Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-19T05:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T22:47:01Z : No. of bitstreams: 1 182957.pdf: 3114560 bytes, checksum: 8ec78ff7058c6c16ee0ad93060283c28 (MD5) / O presente trabalho descreve os efeitos de injeções locais de 8-OH-DPAT em vários distritos do tegmento pontomesencefálico e no aqueduto ou 40 ventrículo de pombos domésticos sobre os comportamentos de ingestão hídrica e alimentar. Uma descrição neuroanatômica da distribuição de pericários 5-HT imunoreativos (5HT-IRp) visando auxiliar o mapeamento funcional realizado por meio de injeções locais de 8-OH-DPAT em distritos do tegmento pontomesencefálico indicou que a maioria dos 5-HT-IRp estão localizados em distritos paramedianos e da linha média do tegmento mesencefálico e pontino (rafe superior), ou em áreas do tegmento ventrolateral mesencefálico e dorsolateral pontino, referido como grupo lateral. Os efeitos ingestivos de injeções de 8-OH-DPAT ou de veículo, nestes distritos foram examinados em pombos saciados com livre acesso à água e alimento. Após aplicação destes tratamentos e ao longo de 60 minutos, foram registrados os padrões comportamentais de ingestão de água e alimento (freqüência, latência e duração), a latência e a duração das posturas de sono e sonolência, e a duração dos comportamentos de autolimpeza, imobilidade alerta, exploração do ambiente e locomoção, além dos consumos de água e alimento. As injeções de 8-OH-DPAT administradas nas estruturas paramedianas e da linha média e no aqueduto/40 ventrículo provocaram, efeitos dipsogênicos, de forma consistente, e efeitos hiperfágicos de menor incidência e intensidade. As injeções de 8-OH-DPAT provocaram, de forma dose-dependente, um aumento na quantidade de água ingerida por grama de alimento consumido, indicando uma desorganização do padrão periprandial de ingestão hídrica e um aumento seletivo no consumo de água. As injeções de 8-OH-DPAT administradas no grupo lateral e em regiões não imunoreativas do tegmento pontomesencefálico não afetaram a ingestão alimentar e hídrica. Além disso, as injeções de 8-OH-DPAT nos diversos distritos estudados não provocaram efeitos hipnogênicos ou alterações nos comportamentos exploratórios. Assim, os resultados obtidos no presente trabalho sugerem: 1) a participação de receptores 5-HT1a, localizados na linha média do tegmento pontomesencefálico na regulação do comportamento de ingestão hídrica em pombos e 2) neurônios serotoninérgicos da rafe superior e do grupo lateral participam de distintos circuitos funcionais.

Orientador : Profª. Drª. Joice Maria da Cunha / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 05/08/2016 / Inclui referências : f. 78-100 / Resumo: O diabetes é uma doença crônica, debilitante e de alta prevalência, cuja gravidade aumenta com o aparecimento de complicações subjacentes. Dentre estas, a dor neuropática diabética (DND) parece estar associada à morbidade e mortalidade no diabetes, dada a dificuldade de tratamento. A fisiopatologia da DND tem sido associada à redução do tônus imposto pelo sistema descendente inibitório, incluindo aqueles dependentes da liberação de serotonina (5-HT). Neste contexto, nossa hipótese é de a via indolamina 2,3-dioxigenase 1 (IDO1)/quinureninas (KYN) possa estar envolvida no mecanismo patológico da DND, uma vez que a mesma é a principal via de catabolismo do triptofano, levando à depleção de serotonina e à produção de quinureninas neurotóxicas. Assim, nosso objetivo foi investigar o papel da via IDO1/KYN na alodinia mecânica em animais com diabetes experimental induzido quimicamente por estreptozotocina (STZ). Verificamos que a alodinia mecânica inicia-se 2 semanas após a indução do diabetes, com pico na 4ª semana, havendo redução de cerca de 20% no limiar mecânico dos animais diabéticos (Dbt) quando comparados aos animais normoglicêmicos (Ngl). Corroborando a nossa hipótese, foi observado que 1) animais Dbt apresentam significativa redução os níveis de 5-HT no cordão espinhal (CE), com baixa reposição deste neurotransmissor (evidenciada pelo aumento da razão 5-HT1AA/5-HT) nesta estrutura e 2) o tratameto com fluoxetina (bloqueador da recaptação da serotonina) induziu efeito antinociceptivo nestes animais. Apesar da expressão de IDO1, enzima passo-limitante da via, não estar alterada em CE de animais Dbt quando comparada aos animais Ngl, o tratamento com 1-L-metil triptofano (antagonista da IDO1) promoveu antinocicepção em animais Dbt. A ausência de alteração na expressão da IDO no CE de animais Dbt pode estar associada a não observação de alterações significativas