Submitted by RODRIGO DOS SANTOS ALBUQUERQUE null (rdsa20@gmail.com) on 2016-09-19T19:21:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado Rodrigo Albuquerque.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 12 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 12 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-22T17:06:43Z (GMT) / Submitted by RODRIGO DOS SANTOS ALBUQUERQUE null (rdsa20@gmail.com) on 2016-09-22T17:53:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado Rodrigo Albuquerque.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-09-27T12:31:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 albuquerque_rs_me_jabo.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T12:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 albuquerque_rs_me_jabo.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A criopreservação provoca injúrias aos espermatozoides e necessita de métodos que minimizem esses danos. Embora seja bastante discutida, a remoção do plasma seminal tornou-se uma alternativa para melhorar a qualidade e viabilidade espermática após a congelação e vem sendo utilizada em outras espécies na tentativa de obter bons resultados. O objetivo deste estudo foi comparar a remoção do plasma seminal de bubalinos tanto por filtragem (SpermFilter®) quanto por centrifugação sobre a qualidade do sêmen descongelado de búfalos. Foram utilizados sete touros da raça Murrah, os quais foram submetidos à colheita de sêmen por vagina artificial uma vez por semana. Os ejaculados foram diluídos com Botu-Bov® e fracionados em alíquotas para confrontar três técnicas antes da congelação: grupo C (Criopreservação convencional com plasma seminal), grupo CE (Criopreservação removendo o plasma seminal por centrifugação) e grupo F (Criopreservação removendo o plasma seminal por filtragem). O sêmen fresco foi analisado quanto ao volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor e morfologia espermática. No sêmen descongelado, foram avaliados a cinética espermática pelo CASA, a integridade de membrana plasmática, acrossoma, potencial de membrana mitocondrial e quantificação de EROs por citometria de fluxo e, adicionalmente, foi estimado o grau de peroxidação lipídica pela técnica de TBARS. Os resultados revelam que a remoção de plasma seminal não proporcionou aumento da velocidade espermática, alteração no potencial de membrana mitocondrial e nem modificou o grau de peroxidação lipídica. Entretanto, a presença do plasma seminal (grupo controle) e a centrifugação provocou maiores índices de lesões na membrana plasmática, quando estas apresentam o acrossoma intacto (47,88±1,99% vs. 41,30±1,96%, respectivamente) em comparação ao grupo F (40,45±2,01%; p<0,07). A lesão em ambas as membranas (acrossomal e plasmática) foi mais evidente na filtragem (22,18±1,07) em relação ao grupo controle (15,23±1,06), sendo que a centrifugação não diferiu entre os grupos (17,43±1,04; p<0,01). A EROs foi mais evidente no grupo CE (56,68±4,53%) em relação ao grupo C e F (21,83±4,60% vs. 20,96±4,7%, respectivamente; p<0,01). Portanto, as hipóteses de que a remoção de plasma seminal melhoram a cinética espermática e proporcionam menores índices de lesões na membrana plasmática não foram confirmadas. Embora a filtragem tenha apresentado vantagem sobre a centrifugação gerando menor quantidade de EROs, não se justifica a remoção do plasma seminal em búfalos devido aos resultados serem muito semelhantes ao grupo controle. / Cryopreservation promotes injury to sperm and methods to minimize such damage are necessary. Although much discussed, removal of seminal plasma that has been successfully used in other species has become an alternative for improving sperm quality and viability after freezing. The aim of the present study was compare to removal seminal plasma in buffalo both by filtering (SpermFilter®) and by centrifugation on the quality frozen thawed buffalo semen. For this purpose, semen of seven Murrah buffalo-bulls, which were submitted to semen collection by artificial vagina once a week. The samples were diluted with Botu-Bov® and were fractionated in aliquots to confront three techniques before freezing: C group (conventional cryopreservation with seminal plasma), CE group (cryopreservation removing the seminal plasma centrifuge) F group (Cryopreservation removing the seminal plasma with Sperm Filter®). Fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), gross motility, progressive motility, vigor and sperm morphology. In the thawed sperm, sperm kinetics was evaluated by CASA, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and estimation of the levels of reactive oxygen species were assigned by flow cytometry and was estimated degree of lipid peroxidation by TBARS technique. The results show that the removal seminal plasma did not improve sperm kinetics, mitochondrial membrane potential and does not modify the degree of lipid peroxidation.However, the presence of seminal plasma (control group) and centrifugation resulted in higher rates of injury to the plasma membrane, where they have an intact acrosome (47,88±1,99% vs. 41,30±1,96%, respectively) compared to F group (40,45±2,01%; p<0.07). The damage in both membranes (acrosome and plasma) was more evident in filtering (22,18±1,07) compared to the control group (15,23±1,06), and centrifugation did not differ between groups (17,43±1,04; p<0.01). ROS production was more evident in the CE group (56,68±4,53%) compared to the C and F group (21.83±4.60% vs. 20.96±4.7%, respectively; p<0.01). Therefore, removal seminal plasmais not beneficial to sperm, as did not alter the sperm kinetics nor provided lower lesions rates in the plasma membrane, although the filter has presented advantage over centrifugation as generated lower amount of ROS, not justifies the use bothtechnique because the results are very similar to those with seminal plasma. / FUNDUNESP: 2523-002-14

Orientador: Maria Denise Lopes / Resumo: Em climas temperados, variações sazonais na reprodução em cães têm sido reportadas, entretanto, em condições tropicais essa influência não tem sido estudada. O objetivo desse trabalho foi avaliar se as modificações ambientais, da Região Sudeste do Brasil, exercem efeitos sobre a função testicular. Neste estudo foram utilizados 8 cães adultos, com idade entre 1,2 a 6 anos, de três raças (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel), em atividade reprodutiva, de um mesmo canil, num período de 14 meses. Colheitas de sêmen foram realizadas quinzenalmente. O ejaculado foi imediatamente avaliado quanto à motilidade e vigor espermático, pH, concentração e morfologia dos espermatozóides. Após a centrifugação, o "pellet" foi ressuspendido e submetido a congelação. No plasma seminal foram determinadas as concentrações de proteínas totais, sódio, potássio, cálcio, magnésio e cloretos totais. A eletroforese SDS-PAGE foi realizada utilizando-se géis de poliacrilamida nas concentrações de 12 e 18%. Os géis foram corados com Coomasie azul brilhante R-250, as imagens digitalizadas e os pesos moleculares e a densidade óptica integrada estimada. Amostras de sangue foram obtidas a cada 15 dias, sempre no período da manhã, entre 8:30 e 11:30 h. As dosagens séricas de testosterona total foram determinadas por radioimunoensaio (RIA) em fase sólida. Foram realizadas mensurações de próstata e testículos. Os dados referentes às variações de temperatura ambiente (°C) e índice pluviométrico (mm3) foram obtidos no CIIAGRO. A variação de temperatura, nesse período, foi de 9ºC a 32,8ºC, e o índice pluviométrico de 26 mm3 a 476 mm3. A concentração média de testosterona nos animais foi de 131,65 ng/dL a 213,17 ng/dL, com uma grande variação individual. Houve uma queda acentuada no verão de 2003, onde a temperatura e a umidade foram altas...