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Produção da proteína L1 do Papilomavírus bovino tipo 1 em Pichia pastorisJESUS, André Luiz Santos de 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões tumorais, geralmente benignas, em
tecidos epiteliais de diversos organismos, que podem sob condições adequadas progredirem
para o câncer. O papilomavírus bovino (BPV) tem sido amplamente caracterizado tanto por
ser considerado um modelo experimental para o estudo do papilomavírus humano (HPV),
quanto por sua grande importância na bovinocultura. Estudos para o combate da infecção
mostram que vacinas baseadas em virus-like particles (VLPs), formadas a partir das proteínas
capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes conferindo proteção
contra o mesmo tipo viral. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão eficiente e
de baixo custo para produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em
relação a outros sistemas. Neste trabalho foi avaliado a possibilidade do uso do sistema de
expressão heteróloga baseado em células da levedura P. pastoris para a produção da proteína
L1 do capsídeo do papilomavírus bovino tipo 1. O gene L1 foi amplificado por PCR a partir
do genoma completo de BPV 1, clonado no vetor pGEM-T Easy e subclonado sob a
regulação do promotor AOX1 e em fase de leitura com uma cauda de poli-histidina presentes
no vetor pPICZA. As células da levedura foram transformadas com a construção
pPICZAL1B1 e os recombinantes resistentes a zeocina foram selecionados para expressão da
proteína L1. Estes foram cultivados em frascos contendo meio com glicerol como fonte de
carbono e após 48 horas o meio foi trocado por outro contendo 0,5% de metanol. A cada 24
horas foi adicionado metanol para uma concentração final de 2%, até completar 96 horas. Os
resultados obtidos mostraram que os recombinantes P. pastoris transformados com o cassete
de expressão pPICZAL1B1, após indução com metanol, foram capazes de expressar o gene
L1 e de produzir a proteína L1 de BPV 1. Tais transformantes permitirão o estabelecimento
de um sistema de expressão da proteína L1 e conseqüente produção de VLPs como primeiro
passo para implementação de uma estratégia vacinal contra infecções por papilomavírus
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Avaliação do uso de células da levedura Pichia pastoris para expressão do gene L1 do Papilomavírus Humano tipo 16COIMBRA, Eliane Campos January 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007 / Os papilomavírus humanos infectam o tecido epitelial mucoso ou cutâneo provocando o
aparecimento de verrugas ou papilomas benignos que podem regredir ou evoluir para lesões
malignas. A infecção por HPV é a doença sexualmente transmissível mais freqüente do
mundo e está relacionada com a etiologia de certos tipos de cânceres, principalmente os
anogenitais. O câncer cervical é o segundo mais freqüente entre as mulheres do mundo e o
HPV-16 é o tipo mais encontrado, presente em 60% dos casos. Estudos para o combate da
infecção mostram que as vacinas baseadas em Virus-Like Particles (VLPs), formadas a partir
das proteínas capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes que
conferem proteção contra o mesmo tipo viral. A imunidade humoral é direcionada contra os
epítopos conformacionais da proteína L1 que compõe 90% da estrutura capsidial. As VLPs
são obtidas através da expressão dos genes capsidiais em sistema de expressão heterólogo e
processos de purificação. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão, eficiente e de
baixo custo para a produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em
relação a outros sistemas. Neste trabalho foi proposta a expressão do gene L1 de HPV-16 em
células da levedura P. pastoris, como base de uma estratégia vacinal para o controle do câncer
de colo de útero. O gene L1 de HPV-16 foi clonado em vetor de expressão pPICZA e a
construção pPICZL1H16 foi integrada no genoma de Pichia. A transcrição do gene L1 foi
confirmada por meio de RT-PCR e a expressão da proteína, por imunodetecção em Dot Blot.