nos níveis de citocinas inflamatórias (IL-1?, IL-6 e TNF?) nem nos marcadores para astrócitos (GFAP) e micróglia (IBA-1) no CE destes animais. Curiosamente, os níveis de IL-1? e TNF? em nervo ciático de animais Dbt apresentam-se reduzidos quando comparados aos níveis observados em animais Ngl. Da mesma forma, a enzima quinurenina 3 monoxigenase (KMO), também importante na geração de KYN, não se demonstrou aumentada em animais Dbt em relação ao grupo Ngl, embora seu bloqueio farmacologíco pelo tratamento com JM-6 tenha induzido significativo efeito antinociceptivo nestes animais. Por fim, dada a ativação de receptores NMDA por algumas KYN, verificamos que a administração intratecal de um antagonista NMDA o MK-801 também aumentou significativamente o limiar mecânico em animais Dbt. Assim, podemos concluir que a ativação da via IDO1/KYN parece estar associada ao desenvolvimento da DNP, levando tanto a redução de 5-HT e, portanto, da ativação das vias descendentes inibitórias quanto ao aumento da produção de KYN, as quais possivelmente devido à ligação aos receptores NMDA aumentam o tônus das vias descendentes facilitatórias. Palavras-chave: Dor neuropática, diabetes, serotonina, IDO1, quinureninas. / Abstract: Diabetes is a highly disabling chronic disease, prevalent in both low and high income countries. Among the complications, the diabetic neuropathic pain (DNP) is cited as one of the main and more difficult to treat complication and is highly linked to higher mortality and morbidity in diabetic patients. The pathophysiology of DNP has been associated with a reduction of endogenous inhibitory descending pathway tonus, including the fat ones driven by neurotransmitters as serotonin. In this context, our hypothesis is that the indoleamine 2,3-dioxygenase 1 (IDO1)/kynurenine (KYN) pathway might be related to the pathological process of DNP, since this pathway is mainly related to the L-tryptophan catabolism, lowering serotonin levels and also producing neuroactive kynurenines. Then, we investigated the role of IDO1/KYN in the generation of mechanical allodynia in streptozotocin (STZ)-diabetic animals (Dbt) in which the mechanical allodynia was initiated 2 weeks after the STZ injection, peaking in the fourth week. Corroborating our hypothesis, we observed that Dbt rats have reduced spinal cord serotonin levels, and lower 5-HT turnover evidenced by an increase of the 5-HIAA/5HT ratio and that the mechanical allodynia in Dbt rats is significantly prevented by SSRI fluoxetine. Although the rate limiting enzyme IDO1 expression was not altered in the spinal cord from Dbt rats, the pharmacological blockade of IDO1 by 1-L-MT evoked a significant reduction in the mechanical allodynia in these animals. Pro inflammatory cytokine levels (IL-1?, IL-6 e TNF?) in the spinal cord did not differ between normoglycemic (Ngl) and Dbt rats while in sciatic nerve, we observed a reduction of IL-1? and TNF-? levels, revealing a lower pro inflammatory tonus in these tissues, which might explain the absence of statistical difference of IDO1 expression in the spinal cord. Given the presence of IDO1/KYN in glial cells and its importance for the neuropathic pain states, we observed no effect of diabetes on the expression of IBA-1 (microglial marker) and GFAP (astrocytic marker) production between Ngl and Dbt animals. In addition, immunofluorescence revealed morphological changes in astrocytic cells in the spinal cord of Dbt animals 3 and 4 weeks after the STZ injection, prompting to idea that these cells might have an alteration in its metabolism or function. The kynurenine 3-monooxigenase (KMO) enzyme, another important enzyme for the kynurenine generation, remained unchanged in Dbt rats after 4 weeks when compared to Ngl group, despite its blockade induced antinociception by JM-6 in these animals. Since NMDA receptors might be activated by quinurenins, as these receptors are upregulated in the DPN, we further demonstrated that the pharmacological blockade of these receptors also promoted reduction in the mechanical allodynia in Dbt group. All together, our data suggest that the physiopathology of DNP may involve the overactivation of IDO1/KYN pathway, which explained the decrease of serotonin levels/ turnover and the pharmacological effectiveness of compounds that interfere directly or indirectly in this pathway over the mechanical allodynia in DBT animals. Further studies however are needed to characterize the importance of this pathway activation not only in DNP but also in other neuropathic pain conditions. Keywords: diabetes; streptozotocin; serotonin; cytokines.

