influenciam direta e indiretamente a fertilidade das fêmeas bovinas, a qualidade das amostras seminais exerce um papel importante na determinação das taxas de concepção dos programas de inseminação artificial. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores de criopreservação de sêmen bovino no processamento de amostras seminais apresentando diferentes concentrações espermáticas em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia quando utilizada em programas de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em bovinos (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 14 ejaculados de diferentes touros da raça Nelore. Cada ejaculado foi fracionado em oito alíquotas iguais, submetidas a criopreservação com os diluidores Tris-gema de ovo-frutose (meio TRIS) e MKA nas concentrações de 12, 25, 50 e 100 milhões de espermatozóides totais por mililitro de meio, formando oito grupos experimentais em função das variáveis diluidor e concentração. As amostras foram descongeladas a 46 ºC por 20 segundos, avaliando-se os padrões de motilidade através do método computadorizado (CASA), integridade de membrana plasmática (IMP), resistência ao teste de termorresistência rápido (TTR) e taxa de recuperação e IMP após seleção espermática pela técnica de swim-up. Para o Experimento II foram selecionados sete touros utilizados no Experimento I, obtendo-se um ejaculado de cada animal por eletroejaculação...(Resumo completo, clicar acesso eletrõnico abaixo) / Abstract: Although there are many variables which directly or indirectly influence female bovine fertility, the quality of sperm samples plays a important role in the determination of conception rates in artificial insemination programs. The aim of the present study was to compare the efficiency of two bovine semen extenders for sperm freezing with different spermatic concentrations in the freezability determined by lab tests (Experiment I), and conception rates after fixed time artificial insemination (FTAI; Experiment II). In Experiment I 14 ejaculates of different Nelore bulls were used. Each ejaculate was splitsampled in to eight equal parts and then submitted to cryopreservation with Tris-egg yolk fructose (TRIS) and MKA extenders, at concentrations of 12, 25, 50 and 100 millions spermatozoa per milliliter forming eight experimental groups. The samples were thawed at 46 ºC for 20 seconds, and the following parameters were evaluated: sperm motility and movement (by computer-assisted semen analysis - CASA), sperm membrane integrity (SMI), resistance to the fast thermoresistance test (TT), recovery rate and sperm membrane integrity after sperm selection through swim-up technique. Seven of 14 bulls used in Experiment I were selected for Experiment II, and semen was collected from each of the animals by electroejaculation. The seven ejaculates obtained were mixed (semen pool) and cryopreserved, thus forming eight experimental groups according to the freezing extenders and sperm concentrations/straws: TRIS 12, 25, 50 and 100, and MKA 12, 25, 50 and 100...(Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Rui Machado / Banca: Jairo Pereira Neves / Banca: César Roberto Esper / Banca: Cezinande de Meira / Resumo: Objetivando testar a ação do colesterol, desmosterol, ácido oléico-linoléico ou Q-Iactoalbumina sobre os espermatozóides ovinos, alíquotas de sêmen de 25 carneiros foram submetidas à criopreservação após tratamento com essas substâncias. O sêmen foi avaliado antes do processamento e após a refrigeração, descongelação e incubação quanto à, cinética pela análise subjetiva e computadorizada (CASA), morfologia, avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática (IMP) e do acrossomo (IAC) e do potencial de membrana mitocondrial (PMM) pela associação da aglutinina de Pisum sativum conjugada ao isotiocianato de fluoresceína (FITC-PSA), iodeto de propídio (PI) e JC-1 e, status de capacitação pela c10rtetraciclina (CTC). A influência dos aditivos em poucos parâmetros não foi suficiente para sugerir a superioridade de qualquer um dos tratamentos. A criopreservação provocou prejuízos à cinética, IMP, IAC, PMM, além de induzir a capacitação e reação do acrossomo. Foram observadas diferenças entre grupos de carneiros quanto ao status de capacitação no sêmen in natura, assim como na sensibilidade desse sêmen à crioinjúria e criocapacitação. Após a descongelação, as mudanças semelhantes à capacitação foram maiores nos animais de menor IMP. A segregação dos carneiros de acordo com a crioresistência da membrana plasmática norteou o comportamento de vários outros parâmetros. Conclui-se, que o colesterol, desmosterol, ácido oléico-linoléico e alactoalbumina não protegem o sêmen ovino contra as crioinjúrias, que a congelação-descongelação é mais danosa que a refrigeração e, que existem diferenças entre grupos de indivíduos relacionadas à crioresistência e criocapacitação espermática. / Abstract: In order to evaluate the proteeting aetion of some substanceson ram spermatozoa, semen samples of 25 rams were colleeted and submitted to cryopreservation after treatment with cholesterol, desmosterol, oleic-linoleic acid or Q-Iactalbumin. Before the processing and after the procedures of cooling, freezing-thawing and incubation, semen was evaluated as to kínetcs by subjective and computerized analyses (CASA), morphology, simultaneously to plasma membrane integrity (PMI), acrosome integrity (ACI) and mitochondrial membrane potential (MMP) by isothiocyanate-conjugated Pisum sativum (FITCPSA), propidium iodide (PI) and JC-1 combination and as to sperm capacitation and acrosome reaction determined by chlortetracycline (CTC) assay. The influence resulted from the additives in a few parameters was not enough to suggest the superiority of any treatments. The cryopreservation process, especially the freezing-thawing, promotes damages to kinetics, PMI, ACI, MMP and induees accelerated eapacitation and acrosome reaction in spermatozoa. Differenees among groups of rams were observed regarding capacitation status in fresh semen as well as the sensibility of their semen to cryoinjury and cryocapacitation. Higher and more accelerated capacitation-like ehanges were observed in groups of rams presenting lower plasmatic membrane cryoresistance after thawing. The segregation of rams in different levels of PMI influenced the behavior of several other parameters. It was concluded that cholesterol, desmosterol, oleic-Iinoleic acid and Q-Iactalbumin do not protect the ram semen against the cryoinjuries as well as freezing-thawing is more harmful than cooling. Important differenees among groups of individuais were noticed as for the spermatozoa resistance to the damages provoked by cryopreservation such as the eryocapacitation susceptibility. / Doutor