A obtenção dos clones de P.pastoris que expressam a proteína L1 de HPV-16, permitirá o
desenvolvimento de mais uma estratégia vacinal baseada em VLPs
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Análise da produção extracelular da proteína L1 de HPV 16, a partir da construção PICZAαL1H16 em células de Pichia pastorisGOMES, Felippe Barbosa 31 January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer cervical é a segunda maior causa de mortes entre mulheres no mundo. Esta
neoplasia maligna está relacionada com a presença do Papilomavírus Humano (HPV), sendo o
tipo 16 responsável por 60% dos casos. O HPV infecta o tecido epitelial mucoso ou cutâneo e
é responsável pelo aparecimento de verrugas ou papilomas benignos que tendem a regredir
naturalmente na maioria dos casos, mas que ainda assim causam prejuízos aos indivíduos
infectados e aos sistemas públicos de saúde, sendo a papilomatose considerada a doença
sexualmente transmissível mais prevalente no mundo, tornando essencial a aplicação de
estratégias de combate à esta infecção. Vacinas baseadas em Virus-like particles (VLPs),
formadas a partir das proteínas capsidiais L1 e L2 - que induzem a formação de anticorpos
neutralizantes - já estão comercialmente disponíveis. Contudo, possuem um preço elevado
considerando, principalmente, os países em desenvolvimento. A imunidade humoral é
direcionada contra os epítopos conformacionais da proteína L1 que compõe 90% da estrutura
capsidial. Para produção das VLPs os genes das proteínas capsidiais são expressos em
sistemas heterólogos e o produto resultante é purificado. A escolha de um sistema mais
simples e barato para essa expressão é fundamental para a redução do custo das vacinas. Uma
alternativa promissora é a levedura Pichia pastoris. Este trabalho propôs a produção
extracelular da proteína L1 de HPV16, que teve seu gene inserido no vetor pPCIZAα. A
construção pPICZAαL1H16 foi integrada no genoma da levedura Pichia pastoris e a
transcrição do gene L1 e a expressão da proteína foram confirmadas por RT-PCR e
imunodetecção em Dot Blot. A expressão extracelular da proteína L1 de HPV 16, em células
de P. pastoris, é uma etapa essencial na busca do desenvolvimento de uma estratégia vacinal
mais economicamente viável baseada em VLPs
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Análise do promotor quimérico regulado por zinco para a expressão de proteínas recombinantes em Saccharomyces cerevisiae. / Analysis of chimeric promoter regulated by zinc for the expression of recombinant proteins in Saccharomyces cerevisiae.Borges, Flávia Garcia 05 October 2015 (has links)
O desenvolvimento de sistemas de expressão através da modificação de fortes promotores conhecidos vem sendo amplamente utilizado para a produção de proteínas com potencial utilização biotecnológica em diversos hospedeiros como S. cerevisiae. O objetivo do trabalho foi construir um promotor quimérico através de modificações do promotor cbh1 de T. reesei e inserção de elementos de resposta a metais provenientes do promotor ZRT1 de S. cerevisiae. O promotor desenhado foi utilizado na construção de um sistema de expressão, que foi inserido na levedura e teve sua atividade analisada pelo teste de ONPG. Foi possível observar que, conforme a concentração de zinco aumenta, a atividade do promotor diminui. O promotor teve maior atividade no meio sem zinco e menor no meio com 1000 μM de zinco. Esses resultados confirmam que o sistema funciona de forma eficiente em S. cerevisiae. Também foi possível observar que os mutantes crescidos em meio com limitação de zinco e, consequentemente com maior atividade do promotor, tiveram sua taxa de crescimento alterada. O que é esperado devido ao fenômeno conhecido como estresse metabólico, comum durante a produção de proteínas recombinantes em leveduras, na qual a cultura apresenta uma diminuição significativa do crescimento. / The development the expression systems by modifying strong promoters has been widely used for the production of proteins with potential biotechnological use in various hosts such as S. cerevisiae. This study aimed to construct an expression system constituted of the chimeric promoter built with cbh1 promoter modified by inserting metal responsive elements from the promoter of ZRT1 gene of S. cerevisiae. The S. cerevisiae was transformed and the system was induced with different concentrations of zinc and was tested using ONPG as substrate. It was observed that under high zinc concentrations promoter activity is low. At low zinc concentrations the opposite effect is observed, and the promoter reaches its highest activities. These results confirm that the system functions efficiently in S. cerevisiae. It was also observed that the mutant grown in environment with zinc limitation, hence with higher activity of the promoter, showed reduced growth rate. Indeed, this is expected due to the phenomenon known as metabolic burden, characterized by a joint stress during the production of recombinant proteins in yeast, under conditions which the culture has a significant growth reduction.