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In temperate zones, seasonal influence on reproductive performance of male dogs has been described, but in tropical conditions it hasn't been studied. The objective of this work was to evaluate the influence of seasonality on testis function. In the study 8 adult dogs were used, with age varying between 1.2 and 6 years old, from 3 breeds (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel). These dogs were active studs, and they were housed in the same cannel, during 14 months. Ejaculates were collected each 15 days. Immediately after the collection, spermatic progressive motility, progressive velocity, pH and sperm morphology, were evaluated. The samples were centrifuged, the pellet re-suspended and frozen, and supernatant was evaluated for total protein, cloride, potassium, sodium, calcium and magnesium. Ultrasonic measurements of canine testis and prostate were performed. Electrophoresis was performed using 12% and 18% SDS-PAGE. The electrophoresis gel was stained with Coomasie blue brilliant R-250, scanned and analysed by a software. Molecular weight was estimated based in a standard weight. Blood collections were performed every 15 days at morning (between 8:30 and 11:30 a.m). Testosterone serum concentrations were determined by solid phase RIA (radioimmunoassay). The data from environmental temperature and pluvial index were obtained from CIIAGRO. Testosterone mean concentrations varied from 1.31 ng/mL to 2.02 ng/mL. The temperature varied from 10.2º C to 32.8º C and the pluvial index was 33 mm3 to 476 mm3. Notable individual variation was observed on testosterone serum concentrations among dogs in all seasons. There was a remarkable decrease on testosterone levels in all animals during Summer, when temperature and humidity were high. Seminal parameters before and after thawing were normal during the study...(Complete abstract click eletronic access below) / Doutor

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o perfil das principais proteÃnas do plasma seminal suÃno e suas associaÃÃes com parÃmetros seminais. Amostras de sÃmen foram coletadas de 12 cachaÃos adultos e submetidas à avaliaÃÃo dos parÃmetros seminais (motilidade total, morfologia, vitalidade e porcentagem de cÃlulas com acrossoma intacto). O plasma seminal foi obtido por centrifugaÃÃo e as proteÃnas seminais foram analisadas por eletroforese 2-D e espectrometria de massa. Foram testados modelos de regressÃo usando a soma das intensidades dos spots referentes Ãs mesmas proteÃnas como variÃveis independentes e parÃmetros seminais como variÃveis dependentes (p < 0,05). Cento e doze spots foram identificados nos gÃis do plasma seminal, equivalentes a 39 proteÃnas diferentes. As espermadesinas PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 e AWN1 representaram 45,2  8 % do total da intensidade de todos os spots detectados nos geis. Outras proteÃnas expressas no plasma seminal suÃno incluem a albumina, proteÃnas do complemento (complement factor H precursor, complement C3 precursor e adipsin/complement factor D), imunoglobulinas (IgG heavy chain precursor, imunoglobulina delta heavy chain membrane bound form, imunoglobulina gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 e CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin e fibronectin tipo 1 (FN1). Em funÃÃo das anÃlises de regressÃo, o percentual de espermatozoides com defeito na peÃa intermediÃria foi relacionado com a quantidade de âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 = 0,58), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,61), o fator H do complemento (R2 = 0,61) e lactaderina (R2 = 0,45). Porcentagem percentual de defeitos de cauda tambÃm foi relacionado com âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 =0,40), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,34), e lactaderina (R2 = 0,74). A motilidade espermÃtica, por sua vez, teve associaÃÃo com a intensidade dos spots identificados como lactaderina (R2 = 0,48). Em conclusÃo, descreve-se, neste trabalho, o proteoma do plasma seminal suÃno e associaÃÃes significativas entre proteÃnas especÃficas do plasma seminal e parÃmetros seminais. Tais relaÃÃes servirÃo como base para a determinaÃÃo de marcadores moleculares da funÃÃo espermÃtica na espÃcie suÃna. / The present study was conducted to identify the major seminal plasma protein profile of boars and its associations with semen criteria. Semen samples were collected from 12 adult boars and subjected to evaluation of sperm parameters (motility, morphology, vitality and percent of cells with intact acrosome). Seminal plasma was obtained by centrifugation, analyzed by 2-D SDS-PAGE and proteins identified by mass spectrometry (electrospray ionization quadrupole-time-of-flight). We tested regression models using spot intensities related to the same proteins as independent variables and semen parameters as dependent variables (p < 0,05). One hundred and twelve spots were indentified in the boar seminal plasma gels, equivalent to 39 different proteins. Spermadhesins PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 and AWN1 represented 45,2  8 % of the total intensity of all spots. Other proteins expressed in the boar seminal plasma include albumin, complement proteins (complement factor H precursor, complement C3 precursor and adipsin/complement factor D), immunoglobulins (IgG heavy chain precursor, immunoglobulin delta heavy chain membrane bound form, immunoglobulin gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 and CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal secretory glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin and fibronectin type 1 (FN1). Based on regression analysis, the percentage of sperm with midpiece defects was related to the amount of CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,58), IgG-binding protein (R = 0,61), complement factor H precursor (R = 0,61) and lactadherin (R = 0.45). The percentage of sperm with tail defects was also related to CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,40), IgG-binding protein (R = 0,34) and lactadherin (R = 0,74). Sperm motility, in turn, had association with the intensities of spots identified as lactadherin (R = 0,48). In conclusion, we presently describe the major proteome of boar seminal plasma and significant associations between specific seminal plasma proteins and semen parameters. Such relationships will serve as the basis for determination of molecular markers of sperm function in the swine species.