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T12:25:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Binhara_IramaiaMendes_M.pdf: 1552383 bytes, checksum: e0083856ae06fb79873d77624a7b709e (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Poliaminoácidos básicos tais como a polilisina e poliarginina produzem uma variedade de efeitos biológicos incluindo aumento da permeabilidade vascular, infiltração de leucócitos, inflamação pulmonar, agregação de plaquetas e ativação de mastócitos. Neste estudo, investigamos os mecanismos envolvidos na desgranulação de mastócitos induzida por poliarginina e polilisina usando-se mastócitos peritoneais isolados de ratos. Mastócitos de 10 ratos machos Wistar (200 a 300 g) foram obtidos por injeção de solução Krebs Ringer Fosfato (KRF) na cavidade peritoneal. O lavado peritoneal foi removido e centrifugado a 300 9 por 5 minutos à temperatura ambiente. A suspensão de células foi lavada com KRF e incubada com C4C]serotonina (C4C]5-HT; 40 nCi/ml) por 60 minutos. As células foram então lavadas 3 vezes em KRF. Alíquotas da suspensão celular foram aqueci das a 37°C por 20 minutos. Os agentes desgranuladores foram adicionados à suspensão. As células foram então centrigugadas (300 g, 10 minutos) e o sobrenadante removido para determinação da C4C]5-HT. A concentração de C4C]5-HT (%) foi determinada medindo-se a cintilação em contador f3 ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Basic polyaminoacids such as polylysine and polyarginine produce a variety of biological effects including increase in vascular permeability, leucocytic infiltration, lung infllammation, platelet aggregation and mast cell activation. In this study we have further investigated the mechanisms involved in the mast cell degranulation induced by polyarginine and polylysine using isolated rat peritoneal mast cells. Mast cells of 10 male Wistar rats (200 - 300 g) were obtained by the injection of Krebs-Ringer Phosphate solution (KRP) into peritoneal cavity. The fluid was withdrawn and centrifuged at 300 9 for 5 min at roem temperaature. The cell suspension was washed twice in KRP and incubated with 40 nCi/ml of C"C]5-HT at 37C by 60 min. The cells were then washed three times in KRP. Aliquots of the peritoneal cell suspension were warmed at 37°C for 20 mino The stimulus were added to the suspension. The cells were then centrifuged (300 g, 10 min) aand the supematant removed for [1"C]5-HT determination. The [1"C]5 HT concentrations (%) was determined by measuring the radioactivity in a y counter. Poly-l-arginine caused a dose-dependent C"C]5-HT release (139.2 kD; 11 :t 5, 67 :t 4.4 and 70.4 :t 0.6% for 0.01, 0.1 and 1J,LM, respectively; n = 4). Similar responses were observed for either poly-D-Iysine (94.9 kD; 4 :t 0.6, 28 :t 6 and 41 :t 14 for 0.01,0.1 and 1 IlM, respectively; n = 4) and poly-l-Iysine (80.4 kD; 30 :t 1 and 61 :t 3.3% for 0.1 and 1 J,LM, respectively; n=12). The polyarginine-induced C4C]5-HT release was also dependent on the molecular weight of the polycation (5 1: 2 and 27 1: 7% for 11.6 kD and 139.3 kD, respectively; n = 6). Heparin (15 - 250 U/ml) and dermatan sulfate (0.1 mg I ml) virtually abolished the [14C] 5-HT release induced by polyarginine. In contrast, the enzymes chondroitinase AC, heparitinase I, heparitinase 11 and heparinase had no effect on the polyarginine-induced [14C] 5-HT release / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientadores: Claudia Herrera Tambeli, Maria Cecilia F. A. Veiga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:04:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ting_Elizabeth_M.pdf: 3202953 bytes, checksum: 19d676f0e41c99578f051e9850374149 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientador: Lauro T. Kubota / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:00:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castilho_TaniaJacometode_D.pdf: 2873159 bytes, checksum: 7c51369d8da8503c54b5af2b2c45b337 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Sendo os neurotransmissores compostos que desempenham papel importante no organismo humano, a análise dos mesmos é revestida de um interesse especial nas áreas médica e farmacêutica. A análise de neurotransmissores, utilizando um biossensor à base