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Análise do promotor quimérico regulado por zinco para a expressão de proteínas recombinantes em Saccharomyces cerevisiae. / Analysis of chimeric promoter regulated by zinc for the expression of recombinant proteins in Saccharomyces cerevisiae.Flávia Garcia Borges 05 October 2015 (has links)
O desenvolvimento de sistemas de expressão através da modificação de fortes promotores conhecidos vem sendo amplamente utilizado para a produção de proteínas com potencial utilização biotecnológica em diversos hospedeiros como S. cerevisiae. O objetivo do trabalho foi construir um promotor quimérico através de modificações do promotor cbh1 de T. reesei e inserção de elementos de resposta a metais provenientes do promotor ZRT1 de S. cerevisiae. O promotor desenhado foi utilizado na construção de um sistema de expressão, que foi inserido na levedura e teve sua atividade analisada pelo teste de ONPG. Foi possível observar que, conforme a concentração de zinco aumenta, a atividade do promotor diminui. O promotor teve maior atividade no meio sem zinco e menor no meio com 1000 μM de zinco. Esses resultados confirmam que o sistema funciona de forma eficiente em S. cerevisiae. Também foi possível observar que os mutantes crescidos em meio com limitação de zinco e, consequentemente com maior atividade do promotor, tiveram sua taxa de crescimento alterada. O que é esperado devido ao fenômeno conhecido como estresse metabólico, comum durante a produção de proteínas recombinantes em leveduras, na qual a cultura apresenta uma diminuição significativa do crescimento. / The development the expression systems by modifying strong promoters has been widely used for the production of proteins with potential biotechnological use in various hosts such as S. cerevisiae. This study aimed to construct an expression system constituted of the chimeric promoter built with cbh1 promoter modified by inserting metal responsive elements from the promoter of ZRT1 gene of S. cerevisiae. The S. cerevisiae was transformed and the system was induced with different concentrations of zinc and was tested using ONPG as substrate. It was observed that under high zinc concentrations promoter activity is low. At low zinc concentrations the opposite effect is observed, and the promoter reaches its highest activities. These results confirm that the system functions efficiently in S. cerevisiae. It was also observed that the mutant grown in environment with zinc limitation, hence with higher activity of the promoter, showed reduced growth rate. Indeed, this is expected due to the phenomenon known as metabolic burden, characterized by a joint stress during the production of recombinant proteins in yeast, under conditions which the culture has a significant growth reduction.
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Vacinas de administração oral contra diarréia associada à Escherichia coli enteropatogênica baseada em linhagens geneticamente modificadas de Bacillus subtilis / Oral vaccines against diarrhea associated with enteropathogenic Escherichia coli strains based on genetically modified Bacillus subtilis strainsLuiz, Wilson Barros 07 May 2010 (has links)
O objetivo deste trabalho foi a construção de linhagens geneticamente modificadas de B. subtilis capazes de expressar porções de intimina, principal componente envolvido na capacidade de colonização de linhagens enteropatogênicas de Escherichia coli (EPEC), como estratégia vacinal de administração oral contra diarréias infecciosas. As vacinas desenvolvidas empregaram cinco regiões da intimina de EPEC e linhagens de B. subtilis capazes de expressar e acumular proteínas recombinantes no citoplasma. Além disso, avaliamos o uso de esporos e células vegetativas como veículos vacinais para a entrega de antígenos recombinantes a partir de sistema de expressão epissomal. A eficácia do modelo vacinal foi demonstrada pela: (i) produção de anticorpos sistêmicos (IgG) e secretados (sIgA) contra intimina, (ii) capacidade de neutralização das intiminas expressas por diferentes linhagens de EPEC pelos anticorpos específicos gerados nos animais imunizados; e (iii) proteção a desafio com linhagens de EPEC a partir de modelo experimental que emprega camundongos recém-nascidos. Os resultados representam uma etapa importante na validação de uma nova estratégia vacinal para o controle de patógenos entéricos. Além disto, propomos a utilização de um modelo animal como uma nova ferramenta para se avaliar o potencial protetor de vacinas contra EPEC. / The objective of this work was the construction of genetically modified strains of B. subtilis able to express portions of intimin, the main component involved in colonization by enteropathogenic Escherichia coli strains (EPEC) as a strategy of oral vaccination against infectious diarrhea. The vaccines employed five regions of EPEC intimin and B. subtilis strains expressing recombinant proteins in the cytoplasm. Furthermore, we evaluated the use of spores and vegetative cells as vaccine vehicles for the delivery of recombinant antigens based on an epissomal expression system. The efficacy of the vaccines was demonstrated by: (i) production of systemic (IgG) and mucosal (sIgA) antibody responses to intimin, (ii) neutralizing of intimin expressed by different strains of EPEC by the antibodies generated in immunized animals, and (iii) protection to lethal challenges carried out with EPEC strains using an experimental model based in newborn mice. The results represent an important step in the validation of a new vaccine strategy for the control of enteric pathogens. Moreover, we propose the use of an animal model as a new tool to evaluate the protective potential of vaccines against EPEC.