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar os aspectos da interaÃÃo das Binder of SPerm proteins (BSP) presentes no plasma seminal de caprinos e as principais proteÃnas do leite; 2) determinar se as BSP homÃlogas do plasma seminal de equinos, suÃnos e ovinos possuem propriedades de ligaÃÃo as proteÃnas do leite semelhante Ãs BSP bovinas; 3) investigar a interaÃÃo das proteÃnas do plasma seminal de caprinos e os componentes dos diluidores à base de lecitina de soja; 4) identificar as proteÃnas do plasma seminal de touros Curraleiro (PÃ-duro) associadas à circunferÃncia escrotal e os parÃmetros seminais. Para tanto, o leite desnatado tratado termicamente foi incubado com as proteÃnas do plasma seminal de caprinos e, aplicados em coluna cromatogrÃfica de gel filtraÃÃo na presenÃa e na ausÃncia de cÃlcio. AlÃm disso, o leite desnatado foi fracionado em duas fraÃÃes, MF-1 (proteÃnas do soro de leite) e MF-2 (caseÃnas), e posteriormente incubadas com as proteÃnas do plasma seminal de caprinos, seguida pela aplicaÃÃo em coluna de gel filtraÃÃo. As fraÃÃes foram eluÃdas e analisadas por Western blot. Adicionalmente, outras anÃlises foram realizadas para avaliar as propriedades desta ligaÃÃo. No primeiro procedimento, uma placa de ELISA foi sensibilizada com leite desnatado tratado termicamente e, em seguida, incubadas com diluiÃÃes em sÃrie de BSP purificadas e plasma seminal caprino, seguido por incubaÃÃo com anticorpos primÃrio e secundÃrios. Na segunda anÃlise, o leite desnatado, caseÃnas, &#945;-lactalbumina, &#946;-lactoglobulina diluÃdas em sÃrie foram gotejadas sobre uma membrana de nitrocelulose e, posteriormente, as membranas foram incubadas com plasma seminal de caprinos. A interaÃÃo foi detectada pela incubaÃÃo com anticorpos primÃrios e secundÃrios. No terceiro experimento, os espermatozoides epididimÃrios foram incubados com: (1) citrato/glicose + plasma seminal caprino, (2) plasma seminal caprino + diluidor leite, e (3) diluidor leite + plasma seminal de caprino. ApÃs o perÃodo de incubaÃÃo, as proteÃnas da membrana de espermatozoides foram extraÃdas e analisadas por Western blot. No segundo estudo, o leite desnatado foi incubado com as proteÃnas do plasma seminal de bovino, equino, suÃno e ovino, separadamente, e em seguida, foram aplicados em coluna cromatografia de filtraÃÃo em gel. AlÃm disso, a interaÃÃo de componentes de diluidores à base de lecitina de soja (Andromed e BioxcellÂ) foi investigada por cromatografia de filtraÃÃo em gel e ultracentrifugaÃÃo. Uma alÃquota de diluidor à base de lecitina de soja foi incubada com as proteÃnas do plasma seminal de caprinos e aplicadas em coluna de gel filtraÃÃo. As fraÃÃes foram eluÃdas e, apÃs este procedimento, as amostras foram analisadas por Western blot. A anÃlise por ultracentrifugaÃÃo foi realizada na ausÃncia e na presenÃa de vesÃculas de fosfolipÃdios oriundas de diluidores a base de lecitina de soja, Andromed e BioxcellÂ. As vesÃculas isoladas foram incubadas com as proteÃnas do plasma seminal de caprino. ApÃs a ultracentrifugaÃÃo, a presenÃa de BSP no sobrenadante e no sedimento foi analisada por Western Blot. Adicionalmente, o plasma seminal de dez touros Curraleiro (PÃ-duro) foi analisado por 2-D eletroforese. Os gÃis corados por Coomassie foram analisados no aplicativo PDQuestÂ. Nossos resultados demonstraram que as proteÃnas de BSP do plasma seminal caprino se ligam Ãs proteÃna do leite, especialmente, as caseÃnas e &#946;-lactoglobulina. AlÃm disso, estas proteÃnas interagem com as vesÃculas de fosfolipÃdios presentes nos diluidores Andromed e BioxcellÂ. As BSP de bovinos, equinos e suÃnos tambÃm se ligam aos componentes do leite. Jà as BSP de ovinos nÃo interagem com os componentes do leite desnatado. Nossas analises demonstraram que vinte e sete spots proteÃcos se correlacionam com pelo menos um parÃmetro reprodutivo. Em resumo, nossos resultados indicam que as BSP de caprinos se ligam Ãs proteÃnas do leite e aos fosfolipÃdios do diluidor Andromed e BioxcellÂ. Isto sugere que estes componentes tÃm um papel significativo na proteÃÃo de espermatozoide de caprinos, pois sequestram as BSP presentes no sÃmen. Nossos resultados sugerem que as BSP homÃlogas presentes no plasma seminal de equinos e suÃnos apresentam propriedades de ligaÃÃo Ãs proteÃnas do leite semelhantes Ãs BSP bovinas. AlÃm disso, o plasma seminal de touros Curraleiro (PÃ-duro) tem potenciais proteÃnas relacionadas com parÃmetros de qualidade seminal. Estes resultados sÃo de grande interesse, visto que elucida aspectos relacionados aos mecanismos de proteÃÃo dos espermatozoides pelos diluidores, para o desenvolvimento de novos diluidores livre de produtos de origem animal e na identificaÃÃo de proteÃnas com potencial à marcadores de fertilidade no plasma seminal de bovino. / The objectives of this study were: 1) to evaluate aspects of interaction between goat seminal plasma proteins and milk proteins; 2) to determine if homolog Binder of Sperm Proteins (BSP) from stallion, boar and ram seminal share the binding properties of the bovine BSP for the milk proteins; the mechanism of bovine sperm protection by milk is similar in different species of mammals; 3) to investigate the interactions of BSP proteins present in goat seminal plasma and phospholipids from soybean lecithin-based extender; 4) to identify seminal plasma proteins associated with scrotal circumference and sperm parameters. Heated skimmed milk was incubated with goat seminal plasma proteins and loaded onto Sepharose CL-4B column both in the presence and absence of calcium. Fractions were eluted and evaluated by Western blots using anti-goat BSP antibodies. Also, we fractionated milk into two fractions, MF-1 (mostly whey proteins) and MF-2 (mostly caseins), which were incubated with goat seminal plasma proteins and passed through gel filtration columns. Eluted fractions were then analysed by immunoblotting with anti-BSP antibodies. In addition, a series of analysis was conducted to evaluate binding properties involving milk and seminal plasma proteins. In the first procedure, an ELISA plate was saturated with heated skimmed milk and then incubated with serial dilutions of purified BSP proteins, goat seminal plasma proteins and anti-goat BSP. In a second analysis, heated skimmed milk, casein, &#945;-lactalbumin and &#946;-lactoglobulin were spotted onto a nitrocellulose membrane with serial dilutions. Membranes were then overlaid with goat seminal plasma proteins. Binding between milk and seminal plasma components were detected by successive incubations with primary and secondary antibodies. A third set of analysis was conducted to evaluate interactions among ejaculated and caudal epididymal sperm, milk and goat seminal plasma proteins. Epididymal sperm from each animal was incubated with: (1) citrate-glucose medium followed by seminal plasma; (2) with seminal