A criação de equinos tem se desenvolvido ativamente no Brasil. Assim, o interesse dos proprietários em biotecnologias reprodutivas equinos vem aumentando. Entretanto, o sêmen equino tem baixa tolerância à criopreservação comparada com outras espécies, sendo o estresse oxidativo um entrave por seus efeitos deletérios sobre a célula espermática. Neste contexto, o plasma seminal possui antioxidantes que promovem um papel importante na proteção do espermatozoide. Porém o, durante o processo de criopreservação, o plasma seminal é retirado. Em estudo anterior verificamos que, na ausência do plasma seminal os espermatozoides equinos tornam-se mais susceptíveis ao estresse oxidativo, principalmente causado pelo malondialdeído (MDA), subproduto da oxidação de lipídeos. Um dos motivos para este resultado seria a retirada da carnosina, um dos principais antioxidantes responsáveis pela proteção contra o acúmulo de MDA e seus efeitos deletérios, presente no plasma seminal. O objetivo do presente estudo é identificar e quantificar carnosina no plasma seminal de garanhões e comparar as características seminais em diferentes grupos de bons e maus refrigeradores e congeladores, baseando-se na análise da motilidade posterior ao processo de refrigeração e congelação. Foram colhidos dois ejaculados de quarenta garanhões (idades entre 4 e 16 anos de idade). As variáveis analisadas foram cinética espermática pelo sistema CASA, avaliação funcional (coloração de eosina-nigrosina para membranas, fast-green/rosa bengala para acrossomos, coloração 3-3diaminobenzidina para atividade mitocondrial e SCSA™ para susceptibilidade a denaturação de cromatina) e avaliação do índice de peroxidação lipídica (TBARS) do espermatozoide e do plasma seminal. Também foram realizadas análises da integridade de membranas plasmática e acrossomal, e potencial de atividade mitocondrial pelas sondas fluorescentes PI, Hoescht 33342, FITC-PSA e JC-1 além da produção de (ROS) pelo espermatozoide com a sonda fluorescente CellRox. A carnosina do plasma seminal foi mensurada utilizando kit de ELISA Biomatik® comercial. Foram comparados os grupos bons e maus refrigeradores, e bons e maus congeladores (p≤0,05). Verificamos uma maior concentração de carnosina nos bons refrigeradores em relação aos que refrigeraram mau. Isso pode ter ocorrido pela maior concentração de TBARS no plasma seminal destes animais, possivelmente por um efeito fisiológico de reações de oxidação. Além disto, os bons refrigeradores apresentaram porcentagens significativamente maiores de células com alta atividade mitocondrial, acrossomo intacto e membrana intacta sugerindo um efeito benéfico da carnosina. Em relação ao efeito da congelação do sêmen, não foi observada diferença na concentração de carnosina entre os que congelaram bem ou não. Este resultado era esperado uma vez que, durante o processo de criopreservação do sêmen equino o plasma seminal é retirado. De fato, a maior porcentagem de células com lesão mitocondrial, de membrana e DNA lesado nos maus congeladores e as correlações entre as lesões e o estresse oxidativo pode indicar um mecanismo mitocondrial de geração de estresse oxidativo e consequente lesão das estruturas celulares. Conclui-se que a carnosina apresentou efeito protetor durante a refrigeração espermática protegendo contra injúrias causadas pela mesma e consequentemente é um dos fatores que melhora a qualidade espermática após 24 horas de refrigeração. / Equine breeding has been actively developing in Brazil, leading to increased interest in reproductive biotechnology. However, there is a limitation due to a tolerance of some stallions to cryopreservation, especially when compared to other species. In this context, oxidative stress represents an obstacle due to its deleterious effects on equine sperm. To counterattack such effect, seminal plasma has antioxidants that play an important role in protecting the sperm. However, during the cryopreservation process, the seminal plasma is withdrawn. In a previous study we verified that, in the absence of seminal plasma, equine spermatozoa are more susceptible to oxidative stress, mainly caused by malondialdehyde (MDA), a product of lipid oxidation. One of the reasons for this result would be the removal of carnosine present in the seminal plasma, one of the main antioxidants responsible for protection against the MDA accumulation and its deleterious effects. The objective of the present study was to identify and quantify carnosine in the seminal plasma of stallions and to compare the seminal characteristics in different groups of sperm samples with high and low tolerance to the cryopreservation or cooling, based on analysis of total motility after these processes. Two ejaculates of forty stallions (N= 80; ages between 4 and 16 years old) were collected. Each ejaculate was divided into two aliquots, one submitted to a 24h cooling and the other submitted to cryopreservation. The variables analyzed were: Computer Assisted Sperm Analysis (CASA system), functional evaluation (eosin-nigrosin stain for membranes, fast-green/rose bengal for acrosomes, 3-3\'diaminobenzidine staining for mitochondrial activity and SCSA™ for susceptibility to chromatin denaturation) and lipid peroxidation index (TBARS assay) of sperm and seminal plasma. Furthermore, plasma and acrossomal membranes integrities and mitochondrial membrane potential were also analyzed using the fluorescence probes PI, Hoescht 33342, FITC-PSA, JC-1 and ROS detection by CellRox fluorescent probes. Carnosine from the seminal plasma was measured using commercial Biomatik® ELISA kit. Thus, samples with high and low tolerance were compared (p≤0.05). We found a higher concentration of carnosine in good cooler compared to those showing low motility. This may have occurred in response to the higher concentration of TBARS in the seminal plasma of these animals, possibly due to a physiological effect of oxidation reactions. In addition, good coolers presented significantly higher percentages of cells with high mitochondrial activity, intact acrosome and intact membrane suggesting a beneficial effect of carnosine. Regarding the effect cryopreservation, no difference was observed between those with high and low post-thaw motility. This result was expected since, during the cryopreservation process of equine semen, the seminal plasma is removed. In fact, the higher percentage of cells with mitochondrial lesions, damaged membrane and fragmented DNA in bad freezers and the correlations between lesions and oxidative stress may indicate a mitochondrial mechanism of oxidative stress generation and consequent lesion of cellular structures. In conclusion, carnosine had a protective effect during sperm cooling, protecting against damages being probably one of the factors that improves sperm quality after 24 hours of refrigeration.