de peroxidase (HRP) imobilizada em pasta de carbono, pode ser uma alternativa às técnicas tradicionais de análise que são pouco seletivas (fluorimétrica), muito caras (CG-MS) ou demoradas (HPLC-ED). Estes fatores as tomam pouco adequadas para análises rápidas. Assim, esta tese refere-se ao desenvolvimento de um biossensor à base de peroxidase imobilizada em pasta de carbono para a determinação de neurotransmissores em amostras biológicas. Na construção do biossensor foram realizados oito procedimentos diferentes para imobilizar a enzima HRP e todas as condições experimentais determinadas, usando uma solução do neurotransmissor serotonina como composto de referência. Foram avaliados os valores de sensibilidade obtidos com a adição de glutaraldeído, albumina de soro bovino e a ativação da grafite com carbodiimida no processo de imobilização enzimática. -Os resultados indicaram que a composição da pasta tem grande influência na atividade da enzima imobilizada para catalisar a oxidação da serotonina. Os melhores resultados foram obtidos em tampão fosfato 0,1 moI L-I (pH = 7,0), contendo 10 !lmoI L-I de peróxido de hidrogênio, aplicando-se o potencial-50 mV vs ECS. Nestas condições, o biossensor apresentou resposta linear entre 0,2 e 2,0 fllIlol L-I, limite de detecção de 0,08 Ilmol L-I e tempo de resposta de 0,5 s. O biossensor apresentou sensibilidades semelhantes para a dopamina, a epinefrina e a norepinefrina. Para a serotonina a sensibilidade foi mais baixa, estando de acordo com o potencial redox mais elevado e ser esta substância um monofenol. O sensor proposto apresentou-se estável durante quatro horas de monitoramento, e uma diferença de resposta de 2% entre seis preparações. O biossensor foi aplicado com sucesso na determinação da concentração total de neurotransmissores em amostra de plasma sanguíneo de rato, sendo obtida uma recuperação de 102% / Abstract: Neurotransmitters are compounds that have a very important role on human body and their analysis have an especial interest to medical and pharmacological areas. This type of analysis using a biosensor with HRP enzyme immobilized on carbon paste might be an interesting alternative to the traditional methods that are low selective (fluorimetric), very expensive (GC-MS), or takes much time to accomplish the results (HPLC-ED). The characteristics mentioned above make them non appropriate for quick analysis. Thus, this work describes the biosensor development and its use for determination of neurotransmitter in biological samples. Eight different protocols on the HRP enzyme immobilization were used and optimal experimental conditions were determined using a serotonin solution as a standard. Values of sensitivity were evaluated by adding glutaraldehyde, bovine serum albumin, and carbodiimide to the enzyme immobilization processo The results showed that the paste composition has great influence on the enzyme activity for serotonin oxidation. The best results were obtained in 0.1 moI L-I phosphate buffer (pH=7.0) containing 10 J..lmol L-I of hydrogen peroxide at an applied potential of -50 mV vs SCE. On these conditions, the biosensor showed a linear response range from 0.2 to 2.0 J..lIDol L-I, a detection limit ofO.08 J..lIDol L-I and the response time was 0.5 seconds. The biosensor sensitivities for dopamine, epinephrine and norepinephrine were practically the same. For serotonin, the biosensor showed a slight lower sensitivity, what agrees with its redox potential. The proposed biosensor presented a stable response during 4 h under continuous monitoring. The difference of response was of 2% among six different preparations. The biosensor showed a successful use on the determination of the total ftaction of neurotransmitters in rat blood samples, obtaining an average recovery of 102% / Doutorado / Doutor em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4014_1.pdf: 877470 bytes, checksum: d1b076f879fb8d9d2e99d5539bd5480f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi analisar as influências da maior disponibilidade de alimento durante a lactação sobre o crescimento somático, desenvolvimento sensório-motor e regulação serotoninérgica do consumo alimentar em ratos. Para obtenção de um estado de hiperalimentação foi utilizado o modelo