plasma followed by milk extender; (3) with milk extender followed by seminal plasma (Fig. 1). Both ejaculated and epididymal goat sperm were also incubated with citrate-glucose medium without seminal plasma, as positive and negative controls, respectively. Following incubations, sperm membrane proteins were extracted and the presence of goat BSP proteins was assessed by Western blot Furthermore, heated skim milk was incubated with seminal plasma proteins from bulls, stallions, boars and rams and then loaded onto gel filtration column. The proteins were eluted and fractions were analysed by immunoblotting. Moreover, the interaction of hospholipids vesicles from soybean lecithin-based extender (Andromed and BioxcellÂ) and goat BSP proteins was investigated by gel filtration chromatography and ultracentrifugation analysis. An appropriate volume of soybean-based extender was incubated with goat seminal plasma proteins and passed through a gel filtration column. Proteins were eluted and fractions analysed by Western blot. Ultracentrifugation analysis was performed in the absence or in the presence of phospholipid vesicles. These vesicles were isolated from soybean lecithin extender and incubated with goat seminal proteins. The presence of goat BSP proteins in the supernatant and in the pellet was assessed by Western blot. In addition, seminal samples from ten Curraleiro Bulls were subjected to 2-D electrophoresis and Coomassie blue-stained gels analyzed with PDQuest software. Our results demonstrated that goat BSP proteins bound to milk protein, specially caseins and &#946;-lactoglobulin. In addition, these proteins interact with phospholipids vesicles of Andromed and BioxcellÂ. Bull, stallion and boar BSP proteins also bind to milk protein, whereas ram BSP proteins did not bind. Also, we identified that twenty and seven protein spots presented significant correlation with at least one reproductive parameter. In summary, our results indicate that goat BSP proteins bind to milk proteins and phospholipids from Andromed and Bioxcell semen extender. This suggests that these components play a significant role in protecting goat sperm by sequestrating all BSP proteins in semen. We also demonstrated that BSP homologs in boar, stallion seminal plasma share the binding properties of the bovine BSP for the milk proteins. Additionally, Curraleiro seminal plasma has potential proteins related to quality sperm parameters and they should be tested as putative fertility markers. These findings are of considerable interest in view of the mechanisms of sperm protection by extender constituents, for the development of novel extender free of animal components and the identification of proteins as potential biomarkers of fertility in bovine seminal plasma.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Nordeste brasileiro possui aproximadamente quase metade do rebanho ovino brasileiro, estimado em vinte milhÃes de animais. Das raÃas aqui criadas, destacam-se as raÃas Santa InÃs e Morada Nova que tÃm bom desenvolvimento corporal, ganho de peso e boa adaptaÃÃo ao clima tropical. Recentemente mostrou-se o perfil protÃico de carneiros maduros atravÃs das tÃcnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa, onde vÃrias proteÃnas foram identificadas, entre elas as RSVPs 14 e 22 kDa, pertencentes à famÃlia das BSPs e as bodesinas â 1 e 2, que fazem parte da famÃlia das espermadesinas, bem como as alteraÃÃes que sofre o perfil protÃico do plasma seminal dos animais durante o desenvolvimento reprodutivo, simultaneamente a mudanÃas nos parÃmetros de motilidade e concentraÃÃo espermÃtica, embora a associaÃÃo entre a expressÃo protÃica dessas proteÃnas com parÃmetros reprodutivos e medidas testiculares ainda nÃo tenham sido feitas no nordeste do Brasil. Amostras de sÃmen foram coletadas de 21 carneiros adultos Santa InÃs e 11 da raÃa Morada Nova com normalidade reprodutiva e idade mÃdia de dois anos. O plasma seminal foi obtido atravÃs da centrifugaÃÃo e submetido à eletroforese bidimensional, sendo os spots que diferiram estatisticamente entre os grupos de animais de alta (G1) e baixa motilidade (G2) foram digeridos com tripsina e submetidos a espectometria de massa e pesquisa em banco de dados para identificaÃÃo. Os gÃis foram corados com Cromassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest e as quantidades dos spots estimados quantitativamente. Avaliaram-se, entÃo, associaÃÃes estatÃsticas entre estas variÃveis e os parÃmetros reprodutivos como, circunferÃncia escrotal (CE), percentual de cÃlulas mÃveis (PEM) e total de defeitos espermÃticos maiores (TDM) dos animais Santa InÃs e CircunferÃncia escrotal (CE), Motilidade Individual Progressiva (MIP), Percentual de cÃlulas mÃveis (PEM), ConcentraÃÃo espermÃtica (CONC) e Motilidade Massal (MM) para os animais Morada Nova. Em mÃdia foram detectados 236Â7,65 spots por gel, de acordo com o pareamento gerado pelo aplicativo PDQuest para a raÃa Santa InÃs e 261 15,09 spots por gel do plasma seminal dos animais Morada Nova, variando entre 182 e 375 spots por gel. Para a raÃa Santa InÃs um total de 63 spots foi identificado consistentemente em todos os gÃis, o que representou 41,5% da intensidade todos os spots detectados. Para os animais Morada Nova, um total de 98 spots foram detectados de forma consistente em todos os gÃis. A intensidade desses spots somou 60,82% da intensidade de todos os spots mostrados no gel master. Foi observado a grande expressÃo de proteÃnas de baixo peso molecular (14,5 a 18,4 kDa) e pI variando de 4,2 a 5,9.para a raÃa Santa InÃs. Do total mÃdio de 236 spots encontrados, treze spots apresentaram diferenÃa significativa (p<0,05) entre animais de alta e baixa motilidade, sendo dez spots mais intensos em animais de alta motilidade e trÃs em animais de baixa motilidade. ApÃs digestÃo dos spots e identificaÃÃo por espectometria de massa esses spots foram identificados como as proteÃnas Arilsulfatase A e Zinco alfa 2 glicoproteÃna, mais intensas no G1 e RSVP-22 e Bodesina-2 com maior expressÃo no grupo G2. Para a raÃa Morada Nova , quatro spots apresentaram diferenÃa significativa (p<0,05) para o parÃmetro percentual de cÃlulas mÃveis (PEM). ApÃs digestÃo dos spots e identificaÃÃo por MALDI-Tof-Tof, foram identificadas as proteÃnas RSVP-14, RSVP-22, ProteÃna &#945;-1 do complexo-t e aldose redutase, sendo todas mais intensas em animais de alta motilidade (G1). Em um segundo estudo, foi avaliada a influÃncia de diferentes fontes de proteÃna da dieta (farelo de soja, feno de folha de leucena e torta de algodÃo) e de nitrogÃnio nÃo- protÃico (urÃia) sobre o peso corporal, desenvolvimento testicular e qualidade espermÃtica dos animais estudados, bem como a expressÃo de proteÃnas no plasma seminal dos animais potencialmente relacionadas Ãs dietas. Foram utilizados 20 cordeiros da raÃa Morada Nova com idade variando entre 24 e 39 semanas. Para os critÃrios de desenvolvimento testicular (cirrcunferÃncia escrotal, espessura testicular, largura testicular e comprimento testicular) nÃo houve diferenÃa significativa (p<0,05). ao