Sabe-se que a principal causa da diminuição do desempenho reprodutivo de um touro é o estresse térmico levando conseqüentemente à degeneração testicular. Esta alteração patológica poderá ocorrer mesmo nos animais zebuínos. O objetivo deste experimento foi verificar os efeitos da disponibilidade de sombras na pastagem sobre as características reprodutivas de touros da raça Nelore. Foram utilizados 10 touros com idades de 26 ± 2 meses. Previamente ao início do experimento, os animais foram mantidos durante 30 dias em regime de colheita de sêmen a cada 15 dias para avaliação das características físicas e morfológicas. Então, logo após, os animais foram classificados segundo um índice que representou a soma dos valores das características espermáticas e distribuídos uniformemente em dois grupos ou tratamentos experimentais: Com Sombra (CS) e Sem Sombra (SS). No grupo CS, cinco (5) animais foram colocados em um piquete (2 hectares) com área de sombra, consistente em Sombrites de polietileno com 90% de retenção da luz solar, com 10 m2 de sombra por animal. No grupo SS, os outros cinco (5) animais permaneceram em outro piquete (2 hectares) porém, não tiveram acesso à área de sombra. Foram realizadas colheitas de sêmen de cada animal a cada 15 dias, durante quatro (4) meses, bem como, mensurações do perímetro escrotal e da consistência testicular. Logo após a colheita, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, concentração, parâmetros de motilidade espermática por sistema computadorizado (CASA Computer Assisted Semen Analysis), alterações morfológicas por contraste de interferência diferencial (DIC), integridade das membranas plasmáticas, acrossomal e função mitocondrial por microscopia de epifluorescência. Os dados obtidos dos procedimentos experimentais foram analisados utilizando o programa estatístico Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004). Não foram observadas diferenças estatísticas significativas (P>0.05) em nenhuma das características reprodutivas estudadas quando touros da raça Nelore foram submetidos aos ambientes com ou sem sombra. / It is known that heat stress is the main cause that affects bulls reproductive performance, consequently leaded to testicular degeneration. This pathologic alteration can also occur in Bos Indicus cattle. The objective of this experiment was verify the shadow availability effect at pasture on reproductive characteristics in Nelore, a Bos Indicus bull. For this work, 10 bulls with ages of 20 ± 10 months were used. A month before the experiment started, semen samples were collected each 15 days for physical and morphological sperm evaluation. After this, animals were classified with a score according to the sperm characteristics values sum and then distributed in two groups: with Overshadow (CS) and without Overshadow (SS). In the group CS, 5 animals were kept in a picket (2 ha), with a 10 m2 shaded area per animal, consisted in a polyethylene filter with 90% solar light retention. In the group SS, the others 5 animals were placed in another picket (2 ha) with no access to shaded area. Semen collection, scrotal perimeter and testicular consistence measures ocurred every 15 days, for a 4 months period After collection, semen samples were submitted to following analysis: volume, sperm concentration, sperm motility by computer system (CASA - Computer Assisted Semen Analysis), morphological defects using differential interference contrast (DIC), plasmatic acrossomal membrane integrity and mitochondrial function by epifluorescence microscopy. Data obtained from experimental proceedings were analyzed by Statistical Analysis System program (SAS Institute Inc., 2004). It wasn´t find any statistical differences (P>0,05) in reproductive characteristics, when Nelore bulls were kept under envirormental conditions with or without overshadow.