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Sistema de expressão induzido por estradiol em Saccharomyces cerevisiae. / Expression system induced by estradiol in Saccharomyces cerevisiae.Adriani, Patricia Pereira 03 May 2016 (has links)
Devido as suas características funcionais, as proteínas vêm sendo cada vez mais utilizadas em diferentes áreas e atividades da sociedade humana como: alimentícia, indústria, têxtil, papel e celulose, química e médica. A produção industrial de proteínas de valor comercial para diversas aplicações, vem sendo cada vez mais conduzida através do desenvolvimento de sistemas de expressão em diferentes hospedeiros, como Saccharomyces cerevisiae. O presente trabalho teve por objetivo desenhar um sistema de expressão metabolicamente independente induzido pelo hormônio estradiol que, em S. cerevisiae, seja capaz de produzir e secretar com eficiência proteínas homólogas e/ou heterólogas de interesse industrial. Para tanto, foi desenhado e construído um plasmídeo regulador (que expressa o fator de transcrição quimérico c-mycGal4(DBD)hERα(LBD)VP16(AD) e um plasmídeo de expressão (que contém o promotor quimérico p5xUASGAL-UARcb1, o qual será induzido pelo fator de transcrição quimérico, regulando a expressão da proteína repórter celobiohidrolase I - cbh1 de Trichoderma reesei). Ambos plasmídeos foram utilizados para transformar a cepa ScW303-1A/pdr5Δ(construída neste trabalho) e induzido com diferentes concentrações de estradiol. Para analisar a habilidade do promotor em dirigir a expressão da proteína repórter cbh1, foi feito o teste de DNS, com os transformantes selecionados, utilizando carboximetilcelulose 1% como substrato. A maior atividade enzimática ocorre na indução do sistema com 5 μM de 17-β-estradiol e DES (dietilestilbestrol). Os resultados mostram que o sistema de expressão induzido por 17-β-estradiol e DES, funciona de forma eficiente em S. cerevisiae e que o mesmo pode ser utilizado na produção biotecnológica de outras proteínas de interesse. / Due to its functional characteristics, the proteins are being increasingly used in different areas and activities of human society: food, industry, textile, pulp and paper, chemical and medical. The industrial production of commercially valuable proteins for various applications is increasingly being conducted through the development of systems of expression in different hosts such as Saccharomyces cerevisiae. This study aimed to design a metabolically independent expression system induced by estradiol hormone in S. cerevisiae is able to produce and secrete effectively homologous proteins and / or heterologous of industrial interest. Thus, it was designed and built a regulatory plasmid (expressing the chimeric transcription factor c-myc-Gal4 (DBD) -hERα (LBD) - VP16 (AD) and an expression plasmid (which contains the chimeric promoter 5xUASGAL- UARcb1, which is induced by the chimeric transcription factor, regulating the expression of the reporter protein cellobiohydrolase I - cbh1 of Trichoderma reesei). Both plasmids were used to transform ScW303-1A / pdr5Δ strain (constructed in this work) and induced with different concentrations of estradiol. To analyze the ability of the promoter to direct the expression of the reporter protein cbh1, the DNS testing, with the selected transformants was done using 1% carboxymethylcellulose as a substrate. The highest enzymatic activity occurs in the induction system with 5 μM of 17-β-estradiol and DES (diethylstilbestrol). The results show that the expression system induced by 17-β-estradiol and DES operates efficiently in S. cerevisiae and that it can be used for the biotechnological production of other proteins of interest.