final do perÃodo experimental Animais alimentados com torta de algodÃo tiveram um aumento significativo do peso corporal (p<0,05), quando comparado com feno de leucena. No mesmo perÃodo, o peso corporal dos animais alimentados com feno de leucena, soja e urÃia foi semelhante. DiferenÃas entre os tratamentos (p <0,05) foram observadas apenas para motilidade progressiva individual e defeitos totais. O sÃmen dos animais alimentados com dietas contendo feno de leucena apresentou baixa motilidade progressiva individual quando comparados aqueles alimentados com dietas contendo farelo de soja. No entanto, animais alimentados com dietas contendo torta de algodÃo e urÃia tinham valores semelhantes para a motilidade progressiva. Quando os defeitos totais foram analisados, houve uma diferenÃa significativa entre os grupos de feno de leucena e urÃia. Foi detectado uma quantidade de 246,6  13,9, 236,0  12,4, 261,2  20,2 e 243,8  20,5 spots por gel nos grupos de farelo de soja, feno de folhas de leucena, torta de algodÃo e urÃia, respectivamente. NÃo houve diferenÃas significativas no nÃmero de spots por gel, entre os grupos. DiferenÃas significativas (p <0,05) foram observadas nas intensidades de doze spots dos mapas protÃicos. Foi observado um aumento da expressÃo do spot S8707 (62,8 kDa, pI 6,9 ) em animais alimentados com feno de folhas de leucena, quando comparados Ãqueles alimentados com farelo de soja, bem como correlaÃÃo negativa com a motilidade progressiva individual (MPI). Estas observaÃÃes indicam que fatores presentes no feno de folhas de leucena promovem um aumento na expressÃo da proteÃna (S8707), o que provavelmente provoca alteraÃÃes deletÃrias no mecanismo que controla a motilidade progressiva da cÃlula espermÃtica, jà que neste grupo observou-se valores mais baixos para MPI. / The Brazilian Northeast has about almost half of Brazilian sheep livestock, estimated at twenty million animals. The races created here, Santa Ines and Morada Nova stand out because they have good physical development, weight gain and good adaptation to the tropical climate. Recently showed the protein profile of mature rams through the techniques of two-dimensional electrophoresis associated with mass spectrometry, which several proteins have been identified, including those RSVPs 14 and 22 kDa, belonging to the family of BSPs and bodesinas - 1 and 2, that are part of the family of espermadesinas as well as the changes suffered by the protein profile of seminal plasma of animals during reproductive development, while changes in the parameters of sperm concentration and motility, although the association between the protein expression of these proteins with reproductive parameters testicular and measures have not yet been made in northeastern Brazil. Semen samples were collected from twenty-one adult sheep Santa Ines and eleven Morada Nova with normal reproductive and mean age of two years and seminal plasma was obtained by centrifugation and subjected to two-dimensional electrophoresis, and the spots that differed significantly between the groups of animals from high (G1) and low motility (G2) were digested with trypsin and subjected to mass spectrometry and research database for identification. The gels were stained with colloidal Cromassie, scanned and analyzed with PDQuest application and quantity of the spots quantitatively estimated. Evaluated, then, statistical associations between these variables and the reproductive parameters scrotal circumference (EC), percentage of motile cells (PEM) and total sperm defects (MDD) of the animals Santa InÃs and scrotal circumference (EC) motility individual rogressive (MIP), percentage of motile cells (PEM), Sperm concentration (CONC) and Massal motility (MM) for the animails Morada Nova. Were detected on average 236  7.65 spots per gel, according to the pairing generated by PDQuest application to the Santa Ines and 261  15.09 spots per gel in the seminal plasma of animals Morada Nova, ranging between 182 and 375 spots gel. For Santa InÃs a total of 63 spots were identified consistently in all gels, which represented 41.5% of all spots detected intensity. For Morada Nova animails, a total of 98 spots were detected consistently in all gels. The intensity of these spots amounted to 60.82% of the intensity of all spots shown on the master gel was observed a great expression of proteins of low molecular weight (14.5 to 18.4 kDa) and pI ranging from 4.2 to 5, 9. to Santa Ines. The average total of 236 spots found thirteen spots showed significant difference (p <0.05) between animals of high and low motility, being more intense ten spots in animals with high motility and three in animals with low motility. After digestion of spots and identification by mass spectrometry these spots were identified as proteins Arylsulfatase A and zinc alpha 2 glycoprotein more intense in G1and RSVP-22 and Bodesina with higher expression in G2. For the Morada Nova race, four spots showed significant difference (p <0.05) for the parameter percentage of motile cells (PEM). After digestion of spots and identification by MALDI-TOF-TOF, we identified as proteins, RSVP-14, RSVP-22, a protein &#945;-1 of t-complex and aldose reductase, which are all more intense in animals with high motility (G1). In a second study, evaluated the influence of different sources of dietary protein (soybean meal, leucaena leaf hay and cottonseed meal) and non-protein nitrogen (urea) on body weight, testicular development and sperm quality of the animals studied and protein expression in the seminal plasma of the animals potentially related to the diets. We used 20 Morada Nova lambs aged between 24 and 39 weeks. For the testicular development criteria (cirrcunferÃncia scrotal, testicular thickness, width and length testicular testicular) no significant difference (p <0.05) was observed at the end of experiment. Animals fed cottonseed meal had a significant increase in body weight (p <0.05) compared with Leucaena hay. In the same period, the body weight of animals fed leucaena hay, soybeans and urea was similar. Differences between treatments (p <0.05) were observed only for individual progressive motility and total defects. The semen of animals fed diets containing leucaena showed low motility individual when compared with those fed diets containing soybean meal. However, animals fed diets containing cottonseed meal and urea had similar values for progressive motility. When the total defects were analyzed, there was a significant difference between groups of leucaena hay and urea. Detected an amount of 246.6  13.9, 236.0  12.4, 261.2  20.2 and 243.8  20.5 spots per gel in groups of soybean meal, leucaena leaf hay, cottonseed meal and urea, respectively. No significant differences in the number of spots per gel, in both groups. Significant differences (p <0.05) were observed in the intensities of twelve spots in the proteic maps . An increased expression of spot S8707 (62.8 kDa, pI 6.9) in animals fed with hay and leaves of leucaena compared to those fed soybean meal, and a negative correlation with individual motility (MPI .) These observations indicate that factors present in hay sheets leucaena promote an increase in protein expression (S8707), the likely cause deleterious changes in the mechanism controlling the motility of sperm cells, as observed in this group lowest for MPI.