experimental de redução da ninhada, sendo obtidos dois grupos experimentais: 1. Grupo Controle (n = 30), composto por animais mantidos em ninhadas com número controle de 8 filhotes, do 1º ao 21º dia de aleitamento; 2.Grupo Ninhada reduzida (n = 30), composto por animais submetidos a redução no 3º dia de lactação do número controle (8 por ninhada) para 2 filhotes. Durante este período, correspondente ao aleitamento, foram avaliados parâmetros de crescimento somático, maturação de características físicas e sensóriomotoras e quantificada a ingestão alimentar neonatal. Para quantificação do consumo alimentar neonatal os animais passaram por privação alimentar nos dias 7, 14 e 21. Após o período de separação, os filhotes foram devolvidos para suas mães e o consumo alimentar foi quantificado por ganho de peso após período de 1 hora de aleitamento. Durante os primeiros 21 dias de vida, foram realizadas avaliações de desenvolvimento somático e maturação reflexa. Ao 40º dia, cada grupo foi subdividido segundo o tratamento farmacológico diário, uma vez por dia, do 40o ao 52o dia de vida, nos subgrupos salina (injeção de solução de Nacl a 0,9%, 1ml/Kg i.p. n = 10) ou fluoxetina (injeção de solução de fluoxetina, 10mg/Kg, 1ml/kg i.p, n = 10). A partir de então, a avaliação da ingestão alimentar de 24 horas dos animais foi obtida diariamente durante os 12 dias do tratamento farmacológico. Para tanto, foram utilizadas gaiolas metabólicas apropriadas. O aumento de peso dos animais de ninhadas reduzidas foi observado já a partir do 4º dia pós-natal, persistindo até o 40º e 90º dias de vida. Observou-se aceleração na maturação de características somáticas e físicas bem como do desenvolvimento de reflexos. Essas alterações em animais Ninhada reduzida foram acompanhadas por aumento na ingestão alimentar durante a lactação. No entanto, aos 40 dias de idade, o grupo de animais de ninhadas reduzidas mostrava-se hipofágico com relação ao controle. Esse efeito foi revertido aos 90 dias. O tratamento com fluoxetina promoveu redução de ingestão alimentar em animais controle, por outro lado não foi efetivo em animais de ninhadas reduzidas, indicando menor sensibilidade desses animais ao efeito hipofágico desse fármaco. Os resultados deste estudo evidenciam um efeito precoce da hiperalimentação nos períodos iniciais da vida sobre os parâmetros de crescimento somático e desenvolvimento sensório-motor em ratos. O excesso de alimentação nos períodos iniciais da vida pode ter promovido alterações metabólicas na regulação serotoninérgica do comportamento alimentar, evidenciada pela ausência de resposta ao efeito agudo da fluoxetina nos animais de ninhadas reduzidas. Estes achados apontam para a importância da nutrição nos períodos iniciais da vida para o correto desenvolvimento dos sistemas fisiológicos, dentre os quais se destaca o SNC e o controle do comportamento alimentar

A serotonina está presente no Sistema Nervoso Central (SNC), gânglios perifé-ricos, e órgãos neuroendócrinos de crustáceos, participando de muitos processos fisi-ológicos. Receptores serotoninérgicos com perfil farmacológico similar ao dos recep-tores 5-HT1 e 5-HT2 de vertebrados já foram identificados em crustáceos, assim como os efeitos de vários agonistas e antagonistas destes receptores. O objetivo geral deste trabalho foi investigar a localização dos receptores serotoninérgicos nos tecidos-alvo periféricos do caranguejo Neohelice granulata pela técnica de binding, utilizando serotonina triciada (5-HT-H3), identificar o perfil fisiológico e farmacológico dos receptores pela técnica de binding, utilizando metiotepina, antagonista dos receptores serotoninérgicos 5-HT1 e ciproeptadina, antagonista dos receptores serotoninérgicos 5-HT2 e verificar o efeito dos antagonistas sobre o metabolismo de carboidratos e a postura de caranguejos N. granulata. Os experimentos in vivo e in vitro, foram realizados com grupos de animais alimentados com dieta rica em proteínas (RP), rica em carboidratos (RC) e animais do campo. O presente trabalho mostra que fatores nutricionais relacionados às dietas ofe-recidas aos caranguejos interagem com a serotonina, controlando a homeostase da glicose. Resultados obtidos com a administração dos antagonistas metiotepina e ci-proeptadina