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Vacinas de administração oral contra diarréia associada à Escherichia coli enteropatogênica baseada em linhagens geneticamente modificadas de Bacillus subtilis / Oral vaccines against diarrhea associated with enteropathogenic Escherichia coli strains based on genetically modified Bacillus subtilis strainsWilson Barros Luiz 07 May 2010 (has links)
O objetivo deste trabalho foi a construção de linhagens geneticamente modificadas de B. subtilis capazes de expressar porções de intimina, principal componente envolvido na capacidade de colonização de linhagens enteropatogênicas de Escherichia coli (EPEC), como estratégia vacinal de administração oral contra diarréias infecciosas. As vacinas desenvolvidas empregaram cinco regiões da intimina de EPEC e linhagens de B. subtilis capazes de expressar e acumular proteínas recombinantes no citoplasma. Além disso, avaliamos o uso de esporos e células vegetativas como veículos vacinais para a entrega de antígenos recombinantes a partir de sistema de expressão epissomal. A eficácia do modelo vacinal foi demonstrada pela: (i) produção de anticorpos sistêmicos (IgG) e secretados (sIgA) contra intimina, (ii) capacidade de neutralização das intiminas expressas por diferentes linhagens de EPEC pelos anticorpos específicos gerados nos animais imunizados; e (iii) proteção a desafio com linhagens de EPEC a partir de modelo experimental que emprega camundongos recém-nascidos. Os resultados representam uma etapa importante na validação de uma nova estratégia vacinal para o controle de patógenos entéricos. Além disto, propomos a utilização de um modelo animal como uma nova ferramenta para se avaliar o potencial protetor de vacinas contra EPEC. / The objective of this work was the construction of genetically modified strains of B. subtilis able to express portions of intimin, the main component involved in colonization by enteropathogenic Escherichia coli strains (EPEC) as a strategy of oral vaccination against infectious diarrhea. The vaccines employed five regions of EPEC intimin and B. subtilis strains expressing recombinant proteins in the cytoplasm. Furthermore, we evaluated the use of spores and vegetative cells as vaccine vehicles for the delivery of recombinant antigens based on an epissomal expression system. The efficacy of the vaccines was demonstrated by: (i) production of systemic (IgG) and mucosal (sIgA) antibody responses to intimin, (ii) neutralizing of intimin expressed by different strains of EPEC by the antibodies generated in immunized animals, and (iii) protection to lethal challenges carried out with EPEC strains using an experimental model based in newborn mice. The results represent an important step in the validation of a new vaccine strategy for the control of enteric pathogens. Moreover, we propose the use of an animal model as a new tool to evaluate the protective potential of vaccines against EPEC.
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Expressão intra e extracelular da proteína L1 de HPV 16, a partir da construção Ppiczal1h16 pPICZAαL1H16, em células de Pichia pastorisCARVALHO, Janaine Cavalcanti 07 October 2011 (has links)
Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T18:59:29Z
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Previous issue date: 2011-10-07 / O câncer cervical é a segunda maior causa de mortes entre mulheres no mundo. Esta neoplasia maligna está relacionada com a presença do Papilomavírus Humano (HPV), sendo o tipo 16 responsável por 60% dos casos. O HPV infecta o tecido epitelial mucoso ou cutâneo e é responsável pelo aparecimento de verrugas ou papilomas benignos que tendem a regredir naturalmente na maioria dos casos, mas que ainda assim causam prejuízos aos indivíduos infectados e aos sistemas públicos de saúde, sendo a papilomatose considerada a doença sexualmente transmissível mais prevalente no mundo, tornando essencial a aplicação de estratégias de combate à esta infecção. Vacinas baseadas em Virus-like particles (VLPs), formadas a partir das proteínas capsidiais L1 e L2 - que induzem a formação de anticorpos neutralizantes - já estão comercialmente disponíveis. Contudo, possuem um preço elevado considerando, principalmente, os países em desenvolvimento. A imunidade humoral é direcionada contra os epítopos conformacionais da proteína L1 que compõe 90% da estrutura capsidial. Para produção das VLPs os genes das proteínas capsidiais são expressos em sistemas heterólogos e o produto resultante é purificado. A escolha de um sistema mais simples e barato para essa expressão é fundamental para a redução do custo das vacinas.
Uma alternativa promissora é a levedura Pichia pastoris. Este trabalho propôs a produção extracelular e intracelular da proteína L1 de HPV16, que teve seu gene inserido no vetor pPCIZAα e pPCIZA, respectivamente. As construções pPICZAαL1H16 e pPICZAL1H16 foram integradas no genoma da levedura Pichia pastoris e a transcrição do gene L1 e a expressão da proteína foram confirmadas por RT-PCR e imunodetecção em Dot Blot. A busca de uma melhor expressão da proteína L1 de HPV 16, em células de P. pastoris, é uma etapa essencial na busca do desenvolvimento de uma estratégia vacinal mais economicamente viável baseada em VLPs. / The Cervical cancer is the second leading cause of death among women worldwide. This malignancy is related to the presence of human papillomavirus (HPV) being the type 16 responsible for 60% of the cases. HPV infects cutaneous or mucosal epithelial tissue and is responsible for the appearance of benign papillomas or warts that tend to regress naturally in most cases, but still cause damage to infected individuals and public health systems, with papillomatosis being considered the most prevalent sexually transmitted disease worldwide, making essential to implement strategies to combat this infection. Vaccines based on viruslike particles (VLPs), formed from the capsid proteins L1 and L2 - that induce the formation of neutralizing antibodies - are already commercially available. However, they are expensive considering mainly the developing countries. Humoral immunity is directed against conformational epitopes of the L1 protein which represents 90% of the capsid structure. In order to produce VLPs the capsid protein genes are expressed in heterologous systems and the resulting product is purified. The choice of a simpler and cheaper system for this expression is fundamental to reduce the cost of vaccines. A promising alternative is the Pichia pastoris yeast. This paper proposed the extracellular and intracellular generation of
HPV16 L1 protein, which had its gene inserted into the vectors pPCIZAα e pPCIZA, respectively. The pPICZAαL1H16 and pPICZAL1H16 plasmids were integrated into the Pichia pastoris yeast genome and the L1 gene transcription and protein expression were confirmed by RT-PCR and immunodetection in Dot Blot. The search for better expression of HPV 16 L1 protein, in cells of P. pastoris, is an essential step in the quest to develop a more economically viable vaccine strategy based on VLPs.