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O Nordeste brasileiro à detentor de um expressivo rebanho ovino, e, dentre as raÃas deslanadas existentes na regiÃo, a Santa InÃs se destaca por apresentar bom desenvolvimento corporal, ganho de peso e adaptabilidade Ãs condiÃÃes tropicais. Recentemente, demonstrou-se que o perfil protÃico do plasma seminal de carneiros Santa InÃs passa por alteraÃÃes significativas durante o desenvolvimento reprodutivo, simultaneamente a mudanÃas nos parÃmetros de motilidade e concentraÃÃo espermÃtica. Contudo, ainda nÃo se conhece a identidade de todas essas proteÃnas. Dessa forma, o presente trabalho foi conduzido com o objetivo de identificar as proteÃnas do plasma seminal de carneiros Santa InÃs maduros, utilizando as tÃcnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa. Amostras de sÃmen foram coletadas de oito carneiros adultos e o plasma seminal obtido atravÃs de centrifugaÃÃo e submetido à eletroforese bidimensional. Os gÃis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest. Os spots foram cortados individualmente dos gÃis, digeridos com tripsina, e submetidos a identificaÃÃo por espectrometria de massa (MALDI-ToF/ToF). A sequÃncia peptÃdica das proteÃnas mais abundantes e a distribuiÃÃo dos domÃnios foram representadas graficamente utilizando o aplicativo Caititu. Foram detectados, em mÃdia, 302 spots por gel. Destes, 143 estavam presentes em todos os gÃis. Trinta e nove spots foram identificados, correspondendo a 26 diferentes proteÃnas. As proteÃnas mais abundantes foram as RSVPs 14 e 22 kDa, pertencentes à famÃlia das binder of sperm proteins, e as Bodesinas-1 e 2, pertencentes à famÃlia das espermadesinas. Outras proteÃnas foram identificas no estudo, incluindo albumina, clusterina, peroxiredoxina, lactotransferrina, metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2), beta galactosidase e heat shock proteins. Dessa forma, a identidade dessas proteÃnas sugere que o plasma seminal de carneiros Santa InÃs contÃm componentes que participam de diversos processos fisiolÃgicos, incluindo proteÃÃo do espermatozÃide, modulaÃÃo da motilidade e capacitaÃÃo espermÃtica, modificaÃÃo da membrana do espermatozÃide e interaÃÃo entre gametas. O conhecimento dessas proteÃnas contribuirà para uma melhor compreensÃo dos mecanismos de regulaÃÃo do plasma seminal sobre a funÃÃo espermÃtica em ovinos / Northeastern Brazil has a significant population of sheep and, among the native hairy breeds, Santa InÃs is known for its good performance and adaptability to tropical environments. Recently, it has been shown that the protein profile of the seminal plasma of Santa InÃs rams changes during sexual development, in concert with changes in semen parameters, such as sperm motility, morphology and concentration. However, the identity of seminal plasma proteins from these hairy rams is still unknown. Therefore, we pursued the identification of seminal plasma proteins from Santa InÃs rams using a proteomic approach. Semen samples were collected from eight mature rams, and seminal plasma saved after centrifugation. Seminal plasma protein maps, obtained by two-dimensional electrophoresis, were stained with colloidal Coomassie. The gels were scanned and analyzed using PDQuest software. Protein spots were individually cut, in-gel digested with trypsin and identified after tandem mass spectrometry and database search. On average , we detected 302 spots per gel, from which 143 were present on every member of the match set generated by PDQuest. Thirty-nine spots were positively identified by mass spectrometry, corresponding to 26 different proteins. The major proteins present in the maps were the BSP-like RSVP14 and RSVP22 and the spermadhesins bodhesin 1 and 2. Other proteins detected in the maps included albumin, clusterin, peroxiredoxin, lactoferrin, transferrin, matrix metalloproteinase 2, beta galactosidase and heat shock proteins. The Identity of these proteins suggest their participation on several physiological events, such as sperm protection, regulation of sperm motility and capacitation, modification of sperm membrane and fertilization. The knowledge of the proteome of the ovine seminal plasma is a necessary step towards the understanding of the mechanisms underlying the regulation of sperm function by seminal plasma components in rams

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A realizaÃÃo desta pesquisa teve por objetivos a descriÃÃo do mapa eletroforÃtico bidimensional do plasma seminal de touros adultos Bos indicus, raÃa Brahman, bem como a determinaÃÃo das associaÃÃes estatÃsticas entre proteÃnas do plasma seminal e parÃmetros seminais destes touros. Amostras de sÃmen de 56 touros foram coletadas e o plasma seminal foi obtido atravÃs de centrifugaÃÃo e submetido à eletroforese bidimensional. Os gÃis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. Os touros foram divididos em grupos de alta e baixa motilidade espermÃtica e alto e baixo percentual de cÃlulas espermÃticas morfologicamente normais. As proteÃnas mais abundantes no plasma seminal dos touros Bos indicus e detectadas em todos os 56 gÃis apresentaram semelhanÃa com espermadesinas e BSPs. A expressÃo de spots com valores de kDa e pI equivalentes aos das proteÃnas aSFP, BSPs, clusterina , albumina e osteopontina foram estatisticamente diferentes entre os grupos de animais com parÃmetros contrastantes de motilidade e morfologia espermÃticas. As associaÃÃes encontradas entre tais spots protÃicos e os parÃmetros seminais sugerem a possibilidade do uso destes como marcadores moleculares da fertilidade potencial dos animais. / This research aimed to describe the two-dimensional electrophoresis map of bull seminal plasma of adult Bos indicus, Brahman, and the determination of statistical associations between proteins of seminal plasma and semen parameters of these bulls. Semen samples from 56 bulls were collected and seminal plasma was obtained by centrifugation and subjected to two-dimensional electrophoresis. The gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed using PDQuest application. The bulls were divided into groups of high and low sperm motility and high and low percentage of morphologically normal sperm cells. The most abundant proteins in seminal plasma of bulls Bos indicus and detected in all 56 gels showed similarity to espermadesinas and BSPs. The expression of spots with pI values &#8203;&#8203;kDa protein equivalent to aSFP, BSPs, clusterin, albumin and osteopontin were significantly different between groups of animals with contrasting parameters of sperm motility and morphology. The associations found between such protein spots and semen parameters suggest the possibility of their use as molecular markers of potential fertility of animals.