A quantificação dos componentes bioquímicos como frutose, ácido cítrico e proteína total existentes no plasma seminal de caprinos e ovinos localizados na região Centro-Oeste do Brasil é uma forma de avaliar a atividade fisiológica e bioquímica espermáticas. Estes dados servem como indicadores de prováveis problemas com os testículos e glândulas acessórias desses animais e de sua respectiva fertilidade. A frutose e o ácido cítrico são importantes para o sêmen como fonte de energia metabólica e como componente de sistema tampão, respectivamente. A frutose é um marcador da função secretora das vesículas seminais, e é um componente importante para a sobrevivência dos espermatozóides em condições anaeróbicas e está estreitamente relacionada com a motilidade inicial das células espermáticas. Sendo assim, os objetivos do presente projeto foram analisar quantitativamente esses componentes do plasma seminal de bodes e carneiros sob latitude 20°31\'S em quatro épocas do ano e purificar, através de técnicas cromatográficas, a enzima fosfolipase A2, importante proteína presente no plasma seminal. As análises bioquímicas foram feitas usando-se um espectrofotômetro UV/Vis para obtenção da curva padrão e para a determinação das concentraçõoes mensais e da concentração anual média dos constituintes analisados. A purificação da PLA2 foi feita por cromatografia líquida preparativa usando-se como fase estacionária a coluna Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) de exclusão por tamanho e membranas semipermeáveis de 10 e 30 kDa. Como resultado das análises bioquímicas, obteve-se a concentração anual média de proteínas totais de 3,27 ± 0,60 g/dL para ovinos e de 5,02 ± 0,43 para caprinos, ácido cítrico de 1015,33 ± 66,50 µg/mL para ovinos e de 1584,35 ± 143,90 µg/mL para caprinos e frutose de 23,40 ± 4,80 mg/dL para ovinos e 72,73 ± 18,50 mg/dL para caprinos. Os resultados mostraram que a PLA2 extraída do plasma seminal de ovinos tem massa molecular próxima de 13,8 kDa e a PLA2 do plasma seminal de caprinos tem massa molecular próxima a 12,8 kDa. / Quantification of biochemical components in seminal plasma including fructose, citric acid and total protein of goat and sheep of the Midwest region of Brazil is one way of evaluating the biochemical and physiological activity of the sperm. These data serve as indicators of potential problems with the testicles and accessory glands of these animals and their relative fertility. The fructose and citric acid are important for the semen as a source of metabolic energy and as a component of a buffer, respectively. Fructose is a marker of secretory function of seminal vesicles, important for the survival of spermatozoa under anaerobic conditions, and is closely related to the initial motility of sperm cells. Therefore, the objectives of this project were to quantitatively analyze these components in the seminal plasma of goats and sheep in latitude 20°31\'S 3 1\'S in four seasons and purify by chromatographic techniques the enzyme phospholipase A2, an important protein in the seminal plasma. Biochemical analysis were done using a spectrophotometer UV / Vis to obtaining the standard curve and to determine the monthly and annual average concentration of the constituents analyzed. The purification of PLA2 was performed by preparative liquid chromatography using the column as stationary phase Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) by size exclusion and semipermeable membranes 10 and 30 kDa. As a result of biochemical analysis, we obtained the annual average concentration of total protein of 3,27 ± 0,60 g / dL for sheep and 5,02 ± 0,43 g/dL for goats, citric acid of 1015,33 ± 66, 50 g / mL for sheep and 1584,35 ± 143,90 g / mL for goats and fructose 23,40 ± 4,80 mg / dL for sheep and 72,73 ± 18,50 mg / dL for goats. The results showed that the PLA2 extracted from seminal plasma of sheep has a molecular mass of 13,8 kDa and the next PLA2 from goat seminal plasma has a molecular mass close to 12,8 kDa.

A criopreservação do sêmen suíno ainda é um desafio devido a extensão dos danos causados pelo choque-frio. Os espermatozoides oriundos da fração rica do ejaculado suíno possuem a membrana plasmática mais estável, são mais resistentes ao choque-frio e a reação acrossomal precoce do que aqueles oriundo da fração total do ejaculado. Com isso, o uso do plasma seminal oriundo dessa fração do ejaculado suíno também poderia aumentar a criotolerância dos espermatozoides suínos e/ou reverter os danos oriundo da criopreservação. Entretanto, a grande maioria das técnicas de avaliação espermática inclui apenas um parâmetro de funcionalidade espermática. Por outro lado, quanto mais características espermáticas analisadas, mais fiel se torna a avaliação quanto ao potencial fertilizante da amostra. Nesse contexto, esse trabalho objetivou a validação de uma técnica de análise espermática por citometria de fluxo para a avaliação simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. Além de avaliar os efeitos da adição/manutenção do plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno sobre a cinética espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial, fluidez e peroxidação das membranas espermáticas, fosforilação do aminoácido tirosina, taxa de fertilidade e de prenhez precoce. A técnica sugerida em nosso trabalho é capaz de detectar (R2 = 0,9356; p < 0,01) simultaneamente os espermatozoides com a membrana plasmática e acrossomal integras e alto potencial de membrana mitocondrial (PIAIA). O plasma seminal da fração rica do ejaculado suíno gera benefícios para a cinética espermática melhorando a motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados (p < 0,05). Por outro lado, a manutenção/adição de plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno, não é capaz de alterar (p > 0,05) os espermatozoides PIAIA, a fosforilação do aminoácido