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Sistema de expressão induzido por estradiol em Saccharomyces cerevisiae. / Expression system induced by estradiol in Saccharomyces cerevisiae.Patricia Pereira Adriani 03 May 2016 (has links)
Devido as suas características funcionais, as proteínas vêm sendo cada vez mais utilizadas em diferentes áreas e atividades da sociedade humana como: alimentícia, indústria, têxtil, papel e celulose, química e médica. A produção industrial de proteínas de valor comercial para diversas aplicações, vem sendo cada vez mais conduzida através do desenvolvimento de sistemas de expressão em diferentes hospedeiros, como Saccharomyces cerevisiae. O presente trabalho teve por objetivo desenhar um sistema de expressão metabolicamente independente induzido pelo hormônio estradiol que, em S. cerevisiae, seja capaz de produzir e secretar com eficiência proteínas homólogas e/ou heterólogas de interesse industrial. Para tanto, foi desenhado e construído um plasmídeo regulador (que expressa o fator de transcrição quimérico c-mycGal4(DBD)hERα(LBD)VP16(AD) e um plasmídeo de expressão (que contém o promotor quimérico p5xUASGAL-UARcb1, o qual será induzido pelo fator de transcrição quimérico, regulando a expressão da proteína repórter celobiohidrolase I - cbh1 de Trichoderma reesei). Ambos plasmídeos foram utilizados para transformar a cepa ScW303-1A/pdr5Δ(construída neste trabalho) e induzido com diferentes concentrações de estradiol. Para analisar a habilidade do promotor em dirigir a expressão da proteína repórter cbh1, foi feito o teste de DNS, com os transformantes selecionados, utilizando carboximetilcelulose 1% como substrato. A maior atividade enzimática ocorre na indução do sistema com 5 μM de 17-β-estradiol e DES (dietilestilbestrol). Os resultados mostram que o sistema de expressão induzido por 17-β-estradiol e DES, funciona de forma eficiente em S. cerevisiae e que o mesmo pode ser utilizado na produção biotecnológica de outras proteínas de interesse. / Due to its functional characteristics, the proteins are being increasingly used in different areas and activities of human society: food, industry, textile, pulp and paper, chemical and medical. The industrial production of commercially valuable proteins for various applications is increasingly being conducted through the development of systems of expression in different hosts such as Saccharomyces cerevisiae. This study aimed to design a metabolically independent expression system induced by estradiol hormone in S. cerevisiae is able to produce and secrete effectively homologous proteins and / or heterologous of industrial interest. Thus, it was designed and built a regulatory plasmid (expressing the chimeric transcription factor c-myc-Gal4 (DBD) -hERα (LBD) - VP16 (AD) and an expression plasmid (which contains the chimeric promoter 5xUASGAL- UARcb1, which is induced by the chimeric transcription factor, regulating the expression of the reporter protein cellobiohydrolase I - cbh1 of Trichoderma reesei). Both plasmids were used to transform ScW303-1A / pdr5Δ strain (constructed in this work) and induced with different concentrations of estradiol. To analyze the ability of the promoter to direct the expression of the reporter protein cbh1, the DNS testing, with the selected transformants was done using 1% carboxymethylcellulose as a substrate. The highest enzymatic activity occurs in the induction system with 5 μM of 17-β-estradiol and DES (diethylstilbestrol). The results show that the expression system induced by 17-β-estradiol and DES operates efficiently in S. cerevisiae and that it can be used for the biotechnological production of other proteins of interest.
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