sugerem que os receptores serotoninérgicos envolvidos no controle do metabolismo de carboidratos possam ter um mecanismo de ação similar aos recepto-res 5-HT2 de mamíferos. A administração de serotonina e ciproeptadina nos animais promoveu uma for-te flexão de membros e abdome. No entanto, a administração de metiotepina promo-veu um relaxamento da musculatura, sugerindo a existência de receptores com perfil farmacológico similar aos receptores 5-HT1 de mamíferos no sistema nervoso periférico. Não foram encontradas terminações nervosas próximas ou se inserindo nas lamelas branquiais, e também não se observou qualquer neurônio imunorreativo à serotonina em ambas as brânquias, sugerindo que a serotonina seja liberada de ór-gãos neuroendócrinos para a hemolinfa do N. granulata, e tenha sua ação como neu-ro-hormônio nas brânquias. Foram localizados receptores serotoninérgicos no caranguejo N.granulata através da ligação específica de serotonina triciada (5-HT-H3) nas brânquias posteriores, maior ligação entre todos, brânquias anteriores, coração, hepatopâncreas e músculo mandibular. Experimentos in vivo mostraram no músculo, hepatopâncreas e coração, que a administração de 5-HT juntamente com 5-HT-H3 promove redução da ligação em seus receptores em animais do campo, demonstrando a especificidade da ligação. Nos animais em dieta RC ou RP a ligação não foi alterada, sugerindo um possível efeito da dieta sobre a ligação de 5-HT-H3. Resultados da administração dos antagonistas no músculo, em conjunto com os obtidos na reação postural, reforçam a hipótese da presença de receptores com perfil farmacológico similar aos 5HT1 de mamíferos neste tecido. No hepatopâncreas e coração, a administração dos antagonistas sugerem a presença de receptores com perfil farmacológico distinto dos receptores 5-HT1 e 5-HT2. Em ambas as brânquias, observou-se que a ligação de 5-HT-H3 é alterada em função do tempo de injeção e apresentam alta ligação de 5-HT-H3. Nos animais da dieta RP a administração de 5-HT reduziu a ligação de 5-HT-H3 em ambas as brânquias, confirmando a especificidade da ligação e a dopamina reduziu a ligação de 5-HT-H3 nas brânquias anteriores. Com a administração dos antagonistas, sugere-se a existência de receptores serotoninérgicos nas brânquias com perfil farmacológico similar aos receptores 5-HT1 de mamíferos. Nos animais alimentados com dieta RC e do campo, não foram observadas alterações na ligação de 5-HT-H3 com o uso de 5-HT, dopamina e antagonistas em ambas as brânquias, mostrando novamente que a dieta pode estar interferindo na ligação de 5-HT-H3. Em estudos in vitro realizados em ambas as brânquias, as curvas de competi-ção entre 5-HT-H3 e serotonina em caranguejos alimentados com ambas as dietas, mostram que a serotonina inibe a ligação de 5-HT-H3 de forma dose-dependente, de-monstrando a especificidade da ligação. A metiotepina e ciproeptadina não inibiram a ligação de 5-HT-H3 de forma dose-dependente, mas observa-se uma diminuição de aproximadamente 50% na ligação em ambas as brânquias de animais alimentados com dieta RP, evidenciando a existência de receptores do tipo 5-HT1 e 5-HT2 nestes tecidos. O presente trabalho propõe a existência de receptores serotoninérgicos nas brânquias posteriores e anteriores, coração, hepatopâncreas e músculo mandibular do caranguejo N. granulata e que a dieta oferecida aos animais interfere na ligação da serotonina em seus receptores nestes tecidos-alvo periféricos. Existem provavelmen-te três tipos de receptores serotoninérgicos nos tecidos-alvo periféricos do caranguejo N. granulata: um receptor 5-HT1Neo com perfil similar ao receptor 5-HT1 de mamífero; um receptor 5-HT2Neo com perfil similar ao receptor 5-HT2 e provavelmente, um tercei-ro, o 5-HT-H3Neo com perfil farmacológico indeterminado.