tirosina, a fluidez e a peroxidação das membranas espermáticas. Entretanto, essas características devem ser cuidadosamente interpretadas, uma vez que, a fluidez e a peroxidação das membranas espermáticas são alteradas (p < 0,05) pelo processo de centrifugação. As taxas de fertilidade e de prenhez precoce também não foram influenciadas (p > 0,05) pela adição de plasma seminal oriundo da fração rica do ejaculado suíno. Portanto, podemos concluir que o plasma seminal da fração rica possui efeito benéfico sobre a fisiologia dos espermatozoides pós-descongelação, melhorando a criopreservação do sêmen suíno. / Boar semen cryopreservation is still a challenge due to the extension of cold shock damage. Boar spermatozoa arising from sperm-rich ejaculate fraction are reported to have a more stable plasma membrane, more resistant to cold shock and premature acrosome reaction than spermatozoa from the whole ejaculate. Thus, seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction can increase cryotolerance of boar spermatozoa, and in other domestic species it has the ability to reverse cryopreservation damage. However, the majority of actual sperm evaluation techniques include a single sperm parameter, which makes the sperm characterization of a single population difficult. In this context, this work was performed to validate a sperm flow cytometry fourfold coloration technique for the simultaneous evaluation of plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential. Furthermore, we evaluate the seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction effects on sperm kinetics, plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential, tyrosine phosphorylation, membrane fluidity and peroxidation, fertility and early pregnancy rate. The proposed technique is able (R2 = 0.9356; p < 0.01) to simultaneous detection of plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential (IPIAH). Seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction is able to improve (p < 0.05) total and progressive motility. Furthermore, seminal plasma arising from whole sperm-rich fraction maintenance/addition was not able to improve (p > 0.05) the IPIAH sperm population, tyrosine phosphorylation, membrane fluidity and peroxidation. However, these sperm characteristics need to be carefully interpreted, once, membrane fluidity and peroxidation could be influenced (p < 0.05) by centrifugation. Fertility and early pregnancy rate we not improved (p > 0.05) by seminal plasma addition. Therefore, we concluded that sperm fourfold coloration can be used to evaluate simultaneously plasma and acrosomal membranes integrity and mitochondrial membrane potential and that whole sperm-rich fraction seminal plasma can be beneficial to post-thawed sperm physiology, thereby improving boar semen cryopreservation.

O plasma seminal é o constituintes não celular do sêmen suíno e contém uma série de componentes orgânicos e inorgânico que desempenham ações variadas tanto no trato reprodutivo masculino como no feminino. No entanto, este fluido de constituição complexa, exerce ações ambiguas sobre os espermatozoides suínos, pois pode atuar ao mesmo tempo de forma benéfica ou deletéria sobre a viabilidade destas células. Nesse sentido, alguns estudos sugerem que este não é o melhor meio para a conservação de espermatozoides. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do plasma seminal sobre a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial do espermatozoide suíno armazenado sob refrigeração a 17°C por 72 horas. Para tanto, foram obtidos 4 ejaculados de 6 cachaços. Em seguida o sêmen in natura foi avaliado quanto às características da motilidade pelo sistema computadorizado de análise do sêmen, morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e concentração espermática. Após essa primeira avaliação, os ejaculados foram acondicionados em tubos cônicos de 50 mL para serem divididos em três tratamentos, a saber: não centrifugado (NC), centrifugado e com o plasma seminal retirado pós-centrifugação (CS) e centrifugado resuspendido (CR). A força de centrifugação utilizada foi de 500xg por 10 minutos. Todos os tratamentos foram submetidos à diluição em meio BTS para que se obtenha uma concentração de 30 x 106 espermatozoides por mililitro (mL). Em seguida, as amostras permaneceram por 90 minutos em temperatura ambiente e protegidas da luz antes de serem armazenadas. As doses com os diferentes tratamentos foram acondicionadas à temperatura de 17°C e foram avaliadas nos intervalos 0 (90 min pós-diluição), 24, 48 e 72 horas para os seguintes parâmetros: características da motilidade (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal, estabilidade da membrana plasmática e peroxidação das membranas espermáticas (citometria de fluxo). Os tratamentos foram submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). Quando o principal efeito foi significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey-kramer ao nível de 5% de significância. Os resultados do presente estudo mostram que a ausência do plasma seminal foi deletéria para algumas características de motilidade, o mesmo ocorreu para a integridade das membranas plasmática e acrossomal uma vez que houve diminuição na percentagem de celulás espermáticas com membrana plasmatica integra e acrossomo integro no tratamento sem plasma seminal. A peroxidação lipídica das membranas e a manutenção da estabilidade da membrana plasmática não foram influenciadas pelo tratamento. Assim, conclui-se que a presença do plasma seminal em doses inseminantes refrigeradas por 72 h é importante para a manutenção das características de motilidade e para a integridade das membranas plasmáticas e acrossomal / The present study aimed to evaluate the effects of seminal plasma, from the rich fraction of the ejaculate, on kinetics, plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and