Estudou-se o perfil de proteínas de plasma seminal de touros das raças Nelore (Bos taurus primigerus indicus) e Simental (Bos taurus primigerus taurus), criados a campo, em regime de acasalamento múltiplo e manejo extensivo, na região de Dourados/MS, a fim de analisar a relação entre estas proteínas e características ligadas ao desempenho reprodutivo de touros. Coletaram-se amostras de sêmen no período de inverno (Julho/2001) e verão (Fevereiro/2002), realizando-se inicialmente o exame andrológico nos animais, e em seguida a análise padrão do sêmen. O plasma seminal foi, então, submetido à dosagem de proteínas totais, à dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), para avaliação da ocorrência de lipoperoxidação, e à eletroforese bidimensional de proteínas. Para análise do perfil proteico de plasma seminal da cada raça, foram utilizados os seguintes parâmetros: comparação entre os períodos de inverno e verão; comparação de grupos de amostras separados de acordo com a quantificação de características ligadas ao desempenho reprodutivo (morfologia espermática, dosagem de proteína total e dosagem de TBARS); e comparação de grupos de amostras separados de acordo com classificações para avaliação da capacidade reprodutiva, previamente descritas na literatura (Breeding Soundness Evaluations – BSEs). Os touros da raça Simental demonstraram menor adaptação às condições ambientais tropicais, com valores mais altos de defeitos espermáticos maiores, proteína total e dosagem de TBARS no período de verão. Observou-se grande variabilidade no perfil proteico entre as raças Nelore e Simental e, dentro de cada raça, encontrou-se expressiva variação individual. O perfil de proteínas de plasma seminal de touros Nelore apresentou 155 spots, entre os quais 04 se destacaram como possíveis marcadores de características ligadas ao desempenho reprodutivo. Já na raça Simental foram identificados 248 spots, com destaque para 04 spots, que demonstraram maior potencial como marcadores de características de interesse para a reprodução. Os resultados mostram que o perfil de proteínas de plasma seminal está relacionado ao desempenho reprodutivo de touros, fazendo-se necessários maiores estudos sobre as proteínas que se destacaram como marcadores, a fim de identificar as funções que elas exercem no trato reprodutivo e nos eventos ligados à fertilização. / Seminal plasma proteins profiles from Nelore (Bos taurus primigerus indicus) and Simmental (Bos taurus primigerus taurus) bulls, used for multiple-sire breeding under range conditions, at Dourados/MS region, were studied aiming to analyze the relation between these proteins and traits linked to bulls’ reproductive performance. Semen samples were collected in the winter (July/2001) and summer (February/2002). Initially, an andrological examination was performed, followed by standard semen analysis. Seminal plasma was subjected to total protein quantification, thiobarbituric acid reactive substances quantification (TBARS, to evaluate lipid peroxidation), and two-dimensional protein electrophoresis. To analyze seminal plasma protein profile of each breed, the following parameters were used: comparison between winter and summer, comparison among groups of samples divided by quantification of traits linked to reproductive performance (sperm morphology, total protein quantification, TBARS quantification) and comparison among groups of samples divided by breeding soundness evaluations (BSEs), previously reported in literature. Simmental bulls showed lower adaptability to tropical environment conditions, with higher values of major sperm defects, total protein and TBARS in the summer. A great variability was observed in the protein profile between Nelore and Simmental breeds, and, for each breed it was found great individual variability too. Nelore seminal plasma protein profile presented 155 spots, 04 of which were considered potential markers for traits linked to reproductive performance. For Simmental breed, 248 spots were identified, with special interest for 04 spots, which showed higher potential as markers to reproductive characteristics. Results show that seminal plasma protein profile is related to bulls’ reproductive performance. Further studies about those proteins which are potential markers are needed, to determine their function at bulls’ reproductive system and in the events related to fertilization.