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas / Made available in DSpace on 2013-06-25T21:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310917.pdf: 1085728 bytes, checksum: d351d3c19308e32fdf6eb3afebae7290 (MD5) / Estudos conduzidos em nosso laboratório avaliaram os efeitos da injeção local de 8-hidroxi-2-(di-npropilamino)-tetralina (8-OH-DPAT) na Área Hipotalâmica Lateral (AHL) sobre o comportamento ingestivo de fêmeas adaptadas a comer uma ração enriquecida com 10% de sacarose, durante o período diurno do estro e diestro. Os resultados mostraram que 8-OH-DPAT reduziu significativamente a ingestão de alimentos em ambos os estágios do ciclo. Investigações posteriores mostraram que o pré-tratamento da AHL com WAY100635 (antagonista dos receptores 5-HT1A) suprimiu o efeito hipofágico provocado pelo 8-OH-DPAT nas duas fases do ciclo. Neste contexto, a proposta do presente estudo foi investigar a localização do receptor 5-HT1A no circuito serotoninérgico da AHL por meio da injeção de um antagonista considerado de ação pós-sináptica, 1-(2-methoxyphenyl)-4-(4-succinimidobutyl)-piperazine (MM-77), em ratas em diestro e estro. Ratas adaptadas a consumir uma dieta rica em sacarose 10% e com cânulas cronicamente implantadas na AHL foram pré-tratadas com o veículo (ácido ascórbico 5%) ou MM-77 (doses de 0,37 e 0,74 nmol/200 nl) seguida pela injeção de veículo ou 8-OH-DPAT (6 nmol/200 nl). Os comportamentos foram avaliados durante 1 hora após a administração das drogas e os resultados mostraram que a injeção de 8-OH-DPAT reduziu significativamente a ingestão de alimentos em 60% na fase estro e 49% no diestro. Essa redução na quantidade de alimento ingerido foi acompanhada por uma redução na duração e na frequência de ingestão, na fase estro. Os animais que foram tratados com MM-77 seguido de veículo não apresentaram alterações nos comportamentos ingestivos e/ou não ingestivos. Porém, os animais tratados com MM-77 seguido de 8-OH-DPAT apresentaram um bloqueio do efeito hipofágico induzido pela injeção de 8-OH-DPAT. Estes resultados indicam que receptores 5-HT1A localizados na AHL participam no controle serotoninérgico de mecanismos relacionados à regulação da ingestão de alimentos e que estes circuitos são, possivelmente, afetados por hormônios esteroides ovarianos. Além disso, observa-se que a reversão da hipofagia (provocada por um antagonista de receptor 5-HT1A pós-sináptico) pode ter sido realizada por um bloqueio prévio do receptor pelo antagonista, indicando sua localização pós-sináptica. / Studies conducted in our laboratory evaluated the effects of local injection of 8-hydroxy-2-(di-npropilamino)-tetralin (8-OH-DPAT) in the lateral hypothalamic area (AHL) on feeding behavior of females adapted to eating a diet supplemented with 10% sucrose during the daytime estrus and diestrus. The results showed that 8-OH-DPAT significantly reduced food intake in both stages of the cycle. Subsequent investigations showed that pretreatment with WAY100635 (antagonist of 5-HT1A) abolished the hypophagic effect caused by 8-OH-DPAT in both stages of the cycle. In this context, the purpose of this study was to investigate the location of the 5-HT1A receptor in the serotonergic circuit of the AHL by injection of an antagonist considered with postsynaptic action, 1 - (2-methoxyphenyl) -4 - (4-succinimidobutyl )-piperazine (MM-77), in rats in diestrus and estrus. Rats adapted to consume a diet rich in 10% sucrose and carrying chronically implanted cannulas toward to the AHL were pretreated with the vehicle (5% ascorbic acid) or MM-77 (0.37 and 0.74 nmol) followed by injection of vehicle or 8-OH-DPAT (6 nmol). The behaviors were evaluated for 1 hour after drug administration and the results showed that the injection of 8-OH-DPAT reduced the food intake by 60% in the phase of the estrous and 49% in the diestrous. This reduction in food intake was accompanied by a reduction in the duration and frequency of the ingestive behavior, during the estrus. Animals that were treated with MM-77 followed by the vehicle showed no alterations in the ingestive and/or non ingestive behaviors. However, animals treated with MM-77 followed by 8-OH-DPAT showed blockage of the hypophagic effects induced by injection of 8-OH-DPAT. These results indicate that 5-HT1A receptors located in the AHL are involved in the serotoninergic control of the mechanisms related to the regulation of food intake and that these circuits are possibly affected by ovarian steroid hormones. Furthermore, it is observed that the reversal of the hypophagia (caused by an antagonist of 5-HT1A postsynaptic receptor) may have been carried out by a previous blockade of the receptor by the antagonist, indicating its postsynaptic location.