capacitation of extended liquid boar semen stored under refrigeration at 17° C for 72 hours. For this purpose, four ejaculates from each of six boars were used. Shortly after collection and raw semen evaluation, ejaculates were extended in BTS medium and then assigned to one of three treatments, as follows: non-washed seminal plasma (NWSP), washed-seminal plasma (WSP) centrifuged with own seminal plasma suspended (CWSSP). All treatments were evaluated for sperm motility parameters by the sperm class analyzer (SCA). Plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and sperm capacitation were evaluated by flow cytometry at 0, 24, 48 and 72 hours post dilution. The mean percentage of sperm motility (total and progressive) were lower (p<0.05) in the WSP treatment. There was an increase (p<0.05) in the percentage of sperm with damaged acrosome and damage plasma membrane in the WSP treatment. Membrane lipid peroxidation did not differ (p>0.05) irrespective of treatment nor did sperm capacitation, which was similar (p>0.05) among treatments. Our results show that seminal plasma from the sperm rich fraction is important to maintain adequate structural and functional characteristics of extended liquid boar and should be present in seminal doses throughout the period of store

Os macacos de cheiro (S. sciureus) são primatas neotropicais bastante ativos e que se estressam facilmente em cativeiro. Os métodos de colheita e avaliação do sêmen na espécie não foram padronizados de forma a reproduzi-los em diferentes centros de criação. O sêmen forma um firme coágulo imediatamente após a ejaculação e até o momento, nenhum método foi capaz de dissolvê-lo totalmente. Assim, a proposta deste estudo foi avaliar o condicionamento de S. sciureus ao método de colheita de sêmen por vibroestimulação peniana com o auxílio de observações comportamentais e dosagem de cortisol sérico. Objetivou-se ainda analisar o sêmen dos animais por meio de testes físicos e morfofuncionais, com e sem a utilização de enzima proteolítica para a dissolução do coágulo seminal. Foram estudados 12 machos adultos, alojados em dupla, em ambiente controlado. O condicionamento a vibroestimulação peniana foi desempenhado pela técnica de reforço positivo por meio de recompensa alimentar. Para a dissolução do coágulo seminal empregou-se a tripsina em três doses e dois tempos de incubação. O cortisol foi dosado pelo método de radioimunoensaio em amostras de soro. No presente estudo os animais foram condicionados às estimulações, porém a taxa de obtenção de ejaculados foi baixa. Contudo, a análise dos parâmetros físicos e morfofuncionais dos ejaculados obtidos mostrou altas porcentagens de espermatozóides móveis e com movimentos progressivos retilíneos com progressão boa à rápida. Somente os parâmetros concentração e espermatozóides com membrana plasmática íntegra foram menores do que o descrito para o gênero. A integridade do acrossomo e grau de atividade mitocondrial foram descritos pela primeira vez para a espécie e apresentaram alta porcentagem de integridade. O tratamento com a tripsina não foi eficaz na dissolução do coágulo nas concentrações de 0,5, 1 ou 5%, mas também não causou danos significativos aos espermatozóides. A dosagem de cortisol sérico demonstrou haver uma resposta aguda e não duradoura ao estresse logo após o procedimento de colheita de sêmen. O maior sucesso no emprego da vibroestimulação peniana para colheita de sêmen de macacos de cheiro parece depender de ajustes nas técnicas de contenção e estimulação, sazonalidade reprodutiva e contato olfativo com as fêmeas. / The squirrel monkeys (S. scireus) are very active neotropical primates, who get easily stressed in captivity. The semen collection and evaluation methods in this species have not been standardized to make possible their reproduction in different breeding centers. The semen turns into a firm coagulum immediately after the ejaculation, and, so far, any method was able to dissolve it completely. Therefore, the aim of this study was to evaluate the conditionment of S. sciureus to the semen collection method through the penile vibrostimulation with the assistance of behavioural observation and serum cortisol. Another objective was to analyze the semen of these animals through physical and morphofunctional tests, with and without the use of proteolytic enzymes to dissolve the semen coagulum. The study was performed in twelve male adults, hosted in couples, in a controlled environment. The training for the penile vibrostimulation was made through the positive reinforcement technique, with food reward. To dissolve the semen coagulum, it was made use of trypsin, at three doses and two incubation periods. Cortisol was measured through radioimmunoassay in serum samples. For this study, the animals were conditioned to the stimulations, though the semen attainment rate was low. Therefore, the analysis of the physical and morphofunctional semen parameters resulted in high percentages of mobile spermatozoa, with a straight-line progressive movement (good to fast progression). Only the parameters concentration and integrity of sperm plasma membrane were lower than the pattern for this genus. The achrossome integrity and the mitochondrial activity were described for the first time for this species and presented high integrity percentage. The treatment with trypsin was effective in dissolving the coagulum in concentrations of 0.5, 1 or 5%, but did not bring significant hazard to the spermatozoa. Measurement of serum cortisol showed an acute and not durable response to stress immediately after semen collection proceedings. The biggest success in the employment of the penile vibrostimulation in the collection of the squirrel monkey semen seems to depend on the handling and stimulation techniques, reproductive seasonality and contact with the female´s smell.