O plasma seminal é o constituintes não celular do sêmen suíno e contém uma série de componentes orgânicos e inorgânico que desempenham ações variadas tanto no trato reprodutivo masculino como no feminino. No entanto, este fluido de constituição complexa, exerce ações ambiguas sobre os espermatozoides suínos, pois pode atuar ao mesmo tempo de forma benéfica ou deletéria sobre a viabilidade destas células. Nesse sentido, alguns estudos sugerem que este não é o melhor meio para a conservação de espermatozoides. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do plasma seminal sobre a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial do espermatozoide suíno armazenado sob refrigeração a 17&deg;C por 72 horas. Para tanto, foram obtidos 4 ejaculados de 6 cachaços. Em seguida o sêmen in natura foi avaliado quanto às características da motilidade pelo sistema computadorizado de análise do sêmen, morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e concentração espermática. Após essa primeira avaliação, os ejaculados foram acondicionados em tubos cônicos de 50 mL para serem divididos em três tratamentos, a saber: não centrifugado (NC), centrifugado e com o plasma seminal retirado pós-centrifugação (CS) e centrifugado resuspendido (CR). A força de centrifugação utilizada foi de 500xg por 10 minutos. Todos os tratamentos foram submetidos à diluição em meio BTS para que se obtenha uma concentração de 30 x 106 espermatozoides por mililitro (mL). Em seguida, as amostras permaneceram por 90 minutos em temperatura ambiente e protegidas da luz antes de serem armazenadas. As doses com os diferentes tratamentos foram acondicionadas à temperatura de 17&deg;C e foram avaliadas nos intervalos 0 (90 min pós-diluição), 24, 48 e 72 horas para os seguintes parâmetros: características da motilidade (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal, estabilidade da membrana plasmática e peroxidação das membranas espermáticas (citometria de fluxo). Os tratamentos foram submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). Quando o principal efeito foi significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey-kramer ao nível de 5% de significância. Os resultados do presente estudo mostram que a ausência do plasma seminal foi deletéria para algumas características de motilidade, o mesmo ocorreu para a integridade das membranas plasmática e acrossomal uma vez que houve diminuição na percentagem de celulás espermáticas com membrana plasmatica integra e acrossomo integro no tratamento sem plasma seminal. A peroxidação lipídica das membranas e a manutenção da estabilidade da membrana plasmática não foram influenciadas pelo tratamento. Assim, conclui-se que a presença do plasma seminal em doses inseminantes refrigeradas por 72 h é importante para a manutenção das características de motilidade e para a integridade das membranas plasmáticas e acrossomal / The present study aimed to evaluate the effects of seminal plasma, from the rich fraction of the ejaculate, on kinetics, plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and capacitation of extended liquid boar semen stored under refrigeration at 17&deg; C for 72 hours. For this purpose, four ejaculates from each of six boars were used. Shortly after collection and raw semen evaluation, ejaculates were extended in BTS medium and then assigned to one of three treatments, as follows: non-washed seminal plasma (NWSP), washed-seminal plasma (WSP) centrifuged with own seminal plasma suspended (CWSSP). All treatments were evaluated for sperm motility parameters by the sperm class analyzer (SCA). Plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and sperm capacitation were evaluated by flow cytometry at 0, 24, 48 and 72 hours post dilution. The mean percentage of sperm motility (total and progressive) were lower (p&lt;0.05) in the WSP treatment. There was an increase (p&lt;0.05) in the percentage of sperm with damaged acrosome and damage plasma membrane in the WSP treatment. Membrane lipid peroxidation did not differ (p&gt;0.05) irrespective of treatment nor did sperm capacitation, which was similar (p&gt;0.05) among treatments. Our results show that seminal plasma from the sperm rich fraction is important to maintain adequate structural and functional characteristics of extended liquid boar and should be present in seminal doses throughout the period of store

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_carine_dahl_ corcini.pdf: 419232 bytes, checksum: 05d064069666c9b2d7ee37c1f565b4c2 (MD5) Previous issue date: 2008-04-18 / Artificial insemination (AI) in swine with frozen semen presents lower reproductive performance than AI with cooled semen. Such inefficiency can be attributed to many factors, especially to the semen extenders and individual boar effects, since boars may have different protein content in their seminal plasma. The objective of this study was to evaluate the protein content of distinct portions of the ejaculate of boars, prior to freezing, and the association between the presence of the proteins in the seminal plasma and parameters of semen quality post-thawing, to identify biochemical markers potentially associated with semen freezability in different boars and portions of the ejaculate. The sperm-rich portion of the ejaculate was fractioned in two samples, which were frozen in an extender containing 5% dimethylacetamide as a penetrating cryoprotectant. The protein content of the seminal plasma was evaluated through unidimensional electrophoresis and associated with sperm motility and membrane integrity, pre-freezing and post-thawing, and to sperm morphology and acrossome integrity post-thawing. Inter-boar analyses were conducted, adjusting for individual effects, as well as intra-boar analyses, which were stratified by boar. The first portion of the ejaculate, consisting of the first collected 10 mL, presented better post-thawing semen quality than the second portion. Nine proteins present in the seminal plasma presented significant association with parameters of semen quality (P < 0.05), in both inter and intra-boar analyses. Among them, two proteins, having molecular weight of 28 and 100 kDa were associated, respectively, with post-thawing sperm motility and both pre-freezing and post-thawing sperm membrane integrity. Thus, such proteins are potential biochemical markers for boar semen quality. / A inseminação artificial (IA) em suínos com sêmen congelado apresenta índices de desempenho reprodutivo insatisfatórios, em comparação com a IA com sêmen resfriado. Entre outros fatores, esta ineficiência pode ser atribuída aos diluentes e à variação entre os machos doadores de sêmen, que podem apresentar diferente conteúdo de proteínas no plasma seminal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o conteúdo protéico de diferentes porções do ejaculado de suínos, antes destas serem submetidas ao congelamento, e a associação entre a presença de proteínas identificadas no plasma seminal e indicadores de qualidade seminal pósdescongelamento, visando a identificação de marcadores bioquímicos associados com a congelabilidade do sêmen de diferentes machos e frações do ejaculado. A porção do ejaculado rica em espermatozóides foi fracionada em duas amostras, as quais foram congeladas em diluente contendo 5% de dimetilacetamida como crioprotetor interno. O conteúdo protéico do plasma seminal foi avaliado por eletroforese unidimensional e associado com motilidade e integridade da membrana espermática pré e pós-congelamento, e morfologia espermática e integridade de acrossoma pós-congelamento. Foram conduzidas análises inter-machos, nas quais o efeito individual foi ajustado, e intra-machos, nas quais as análises foram estratificadas para cada macho. A primeira porção do ejaculado, consistindo dos primeiros 10 mL coletados, apresentou melhores indicadores de qualidade seminal pós-descongelamento, em comparação com a segunda porção do ejaculado. Nove proteínas presentes no plasma seminal apresentaram associação significativa com parâmetros de qualidade do sêmen congelado, tanto na análise inter-machos, como na intra-machos. Dentre estas nove proteínas, duas dela, que possuem peso molecular de 28 e 100 kDa foram associadas, respectivamente, com a motilidade pós-descongelamento e com a integridade da membrana espermática précongelamento e pós-descongelamento (P < 0,05), sendo, portanto, potenciais candidatas a marcadores bioquímicos para qualidade de sêmen de suínos.