Estudou-se o perfil de proteínas de plasma seminal de touros das raças Nelore (Bos taurus primigerus indicus) e Simental (Bos taurus primigerus taurus), criados a campo, em regime de acasalamento múltiplo e manejo extensivo, na região de Dourados/MS, a fim de analisar a relação entre estas proteínas e características ligadas ao desempenho reprodutivo de touros. Coletaram-se amostras de sêmen no período de inverno (Julho/2001) e verão (Fevereiro/2002), realizando-se inicialmente o exame andrológico nos animais, e em seguida a análise padrão do sêmen. O plasma seminal foi, então, submetido à dosagem de proteínas totais, à dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), para avaliação da ocorrência de lipoperoxidação, e à eletroforese bidimensional de proteínas. Para análise do perfil proteico de plasma seminal da cada raça, foram utilizados os seguintes parâmetros: comparação entre os períodos de inverno e verão; comparação de grupos de amostras separados de acordo com a quantificação de características ligadas ao desempenho reprodutivo (morfologia espermática, dosagem de proteína total e dosagem de TBARS); e comparação de grupos de amostras separados de acordo com classificações para avaliação da capacidade reprodutiva, previamente descritas na literatura (Breeding Soundness Evaluations – BSEs). Os touros da raça Simental demonstraram menor adaptação às condições ambientais tropicais, com valores mais altos de defeitos espermáticos maiores, proteína total e dosagem de TBARS no período de verão. Observou-se grande variabilidade no perfil proteico entre as raças Nelore e Simental e, dentro de cada raça, encontrou-se expressiva variação individual. O perfil de proteínas de plasma seminal de touros Nelore apresentou 155 spots, entre os quais 04 se destacaram como possíveis marcadores de características ligadas ao desempenho reprodutivo. Já na raça Simental foram identificados 248 spots, com destaque para 04 spots, que demonstraram maior potencial como marcadores de características de interesse para a reprodução. Os resultados mostram que o perfil de proteínas de plasma seminal está relacionado ao desempenho reprodutivo de touros, fazendo-se necessários maiores estudos sobre as proteínas que se destacaram como marcadores, a fim de identificar as funções que elas exercem no trato reprodutivo e nos eventos ligados à fertilização. / Seminal plasma proteins profiles from Nelore (Bos taurus primigerus indicus) and Simmental (Bos taurus primigerus taurus) bulls, used for multiple-sire breeding under range conditions, at Dourados/MS region, were studied aiming to analyze the relation between these proteins and traits linked to bulls’ reproductive performance. Semen samples were collected in the winter (July/2001) and summer (February/2002). Initially, an andrological examination was performed, followed by standard semen analysis. Seminal plasma was subjected to total protein quantification, thiobarbituric acid reactive substances quantification (TBARS, to evaluate lipid peroxidation), and two-dimensional protein electrophoresis. To analyze seminal plasma protein profile of each breed, the following parameters were used: comparison between winter and summer, comparison among groups of samples divided by quantification of traits linked to reproductive performance (sperm morphology, total protein quantification, TBARS quantification) and comparison among groups of samples divided by breeding soundness evaluations (BSEs), previously reported in literature. Simmental bulls showed lower adaptability to tropical environment conditions, with higher values of major sperm defects, total protein and TBARS in the summer. A great variability was observed in the protein profile between Nelore and Simmental breeds, and, for each breed it was found great individual variability too. Nelore seminal plasma protein profile presented 155 spots, 04 of which were considered potential markers for traits linked to reproductive performance. For Simmental breed, 248 spots were identified, with special interest for 04 spots, which showed higher potential as markers to reproductive characteristics. Results show that seminal plasma protein profile is related to bulls’ reproductive performance. Further studies about those proteins which are potential markers are needed, to determine their function at bulls’ reproductive system and in the events related to fertilization.

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: Os garanhões possuem um conjunto completo de glândulas sexuais acessórias, compostas pelas bulbouretrais, a próstata, vesículas seminais e ampolas dos ductos deferentes. Dentre as afecções que acometem essas estruturas, a vesiculite seminal é a de maior ocorrência, consistindo na colonização de uma ou ambas as vesículas por bactérias, sendo a Pseudomonas aeruginosa a mais frequente. No ejaculado é observada uma grande percentagem de neutrófilos e hemácias podem estar presentes, caracterizando os quadros de piospermia e hemospermia, respectivamente. O diagnóstico definitivo é realizado por meio da endoscopia das vesículas, onde é possível visualizar o conteúdo purulento, associado à cultura bacteriana do lavado da glândula. O tratamento é desafiador, pois a antibioticoterapia apresenta baixa eficácia. Visto a importância desta enfermidade e a dificuldade do tratamento, este estudo teve como objetivo abordar os principais aspectos e avaliar a eficácia do ácido metacresolsulfônico e formaldeído para o tratamento da vesiculite seminal em garanhões, considerando os parâmetros seminais e características histopatológicas das vesículas seminais. Três garanhões adultos (n=3), com aspectos reprodutivos normais, tiveram a vesiculite seminal induzida por Pseudomonas aeruginosa através da endoscopia. Após 8 semanas de infecção, foi realizado tratamento local utilizando solução a 30% do ácido metacresolsulfônico e formaldeído (Lotagen®). O experimento consistiu em avaliações semanais, ante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Stallions have a complete set of accessory sex glands, composed of the bulbourethral, prostate gland, seminal vesicles and ampullae. Among the diseases that affect these structures, seminal vesiculitis is the most frequent, consisting the colonization of one or both vesicles by bacteria, whose Pseudomonas aeruginosa is the most frequent. In ejaculate is observed a large percentage of neutrophils and erythrocytes may be present, characterizing piospermia and hemospermia, respectively. The definitive diagnosis is made through the endoscopical evaluation of the seminal vesicles, where it is possible to visualize the purulent contents, associated to gland lavage and bacterial culture. Treatment is challenging because antibiotic therapy is ineffective. Considering the importance of this disease and the difficulty of treatment, this study aims to address the most important aspects and evaluate the efficacy of metacresolsulfonic acid and formaldehyde for the treatment of vesiculitis in stallions, considering seminal parameters and histopathological characteristics. Three adult stallions (n = 3), with normal reproductive aspects, had seminal vesiculitis induced by Pseudomonas aeruginosa through endoscopy. After 8 weeks of infection, local treatment was performed using 30% solution of metacresolsulfonic acid and formaldehyde (Lotagen®). The experiment consisted of weekly evaluations, before and after experimental infection and after treatment. The characteristics of semen and seminal ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Resumo: A criopreservação é uma tecnologia empregada para preservação de células, tecidos e embriões em baixas temperaturas. Para o desenvolvimento de tal tecnologia para a preservação seminal, é necessário o conhecimento sobre as características seminais da espécie que se pretende trabalhar, o estabelecimento de soluções diluentes que protegerão as células espermáticas e, dos respectivos protocolos de resfriamento, congelamento e descongelamento do sêmen criopreservado. As soluções crioproteroras devem ser atóxicas às células espermáticas, mantendo as características do fluido seminal. Assim, este trabalho teve por objetivos além de conhecer as características seminais do sêmen de Astyanax altiparanae, desenvolver um protocolo eficiente para a criopreservação seminal da espécie e sua utilização posterior. Para isso, exemplares adultos e maduros de A. altiparanae foram induzidos hormonalmente à reprodução com Ovopel®, sendo o sêmen coletado após 226 horas-grau em com auxílio de micropipetas. Deste foram avaliadas as características seminais como, osmolalidade, concentração espermática, motilidade espermática subjetiva e motilidade objetiva e vários outros aspectos de cinética dos espermatozoides pelo uso do CASA (Integrated Semen Analysis System). Foram avaliadas dez soluções crioprotetoras compostas por três bases diluentes A (5% de glicose + 10% gema de ovo), B (Bestville Thawing Solution (BTS®) a 5%) e C (5% de glicose), combinadas com um crioprotetor interno dimetilsulfóxido ou m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation is a technology used to preserve cells, tissues and embryos at low temperatures. For the development of such seminal preservation technology, it is necessary to know the seminal characteristics of the species to be worked on, the establishment of diluent solutions that will protect the sperm cells, and the respective protocols of cooling, freezing and thawing of the cryopreserved semen. Cryoprotective solutions should be non-toxic to sperm cells, while maintaining seminal fluid characteristics. Thus, this work had as objectives besides knowing the seminal characteristics of Astyanax altiparanae, to develop an efficient protocol for the seminal cryopreservation of the species for its later use. For this, adult and mature A. altiparanae specimens were hormonally induced to Ovopel® reproduction, and the semen was collected after 226 hours-degree with the help of micropipettes. Seminal characteristics such as osmolality, sperm concentration, subjective sperm motility and objective motility, and several other aspects of sperm kinetics were evaluated using CASA (Integrated Semen Analysis System). Ten cryoprotectant solutions composed of three diluent bases A (5% glucose + 10% egg yolk), B Bestville Thawing Solution (BTS®) 5% and C (5% glucose), combined with a cryoprotectant internal dimethylsulfoxide or methylglycol, in concentrations of 10% and 15%. The efficiency of these solutions was evaluated by the analysis of the computerized sperm motility. For cryopreserv... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T13:08:46Z No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T13:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the influence of different extenders [Tris buffer (Tris), Tris-egg yolk (EY) and Tris-soybean lecithin 1% (SL1) and 2% (SL2)] and the removal of seminal plasma process in goat sperm stored at 5 ºC for 48 hours. Semen was collected four goats (two Toggenburg and two American Alpine), using an artificial vagina twice a week for four weeks. Ejaculates with greater than 60% motility were pooled and each pool seminal (n = 8) was used in a repeat. The pool was divided equally, half diluted without removal of seminal plasma (non washed semen – NW), and packaged in straws of 0.25 mL (200x106 sperm/mL). The second half of the pool was subjected to removal of the seminal plasma (washed semen - W) by double centrifugation (2200 g/10 min) then diluted and packaged as mentioned above. Then, the samples were chilled to 5 °C (90 min) and kept under refrigeration for 48 hours. Computer analysis of sperm kinetics (CASA) and the evaluation of the plasma membrane (PMi) and acrosomal (ACi) integrity and mitochondrial membrane potential (MMP) were determined within five minutes after reaching 5 °C (T0), and after 24 (T24) and 48 (T48) hours of storage. No influence extender (p>0.05) was observed for sperm kinetic variables of NW semen, however, independent extender, progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), straightline velocity (VSL) and average path velocity (VAP) were lower (p<0.05) in T48 compared to T0, a fact confirmed for total motility (TM) of SL2 group. In washed semen, TM and MP of EY group was higher (p <0.05) than the other groups throughout chilling period. After removal of the seminal plasma did not influence the cooling time (p>0.05) in any of the kinetic variables SL2 group. However, LIN, STR, VSL values for Tris-EY and SL1 groups, and PM and VAP values for Tris-EY group, were lower in T48 compared to T0. It was observed also that in the T48 TM, PM, VSL and VAP variables of LS2 group, and PM variable of Tris-EY group were higher in semen washed when compared to semen non whased. The PMi was not influenced by the type of extender, but in NW semen PMi of Tris-EY and SL2 groups was lower (p <0.05) in T48 compared to T0. Greater (p <0.05) PMi was observed for the washed compared to non washed semen. The ACi and kinetics (curvilinear velocity – VCL) were not affected (p>0.05) by extender, or by storage time or the removal of seminal plasma. Thus, it is concluded that the soybean lecithin can be used as a substitute for egg yolk for cooling of goat semen and which removal of the seminal plasma enhances the preservation of the caprine semen. / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de diferentes diluidores [Tris tampão (Tris), Tris-Gema (TG) e Tris-lecitina de soja 1% (LS1) e 2% (LS2)] e do processo de remoção do plasma seminal no sêmen caprino armazenado a 5 ºC por 48 horas. O sêmen foi colhido de quatro caprinos (dois Toggenburg e dois Alpino Americano), com vagina artificial, duas vezes por semana, durante quatro semanas. Ejaculados com motilidade superior a 60% foram agrupados e cada pool seminal (n=8) foi utilizado em uma repetição. O pool foi igualmente dividido, sendo metade diluído, sem remoção do plasma seminal (sêmen não lavado – NL), e envasado em palhetas de 0,25 mL (200x106 espermatozoides/mL). A segunda metade do pool foi submetida a remoção do plasma seminal (sêmen lavado – L) por dupla centrifugação (2200 g/10min) e depois diluída e envasada como citado anteriormente. Em seguida, as amostras foram refrigeradas até 5 ºC (90 min) e mantidas sob refrigeração por 48 horas. Análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e a avaliação da integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAC) e do potencial de membrana mitocondrial (PMM) foram determinadas cinco minutos após atingir 5 ºC (T0), após 24 (T24) e 48 (T48) horas de armazenamento. Nenhuma influência do diluidor (p>0,05) foi observada para as variáveis de cinética espermática do sêmen NL, porém, independente do diluidor, motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP) foram menores (p<0,05) no T48 em relação ao T0, fato também observado para motilidade total (MT) do grupo LS2. No sêmen lavado, MT e MP do grupo Gema foi superior (p<0,05) aos demais grupos durante todo período de refrigeração. Após a remoção do plasma seminal não houve influência do tempo de refrigeração (p>0,05) sobre quaisquer das variáveis cinéticas do grupo LS2. Entretanto, os valores de LIN, STR, VSL para os grupos Tris-Gema e LS1, e MP e VAP para o grupo Tris-Gema, foram inferiores no T48 em relação ao T0. Observou-se, ainda, que no T48 as variáveis de MT, MP, VSL e VAP do grupo LS2, e MP do grupo Tris-Gema foram superior no sêmen lavado quando comparado ao sêmen não lavado. A iMP não foi influenciada pelo tipo de diluidor, porém no sêmen NL a iMP dos grupos Tris-Gema e LS2 foi inferior (p<0,05) no T48 em relação ao T0. Maior (p<0,05) iMP foi observada para o sêmen lavado em relação ao não lavado. A iAC e a cinética (velocidade curvilinear-VCL), não foram influenciadas (p>0,05) pelo diluidor, nem pelo tempo de armazenamento ou pela remoção do plasma seminal. Assim, conclui-se que a lecitina de soja pode ser utilizada como substituto à gema de ovo para refrigeração do sêmen caprino e que a remoção do plasma seminal melhora a conservação do sêmen dessa espécie.